TESIS FICOTOXINAS MARINAS EVA FONFRIA

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Introducción
Por el contrario, los métodos de “análisis” son aquellos en los que se realiza una
separación, identificación y cuantificación individual de las toxinas existentes en una
muestra. Esta cuantificación requiere la calibración previa del equipo instrumental
con patrones de concentración conocida para cada una de las toxinas. La respuesta
instrumental se convierte a valores de toxicidad a partir de factores de conversión
específicos para cada toxina y la toxicidad total se determina como la suma de las
toxicidades individuales. En este grupo encontramos métodos químicos como el
HPLC asociado a detección fluorimétrica o colorimétrica, el LC-MS, la
electroforesis capilar, etc.
En esta tesis se desarrollaron métodos de detección tipo “ensayo” utilizando técnicas
relativamente recientes: la polarización de fluorescencia y los biosensores basados en
el fenómeno óptico de la resonancia del plasmón superficial.
1.2.1 Polarización de fluorescencia
Fundamentos teóricos
La luz presenta dualidad onda-corpúsculo. Considerada como onda, consiste en un
campo eléctrico y un campo magnético perpendiculares entre sí, que oscilan de
forma sinusoidal a medida que se propagan a través del espacio. La relación entre la
frecuencia y la longitud de onda viene definida por λυ =c, donde λ es la longitud de
onda (distancia entre cresta y cresta de una onda), υ la frecuencia (número de
oscilaciones completas por segundo) y c la velocidad de la luz en el vacío. Desde el
punto de vista corpuscular, la luz está constituida por partículas llamadas fotones. La
energía de cada fotón viene determinada por la ecuación E= hυ, donde h es la
constante de Planck y υ la frecuencia. Combinando las dos ecuaciones se observa
que la energía y la longitud de onda son inversamente proporcionales [156].
Cuando un átomo o una molécula absorben un fotón, los electrones que se
encuentran en orbitales de menor energía (estado basal o fundamental) utilizan la
energía de la luz para acceder a orbitales desocupados de mayor energía (estado
excitado). Si los espines (momentos intrínsecos de rotación) de los electrones del
estado excitado y el estado fundamental son opuestos, el estado excitado se
denomina estado singulete (en contraposición al estado excitado triplete, donde los