hydragel 4 bence jones - Sebia Electrophoresis

HYDRAGEL 1 BENCE JONES 

Ref. 4821 


Ref. 4822 


Ref. 4824 


Ref. 4883* 

Masque standard / Standard mask 

2005/03

HYDRAGEL 1, 2, 4 & 9 BENCE JONES - 2005/03 

UTILISATION 

Les kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES et HYDRAGEL 9 BENCE JONES permettent 

la détection et l’identification des protéines de Bence Jones, ou chaînes légères libres monoclonales (kappa ou lambda) dans l’urine et le sérum 

humains par immunofixation sur gel d’agarose dans le système semi-automatique HYDRASYS. 

Le système HYDRASYS permet de réaliser toutes les séquences jusqu’à l’obtention du gel prêt pour l’interprétation. Les protéines sont séparées en 

tampon alcalin (pH 9,1) puis immuno-précipitées par les antisérums des différentes spécificités : antisérum trivalent anti-chaînes lourdes [gamma, 

alpha et mu (Ig G, A et M)], anti-chaînes légères kappa et lambda (libres et liées) et anti-chaînes légères libres kappa et lambda. Après immunofixation, 

les protéines précipitées sont colorées par une solution de violet acide. L’excès de colorant est éliminé en milieu acide. 

Chaque gel d’agarose est prévu pour l’analyse de : 

- 1 échantillon pour le kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- 2 échantillons pour le kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- 4 échantillons pour le kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- 9 échantillons pour les kits HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

À usage in vitro exclusivement. 

PRINCIPE DU TEST 

Les immunoglobulines monoclonales, marqueurs d’une gammapathie, sont détectées lors de l’électrophorèse des protéines. Elles se présentent sous 

forme de bandes anormales situées essentiellement dans les zones bêta et gamma globulines. L’immunofixation effectuée à l’aide d’anticorps permet 

l’identification des bandes monoclonales dépistées par électrophorèse. 

Elle se réalise en quatre étapes : 

1. Séparation électrophorétique des protéines en gel d’agarose. 

2. Fixation et immunoprécipitation des protéines séparées par électrophorèse : application du fixateur et des antisérums sur le gel, au niveau des 

pistes de migration. Le fixateur et les antisérums diffusent dans le gel. Le fixateur précipite toutes les protéines et les anticorps précipitent les 

antigènes correspondants. 

3. Élimination des protéines non précipitées par pompage et lavage. Les protéines précipitées restent piégées dans le gel. 

4. Coloration des protéines et comparaison de la position des bandes immunoprécipitées avec celle des bandes anormales observées après 

électrophorèse des protéines. 

Pour identifier de façon précise la nature de la bande monoclonale, l’échantillon est testé sur six pistes. Après électrophorèse, la piste ELP sert de 

référence grâce à la précipitation de toutes les protéines présentes ; les cinq autres pistes permettent de caractériser la ou les bandes monoclonales 

grâce à l’antisérum trivalent (anti-chaînes lourdes gamma, alpha et mu) et les antisérums anti-chaînes légères kappa et lambda (libres et liées) et 

anti-chaînes légères libres kappa et lambda. 

Cette technique simple et rapide donne une image claire et très facilement interprétable. 

RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES ET HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES RÉF. N° 4821 KIT HYDRAGEL 2 BENCE JONES RÉF. N° 4822 KIT HYDRAGEL 4 BENCE JONES RÉF. N° 4824 KIT HYDRAGEL 9 BENCE JONES RÉF. N° 4883* Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels 10 gels 80 gels Mèches tamponnées (prêtes à l'emploi) 10 sachets de 2 10 sachets de 2 80 sachets de 2 Colorant violet acide (solution concentrée) 1 fl. de 75 ml 1 fl. de 75 ml 8 fl. de 75 ml Fixateur (prêt à l’emploi) 1 fl. de 14,4 ml Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 10,8 ml anti-chaînes lourdes gamma, alpha, mu (trivalent) (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 10,8 ml anti-chaînes légères kappa (libres et liées) (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 10,8 ml anti-chaînes légères lambda (libres et liées) (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 10,8 ml anti-chaînes légères libres kappa (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 10,8 ml anti-chaînes légères libres lambda (prêtes à l’emploi) Applicateurs (prêts à l’emploi) 1 boîte de 10 2 boîtes de 10 24 boîtes de 10 Papiers-filtres fins 1 sachet de 10 1 sachet de 10 8 sachets de 10 | 

Peignes de papier-filtre 1 sachet de 10 2 sachets de 10 24 sachets de 10 

| Papiers-filtres épais | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 8 sachets de 10 | 

* HYDRAGEL 9 BENCE JONES MAXI-KIT 

NOTE : Le fixateur et les antisérums sont commercialisés séparément sauf pour le MAXI-KIT (voir RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS). 

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS 

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. 

LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. 

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NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français


1. GELS D’AGAROSE 

Préparation 

Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 8 g/l ; tampon tris-barbital, pH 9,1 ± 0,1 ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les gels contiennent 0,31 % de barbital et 0,34 % de barbital sodé. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! 

Utilisation 

Support pour l’électrophorèse et l’immunofixation des protéines. 

Conservation, stabilité et signes de détérioration 

Les gels peuvent être conservés à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date 

d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet du gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur 

le devant du kit doit être pointée vers le haut). Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. Éviter toute variation 

brutale de température. 

NE PAS CONGELER. 

Éliminer le gel dans les cas suivants : 

(I) apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ; 

(II) apparition de bactéries ou de moisissures ; 

(III) présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation). 

2. MÈCHES TAMPONNÉES 

Préparation 

Les mèches en éponge tamponnées sont prêtes à l’emploi. Chaque mèche tamponnée contient : tampon tris-barbital, pH 9,1 ± 0,3 ; azoture de 

sodium ; composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les mèches tamponnées contiennent 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sodé et 0,30 % d’azoture de sodium. Ne pas avaler ! 

En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! L’azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas 

de contact avec des acides, du plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des mèches, éviter tout contact avec ces produits. 

Utilisation 

Les mèches en éponge tamponnées jouent un rôle de réservoir de tampon pour l’électrophorèse et assurent le contact entre le gel et les électrodes. 


Les mèches tamponnées peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Elles doivent être conservées horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet des mèches tamponnées. NE PAS CONGELER. 

Éliminer les mèches tamponnées si le sachet est ouvert ou si les mèches sont sèches. 

3. COLORANT VIOLET ACIDE 

Préparation 

Le flacon de violet acide concentré doit être complété à 300 ml avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; violet acide, 2 g/l ; éthylène-glycol, 3,25 % ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique et immunofixation des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. La solution diluée 

est stable pendant 6 mois. 

4. FIXATEUR (RÉF. 4883) 

Préparation 

Le fixateur est prêt à l’emploi. Il contient : une solution acide et des composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des 

performances optimales. 

Il a une couleur spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. La couleur est rappelée sur l’étiquette du flacon et sur la piste correspondante 

du masque de dépôt des réactifs. 

Utilisation 

Pour la fixation des protéines séparées par électrophorèse sur la piste référence (ELP). 

NOTE : Le fixateur est spécifique à la technique d’immunofixation réalisée avec les masques 1, 2, 4 et 9 BENCE JONES. 

IMPORTANT : Pour éviter toute contamination entre les différents réactifs, il est impératif de remettre chaque bouchon sur le flacon correspondant 

après toute utilisation. 


Le fixateur peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette 

du flacon de fixateur. 

Il ne doit pas y avoir de précipité. 

5. ANTISÉRUMS (RÉF. 4883) 

Préparation 

Les antisérums sont prêts à l’emploi. Ils contiennent des immunoglobulines totales de mammifère anti-humaines. Chaque réactif a une couleur 

spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. La couleur est rappelée sur les étiquettes des flacons. 

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Lorsque les antisérums présentent un léger trouble ou précipité, il suffit généralement de mettre les flacons à température ambiante environ 10 

minutes avant leur utilisation. Si le trouble persiste, il ne perturbe en rien la réaction immunologique. Dans le cas de précipité insoluble, il est 

recommandé de centrifuger les antisérums pendant 5 minutes à 3000 rpm. 

Utilisation 

Pour l’immunoprécipitation des protéines séparées par électrophorèse. 

NOTE : Les antisérums sont spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec les masques 1, 2, 4 et 9 BENCE JONES. 

Les antisérums peuvent être d’origines animales différentes. Il est donc impératif de ne pas mélanger deux flacons différents d’antisérums, y compris 

de la même spécificité, et de TOUJOURS changer l’embout de la pipette lors d’un changement de flacon. 

IMPORTANT : Pour éviter toute contamination entre les différents réactifs, il est impératif de remettre chaque bouchon sur le flacon correspondant 

après toute utilisation. 


Les antisérums doivent être conservés au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur les 

étiquettes des flacons d’antisérum. 

NOTE : Durant le transport, les antisérums peuvent rester à température ambiante (entre 15 et 30 °C) pendant 15 jours sans que cela n’affecte la 

qualité du test. 

6. APPLICATEURS 

Utilisation 

Applicateurs prédécoupés, à usage unique pour le dépôt des échantillons. 

Conservation 

Les applicateurs doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

7. PAPIERS-FILTRES FINS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption de l’excès de liquide à la surface du gel avant l’application des échantillons. 

Conservation 

Les papiers-filtres fins doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

8. PEIGNES PAPIER-FILTRE 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre prédécoupées, à usage unique pour l’absorption de l’excès de réactifs à la surface du gel après l’étape d’immunofixation. 

9. PAPIERS-FILTRES ÉPAIS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption des protéines non précipitées du gel après l’étape d’immunofixation. 

Conservation 

Les papiers-filtres épais doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS 

1. COFFRET D’ANTISÉRUMS ET DE FIXATEUR GAM, K, L (pour les kits 4821, 4822 et 4824) 

Le coffret Antisérums et Fixateur GAM, K, L pour immunofixation, Masque standard (SEBIA, référence N° 4835), contient trois flacons d’antisérums 

(anti-chaînes lourdes gamma, alpha et mu, anti-chaînes légères kappa, libres et liées, et anti-chaînes légères lambda, libres et liées) de 1 ml chacun 

et un flacon de fixateur de 2,5 ml, spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec les masques 1, 2, 4 et 9 BENCE JONES, SEBIA. 

1.1 ANTISÉRUMS 

Voir paragraphe 5 précédent. 

1.2 FIXATEUR 

Voir paragraphe 4 précédent. 

2. COFFRET D’ANTISÉRUMS ANTI-CHAINES LÉGÈRES LIBRES (pour les kits 4821, 4822 et 4824) 

Le coffret Antisérums, chaînes légères libres K et L pour immunofixation, Masque standard (SEBIA, référence N° 4836), contient deux flacons 

d’antisérums de 1 ml chacun, spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec les masques 1, 2, 4 et 9 BENCE JONES, SEBIA. 

Préparation, Utilisation, Conservation, stabilité et signes de détérioration : Voir paragraphe 5 précédent. 

3. DÉCOLORANT 

Préparation 

Chaque flacon de décolorant concentré (SEBIA, référence N° 4540 : 10 flacons de 100 ml chacun) doit être dilué au 1/1 000 avec de l’eau distillée 

ou déminéralisée, il permet d'obtenir 100 litres de solution décolorante. 

Prélever par quantité de 5 ml et compléter à 5 litres avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution décolorante contient : acide citrique, 0,5 g/l. 

Utilisation 

Pour la décoloration, c’est-à-dire l’élimination de l’excès de colorant après coloration du gel. 

Pour le rinçage de la cuve de coloration après lavage. 

Pour neutraliser l’acidité du décolorant, mettre dans le flacon de vidange vide, 15 ml de soude à 50 % (solution du commerce). 


Le décolorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou 

sur l’étiquette du flacon de décolorant. NE PAS CONGELER. Le décolorant dilué est stable pendant 1 semaine à température ambiante, en flacon 

fermé. 

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Éliminer le décolorant dilué s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

En cas de conservation prolongée (au delà d’une semaine) de la solution diluée, ajouter 50 µl/l de ProClin 300 pour prévenir toute prolifération microbienne. 

Le décolorant dilué contenant du ProClin est stable en flacon fermé à température ambiante ou au réfrigérateur jusqu’à la date d’expiration indiquée 

sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

4. SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS 

Préparation 

Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentrée (SEBIA, référence N° 4541 : 10 flacons de 80 ml chacun) doit être complété à 5 litres 

avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution de lavage contient : tampon alcalin, pH 8,8 ± 0,3 ; azoture de sodium. 

ATTENTION : La solution de lavage concentrée contient 0,625 % d'azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! L'azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides, du 

plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des solutions, laver abondamment avec une grande quantité d’eau. 

Utilisation 

Pour le lavage du gel après immunofixation afin d’éliminer les protéines résiduelles non précipitées. 

Pour le lavage périodique de la cuve de coloration de l’HYDRASYS : par exemple pour une utilisation journalière effectuer un lavage hebdomadaire 

de la cuve de coloration. 

Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d’utilisation. 


Les solutions de lavage concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur dans un flacon fermé. Elles sont 

stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. 

Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

5. EAU PHYSIOLOGIQUE 

Préparation 

Solution de NaCl 0,15 M (9 g/l) dans l’eau distillée ou déminéralisée. 

Utilisation 

Pour la dilution si nécessaire des échantillons. 


La solution d’eau physiologique peut être conservée à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Éliminer la solution après 3 mois ou s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. Pour une 

conservation prolongée, ajouter 1 g/l d’azoture de sodium. 

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES 

1. Système HYDRASYS SEBIA, référence N° 1210 ou N° 1211. 

2. Micropipetteur, manuel ou automatique, tel que HYDRAplus SEBIA, référence N° 1215, pour le chargement des applicateurs. 

3. Chambre humide, référence N° 1270, fournie avec le système HYDRASYS. 

4. Bidons plastiques fournis avec le système HYDRASYS. 

5. Barre métallique du masque SEBIA, fournie avec le système HYDRASYS 

6. Kit accessoires HYDRASYS IF SEBIA, référence N° 1260. 

7. Kit accessoires HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES, SEBIA, référence N° 1267. 

8. Kit accessoires HYDRASYS 9 BENCE JONES, SEBIA, référence N° 1266. 

9. Pipettes de 10 µl et 200 µl. 

ÉCHANTILLONS À ANALYSER 

Prélèvement et conservation des échantillons 

• L’analyse se fait sur urines fraîches. Elles peuvent être conservées moins d’une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations 

prolongées, congeler les urines ; les urines congelées sont stables au minimum 1 mois. La conservation des urines congelées est améliorée par 

addition à l’échantillon de tampon HEPES 0,1 M (pH 6,75) et d’azoture de sodium 0,2 g/l. Les urines décongelées peuvent donner, au point de 

dépôt, une trace due à la dénaturation de protéines. 

IMPORTANT : Ne pas utiliser de conservateur contenant de l’acide borique. 

• Si l’analyse se fait sur sérums, ils doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire d’analyses cliniques. Les échantillons 

peuvent être conservés moins d’une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations prolongées, congeler les échantillons ; les 

échantillons congelés sont stables au minimum 1 mois. Les échantillons décongelés peuvent donner, au point de dépôt, une trace dûe à la 

dénaturation de protéines ou de lipoprotéines. 

Préparation des échantillons 

Urines 

L’analyse est réalisée sur des urines non concentrées. Dans ces conditions, la limite de détection d’une protéine de Bence Jones est de l’ordre de 10 

à 50 mg/l. Si l’on recherche une meilleure sensibilité, il conviendra de concentrer les urines en conséquence (20 à 100 fois). 

NOTE : En cas d’urines troubles (concentrées ou non), il est recommandé d’éliminer les particules en centrifugeant les échantillons (pendant 

10 minutes à 3000 rpm) ou par filtration (sur filtre de 0,45 µm) afin d’obtenir une bonne diffusion sur les applicateurs. 

Sérums 

Pour faire la recherche simultanée de protéines de Bence Jones dans l’urine et le sérum correspondant, diluer le sérum dans de l’eau physiologique 

ou dans le diluant pour immunofixation prédilué au 1/4 (1 volume de diluant + 3 volumes d’eau distillée ou déminéralisée) au 1/10 pour les pistes ELP, 

GAM, K et L (1 volume de sérum + 9 volumes de diluant prédilué ou d’eau physiologique) et au 1/3 (1 volume de sérum + 2 volumes de diluant prédilué 

ou d’eau physiologique) pour les pistes Kl et Ll. 

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NOTE : Si le taux d’immunoglobulines est inférieur à 5 g/l, il est recommandé de moins diluer le sérum dans de l’eau physiologique ou dans le diluant 

pour immunofixation, prédilué au 1/4 (1 volume de diluant + 3 volumes de d’eau distillée ou déminéralisée). 

Par exemple, diluer le sérum au 1/5 pour les pistes ELP, GAM, K et L (1 volume de sérum + 4 volumes de diluant prédilué ou d’eau physiologique) et 

au 1/2 (1 volume de sérum + 1 volume de diluant prédilué ou d’eau physiologique) pour les pistes Kl et Ll. 

Pour l’analyse des Ig D et/ou des Ig E, appliquer les mêmes dilutions que pour les chaînes légères libres et liées. 

IMPORTANT : 

• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène donne une bande proche du point de dépôt. Cette bande peut fausser l’interprétation du test (confusion 

avec une gammapathie). 

• Certaines urines contiennent une concentration importante de sels. Il s’ensuit une déformation du gel au cours de la migration qui risque de conduire 

à une perturbation dans les profils après immunofixation. Il convient d’éliminer cet excès de sels par une dialyse. 

• Des urines dégradées (protéolysées) peuvent donner une réaction positive avec les anti-chaînes légères libres. Une protéinurie avec paraprotéine 

sérique passant dans les urines peut donner dans ce cas une bande monoclonale avec le trivalent, une bande monoclonale avec un anti-chaînes 

légères libres et liées et une bande avec un anti-chaînes légères libres. 

• La sensibilité de détection de protéines de Bence Jones à l’aide d’antisérums anti-chaînes légères libres est affectée par leur polymérisation, 

masquant les épitopes concernés. 

Quand la présence de protéines de Bence Jones est suspectée, traiter les échantillons comme suit : mélanger 100 µl d’urine et 5 µl de 

β-mercaptoéthanol préalablement dilué au 1/10 dans de l’eau physiologique. 

TECHNIQUE 

Le système HYDRASYS est un instrument multiparamétrique semi-automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les étapes suivantes : 

application des échantillons, migration électrophorétique, incubation avec les réactifs, séchage, lavage, coloration, décoloration et séchage final. 

Les étapes manuelles sont les suivantes : préparation des échantillons et des gels, dépôt des réactifs et lancement des séquences automatiques. 

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS D’HYDRASYS. 

I. PRÉPARATION DE LA MIGRATION 

1. Mettre HYDRASYS sous tension. 

2. Poser un applicateur pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 échantillons), deux applicateurs pour 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 échantillons) ou 3 applicateurs pour HYDRAGEL 9 BENCE JONES, à plat sur la paillasse, numérotations 

(puits) vers le haut (Fig. 1). 

- Déposer 10 µl d’échantillon dans chaque puits. Le chargement de chaque applicateur ne doit pas excéder 2 minutes. 

| PISTES | 

PUITS DE DÉPÔT : ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ÉCHANTILLON N° 1 OU 3 2 3 4 5 6 7 ÉCHANTILLON N° 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES ÉCHANTILLON N° 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 ÉCHANTILLON N° 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| ÉCHANTILLON N° 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANT : Pour l’analyse sur HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, ne pas utiliser les puits de l’applicateur numérotés 1, 8 et 15 ; il est 

recommandé de les identifier au préalable à l’aide d’un marqueur pour éviter d’y déposer l’échantillon par erreur. 

- Placer l’(es) applicateur(s) dans la chambre humide, dents vers le haut (en manipulant l’(es) applicateur(s) par la protection en plastique). 

- Laisser diffuser 5 minutes après le dépôt du dernier échantillon. 

Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d’utilisation. 

3. Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

ATTENTION : Ne pas fermer le capot de l’appareil si les chariots sont relevés ! 

4. Sélectionner dans le menu le programme de migration "1 BJ MS/MD" pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES, " 2/4 BJ-UP MS/MD " pour 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ou "9 BJ MS" pour HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

5. Sortir les mèches tamponnées de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques. 

Fixer les mèches sur le chariot porte-électrodes à l'aide des languettes perforées. La face de la mèche fixée sur la languette vient en contact 

avec l'électrode (Fig. 2). 

6. Sortir le gel de son emballage. 

- Éliminer rapidement l’excès de liquide en surface, en effleurant le gel avec un papier-filtre fin. 

ATTENTION : Ne surtout pas laisser le papier-filtre en contact prolongé avec le gel pour éviter sa déshydratation. 

- Déposer 120 µl d'eau distillée ou déminéralisée pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou 200 µl pour HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 et 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, sur le plateau de migration dans le tiers inférieur du cadre sérigraphié. 

- Placer le gel (face gel orientée vers le haut) sur le plateau contre la barrette, à l'intérieur du cadre sérigraphié (Fig. 3). 

- Donner une forme concave au gel (Fig. 3) et le dérouler sur le plateau jusqu'au contact de la goutte d'eau qui doit se répartir sur toute la 

largeur du gel. Relever légèrement le gel pour éliminer les bulles d'air éventuellement piégées puis dérouler totalement le gel au contact du 

plateau. La goutte d’eau doit s’étaler sous toute la surface du film. 

7. Abaisser l'ensemble des chariots jusqu'en butée. Dans cette position, les mèches tamponnées ne touchent pas le gel. NE PAS FORCER LA 

DESCENTE DES CHARIOTS. 

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8. Sortir l’(es) applicateur(s) de la chambre humide en le(s) manipulant par la protection plastique. 

- Éliminer la protection des dents. 

- Placer l'(es)applicateur(s) sur le porte-applicateurs : 

- HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 échantillons) : position N° 6, 

- HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 échantillons) : positions N° 3 et 9, 

- HYDRAGEL 9 BENCE JONES : positions N° 2, 6 et 10. 

Pour une parfaite reproductibilité de la zone de dépôt, amener les applicateurs en butée sur le porte-applicateurs, par exemple du côté gauche. 

IMPORTANT : Les numérotations de l'applicateur sont toujours dirigées vers l'opérateur (Fig. 4). 

9. Fermer le capot du module de migration 

10. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à gauche du clavier). 

IMPORTANT : Ne rien placer à proximité immédiate de la grille de ventilation (à droite de l'appareil). 

MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente des chariots porte-électrodes et porte-applicateurs pour amener les mèches tamponnées et l’(es) applicateur(s) au contact du gel. 

• Remontée du chariot porte-applicateurs. 

• Migration à 10 W constants pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES et à 20 W constants pour HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, jusqu’à 42 Vh 

accumulés (pendant environ 9 minutes) et à 20 W constants jusqu’à 31 Vh accumulés (pendant environ 7 minutes) pour HYDRAGEL 9 BENCE 

JONES, à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier. 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. 

À l’écran, s’affiche le message : « AS». 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

II.IMMUNOFIXATION 

1. Ouvrir le capot du module de migration. 

2. Retirer l’(es) applicateur(s) et le(s) jeter. 

3. Relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes, retirer les mèches par les languettes et les jeter. 

- Retirer les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

- Nettoyer les électrodes avec un papier ouaté humide. 

- Laisser le gel en place dans le module de migration. 

4. Mettre en place le masque de dépôt des réactifs en procédant comme suit (Fig. 5) : 

- fixer la tige destinée à l'accrochage du masque d'incubation, à l'aide des plots de fixation. (Une fois mise en place, cette tige peut être laissée 

sur l'HYDRASYS) ; 

- placer les encoches du masque dans les repères de la tige en tenant le masque par la poignée ; 

- faire pivoter le masque pour l'appliquer sur le gel. 

- régler la position du masque pour obtenir une parfaite correspondance entre les profils électrophorétiques du gel et les pistes de révélation 

du masque (voir la notice d’utilisation du kit accessoires 9 BENCE JONES SEBIA, référence N° 1266). 

5. Déposer les réactifs en procédant comme suit : 

VOLUME (µl) PISTE Masque Masque DÉSIGNATION COULEUR 1, 2 et 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 solution de fixation jaune GAM 25 15 antisérum trivalent violet K 25 15 antisérum anti-chaînes légères kappa (libres et liées) vert clair L 25 15 antisérum anti-chaînes légères lambda (libres et liées) bleu clair Kl 25 15 antisérum anti-chaînes légères libres kappa orange 

| Ll | 25 | 15 | antisérum anti-chaînes légères libres lambda | rouge | 

NOTE : Pour éviter les inversions, les réactifs sont colorés et la couleur de la piste à remplir est rappelée sur le masque de dépôt des réactifs. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : Il est recommandé de déposer en premier les antisérums, dans l’ordre suivant : lambda libres, kappa libres, 

lambda, kappa et GAM, et de terminer par le dépôt du fixateur. 

- Lors du prélèvement des réactifs, ne pas piéger de bulles d'air dans l'embout de la pipette. 

- Pour déposer les réactifs (Fig. 6) : 

- tenir la pipette verticalement et appliquer légèrement l'embout au fond de l'orifice ; 

- injecter très progressivement les réactifs. 

6. Fermer le capot du module de migration. 

7. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à gauche du clavier). 

À l'écran, s'affiche le message : «[INCUBATION]». 

IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Incubation à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 10 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. 

À l'écran, s'affiche le message : «❊ AS (MS)». 

NOTE : Pendant la séquence d'incubation, le capot du module de migration reste verrouillé. 

III. ÉLIMINATION DES RÉACTIFS 


2. Éliminer les réactifs à l’aide des peignes de papier-filtre (Fig. 7) : Un peigne pour les masques 1 BENCE JONES et 2 BENCE JONES, deux 

peignes pour le masque 4 BENCE JONES et 3 peignes pour le masque 9 BENCE JONES. 

- présenter le(s) peigne(s) à 30° (par rapport à l’horizontale) et l’(es) introduire dans la(les) fente(s) pratiquée(s) dans la partie inférieure des 

pistes d’incubation, selon le plan incliné de celle(s)-ci ; 

- faire glisser très délicatement les dents du peigne de papier-filtre, le long de la paroi verticale opposée de la fente ; les dents viennent en 

contact avec les réactifs et les absorbent par capillarité ; 

- 6 -


- si le liquide ne progresse pas incliner davantage le peigne de papier-filtre en faisant levier sur son sommet pour amener les dents en contact 

avec le liquide (Fig. 8). 

IMPORTANT : Le peigne de papier-filtre doit rester incliné à environ 45° et ne doit pas pénétrer dans le gel. 

3. Démarrer la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à gauche du clavier). 

ÉLIMINATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Pompage à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 15 secondes. 

• Un signal sonore (bip) retentit. 

À l'écran, s'affiche le message : « PAP.». 

IV. POMPAGE DU GEL 

1. Retirer les peignes de papier-filtre. 

2. Contrôler la bonne absorption des différents réactifs : 

- absence de réactifs sur le gel ; 

- toutes les dents du peigne sont colorées sur toute leur hauteur. 

Si l'absorption est insuffisante, introduire à nouveau le même peigne (dans le même sens) et renouveler manuellement l'opération. 

3. Retirer le masque de dépôt des réactifs : 

- tenir le masque par la poignée ; 

- faire pivoter le masque autour de la tige et le décrocher. 

4. Appliquer une feuille de papier-filtre épais sur le gel : 

- incliner la feuille de papier-filtre épais d'environ 45° ; aligner le bord inférieur de la feuille de papier-filtre sur la barrette de positionnement 

du gel ; 

- faire pivoter la feuille de papier-filtre et l'appliquer sur le gel. 

ATTENTION : Bien appuyer sur toute la surface de la feuille de papier-filtre pour assurer un contact parfait entre le gel et le papier. 



7. Laver le masque sous l'eau courante avec une petite brosse souple (type brosse à dent). NE PAS UTILISER D'ALCOOL NI TOUT AUTRE 

SOLVANT. 

Pour l'utilisation suivante, le masque doit être parfaitement sec. Pour éliminer les gouttes d'eau pouvant être piégées dans les puits, tapoter 

le masque sur un papier ouaté et l'essuyer. 

POMPAGE DU GEL - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Pompage à 40 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 3 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit. 

À l'écran, s'affiche le message : «❊ PAP.». 

V. SÉCHAGE DU GEL 

1. Ouvrir le capot. 

2. Retirer le papier-filtre en laissant le film en place. 



SÉCHAGE DU GEL - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Séchage à 50 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 6 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. Le plateau reste à 50 °C jusqu'à l'ouverture du capot. 

NOTE : Pendant toute la séquence de séchage, le capot du module de migration reste verrouillé. 

VI. PRÉPARATION DES SÉQUENCES DE LAVAGE, COLORATION ET DÉCOLORATION DU GEL 


2. Récupérer le film sec pour les séquences suivantes. 

3. Placer le film sur le porte-film, face gel vers l'opérateur, en procédant comme suit (Fig. 9) : 

- ouvrir le porte-film ; 

- le poser à plat sur la paillasse ; 

- positionner le gel dans les gorges des colonnettes ; 

- refermer le porte-film ; 

- s'assurer que le film soit bien enfoncé dans les gorges des deux colonnettes. 

4. Introduire le porte-film dans le module de traitement / coloration du gel. 

IMPORTANT : Avant de lancer un cycle de coloration, s'assurer que : 

- le flacon de solution de lavage contienne 400 ml de solution de lavage ; 

- le flacon de colorant contienne 300 ml de colorant ; 

- le flacon de décolorant contienne 1 litre de décolorant minimum ; 

- le flacon de vidange soit vide. 

Pour le branchement des canaux réactifs : Se référer aux instructions affichées sur l’écran de l’appareil (sélectionner la touche : VISU 

CANAUX). 

IMPORTANT : Ne pas oublier d’obturer les canaux non utilisés. 

5. Sélectionner le programme de coloration «IF ACID VIOLET» dans le menu. 

Démarrer la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à droite du clavier). 

Pendant toutes les séquences de coloration, décoloration et séchage, le système reste verrouillé. 

Après refroidissement de la cuve, un signal sonore (bip) retentit et le système se débloque (la ventilation se maintient jusqu’à la récupération 

du porte-film). 

- 7 -


NOTES : 

- La température du plateau continue à descendre et atteint 20 °C en 5 minutes environ. À 20 °C, une nouvelle séquence de migration peut être 

lancée. 

- Remettre les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

- Nettoyer le plateau avec un papier ouaté humide. 

VII. FIN DU TRAITEMENT DU GEL 

1. Sortir le porte-film du compartiment ; ouvrir le porte-film et retirer le gel sec. 

2. Si nécessaire, nettoyer le dos du gel (support plastique) avec un papier ouaté humide. 

NOTE : Pour les gels à rangées multiples (2 ou 3), les longueurs de migration peuvent être sensiblement différentes, sans aucune conséquence 

sur les résultats. 

RÉSULTATS 

Interprétation 

La présence d’une protéine de Bence Jones est caractérisée par une bande monoclonale révélée par : 

- un anti-chaînes légères (libres et liées) kappa ou lambda (pistes K ou L), 

- un anti-chaînes libres kappa ou lambda (pistes Kl ou Ll), 

et l’absence de bande monoclonale avec l’antisérum trivalent (piste GAM). 

Une paraprotéine sérique passant dans les urines avec absence de protéine de Bence Jones est caractérisée par : 

- une bande monoclonale révélée avec le trivalent, 

- la même bande, révélée avec un anti-chaînes légères kappa ou lambda (libres et liées), et non détectée avec l’antisérum anti-chaînes 

légères libres correspondant. 

Une paraprotéine sérique associée à une paraprotéine de Bence Jones est caractérisée par : 

- une bande monoclonale révélée avec le trivalent, 

- deux bandes révélées avec un ou les deux anti-chaînes légères kappa et/ou lambda (libres et liées), 

- une bande révélée avec un anti-chaînes légères libres kappa ou lambda (cette bande ne correspondant généralement pas à la position de 

la fraction révélée avec le trivalent). 

Une protéine de Bence Jones à différents états de polymérisation est caractérisée par : 

- l’absence de révélation par le trivalent, 

- plusieurs bandes révélées par un anti-chaînes légères kappa ou lambda (libres et liées), 

- les mêmes bandes révélées par l’anti-chaînes légères libres correspondant. 

Interférences et limites 

L’utilisation d’antisérums autres que ceux spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec le masque standard peut affecter la qualité des 

résultats. 

Compte-tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne 

peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales. 

Assistance technique 

Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux. 

Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès 

du Service Technique SEBIA. 

PERFORMANCES 


Reproductibilité 

Inter-essais 

Quatre urines à protéines de Bence Jones non polymérisées, chaînes légères lambda ou kappa, ont été analysées sur 10 gels HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4 du même lot. 

Inter-lots 

Deux urines à protéines de Bence Jones non polymérisées, chaînes légères lambda ou kappa, ont été analysées sur toutes les pistes (24) de 2 gels 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (même lot) de trois lots différents. L’immunofixation a été réalisée avec un antisérum anti-chaînes légères libres et 

liées sur le premier gel, et avec un antisérum anti-chaînes légères libres sur le second gel. 

Résultats : Sur tous les gels, les protéines de Bence Jones de chaque échantillon ont été identifiées de façon reproductible sans faux-positif. 

Exactitude - Détection et identification de protéines de Bence Jones 

Quarante six échantillons (36 urines et 10 sérums) pathologiques et normaux ont été analysés en parallèle sur gel HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 

et sur un autre système en gel d’agarose pour immunofixation disponible dans le commerce. Les résultats obtenus sont identiques dans les deux 

systèmes d’immunofixation et en accord avec le diagnostic clinique. 


Reproductibilité intra-essai 

Trois échantillons pathologiques, deux urines présentant respectivement une chaîne légère libre Kappa faible et une chaîne légère libre Lambda forte, 

et un sérum présentant une paraprotéine à chaîne légère Lambda et une chaîne légère libre Lambda, ont été analysés chacun en répétabilité sur 

3 gels HYDRAGEL 9 BENCE JONES de deux lots différents. 

- 8 -


Chaque échantillon analysé a donné les mêmes résultats sur les deux lots de gels testés. En effet, les profils obtenus sont typiques de chaque 

échantillon analysé et l’immunofixation met en évidence les bandes monclonales attendues. 

Reproductibilité inter-essai 

Huit échantillons pathologiques (cinq urines et trois sérums présentant des protéines de Bence Jones) et un échantillon d’urine sans protéine de Bence 

Jones ont été analysés en reproductibilité sur 10 gels HYDRAGEL 9 BENCE JONES de trois lots différents, à raison des neufs échantillons différents 

par gel. 

Chaque échantillon analysé a donné les mêmes résultats sur les trois lots de gels testés. En effet, les profils obtenus sont typiques de chaque 

échantillon analysé et l’immunofixation met en évidence les bandes monclonales attendues. De plus, l’immunofixation de l’échantillon d’urine sans 

protéine de Bence Jones n’a révélé aucune bande moclonale sur les dix gels testés. 

Exactitude 

Vingt neuf échantillons d’urine et de sérums pathologiques (21 urines et 8 sérums), présentant une ou plusieurs chaînes légères libres Kappa ou 

Lambda, et sept échantillons (6 urines et 1 sérum) sans protéine de Bence Jones, ont été analysés en parallèle sur gel HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

et sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce. Les résultats obtenus ont montré une parfaite corrélation entre les deux 

systèmes d’analyse. En effet, les mêmes bandes monoclonales ont été mises en évidence pour tous les sérums pathologiques sur les deux types de 

gels et les sept échantillons sans paraprotéine de Bence Jones n’ont présenté aucune bande monoclonale dans ces deux systèmes d’analyse. 

BIBLIOGRAPHIE 

(1) Didier Le Carrer, «Électrophorèse des Protéines et Immunofixation : Guide d’interprétation», Laboratoires SEBIA, 1994, 120 pp, Ed. Hatier - Paris. 

(2) DF Keren, «High Resolution Electrophoresis and Immunofixation, Techniques and Interpretation», Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

1994, 397 pp. 

- 9 -


INTENDED USE 

The HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES and HYDRAGEL 9 BENCE JONES kits are 

designed for qualitative detection and identification of Bence Jones proteins, monoclonal free light chains kappa or lambda, in human urine or serum, 

by immunofixation electrophoresis. The detection of Bence Jones proteins serves as a qualitative aid in the identification of monoclonal gammopathies. 

Each agarose gel is intended to run : 

- one sample in the HYDRAGEL 1 BENCE JONES kit, 

- two samples in the HYDRAGEL 2 BENCE JONES kit, 

- four samples in the HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit, 

- nine samples in the HYDRAGEL 9 BENCE JONES kits. 

For In Vitro Diagnostic Use. 

PRINCIPLE OF THE TEST 

Abnormal bands in electrophoretic patterns, primarily those in the beta-globulins and gamma-globulins zones, are always suspect of being monoclonal 

proteins and therefore an indication of gammopathies. To identify these abnormal bands, the technique of immunofixation is applied. 

Immunofixation electrophoresis allows the proteins to be anchored in situ after electrophoresis, by forming insoluble complexes with corresponding 

antisera. 

The Bence Jones protein test is performed in conjunction with the semi-automated HYDRASYS system to carry out all the steps needed to obtain gels 

ready for interpretation : 

1. The sample is simultaneously electrophoresed in six tracks on alkaline buffered agarose gel. 

2. After the electrophoresis, one track (ELP) is fixed to serve as a reference showing electrophoretic pattern of the sample’s proteins. The remaining 

five tracks are immunofixed with respective antisera : trivalent anti-heavy chains (gamma, alpha and mu), anti kappa free and bound light chains, 

anti lambda free and bound light chains, anti kappa free light chain and anti lambda free light chain. 

3. The unprecipitated, soluble proteins are removed from the gel by blotting and washing. Precipitin of the antigen-antibody complex is trapped within 

the gel matrix. 

4. The precipitated proteins are visualized by staining with acid violet. The excess of stain is removed with an acidic solution. 

5. The immunoprecipitated bands are then compared with corresponding abnormal bands seen in the electrophoretic pattern of the sample and 

identified from the reaction, or lack of, with individual antisera. 

This simple and fast technique gives a clear and easily interpretable picture. 

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES AND HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT PN 4821 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT PN 4822 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT PN 4824 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KIT PN 4883* Agarose Gels (ready to use) 10 gels 10 gels 80 gels Buffered Strips (ready to use) 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each 80 packs of 2 each Acid Violet Stain (stock solution) 1 vial, 75 mL 1 vial, 75 mL 8 vials, 75 mL each Fixative Solution (ready to use) 1 vial, 14.4 mL Mammalian immunoglobulins anti-human gamma, alpha, 1 vial, 10.8 mL mu heavy chains (trivalent) (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human kappa free 1 vial, 10.8 mL and bound light chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human lambda free 1 vial, 10.8 mL and bound light chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human kappa free 1 vial, 10.8 mL light chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human lambda free 1 vial, 10.8 mL light chains (ready to use) Applicators (ready to use) 1 pack of 10 2 packs of 10 each 24 packs of 10 each Filter Papers - Thin 1 pack of 10 1 pack of 10 8 packs of 10 each Filter Paper Combs 1 pack of 10 2 packs of 10 each 24 packs of 10 each 

| Filter Papers - Thick | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 8 packs of 10 each | 

(*) HYDRAGEL 9 BENCE JONES MAXI-KIT 

NOTE : The fixative solution and the antisera are supplied separately from the kits except for MAXI-KIT (See REAGENTS REQUIRED BUT NOT 

SUPPLIED). 

FOR OPTIMAL RESULTS 

All reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions. 

PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY. 

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SEBIA INSTRUCTIONS - English


1. AGAROSE GELS 

Preparation 

Agarose gels are ready to use. Each gel contains: agarose, 0.8 g/dL, tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.1 ; additives, nonhazardous at concentrations used, 

necessary for optimum performance. 

WARNING: Agarose gels contain 0.31 % barbital and 0.34 % sodium barbital. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! 

Use 

Support medium for protein electrophoresis and immunofixation. 

Storage, stability and signs of deterioration 

Store the gels horizontally in the original protective packaging at room temperature (15 to 30 °C) or refrigerated (2 to 8 °C). (The arrow on the front of 

the kit box must be pointing upwards). They are stable until the expiration date indicated on the kit package and the gel package labels. 

Avoid storage close to a window or to a heat source. Avoid important variation of temperature during storage. 

DO NOT FREEZE. 

Discard when: 

(i) crystals or precipitate form on the gel surface or the gel texture becomes very soft (all these result from freezing the gel), 

(ii) bacterial or mold growth is indicated, 

(iii) abnormal quantity of liquid is present in the gel box (as a result of buffer exudation from the gel due to improper storage conditions). 

2. BUFFERED STRIPS 

Preparation 

Buffered sponge strips are ready to use. Each contains: tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.3 ; sodium azide ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: The buffer in the strips contains 0.92 % barbital, 1.03 % sodium barbital and 0.30 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested 

consult physician immediately ! When disposing, prevent contact with acids, lead or copper, as these are known to form explosive or toxic 

compounds with sodium azide. 

Use 

Buffered strips function as electrophoresis buffer reservoir and ensure contact between the gel and electrodes. 


Store the buffered strips horizontally in the original protective packaging at room temperature or refrigerated. (The arrow on the front of the kit box 

must be pointing upwards). 

They are stable until the expiration date indicated on the kit package or buffered strips package label. 

DO NOT FREEZE. 

Discard buffered strips if the package is opened and the strips dry out. 

3. ACID VIOLET STAIN 

Preparation 

Vial of the stock acid violet stain to be diluted up to 300 mL with distilled or deionized water. 

After dilution, the working stain solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; acid violet, 0.2 g/dL ; ethylene-glycol, 3.25 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels after protein electrophoresis and immunofixation. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working stain solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock stain solution is 

stable until the expiration date indicated on the kit package or stain vial labels. Working stain solution is stable for 6 months. 

4. FIXATIVE SOLUTION (with PN 4883) 

Preparation 

Fixative solution is ready to use. It contains: acidic solution ; additives, nonhazardous at concentrations used, necessary for optimum performance. 

For an easy identification and as an aid in monitoring its application, the fixative is colored with a non hazardous dye that matches the color of the vial 

label and the particular track on the reagent application template. 

Use 

To fix the electrophoreticaly separated proteins in the reference track (ELP). 

NOTE : The fixative solution is specific for the immunofixation procedure with the 1, 2, 4 and 9 BENCE JONES masks. 

IMPORTANT: In order to avoid any contamination between reagents, be careful to replace the cap on each corresponding vial after each use. 


Store fixative solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or fixative solution vial 

labels. 

Fixative solution must be free of precipitate. 

5. ANTISERA (with PN 4883) 

Preparation 

Ready to use. All antisera are mammalian, anti-human total immunoglobulins. For easy identification of antisera and as an aid in monitoring their 

application, the antisera are colored with distinct nonhazardous dyes that match the color of the vial label. 

When antiserum exhibits a slight turbidity, leave the antiserum vial at room temperature for a minimum of 10 minutes. This should be sufficient to clear 

the solution ; however, if turbidity remains, this should not affect in any way the immunological reaction. In case of insoluble precipitates, it is 

recommended to centrifuge antisera for 5 minutes at 3000 rpm. 

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Use 

For immunofixation of the electrophoresed proteins. 

NOTE : The antisera are specific for the immunofixation procedure with the 1, 2, 4 and 9 BENCE JONES masks. 

Antisera may originate from different animal species. Don’t mix two different antisera vials, even with the same specificity, and ALWAYS change the 

tip of the pipette when changing antiserum vials. 

IMPORTANT: In order to avoid any contamination between reagents, be careful to replace the cap on each corresponding vial after each use. 


Store the antisera refrigerated (2 to 8 °C). They are stable until the expiration date indicated on the kit package or antisera vial labels. 

NOTE: During transportation, the antisera can be kept without refrigeration (15 to 30 °C) for 15 days without any adverse effects on performance. 

6. APPLICATORS 

Use 

Precut, single use applicators for sample application. 

Storage 

Store the applicators in a dry place at room temperature or refrigerated. 

7. FILTER PAPERS-THIN 

Use 

Single use, thin absorbent paper pads for blotting excessive moisture off the gel surface before sample application. 

Storage 

Store the thin filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

8. FILTER PAPER COMBS 

Use 

Precut, single use, thick absorbent paper combs for blotting excess of fixative solution and antisera off the gel surface after immunofixation step. 

9. FILTER PAPERS-THICK 

Use 

Single use, thick absorbent paper pads for blotting unprecipitated proteins off the gel after immunofixation step. 

Storage 

Store the thick filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

REAGENTS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. ANTISERA AND FIXATIVE SOLUTION PACK (for 4821, 4822 and 4824 kits) 

The antisera and fixative solution pack, GAM, K, L for immunofixation, Standard mask, SEBIA, PN 4835, contains 3 antisera vials (anti-gamma, alpha, 

mu heavy chains, anti-kappa free and bound light chains and anti-lambda free and bound light chains), 1 mL each, and 1 fixative solution vial, 2.5 mL. 

They are specific for the immunofixation procedure with the 1, 2, 4 and 9 BENCE JONES masks, SEBIA. 

1.1 ANTISERA 

See previous paragraph 5. 

1.2 FIXATIVE SOLUTION 

See previous paragraph 4. 

2. ANTISERA PACK FOR FREE LIGHT CHAINS (for 4821, 4822 and 4824 kits) 

The antisera pack, anti-kappa free light chains and anti-lambda free light chains for immunofixation, Standard mask, SEBIA, PN 4836, contains 

2 antisera vials, 1 mL each. They are specific for the immunofixation procedure with the 1, 2, 4 and 9 BENCE JONES masks, SEBIA. 

Preparation, Use, Storage, stability and signs of deterioration : See previous paragraph 5. 

3. DESTAINING SOLUTION 

Preparation 

Each vial of stock Destaining Solution (SEBIA, PN 4540, 10 vials, 100 mL each) to be diluted up to 100 liters with distilled or deionized water. It is 

convenient to dilute only 5 mL of the stock solution to 5 liters, the volume of the destaining solution container. After dilution, the working destaining 

solution contains: citric acid, 0.5 g/L. 

Use 

For destaining, that is removal of excess and background stain from the gels. 

For rinsing of the staining compartment after wash step. 

To neutralize the acidity of the destaining solution, pour 15 mL of a 50 % solution of sodium hydroxide into the empty waste container. 


Store the stock destaining solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or destaining 

solution vial labels. DO NOT FREEZE. Working destaining solution is stable for one week at room temperature in a closed bottle. Do not add any 

sodium azide. 

Discard working destaining solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

To prevent microbial proliferation in the diluted destaining solution to be stored more than one week, add 5 µL/dL of ProClin 300. 

Working destaining solution added with ProClin is stable in a closed bottle at room temperature or refrigerated until the expiration date indicated on the 

kit package or destaining solution vial labels. 

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4. HYDRASYS WASH SOLUTION 

Preparation 

Each vial of the stock HYDRASYS Wash Solution (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 mL each) to be diluted up to 5 liters with distilled or deionized water. 

After dilution, the working wash solution contains: alkaline buffer pH 8.8 ± 0.3 ; sodium azide. 

WARNING: The stock wash solution contains 0.625 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Sodium 

azide may lead to formation of explosive or toxic compounds when in contact with acids, lead or copper. Always flush with a large quantity 

of water when disposing. 

Use 

The HYDRASYS wash solution is designed to wash unprecipitated proteins from gels. It also serves for cleaning of the HYDRASYS's Staining 

Compartment. Use periodically, e.g., if the instrument is used daily, wash the staining compartment weekly. 

See the package insert for directions to use. 


Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. They are stable until the expiration date indicated 

on the wash solution vial label. 

Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

5. SALINE 

Preparation 

Make 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl solution in distilled or deionized water. 

Use 

To dilute samples if necessary. 


Store at room temperature or refrigerated. Discard after 3 months or if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

For longer storage periods, add sodium azide, 0.1 g/dL. 

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 or PN 1211. 

2. Micropipettor, either manual or automated, such as HYDRAplus SEBIA, PN 1215, for an alternative way of loading the sample applicators. 

3. Wet Storage Chamber, PN 1270, supplied with HYDRASYS. 

4. Container Kit supplied with HYDRASYS. 

5. Template guide Bar SEBIA supplied with HYDRASYS. 

6. Accessory Kit for HYDRASYS IF, SEBIA, PN 1260. 

7. Accessory kit for HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES, SEBIA, PN 1267. 

8. Accessory kit for HYDRASYS 9 BENCE JONES, SEBIA, PN 1266. 

9. Pipettes: 10 µL and 200 µL. 

SAMPLES FOR ANALYSIS 

Sample collection and storage 

• The analysis is generally carried out on fresh urine. 

If needed, store urines at 2 to 8 °C for up to one week. For longer storage periods, keep urines frozen. Freezing with HEPES 0.1 M (pH 6.75) and 

sodium azide, 0.02 g/dL improves the storage stability. Frozen urines are stable for at least one month. Thawed samples can give slight application 

marks due to protein denaturation. 

IMPORTANT: Avoid boric acid as preservative. 

• If analyzing sera, they must be collected according to established procedures used in clinical laboratory testing. If needed, store sera at 2 to 8 °C 

for up to one week. For longer storage periods, freeze the samples. Frozen sera are stable at least for one month. Thawed samples may give slight 

application marks due to protein or lipoprotein denaturation. 

Sample preparation 

Urines 

Analysis is performed on unconcentrated urine. The detection level of Bence Jones protein is generally within 1 - 5 mg/dL. Concentrate urine if required 

by the procedures established in the laboratory or if a higher sensitivity is needed. A 20 - 100 fold concentration is generally sufficient. 

NOTE : Diffusion of urine samples into the applicator tips may be hindered when the urine (neat or concentrated) is turbid. It is recommended to 

remove the particulates by centrifugation (e.g., 10 minutes at 3,000 rpm) or filtration (e.g., 0.45 µm syringe filter). 

Sera 

In addition to urine, the patient’s serum may also be tested for Bence Jones protein. 

Dilute the serum in saline or in diluent for immunofixation previously diluted 1/4 (1 part diluent, 3 parts distilled or deionized water): 1/10 for ELP, GAM, 

K and L tracks (1 part serum, 9 parts diluted diluent or saline) and 1/3 (1 part serum, 2 parts diluted diluent or saline) for Kf and Lf tracks. 

NOTE : If total immunoglobulin level is < 0.5 g/dL, it is recommended to use lower dilutions of the serum sample in saline or in the diluent for 

immunofixation prepared as follows : 1 part diluent, 3 parts distilled or deionized water. For example, dilute 1/5 the serum for ELP, GAM, K and L tracks 

(1 part serum, 4 parts diluted diluent or saline) and 1/2 (1 part serum, 1 part diluted diluent or saline) for Kf and Lf tracks. 

For Ig D and/or Ig E analysis, apply the same dilutions as for kappa and lambda free and bound light chains. 

WARNINGS: 

• Avoid plasma samples. Fibrinogen gives a band in the reference track close to the application point which might be taken for a monoclonal 

immunoglobulin. 

• Some urines contain high concentration of salts. This may cause gel deformation during migration and consequently, distortion of the migration 

profiles. If such distortion makes intrepretation inaccurate, the urine should be dialyzed to eliminate the salts. 

- 13 -


• Due to bacterial contamination, the immunoglobulin (paraprotein) present in urine may undergo a proteolysis. This would lead to a positive reaction 

with anti free light chain antiserum. In such case, a serum paraprotein eliminated in urine may show a monoclonal band with the trivalent antiserum, 

and with one of the anti free and bound antisera and with the corresponding anti free light chain antiserum. 

• Polymerization of Bence Jones proteins generally lowers the sensitivity of detection with the anti free light chains antisera as the polymerization may 

block the epitopes that normally react with anti free light chain antisera. When no detection is achieved and Bence Jones proteins are suspected, 

depolymerize prior to electrophoresis: mix 100 µL urine with 5 µL beta-mercaptoethanol diluted 1:10 with saline and apply. 

PROCEDURE 

The HYDRASYS system is a semi-automated multi-parameter instrument. The automated steps include processing of HYDRAGEL agarose gels in 

the following sequence: sample application, electrophoretic migration, incubation with fixative solution and antisera, drying, staining, destaining and 

final drying. The manual steps include handling samples and gels, application of fixative and antisera and setting up the instrument for operation. 

READ CAREFULLY HYDRASYS INSTRUCTION MANUAL. 

I. MIGRATION SET UP 

1. Switch on HYDRASYS instrument. 

2. Place one applicator for HYDRAGEL 1 BENCE JONES or HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 samples), two applicators for HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 samples) or three applicators for HYDRAGEL 9 BENCE JONES, on a flat surface with the well numbers in the rightside-up 

position (Fig. 1). 

- Apply 10 µL sample in each well. Load each applicator within 2 minutes. 

| MIGRATION / IMMUNOFIXATION TRACK | 

WELLS NO : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 SAMPLE N° 1 OR 3 2 3 4 5 6 7 SAMPLE N° 2 OR 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES SAMPLE N° 1, 4 OR 7 1 2 3 4 5 6 SAMPLE N° 2, 5 OR 8 7 8 9 10 11 12 

| SAMPLE N° 3, 6 OR 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

NOTE: For HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, the wells no. 1, 8 and 15 are not used in this test ; they may be marked with a felt tip pen to 

avoid filling them with sample by mistake. 

- Place the applicator(s) into the wet storage chamber with the teeth up [handle it (them) by the plastic tooth protection frame]. 

- Let the samples diffuse into the teeth for 5 minutes after the last sample application. 

See wet chamber package insert for further details. 

3. Open the lid of the Migration Module and raise the electrode and applicator carriers. 

WARNING: Never close the lid while the carriers are raised ! 

4. Select "1 BJ SM/DM" migration program for HYDRAGEL 1 BENCE JONES, “2/4 BJ-UP SM/DM” for HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 or 

“9 BJ SM ” for HYDRAGEL 9 BENCE JONES, from the instrument menu (left side of the keyboard). 

5. Remove buffered strips from the package ; handle them by the plastic ends. Engage the punched ends of the strip's plastic backing to the pins 

on the electrode carrier ; the strip's plastic backing must face the carrier (Fig. 2). 

6. Unpack the HYDRAGEL plate. 

- Roll quickly and uniformly one thin filter paper onto the gel surface to absorb the excess of liquid. Remove the paper immediately. 

WARNING: Do not leave the filter paper for a too long contact with the gel to avoid its dehydration. 

- Pool 120 µL distilled or deionized water for HYDRAGEL 1 BENCE JONES or 200 µL for HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 and HYDRAGEL 

9 BENCE JONES, on the lower third of the frame printed on the temperature control plate of the migration module. 

- Place the gel plate (the gel side up) with its edge against the stop at the bottom of the printed frame (Fig. 3). 

- Bend the gel and ease it down onto the water pool (Fig. 3). Ensure that no air bubbles are trapped, water is spread underneath the entire 

gel plate and the gel is lined up with the printed frame. 

7. Lower both carriers down. In this position the buffered strips do not touch the gel. DO NOT FORCE THE CARRIERS ALL THE WAY DOWN. 

8. Remove the applicator(s) from the wet chamber. Handle it (them) by the protection frame. 

- Snap off the applicator teeth's protection frame. 

- Place the applicator(s) on the carrier : 

- With HYDRAGEL 1 BENCE JONES or HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 samples), into position No 6, 

- With HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 samples), into position No 3 and 9, 

- With HYDRAGEL 9 BENCE JONES, into position No 2, 6 and 10. 

To improve reproducibility of sample application, always position the applicators on the left side of the carrier. 

IMPORTANT: The numbers printed on the applicator(s) must face the operator (Fig. 4). 

9. Make sure the carriers are lowered. Close the lid of the migration module. 

10. Start the procedure immediately by pressing the green arrow «START» key on the left side of the keyboard. 

IMPORTANT: Make sure that the ventilation air inlet on the right side of the instrument is not blocked. 

MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The two carriers are lowered so that buffered strips and applicator(s) contact the gel surface. 

• Sample applicator carrier rises up. 

• Migration is carried out under 10 W constant for HYDRAGEL 1 BENCE JONES and under 20 W constant for HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, until 

42 Vh accumulated (for about 9 minutes) and under 20 W constant until 31 Vh accumulated (for about 7 minutes) for HYDRAGEL 9 BENCE JONES, 

at 20 °C controlled by Peltier effect. 

- 14 -


• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• An audible beep signals that the migration module lid unlocks. The following message is displayed on the screen : « AS». 

NOTE: The migration module lid remains locked during all migration steps. 

II. IMMUNOFIXATION SET UP 

1. Open the migration module lid. 

2. Remove the sample applicator(s) and discard. 

3. Raise both carriers, remove the buffered strips by their plastic ends and discard. 

- Remove both carriers. 

- Wipe electrodes with soft wet tissue. 

- Leave the gel in place in the migration module. 

4. Set up the reagent application template as follows (Fig. 5): 

- Position the application template guide on the lower two anchoring pins (the guide may stay in the migration module all the time). 

- Hold the template by the flap and insert it onto the guide (the right clip on the notch). 

- Lower the template onto the gel. 

- Adjust the template position for perfect alignment between electrophoretic profiles and wells of the template (see accessory kit for 

HYDRASYS 9 BENCE JONES SEBIA, PN 1266, for instructions). 

5. Apply reagents as follows: 

VOLUME (µL) TROUGH Template Template REAGENT COLOR 1, 2 & 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 fixative solution yellow GAM 25 15 trivalent antiserum violet K 25 15 anti-kappa light chain (free & bound) antiserum green L 25 15 anti-lambda light chain (free & bound) antiserum blue Kf 25 15 anti-kappa free light chain antiserum orange 

| Lf | 25 | 15 | anti-lambda free light chain antiserum | red | 

NOTE: To avoid a mix-up, reagent colors are shown both on the vial labels and the application template wells. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : It is recommended to apply the antisera in the following order: lambda free, kappa free, lambda, kappa and 

GAM, and at last, fixative solution. 

- Take reagents without trapping any air bubbles in the pipette tip. 

- Apply the reagents (Fig. 6): 

- Hold pipette vertically and rest its tip lightly at the bottom of the well. 

- Inject reagent so it spreads through the trough without trapping any bubbles. 

6. Close the lid of the migration module. 

7. Start the procedure immediately by pressing the green arrow «START» key on the left side of the keyboard. A message «[INCUBATION]» 

appears on the screen. 

IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Incubation at 20 °C for 10 minutes (controlled by Peltier effect). 

• An audible beep signals that the migration module lid unlocks. The following message is displayed on the screen: «❊ AS (SM)». 

NOTE: The migration module lid remains locked during incubation. 

III. REMOVAL OF THE EXCESS OF REAGENTS 


2. Remove the excess of reagents with the filter paper combs : one comb for the 1 BENCE JONES and 2 BENCE JONES templates, two combs 

for the 4 BENCE JONES template and three combs for the 9 BENCE JONES template (Fig. 7) : 

- Insert the comb(s) at a 30 ° angle into the slots at the lower end of the template troughs so that the teeth touch the vertical side away from 

the operator. 

- Allow the teeth to contact delicately the liquid by tilting the comb(s) to a 45 ° angle enabling the teeth to wick off the liquid (Fig. 8). 

IMPORTANT: The teeth must not contact the gel. Each comb must stay inclined (45 °). If it is straight up, it could damage the gel. 

3. Start the procedure by pressing the «START» key (green arrow on the left side of the keyboard). 

REAGENT REMOVAL - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The reagents are allowed to wick off the troughs for 15 seconds at 20 °C (controlled by Peltier effect). 

• An audible beep rings. The following message is displayed on the screen : « PAP.». 

IV. BLOTTING OF THE GEL 

1. Remove the comb(s). 

2. Check that the reagents are well absorbed as indicated by: 

- the absence of reagents on the gel. 

- the full length of the teeth are stained. 

If the reagent absorption is incomplete, insert the same filter paper comb again (in the same position) and repeat manually the removal 

procedure. 

3. Grasp the reagent application template by the flap, lift it and remove it. 

4. Apply a thick filter paper on the gel: 

- incline the filter paper at a 45 ° angle and line up its edge with the gel edge. 

- ease it down onto the gel. 

IMPORTANT: Press firmly on the whole surface of the filter paper to ensure perfect adherence on the gel. 

5. Close the lid of the migration module. 


7. Clean the application template with a small brush (e.g., toothbrush). DO NOT USE ALCOHOL OR SOLVENTS. Ensure the template is 

completely dry before re-use ; remove water droplets from the wells by tapping it on soft paper. 

- 15 -


BLOTTING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Blotting at 40 °C controlled by Peltier effect, for 3 minutes. 

• An audible signal (beep) rings. The following message is displayed on the screen: «❊ PAP.». 

NOTE: The migration module lid remains locked during blotting. 

V. DRYING OF THE GEL 


2. Remove the filter paper and leave the gel in place. 

3. Close the lid. 


DRYING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Drying at 50 °C controlled by Peltier effect, for 6 minutes. 

• A beep signals that the cover unlocks. The plate temperature remains at 50 °C until the lid is opened. 

NOTE: The migration module lid remains locked during the drying step. 

VI. GEL PROCESSING SET UP 

1. Open the lid. 

2. Remove the dried gel film for further processing. 

3. Open the gel holder. Lay it flat and position the dried gel (with gel side facing up) into the grooves of the two rods and close the holder. Make 

sure that the film is correctly positioned inside the holder (Fig. 9). 

4. Place the gel holder into the Gel Processing / Staining Module. 

IMPORTANT: Before starting the gel processing / staining program, check the following: 

- the wash solution container contains at least 400 mL of wash solution ; 

- the staining container is filled with 300 mL of staining solution ; 

- the destaining container contains at least 1 liter of destaining solution ; 

- the waste container is empty. 

For reagent line connection: Refer to the information displayed on the screen of the instrument (select key: REAGENT LINES). 

IMPORTANT: Do not forget to block up the unused lines. 

5. Select «IF ACID VIOLET» staining program from the instrument menu and start the run by pressing the «START» key (green arrow on the 

right side of the keyboard). 

During staining, destaining and drying steps, the compartment remains locked. 

After cooling step, an audible beep signals that the compartment unlocks (the ventilation is maintained until the gel holder is removed). 

NOTES: 

- Temperature of the migration plate keeps decreasing since the lid has been opened until it reaches 20 °C (in less than 5 minutes). Then a new 

migration run may start. 

- Return the sample applicator and electrode carriers back in place. 

- Wipe the temperature control plate with a soft wet tissue. 

VII.GEL PROCESSING COMPLETION 

1. Remove the gel holder from the compartment, open it and remove the dried gel. 

2. If needed, clean the back side (the plastic support side) of the dry film with a damp soft paper. 

NOTE : The lengths of electrophoretic migrations may be slightly different with gels containing 2 or 3 analysis rows, without any adverse effects 

on performance. 

RESULTS 

Interpretation 

Presence of a Bence Jones protein in urine is characterized by: 

- a monoclonal band detected with one of the anti-free and bound light chains kappa or lambda antisera, (K or L tracks), 

- the same monoclonal band detected with the corresponding anti free light chain antiserum (KF ou LF tracks). 

- no reaction with the trivalent antiserum (GAM track), 

Serum paraprotein eliminated in urine without Bence Jones protein is characterized by: 

- one monoclonal band detected with the trivalent antiserum, 

- the same band detected with one of the anti free and bound light chain antisera, and 

- no reaction with the corresponding anti free light chain antiserum. 

Serum paraprotein eliminated in urine associated with a Bence Jones protein is characterized by: 

- one monoclonal band detected with the trivalent antiserum, 

- the same band detected with one of the anti free and bound light chain antisera, 

- one monoclonal band detected with one of the anti free and bound light chain antisera. This band generally does not migrate at the same 

level as the one detected with the trivalent antiserum, 

- the same band detected with one of the anti free light chain antisera. 

In rare cases, the two bands migrate together (then, the staining in the light chain track is stronger than that in the GAM track). 

Polymerized forms of Bence Jones protein are characterized by: 

- lack of reaction with the trivalent antiserum, 

- several bands revealed with one of the anti free and bound light chain antisera, 

- the same bands may also be detected with the corresponding free light chain antiserum. 

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Limitations 

The use of antisera other than those specific for the immunofixation procedure with the standard mask may affect the results. 

Due to the resolution and sensitivity limits of zone electrophoresis, it is possible that some monoclonal components may not be detected with this 

method. 

Troubleshooting 

Call Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instructions for the preparation and storage of materials, and for the 

procedure were carefully followed. 

Kit reagent Safety Data Sheets and informations on waste products elimination are available from the Technical Service of the supplier. 

PERFORMANCE DATA 


Reproducibility 

Gels - to - Gel 

Four urine samples containing non-polymerized, either lambda or kappa, Bence Jones light chain were each run on 10 gels from the same lot using 

the standard procedure and HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit. 

Lot - to - Lot 

Two urine samples containing non-polymerized, either kappa or lambda, Bence Jones light chain were used. Each sample was applied in all (24) tracks 

of two HYDRAGEL 4 BENCE JONES gels. One gel of the two was immunofixed with appropriate anti free & bound light chain antiserum and the other 

gel with anti free light chain antiserum. Gels from three different lots were used this way with each sample. 

Results: The Bence Jones proteins were correctly identified in each sample and on all gels, there were no false positives and no differences were 

observed among the repetitions. 

Accuracy - Detection and Identification of Bence Jones Proteins 

Thirty six urine and ten serum samples, pathological and normal, were analyzed using the HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit and a similar, 

commercially available immunofixation procedure. The results of the two immunofixation procedures were in perfect agreement with each other and 

with the results and diagnosis provided by a hospital. 


Reproducibility within gel and specificity 

Reproducibility within gel was demonstrated on two urine samples (one sample with lambda Bence Jones light chain and one sample with kappa 

Bence Jones light chain) and on one serum sample with a lambda light chain paraprotein and a lambda Bence Jones light chain. Each sample was 

run on two lots of HYDRAGEL 9 BENCE JONES gels. All tested samples gave identical results for the two lots showing patterns typical and as 

expected for the type of sample tested. Immunofixation repeatedly showed the expected monoclonal bands with the three pathological samples. 

Reproducibility between gels and specificity 

Reproducibility between gels was demonstrated on eight pathological samples (five urines and three serum samples with Bence Jones proteins) and 

on one normal urine sample, without Bence Jones protein. Samples were run on 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES gels from three lots. All tested 

pathological samples gave identical results on each gel showing typical patterns and as expected for the type of sample tested and no monoclonal 

band was detected after immunofixation from the normal urine sample. 

Accuracy 

Twenty nine pathological urine and serum samples (21 urines and 8 sera) with one or more kappa or lambda Bence Jones proteins, and seven 

samples (6 urines and 1 serum) without Bence Jones protein, were run using HYDRAGEL 9 BENCE JONES procedure and a similar commercially 

available agarose gel immunofixation system. The results of the two immunofixation procedures were in perfect agreement with each other : identical 

bands were detected on all pathological samples with each system or procedure and no monoclonal band was detected after immunofixation from the 

normal samples. 

BIBLIOGRAPHY 

(1) Didier Le Carrer, "Serum Protein Electrophoresis and Immunofixation, Illustrated Interpretations", SEBIA Laboratories, 1994, 120 pp, Ed. Hatier - Paris. 

(2) D. F. Keren, “High Resolution Electrophoresis and Immunofixation, Techniques and Interpretation”, Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

1994, 397 pp. 

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ANWENDUNGSBEREICH 

Die HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES und HYDRAGEL 9 BENCE JONES Kits dienen 

zum Nachweis von Bence-Jones-Proteinen oder freien (Kappa- oder Lambda-) Leichtketten in Humanurin bzw. -serum durch Immunfixationselektrophorese 

auf Agarosegelen in alkalischem Puffer (pH-Wert 9,1). Sie wurden für das halbautomatische Elektrophoresegerät HYDRASYS 

entwickelt, das die Bearbeitung der Gele übernimmt, bis diese für die Auswertung vorliegen. Die in der Probe enthaltenen Proteine werden zunächst 

elektrophoretisch getrennt und dann mit Antiseren folgender Spezifität immunfixiert: (1) einem trivalenten Antiserum gegen Gamma- (Ig G), Alpha- 

(Ig A) und My-Schwerketten (Ig M), (2) Antiserum gegen freie und gebundene Kappa-Leichtketten, (3) Antiserum gegen freie und gebundene Lambda- 

Leichtketten, (4) Antiserum gegen freie Kappa-Leichtketten und (5) Antiserum gegen freie Lambda-Leichtketten. Nach der Immunfixation werden die 

ausgefällten Proteine mit Säureviolett gefärbt. Überschüssige Farbe wird durch eine saure Lösung entfernt. 

Jedes Agarosegel dient zur Abarbeitung von: 

- Einer Probe im HYDRAGEL 1 BENCE JONES Kit, 

- zwei Proben im HYDRAGEL 2 BENCE JONES Kit, 

- vier Proben im HYDRAGEL 4 BENCE JONES Kit, 

- neun Proben im HYDRAGEL 9 BENCE JONES Kit. 

In-vitro-Diagnostikum. 

TESTPRINZIP 

Bei atypischen Banden im elektrophoretischen Muster, vor allem in den Betaglobulin- und Gammaglobulinfraktionen, besteht immer der Verdacht, daß 

es sich um monoklonale Proteine und damit um ein Anzeichen für Gammopathien handeln könnte. Zur Identifikation dieser atypischen Banden wird 

die Methode der Immunfixation angewandt. 

Die Immunfixationselektrophorese erlaubt die Bindung der Proteine in situ nach der Elektrophorese, indem sie unlösliche Komplexe mit den 

entsprechenden Antiseren bilden. 

Das Verfahren teilt sich in vier Schritte: 

1. Trennung der Proteine durch Elektrophorese auf Agarosegel. 

2. Fixierung und Immunpräzipitation der Proteine nach der Elektrophorese: Fixierlösung und Antiseren werden direkt auf die Geloberfläche und damit 

auf die entsprechenden elektrophoretischen Migrationsspuren aufgebracht. Die Fixierlösung und Antiseren diffundieren in das Gel, wobei alle 

Proteine bzw. die entsprechenden Antigene ausgefällt werden. 

3. Die ungebundenen, löslichen Proteine werden vom Gel durch Abblotten und Waschen entfernt. Das Präzipitat des Antigen-Antikörper-Komplexes 

ist in der Gelmatrix eingeschlossen. 

4. Die ausgefällten Proteine werden durch Färbung sichtbar gemacht. Die Immunpräzipitationsbanden werden anschließend mit den entsprechenden 

atypischen Banden im elektrophoretischen Muster der Probe verglichen. 

Zum Nachweis und zur Identifikation der vermuteten monoklonalen Banden erfolgt die gleichzeitige Elektrophorese der Probe in sechs Spuren. Nach 

der Elektrophorese dient die ELP-Spur, die das elektrophoretische Muster der in der Probe enthaltenen Proteine aufweist, als Referenz. Die übrigen 

fünf Spuren gestatten die Identifikation der monoklonalen Komponente(n) entweder durch ihre Reaktion(en) mit dem trivalenten Antiserum gegen 

(Gamma, Alpha- und My-) Schwerketten sowie mit den einzelnen Antiseren gegen freie und gebundene Kappa- und Lamda-Leichtketten und gegen 

freie Kappa- und Lamda-Leichtketten oder dadurch, daß diese Reaktionen ausbleiben. 

Mit dieser einfachen und schnellen Technik werden eindeutige und leicht interpretierbare Ergebnisse erzielt. 

MITGELIEFERTE REAGENZIEN UND MATERIALIEN IN HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES UND HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT BESTELL. NR. 4821 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT BESTELL. NR. 4822 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT BESTELL. NR. 4824 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KIT BESTELL. NR. 4883* Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele 10 Gele 80 Gele Pufferstreifen (gebrauchsfertig) 10 Pack, jeweils 2 10 Pack, jeweils 2 80 Pack, jeweils 2 Säureviolett-Färbelösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 75 ml 1 Fläschchen, 75 ml 8 Fläschchen, Jeweils 75 ml Fixierlösung (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 14,4 ml Säugetier-Immunglobuline gegen Human-Gamma-, Alpha-, 1 Fläschchen, 10,8 ml My-Schwerketten (trivalent) (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie und gebundene 1 Fläschchen, 10,8 ml Human-Kappa-Leichtketten (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie und gebundene 1 Fläschchen, 10,8 ml Human-Lambda-Leichtketten (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie Human-Kappa- 1 Fläschchen, 10,8 ml Leichtketten (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie Human-Lambda- 1 Fläschchen, 10,8 ml Leichtketten (gebrauchsfertig) Applikatoren (gebrauchsfertig) 1 Pack zu 10 2 Pack zu 10 Stück 24 Pack zu je 10 Stück Filterpapier, dünn 1 Pack zu 10 1 Pack zu 10 8 Pack zu je 10 Stück Filterpapier-Kämme 1 Pack zu 10 2 Pack zu 10 24 Pack zu je 10 Stück 

| Filterpapier, dick | 1 Pack zu 10 | 1 Pack zu 10 | 8 Pack zu je 10 Stück | 


HINWEIS: Die Fixierlösung und die Antiseren werden mit Ausnahme bei den MAXI-KITS getrennt von den Kits geliefert. (SIEHE BENÖTIGTE ABER 

NICHT MITGELIEFERTE REAGENZIEN). 

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SEBIA ARBEITSANLEITUNG - Deutsch

FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE 

Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden. 

BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN. 


1. AGAROSEGELE 

Vorbereitung 

Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält: Agarose, 8 g/l ; Tris-Barbital-Puffer (pH-Wert 9,1 ± 0,1) ; Additiva zur Optimierung der Leistung, 

in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Die Agarosegele enthalten 0,31 % Barbital und 0,34 % Natriumbarbital. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen 

Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! 

Gebrauch 

Hilfsmedium für die Proteinelektrophorese und Immunfixation. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall 

Gele waagerecht in der Originalverpackung bei Raumtemperatur (15 bis 30 °C) oder im Kühlschrank (2 bis 8 °C) aufbewahren. Sie bleiben bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf der Kit- oder Gelverpackung angegeben ist. (Der Pfeil auf der Vorderseite der Kit-Schachtel muß nach oben zeigen.) Eine 

Lagerung in der Nähe eines Fensters oder einer Hitzequelle ist zu vermeiden. Starke Temperaturschwankungen sind zu vermeiden. 

NICHT EINFRIEREN. 

Das Gel ist zu verwerfen bei: 

(i) Kristallen oder Niederschlag auf der Geloberfläche oder sehr weicher Gelstruktur (was darauf hindeutet, daß das Gel gefroren war) ; 

(ii) Bakterien- oder Schimmelpilzbildung ; 

(iii) einer ungewöhnlich stark ausgeprägten Flüssigkeitsansammlung in der Gel-Box (was auf einen Austritt von Puffer aus dem Gel aufgrund 

unsachgemäßer Lagerung hindeutet). 

2. PUFFERSTREIFEN 

Vorbereitung 

Die als Streifen vorliegenden Pufferschwämme sind gebrauchsfertig. Jeder Pufferstreifen enthält: Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 9,1 ± 0,3 ; Natriumazid ; 

Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Der im Streifen enthaltene Puffer enthält 0,92 % Barbital, 1,03 % Natriumbarbital und 0,30 % Natriumazid. Nicht einnehmen! 

Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! Darf bei der Entsorgung nicht mit Säuren, Blei oder Kupfer in Kontakt 

kommen, da sich sonst explosive bzw. toxische Natriumazidverbindungen bilden können. 

Gebrauch 

Die Pufferstreifen fungieren als Elektrophoresepufferreservoir und gewährleisten den Kontakt zwischen dem Gel und den Elektroden. 


Bewahren Sie die Pufferstreifen waagerecht liegend in der Original-Schutzverpackung bei Zimmertemperatur oder gekühlt auf. (Der Pfeil auf der 

Verpackungsschachtel muss nach oben zeigen.) Die Pufferstreifen sind bis zum angegebenen Verfallsdatum auf der Schachtel oder auf dem Etikett 

der Streifen stabil. 

NICHT EINFRIEREN! 

Verwerfen Sie die Pufferstreifen, wenn die Verpackung geöffnet ist und die Streifen ausgetrocknet sind. 

3. SÄUREVIOLETT-FÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt des Fläschchens konzentrierte Säureviolett-Färbelösung mit destilliertem oder entionisiertem Wasser auf 300 ml auffüllen. 

Nach Verdünnung enthält die gebrauchsfertige Färbelösung: saure Lösung pH ≈ 2 ; Säureviolett, 0,2 g/dl ; Äthylenglykol, 3,25 % ; Zusätze, 

ungefährlich bei den eingesetzten Konzentrationen, nötig für die optimale Durchführung. 

WARNUNG: Nicht Verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Gele nach der elektrophoretischen Trennung der Proteine und nach der Immunfixation. 

WICHTIG: Mit der Färbelösung können lediglich zehn Gele angefärbt werden. Tauschen Sie die Lösung nach zehn Färbeschritten aus. 


Zur Vermeidung von Verdunstungsverlusten sowohl konzentrierte als auch verdünnte Färbelösung in verschlossenen Behältern bei Raumtemperatur 

oder im Kühlschrank aufbewahren. Konzentrierte Färbelösung bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit-Verpackung oder auf dem 

Fläschchenetikett der Färbelösung angegeben ist. Verdünnte Färbelösung bleibt 6 Monate stabil. 

4. FIXIERLÖSUNG (Bestell-Nr. 4883) 

Vorbereitung 

Fixierlösung ist gebrauchsfertig und enthält: saure Lösung ; Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

Damit die Fixierlösung schnell und sicher angewandt werden kann, ist sie mit einem gesundheitlich unbedenklichen Farbstoff markiert. Das 

Fläschchenetikett und die entsprechende Spur auf der Schablone zum Reagenzauftrag weist dieselbe Farbe auf. 

Gebrauch 

Zur Fixierung der elektrophoretisch getrennten Proteine in der Referenzspur (ELP). 

Die Fixierlösung ist speziell für die Immunfixationsprozedur mit der 1, 2, 4 und 9 BENCE JONES Standard Maske abgestimmt. 

ACHTUNG: Um eine Kontamination der Reagenzien zu vermeiden, dürfen die Verschlußkappen der Gefäße nicht vertauscht werden. 


Fixierlösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit-Verpackung oder auf dem 

Fläschchenetikett der Fixierlösung angegeben ist. 

Fixierlösung darf kein Präzipitat aufweisen. 

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5. ANTISEREN (Bestell-Nr. 4883) 

Vorbereitung 

Gebrauchsfertig. Alle Antiseren sind Säugetier-Anti-Human-Gesamtimmunoglobuline. Damit die Antiseren schnell und sicher angewendet werden 

können, sind sie mit gesundheitlich unbedenklichen Farbstoffen markiert, die den Farben auf dem Fläschchenetikett entspricht. Sollte das Antiserum 

eine leichte Trübung aufweisen, sollte es für mindestens 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert werden. Dies sollte für die Klärung der Lösung 

ausreichen. Eine eventuell noch vorhandene leichte Trübung sollte die immunologische Reaktion nicht beeinflussen. Im Falle von unlöslichen 

Präzipitaten, wird eine fünfminutige Zentrifugation bei 3000 Upm empfohlen. 

Gebrauch 

Zur Immunfixation von Proteinen nach der Elektrophorese. 

Die Antiseren sind speziell für die Immunfixationsprozedur mit der 1, 2, 4 und 9 BENCE JONES Standard Maske abgestimmt. 

Die Antiseren können von unterschiedlichen Tierspezies stammen. Nicht den Inhalt von zwei unterschiedlichen Antiserenfläschchen mischen, auch 

nicht bei gleicher Spezifität und IMMER eine neue Pipettenspitze benutzen, wenn das Antiserumfläschchen gewechselt wird. 

ACHTUNG: Um eine Kontamination der Reagenzien zu vermeiden, dürfen die Verschlußkappen der Gefäße nicht vertauscht werden. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen von Verfall 

Antiseren im Kühlschrank aufbewahren. Sie sind bis Verfalldatum auf der Kit-Verpackung oder auf den Antiserenfläschchen stabil. 

HINWEIS: Während des Transports können die Antiseren ungekühlt (15 bis 30 °C) für 15 Tage ohne nachteilige Effekte für die Durchführung 

aufbewahrt werden. 

6. APPLIKATOREN 

Gebrauch 

Einmalapplikatoren für den Probenauftrag. 

Lagerung 

Applikatoren vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

7. FILTERPAPIER, DÜNN 

Gebrauch 

Dünnes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten überschüssiger Flüssigkeit von der Gel-oberfläche vor dem Probenauftrag. 

Lagerung 

dünnes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

8. FILTERPAPIER-KÄMME 

Gebrauch 

Kämme aus dickem Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten überschüssiger Fixierlösung und Antiseren von der Geloberfläche nach der 

Immunfixation. 

9. FILTERPAPIER, DICK 

Gebrauch 

Dickes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten nicht ausgefällter Proteine nach der Immunfixation. 

Lagerung 

dickes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE REAGENZIEN (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. ANTISEREN UND FIXIERLÖSUNGSPACKUNG (für Art.-Nr. 4821, 4822 und 4824 Kits) 

Die Antiseren Fixierlösungspackung, GAM, K, L (Antiseren gegen Gamma-, Alpha- und My-Schwerketten, Antiseren gegen freie und gebunden 

Kappa- und Lambda- Leichtketten), Standard Maske, SEBIA Art.-Nr. 4835, enthält 3 Antiserenfläschchen, jeweils mit 1 ml Inhalt und ein Fläschchen 

mit Fixierer, mit 2,5 ml. Sie sind speziell auf die Immunfixationsprozedur mit der 1, 2, 4 und 9 BENCE JONES Standard Maske, SEBIA, 

abgestimmt. 

1.1 ANTISEREN 

Siehe vorheriger Abschnitt 5. 

1.2 FIXIERLÖSUNG 

Siehe vorheriger Abschnitt 4. 

2. ANTISERENPACKUNG FÜR FREIE LEICHTKETTEN (für Art.-Nr. 4821, 4822 und 4824 Kits) 

Die Antiserenpackung, Antiseren gegen freie Kappa/Lambda-Leichtketten, Standard Maske, SEBIA, Art.-Nr. 4836, enthält 2 Antiserenfläschchen, je 

1 ml Inhalt. Sie sind speziell auf die Immunfixationsprozedur mit der 1, 2, 4 und 9 BENCE JONES Standard Maske abgestimmt. 

Vorbereitung, Gebrauch, Lagerung, Stabilität und Anzeichen von Verfall: siehe vorheriger Abschnitt 5. 

3. ENTFÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte Entfärbelösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4540, 10 Fläschchen zu je 100 ml) mit destilliertem oder entionisiertem 

Wasser auf 100 Liter auffüllen. Es empfiehlt sich, nur 5 ml konzentrierte Lösung auf 5 Liter, dem Fassungsvermögen des Behälters für die 

Entfärbelösung, aufzufüllen. Verdünnte Entfärbelösung enthält: Zitronensäure, 0,5 g/l. 

Gebrauch 

Zum Entfärben, d.h. Auswaschen von überschüssiger Farbe und zur Entfernung der Gelhintergrundfärbung. 

Zum Spülen der Färbekammer nach dem Waschen. 

Zur Neutralisation der sauren Entfärbelösung können 15 ml einer 50 % Natronlauge (NaOH) in den leeren Abfallbehälter gefüllt werden. 

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Konzentrierte Entfärbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit- 

Verpackung oder auf dem Fläschchenetikett der Entfärbelösung angegeben ist. NICHT EINFRIEREN. Verdünnte Entfärbelösung bleibt bei 

Raumtemperatur in einem verschlossenen Behälter eine Woche stabil. Kein Natriumazid zugeben. 

Verdünnte Entfärbelösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

Um mikrobielles Wachstum in der verdünnten Entfärbelösung zu verhindern, wenn sie länger als 1 Woche aufgehoben wird, sollten 50 µl/l ProClin 300 

zugesetzt werden. 

Die mit ProClin versetzte, gebrauchsfertige Entfärbelösung ist in der verschlossenen Flasche bei Zimmertemperatur oder gekühlt bis zum Verfallsdatum 

stabil, das auf der Verpackung oder auf den Flaschenetiketten angegeben ist. 

4. HYDRASYS WASCHLÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte HYDRASYS Waschlösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4541, 10 Fläschchen zu je 80 ml) mit destilliertem oder 

entionisiertem Wasser auf 5 Liter auffüllen. Verdünnte Waschlösung enthält: alkalischen Puffer, pH-Wert 8,8 ± 0,3 ; Natriumazid. 

WARNHINWEIS: Konzentrierte Waschlösung enthält 0,625 % Natriumazid. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort 

den Arzt aufsuchen! Natriumazid kann bei Kontakt mit Säuren, Blei oder Kupfer zu explosiven bzw. toxischen Verbindungen reagieren. Bei 

der Entsorgung stets mit reichlich Wasser nachspülen. 

Gebrauch 

HYDRASYS Waschlösung dient zum Auswaschen der nicht ausgefällten Proteine aus den Gelen. Sie wird ebenfalls zum Reinigen des HYDRASYS 

Färbemoduls eingesetzt. Die Reinigung in regelmäßigen Abständen durchführen: Wird das Gerät zum Beispiel täglich genutzt, sollte das Färbemodul 

einmal pro Woche gereinigt werden. 

Hinweise zum Gebrauch finden Sie auf der Packungsbeilage. 


Konzentrierte und verdünnte Waschlösung in geschlossenen Behältern bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf dem Fläschchenetikett der Waschlösung angegeben ist. 

Verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

5. KOCHSALZLÖSUNG 

Vorbereitung 

Mit destilliertem oder entionisiertem Wasser eine 0,15 M (9 g/l) -NaCl-Lösung herstellen. 

Gebrauch 

Zum Verdünnen von Proben, sofern erforderlich. 


Bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Die Lösung muß nach 3 Monaten verworfen werden oder wenn sich ihr Aussehen verändert 

hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. Bei längerer Lagerung Natriumazid zugeben, 1 g/l. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE AUSSTATTUNG (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. HYDRASYS System, SEBIA, Bestell-Nr. 1210 oder Nr. 1211. 

2. Für das Beladen der Applikatoren kann alternativ eine manuelle Mikropipette oder der Pipettierautomat HYDRAplus SEBIA, Bestell-Nr. 1215, 

verwendet werden. 

3. Feuchte Kammer, Bestell-Nr. 1270, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

4. Behälter-Kit, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

5. Schablonen-Führungsstab SEBIA, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

6. Zubehörkit für HYDRASYS IF, SEBIA, Bestell-Nr. 1260. 

7. Zubehörkit für HYDRASYS 9 BENCE JONES, SEBIA, Bestell-Nr. 1266. 

8. Zubehörkit für HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES, SEBIA, Bestell-Nr. 1267. 

9. Pipetten: 10 µl und 200 µl. 

PROBEN FÜR DIE ANALYSE 

Probensammlung und -lagerung 

• Die Analyse wird in der Regel an frischen Urinproben durchgeführt. 

Falls erforderlich, können die Proben bei 2 bis 8 °C bis zu eine Woche aufbewahrt werden. Für eine längere Lagerung die Proben einfrieren. Die 

Lagerstabilität gefrorener Proben erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit HEPES, 0,1 M (pH-Wert 6,75), und Natriumazid, 0,2 g/l, versetzt 

werden. Durch Einfrieren bleiben die Proben mindestens einen Monat stabil. Nach dem Auftauen können die Proben aufgrund der 

Proteindenaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

WICHTIG: Keine Borsäure als Konservierungsmittel verwenden. 

• Für die Analyse von Seren die Proben nach einem gebräuchlichen Verfahren für klinische Labortests gewinnen. Bei Bedarf können Seren bis zu 

eine Woche bei 2 bis 8 °C gelagert werden. Bei längerer Lagerung die Proben einfrieren. Durch Einfrieren bleiben die Serumproben mindestens 

einen Monat stabil. Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Protein- bzw. Lipoproteindenaturierung leichte Trennspuren an der 

Auftragsstelle hinterlassen. 

Probenvorbereitung 

Urin 

Die Analyse erfolgt an nichtkonzentrierten Proben. Die Nachweisgrenze für Bence-Jones-Protein beträgt 50 mg/l. Wird eine höhere Empfindlichkeit 

benötigt, die Proben entsprechend konzentrieren. 

ZU BEACHTEN: Die Diffusion der Urinproben in die Applikatorspitzen kann behindert sein, wenn der Urin (nativ oder konzentriert) trüb ist. Es wird 

empfohlen, die Partikel durch Zentrifugation (z.B. 10 Minuten bei 3.000 Upm) oder Filtration (z.B. 0,45 µm Filter) zu entfernen. 

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Serum 

Zusätzlich zum Urin wird empfohlen, ebenfalls das Patientenserum auf Bence Jones Protein zu testen. 

Das Serum wird mit physiologischer Kochsalzlösung oder in vorab 1/4 verdünntem Diluent für Immunfixation (1 Teil Diluent + 3 Teile destilliertes oder 

deionisiertes Wasser) verdünnt: 1/10 für die Spuren ELP, GAM, K und L (1 Teil Serum + 9 Teile verdünntes Diluent oder physiologische 

Kochsalzlösung) sowie 1/3 für die Spuren Kf und Lf. 

HINWEIS : Wenn die Gesamt-Immunglobulinkonzentration kleiner als 5 g/l ist, empfehlen wir das Serum entsprechend geringer zu verdünnen: 1/5 für 

die Spuren ELP, GAM, K und L (1 Teil Serum + 4 Teile verdünntes Diluent oder physiologische Kochsalzlösung) sowie 1/2 für die Spuren Kf und Lf. 

Für eine Ig D und/oder Ig E Immunfixation sollte die Probe in der gleichen Verdünnung wie für die Spuren Kappa und Lambda (frei und gebunden) 

eingesetzt werden. 

WICHTIG 

• Plasmaproben vermeiden. Das Fibrinogen ergibt eine Bande in der Nähe der Auftragsstelle, die mit monoklonalem Immunglobulin verwechselt 

werden könnte. 

• Urinproben enthalten mitunter hohe Salzkonzentrationen, was während der Migration zur Deformation des Gels und folglich zu verzerrten 

Migrationsmustern führen kann. Ist die Interpretation aufgrund derartiger Erscheinungen erschwert, sollte der Urin zur Entfernung der Salze 

dialysiert werden. 

• Proteolytische Urinproben können zu einer positiven Reaktion mit den Antiseren gegen freie Leichtketten führen. In diesem Fall kann ein über den 

Urin ausgeschiedenes Serumparaprotein sowohl beim trivalentem Antiserum als auch bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene 

Leichtketten sowie beim Antiserum gegen die entsprechende freie Leichtkette eine monoklonale Bande hinterlassen. 

• Eine Polymerisation der Bence Jones Proteine verringert im Allgemeinen die Sensitivität im Nachweis mit Antiserum gegen freie Leichtketten, da 

durch die Polymerisation die Epitope, die mit den Antiseren gegen freie Leichtketten reagieren, blockiert werden können. Wenn Bence Jones 

Proteine vermutet werden, deren Nachweis jedoch negativ war, sollte der Urin vor der Elektrophorese depolymerisiert werden: 100 µl Urin werden 

mit 5 µl einer ß-Mercaptoethanol-Verdünnung (1:10 Verdünnung mit physiologischer Kochsalzlösung) versetzt und aufgetragen. 

DURCHFÜHRUNG 

Das HYDRASYS System ist ein halbautomatisches Multiparameter-Gerät, das eine automatische Bearbeitung der HYDRAGEL Agarosegele in der 

nachstehenden Reihenfolge durchführt: Probenapplikation, elektrophoretische Migration, Inkubation mit Fixierlösung und Antiseren, Trocknen, Färben, 

Entfärben und Endtrocknen. Zu den manuellen Schritten gehört die Handhabung der Proben und Gele, der Auftrag der Fixierlösung und der Antiseren 

sowie die Bedienung des Geräts. 

DIE BEDIENUNGSANLEITUNG ZUM HYDRASYS SYSTEM AUFMERKSAM DURCHLESEN. 

I. VORBEREITUNG DER MIGRATION 

1. HYDRASYS einschalten. 

2. Bei Verwendung von HYDRAGEL 1 BENCE JONES oder HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 Proben) einen Applikator, für HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 Proben) zwei Applikatoren oder für HYDRAGEL 9 BENCE JONES drei Applikatoren, auf eine ebene Unterlage legen, 

dass die Nummern (Vertiefungen) nach oben zeigen (Abb. 1). 

- In jede Vertiefung 10 µl Probenflüssigkeit auftragen. Das Füllen eines Applikators darf höchstens 2 Minuten dauern. 

| MIGRATIONS/IMMUNFIXATIONSSPUR | 

NUMMER DER VERTIEFUNG : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 PROBENNR. 1 ODER 3 2 3 4 5 6 7 PROBENNR. 2 ODER 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES PROBENNR. 1, 4 ODER 7 1 2 3 4 5 6 PROBENNR. 2, 5 ODER 8 7 8 9 10 11 12 

| PROBENNR. 3, 6 ODER 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

HINWEIS: Beim HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, werden die Nummern der Vertiefungen 1, 8 und 15 nicht verwendet; sie sollten mit einem 

Filzschreiber markiert werden, um ein irrtümliches Befüllen zu vermeiden. 

- Den/die Applikator(en) mit den Zähnen nach oben in die feuchte Kammer legen (nur am Schutzrahmen für die Zähne anfassen). 

Hinweise hierzu finden Sie in der Packungsbeilage zur feuchten Kammer. 

- Die Proben nach dem Auftragen der letzten Probe 5 Minuten lang in die Zähne einziehen lassen. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen, und die Elektroden-/Applikatoren-Halter nach oben klappen. 

WARNHINWEIS: Die Abdeckung bei hochgestelltem Elektroden-/Applikatoren-Halter nicht schliessen! 

4. Im Gerätemenü für HYDRAGEL 1 BENCE JONES das Programm "1 BJ SM/DM", für HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 das Programm 

“2/4 BJ–UP SM/DM” oder für HYDRAGEL 9 BENCE JONES das Programm “9 BJ SM ” aufrufen (an der Tastatur links). 

5. Die Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus der Packung nehmen. Die Perforation des Plastikfilms in die Stifte des Elektroden-Halters 

einführen. Die Plastikfolie muß dabei zum Applikator-Halter zeigen (siehe Abb. 2). 

6. Das Gel aus der Verpackung nehmen. 

- Ein dünnes Filterpapier vorsichtig und gleichmäßig auf die Oberfläche legen um überschüssige Feuchtigkeit zu entfernen. Das Filterpapier 

sofort wieder entfernen. 

WARNUNG: Das Filterpapier nicht zu lange auf dem Gel lassen, um ein Austrocknen des Gels zu verhindern. 

- 120 µl destilliertes oder deionisiertes Wasser beim HYDRAGEL 1 BENCE JONES oder 200 µl destilliertes oder deionisiertes Wasser beim 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 und beim HYDRAGEL 9 BENCE JONES, in das untere Drittel des Rahmens geben, der auf der Peltier- 

Platte des Migrationsmoduls aufgedruckt ist. 

- Das Gel (mit der Gelseite nach oben) an die untere Kante des aufgedruckten Rahmens anlegen (siehe Abb. 3). 

- Das Gel biegen und auf dem Wasser abrollen (siehe Abb. 3). Darauf achten, daß keine Luftblasen eingeschlossen werden, das Wasser 

unter der gesamten Gelplatte verteilt ist und das Gel am aufgedruckten Rahmen anliegt. 

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7. Beide Halter nach unten klappen. In dieser Position dürfen die Pufferstreifen keinen Kontakt mit dem Gel haben. DIE HALTER NICHT MIT 

GEWALT BIS GANZ NACH UNTEN DRÜCKEN. 

8. Den/die Applikator(en) aus der feuchten Kammer nehmen. Dabei nur am Schutzrahmen anfassen. 

- Den Schutzrahmen für die Zähne entfernen. 

- Den/die Applikator(en) auf dem Halter einsetzen: 

- Bei HYDRAGEL 1 BENCE JONES oder HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 Proben), in Position Nr. 6, 

- Bei HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 Proben), in Position Nr. 3 und 9, 

- Bei HYDRAGEL 9 BENCE JONES, in Position Nr. 2, 6 und 10. 

- Für eine hohe Reproduzierbarkeit des Probenauftrags, sollten die Applikatoren nach dem Einsetzen in den Applikator-Halter nach links 

geschoben werden. 

WICHTIG: Die auf dem/den Applikator(en) aufgedruckten Ziffern müssen immer zum Bediener zeigen (siehe Abb. 4). 

9. Darauf achten, daß die Halter nach unten geklappt sind. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

10. Die Migration sofort starten. Dazu die grüne Pfeiltaste «START» auf der linken Seite der Tastatur drücken. 

WICHTIG: Darauf achten, daß die Lüftungsschlitze an der rechten Geräteseite nicht verdeckt sind. 

MIGRATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Die beiden Halter werden soweit gesenkt, daß die Pufferstreifen und der/die Applikator(en) in Kontakt mit der Geloberfläche kommen. 

• Der Probenapplikator-Halter wird angehoben. 

• Die Migration erfolgt beim HYDRAGEL 1 BENCE JONES unter Anlegen eines konstanten Gleichstromes von 10 W und beim HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4 unter Anlegen eines konstanten Gleichstromes von 20 W bis jeweils 42 Vh erreicht sind (ungefähr 9 Minuten) bei 20 °C, die durch das 

Peltier-Element aufrecht erhalten werden. Beim HYDRAGEL 9 BENCE JONES erfolgt die Migration unter Anlegen eines Gleichstromes von 20 W 

bis 31 Vh erreicht sind (nach etwa 7 Minuten), bei 20 °C, die durch das Peltier-Element aufrecht erhalten werden. 

• Der Elektroden-Halter wird angehoben und unterbricht dabei den Kontakt der Elektroden. 

• Ein akustisches Signal ertönt, und die Abdeckung des Migrationsmoduls wird entriegelt. Am Bildschirm wird folgende Meldung angezeigt: « AS». 

HINWEIS: Während der Migration bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

II. VORBEREITUNG DER IMMUNFIXATION 

1. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen. 

2. Den/die Probenapplikator(en) herausnehmen und verwerfen. 

3. Beide Halter anheben, die Pufferstreifen an den Plastikenden herausnehmen und verwerfen. 

- Beide Halter herausnehmen. 

- Die Elektroden mit einem weichen, angefeuchteten Papiertuch abwischen. 

- Das Gel im Migrationsmodul belassen. 

4. Die Schablone für den Reagenzauftrag wie folgt vorbereiten (siehe Abb. 5): 

- Die Schablonenführung auf die beiden unteren Haltestifte stecken (danach kann die Führung im Migrationsmodul verbleiben). 

- Die Schablone an der Lasche halten und auf die Schablonenführung schieben (die rechte Klemme in die Nut). 

- Die Schablone auf das Gel absenken. 

- Die Antiserenmaske sollte für eine optimale Übereinstimmung der elektrophoretischen Profile mit den Antiserenspuren der Maske 

entsprechend ausgerichtet sein (für die Anleitung siehe Zubehörkit für HYDRASYS 9 BENCE JONES SEBIA, Artikelnummer: 1266). 

5. Reagenzien wie folgt auftragen: 

VOLUMEN (µl) SPUR Schablone Schablone REAGENZ FARBE 1, 2 & 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 Fixierlösung gelb GAM 25 15 trivalentes Antiserum violett K 25 15 Antiserum gegen (freie und gebundene) Kappa-Leichtketten grün L 25 15 Antiserum gegen (freie und gebundene) Lambda-Leichtketten hellblau Kf 25 15 Antiserum gegen freie Kappa-Leichtketten orange 

| Lf | 25 | 15 | Antiserum gegen freie Lambda-Leichtketten | rot | 

HINWEIS: Zur Vermeidung von Verwechslungen sind sowohl die Fläschchenetiketten der Reagenzien als auch die Vertiefungen der 

Schablone jeweils mit der gleichen Farbe markiert. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : Der Antiserenauftrag sollte am besten in der folgenden Reihenfolge erfolgen: Lambda freie, Kappa freie, 

kappa, lambda und GAM, und zum Schluß Fixationslösung. 

- Die Reagenzien ohne Luftblasen in die Pipettenspitze aufziehen. 

- Die Reagenzien auftragen (siehe Abb. 6): 

- Die Pipette senkrecht halten, und die Spitze vorsichtig auf den Boden der Vertiefung aufsetzen. 

- Das Reagenz so in die Vertiefung spritzen, daß es sich gleichmäßig darin verteilt und keine Luftblasen entstehen. 

6. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

7. Die Migration sofort starten. Dazu die grüne Pfeiltaste «START» auf der linken Seite der Tastatur drücken. Am Bildschirm erscheint die 

Meldung «[INKUBATION]». 

IMMUNFIXATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Es erfolgt eine 10minütige Inkubation bei 20 °C (durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten). 

• Ein akustisches Signal ertönt, und die Abdeckung des Migrationsmoduls wird entriegelt. Am Bildschirm wird folgende Meldung angezeigt: 

«❊ AS (SM)». 

HINWEIS: Während der Immunfixation bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

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III. ENTFERNEN ÜBERSCHÜSSIGER REAGENZIEN 


2. Überschüssige Reagenzien mit Filterpapierkämmen entfernen. Bei Verwendung von HYDRAGEL 1 BENCE JONES und HYDRAGEL 

2 BENCE JONES einen Kamm, bei HYDRAGEL 4 BENCE JONES zwei Kämme und bei HYDRAGEL 9 BENCE JONES drei Kämme 

benutzen. (Abbildung 7) : 

- Den Kamm/die Kämme in einem 30°-Winkel halten und in die Vertiefungen der Schablonen einführen. Die Zähne müssen dabei vom 

Bediener weg zeigen. 

- Die Zähne leicht in die Flüssigkeit eintauchen. Dazu die Zähne etwas steiler stellen, damit die Flüssigkeit von den Zähnen durch 

Kapillarwirkung aufgesogen wird (siehe Abb. 8). 

WICHTIG: Die Zähne dürfen nicht das Gel berühren. Daher den Kamm nicht senkrecht, sondern in einem Winkel von etwa 45° anlegen, um 

eine Beschädigung des Gels zu vermeiden. 

3. Das Verfahren starten. Dazu die «START»-Taste (grüne Pfeiltaste auf der linken Seite der Tastatur) drücken. 

ENTFERNEN ÜBERSCHÜSSIGER REAGENZIEN - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Das Entfernen der Reagenzien erfolgt 15 Sekunden lang bei 20 °C (durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten). 

• Ein akustisches Signal ertönt, und am Bildschirm wird folgende Meldung angezeigt: « PAP.». 

IV. ABBLOTTEN DES GELS 

1. Den Kamm/die Kämme abnehmen. 

2. Überprüfen, daß die Reagenzien vollständig aufgesogen wurden. Dies ist daran erkennbar, daß: 

- sich auf dem Gel kein Reagenz mehr befindet, 

- die Zähne in ihrer gesamten Länge gefärbt sind. 

Falls noch nicht das gesamte Reagenz aufgesaugt wurde, den Filterpapier-Kamm (wie zuvor) nochmals einführen und das Abblotten manuell 

vornehmen. 

3. Die Schablone für den Reagenzauftrag an der Lasche ergreifen, anheben und herausnehmen. 

4. Ein dickes Filterpapier auf das Gel legen: 

- Das Filterpapier in einem Winkel von 45° halten und mit dem unteren Rand an die Kante anlegen, die zur Ausrichtung des Gels dient. 

- Das Filterpapier auf dem Gel abrollen. 

ACHTUNG : Das dicke Filterpapier sollte fest auf die gesamte Geloberfläche angedrückt werden, um eine optimale Anhaftung an das 

Gel zu ermöglichen. 



7. Die Auftragsschablone mit einer kleinen Bürste (z.B. mit einer Zahnbürste) reinigen. KEINEN ALKOHOL ODER SONSTIGE 

LÖSUNGSMITTEL VERWENDEN! Vor der nächsten Anwendung muß die Schablone wieder absolut trocken sein ; zum Entfernen von 

Wassertropfen, die an den Vertiefungen haften, die Schablone auf einem weichen Papiertuch ausklopfen. 

ABBLOTTEN - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Das Abblotten erfolgt 3 Minuten lang bei 40 °C (durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten). 

• Ein akustisches Signal ertönt, und am Bildschirm wird folgende Meldung angezeigt: "❊ PAP.". 

HINWEIS: Während des Abblottens bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls verriegelt. 

V. TROCKNEN DES GELS 


2. Das Filterpapier herausnehmen. Das Gel im Migrationsmodul belassen. 



TROCKNEN - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Das Trocknen erfolgt 6 Minuten lang bei 50 °C (durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten). 

• Ein akustisches Signal ertönt, und die Abdeckung des Migrationsmoduls wird entriegelt. Bis zum Öffnen der Abdeckung wird die Temperatur auf 

50 °C gehalten. 

HINWEIS: Während des Trocknens bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

VI. VORBEREITUNG DER GELBEARBEITUNG 

1. Die Abdeckung öffnen. 

2. Das getrocknete Gel zur weiteren Bearbeitung herausnehmen. 

3. Den Gel-Halter öffnen und flach hinlegen. Das Gel (mit der Gelseite nach oben) in die Ausfräsung des Gel-Halters einsetzen, und den Gel- 

Halter schließen. Darauf achten, daß das Gel im Halter korrekt positioniert ist (siehe Abb. 9). 

4. Den Gel-Halter in das Gelbearbeitungs-/Färbemodul einsetzen. 

WICHTIG: Vor dem Start des Gelbearbeitungs-/Färbeprogramms überprüfen, daß: 

- der Waschlösungsbehälter mindestens 400 ml Waschlösung enthält ; 

- der Färbelösungsbehälter 300 ml Färbelösung enthält ; 

- der Entfärbelösungsbehälter mindestens 1 liter Entfärbelösung enthält ; 

- der Abfallbehälter leer ist. 

Hinweise zum Anschluß an die Reagenzkanäle werden am Monitor des Gerätes angezeigt (drücken Sie dazu die Taste KANAELE). 

WICHTIG: Nicht vergessen, die nicht benötigten Kanäle zu blockieren. 

5. Im Gerätemenü das Färbeprogramm «IF ACID VIOLET» wählen, und den Vorgang durch Drücken der «START»-Taste (grüner Pfeil auf der 

rechten Seite der Tastatur) starten. 

Gedurende de kleur-, onkleur- en droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

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HINWEIS: 

- Die Temperatur der Peltier-Platte sinkt nach dem Öffnen (innerhalb von 5 Minuten) auf 20 °C. Danach kann die nächste Migration durchgeführt 

werden. 

- Den Probenapplikator-/Elektroden-Halter wieder einsetzen. 

- Die Peltier-Platte mit einem weichen, feuchten Papiertuch abwischen. 

VII.ABSCHLUSS DER GELBEARBEITUNG 

1. Den Gel-Halter aus dem Färbemodul nehmen, die Bügel nach oben klappen und das getrocknete Gel entnehmen. 

2. Bei Bedarf die Rückseite (den Plastikfilm) der trockenen Folie mit einem weichen, feuchten Papiertuch reinigen. 

HINWEIS: Die Migrationslänge kann bei Gelen mit 2 oder 3 Analysereihen unterschiedlich sein, ohne jegliche Beeinträchtigung der Leistung. 

ERGEBNISSE 

Interpretation 

Das Vorhandensein von Bence-Jones-Protein in Urin ist gekennzeichnet durch: 

- eine monoklonale Bande bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Kappa- oder Lambda-Leichtketten (K- oder L-Spur), 

- eine monoklonale Bande bei einem der Antiseren gegen freie Kappa- oder Lambda-Leichtketten (Kf- oder Lf-Spur) und 

- das Ausbleiben der Reaktion mit dem trivalenten Antiserum (GAM-Spur). 

Ausscheidung von Serumparaproteinen im Urin ohne Bence-Jones-Protein ist gekennzeichnet durch: 

- eine monoklonale Bande beim trivalenten Antiserum, 

- die gleiche Bande bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten und 

- das Ausbleiben der Reaktion mit dem Antiserum gegen die entsprechende freie Leichtkette. 

Über den Urin ausgeschiedenes Serumparaprotein assoziiert mit Bence-Jones-Protein ist gekennzeichnet durch: 

- eine monoklonale Bande beim trivalenten Antiserum, 

- zwei Banden bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten (oder mitunter durch eine Bande bei einem der Antiseren 

gegen freie und gebundene Leichtketten sowie eine Bande bei den anderen Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten), 

- eine Bande bei einem der Antiseren gegen freie Leichtketten. Diese Bande wandert in der Regel nicht bis zur gleichen Höhe wie die Bande 

beim trivalenten Antiserum. 

Bence-Jones-Protein in verschiedenen Polymerisationsformen ist gekennzeichnet durch: 

- das Ausbleiben der Reaktion mit dem trivalenten Antiserum, 

- mehrere Banden bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten, 

- die gleichen Banden beim Antiserum gegen die entsprechenden freien Leichtketten. 

Interferenzen und Einschränkungen 

Die Antiseren für die Verwendung mit der Standard Maske sind speziell auf diese abgestimmt. Die Verwendung von anderen Antiseren kann Ihre 

Ergebnisse beeinträchtigen. 

Es wird darauf hingewiesen, dass aufgrund der derzeitigen Kenntnis des zugrundeliegenden Analysenprinzips (Theorie der Zonenelektrophorese, 

Auflösungsvermögen und Sensitivität) keine Garantie für ein 100 % Erkennen aller monoklonalen Komponenten gewährt werden kann. 

Fehlersuche 

Kommt es trotz sachgerechter Lagerung und Vorbereitung der Materialien und Beachtung der Verfahrensbeschreibung zum Versagen des Tests, 

wenden Sie sich bitte an den SEBIA Kundendienst. 

Datensicherheitsblätter sowie Informationen zur Abfallentsorgung sind bei SEBIA GmbH, Fulda zu erfragen. 

LEISTUNGSDATEN 


Reproduzierbarkeit 

Von Gel zu Gel (Intra-Assay) 

Vier Urinproben, die nicht polymerisierte, Kappa- oder Lambda-, Bence Jones Leichtketten enthielten, wurden jeweils auf 10 Gelen der gleichen 

Charge nach der Standardprozedur mit Hilfe eine HYDRAGEL 4 BENCE JONES Kits aufgetrennt. 

Von Charge zu Charge 

Zwei Urinproben, die nicht polymerisierte, Kappa- oder Lambda-, Bence Jones Leichtketten enthielten, wurden verwendet. Jede dieser Proben wurde 

auf alle (24) Spuren von 2 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 Gelen aufgetragen. Ein Gel der beiden wurde mit den entsprechenden Antiseren gegen 

die freien und gebundenen Leichtketten, das andere Gel mit den Antiseren gegen die freien Leichtketten immunfixiert. Auf diese Art wurden mit diesen 

Proben Gele von drei verschiedenen Chargen untersucht. 

Ergebnisse: Die Bence Jones Proteine wurden in jeder Probe und auf jedem Gel korrekt identifiziert ; es wurden keine falsch-positive Ergebnisse, 

sowie keine Unterschiede in den Wiederholungen beobachtet. 

Genauigkeit - Nachweis und Identifikation der Bence Jones Proteine 

Sechsunddreißig Urin- und 10 Serumproben, pathologisch und normal, wurden unter Verwendung des HYDRAGEL 4 BENCE JONES Kits und einer 

anderen im Handel erhältlichen Immunfixationstechnik untersucht. Die Ergebnisse der beiden Immunfixationstechniken stimmten exakt überein und 

entsprachen den vom Hospital zur Verfügung gestellten Ergebnissen und der Jeweiligen Diagnose. 

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Intra-Assay Reproduzierbarkeit und Spezifität 

Die Reproduzierbarkeit wurde an zwei Urinproben (eine Probe mit einer Lambda Bence Jones Leichtkette und eine Probe mit einer Kappa Bence 

Jones-Leichtkette), sowie einer Serumprobe mit je einem Lambda Leichtkettenparaprotein und einer monoklonalen freien Lambda Leichtkette 

nachgewiesen. Jede Probe wurde unter Verwendung von 2 verschiedenen Chargen von Gelen HYDRAGEL 9 BENCE JONES analysiert. 

Alle getesteten Proben ergaben auf den beiden Chargen identische Ergebnisse. Die Muster entsprachen dem Typ der jeweils getesteten Probe. Die 

Immunfixation zeigte in jedem Durchgang die monoklonalen Banden der pathologischen Proben deutlich. 

Inter-Assay Reproduzierbarkeit und Spezifität 

Die Reproduzierbarkeit wurde an acht pathologischen Proben (5 Urine und 3 Serumproben mit monoklonalen freien Leichtketten) und einer normalen 

Urinprobe ohne Bence Jones Protein nachgewiesen. Die Proben wurden auf 10 Gelen HYDRAGEL 9 BENCE JONES aus drei verschiedenen 

Chargen analysiert. Alle getesteten pathologischen Proben ergaben auf allen Gelen identische Ergebnisse. Die Muster entsprachen dem Typ der 

jeweils getesteten Probe. Die Immunfixation zeigte in jedem Durchgang die monoklonalen Banden der pathologischen Proben deutlich, in der 

normalen Urin-Probe wurde keine monoklonale Bande nachgewiesen. 

Richtigkeit 

Neunundzwanzig verschiedene pathologische Serum- und Urin-Proben (21 Urin und acht Seren)mit einer oder mehr Kappa oder Lambda 

Bence-Jones Proteinen und 7 Proben (6 Urinproben und 1 Serum) ohne monoklonale freie Leichtketten wurden mit dem HYDRAGEL 9 BENCE 

JONES Kit und mit einem anderen handelsüblichen Agarosegelimmunfixationssystem analysiert. Bei allen pathologischen Proben wurden mit jedem 

System identische Banden festgestellt. Die pathologischen Proben ergaben in allen Fällen erwartete Ergebnisse: auf beiden System wurden die 

identischen monoklonalen Banden nachgewiesen und die normalen Proben enthielten keinerlei monoklonale Banden. 

LITERATUR 



1994, 397 pp. 

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GEBRUIKSAANWIJZING 

De HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES en de HYDRAGEL 9 BENCE JONES kits zijn 

ontwikkeld voor de detectie van Bence Jones proteïnen, of vrije lichte ketens (kappa of lambda) in menselijke urine of menselijk serum, door middel 

van immunofixatie en elektroforese op een alkalisch gebufferde (pH 9,1) agarose-gel. Zij worden samen met het semi-geautomatiseerde HYDRASYSsysteem 

gebruikt om alle stappen uit te voeren die nodig zijn om gels gereed te maken voor interpretatie. De proteïnen van het monster ondergaan 

elektroforese en immunofixatie door antisera met de volgende specificiteiten: (1) een trivalent antiserum: anti-gamma (Ig G), anti-alfa (Ig A) en antimu 

(Ig M) zware ketens, (2) anti-kappa, vrije en gebonden lichte ketens, (3) anti-lambda vrije en gebonden lichte ketens, (4) anti-kappa, vrije lichte 

ketens, en (5) anti-lambda, vrije lichte ketens. Na immunofixatie worden de geprecipiteerde proteïnen met zuurviolet gekleurd. De overtollige kleurstof 

wordt met een zure oplossing verwijderd. 

Iedere agarosegel is bedoeld voor het testen van: 

- één monster met de HYDRAGEL 1 BENCE JONES-kit, 

- twee monsters met de HYDRAGEL 2 BENCE JONES-kit, 

- vier monsters met de HYDRAGEL 4 BENCE JONES-kit, 

- negen monsters met de HYDRAGEL 9 BENCE JONES-kits. 

Voor gebruik bij in vitro diagnostiek. 

PRINCIPE VAN DE TEST 

Abnormale banden in elektroforetische patronen, vooral die in de bèta-globulinen- en gamma-globulinenzones, kunnen altijd monoclonaal zijn en 

zodoende een indicatie leveren voor gammopathieën. Om deze abnormale banden te kunnen identificeren wordt de techniek van de immunofixatie 

toegepast. 

Immunofixatie-elektroforese is een techniek waarbij een proteïne na elektroforese in situ wordt gebonden door de vorming van een onoplosbaar 

complex met corresponderende antisera. 

Het wordt in vier fasen uitgevoerd: 

1. Separatie van proteïnen door elektroforese op agarose-gel. 

2. Fixatie en immunoprecipitatie van de proteïnen na elektroforese: de fixeeroplossing en de antisera worden direct op het geloppervlak aangebracht 

op de juiste elektroforetische-migratiesporen. De fixeeroplossing en de antisera trekken in de gel terwijl zij respectievelijk al de proteïnen en de 

corresponderende antigenen precipiteren. 

3. De niet geprecipiteerde, oplosbare proteïnen worden door middel van deppen en spoelen van de gel verwijderd. De geprecipiteerde proteïnen 

blijven vastzitten in de gel. 

4. De geprecipiteerde proteïnen worden door middel van kleuring zichtbaar gemaakt. De immuno-geprecipiteerde banden worden vervolgens 

vergeleken met de corresponderende abnormale banden die werden waargenomen in het elektroforetisch patroon van het serummonster. 

Om detectie en identificatie van de verdachte monoclonale componenten mogelijk te maken ondergaan de monsters simultaan in zes tracks 

elektroforese. Na de elektroforese dient één track (ELP) als referentie, en deze geeft het elektroforetisch patroon van de monsterproteïnen te zien. 

De overige vijf tracks tonen de monoclonale component(en) uit hun reactie(s), of het ontbreken daarvan, met het trivalente antiserum anti-zware ketens 

(gamma, alfa en mu), en antisera tegen kappa en lambda (vrije en gebonden) lichte ketens en kappa en lambda vrije lichte ketens. 

Deze eenvoudige en snelle methode levert een helder en gemakkelijk te interpreteren beeld op. 

REAGENTIA EN MATERIALEN BIJGELEVERD BIJ DE HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES EN HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT PROD. NR. 4821 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT PROD. NR. 4822 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT PROD. NR. 4824 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KIT PROD. NR. 4883* Agarose-gels (klaar voor gebruik) 10 gels 10 gels 80 gels Bufferstrips (klaar voor gebruik) 10 pakjes van 2 stuks 10 pakjes van 2 stuks 80 pakjes van 2 stuks Zuurviolet kleurstof (voorraadoplossing) 1 flesje van 75 ml 1 flesje van 75 ml 8 flesjes van 75 ml Fixeeropossing (klaar voor gebruik) 1 flesje van 14,4 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke gamma, alfa, mu zware ketens (trivalent, driewaardig) (klaar voor gebruik) 1 flesje van 10,8 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke kappa vrije en gebonden lichte ketens (klaar voor gebruik) 1 flesje van 10,8 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke lambda vrije en gebonden lichte ketens (klaar voor gebruik) 1 flesje van 10,8 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke kappa vrije lichte ketens (klaar voor gebruik) 1 flesje van 10,8 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke lambda vrije lichte ketens (klaar voor gebruik) | | | 1 flesje van 10,8 ml Applicators (klaar voor gebruik) |1 pakje van 10 stuks |2 pakjes van 10 stuks| 24 pakjes van 10 stuks Filterpapier - Dun |1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 | 8 pakjes van 10 stuks Filterpapierstrips - kam - |1 pakje van 10 stuks |2 pakjes van 10 

| 

stuks| 24 pakjes van 10 stuks Filterpapier - Dik | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 8 pakjes van 10 stuks | 


OPMERKING: De fixeeroplossing en de antisera worden los van de kits geleverd, behalve bij de MAXI-KIT (zie BENODIGDE MAAR NIET 

BIJGELEVERDE REAGENTIA). 

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SEBIA INSTRUCTIEBLAD - Nederlands


VOOR OPTIMALE RESULTATEN 

Onderdelen uit dezelfde kit dienen altijd samen te worden gebruikt en in overeenstemming met de instructies op de bijsluiter. 

LEES DE GEBRUIKSAANWIJZING ALTIJD ZORGVULDIG DOOR. 

1. AGAROSE-GELS 

Voorbereiding 

De Agarose-gels zijn klaar voor gebruik. Iedere gel bevat: agarose, 8 g/l ; tris-barbital buffer, pH 9,1 ± 0,1 ; in de gebruikte concentraties niet schadelijke 

toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De Agarose-gels bevatten 0,31 % barbital en 0,34 % natriumbarbital. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! 

Gebruik 

Draagmedium voor elektroforese en immunofixatie van proteïnen. 

Opslag, stabiliteit en tekenen van verval 

De gels moeten horizontaal worden opgeslagen in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur (15 tot 30 °C) of gekoeld (2 tot 8 °C) 

bewaard worden. De gels zijn stabiel tot de houdbaarheidsdatum die op de verpakking, of op het verpakkingslabel van de gel, staat aangegeven. (De 

pijl op de voorzijde van de verpakking moet naar boven wijzen.) Vermijd opslag dicht bij een raam of een warmtebron. Vermijd belangrijke 

temperatuurwisselingen tijdens de opslag. NIET INVRIEZEN. 

Verwijder de gel wanneer : 

(I) zich kristallen of neerslag op het oppervlak van de gel vormen, of wanneer de textuur van de oppervlakte van de gel erg zacht wordt (dit geeft 

aan dat de gel bevroren is geweest) ; 

(II) er bacteriële of schimmelgroei wordt waargenomen ; 

(III) er een abnormale hoeveelheid vloeistof in de gelbox aanwezig is (wijst er op dat afscheiding van buffer uit de gel heeft plaatsgevonden tijdens 

onjuiste opslagomstandigheden). 

2. GEBUFFERDE STRIPS 

Voorbereiding 

De gebufferde strips zijn gebruiksklaar. Elke strip bevat: tris-barbital buffer, pH 9,1 ± 0,3 ; natriumazide, in de gebruikte concentraties niet schadelijke 


WAARSCHUWING: De bufferstrips bevatten 0,92 % barbital, 1,03 % natriumbarbital en 0,30 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij 

abusievelijke inname dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Vermijd contact met zuren, lood of koper aangezien deze stoffen 

explosieve of toxische verbindingen met natriumazide aangaan. Na gebruik altijd met ruim water spoelen. 

Gebruik 

Gebufferde strips fungeren als elektroforese bufferreservoir en verzekeren contact tussen gel en elektrodes. 


Bewaar de gebufferde strips horizontaal in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur of in de koeling. (De pijl aan de voorkant van 

de kitdoos dient omhoog te wijzen.) 

De strips blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of de etiketten van de verpakking van 

de gebufferde strips. 

NIET INVRIEZEN. 

Gooi de gebufferde strips weg als de verpakking geopend is en de strips uitdrogen. 

3. ZUURVIOLET KLEURSTOF 

Voorbereiding 

Elk flesje kleurstofconcentraat wordt verdund tot 300 ml met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. Na verdunning bevat de werkzame 

kleuringoplossing: zuuroplossing pH ≈ 2 ; zuurviolet, 2 g/l ; ethyleenglycol, 3.25 % ; additieven, in de gebruikte concentraties niet schadelijke 


WAARSCHUWING : Inname is schadelijk. 

Gebruik 

Voor het kleuren van gels na elektroforetische proteïnenscheiding en immunofixatie. 

BELANGRIJK: De kleuringsoplossing is bedoeld voor het kleuren van slechts 10 gels. Vervang de oplossing na 10 kleuringsfases. 


Zowel de concentraat- als de verdunde kleuroplossingen bij kamertemperatuur of gekoeld in afgesloten flessen opslaan om verdamping te voorkomen. 

De concentraat-kleurstofoplossing blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de verpakking of de labels op de flesjes met 

kleuroplossing. De verdunde kleuroplossing blijft gedurende 6 maanden stabiel. 

4. FIXEEROPLOSSING (bij productnummer 4883) 

Voorbereiding 

De fixeeroplossing is klaar voor gebruik. Het bevat: azijnzuur, in de gebruikte concentraties niet schadelijke toevoegingen die noodzakelijk zijn voor 

een optimale werking. Voor eenvoudige herkenning en als hulp bij de toepassing is het fixeermiddel gekleurd met een niet schadelijke kleurstof die 

overeenkomt met de kleur van het label op het flesje en de track op de applicatiemal. 

Gebruik 

Voor het fixeren van elektroforetisch gescheiden proteïnen in de referentiespleet (ELP). 

De fixeeroplossing is specifiek voor de immunofixatieprocedure met de 1, 2, 4 en 9 BENCE JONES maskers. 

BELANGRIJK: Opdat de verschillende reagentia niet met elkaar in contact zouden komen, moet men na gebruik de dop terug op de respectievelijke 

flacon zetten. 


De fixeeroplossing bij kamertemperatuur of gekoeld opslaan. De oplossing blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de 

verpakking of de labels op de flesjes fixeer. 

De fixeeroplossing mag geen precipitaat bevatten. 

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5. ANTISERA (bij productnummer 4883) 

Voorbereiding 

Gereed voor gebruik. Alle antisera zijn zoogdier, antimenselijke totaal immunoglobulinen. Voor eenvoudige identificatie van de antisera en als steun 

bij het controleren van de toepassing er van, worden de antisera gekleurd met opvallende, maar ongevaarlijke kleurstoffen met dezelfde kleur als op 

de label van het flesje. 

Indien het antiserum een lichte troebeling vertoont, laat het antiserum dan gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur staan. Dit zou voldoende 

moeten zijn om een heldere oplossing te verkrijgen; indien de troebeling echter blijft dan zal deze in geen geval invloed hebben op de immunologische 

reactie. In geval van onoplosbare precipitaten wordt het aanbevolen de antisera gedurende 5 minuten te centrifugeren met 3000 rpm. 

Gebruik 

Bij immunofixatie van proteïnen die elektroforese ondergingen. 

De antisera zijn specifiek voor de immunofixatieprocedure met de 1, 2, 4 en 9 BENCE JONES maskers. 

Antisera kunnen van diverse diersoorten afkomstig zijn. Daarom moet u twee verschillende antiseraflesjes nooit mengen ook niet als deze dezelfde 

specificiteit hebben en dient u ALTIJD het uiteinde van de pipet te vervangen bij het wisselen van het flesje met antiserum. 

BELANGRIJK: Opdat de verschillende reagentia niet met elkaar in contact zouden komen, moet men na gebruik de dop terug op de respectievelijke 

flacon zetten. 


De antisera worden gekoeld bewaard (2 tot 8 °C). Zij zijn stabiel tot de vervaldatum welke op de kit of op de label van het flesje met antiserum staat 

aangegeven. 

OPMERKING: Tijdens transport kunnen de antisera gedurende 15 dagen zonder koeling (15 tot 30 °C) zonder dat dit negatieve gevolgen heeft voor 

de werking er van. 

6. MONSTER-MALPLAATJES 

Gebruik 

Voorgesneden strips, voor eenmalig gebruik, voor het aanbrengen van het monster op de gel. 

7. FILTERPAPIER - DUN 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het absorberen van overtollige vloeistof van het oppervlak van de gel na elektroforese, het 

verwijderen van overtollig reagens na incubatie en het opdeppen van niet-geprecipiteerde proteïnen na de immunofixatiefase. 

Opslag 

Bewaar de dunne velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

8. FILTERPAPIERKAMMEN 

Gebruik 

Voorgesneden dikke absorberende papieren kammen, voor eenmalig gebruik, voor het absorberen van overtollige fixeervloeistof en antisera van het 

oppervlak van de gel na de immunofixatie-stap. 

9. FILTERPAPIER - DIK 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het opdeppen van niet-geprecipiteerde proteïnen na de immunofixatiefase. 

Opslag 

Bewaar de dikke velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

BENODIGDE, NIET BIJGELEVERDE REAGENTIA 

1. PAKKET MET ANTISERA EN FIXEEROPLOSSING (voor 4821, 4822 en 4824 kits) 

Het pakket met antisera en fixeeroplossing, GAM, K, L voor immunofixatie, Standaard masker, SEBIA, PN 4835, bevat 3 antisera flesjes (anti-gamma, 

alfa, mu zware ketens, anti-kappa vrije en gebonden lichte ketens en anti-lambda vrije en gebonden lichte ketens), 1 ml elk, en 1 fixeeroplossing flesje, 

2,5 ml. Zij zijn specifiek voor de immunofixatieprocedure met de 1, 2, 4 en 9 BENCE JONES maskers van SEBIA. 

1.1 ANTISERA 

Zie vorig hoofdstuk 5. 

1.2 FIXEEROPLOSSING 

Zie vorig hoofdstuk 4. 

2. PAKKET MET ANTISERA VOOR VRIJE LICHTE KETENS (voor de 4821, 4822 en 4824 kits) 

Het pakket met antisera, anti-kappa vrije lichte ketens en anti-lambda vrije lichte ketens voor immunofixatie, Standaard masker, SEBIA, PN 4836, 

bevat 2 antisera flesjes, 1 ml elk. Zij zijn specifiek voor de immunofixatieprocedure met de 1, 2, 4 en 9 BENCE JONES maskers van SEBIA. 

Bereiding, gebruik, opslag, stabiliteit en tekenen van verval: Zie vorig hoofdstuk 5. 

3. ONTKLEURINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Elk flesje ontkleuringsconcentraat (SEBIA, prod. nr. 4540, 10 flesjes, 100 ml elk) wordt verdund tot 100 liter met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Het is praktisch om een verdunning van een klein deel van het concentraat aan te maken, bijvoorbeeld 5 ml concentraat te verdunnen tot 5 liter. Na 

verdunning bevat de ontkleuringsoplossing: citroenzuur, 0,5 g/l. 

Gebruik 

Voor het ontkleuren van gels, d.w.z. het verwijderen van overtollige en achtergrondkleur uit de gels. 

Voor het spoelen van het kleurcompartiment na de wasstap. 

Giet om de zuurgraad van de vlekkenoplosser te neutraliseren 15 mL van een 50 % Sodium Hydroxyde-oplossing in de lege afvalbak. 

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De concentraat-ontkleuringsoplossing is stabiel bij kamertemperatuur of gekoeld tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de verpakking of 

de labels op de flesjes met ontkleuringsoplossing. NIET INVRIEZEN. De verdunde ontkleuringsoplossing is, in een afgesloten fles en bij 

kamertemperatuur, gedurende 1 week stabiel. Voeg geen natriumazide toe. 

Verwijder de verdunde ontkleuringsoplossing zodra er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting 

met microben. 

Om te voorkomen dat micro-organismen zich kunnen verspreiden in de verdunde ontkleuringsoplossing wanneer deze langer dan een week bewaard 

moet worden, kunt u er 5 µL/dL ProClin 300 aan toevoegen. 

De verdunde, ProClin bevattende ontkleuringsoplossing blijft, indien bewaard in een afgesloten fles bij kamertemperatuur of in de koeling, stabiel tot 

aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes ontkleuringsoplossing. 

4. HYDRASYS SPOELOPLOSSING 

Voorbereiding 

Ieder flesje geconcentreerde HYDRASYS Spoeloplossing (SEBIA, prod. nr. 4541, 10 flesjes, 80 ml elk) wordt verdund tot 5 liter met gedestilleerd of 

gedeïoniseerd water. 

Na verdunning bevat de spoeloplossing: alkalische buffer, pH 8,8 ± 0,3 ; natriumazide. 

WAARSCHUWING: De geconcentreerde spoeloplossing bevat 0,625 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Natriumazide kan explosieve of giftige verbindingen aangaan met zuren, lood of 

koper. Na gebruik altijd spoelen met ruime hoeveelheden water. 

Gebruik 

Voor het spoelen van het hydrasys kleuringscompartiment. Gebruik deze oplossing periodiek, d.w.z. als het instrument dagelijks gebruikt wordt, spoel 

het kleuringscompartiment dan wekelijks. 

Voor verdere instructies met betrekking tot het gebruik wordt u verwezen naar de bijsluiter in de verpakking. 


De geconcentreerde oplossing en de verdunde oplossing in gesloten flessen bewaren bij kamertemperatuur of gekoeld. De oplossingen blijven stabiel 

tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de flesjes met spoeloplossing. Ruim de spoeloplossing op zodra hij van uiterlÿk verandert, 

bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

5. FYSIOLOGISCHE ZOUTOPLOSSING 

Voorbereiding 

Maak een 0,15 M (9 g/l) NaCl oplossing met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Gebruik 

Voor het spoelen van rode bloedcellen. 


Bij kamertemperatuur of gekoeld opslaan. Na 3 maanden verwijderen, of wanneer er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld troebeling als 

gevolg van besmetting met microben. Voor langere opslagperiodes moet natriumazide worden toegevoegd, 1 g/l. 

BENODIGDE UITRUSTING EN ACCESSOIRES 

1. HYDRASYS systeem SEBIA, prod. nr. 1210 of nr. 1211. 

2. Micro-pipet, voor handmatig dan wel automatisch gebruik, zoals bijvoorbeeld de HYDRAplus SEBIA, prod. nr. 1215, als extra keuzemogelijkheid 

voor het vullen van de monsterapplicators. 

3. Natte opslagkamer, prod. nr. 1270, geleverd met HYDRASYS. 

4. Container kit, geleverd met HYDRASYS. 

5. Malgeleidestaaf SEBIA, geleverd met HYDRASYS. 

6. Accessoires kit voor HYDRASYS BENCE JONES, SEBIA, prod. nr. 1260. 

7. Accessoires Kit voor HYDRASYS 9 BENCE JONES, SEBIA, prod. nr. 1266. 

8. Accessoires Kit voor HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES, SEBIA, prod. nr. 1267. 

9. Pipetten: 10 µl en 200 µl. 

MONSTERS VOOR ANALYSE 

Verzameling en opslag van monsters 

• De analyse wordt over het algemeen op verse urine uitgevoerd. Indien noodzakelijk kan de urine gedurende een week gekoeld (2 tot 8 °C) bewaard 

worden. Voor langere opslagperiodes moet de urine ingevroren bewaard worden. Invriezen met HEPES 0,1 M (pH 6,75) en natriumazide, 0,2 g/l 

bevordert de kwaliteit van de opslag. Ingevroren monsters blijven ten minste 1 maand stabiel. Ontdooide monsters kunnen, bij het punt van 

applicatie, geringe sporen te zien geven als gevolg van denaturatie van proteïnen of lipoproteïnen. 

BELANGRIJK: Vermijd boorzuur als houdbaarheidsmiddel. 

• Bij de analyse van sera moeten deze volgens erkende procedures zoals toegepast in klinische laboratoria worden verzameld. De monsters kunnen 

gekoeld (bij 2 tot 8 °C) een week bewaard worden. Voor langere opslagperiodes kunnen de monsters ingevroren worden. Ingevroren sera blijven 

gedurende ten minste een maand stabiel. Ontdooide monsters kunnen, bij het punt van applicatie, geringe sporen te zien geven als gevolg van 

denaturatie van proteïnen of lipoproteïnen. 

Voorbereiding van het monster 

Urines 

De analyse wordt op niet-geconcentreerde urines uitgevoerd. Het detectieniveau van Bence Jones proteïne is 50 mg/l. Om een grotere gevoeligheid 

te bereiken moeten de monsters naar behoefte geconcentreerd worden. 

LET OP: Bij troebele urinemonsters (al dan niet geconcentreerd) wordt aanbevolen de hiervoor verantwoordelijke deeltjes te elimineren door middel 

van centrifugatie van de monsters (gedurende 10 minuten bij 3000 toeren per minuut) dan wel door middel van filtratie (op een filter van 0,45 µm) 

teneinde een goede verspreiding te realiseren op de applicators. 

- 30 -


Sera 

Behalve de urine dient ook het serum van de patiënt te worden getest op Bence Jones-proteïnen. 

Verdun het serum in een fysiologische zoutoplossing of in een oplosmiddel voor immunofixatie dat van tevoren is verdund in de verhouding 1/4 (1 deel 

oplosmiddel, 3 delen gedestilleerd of gedeïoniseerd water), 1/10 voor ELP, GAM, K en L sporen (1 deel serum, 9 delen verdund oplosmiddel of 

fysiologische zoutoplossing) en 1/3 (1 deel serum, 2 delen verdund oplosmiddel of fysiologische zoutoplossing) voor Kf en Lf sporen. 

OPMERKING : Indien het totale immuunglobulineniveau < 0,5 g/l is, wordt aanbevolen het serummonster minder te verdunnen in fysiologische 

zoutoplossing of in het oplosmiddel voor immunofixatie, in de volgende preparatie: 1 deel oplosmiddel, 3 delen gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Verdun het serum bijvoorbeeld in de verhouding 1/5 voor ELP, GAM, K en L sporen (1 deel serum, 4 delen verdund oplosmiddel of fysiologische 

zoutoplossing) en 1/2 (1 deel serum, 1 deel verdund oplosmiddel of fysiologische zoutoplossing) voor Kf en Lf sporen. 

Voor een analyse van Ig D en/of Ig E hanteert u dezelfde verdunningen als voor kappa en lambda vrije en gebonden lichte ketens. 

BELANGRIJK 

• Vermijd plasmamonsters. Fibrinogeen levert een band op die dicht bij het punt van applicatie ligt en voor een monoclonale immunoglobuline 

gehouden kan worden. 

• Sommige urinemonsters bevatten hoge concentraties zout. Dit kan aanleiding geven tot deformatie van de gel en zo tot vervorming van de 

migratieprofielen. Als een dergelijke vervorming interpretatie onnauwkeurig maakt, dan moet de urine gedialyseerd worden om de zouten te 

verwijderen. 

• Geproteolyseerde urines kunnen aanleiding geven tot een positieve reactie met de anti-vrije lichte keten antisera. In dit geval kan een serum 

paraproteïne dat na eliminatie in urine komt een monoclonale band laten zien met het trivalent antiserum en met een van de vrije en gebonden 

antisera en met het corresponderende vrije lichte keten antiserum. 

• Polymerisatie van Bence Jones proteïnen verlaagt over het algemeen de gevoeligheid van de detectie met de anti vrije lichte ketens antisera, want 

de polymerisatie kan de epitopen blokkeren die normaal reageren met anti vrije lichte keten antisera. Wanneer er geen detectie wordt bereikt en 

het vermoeden bestaat dat er sprake is van Bence Jones proteïnen, voer dan voorafgaand aan de elektroforese een depolymerisatie uit, op de 

volgende manier: meng 100 µl urine met 5 µl ß-mercapto-ethanol in een verdunning van 1:10 met fysiologische zoutoplossing, en breng dit aan. 

PROCEDURE 

Het HYDRASYS systeem is een semi-automatisch multiparameter-instrument. Tot de geautomatiseerde stappen behoort bewerking van hydragel 

agarose-gels in de volgende volgorde: applicatie van de monsters, elektroforetische migratie, incubatie met fixeeropossing en antisera, drogen, 

kleuren, ontkleuren en de laatste droogfase. Tot de handmatige stappen behoren de voorbereiding van monsters en gel, de applicatie van fixeermiddel 

en antisera, en het in werking stellen van het instrument. 

LEES HET HYDRASYS-INSTRUCTIEHANDBOEK NAUWKEURIG. 

I. MIGRATIE 

1. Schakel het HYDRASYS instrument in. 

2. Plaats één applicator voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES of HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 monsters), twee applicators voor HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 monsters) of drie applicators voor HYDRAGEL 9 BENCE JONES op een vlakke ondergrond met de holtenummers met 

de goede kant naar boven (Fig. 1). 

- Breng 10 µl monster aan in elke holte. Vulelke applicator binnen 2 minuten. 

| MIGRATIE / IMMUNOFIXATIESPOOR | 

HOLTE Nr. : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 MONSTER Nr. 1 OF 3 2 3 4 5 6 7 MONSTER Nr. 2 OF 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES MONSTER Nr. 1, 4 OF 7 1 2 3 4 5 6 MONSTER Nr. 2, 5 OF 8 7 8 9 10 11 12 

| MONSTER Nr. 3, 6 OF 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

OPMERKING: Voor HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 worden de holtes nr. 1, 8 en 15 niet gebruikt in deze test; ze kunnen met een viltstift 

gemarkeerd worden om te voorkomen dat ze per ongeluk toch gevuld worden met monsterstof. 

- Plaats de applicator in de natte opslagkamer, met de strips omhoog. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe van de strips. 

- Laat de monsters gedurende 5 minuten, na de applicatie van het laatste monster, in de strips trekken. 

Zie voor verdere gebruiksinstructies de bijsluiter bij de natte opslagkamer. 

3. Open het deksel van de migratiemodule en til de dragers van de elektroden en de applicators op. 

WAARSCHUWING: Sluit het deksel niet als de dragers nog omhoog staan. 

4. Selecteer het migratieprogramma "1 BJ SM/DM" voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES, "2/4 BJ-UP SM/DM" voor HYDRAGEL BENCE JONES 

2/4 of "9 BJ SM" voor HYDRAGEL 9 BENCE JONES uit het menu van het instrument (linkerzijde van het toetsenpaneel). 

5. Verwijder de gebufferde strips van het pakket: manipuleer deze aan de plastic uiteinden. Plaats de geponsde uiteinden van de plastic 

achterzijde van de strips op de pinnen van de elektrodendrager: de plastic achterzijde van de strip in de richting van de drager (Fig. 2). 

6. Pak de HYDRAGEL agarose-gel uit. 

- Rol een dun filter voorzichtig en gelijkmatig over het oppervlak om zo het teveel aan vloeistof te absorberen. Verwijder het filterpapier direct. 

WAARSCHUWING : Laat het filtreerpapier niet te lang in contact met de gel om dehydratatie van de gel te vermijden. 

- Giet 120 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES of 200 µl voor HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 en 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES op het onderste derde deel van het frame zoals afgedrukt op de temperatuurcontroleplaat van de 

migratiemodule. 

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- Plaats de gelplaat (met de gelzijde omhoog) met de rand tegen de begrenzer aan de onderzijde van het afgedrukte frame (Fig. 3). 

- Buig de gel en breng deze naar beneden in het water (Fig. 3). Zorg ervoor dat er geen luchtbellen worden ingesloten, dat het water zich 

onder de gehele gelplaat verspreidt (Fig. 3), en dat de gel parallel met het afgedrukte frame ligt. 

7. Breng beide dragers omlaag. In deze positie raken de gebufferde strips de gel niet. Forceer de dragers niet helemaal naar beneden. 

8. Haal de applicator uit de natte kamer. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe. 

- Klik het beschermframe los van de strips van de applicator(s). 

- Plaats de applicator(s) op de drager: 

- bij HYDRAGEL 1 BENCE JONES of HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 monsters), in positie Nr. 6, 

- bij HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 monsters), in positie Nr. 3 en 9, 

- bij HYDRAGEL 9 BENCE JONES, in positie Nr. 2, 6 en 10. 

- Voor perfecte reproduceerbaarheid van de monsterapplicatie blokkeert u de applicators aan de linkerzijde van de drager. 

BELANGRIJK: De nummers die op de applicator zijn geprint moeten steeds door de bediener gelezen kunnen worden (Fig. 4). 

9. Zorg ervoor dat de dragers omlaag zijn. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

10. Start de procedure ogenblikkelijk door het indrukken van de «START»-knop (groene pijl aan de linkerzijde van het bedieningspaneel). 

BELANGRIJK: Zorg ervoor dat de ventilatieopening aan de rechterzijde van het instrument niet geblokkeerd is. 

MIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE FASEN 

• De beide dragers worden omlaag gebracht zodat de gebufferde strips en applicator in contact komen met de gel. 

• De drager van de monsterapplicator komt omhoog. 

• De migratie wordt uitgevoerd onder 10 W constant voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES en onder 20 W constant voor HYDRAGEL BENCE JONES 

2/4, totdat 42 Vh is bereikt (gedurende ongeveer 9 minuten) en onder 20 W constant totdat 31 Vh is bereikt (gedurende ongeveer 7 minuten) voor 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, bij 20 °C gecontroleerd door het Peltier-effect. 

• De elektrodedrager komt omhoog zodat de elektroden uitgeschakeld worden. 

• Er klinkt een hoorbaar piepsignaal dat aangeeft dat het deksel van de module ontsloten wordt. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: 

« AS». 

OPMERKING: Gedurende alle migratiestappen blijft het deksel van de migratiemodule vergrendeld. 

II. VOORBEREIDING VAN DE IMMUNOFIXATIE 

1. Open het deksel van de migratiemodule. 

2. Verwijder de monsterapplicator en doe deze weg. 

3. Breng beide dragers omhoog, verwijder de gebufferde strips aan hun plastic uiteinden en doe ze weg. 

- Verwijder beide dragers. 

- Maak de elektroden schoon met een vochtig doekje. 

- Laat de gel op zijn plaats in de migratiemodule. 

4. Installeer de reagens-applicatiemal als volgt: 

- Plaats de geleidestang van de applicatiemal op de beide onderste bevestigingspinnen (de geleidestang kan altijd in de migratiemodule 

blijven). 

- Houd de mal vast bij de flap en plaats deze op de geleidestang (de rechterklip bij de kerf). 

- Laat de mal op de gel zakken. 

- Stel de positie van de mal bij zodat de elektroforetische profielen perfect aansluiten op de groefjes van de mal (nadere aanwijzingen vindt 

u in de handleiding bij de accessoirekit voor de HYDRASYS 9 BENCE JONES SEBIA, productnummer 1266). 

5. Breng de reagentia als volgt aan, aan de bovenzijde van de spleten: 

HOEVEELHEID (µL) SPLEET applicatiemal applicatiemal REAGENS KLEUR 1, 2 & 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 Fixeeroplossing geel GAM 25 15 Trivalent antiserum violet K 25 15 Anti-kappa lichte ketens (vrij & gebonden) antiserum groen L 25 15 Anti-lambda lichte ketens (vrij & gebonden) antiserum blauw Kl 25 15 Anti-kappa vrije lichte ketens antiserum oranje 

| Ll | 25 | 15 | Anti-lambda vrije lichte ketens antiserum | rood | 

OPMERKING: Om verwisseling te voorkomen zijn de kleuren van de reagentia zowel op de flesjes als ook op de putten in de applicatiemal 

aangegeven. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : De aanbeveling geldt dat de antisera in de volgende volgorde worden aangebracht: lambda lichte, kappa 

lichte, lambda, kappa en GAM, en ten slotte fixeer. 

- Neem de reagentia op zonder luchtbellen in het uiteinde van de pipet te trekken. 

- Breng de reagentia aan (Fig. 6): 

- houd de pipet verticaal en laat het uiteinde licht tegen de bodem van het putje rusten ; 

- injecteer het reagens zó dat het zich door de spleet verspreidt zonder dat er luchtbellen in komen. 

6. Sluit de migratiemodule. 

7. Start de procedure ogenblikkelijk door het indrukken van de «START»-knop met groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord. Op het 

scherm verschijnt het volgende bericht: «[INCUBATION]». 

IMMUNOFIXATIE - BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE STAPPEN 

• Incubatie bij 20 °C gedurende 10 minuten (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Een hoorbare toon geeft aan dat het deksel van de migratiemodule ontsloten word. Op het scherm verschijnt het volgende bericht: «❊ AS (SM)». 

III. VERWIJDERING VAN HET TEVEEL AAN REAGENS 


2. Verwijderen van het surplus aan reagentia met de filterpapieren kammen: een kam voor de 1 BENCE JONES en 2 BENCE JONES mallen, 

twee kammen voor de 4 BENCE JONES mal en drie kammen voor de 9 BENCE JONES mal (Fig. 7): 

- Breng de kammen onder een hoek van 30° in de gleuven aan de onderzijde van de malspleten zodat de strips de verticale zijde raken. 

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- Laat de strips de vloeistof licht aanraken door de kam(men) tot een hoek van 45° te kantelen zodat de strips de vloeistof kunnen afnemen 

(Fig. 8). 

BELANGRIJK: De strips mogen niet in contact zijn met de gel. De kam(men) moet(en) onder een hoek van 45° blijven. Onder een andere 

hoek kunnen zij de gel beschadigen. 

3. Start de procedure ogenblikkelijk door het indrukken van de «START»-knop met groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord. 

VERWIJDERING VAN REAGENS - BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE STAPPEN 

• Bij 20 °C gedurende 15 seconden kan het reagens opgenomen worden uit de spleten (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Een hoorbare toon klinkt. Op het scherm verschijnt het volgende bericht: « PAP.». 

IV. HET DEPPEN VAN DE GEL 

1. Verwijder de kam(men). 

2. Controleer of het reagens goed is opgenomen zoals wordt aangegeven door: 

- de afwezigheid van reagens op de gel ; 

- de tanden zijn over de gehele lengte gekleurd. 

Als de absorbtie van het reagens niet volledig is, dan wordt dezelfde papierkam opnieuw (in dezelfde positie) aangebracht en wordt de 

verwijderingsprocedure handmatig herhaald. 

3. Neem de reagens-applicatiemal bij de flap en verwijder de mal. 

4. Breng een dik filterpapier op de gel aan: 

- plaats het filterpapier parallel aan de rand van de gel ; 

- zorg ervoor dat het papier onder een hoek van 45° komt en dat de rand parallel loopt met de rand van de gel ; 

- laat het voorzichtig op de gel zakken. 

WAARSCHUWING: Goed aandrukken over het gehele oppervlak van het filterpapier zodat het papier goed aan de gel kan hechten. 

5. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

6. Start de procedure door het indrukken van de «START»-knop met groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord. 

7. Maak de applicatiemal schoon met een kleine borstel (bijvoobeeld een tandenborstel). GEBRUIK GEEN ALCOHOL OF OPLOSMIDDELEN. 

Zorg ervoor dat de mal volledig droog is voordat deze opnieuw gebruikt wordt ; verwijder waterdruppels uit de putjes door met de mal op zacht 

papier te tikken. 

HET DEPPEN VAN DE GEL - BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE STAPPEN 

• Bij 40 °C gedurende 3 minuten deppen (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Een hoorbare toon klinkt. Op het scherm verschijnt het volgende bericht: «❊ PAP.». 

V. HET DROGEN VAN DE GEL 


2. Verwijder het filterpapier en laat de gel op zijn plaats. 

3. Sluit het deksel. 

4. Start de procedure door het indrukken van de «START»-knop met groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord. 

HET DROGEN VAN DE GEL - BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE STAPPEN 

• Bij 50 °C gedurende 6 minuten drogen (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Een hoorbare toon klinkt. De temperatuur van de plaat blijft 50 °C totdat het deksel wordt geopend. 

OPMERKING: Het deksel van de migratiemodule blijft gedurende de gehele droogfase gesloten. 

VI. GELVERWERKING SET-UP 

1. Open het deksel. 

2. Neem de gedroogde gelfilm eruit voor verdere verwerking. 

3. Open de gelhouder. Leg deze plat en plaats de gedroogde gel (met de gelkant naar boven gericht) in de spleten van de beide stangen en sluit 

de houder. Zorg ervoor dat de film op de juiste wijze in de houder geplaatst is (Fig. 9). 

4. Plaats de gelhouder in de gel processing / staining module. 

BELANGRIJK: Alvorens te beginnen met het gelverwerkings-/ kleuringsprogramma moet het volgende gecontroleerd worden: 

- De spoelcontainer is gevuld met 400 ml spoeloplossing. 

- De kleuringscontainer is gevuld met 300 ml kleuringsoplossing. 

- De ontkleuringscontainer bevat ten minste 1 liter ontkleuringsoplossing. 

- De afvalcontainer is leeg. 

Voor de verbinding van de reagenslijnen: Zie de informatie op het scherm van het apparaat (keuzetoets: REAGENT LINES). 

BELANGRIJK: vergeet niet de niet-gebruikte lijnen te blokkeren. 

5. Selecteer het «IF ACID VIOLET» kleuringsprogramma uit het menu op het instrument. Begin de procedure met het indrukken van de 

«START»-knop (groene pijl op de rechterzijde van het toetsenbord). 

Gedurende de kleur-, onkleur- en droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

OPMERKINGEN: 

- De temperatuur van de migratieplaat blijft dalen nadat het deksel geopend werd, tot een temperatuur van 20 °C is bereikt (in minder dan 5 minuten). 

Dan kan een nieuwe migratiecyclus begonnen worden. 

- Breng de monsterapplicator en elektrodedragers terug in positie. 

- Veeg de temperatuurcontroleplaat schoon met een zacht vochtig doekje. 

VII. AFRONDING VAN DE GELVERWERKING 

1. Verwijder de gelhouder uit het compartiment ; open de clips en verwijder de gedroogde gel. 

2. Indien nodig wordt de achterzijde (de zijde van de plastic steun) van de droge film met een vochtig doekje schooongemaakt. 

NOOT: Voor de gels met verschilende rijen (2 of 3) kunnen de migratielengtes aanzienlijk verschillen, zonder de resultaten te beïnvloeden. 

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RESULTATEN 

Interpretatie 

De aanwezigheid van een Bence Jones proteïne wordt gekarakteriseerd door: 

- een monoclonale band gedetecteerd met een van de anti-vrije en gebonden lichte ketens kappa of lambda antisera, (K of L tracks) ; 

- een van de anti-vrije lichte ketens kappa of lambda antisera, (Kl of Ll tracks), en de afwezigheid van reactie met het trivalente antiserum 

(gam-track) ; 

- geen reactie met het trivalente antiserum (gam-track). 

Serum paraproteïne geëlimineerd in urine zonder Bence Jones proteïne wordt gekarakteriseerd door: 

- een monoclonale band aangetoond met het trivalent antiserum ; 

- dezelfde band aangetoond met een van de vrije en gebonden lichte keten antisera, en de afwezigheid van reactie met het corresponderende 

vrije lichte keten antiserum. 

Serum paraproteïne geassocieerd met een Bence Jones proteïne wordt gekarakteriseerd door: 

- een monoclonale band aangetoond met het trivalent antiserum ; 

- twee banden aangetoond met een van de vrije en gebonden lichte keten antisera (of soms een band gedetecteerd met een van de vrije en 

gebonden lichte ketens antisera en een band gedetecteerd met de andere vrije en gebonden lichte ketens antisera). 

- een band aangetoond met een van de vrije lichte keten antisera. Deze band migreert in het algemeen niet op hetzelfde niveau als de band 

die wordt aangetoond met trivalent antiserum. 

Bence Jones proteïne in verschillende vormen van polymerisatie wordt gekarakteriseerd door: 

- de afwezigheid van een reactie met het trivalent antiserum ; 

- verschillende banden aangetoond met een van de vrije en gebonden lichte keten antisera ; 

- dezelfde banden aangetoond met het corresponderende vrije lichte keten antiserum. 

Interferentie en begrenzingen 

Het gebruik van antisera die niet specifiek zij voor de immunofixatieprocedure met het standaard masker kan de resultaten beïnvloeden. 

Met het oog op de resolutie- en gevoeligheidsbeperkingen van zone-elektroforese is het mogelijk dat niet alle monoclonale componenten met deze 

methode volledig worden gedetecteerd. 

Troubleshooting 

Bel de technische dienst van de leverancier als de test mislukt terwijl u de instructies voor voorbereiding en opslag van materialen, en voor de 

procedure, nauwkeurig hebt gevolgd. 

De veiligheidsbladen behorend bij de reagentia in de Kit als ook informatie over de verwerking van afval of restproducten kunt u verkrijgen bij de 

Technische Dienst van de leverancier. 

UITVOERINGSGEGEVENS 


Reproduceerbaarheid 

Van gel tot gel 

Vier urinemonsters die niet-gepolymeriseerde, ofwel lambda of kappa, Bence Jones lichte keten bevatten werden elk beproefd op 10 gels uit hetzelfde 

lotnummer, waarbij de standaard procedure werd gevolgd en de HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit werd gebruikt. 

Van lotnummer tot lotnummer 

Er werden twee urinemonsters gebruikt die niet-gepolymeriseerde, ofwel kappa of lambda, Bence Jones lichte keten bevatten. Ieder monster werd 

aangebracht in alle (24) sporen van twee HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 gels. Een van beide gels werd geïmmunofixeerd met passend anti vrije & 

gebonden lichte keten antiserum, en de andere gel met anti vrije lichte keten antiserum. Op deze manier werden met elk monster gels gebruikt uit drie 

verschillende lotnummers. 

Resultaten: De Bence Jones proteïnen werden bij elk monster en op alle gels correct geïdentificeerd ; bij de herhalingen werden geen valse positieven 

of verschillen waargenomen. 

Nauwkeurigheid - Detectie en Identificatie van Bence Jones Proteïnen 

Zesendertig urine- en tien serummonsters, pathologische en normale, werden geanalyseerd met behulp van de HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit en 

een vergelijkbare op de markt verkrijgbare immunofixatieprocedure. De resultaten van de twee immunofixatieprocedures kwamen perfect met elkaar 

overeen, evenals met de resultaten en de diagnose die door een ziekenhuis werden aangeleverd. 


Reproduceerbaarheid binnen de gel en de specificiteit 

De reproduceerbaarheid binnen de gel werd gedemonstreerd op twee urinemonsters (een monster met lambda Bence Jones lichte keten een monster 

met kappa Bence Jones lichte keten) en op een serummonster met een lambda lichte keten paraproteïne en een lambda Bence Jones lichte keten. 

Elk monster werd op twee partijen HYDRAGEL 9 BENCE JONES gels getest. Alle geteste monster lieten identieke resultaten zien voor de beide 

partijen en vertoonden typerende patronen zoals verwacht voor het type monster dat werd getest. Immunofixatie liet herhaaldelijk de verwachtte 

monoklonale banden bij deze drie pathologische monsters. 

Reproduceerbaarheid tussen gels en de specificiteit 

De reproduceerbaarheid tussen gels werd gedemonstreerd op acht pathologische monsters (vijf urine en drie serummonsters met Bence Jones 

proteïnen) en een normaal urinemonster, zonder Bence Jones proteïne. De monsters werden op 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES gels afkomstig uit 

drie partijen, getest. Alle geteste pathologische monsters lieten identieke resultaten zien op elke gel en vertoonden typerende patronen en, zoals 

verwacht voor het type monster dat getest werd, werd er geen monoklonale band waargenomen na de immunofixatie van het normale urinemonster. 

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Nauwkeurigheid 

Negenentwintig pathologische urine en serummonsters (21 urines en 8 sera) met een of meer kappa of lambda Bence Jones proteïnen, en zeven 

monsters (6 urines en 1 serum) zonder Bence Jones proteïne werd getest via de HYDRAGEL 9 BENCE JONES procedure en een vergelijkbaar en 

in de handel beschikbaar agarosegel-immunofixatiesysteem. De resultaten van de twee immunofixatie procedures stemden volledig met elkaar 

overeen : er werden identieke banden waargenomen bij alle pathologische monsters en wel met elk systeem of elke procedure en er werd geen 

monoklonale band waargenomen na de immunofixatie van de normale monsters. 

BIBLIOGRAFIE 



1994, 397 pp. 

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UTILIZZO 

I kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 2 BENCE JONES, 4 BENCE JONES e 9 BENCE JONES sono stati progettati per l’identificazione delle proteine 

di Bence Jones, o catene leggere libere (kappa o lambda), nelle urine umane e nel siero, mediante elettroforesi ed immunofissazione su gel d'agarosio 

tamponato in mezzo alcalino (pH 9.1). I kits sono usati in combinazione con il sistema semi-automatico HYDRASYS, per eseguire tutte le fasi 

necessarie all’ottenimento di gels pronti per l’interpretazione. 

Le proteine dei campioni sono fatte migrare ed immunofissate mediante antisieri con le seguenti specificità: (1) Antisiero Trivalente: anti catene pesanti 

gamma (Ig G), alfa (Ig A) e mu (Ig M), (2) antisiero anti catene leggere, libere e legate, kappa, (3) antisiero anti catene leggere, libere e legate, lambda, 

(4) antisiero anti catene leggere libere, kappa e (5) antisiero anti catene leggere libere lambda. Dopo l’immunofissazione, le proteine precipitate sono 

colorate con violetto acido. L’eccesso di colorante è rimosso con una soluzione acida. 

Ogni gel di agarosio permette di processare: 

- un campione con il kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- due campioni con il kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- quattro campioni con il kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- nove campioni con il kit HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Per uso diagnostico in vitro. 

PRINCIPIO DEL METODO 

Bande anomale nel quadro elettroforetico, in particolare nella zona delle beta-globuline e delle gamma-globuline, sono presunte essere proteine 

monoclonali e pertanto un indice di gammapatia. Per identificare tali bande anomale si utilizza la tecnica dell’immunofissazione. 

L’immunofissazione elettroforetica permette di fissare una proteina in situ dopo l’elettroforesi, formando complessi insolubili con i corrispondenti 

antisieri. 

Tale tecnica consta di quattro fasi: 

1. Separazione delle proteine mediante elettroforesi su gel di agarosio. 

2. Fissazione ed immunoprecipitazione delle proteine migrate: soluzione fissativa ed antisieri sono stratificati direttamente sulla superficie del gel 

nelle appropriate corsie di migrazione. Soluzione fissativa ed antisieri diffondono nel gel precipitando, rispettivamente, le proteine ed i 

corrispondenti antigeni. 

3. Le proteine non precipitate e quindi solubili sono rimosse dal gel mediante asciugatura e lavaggio. Il complesso antigene-anticorpo precipitato è 

intrappolato all’interno della matrice del gel. 

4. Le proteine precipitate sono evidenziate con la colorazione. Le bande immunoprecipitate sono poi comparate con le corrispondenti bande anomale 

presenti nel quadro elettroforetico di riferimento. 

Per evidenziare ed identificare le presunte componenti monoclonali, il campione è fatto migrare contemporaneamente in sei corsie. Dopo l’elettroforesi 

la corsia ELP serve da riferimento, mostrando il quadro elettroforetico di tutte le proteine del campione. Le rimanenti cinque corsie permettono la 

identificazione della componente(i) monoclonale(i) mediante la reazione(i) o la mancanza di reazione(i) con l’antisiero trivalente anti catene pesanti 

(gamma, alfa e mu), gli antisieri singoli anti catene leggere, libere e legate, kappa e lambda e gli antisieri singoli anti catene leggere libere kappa e 

lambda. 

Questa semplice e rapida tecnica fornisce un quadro chiaro e facilmente interpretabile. 

REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEI KITS HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES I HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES PN 4821 KIT HYDRAGEL 2 BENCE JONES PN 4822 KIT HYDRAGEL 4 BENCE JONES PN 4824 KIT HYDRAGEL 9 BENCE JONES PN 4883* Gels di Agarosio (pronti all’uso) 10 gels 10 gels 80 gels Strisce tamponate (pronte all’uso) 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 80 confezioni da 2 Colorante Violetto Acido (soluzione concentrata) 1 flacone, 75 ml 1 flacone, 75 ml 8 flaconi, 75 ml Soluzione Fissativa (pronta all’uso) 1 flacone, 14.4 ml Immunoglobuline di mammifero anti catene pesanti 1 flacone, 10.8 ml umane gamma, alfa e mu (trivalente) (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 10.8 ml umane, libere e legate, kappa (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 10.8 ml umane, libere e legate, lambda (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 10.8 ml umane libere kappa (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 10.8 ml umane libere lambda (pronte all’uso) Applicatori (pronti all’uso) 1 confezione da 10 2 confezioni da 10 24 confezioni da 10 Cartine da filtro sottili 1 confezione da 10 1 confezione da 10 8 confezioni da 10 Pettini di carta da filtro 1 confezione da 10 2 confezioni da 10 24 confezioni da 10 

| Cartine da filtro spesse | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 8 confezioni da 10 | 


NOTA: La soluzione fissativa e gli antisieri sono forniti separatamente dal kit ad esclusione del MAXI-KIT (Vedi REAGENTI RICHIESTI MA NON 

FORNITI). 

PER RISULTATI OTTIMALI 

I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit. 

LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO. 

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FOGLIO DI ISTRUZIONI SEBIA - Italiano


1. GELS DI AGAROSIO 

Preparazione 

I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gels di agarosio contiene: agarosio, 8 g/l ; tampone tris-barbital pH 9.1 ± 0.1 ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: I gels di agarosio contengono 0.31 % di barbital e 0.34 % di barbital sodico. Non ingerire! Se ingerito consultare 

immediatamente un medico ! 

Utilizzo 

Mezzo di supporto per elettroforesi ed immunofissazione delle proteine. 

Conservazione, stabilità e segni di deterioramento 

Conservare i gels orizzontalmente, nella confezione originale protettiva, a temperatura ambiente (15 - 30 °C) o in frigorifero (2 - 8 °C). I gels sono 

stabili fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. (La freccia sulla scatola del kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Evitare la conservazione nelle seguenti condizioni : in prossimità di fenestre ; in prossimità di sorgenti di calore ; in presenza di brusche e/o significative 

variazioni di temperatura. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare il gel quando: 

(i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe conseguenze del 

congelamento del gel), 

(ii) è presente muffa o flora batterica, 

(iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni 

di conservazione improprie). 

2. STRISCE TAMPONATE 

Preparazione 

Le strisce tamponate sono pronte all’uso. Ogni striscia contiene: tampone tris-barbital pH 9.1 ± 0.3 ; sodio azide ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: Il tampone nelle strisce contiene 0.92 % di barbital, 1.03 % di barbital sodico e 0.30 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerite 

consultare immediatamente un medico! Quando smaltite, evitare il contatto con acidi, piombo o rame poiché possono originare composti 

esplosivi o tossici con la sodio azide. 

Utilizzo 

Le strisce di spugna tamponate funzionano da riserva di tampone per l’elettroforesi ed assicurano il contatto tra il gel e gli elettrodi. 


Conservare le strisce tamponate orizzontalmente nella loro confezione protettiva, a temperatura ambiente o in frigorifero. (La freccia sulla scatola del 

kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Le strisce sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichetta della confezione delle strisce. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare le strisce se la confezione è aperta e le strisce sono asciutte. 

3. COLORANTE VIOLETTO ACIDO 

Preparazione 

Il flacone di colorante violetto acido in soluzione concentrata deve essere diluito a 300 ml con acqua distillata o deionizzata. 

Dopo la diluizione, la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; violetto acido, 2 g/l ; Etilen-glicol, 3,25 % ; componenti non pericolosi 

alle concentrazioni utilizzate necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Colorazione dei gels dopo l’elettroforesi e l’immunofissazione delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinato alla colorazione di soli 10 gels. Sostituire la soluzione dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare sia la soluzione concentrata del colorante che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione del colorante concentrata è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. Il 

colorante diluito è stabile 6 mesi. 

4. SOLUZIONE FISSATIVA (con PN 4883) 

Preparazione 

La soluzione fissativa è pronta all’uso. Contiene: soluzione acida ; additivi, non rischiosi alle concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

Per una facile identificazione e come aiuto nel controllo della sua corretta applicazione, il fissativo è colorato con un colorante atossico, tale colore è 

riportato anche sull’etichetta del flacone e sulla corrispondente pista della maschera di stratificazione dei reagenti. 

Utilizzo 

Per fissare le proteine separate mediante l’elettroforesi nella pista di riferimento (ELP). 

NOTA : La soluzione fissativa è specifica per la tecnica di immunofissazione realizzata con le maschere 1, 2, 4 e 9 BENCE JONES. 

IMPORTANTE : Per evitare la contaminazione tra i diversi reagenti, si raccomanda di rimettere ogni tappo sul flacone corrispondente dopo ogni 

utilizzo. 


Conservare la soluzione fissativa a temperatura ambiente o refrigerata. Il fissativo è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit 

o sulla etichetta del flacone del fissativo. 

La soluzione fissativa deve essere priva di precipitato. 

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5. ANTISIERI (con PN 4883) 

Preparazione 

Gli antisieri sono pronti all’uso. Contengono delle immunoglobuline totali di mammifero anti-umane. Ogni reagente ha un colore specifico per evitare 

errori durante l’utilizzo. Lo stesso colore è riportato sull’etichetta del flacone. 

Se l’antisiero è leggermente torbido o presenta un precipitato, generalmente basta mettere il flacone a temperatura ambiente circa 10 minuti prima 

del suo utilizzo. L’aspetto torbido, anche se persiste, non altera la reazione immunologica. In caso di precipitato insolubile, si raccomanda di 

centrifugare l’antisiero per 5 minuti a 3000 rpm. 

Utilizzo 

Per l’immunoprecipitazione delle proteine separate elettroforeticamente. 

NOTA: Questo antisiero è specifico per le tecniche di immunofissazione realizzate con le maschere 1, 2, 4 e 9 BENCE JONES. 

Gli antisieri possono essere di differenti origini animali. Non bisogna quindi assolutamente mescolare due flaconi di antisieri, anche se con la stessa 

specificità, e bisogna SEMPRE cambiare il puntale della pipetta quando si usa un flacone diverso. 

IMPORTANTE : Per evitare la contaminazione tra i diversi reagenti, si raccomanda di rimettere ogni tappo sul flacone corrispondente dopo ogni 

utilizzo. 

Conservazione e stabilità 

L’antisiero deve essere conservato in frigorifero (tra 2 e 8 °C). E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola o sull’etichetta del flacone di 

antisiero. 

NOTA : Durante il trasporto, l’antisiero può restare a temperatura ambiente (tra 15 e 30 °C) per 15 giorni senza che ciò alteri la qualità del test. 

6. APPLICATORI 

Utilizzo 

Applicatori monouso, pretagliati, per l’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare gli applicatori lontano dall’umidità a temperatura ambiente o in frigorifero. 

7. CARTINE DA FILTRO - SOTTILI 

Utilizzo 

Cartine assorbenti monouso per l’eliminazione dell’eccesso di liquido dalla superficie del gel prima dell’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro sottili in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

8. PETTINI DI CARTA DA FILTRO 

Utilizzo 

Pettini di carta assorbente spessa, pretagliati, monouso, per l’eliminazione dell’eccesso di soluzione fissativa e di antisiero dalla superficie del gel dopo 

la fase di immunofissazione. 

9. CARTINE DA FILTRO - SPESSE 

Utilizzo 

Cartine assorbenti pretagliate, monouso, per l’eliminazione dal gel delle proteine non precipitate dopo la fase di immunofissazione. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro spesse in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

REAGENTI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. KIT ANTISIERI E SOLUZIONE FISSATIVA IF (per i kits 4821, 4822 e 4824) 

Il kit antisieri e soluzione fissativa GAM, K, L per immunofissazione, maschera standard (SEBIA, ref. N° 4835) contiene tre flaconi di antisieri, (anticatene 

pesanti gamma, alpha e mu, anti-catene leggere kappa, libere e legate, e anti-catene leggere lambda, libere e legate) di 1 ml ognuno, e un 

flacone di soluzione fissativa di 2.5 ml, specifici per la tecnica di immunofissazione realizzata con le maschere 1, 2, 4 e 9 BENCE JONES SEBIA. 

1.1 ANTISIERI 

Vedere paragrafo 5 precedente. 

1.2 SOLUZIONE FISSATIVA 

Vedere paragrafo 4 precedente. 

2. KIT DI ANTISIERI ANTI-CATENE LEGGERE LIBERE (per i kits 4821, 4822 e 4824) 

Il kit antisieri, catene leggere libere K e L per immunofissazione, Maschera standard (SEBIA, ref. N° 4836), contiene due flaconi di antisieri di 1 ml 

ciascuno, specifici per la tecnica di immunofissazione realizzata con le maschere 1, 2, 4 e 9 BENCE JONES SEBIA. 

Preparazione, Utilizzo, Conservazione e stabilità: Vedere paragrafo 5 precedente. 

3. SOLUZIONE DECOLORANTE 

Preparazione 

Ogni flacone di soluzione decolorante concentrata (SEBIA, PN 4540, 10 flaconi da 100 ml ciascuno) deve essere diluito a 100 litri con acqua 

deionizzata o distillata. Per convenienza diluire solo 5 ml di soluzione concentrata a 5 litri, ossia al volume della tanica della soluzione decolorante. 

Dopo la diluizione la soluzione decolorante contiene: acido citrico, 0.5 g/l. 

Utilizzo 

Come decolorante, ossia per rimuovere l’eccesso di colorante e la colorazione di fondo dal gel. 

Per il risciacquo del compartimento di colorazione dopo la fase di lavaggio. 

Per neutralizzare l’acidità della soluzione decolorante versare, nella tanica vuota dei liquidi reflui, 15 mL di una soluzione al 50 % di Idrossido di Sodio. 

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Conservare la soluzione decolorante concentrata a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza 

indicata sulla scatola del kit o sulla etichetta del decolorante. La soluzione diluita del decolorante è stabile per una settimana a temperatura ambiente 

in flacone chiuso. Non aggiungere sodio azide. 

Eliminare la soluzione decolorante diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

Per prevenire le proliferazioni microbiche nella soluzione decolorante diluita, da conservare oltre una settimana, aggiungere 5 µL/dL di ProClin 300. 

La soluzione decolorante diluita addizionata con ProClin e conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in bottiglia chiusa, è stabile fino alla data 

di scadenza indicata sulla confezione o sull’etichetta del flacone di decolorante. 

4. SOLUZIONE DI LAVAGGIO HYDRASYS 

Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione di Lavaggio HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 flaconi da 80 ml ciascuno) deve essere diluito a 5 litri con acqua distillata o 

deionizzata. Dopo la diluizione la soluzione di lavaggio contiene: tampone alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; sodio azide. 

AVVERTENZA: La soluzione di lavaggio concentrata contiene 0.625 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerita consultare immediatamente 

un medico! La sodio azide può portare alla formazione di composti tossici o esplosivi se posta a contatto con acidi, piombo o rame. Quando 

smaltita, fare scorrere un’abbondante quantità’ di acqua. 

Utilizzo 

La soluzione di lavaggio HYDRASYS ha la funzione di rimuovere le proteine non precipitate dai gels. Serve inoltre per lavare il compartimento di 

colorazione di HYDRASYS. Usare periodicamente ; per esempio, se lo strumento è usato giornalmente lavare il compartimento di colorazione 

settimanalmente. 

Consultare l’inserto nella confezione per la procedura di utilizzo. 


Conservare sia la soluzione di lavaggio concentrata che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso. Entrambe le 

soluzioni sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. 

Eliminare la soluzione di lavaggio diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

5. SOLUZIONE FISIOLOGICA 

Preparazione 

Preparare una soluzione 0.15 M (9 g/l) di NaCl in acqua distillata o deionizzata. 

Utilizzo 

Per diluire i campioni se necessario. 


Conservare a temperatura ambiente o in frigorifero. Eliminare comunque dopo 3 mesi oppure se muta di aspetto (diviene torbida a causa di 

contaminazione batterica). Per una conservazione più lunga aggiungere sodio azide, 1 g/l. 

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Dispensatore manuale, o in alternativa, per il caricamento degli applicatori dei campioni, campionatore automatico HYDRAplus SEBIA, PN 1215. 

3. Camera umida, PN 1270, fornita con HYDRASYS. 

4. Kit di taniche fornito con HYDRASYS. 

5. Barra metallica per il Fissagio della maschera SEBIA fornita con HYDRASYS. 

6. Kit di accessori IF per HYDRASYS, SEBIA, PN 1260. 

7. Kit di accessori 9 BENCE JONES per HYDRASYS, SEBIA, PN 1266. 

8. Kit di accessori 1 IF / 1 BENCE JONES per HYDRASYS, SEBIA, PN 1267. 

9. Pipette: 10 µl e 200 µl. 

CAMPIONI PER L’ANALISI 

Raccolta e conservazione del campione 

• Le analisi sono generalmente eseguite su urine fresche. 

Se necessario le urine possono essere conservate fino ad una settimana a 2 - 8 °C. Per periodi di conservazione più lunghi congelare le urine. 

Congelando con HEPES 0.1 M (pH 6.75) e sodio azide, 0.2 g/l si migliora la conservazione. Le urine congelate sono stabili per almeno un mese. 

Campioni scongelati possono dar luogo a leggeri segni di applicazione a causa della denaturazione delle proteine. 

IMPORTANTE: Evitare l’acido borico come conservante. 

• Se si analizza del siero questo deve essere prelevato secondo le procedure usate per i tests clinici. Se necessario conservare i sieri a 2 - 8 °C per 

una settimana. Per periodi di conservazione più lunghi congelare i campioni. I campioni congelati sono stabili per almeno 1 mese. Campioni 

scongelati possono dare luogo a leggeri segni di applicazione a causa della denaturazione delle proteine o delle lipoproteine. 

Preparazione del campione 

Urine 

L’analisi è eseguita su urine non concentrate. Il limite di sensibilità per la proteina di Bence Jones è 50 mg/l. Per una maggiore sensibilità concentrare 

i campioni. 

NOTA: La diffusione nei dentini degli applicatori di campioni di urina (intera o concentrata) torbidi, può essere ostacolata. Si raccomanda di rimuovere 

il particolato centrifugando i campioni (es., 10 minuti a 3000 rpm) o per filtrazione (es., filtri da siringa 0.45 µm). 

Sieri 

Per ricercare contemporaneamente la proteina di Bence Jones nell’urina e nel corrispondente siero, diluire il siero, utilizzando soluzione fisiologica o 

diluente per immunofissazione prediluito 1/4 (1 volume di diluente + 3 volumi di acqua distillata o deionizzata), 1/10 per le piste ELP, GAM, K e L 

(1 volume di siero + 9 volumi di diluente prediluito o di soluzione fisiologica) e 1/3 per le piste Kl e Ll (1 volume di siero + 2 volumi di diluente prediluito 

o di soluzione fisiologica). 

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NOTA: Se il livello di immunoglobuline totali è minore di 0,5 g/dL, si raccomanda una inferiore diluizione del siero con soluzione fisiologica o con 

diluente per immunofissazione prediluito 1/4 (1 volume di diluente + 3 volumi di acqua distillata o deionizzata). 

Per esempio, diluire il siero 1/5 per le piste ELP, GAM, K e L (1 volume di siero + 4 volumi di diluente prediluito o di soluzione fisiologica) e 1/2 per le 

piste Kl e Ll (1 volume di siero e 2 volumi di diluente prediluito o soluzione fisiologica). 

Per l’analisi delle Ig D e/o Ig E, applicare la stessa diluizione preparata per le catene leggere libere e legate. 

IMPORTANTE 

• Evitare campioni di plasma. Il fibrinogeno dà luogo ad una banda, vicino al punto di applicazione, che può essere scambiata per una 

immunoglobulina monoclonale. 

• Alcune urine presentano un alta concentrazione di sali. Questi possono causare una deformazione durante la migrazione con conseguente distorsione 

dei profili di migrazione. Se la distorsione rende inaccurata l’interpretazione, tali urine devono essere dializzate per eliminare i sali. 

• Urine proteolizzate possono portare ad una reazione positiva con gli antisieri anti catena leggere libere. In questo caso, una paraproteina del siero 

eliminata con le urine può mostrare una banda monoclonale con l’antisiero trivalente, con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate e 

con il corrispondente antisiero anti catene leggere libere. 

• La polimerizzazione delle proteine di Bence Jones generalmente diminuisce la sensibilità di rivelazione con gli antisieri anti catene libere leggere 

poiché può causare il blocco degli epitopi che normalmente reagiscono con gli antisieri anti catene libere leggere. Quando non si ottiene rivelazione 

ma è sospettata la presenza di proteine di Bence Jones, prima di processare elettroforeticamente provvedere a depolimerizzare: miscelare 100 µl 

di urina con 5 µl di ß-mercaptoetanolo diluito 1:10 in fisiologica e quindi applicare. 

PROCEDURA 

Il sistema HYDRASYS è uno strumento semi-automatico multiparametrico. Le fasi automatiche includono il trattamento dei gels di agarosio 

HYDRAGEL nella seguente sequenza: applicazione del campione, migrazione elettroforetica, incubazione con la soluzione fissativa e con gli antisieri, 

essiccazione, colorazione, decolorazione ed essiccazione finale. Le fasi manuali includono la manipolazione dei campioni, dei gels, l’applicazione del 

fissativo e degli antisieri e la preparazione dello strumento per l’uso. 

LEGGERE ATTENTAMENTE IL MANUALE DI ISTRUZIONE HYDRASYS. 

I. MIGRAZIONE 

1. Accendere lo strumento HYDRASYS. 

2. Posizionare un applicatore per HYDRAGEL 1 BENCE JONES o HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES (2 campioni), due applicatori per 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 campioni) o tre applicatori per HYDRAGEL 9 BENCE JONES, su una superficie piana con i numeri dei 

pozzetti rivolti verso l’alto (Fig. 1). 

- Applicare 10 µl di campione in ogni pozzetto. Caricare ciascun applicatore entro 2 minuti. 

| PISTE DI MIGRAZIONE/IMMUNOFISSAZIONE | 

POZZETTO No. ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 CAMPIONE No 1 O 3 2 3 4 5 6 7 CAMPIONE No 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES CAMPIONE No 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 CAMPIONE No 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| CAMPIONE No 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANTE: Per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, i pozzetti num. 1, 8 e 15 non sono utilizzati; possono essere marcati con un pennarello 

per evitarne il riempimento erroneo con il campione. 

- Inserire l’applicatore(i) nella camera umida di conservazione con i dentini rivolti verso l’alto (maneggiare gli applicatori mediante la cornice 

protettiva in plastica). 

Consultare l’inserto all’interno della confezione della camera umida per ulteriori dettagli. 

- Lasciare che i campioni diffondano nei dentini per 5 minuti dall’applicazione dell’ultimo campione. 

3. Aprire lo sportello del modulo di migrazione ed alzare le cornici mobili porta elettrodi e porta-applicatori. 

AVVERTENZA: Non chiudere mai lo sportello se le cornici mobili sono alzate. 

4. Dal menu dello strumento (lato sinistro della tastiera), selezionare il programma di migrazione "1 BJ MS/MD" per HYDRAGEL 1 BENCE 

JONES, "2/4 BJ-UP MS/MD" per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 o "9 BJ MS" per HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

5. Estrarre le strisce tamponate dalla confezione ; maneggiarle mediante le estremità in plastica. Agganciare le estremità in plastica forate agli 

spinotti della cornice porta elettrodi ; le estremità in plastica della striscia devono essere rivolte verso la cornice mobile (Fig. 2). 

6. Estrarre il gel dalla confezione. 

- Eliminare rapidamente l’eccesso di liquido dalla superficie del gel, facendo aderire sul gel una cartina da filtro sottile. 

AVVERTENZA: Non lasciare assolutamente la cartine da filtro in contatto prolungato con il gel in modo da evitare la sua disidratazione. 

- Dispensare 120 µL di acqua distillata o deionizata per HYDRAGEL 1 BENCE JONES o 200 µL per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 e 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, sul terzo inferiore del riquadro stampato sulla piastra di controllo temperatura del modulo di migrazione. 

- Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 3). 

- Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia di acqua. Assicurarsi che non siano rimaste intrappolate bolle d’aria. L’acqua deve essere 

uniformemente stratificata al di sotto della lastrina di gel e questa deve essere allineata all’interno del riquadro stampato. 

7. Abbassare entrambe le cornici mobili. In questa posizione le strisce tamponate non toccano il gel. NON FORZARE LE CORNICI MOBILI AD 

ABBASSARSI ULTERIORMENTE. 

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8. Estrarre l’applicatore(i) dalla camera di umidificazione. Maneggiare gli applicatori mediante la cornice di protezione. 

- Staccare la cornice di protezione dei dentini dell’applicatore. 

- Inserire l’applicatore(i) sulla cornice mobile : 

- Con HYDRAGEL 1 BENCE JONES o HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 campioni), in posizione No 6, 

- Con HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 campioni), in posizione No 3 e 9, 

- Con HYDRAGEL 9 BENCE JONES in posizione No 2, 6 e 10. 

- Per una perfetta riproducibilità nell’applicazione del campione, serrare gli applicatori al lato sinistro del carrello. 

IMPORTANTE: I numeri stampati sugli applicatori devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 4). 

9. Chiudere lo sportello del modulo di migrazione. 

10. Avviare la procedura immediatamente premendo la freccia verde «START» sul lato sinistro della tastiera. 

IMPORTANTE: Assicurarsi che la griglia di ventilazione sul lato destro dello strumento non sia ostruita. 


MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate e gli applicatori entrino in contatto con il gel. 

• La cornice mobile porta applicatori si alza. 

• Ha luogo la migrazione in condizioni di potenza costante, 10 W per HYDRAGEL 1 BENCE JONES e 20 W per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, fino 

ad accumulare 42 Vh (per circa 9 minuti) e 20 W fino ad accumulare 31 Vh (per circa 7 minuti) per HYDRAGEL 9 BENCE JONES, a 20 °C controllati 

mediante effetto Peltier. 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. Sullo schermo compare il messaggio: « AS». 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione. 

II. IMMUNOFISSAZIONE 

1. Aprire lo sportello del modulo di migrazione. 

2. Rimuovere l’applicatore o gli applicatori ed eliminarli. 

3. Alzare entrambe le cornici mobili, rimuovere le strisce tamponate mediante le estremità in plastica ed eliminarle. 

- Estrarre il carrello porta applicatori ed elettrodi. 

- Pulire gli elettrodi con della carta soffice inumidita. 

- Lasciare il gel in posizione nel modulo di migrazione. 

4. Posizionare la maschera per l’applicazione dei reattivi come segue (Fig. 5): 

- Posizionare la guida per la maschera di applicazione sui due spinotti di ancoraggio inferiori (la guida può essere sempre lasciata nel modulo 

di migrazione). 

- Tenere la maschera tramite la aletta superiore ed inserirla nella guida (il gancio destro della maschera si inserisce nell’incavo della guida). 

- Abbassare la maschera sul gel. 

- Regolare la posizione della maschera per ottenere il perfetto allineamento tra i profili elettroforetici e i pozzetti della maschera (per istruzioni, 

vedi kit accessori per HYDRASYS 9 BENCE JONES SEBIA, PN 1266). 

5. Applicare i reattivi come segue. 

VOLUME (µl) PISTE maschera maschera REATTIVO COLORE 1, 2 e 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 soluzione fissativa giallo GAM 25 15 antisiero trivalente violetto K 25 15 antisiero anti catene leggere kappa (libere e legate) verde L 25 15 antisiero anti catene leggere lambda (libere e legate) blu Kl 25 15 antisiero anti catene leggere libere kappa arancione 

| Ll | 25 | 15 | antisiero anti catene leggere libere lambda | rosso | 

NOTA: Per evitare scambi, i colori dei reattivi sono presenti sia sulle etichette dei flaconi che sui pozzetti di applicazione della maschera. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : Si consiglia di applicare gli antisieri nell’ordine seguente: lambda libere, kappa libere, kappa, lambda e GAM, 

per ultima, la soluzione fissativa. 

- Prelevare i reagenti evitando di intrappolare bolle di aria nel puntale della pipetta. 

- Applicare i reattivi (Fig. 6): 

- Tenere la pipetta verticalmente ed appoggiare leggermente il puntale sul fondo del pozzetto. 

- Iniettare il reattivo in modo che si stratifichi lungo tutta la pista senza intrappolare bolle di aria. 


7. Far partire la procedura immediatamente premendo la freccia verde «START» sul lato sinistro della tastiera. Sullo schermo compare il 

messaggio «[INCUBAZIONE]». 

IMMUNOFISSAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Incubazione a 20 °C per 10 minuti (controllata mediante effetto Peltier). 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è sbloccato. Sullo schermo compare il messaggio: «❊ AS (MS)». 

NOTA: Durante l’incubazione lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato. 

III. ELIMINAZIONE DELL’ECCESSO DEI REATTIVI 

1. Alzare lo sportello del modulo di migrazione. 

2. Eliminare i reagenti servendosi dei pettinini di carta da filtro (Fig. 7): un pettinino per le maschere 1 BENCE JONES e 2 BENCE JONES, due 

pettinini per la maschera 4 BENCE JONES e 3 pettinini per la maschera 9 BENCE JONES. 

- Inserire il pettine(i) con un angolo di 30°, nelle fessure, sottostanti le piste della maschera, in modo che i denti ne tocchino il lato verticale, 

opposto all’operatore. 

- Permettere ai denti di entrare delicatamente in contatto con il liquido inclinando il pettine(i) a 45° e consentendo così di aspirare il liquido (Fig. 8). 

IMPORTANTE: I pettini non devono toccare il gel. Ogni pettine deve rimanere inclinato a 45°. Se tenuti in posizione verticale potrebbero 

danneggiare il gel. 

3. Avviare la procedura premendo il tasto «START» (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). 

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ELIMINAZIONE DEI REATTIVI - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• I reagenti sono assorbiti dai denti per 15 secondi a 20 °C (controllati mediante effetto Peltier). 

• Viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il messaggio: « CARTA». 

IV. ASCIUGATURA DEL GEL 

1. Rimuovere i pettini. 

2. Controllare che i reattivi siano stati correttamente assorbiti come indicato da: 

- assenza di reattivi sul gel. 

- denti colorati in tutta la loro lunghezza. 

Se l’assorbimento dei reattivi risultasse incompleto, inserire nuovamente il medesimo pettine nella medesima posizione e ripetere la procedura 

di eliminazione. 

3. Afferrare la maschera per la deposizione dei reattivi mediante la aletta, alzarla ed estrarla. 

4. Applicare una cartina da filtro spessa sul gel: 

- inclinare la cartina da filtro con un angolo di 45° ed allineare il margine della cartina da filtro al margine del gel. 

- abbassarla sul gel. 

ATTENZIONE: Premere sull’intera superficie della carta da filtro, per assicurare la perfetta aderenza tra il gel e la carta. 



7. Pulire la maschera con acqua ed uno spazzolino (es., spazzolino da denti). NON USARE ALCOOL O SOLVENTI. Assicurarsi che la maschera 

sia completamente asciutta prima di utilizzarla nuovamente ; rimuovere le gocce di acqua dai pozzetti scuotendola leggermente su della carta 

assorbente. 

ASCIUGATURA - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Asciugatura a 40 °C mediante effetto Peltier, per 3 minuti. 

• Viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il messaggio: «❊ CARTA». 

NOTA: Durante la fase di asciugatura lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato. 

V. ESSICCAZIONE DEL GEL 

1. Aprire lo sportello del modulo di migrazione. 

2. Rimuovere la cartina da filtro lasciando il gel in posizione. 

3. Chiudere lo sportello. 


ESSICCAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Essiccazione a 50 °C controllati mediante effetto Peltier per 6 minuti. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello è sbloccato. La temperatura della piastra rimane a 50 °C finchè lo sportello non viene aperto. 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante la fase di essiccazione. 

VI. TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Aprire lo sportello. 

2. Estrarre il gel essiccato, pronto per i trattamenti successivi. 

3. Aprire il telaio porta gel. Metterlo in posizione piana ed inserire la lastrina (con il gel rivolto verso l’operatore) nelle scanalature delle due guide, 

quindi chiudere il telaio. Assicurarsi che il gel sia correttamente posizionato all’interno del telaio. 

4. Inserire il telaio porta gel nel Modulo di trattamento/colorazione. 

IMPORTANTE: Prima di avviare il programma di trattamento/colorazione del gel controllare che: 

- la tanica della soluzione di lavaggio contenga almeno 400 ml di soluzione di lavaggio ; 

- la tanica del colorante sia riempita con 300 ml di soluzione colorante ; 

- la tanica del decolorante contenga almeno 1 litro di soluzione decolorante ; 

- la tanica dei liquidi reflui sia vuota. 

Per la connessione dei reagenti: Riferirsi alle informazioni mostrate sul visore dello strumento (premere il tasto: VISUAL CANALI). 

IMPORTANTE: Non dimenticare di chiudere gli ingressi reagenti non utilizzati. 

5. Selezionare il programma di colorazione «IF ACID VIOLET» dal menù dello strumento ed avviare la procedura premendo il tasto «START» 

(freccia verde sul lato destro dello strumento). 

Durante i cicli di colorazione, decolorazione e asciugatura, il compartimento rimane bloccato. 

Dopo il ciclo di raffreddamento, un segnale acustico indica che il compartimento è sbloccato (la ventilazione è mantenuta fino a quando il 

supporto del gel viene rimosso) 

NOTE: 

- La temperatura della piastra di migrazione decresce a partire dall’apertura dello sportello finchè non raggiunge 20 °C (in meno di 5 minuti). A questo 

punto può essere avviata una nuova migrazione. 

- Rimettere in posizione il carrello mobile porta elettrodi e porta applicatori. 

- Pulire la piastra di migrazione con della carta soffice inumidita. 

VII. COMPLETAMENTO DEL TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Rimuovere il telaio porta gel dal compartimento ; aprirlo e rimuovere il gel essiccato. 

2. Se necessario pulire il retro della lastrina di gel (la faccia con la plastica di supporto) con una carta soffice inumidita. 

NOTA : Le lunghezze di migrazione dei gels con 2 o 3 righe analitiche possono essere sensibilmente differenti, senza alcuna conseguenza sui 

risultati. 

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RISULTATI 

Interpretazione 

La presenza della proteina di Bence Jones nell’urina è caratterizzata da: 

- una banda monoclonale evidenziata con uno degli antisieri anti catena leggera libera e legata kappa o lambda (piste K o L), 

- la stessa banda monoclonale evidenziata con uno degli antisieri anti catena leggera libera kappa o lambda (piste KI o LI), 

- assenza di reazione con l’antisiero trivalente (pista GAM). 

Paraproteina del siero eliminata con le urine senza proteina di Bence Jones è caratterizzata da: 

- una banda monoclonale evidenziata con l’antisiero trivalente, 

- la stessa banda evidenziata con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate, e 

- assenza di reazione con il corrispondente antisiero anti catene leggere libere. 

Paraproteina del siero eliminata con le urine associata a proteina di Bence Jones è caratterizzata da: 

- una banda monoclonale evidenziata con l’antisiero trivalente, 

- due bande rilevate con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate (o occasionalmente una banda rilevata con uno degli antisieri 

anti catena leggera libera e legata ed una banda rilevata con l’altro antisiero anti catena leggera libera e legata), 

- una banda rilevata con uno degli antisieri anti catena leggera libera. Questa banda generalmente non migra nella stessa posizione di quella 

messa in evidenza con l’antisiero trivalente. 

Proteina di Bence Jones in differenti gradi di polimerizzazione è caratterizzata da: 

- mancanza di reazione con l’antisiero trivalente, 

- varie bande rivelate con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate, 

- le stesse bande rivelate con il corrispondente antisiero anti catena leggera libera. 

Interferenze e limitazioni 

L’utilizzo di antisieri diversi da quelli specifici per la tecnica di immunofissazione realizzata con la maschera standard può alterare la qualità dei risultati. 

Per i limiti di risoluzione e sensibilità dell’elettroforesi zonale, è possibile che alcune componenti monoclonali possano non essere rilevate con questo 

metodo. 

Eliminazione errori 

Contattare il Servizio di Assistenza Tecnica del fornitore quando, nonostante siano state seguite accuratamente le istruzioni per la preparazione e 

conservazione dei materiali e per la procedura di impiego, i risultati del test non rispettino le caratteristiche. 

Le Schede di Sicurezza dei componenti del kit e le informazioni per lo smaltimento dei rifiuti sono disponibili presso il Servizio di Assistenza Tecnica 

SEBIA. 

DATI SULLE PRESTAZIONI 


Riproducibilità 

Tra gels 

Utilizzando la procedura standard ed il kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, sono stati processati quattro campioni di urina, contenenti catene leggere 

di Bence Jones lambda o kappa non polimerizzate, su 10 gels di uno stesso lotto. 

Tra lotti 

Sono stati utilizzati due campioni di urina contenenti catene leggere di Bence Jones non polimerizzate. Ogni campione è stato applicato in tutte le 

piste (24) di due gels HYDRAGEL BENCE JONES 2/4. Uno dei due gels è stato immunofissato con gli appropriati antisieri anti catene leggere libere 

e legate e l’altro con gli antisieri anti catene leggere libere. Per ogni campione sono stati usati gels da tre lotti diversi. 

Risultati: Le proteine di Bence Jones sono state correttamente identificate in ciascun campione e su tutti i gels, non ci sono stati falsi positivi e non 

sono state osservate differenze tra le ripetizioni. 

Accuratezza - Rivelazione ed identificazione delle proteine di Bence Jones 

Utilizzando il kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES e una similare metodica immunofissativa reperibile in commercio, sono stati analizzati trentasei 

campioni di urina e dieci campioni di siero, patologici e normali. I risultati delle due metodiche sono stati in perfetto accordo tra loro e con i risultati e 

le diagnosi fornite da un ospedale. 


Riproducibilità nella serie e specificità 

La riproducibilità nella serie è stata dimostrata su due campioni di urina (rispettivamente con una catena leggera libera monoclonale Lambda e con 

una catena leggera libera monoclonale Kappa) e su un campione di siero con una paraproteina a catena leggera Lambda ed una catena leggera libera 

monoclonale Lambda. Ciascun campione è stato processato su due lotti di gels HYDRAGEL 9 BENCE JONES. Tutti i campioni hanno fornito risultati 

identici per i due lotti, mostrando i quadri tipici e attesi per il tipo di campione analizzato. Con i tre campioni patologici, le immunofissazioni hanno 

ripetutamente mostrato le attese bande monoclonali. 

Riproducibilità tra serie e specificità 

La riproducibilità tra serie è stata dimostrata su otto campioni patologici (cinque urine e tre sieri con proteine di Bence Jones) ed un campione di urina 

normale senza proteina di Bence Jones. I campioni sono stati processati su 10 gels HYDRAGEL 9 BENCE JONES provenienti da tre lotti diversi. Tutti 

i campioni patologici hanno fornito risultati identici su ciascun gel, mostrando i quadri tipici ed attesi per il tipo di campione analizzato. Nessuna banda 

monoclonale è stata rilevata dopo l’immunofissazione del campione normale di urina. 

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Accuratezza 

Ventinove campioni patologici di siero e urina (21 urine e 8 sieri) con una o più proteine di Bence Jones Kappa o Lambda e sette campioni (6 urine e 

1 siero) senza proteina di Bence Jones diversi sono stati processati utilizzando il kit HYDRAGEL 9 BENCE JONES ed un diverso sistema di 

immunofissazione su gel di agarosio reperibile in commercio. I risultati ottenuti dalle due metodiche hanno mostrato una perfetta correlazione: con 

ambedue i sistemi su tutti i campioni patologici sono state rilevate le stesse bande e su tutti i campioni normali non è stata rilevata alcuna banda 

monoclonale. 

BIBLIOGRAFIA 



1994, 397 pp. 

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ESPECIFICACIONES DE USO 

Los kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 2 BENCE JONES, 4 BENCE JONES y 9 BENCE JONES están diseñados para la detección de proteínas 

Bence Jones, ó cadenas ligeras libres (kappa o lambda) en orina o suero humano, respectivamente, mediante inmunofijación en geles de agarosa 

tamponados alcalinamente (pH 9.1). Son utilizados junto con el sistema semiautomático HYDRASYS, realizándose así todo el conjunto de pasos 

necesarios para la obtención de geles listos para su posterior interpretación. 

Las proteínas de la muestra son sometidas a electroforesis e inmunofijación con antisueros que presentan las siguientes especificidades: (1) un 

antisuero trivalente : anti-gamma (Ig G), anti-alfa (Ig A) and anti-mu (Ig M) cadenas pesadas, (2) anti-kappa, libre o no, cadenas ligeras, (3) antilambda, 

libre o no, cadenas ligeras, (4) anti-kappa cadenas ligeras libres, y (5) anti-lambda cadenas ligeras libres. Después de la inmunofijación, las 

proteínas precipitadas se tiñen con violeta ácido. El exceso de colorante es eliminado con una solución ácida 

Cada gel de agarosa está pensado para analizar: 

- 1 muestra en el kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- 2 muestras en el kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- 4 muestras en el kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- 9 muestras en el kit HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Para uso diagnostico In Vitro. 

PRINCIPIO DEL ENSAYO 

La presencia de bandas anormales en los patrones electroforéticos, principalmente en las fracciones correspondientes a beta-globulinas y gammaglobulinas, 

son siempre sospechosas de ser proteínas monoclonales, y por tanto, son un indicador de gammapatías. Para identificar estas bandas 

anormales se realiza una inmunofijación. 

La inmunofijación permite fijar las proteínas in situ después de la electroforesis, mediante la formación de complejos insolubles en combinación con 

el antisuero correspondiente. 

Se realiza en cuatro etapas : 

1. Separación de las proteínas mediante electroforesis en gel de agarosa. 

2. Fijación e inmunoprecipitación de las proteínas sometidas a electroforesis: La solución fijadora y los antisueros son añadidos directamente sobre 

la superficie del gel en sus pistas de migración electroforética correspondientes. La solución fijadora y los antisueros difunden en el gel 

precipitando todas las proteínas y los correspondientes antígenos, respectivamente. 

3. Las proteínas no precipitadas (solubles) son eliminadas del gel mediante secado (blotting) y posterior lavado. Los complejos antígeno-anticuerpo 

quedan atrapados en la matriz del gel. 

4. Las proteínas precipitadas se visualizan mediante coloración. Las bandas inmunoprecipitadas son entonces comparadas con las bandas 

anormales correspondientes presentes en el patrón electroforético de la muestra. 

Para detectar e identificar las bandas monoclonales sospechosas, la muestra es sometida a separación electroforética en seis pistas de forma 

simultánea. Después de la electroforesis, la pista ELP sirve de referencia al mostrar el patrón electroforético de las proteínas presentes en la muestra. 

Las cinco pistas restantes permiten la detección del/los componente(s) monoclonal(es) o su ausencia, mediante un antisuero trivalente anti-cadenas 

pesadas (gamma, alfa y mu), antisueros individuales anti-cadenas ligeras kappa y lambda libres o no y antisueros individuales anti-cadenas ligeras 

kappa y lambda libres. 

Esta técnica rápida y simple proporciona una imagen clara y fácilmente interpretable. 

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN EL KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES E HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES REF. 4821 KIT HYDRAGEL 2 BENCE JONES REF. 4822 KIT HYDRAGEL 4 BENCE JONES REF. 4824 KIT HYDRAGEL 9 BENCE JONES REF. 4883* Geles de Agarosa (listos para usar) 10 geles 10 geles 80 geles Esponjas tamponadas (listas para usar) 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 80 bolsas de 2 Colorante Violeta Acido (solución stock) 1 vial de 75 ml 1 vial de 75 ml 8 viales de 75 ml Solución Fijadora (lista para usar) 1 vial de 14.4 ml Inmunoglobulinas de Mamífero anti-cadenas pesadas humanas gamma, alfa, mu (trivalente) (listo para usar) 1 vial de 10.8 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas kappa libres o no (listo para usar) 1 vial de 10.8 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas Lambda libres o no (listo para usar) 1 vial de 10.8 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas Kappa libres (listo para usar) 1 vial de 10.8 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas Lambda libres (listo para usar) 1 vial de 10.8 ml Aplicadores (listos para usar) 1 caja de 10 2 cajas de 10 24 cajas de 10 Papeles de Filtro - finos 1 paquete de 10 1 paquete de 10 8 paquetes de 10 Papeles de Filtro peines 1 caja de 10 2 cajas de 10 24 cajas de 10 

| Papeles de Filtro - gruesos | 1 paquete de 10 | 1 paquete de 10 | 8 paquetes de 10 | 

(*) MAXI-KIT HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

NOTA: La solución fijadora y los antisueros se comercializan por separado excepto en el MAXI-KIT (consulte REACTIVOS NECESARIOS NO 

SUMINISTRADOS). 

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INSTRUCCIONES SEBIA - Español

PARA OBTENER RESULTADOS ÓPTIMOS 

Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y según las instrucciones incluidas. 

LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES. 


1. GELES DE AGAROSA 

Preparación 

Los geles de agarosa están listos para el uso. Cada gel contiene: agarosa, 8 g/l ; tampón tris-barbital pH 9.1 ± 0.1 ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCION: Los geles de agarosa contienen barbital 0.31 % y barbital sódico 0.34 % ¡No ingerir! ¡Si se ingiere accidentalmente consultar 

inmediatamente al médico! 

Uso 

Medio de soporte para la electroforesis de proteínas e inmunofijación. 

Almacenamiento, estabilidad y señales de deterioro 

Almacenar los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente (15 a 30 °C) o refrigerados (2 a 8 °C). Son 

estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit y en sus recipientes protectores. (La flecha situada en la cara frontal de la caja del 

kit debe apuntar hacia arriba). Evitar su almacenamiento cerca de una ventana o de una fuente de calor. Evitar variaciones importantes de 

temperatura durante su almacenamiento. NO CONGELAR. 

Desechar cuando: 

(i) haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelación del gel) ; 

(ii) se observe crecimiento bacteriano o fúngico ; 

(iii) se evidencie una cantidad excesiva de líquido en el recipiente del gel (consecuencia de la exudación del tampón debida a un almacenamiento 

inadecuado). 

2. ESPONJAS TAMPONADAS 

Preparación 

Las esponjas tamponadas están listas para su uso. Contienen: tampón tris-barbital pH 9.1 ± 0.3 ; azida sódica ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: El tampón de las esponjas contiene barbital 0.92 %, barbital sódico 1.03 % y azida sódica 0.30 %. ¡No ingerir! ¡En caso de 

ingestión accidental, consultar inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se 

conoce su tendencia a formar compuestos explosivos con la azida sódica. 

Uso 

Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio del tampón de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos. 


Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. 

Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora (la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). 

Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora. NO LAS CONGELE. 

Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa está abierta o si las esponjas están secas. 

3. COLORANTE VIOLETA ACIDO 

Preparación 

El vial de la solución stock de colorante se diluye hasta 300 ml con agua destilada o desionizada. Después de la dilución, la solución de trabajo del 

colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; violeta ácido, 0.2 g/dL ; etilén-glicol, 3.25 % ; aditivos, inocuos a las concentraciones usadas, necesarios 

para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Es perjudicial si se ingiere. 

Uso 

Para la tinción de geles con separación electroforética de proteínas y posterior inmunofijación. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para la coloración de 10 geles. Cambie el colorante después de su utilización en 10 coloraciones. 


Almacenar ambas soluciones, stock y de trabajo del colorante, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados para evitar la 

evaporación. La solución stock del colorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. La solución 

de trabajo es estable 6 meses. 

4. SOLUCION FIJADORA (Ref. N° 4883) 

Preparación 

La solución fijadora está lista para su uso. Contiene: solución ácida: aditivos, inocuos a las concentraciones usadas, necesarias para un rendimiento 

óptimo. Para una fácil identificación y como control de su aplicación, la solución fijadora está coloreada con un colorante no tóxico, del mismo color 

que la etiqueta del vial y la pista determinada de la plantilla de aplicación de reactivos. 

Uso 

Fijación de las proteínas separadas electroforéticamente en la pista de referencia (ELP). 

NOTA: La solución fijadora es específica de la técnica de inmunofijación realizada con las plantillas 1, 2, 4 y 9 BENCE JONES. 

IMPORTANTE: Para evitar cualquier contaminación entre los diferentes reactivos, es imperativo poner cada tapón sobre el vial correspondiente 

después de usarlo. 


Almacenar a temperatura ambiente o refrigerada. Es estable hasta la fecha de caducidad del kit o la que muestra la etiqueta del vial. 

La solución fijadora debe estar exenta de precipitados. 

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5. ANTISUEROS (Ref. N° 4883) 

Preparación 

Los antisueros están listos para su uso. Contienen inmunoglobulinas totales de mamífero anti-humanas. Cada reactivo tiene un color específico para 

evitar errores al utilizarlos. El color es el mismo que el de las etiquetas de los viales. 

Cuando los antisueros presentan una ligera turbidez o precipitados, generalmente basta con poner los viales a temperatura ambiente unos 10 minutos 

antes de su utilización. Si la turbidez persiste, no perturbará la reacción inmunológica. Si hay un precipitado insoluble, se recomienda centrifugar los 

antisueros durante 5 minutos a 3000 r.p.m. 

Uso 

Para la inmunoprecipitación de las proteínas separadas mediante electroforesis. 

NOTA: Los antisueros son específicos de la técnica de inmunofijación realizada con las plantillas 1, 2, 4 y 9 BENCE JONES. 

Los antisueros pueden ser de orígenes animales diferentes. Es por tanto imperativo no mezclar dos viales diferentes de antisueros, incluso si son de 

la misma especificidad, y SIEMPRE hay que cambiar la punta de la pipeta al cambiar de vial. 

IMPORTANTE: Para evitar cualquier contaminación entre los diferentes reactivos, es imperativo poner cada tapón sobre el vial correspondiente 

después de usarlo. 


Los antisueros deben ser conservados en nevera (entre 2 y 8 °C). Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las 

etiquetas de los viales de antisuero. 

NOTA: Durante el transporte, los antisueros pueden permanecer a temperatura ambiente (entre 15 y 30 °C) durante 15 días sin que esto afecte a la 

calidad del test. 

6. APLICADORES 

Uso 

Aplicadores precortados de un solo uso para la aplicación de la muestra. 

Almacenamiento 

Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados. 

7. PAPELES DE FILTRO FINOS 

Uso 

Papeles finos absorbentes precortados, de un solo uso, para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicación de la muestra. 

Conservación 

Les papeles de filtro finos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera. 

8. PAPELES DE FILTRO PEINES 

Uso 

Peines de papel de filtro grueso precortados, de un solo uso, para eliminar el exceso de sol. Fijadora y antisueros del gel, después de haber realizado 

la inmunofijación. 

9. PAPELES DE FILTRO GRUESOS 

Uso 

Papeles de filtro gruesos, de un solo uso, para la eliminación de proteínas no precipitadas del gel, después de haber realizado la inmunofijación. 

Conservación 

Los papeles de filtro gruesos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera. 

REACTIVOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. CAJA DE ANTISUEROS Y SOLUCIÓN FIJADORA GAM, K, L (para los kits 4821, 4822 y 4824) 

La caja de Antisueros y Solución Fijadora GAM, K, L para inmunofijación, Plantilla estándar (SEBIA, referencia N° 4835) contiene tres viales de 

antisueros (anti-cadenas pesadas gamma, alfa y mu, anti-cadenas ligeras kappa, libres y ligadas, y anti-cadenas ligeras lambda, libres y ligadas) de 

1 ml cada uno, y un vial de solución fijadora de 2.5 ml, específicos de la técnica de inmunofijación realizada con las plantillas 1, 2, 4 y 9 BENCE 

JONES, SEBIA. 

1.1 ANTISUEROS 

Ver el párrafo 5. 

1.2 SOLUCIÓN FIJADORA 

Ver el párrafo 4. 

2. CAJA DE ANTISUEROS ANTI-CADENAS LIGERAS LIBRES (para los kits 4821, 4822 y 4824) 

La caja de Antisueros cadenas ligeras libres K y L para inmunofijación, Plantilla estándar (SEBIA, referencia N° 4836), contiene dos viales de 

antisueros de 1 ml cada uno, específicos de la técnica de inmunofijación realizada con las plantillas 1, 2, 4 y 9 BENCE JONES, SEBIA. 

Preparación, Utilización, Conservación, estabilidad y señales de deterioro: Ver el párrafo 5. 

3. SOLUCIÓN DECOLORANTE 

Preparación 

Cada vial de Solución Decolorante stock (SEBIA, PN 4540, 10 viales de 100 ml) se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada. Es 

conveniente diluir sólo 5 ml de la solución stock hasta 5 litros, volumen del contenedor de la solución decolorante. Después de la dilución, la solución 

decolorante de trabajo contiene: ácido cítrico, 0.5 g/l. 

Uso 

Para decolorar, ésto es, la eliminación del exceso de tinción y la coloración de fondo de los geles. 

Para el lavado del compartimento de coloración. 

Para neutralizar la acidez del decolorante, introduzca dentro del contenedor de desechos vacío 15 ml de sosa al 50 % (solución comercial). 

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Almacenar la solución decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada. La solución stock de decolorante es estable hasta la fecha de 

caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. NO CONGELAR. La solución decolorante de trabajo es estable una semana a 

temperatura ambiente en un contenedor cerrado. No añadir azida sódica. 

Desechar la solución decolorante de trabajo si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

Para evitar la proliferación microbiana en la solución decolorante diluida que se vaya a almacenar durante más de una semana, añada 5 µL/dL de 

ProClin 300. 

El decolorante diluido al que se ha añadido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de 

caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante. 

4. SOLUCIÓN DE LAVADO HYDRASYS 

Preparación 

Cada vial de la Solución de Lavado stock HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 viales, 80 ml cada uno) se diluye hasta 5 litros con agua destilada o 

desionizada. Después de la dilución, la solución de trabajo de lavado contiene: tampón alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; azida sódica. 

ATENCIÓN: La solución stock de lavado contiene azida sódica 0.625 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, consultar 

inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su tendencia a formar 

compuestos explosivos con la azida sódica. Lavar siempre con gran cantidad de agua. 

Uso 

La solución de lavado HYDRASYS está diseñada para lavar las proteínas no precipitadas de los geles. Sirve para limpiar el Compartimento de Tinción 

del HYDRASYS. Usar periódicamente, p. ej., si el instrumento se usa a diario, lavar el compartimento de tinción semanalmente. 

Ver la hoja de instrucciones para las indicaciones de uso. 


Almacenar ambas soluciones de lavado, stock y de trabajo, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados. La solución stock de 

lavado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial. 

Desechar la solución de trabajo de lavado si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

5. SALINA 

Preparación 

Preparar una solución de NaCl 0.15 M (9 g/l) en agua destilada o desionizada. 

Uso 

Para diluir las muestras si es necesario. 


Almacenar a temperatura ambiente o refrigerada. Desechar después de 3 meses o si cambia de apariencia, por ejemplo, se vuelve turbia debido a 

contaminación microbiana. Para períodos de almacenaje más prolongados, añadir azida sódica, 1 g/l. 

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Micropipeteador, manual o automatico, como el HYDRAplus SEBIA, PN 1215, para cargar los aplicadores de muestra de una forma alternativa. 

3. Cámara húmeda, PN 1270, suministrada con HYDRASYS. 

4. Kit de Contenedores suministrado con HYDRASYS. 

5. Barra de Guia de la Plantilla SEBIA, suministrada con HYDRASYS. 

6. Kit de Accesorios HYDRASYS IF, SEBIA, PN 1260. 

7. Kit de Accesorios HYDRASYS 9 BENCE JONES, SEBIA, PN 1266. 

8. Kit de Accesorios HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES, SEBIA, PN 1267. 

9. Pipetas: 10 µl y 200 µl. 

MUESTRAS PARA ANALISIS 

Extracción y almacenamiento de las muestras. 

• El análisis se realiza generalmente con orina fresca. 

Si es necesario, almacenar las muestras de orina a 2 - 8 °C hasta 1 semana. Para períodos de almacenamiento superiores, mantener las muestras 

de orina congeladas. Congelar con HEPES 0.1 M (pH 6.75) y azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. Las muestras de orina 

congeladas son estables durante 1 mes por lo menos. Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicación debidas a la 

desnaturalización de proteínas 

IMPORTANTE: Evitar usar ácido bórico como conservante. 

• Si se analiza sueros, deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos usados en el análisis de laboratorio clínico. Si es necesario, 

conservar el suero entre 2 y 8 °C hasta 1 semana. Para períodos de conservación más largos, congelar las muestras. Los sueros congelados son 

estables durante un mes por lo menos. Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicación debidas a la desnaturalización 

de proteínas o lipoproteínas. 

Preparación de las muestras 

Orinas 

El análisis se realiza en orinas no concentradas. Bajo estas condiciones, el nivel de detección de la proteína de Bence Jones es de 50 mg/l. Para una 

mayor sensibilidad, concentrar las muestras lo que sea necesario. 

NOTA : En caso de orinas turbias (concentradas o no), se recomienda eliminar las partículas, centrifugando las muestras (durante 10 minutos a 

3000 rpm) o por filtración (en un filtro de 0,45 µm) para obtener una buena difusión en los aplicadores. 

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Sueros 

Para investigar la presencia de las proteínas de Bence Jones en la orina y el suero simultáneamente, diluya el suero con salina o con diluyente para 

inmunofijación prediluido a 1/4 (1 volumen de diluyente + 3 volúmenes de agua destilada o desmineralizada) a 1/10 para los carriles ELP, GAM, K y 

L (1 volumen de suero + 9 volúmenes de diluyente prediluido o de salina) y a 1/3 (1 volumen de suero + 2 volúmenes de diluyente prediluido o de 

salina) para los carriles Kl y Ll. 

NOTA : Si la concentración total de inmunoglobulinas es inferior a 5 g/l, se recomienda diluir menos la muestra de suero con salina o con diluyente 

de inmunofijación prediluido a 1/4 (1 volumen de diluyente + 3 volúmenes de agua destilada o desionizada). 

Por ejemplo, diluya el suero a 1/5 para los carriles ELP, GAM, K y L (1 volumen de suero + 4 volúmenes de diluyente prediluido o de salina) y a 1/2 

(1 volumen de suero + 1 volumen de diluyente prediluido o de salina) para los carriles Kl y Ll. 

Para análisis de Ig D y/o de Ig E, aplicar las mismas diluciones que para las cadenas ligeras libres y ligadas. 

IMPORTANTE 

• Evitar las muestras de plasma. El fibrinógeno da lugar a una banda cerca del punto de aplicación que puede ser confundida con una 

inmunoglobulina monoclonal. 

• Algunas orinas contienen una concentración de sales elevada. Esto puede causar la deformación del gel durante la migración y, consecuentemente, 

distorsión de los perfiles de migración. Si tal distorsión hace la interpretación imprecisa, la orina debería ser dializada para eliminar las sales. 

• Las orinas que presenten proteolisis pueden dar lugar a reacciones positivas con el antisuero anti-cadenas ligeras libres. En tal caso, una 

paraproteína sérica eliminada en la orina puede mostrar una banda monoclonal con el antisuero trivalente y con uno de los antisueros anti-cadenas 

ligeras libres y unidas, y con el correspondiente antisuero anti cadenas ligeras libres. 

• La polimerización de las proteínas de Bence Jones generalmente disminuye la sensibilidad de detección con el antisuero anti-cadenas ligeras libres 

ya que la polimerización puede bloquear los epÌtopos que normalmente reaccionan con el antisuero anti-cadenas ligeras libres. Cuando no se ha 

detectado nada y se sospecha la presencia de proteÌnas de Bence Jones, despolimerizar antes de la electroforesis: mezclar 100 µl de orina con 

5 µl ß-mercaptoetanol diluido 1:10 con salino y aplicar. 

PROCEDIMIENTO 

El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautomático multiparamétrico. Las etapas automáticas incluyen el procesado de los geles de agarosa 

HYDRAGEL en la siguiente secuencia: aplicación de la muestra, migración electroforética, incubación con solución fijadora y antisueros, secado, 

tinción, destinción y secado final. Las etapas manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles, aplicación de la solución fijadora y antisueros, 

y la puesta en marcha del instrumento para la operación. 

LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS 

I. PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACIÓN 

1. Encender el HYDRASYS. 

2. Coloque un aplicador para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES ó HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 muestras), dos aplicadores para el 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 muestras) ó 3 aplicadores para el HYDRAGEL 9 BENCE JONES, en una superficie plana, con los 

números de los pocillos hacia arriba (Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de la muestra en cada pocillo. Cargar cada aplicador en el plazo de 2 minutos. 

| PISTA MIGRACIÓN / IMMUNOFIJACIÓN | 

POCILLOS DE APLICACIÓN ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 MUESTRA N° 1 Ó 3 2 3 4 5 6 7 MUESTRA N° 2 Ó 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES MUESTRA N° 1, 4 Ó 7 1 2 3 4 5 6 MUESTRA N° 2, 5 Ó 8 7 8 9 10 11 12 

| MUESTRA N° 3, 6 Ó 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANTE: En el análisis hecho con HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, no utilice los pocillos 1, 8 y 15 ; se recomienda identificarlos 

previamente con un rotulador para evitar aplicar muestra en ellos por error. 

- Colocar el(los) aplicador(es) en la cámara húmeda, con el peine hacia arriba (asirlos por el plástico protector del peine). 

Ver la hoja de instrucciones de la cámara húmeda para más detalles. 

- Dejar difundir las muestras durante 5 minutos después de la última aplicación. 

3. Abrir la puerta del Módulo de migración y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador. 

ATENCIÓN: ¡Nunca cerrar la puerta cuando los soportes están elevados! 

4. Seleccione en el menú el programa de migración "1 BJ ME/MD" para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES, " 2/4 BJ-UP ME/MD " para el 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ó "9 BJ ME" para el HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

5. Extraer las esponjas tamponadas de su envoltorio ; asirlas por los extremos de plástico. Engarzar los extremos de plástico agujereados con 

las puntas metálicas del soporte de los electrodos ; los extremos de plástico deben quedar encarados al soporte (Fig. 2). 

6. Abrir el contenedor del HYDRAGEL. 

- Extienda un papel de filtro fino de manera rápida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de líquido. Retire el papel 

inmediatamente. 

ADVERTENCIA: No deje que el papel de filtro contacte demasiado rato con el gel para evitar que se deshidrate. 

- Dispense 120 µl de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES ó 200 µl para el HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 

y HYDRAGEL 9 BENCE JONES, en el tercio inferior del cuadro serigrafiado en la placa del módulo de migración. 

- Colocar el gel (la cara de agarosa hacia arriba) con su lado inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado (Fig. 3). 

- Aplicar el gel en la superficie, haciéndolo contactar con el agua (Fig. 3). Asegurarse que no queden burbujas, que el agua esté extendida 

bajo toda la superficie del gel y que éste esté alineado con el marco serigrafiado. 

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7. Devolver ambos soportes a su posición original. En esta posición, las esponjas tamponadas no tocan el gel. NO FORZAR LOS SOPORTES 

HACIA ABAJO. 

8. Extraer el(los) aplicador(es) de la cámara húmeda. Asirlo(s) por el plástico protector. 

- Romper el plástico protector precortado del peine. 

- Ponga el/los aplicador/es en el soporte de los aplicadores: 

- HYDRAGEL 1 BENCE JONES ó HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 muestras): posición N° 6, 

- HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 muestras): posiciones N° 3 y 9, 

- HYDRAGEL 9 BENCE JONES: posiciones N° 2, 6 y 10. 

- Para una perfecta reproducibilidad de la aplicación de muestra, bloquee los aplicadores en el lado izquierdo del soporte. 

IMPORTANTE: Los números impresos en el(los) aplicador(es) deben quedar de cara al usuario (Fig. 4). 

9. Asegurarse de devolver los soportes a su posición original. Cerrar la puerta del módulo de migración. 

10. Iniciar el procedimiento inmediatamente presionando la tecla «START» (flecha verde)en el lado izquierdo del teclado. 

IMPORTANTE: Asegurarse que la toma de aire en el lado derecho del instrumento no está bloqueada. 

MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Los dos soportes descienden, con lo cual esponjas tamponadas y aplicador(es) entran en contacto con la superficie del gel. 

• El soporte del aplicador se eleva. 

• Migración a 10 W constantes para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES y a 20 W constantes para el HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, hasta que se 

hayan acumulado 42 Vh (durante unos 9 minutos) y a 20 W constantes hasta que se hayan acumulado 31 Vh (durante unos 7 minutos) para el 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, a 20 °C, siendo la temperatura controlada por efecto Peltier. 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos. 

• Un pitido audible se produce al finalizar la migración. En pantalla aparece el siguiente mensaje: « AS». 

NOTA: El módulo de migración permanece con la puerta cerrada durante todas las etapas de la migración. 

II. PUESTA EN MARCHA DE LA INMUNOFIJACION 

1. Abrir la tapa del módulo de migración. 

2. Extraer los aplicador(es) y desechar. 

3. Elevar ambos soportes, extraer las esponjas tamponadas por sus extremos de plástico y desechar. 

- Extraer ambos soportes. 

- Limpiar los electrodos son un pañuelo de papel húmedo. 

- Mantener el gel en su posición dentro de la cámara de migración. 

4. Colocar la plantilla de aplicación de antisueros como sigue (Fig. 5): 

- Posicionar la guía de la plantilla de aplicación en los dos pernos de anclaje inferiores (la guía puede permanecer en el módulo de migración 

todo el tiempo). 

- Sostener la plantilla por la solapa superior e insertarla en la guía (situando el gancho derecho en la muesca). 

- Hacer descender la plantilla hasta que se ponga en contacto con el gel. 

- Ajuste la posición de la plantilla para un alineamiento perfecto entre los perfiles electroforéticos y los pocillos de la plantilla (consulte el kit 

de accesorios para HYDRASYS 9 BENCE JONES SEBIA, PN 1266, para las instrucciones). 

5. Aplicar los antisueros del modo siguiente: 

VOLUME (µl) CANAL plantilla plantilla REACTIVO COLOR 1, 2 y 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 solución fijadora amarillo GAM 25 15 antisuero trivalente violeta K 25 15 antisuero anti-cadenas ligeras kappa(libres o no) verde L 25 15 antisuero anti-cadenas ligeras lambda (libres o no) azul Kl 25 15 antisuero anti-cadenas ligeras kappa libres naranja 

| Ll | 25 | 15 | antisuero anti-cadenas ligeras lambda libres | rojo | 

NOTA: Para evitar mezclar antisueros, sus colores respectivos aparecen en las etiquetas de los viales y en los canales de la plantilla de 

aplicación correspondientes. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : Se recomienda aplicar los antisueros en el orden siguiente: lambda libres, kappa libres, lambda, kappa y 

GAM, por último, la solución fijadora. 

- Pipetear los antisueros evitando la formación de burbujas de aire en la punta de la pipeta. 

- Aplicar los antisueros (Fig. 6) : 

- Mantener la pipeta en posición perpendicular a la plantilla (vertical), apoyando la punta suavemente en el centro del pocillo. 

- Inyectar el antisuero de forma que se extienda a través del canal, sin que se formen burbujas en el mismo. 

6. Cerrar la tapa del módulo de migración. 

7. Iniciar el procedimiento inmediatamente, presionando la tecla «START», situada a la izquierda del teclado. En pantalla aparece el mensaje 

«[INCUBACIÓN]». 

INMUNOFIJACION - DESCRIPCION DE LAS ETAPAS AUTOMATICAS 

• Incubación a 20 °C durante 10 minutos (termostatización mediante efecto Peltier). 

• Una señal audible indica que la tapa del módulo de migración se desbloquea. El siguiente mensaje que aparece en pantalla es «❊ AS (ME)». 

NOTA: La tapa del módulo de migración debe permanecer cerrada durante la incubación. 

III. ELIMINACION DEL EXCESO DE REACTIVOS 


2. Elimine los reactivos usando los peines de papel de filtro (Fig. 7): Un peine para las plantillas 1 BENCE JONES y 2 BENCE JONES, dos 

peines para la plantilla 4 BENCE JONES y 3 peines para la plantilla 9 BENCE JONES. 

- Insertar el(los) peine(s) formando un ángulo de 30° en los huecos situados en el límite inferior de los canales de la plantilla, de forma que 

los extremos del peine toquen la cara vertical más alejada del operador. 

- Permitir que el(los) peine(s) toque(n) delicadamente el líquido inclinándolo(s) un ángulo de 45°, permitiendo la absorción del mismo (Fig. 8). 

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IMPORTANTE: Los extremos del peine (sus «dientes») no deben tocar el gel. Cada peine debe permanecer inclinado (45°). Si se coloca 

derecho puede llegar a dañar el gel. 

3. Iniciar el procedimiento presionando la tecla «START» (flecha verde situada a la izquierda en el teclado). 

ELIMINACION DE REACTIVOS - DESCRIPCION DE LAS ETAPAS AUTOMATICAS 

• Los antisueros difunden durante 15 segundos a 20 °C (Temperatura controlada mediante efecto Peltier). 

• En este momento, suena una alarma audible. El siguiente mensaje que aparece en pantalla es: « PAP.». 

IV. BLOTTING (ABSORCION) 

1. Sacar el(los) peine(s). 

2. Comprobar visualmente que los antisueros se han eliminado de forma correcta, lo cual podremos saber por: 

- ausencia de antisueros en la superficie del gel. 

- los extremos del peine se hallan coloreados en su totalidad. 

Si la absorción es incompleta, introducir de nuevo el mismo peine (y en la misma posición), repitiendo de forma manual el procedimiento de 

eliminación. 

3. Asir la plantilla de aplicación de reactivos por la solapa, elevarla y sacarla. 

4. Aplicar un papel de filtro grueso sobre el gel: 

- inclinar el papel de filtro 45° o y alinear sus bordes con los del gel. 

- colocarlo encima del gel suavemente. 

ATENCIÓN : Asegurarse de apoyar correctamente toda la superficie de la hoja de papel de filtro, para conseguir un perfecto contacto 

entre el gel y el papel. 

5. Cerrar la tapa del módulo de migración. 


7. Limpiar la plantilla de aplicación con un cepillo pequeño (por ej. de dientes). NO UTILIZAR ALCOHOL O DISOLVENTES. Verificar que la 

plantilla se encuentra perfectamente seca antes de ser reutilizada ; eliminar las pequeñas gotas de agua de los pocillos dando golpeándola 

con cuidado sobre un papel suave. 

BLOTTING - DESCRIPCION DE LAS ETAPAS AUTOMATICAS 

• Blotting a 40 °C controlado mediante efecto Peltier, durante 3 minutos. 

• Suena una señal audible. El siguiente mensaje que aparece en pantalla es: «❊ PAP.». 

NOTA : La tapa del módulo de migración permanece cerrada durante el blotting. 

V. SECADO DEL GEL 


2. Extraer el papel de filtro, dejando el gel en su posición actual. 

3. Cerrar la tapa. 


SECADO - DESCRIPCION DE LAS ETAPAS AUTOMATICAS 

• Secado a 50 °C controlado mediante efecto Peltier, durante 6 minutos. 

• Un pitido nos indica que la tapa se desbloquea. El gel permanecerá a 50 °C mientras la tapa permanezca cerrada. 

NOTA: El módulo de migración permanece cerrado mientras se produce el proceso de secado. 

VI. PUESTA EN MARCHA DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Abrir la tapa. 

2. Extraer el gel secado para su procesado posterior. 

3. Abrir el soporte del gel. Colocarlo en una superficie plana y posicionar el gel secado (con la parte de agarosa hacia arriba) en los orificios de 

las dos varillas y cerrar el soporte. Comprobar que el gel está colocado adecuadamente dentro del soporte (Fig. 9). 

4. Colocar el soporte del gel en el Módulo de Procesado / Tinción. 

IMPORTANTE: Antes de comenzar con el programa de procesado / tinción, comprobar lo siguiente: 

- el contenedor de solución de lavado contiene por lo menos 400 ml de solución de lavado ; 

- el contenedor de colorante se ha llenado con 300 ml de solución de tinción ; 

- el contenedor de decolorante contiene por lo menos 1 litro de solución decolorante ; 

- el contenedor de deshechos está vacío. 

Para la conexión de los reactivos: Consultar la información que aparece en la pantalla del instrumento (seleccionar la tecla : VER CANALES) 

IMPORTANTE: No olvidar bloquear los canales no utilizados 

5. Seleccionar el programa de tinción «IF ACID VIOLET» en el menú del instrumento e iniciar el proceso apretando la tecla «START» (flecha 

verde situada a la derecha en el teclado). 

Durante todas las secuencias de coloración, decoloración y secado, el sistema permanece bloqueado. 

Después del enfriamiento de la cubeta, una señal sonora (bip) suena y el sistema se desbloquea (la ventilación se mantiene hasta la 

recuperación del porta-films). 

NOTAS: 

- La temperatura de la placa de migración va descendiendo desde que se ha abierto la tapa hasta que alcanza 20 °C (en menos de 5 minutos). En 

este momento podremos iniciar una nueva migración. 

- Volver a colocar el portaaplicadores en su ubicación original. 

- Limpiar la placa de control de temperatura con un pañuelo de papel suave ligeramente humedecido. 

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VII. FINALIZACION DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Retirar el soporte del gel del compartimento, abrirlo y extraer el gel ya seco. 

2. Si procede, limpiar el reverso del gel (soporte plástico) con un papel suave y húmedo. 

NOTA: En los geles con varias filas de muestras (2 ó 3), las longitudes de migración pueden ser ligeramente diferentes, sin ninguna repercusión 

en los resultados. 

RESULTADOS 

Interpretación 

La presencia de la proteína de Bence Jones en la orinase caracteriza por: 

- una banda monoclonal detectada con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras kappa o lambda libres o unidas (pistas K o L ), 

- una banda monoclonal detectada con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras kappa o lambda libres (pistas Kl o Ll), 

- ausencia de reacción con el antisuero trivalente (pista GAM). 

La paraproteína sérica eliminada en la orina sin la proteína de Bence Jones se caracteriza por: 

- una banda monoclonal detectada con el antisuero trivalente, 

- la misma banda detectada con uno delos antisueros anti-cadenas ligeras libres y unidas y 

- ausencia de reacción con el antisuero anti-cadenas ligeras libres correspondiente. 

La paraproteína sérica eliminada en la orina asociada con la proteína de Bence Jones se caracteriza por : 

- una banda monoclonal detectada con el antisuero trivalente, 

- dos bandas detectadas con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras libres o unidas (u ocasionalmente una banda detectada con uno de 

los antisueros anti-cadenas ligeras libres y unidas y una banda detectada con el otro antisuero anti-cadenas ligeras libres y unidas), 

- una banda revelada con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras libres. Esta banda generalmente no migra al mismo nivel que la 

detectada con el antisuero trivalente. 

La proteína de Bence Jones en diferentes formas de polimerización se caracteriza por: 

- falta de reacción con el antisuero trivalente, 

- varias bandas reveladas con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras libres y unidas, 

- las mismas bandas detectadas con los correspondientes antisueros anti-cadenas ligeras libres. 

Interferencias y limitaciones 

La utilización de antisueros distintos a los especificados para la técnica de inmunofijación realizada con la plantilla estándar puede afectar a la calidad 

de los resultados. 

Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no puede darse 

ninguna garantía respecto a la detección de la totalidad de todos los componente monoclonales. 

Resolución de problemas 

Avisar al Servicio de Atención Técnica del distribuidor cuando el test no funcione, pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la 

preparación y almacenaje de los materiales y para el procedimiento a seguir. 

Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como las informaciones relativas a la eliminación de los desechos, están disponibles 

en el Servicio de Asistencia Técnica de su distribuidor. 

CARACTERISTICAS TECNICAS 


Reproducibilidad 

Entre geles 

Cuatro muestras de orina que contenían cadena ligera Bence Jones no polimerizada, ya fuese kappa o lambda fueron analizadas en 10 geles del 

mismo lote usando el procedimiento habitual y el kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES. 

Entre lotes 

Se usaron dos muestras de orina que contenían cadena ligera Bence Jones no polimerizada, ya fuese kappa o lambda. Cada muestra se aplicó en 

todas las pistas (24) de dos geles HYDRAGEL BENCE JONES 2/4. Un gel de los dos fue sometido a inmunofijación con el antisuero anti-cadenas 

ligeras libres y unidas apropiado y el otro gel con el antisuero anti-cadenas ligeras libres. Para cada muestra se usaron de este modo geles 

procedentes de tres lotes diferentes. 

Resultados: Las proteínas de Bence Jones fueron identificadas correctamente en cada muestra y en todos los geles, no hubieron falsos positivos y 

no se observaron diferencias entre las réplicas. 

Exactitud - Detección e Identificación de las Proteínas de Bence Jones 

Se analizaron treinta y seis orinas y diez muestras de suero, patológicas y normales, usando el kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES y otro sistema 

comercial de inmunofijación. Los resultados de los dos procedimientos de inmunofijación estaban en perfecta concordancia entre ellos y con los 

resultados y diagnóstico proporcionados por un hospital. 

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Reproductibilidad intra-ensayo 

Tres muestras patológicas: dos orinas presentando respectivamente una cadena ligera libre Kappa débil y una cadena ligera libre Lambda fuerte, y 

un suero con una paraproteína de cadena ligera Lambda y una cadena ligera libre Lambda, fueron analizadas repetidamente en tres geles 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES de dos lotes diferentes. 

Cada muestra analizada dio los mismos resultados en los dos lotes de geles comprobados. Los perfiles obtenidos son típicos de cada muestra 

analizada y la inmunofijación evidencia las bandas monoclonales esperadas. 

Reproductibilidad inter-ensayo 

Ocho muestras patológicas (cinco orinas y tres sueros con proteínas de Bence Jones) y una muestra de orina sin proteína de Bence Jones fueron 

analizadas repetidamente en 10 geles HYDRAGEL 9 BENCE JONES de tres lotes diferentes, a razón de nueve muestras diferentes por gel. 

Cada muestra analizada dio los mismos resultados en los tres lotes de geles comprobados. Los perfiles obtenidos son típicos de cada muestra y la 

inmunofijación evidencia las bandas monoclonales esperadas. Además, la inmunofijación de la muestra de orina sin proteína de Bence Jones no 

reveló ninguna banda monoclonal en ninguno de los diez geles testados. 

Exactitud 

Veintinueve muestras de orina y sueros patológicos (21 orinas y 8 sueros), con una o más cadenas ligeras libres Kappa ó Lambda, y siete muestras 

(6 orinas y 1 suero) sin proteína de Bence Jones, fueron analizadas en paralelo en el gel HYDRAGEL 9 BENCE JONES y en otro gel de agarosa 

disponible comercialmente. Los resultados obtenidos mostraron una perfecta correlación entre los dos sistemas. Las mismas bandas monoclonales 

fueron evidenciadas en todos los sueros patológicos en los dos tipos de geles y las siete muestras sin paraproteína de Bence Jones no presentaron 

ninguna banda en los dos sistemas de análisis. 

BIBLIOGRAFIA 



1994, 397 pp. 

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UTILIZAÇÃO 

Os kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES e HYDRAGEL 9 BENCE JONES destinam-se 

à detecção qualitativa e identificação das proteínas Bence Jones, ou cadeias leves livres monoclonais (kapa ou lambda) na urina ou soro humanos 

por imunofixação, no aparelho semi-automático HYDRASYS. O sistema HYDRASYS permite permite realizar todas as sequências, até à obtenção 

do gel para interpretação. As proteínas do soro são separadas por electroforese em tampão alcalino (pH 9,1) e depois imunoprecipitadas com 

antisoros de especificidades diferentes: antisoro trivalente: anti-cadeias pesadas gama (Ig G), alfa (Ig A) e mu (Ig M), anti-cadeias leves kapa e lambda 

(livres e ligadas), anti-cadeias leves livres kapa e anti-cadeias leves livres lambda. 

Após imunofixação, as proteínas precipitadas são coradas com violeta ácido. O excesso de corante é eliminado em meio ácido. 

Cada gel de agarose poderá analisar: 

- 1 amostra no kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- 2 amostras no kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- 4 amostras no kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- 9 amostras no kit HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Para diagnóstico in vitro. Registado no INFARMED. 

PRINCÍPIO DO TESTE 

As imunoglobulinas monoclonais, marcadores das gamapatias, são detectadas através da electroforese das proteínas. Elas apresentam-se sob a 

forma de bandas anormais situadas essencialmente nas zonas das beta ou gama globulinas. A imunofixação efectuada com a ajuda de anticorpos 

permite a identificação das bandas monoclonais despistadas por electroforese. 

A técnica é feita em quatro etapas: 

1. Separação das proteínas por electroforese em gel de agarose. 

2. Fixação e imunoprecipitação das proteínas despistadas por electroforese: aplicação do fixador e dos antisoros directamente sobre o gel, ao nível 

das pistas de migração. Estes últimos difundem-se no gel. O fixador precipita todas as proteínas e os anticorpos precipitam os antigénios 

correspondentes. 

3. As proteínas solúveis, não precipitadas, são removidas do gel por lavagem e absorção com papel de filtro. As proteínas precipitadas ficam retidas 

no interior da matriz do gel. 

4. Coloração das proteínas e comparação da posição das bandas imunoprecipitadas com as bandas anómalas observadas no perfil electroforético 

da amostra de soro. 

Para identificar de forma precisa a natureza das bandas monoclonais, as amostras são testadas simultaneamente em seis pistas. Depois da 

electroforese, a pista ELP serve como referência, mostrando o perfil electroforético das proteínas da amostra. As restantes cinco pistas permitem a 

caracterização da(s) bandas(s) monoclonal(is) graças a um antisoro trivalente anti-cadeias pesadas (gama, alfa e mu), e antisoros anti-cadeias leves 

kapa e lambda (livres e ligadas) e antisoros anti-cadeias leves livres kapa e lambda. 

Esta técnica simples e rápida proporciona uma imagem clara e fácil de interpretar. 

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS NO KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES E HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES REF. N° 4821 HYDRAGEL 2 BENCE JONES REF. N° 4822 HYDRAGEL 4 BENCE JONES REF. N° 4824 HYDRAGEL 9 BENCE JONES REF. N° 4883* Geles de agarose (prontos a usar) 10 geles 10 geles 80 geles Tiras de tampão (prontas a usar) 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 80 pacotes de 2 Corante violeta ácido (solução concentrada) 1 frasco, 75 ml 1 frasco, 75 ml 8 frascos, 75 ml Fixador (pronto a usar) 1 frasco, 14,4 ml Imunoglobulinas totais de mamífero anti-cadeias pesadas gama, 1 frasco, 10,8 ml alfa e mu (trivalente) (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 10,8 ml anti-cadeias leves kapa (livres e ligadas) (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 10,8 ml anti-cadeias leves lambda (livres e ligadas) (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 10,8 ml anti-cadeias leves livres, kapa (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 10,8 ml anti-cadeias leves livres, lambda (pronto a usar) Aplicadores (prontos a usar) 1 caixa de 10 2 caixas de 10 24 caixas de 10 Papéis de filtro finos 1 pacote de 10 1 pacote de 10 8 pacotes de 10 Pentes de papel de filtro 1 pacote de 10 2 pacotes de 10 24 pacotes de 10 

| Papéis de filtro espessos | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 8 pacotes de 10 | 

* HYDRAGEL 9 BENCE JONES MAXI-KIT 

NOTA: O Fixador e os Antisoros são fornecidos separadamente, excepto para o MAXI-KIT (ver REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO 

FORNECIDOS). 

PARA OPTIMIZAÇÃO DOS RESULTADOS 

Os elementos de um mesmo kit devem ser utilizados em conjunto, e de acordo com as instruções de utilização. 

LER ATENTAMENTE AS INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO. 

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INSTRUÇÕES DE USO SEBIA - Português


1. GELES DE AGAROSE 

Preparação 

Os geles de agarose estão prontos a usar. Cada gel contém: agarose, 8 g/l ; tampão tris-barbital pH 9,1 ± 0,1 ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Os geles de agarose contêm 0,31 % de barbital e 0,34 % de barbital sódico. Não ingerir! Se ingerido, consultar imediatamente um 

médico! 

Utilização 

Suporte para a electroforese e imunofixação das proteínas. 

Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração 

Armazenar os geles horizontalmente, nas embalagens protectoras de origem, à temperatura ambiente (15 - 30 °C) ou no frigorífico (2 - 8 °C) (a seta 

existente na parte da frente da caixa do kit deve ficar voltada para cima). Os geles são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos das embalagens dos geles. Evitar variações da temperatura durante o armazenamento (ex: não armazenar perto de uma janela ou de 

uma fonte de calor). 

NÃO CONGELAR! 

Deitar fora o gel quando: 

(i) houver cristais ou precipitados na superfície do gel ou quando a textura do mesmo for muito macia (isto sucede se o gel for congelado) ; 

(ii) há desenvolvimento de bactérias ou fungos ; 

(iii) estiver presente uma quantidade anormal de líquido na embalagem do gel (resultante da exsudação do gel devido a condições de 

armazenamento inadequadas). 

2. TIRAS DE TAMPÃO 

Preparação 

As tiras de esponja de tampão estão prontas a usar. Cada uma contém: tampão tris-barbital pH 9,1 ± 0,3 ; azida de sódio ; aditivos, não perigosos 

nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: As tiras contêm 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sódico e 0,3 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar 

imediatamente um médico! Quando deitar fora as tiras evitar o seu contacto com ácidos, chumbo ou cobre, já que estes elementos formam 

compostos explosivos ou tóxicos com a azida de sódio. 

Utilização 

As tiras de tampão funcionam como reservatório de tampão da electroforese e asseguram o contacto entre o gel e os eléctrodos. 


As tiras de tampão podem ser conservadas à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). 

As tiras de tampão devem ser conservadas horizontalmente dentro da embalagem protectora (a seta na parte da frente da caixa deve permanecer 

apontada para cima). 

As tiras são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou na embalagem protectora das tiras. NÃO CONGELAR. 

3. CORANTE VIOLETA ÁCIDO 

Preparação 

O frasco de corante concentrado deve ser diluído até 300 ml com água destilada ou desmineralizada. Após diluição, a solução de corante contém: 

solução ácida, pH ≈ 2 ; violeta ácido 2 g/l ; etiilenoglicol, 3,25 % ; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar o 

ensaio. 

AVISO: Nocivo em caso de ingestão! 

Utilização 

Para corar os geles após a separação electroforética e imunofixação das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar o corante concentrado e a solução diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico, em recipientes fechados para evitar a evaporação. 

As soluções de corante são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos do frasco. A solução de corante diluída é estável 

durante 6 meses. 

4. FIXADOR (com ref. n° 4883) 

Preparação 

O fixador vem pronto a usar. Contém: solução ácida ; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

O fixador tem uma cor específica, de modo a evitar erros durante a utilização. A cor é a mesma da etiqueta do frasco e da pista da máscara de 

aplicação dos reagentes. 

Utilização 

Para fixar as proteínas separadas por electroforese na pista de referência (ELP). 

A solução fixadora é especifica para a técnica de imunofixação com as máscaras de 1, 2, 4 e 9 BENCE JONES. 

IMPORTANTE: Para evitar qualquer contaminação entre os diferentes reagentes, é imperativo voltar a colocar a tampa do frasco correspondente, 

após utilização. 


Armazenar o fixador à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. 

O fixador deve estar livre de precipitados. 

5. ANTISORO (com ref. nº 4883) 

Preparação 

Prontos a usar. Todos os antisoros são imunoglobulinas totais de mamífero anti-humanas. Cada um tem uma cor específica para evitar erros de 

utilização. Os rótulos dos frascos têm a mesma cor que as soluções e a pista da máscara de aplicação dos reagentes correspondente. 

Se o antisoro apresentar uma certa turvação, deixe o frasco em repouso à temperatura ambiente durante, pelo menos, 10 minutos antes da sua 

utilização. No entanto e caso a turvação persista, a reacção imunológica não será afectada. Em caso de formação de precipitado insolúvel, é 

recomendada a centrifugação do antisoro durante 5 minutos à rotação de 3000 rpm. 

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Utilização 

Para imunoprecipitação das proteínas previamente separadas por electroforese. 

O antisoro é especifico para a técnica de imunofixação com as máscaras de 1, 2, 4 e 9 BENCE JONES. 

O antisoro pode ser originário de variadas espécies animais. Não misture o conteúdo de dois frascos diferentes de antisoros, mesmo que com a 

mesma especificidade. Actualize SEMPRE a etiqueta da pipeta quando mudar de frasco. 

IMPORTANTE: Para evitar qualquer contaminação entre os diferentes reagentes, é imperativo voltar a colocar a tampa do frasco correspondente, 

após utilização. 


Armazenar os antisoros no frigorífico (2 - 8 ºC). São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos de antisoro. 

NOTA: Durante o transporte, os antisoros podem ser mantidos à temperatura ambiente (15 - 30 ºC) durante 15 dias, sem que isso afecte a qualidade 

do teste. 

6. APLICADORES 

Utilização 

Aplicadores pré-cortados, de utilização única, para aplicação das amostras. 

Armazenamento 

Armazenar os aplicadores em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

7. PAPÉIS DE FILTRO FINOS 

Utilização 

Pré-cortados, de utilização única, destinam-se a absorver o excesso de humidade da superfície do gel antes da aplicação da amostra. 

Armanezamento 

Armazenar os papéis de filtro finos em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

8. PENTES DE PAPEL DE FILTRO 

Utilização 

Pré-cortados, de utilização única, estes pentes de papel de filtro destinam-se a absorver o excesso de reagentes da superfície do gel depois da fase 

da imunofixação. 

9. PAPÉIS DE FILTRO ESPESSOS 

Utilização 

De utilização única, destinam-se a absorver as proteínas não precipitadas da superfície do gel após a fase de imunofixação. 

Armanezamento 

Armazenar os papéis de filtro espessos em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. KIT COM ANTISOROS E FIXADOR (para os kits com ref. 4821, 4822 e 4824). 

O Kit de antisoros e fixador GAM, K, L para imunofixação com máscara padrão, (SEBIA, ref. n° 4835) contém três frascos de antisoros (antisoros de 

cadeias pesadas (anti-gama, alfa e mu), e antisoros anti-cadeias leves kapa, livres e ligadas e antisoros anti-cadeias leves lambda, livres e ligadas) 

com 1 ml cada, e um de solução fixadora, com 2,5 ml. São especificos para a realização do procedimento de imunofixação com a Máscara 1, 

2, 4 e 9 BENCE JONES, SEBIA. 

1.1 ANTISOROS 

Ver parágrafo 5 anterior. 

1.2 FIXADOR 

Ver parágrafo 4 anterior. 

2. KIT COM ANTISOROS ANTI-CADEIAS LEVES LIVRES (para os kits com ref. n° 4821, 4822 e 4824) 

O Kit de antisoros anti-cadeias leves livres K e L para imunofixação com máscara padrão (SEBIA ref. n° 4836) contém dois frascos de antisoros, com 

1 ml cada. São específicos para a realização do procedimento de imunofixação com máscara de 1, 2, 4 e 9 BENCE JONES, SEBIA. 

Preparação, Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração: Ver parágrafo 5 anterior. 

3. SOLUÇÃO DESCORANTE 

Preparação 

Cada frasco de solução descorante concentrada (SEBIA, ref. n° 4540, 10 frascos de 100 ml cada) deve ser diluída a 1/1000 com água destilada ou 

desmineralizada e permite obter 100 litros de solução total. É conveniente diluir apenas 5 ml da solução concentrada de cada vez, para o volume 

final de 5 litros (a capacidade do recipiente onde se vai colocar a solução descorante). 

Após diluição, a solução descorante contém: ácido cítrico, 0,5 g/l. 

Utilização 

Na descoloração, isto é, remoção do excesso de corante do gel. 

No enxaguamento da câmara de coloração, após lavagem. 

Para neutralizar a acidez do descorante, colocar no frasco de despejo 15 ml de soda a 50 % (solução disponível comercialmente). 


Armazenar a solução descorante concentrada à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos dos frascos da solução descorante. NÃO CONGELAR. A solução descorante diluída é estável por uma semana à temperatura ambiente, 

quando conservada em recipiente fechado. Não adicionar azida de sódio. Deitar fora a solução diluída se houver alterações no seu aspecto, por 

exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. Em caso de conservação mais prolongada da solução diluída (superior a uma semana), 

adicionar 50 µl/l de ProClin 300 para evitar qualquer proliferação microbiana. 

A solução descorante diluída contendo ProClin é estável à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). É estável até ao 

fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco do descolorante. 

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4. SOLUÇÃO DE LAVAGEM HYDRASYS 

Preparação 

Cada frasco de solução de lavagem concentrada HYDRASYS (SEBIA, ref. n° 4541, 10 frascos de 80 ml cada) deve ser diluído para a obtenção do 

volume final de 5 litros com água destilada ou desmineralizada. Após diluição, a solução de lavagem contém: tampão alcalino pH 8,8 ± 0,3 ; azida de 

sódio. 

AVISO: A solução de lavagem contém 0,625 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! Quando em 

contacto com ácidos, chumbo ou cobre, a azida de sódio pode levar à formação de compostos explosivos ou tóxicos. Quando deitar fora 

lavar abundantemente com grandes quantidades de água. 

Utilização 

Para a lavagem do gel após imunofixação de modo a eliminar as proteínas residuais não precipitadas. 

Para a lavagem da câmara de coloração do HYDRASYS. Utilizar periodicamente. Por exemplo, se o aparelho for utilizado diariamente, fazer a 

lavagem da câmara de coloração uma vez por semana. 

Ver as instruções de utilização incluídas na embalagem. 


Armazenar a solução concentrada e a solução diluída em recipientes fechados à temperatura ambiente ou no frigorífico. A solução concentrada é 

estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco da solução de lavagem. 

Deitar fora a solução de lavagem diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

5. SORO FISIOLÓGICO 

Preparação 

Preparar uma solução a 0,15 M (9 g/l) de NaCl em água destilada ou desmineralizada. 

Utilização 

Para diluir as amostras, se necessário. 


Armazenar à temperatura ambiente ou no frigorífico. Deitar fora após 3 meses ou se notar alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva 

devido a contaminação microbiana. 

Para períodos de armazenamento mais prolongados, adicionar azida de sódio (1 g/l). 

EQUIPAMENTO E ACESSÓRIOS NECESSÁRIOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, ref. n° 1210 ou ref. n° 1211. 

2. HYDRAplus SEBIA, ref. n° 1215, micropipetador, manual ou automático, como alternativa na pipetagem das amostras para os aplicadores 

respectivos. 

3. Câmara húmida fornecida com o sistema HYDRASYS, ref. n° 1270. 

4. Frascos de plástico fornecidos com o HYDRASYS. 

5. Barra metálica para a fixação da máscara SEBIA, fornecida com o sistema HYDRASYS. 

6. Kit de acessórios para o HYDRASYS IF SEBIA, ref. n° 1260. 

7. Kit de acessórios para o HYDRASYS 9 BENCE JONES SEBIA, ref. n° 1266. 

8. Kit de acessórios para o HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES SEBIA, ref. n° 1267. 

9. Pipetas: 10 µl e 200 µl. 

AMOSTRAS 

Colheita e conservação de amostras 

• A análise é geralmente efectuada em amostras de urina frescas. Se necessário, armazenar as urinas entre 2 - 8 °C até uma semana. Para 

conservações prolongadas, congelar as amostras ; as amostras congeladas são estáveis durante pelo menos um mês. O congelamento com 

tampão HEPES 0,1 M (pH 6,75) e azida de sódio, 0,2 g/l aumenta a estabilidade do armazenamento. As amostras descongeladas podem levar ao 

aparecimento de ligeiras bandas no ponto de aplicação, devido à desnaturação das proteínas. 

IMPORTANTE: Evitar o ácido bórico como conservante. 

• Se proceder à análise de soro, este deve ser colhido de acordo com os métodos utilizados nos laboratórios de análises clínicas. Os soros podem 

ser conservados uma semana no frigorífico (2 - 8 °C). Para conservações prolongadas, congelar as amostras. As amostras congeladas são estáveis 

durante pelo menos um mês. As amostras descongeladas podem levar ao aparecimento de ligeiras bandas no ponto de aplicação, devido à 

desnaturação das proteínas ou lipoproteínas. 

Preparação das amostras 

Urinas 

A análise é efectuada em urinas não concentradas. O limite de detecção da proteína Bence Jones é de 10 a 50 mg/l. Para uma maior sensibilidade 

proceder à concentração das amostras conforme necessário (20 a 100 vezes). 

NOTA: No caso de urinas turvas (concentradas ou não), recomenda-se a eliminação das partículas por centrifugação das amostras (durante 

10 minutos a 3000 rpm) ou por filtração (com filtro de 0,45 µm), de modo a obter uma boa difusão nos aplicadores. 

Soro 

Se pretender também analisar o soro correspondente à urina testada quanto a proteínas Bence Jones, é aconselhável diluí-lo com soro fisiológico 

ou com diluente para imunofixação pré-diluído a 1/4 (1 volume de diluente + 3 volumes de água destilada ou desionizada) a 1/10 para as pistas ELP, 

GAM, K e L (1 volume de soro para 9 volumes de diluente pré-diluído ou de soro fisiológico) e a 1/3 para as pistas Kl e Ll (1 volume de soro para 

2 volumes de diluente pré-diluído ou de soro fisiológico). 

NOTA: Se a taxa de imunoglobulinas fôr inferior a 5 g/l, recomenda-se a diluição do soro em soro fisiológico ou diluente para imunofixação, pré-diluído 

a 1/4 (1 volume de diluente + 3 volumes de água destilada ou desionizada). 

Por exemplo, diluir o soro a 1/5 para as pistas ELP, GAM, K e L (1 volume de soro + 4 volumes de diluente pré-diluído ou de soro fisiológico) e a 1/2 

(1 volume de soro + 1 volume de diluente pré-diluído ou de soro fisiológico) para as pistas Kl e Ll. 

Para análise das Ig D e/ou das Ig E, utilizar as mesmas diluições que para as cadeias leves livres e ligadas. 

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IMPORTANTE: 

• Não utilizar amostras de plasma. O fibrinogénio leva ao aparecimento de uma fracção perto do ponto de aplicação que pode ser confundida com 

uma gamapatia monoclonal. 

• Algumas urinas contêm uma elevada concentração de sais. Este facto pode ocasionar uma deformação dos geles durante a migração e, 

consequentemente, distorção dos perfis de migração. Essa distorção torna imprecisa a interpretação ; a urina deverá ser dialisada para eliminação 

dos sais. 

• as urinas degradadas (proteolisadas) podem originar uma reacção positiva com as anti-cadeias leves livres. Uma proteinúria com paraproteína 

sérica que passa para a urina pode originar neste caso uma banda monoclonal com o soro trivalente, uma banda monoclonal com o anti-cadeias 

leves livres e ligadas e uma banda com o anti-cadeais leves livres. 

• o limite de detecção das proteínas Bence Jones com o auxílio dos antisoros anti-cadeias leves livres é afectado pela sua polimerização, que 

mascara os epitopos envolvidos. Quando se suspeita da presença de proteínas Bence Jones, deve-se tratar as amostras do seguinte modo: 

misturar 100 µl de urina e 5 µl de ß-mercaptoetanol previamente diluído a 1/10 em soro fisiológico. 

TÉCNICA 

O sistema HYDRASYS é um aparelho semi-automático multi-paramétrico. Os passos automáticos incluem o processamento dos geles de agarose 

HYDRAGEL segundo as etapas seguintes: aplicação da amostra, migração electroforética, incubação com fixador e antisoro, secagem, lavagem, 

aplicação de corante, remoção de corante e secagem final. Os passos manuais são os seguintes: preparação das amostras e dos geles, aplicação 

dos antisoros e lançamento das sequências automáticas. 

LER ATENTAMENTE O MANUAL DE INSTRUÇÕES DO HYDRASYS. 

I. PREPARAÇÃO DA MIGRAÇÃO 

1. Ligar o aparelho HYDRASYS. 

2. Colocar um aplicador para HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 amostras), 2 aplicadores para o HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 amostras) ou 3 aplicadores para o HYDRAGEL 9 BENCE JONES, numa superfície plana com os números dos poços 

voltados para cima (Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de amostra em cada poço. A pipetagem das amostras em cada aplicador não deve ultrapassar o tempo de dois minutos. 

| PISTA DE IMUNOFIXAÇÃO | 

NÚMERO DO POÇO : ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 AMOSTRA N° 1 OU 3 2 3 4 5 6 7 AMOSTRA N° 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES AMOSTRA N° 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 AMOSTRA N° 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| AMOSTRA N° 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANTE: Na análise com HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, não se utilizam os poços nº 1, 8 e 15 ; pode-se marcar estas pistas com 

uma caneta, de modo a evitar a colocação de amostras por enganos. 

- Colocar o(s) aplicador(es) na câmara húmida com os dentes voltados para cima (segure-o(s) pela protecção de plástico). 

- Deixar as amostras difundirem-se pelos dentes durante cinco minutos após a aplicação da última amostra. 

Ver as instruções de utilização da câmara húmida para mais detalhes. 

3. Abrir a tampa da câmara de migração e levantar os suportes do aplicador e dos eléctrodos. 

AVISO: Nunca fechar a tampa quando os suportes estão levantados! 

4. Seleccionar o programa de migração "1 BJ MP/MD" no menú apresentado pelo aparelho para o HYDRAGEL 1 BENCE JONES, seleccionar 

"2/4 BJ-UP MP/MD" para HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ou "9 BJ MP" para HYDRAGEL 9 BENCE JONES, (lado esquerdo do teclado). 

5. Retirar as tiras de tampão da embalagem ; colocar as tiras de tampão sobre os eléctrodos fixando as extremidades de plástico perfuradas 

aos pinos do suporte dos eléctrodos. A face das tiras de tampão onde estão fixadas as partes de plástico fica em contacto com os eléctrodos. 

(Fig. 2). 

6. Desempacotar a placa HYDRAGEL. 

- Eliminar rapidamente o excesso de líquido da superfície do gel com a ajuda de um papel de filtro fino. 

ATENÇÃO: Não deixar o papel de filtro em contacto prolongado com o gel, para evitar a sua desidratação. 

- Aplicar 120 µl de água destilada ou desionizada para o HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou 200 µl para o HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 

e HYDRAGEL 9 BENCE JONES, no terço inferior do quadro impresso na placa de migração. 

- Colocar o gel virado para cima, contra a parte inferior do quadro impresso na placa de migração (Fig. 3). 

- Dar uma forma côncava ao gel (Fig. 3) e baixá-lo lentamente até contacto com a gota de água. A gota deve repartir-se por toda a largura 

do gel. Ajustar ligeiramente o gel de modo a eliminar as bolhas de ar que se tenham formado. Baixar o gel até ficar na horizontal. 

7. Baixar os dois suportes. Nesta posição as tiras de tampão não tocam no gel. NÃO FORÇAR A DESCIDA DOS SUPORTES MANUALMENTE. 

8. Retirar o(s) aplicador(es) da câmara húmida. Segurá-lo(s) pela estrutura de protecção plástica. 

- Quebrar e retirar a protecção dos dentes. 

- Colocar o aplicador no suporte de aplicadores: 

- HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 amostras), na posição n° 6 ; 

- HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 amostras), na posição n° 3 ou 9 ; 

- HYDRAGEL 9 BENCE JONES, na posição n° 2, 6 e 10. 

- Para uma perfeita reproductibilidade da zona de aplicação, alinhar os aplicadores apoiando-os sobre o suporte dos aplicadores, por 

exemplo, do lado esquerdo. 

IMPORTANTE: Os números impressos nos aplicadores devem ficar virados para o operador (Fig. 4). 

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9. Fechar a tampa da câmara de migração. 

10. Dar início imediatamente ao processo apoiando em “START” (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

IMPORTANTE: Assegure-se de que a grelha de ventilação não está bloqueada (à direita do aparelho). 


MIGRAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Descida dos suportes do aplicador e dos eléctrodos de forma a que as tiras de tampão e o(s) aplicador(es) contactem com a superfície do gel. 

• Subida do aplicador de amostras. 

• A migração é feita à potência constante de 10 W para o HYDRAGEL 1 BENCE JONES e à potência constante de 20 W para o HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4, a 20 °C, controlada por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 42 Vh, durante cerca de 9 minutos. Para o HYDRAGEL 

9 BENCE JONES a migração deve ser feita à potência constante de 20 W, a 20 °C, controlada por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 

31 Vh, durante cerca de 7 minutos. 

• Os eléctrodos são desligados com a subida do suporte. 

• A audição de um sinal sonoro indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. A seguinte mensagem aparece no ecrã: " AS". 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante todos os passos da migração. 

II. IMUNOFIXAÇÃO 

1. Abrir a tampa. 

2. Retirar o(s) aplicador(es) e deitá-lo(s) fora. 

3. Levantar os suportes, retirar as tiras de tampão pegando-lhes pelas suas extremidades de plástico e deitá-las fora. 

- Retirar os suportes. 

- Limpar os eléctrodos com um pano macio e húmido. 

- Deixar o gel no seu lugar na câmara de migração. 

4. Colocar em posição a máscara de aplicação dos reagentes da seguinte forma (Fig. 5): 

- Colocar a barra metálica para a ligação da máscara de incubação nos pinos de fixação (a barra metálica pode permanecer 

permanentemente no HYDRASYS). 

- Segurar a máscara pela pega e colocá-la sobre a barra metálica (encaixando as extremidades nas reentrâncias da mesma). 

- Baixar a máscara sobre o gel. 

- Regular a posição da máscara, de modo a obter uma correspondência perfeita entre os perfis electroforéticos do gel e as pistas de 

revelação da máscara (ver as instruções de utilização do kit de acessórios 9 BENCE JONES SEBIA, ref. n° 1266). 

5. Aplicar os reagentes da seguinte forma: 

VOLUME (µl) PISTA máscara máscara REAGENTE COR 1, 2 e 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 Fixador amarelo GAM 25 15 Soro trivalente violeta K 25 15 Antisoro anti-cadeias leves kapa (livres e ligadas) verde claro L 25 15 Antisoro anti-cadeias leves lambda (livres e ligadas) azul claro Kl 25 15 Antisoro anti-cadeias leves livres kapa laranja 

| Ll | 25 | 15 | Antisoro anti-cadeias leves livres lambda | vermelho | 

NOTA: Para evitar enganos, as cores dos reagentes são as mesmas tanto dos rótulos dos seus frascos como dos respectivos poços na 

máscara de aplicação. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : Recomenda-se iniciar a colocação de antisoros, pela seguinte ordem : lambda livre, kapa livre, lambda, kapa 

e GAM, e terminar com a aplicação do fixador. 

- Pipetar os reagentes, evitando introduzir bolhas de ar na ponta da pipeta. 

- Aplicar os reagentes (Fig. 6). 

- Segure a pipeta na vertical e assente levemente a sua ponta no fundo do poço. 

- Cuidadosa e progressivamente, injecte o antisoro de forma a que se espalhe pela pista (cuidado para não haver introdução de bolhas de ar). 


7. Dar início imediatamente ao processo premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). Aparece a mensagem 

"[INCUBAÇÃO]" no ecrã. 

IMUNOFIXAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Incubação a 20 °C durante 10 minutos (controlada pelo efeito de Peltier). 

• A audição de um sinal sonoro indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. Aparece a mensagem: "❊ AS (MP)" no ecrã. 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a incubação. 

III. REMOÇÃO DOS ANTISOROS 

1. Abrir a tampa da câmara de migração. 

2. Remova o excesso de reagente com pentes de papel de filtro: um pente para o padrão 1 BENCE JONES e 2 BENCE JONES, dois pentes 

para o padrão 4 BENCE JONES e três pentes para o padrão 9 BENCE JONES (Fig. 7): 

- Colocar o pente num ângulo de 30° (em relação ao plano horizontal) e introduzi-lo nas fendas existentes na parte inferior das pistas de 

incubação, segundo o seu plano inclinado ; 

- Deslizar lentamente os dentes do pente de papel de filtro ao longo da parede vertical oposta à fenda ; os dentes ficam em contacto com 

os antisoros, que são absorvidos por capilaridade ; se há dificuldade na absorção do liquido, carregar ligeiramente no pente de modo a que 

este fique em contacto com o liquido. 

IMPORTANTE: Cada pente deve permanecer inclinado (45°), para não danificar o gel. 

3. Dar início ao processo premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

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REMOÇÃO DO EXCESSO DE ANTISOROS - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Os antisoros em excesso são retirados das pistas por absorção, durante 15 segundos a 20 °C (controlado pelo efeito de Peltier). 

• Ouve-se um sinal sonoro e a seguinte mensagem aparece no ecrã: " PAP." para que se aplique uma folha de papel absorvente espesso. 

IV. ABSORÇÃO DO GEL 

1. Retirar o(s) pente(s) de papel de filtro. 

2. Verificar se os reagentes foram bem absorvidos: 

- Ausência de reagentes no gel. 

- Os dentes do pente estão manchados em todo o seu comprimento. 

Se a absorção dos reagentes tiver sido incompleta, voltar a inserir o mesmo pente de papel de filtro (na mesma posição) e repetir 

manualmente a técnica de remoção de reagentes. 

3. Segure a máscara de aplicação dos reagentes pela pega, levante-a e retire-a da barra metálica. 

4. Aplicar uma folha de papel de filtro espesso sobre o gel: 

- Inclinar o papel de filtro a 45°, alinhar a sua margem com a margem do gel. 

- Aplicá-lo sobre o gel. 

ATENÇÃO: Pressionar uniformemente toda a folha de papel de filtro, para assegurar um contacto perfeito entre o gel e o papel. 


6. Dar início à absorção, premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

7. Limpar a máscara de aplicação com uma pequena escova sob água corrente (ex: escova de dentes). NÃO UTILIZAR ÁLCOOL OU 

SOLVENTES. Assegure-se de que a máscara de aplicação está completamente seca antes de a reutilizar: remover as gotículas de água dos 

poços batendo com ela levemente sobre papel macio. 

ABSORÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Secagem por absorção a 40 °C, controlada pelo efeito de Peltier, durante 3 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a seguinte mensagem aparece no ecrã: "❊ PAP.". 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a secagem. 

V. SECAGEM DO GEL 

1. Abrir a tampa da câmara de migração. 

2. Retirar o papel de filtro e deixar o gel no seu lugar. 

3. Fechar a tampa. 

4. Dar início ao processo premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

SECAGEM DO GEL - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Secagem a 50 °C, controlada pelo efeito de Peltier, durante 6 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a tampa da câmara de migração é desbloqueada. A temperatura da placa permanece a 50 °C até a tampa ser aberta. 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a fase de secagem. 

VI. PREPARAÇÃO DAS SEQUÊNCIAS DE TRATAMENTO DOS GELES 

1. Abrir a tampa. 

2. Retirar o gel para tratamento posterior. 

3. Colocar o gel no suporte da câmara de coloração (gel virado para cima) da seguinte maneira (Fig. 9): 

- Abrir o suporte. 

- Colocá-lo na bancada. 

- Encaixar o gel nas ranhuras existentes. 

- Fechar o suporte. 

- Verificar se o gel está bem encaixado. 

4. Colocar o suporte do gel na câmara de coloração. 

IMPORTANTE: Antes de dar início ao programa de coloração do gel, verificar o seguinte: 

- se o frasco da solução de lavagem está cheio com pelo menos 400 ml de solução de lavagem ; 

- se o frasco do corante está cheio com 300 ml de solução corante ; 

- se o frasco de descorante contem pelo menos 1 litro de solução descorante ; 

- se o frasco de despejo está vazio. 

Para seleccionar os canais de entrada dos reagentes: Consultar a informação indicada no ecrã do aparelho (premir a tecla: "VER CANAIS"). 

IMPORTANTE: Não esquecer de tapar os canais não utilizados. 

5. Seleccionar o programa de coloração "IF ACID VIOLET" no menu do aparelho e dar início à operação premindo a tecla "START" (flecha verde 

no lado direito do teclado). 

NOTAS: 

- A temperatura da placa de migração continua a decrescer quando a tampa está aberta, até chegar aos 20 °C (em menos de 5 minutos). Depois 

pode ser dado início a um novo processo de migração. 

- Repor o aplicador de amostras e os suportes do eléctrodo no seu lugar. 

- Limpar a placa de controlo de temperatura com um pano macio e húmido. 

VII.FINALIZAÇÃO DO PROCESSAMENTO DOS GELES 

1. Retirar o suporte da câmara, abrir e remover o gel seco. 

2. Se necessário, limpar a parte de trás (suporte plástico) do gel seco com um papel macio e húmido. 

NOTA : Para os geles com linhas de migração múltiplas (2 ou 3), as extensões da migração podem ser sensivelmente diferentes, sem qualquer 

consequência negativa nos resultados. 

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RESULTADOS 


Interpretação 

A presença de uma proteína de Bence Jones na urina é caracterizada por : 

- uma banda monoclonal detectada com um dos antisoros anti-cadeias leves (livres e ligadas) kapa ou lambda (pistas K ou L). 

- uma banda monoclonal detectada comum dos antisoros anti-cadeias leves livres kapa ou lambda (pistas Kl ou Ll). 

- e ausência de banda na pista do antisoro trivalente (pista GAM). 

A presença de uma paraproteína do soro eliminada na urina não estando presente uma proteína de Bence Jones é caracterizada por: 

- uma banda monoclonal detectada com o antisoro trivalente. 

- uma banda monoclonal que migrou ao mesmo nível da anterior detectada com um dos antisoros anti-cadeias leves (livre e ligada). 

- enão detectada com o antisoro anti-cadeia leve livre correspondente. 

A presença de uma paraproteína do soro eliminada na urina associada à proteína de Bence Jones é caracterizada pela presença de: 

- Uma banda monoclonal detectada com o antisoro trivalente. 

- Duas bandas detectadas com um dos antisoros anti-cadeias leves (livre e ligada). 

- Uma banda detectada por um dos antisoros anti-cadeia leve livre kapa ou lambda. Esta banda geralmente não migra ao mesmo nível da 

fracção detectada com o antisoro trivalente. 

A presença de uma proteína de Bence Jones em diferentes formas de polimerização é caracterizada pela: 

- Ausência de reacção com o antisoro trivalente. 

- Presença de várias bandas reveladas com um dos antisoros anti-cadeias leves kapa ou lambda (livre e ligada). 

- Presença de bandas, que migram ao mesmo nível, detectadas com o antisoro anti-cadeia leve livre correspondente. 

As urinas proteolisadas podem levar a uma reacção positiva com os antisoros anti- cadeia leve livre. Neste caso, uma paraproteína do soro eliminada 

com a urina pode revelar uma banda monoclonal com o antisoro trivalente, com um dos antisoros anti-cadeias leves (livre e ligada) e com o 

correspondente antisoro anti-cadeia leve livre. 

Interferências e limitações 

O uso de outros antisoros que não o específico para a técnica de imunofixação com máscara padrão, pode afectar os resultados. 

De acordo com os princípios analíticos das técnicas actuais (princípios de electroforese de zona, resolução e sensibilidade), não pode ser dada 

qualquer garantia quanto à detecção total de todos os compostos monoclonais. 

Assistência técnica 

Em caso de maus resultados contactar os serviços técnicos do fornecedor ainda que tenham sido seguidas, escrupulosamente, as instruções para 

a preparação e armazenamento dos reagentes, assim como as instruções de utilização da técnica. 

Estão disponíveis nos Serviços Técnicos da SEBIA fichas de dados de segurança dos diversos reagentes do kit, bem como informação relativa à 

eliminação dos desperdícios. 

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO 


Reprodutibilidade 

Inter-gel 

Quatro amostras de urina contendo cadeias leves Bence Jones não polimerizadas, cadeias leves lambda ou kapa foram, cada uma delas, ensaiadas 

em 10 geles do mesmo lote, utilizando a técnica normal e os kits HYDRAGEL 4 BENCE JONES. 

Inter-Lote 

Foram usadas duas amostras de urina contendo cadeias leves Bence Jones não polimerizadas, cadeias leves kapa ou lambda. Cada amostra foi 

aplicada nas 24 pistas de dois geles HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (mesmo lote), de três lotes diferentes. Um dos geles tinha sido sujeito a 

imunofixação, com o antisoro apropriado anti-cadeias leves (livres e ligadas) e o outro com antisoro anti-cadeias leves livres. 

Resultados: As proteínas de Bence Jones foram correctamente identificadas em cada amostra e em todos os geles, não se tendo verificado falsos 

positivos nem diferenças nos resultados das repetições. 

Detecção e Identificação das proteínas Bence Jones 

36 amostras de urina e 10 amostras de soro, patológicas e normais, foram analisadas em paralelo com o kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES e com 

outro sistema de gel de agarose para imunofixação disponível comercialmente. Os resultados das duas técnicas de imunofixação estiveram de acordo 

um com o outro e com os resultados e diagnósticos proporcionados por um hospital. 


Reprodutibilidade intra-ensaio 

Analisaram-se 3 amostras patológicas (duas urinas com respectivamente uma cadeia leve livre kapa e uma com cadeia leve livre lambda e um soro 

com uma paraproteína de cadeia leve lambda e cadeia leve livre lambda) em repetibilidade em 3 geles HYDRAGEL 9 BENCE JONES de dois lotes 

diferentes. 

Cada amostra analisada deu os mesmos resultados nos dois lotes de geles testados. Com efeito, os perfis obtidos são típicos para cada amostra 

analisada e a imunofixação colocou em evidência as bandas monoclonais esperadas. 

Reprodutibilidade inter-ensaio 

Foram analisadas oito amostras patológicas (cinco urinas e três soros que apresentam proteínas de Bence Jones) e uma amostra de urina sem 

proteína de Bence Jones para reproductibilidade em 10 geles HYDRAGEL 9 BENCE JONES de três lotes diferentes, à razão de nove amostras 

diferentes por gel. 

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Cada amostra analisada deu os mesmos resultados nos três lotes de geles testados. Com efeito, os perfis obtidos são típicos para cada amostra 

analisada e a imunofixação colocou em evidência as bandas monoclonais esperadas. Além disso, a imunofixação da amostra de urina sem proteína 

de Bence Jones não revelou qualquer banda monoclonal nos dez geles testados. 

Exactidão 

Analisaram-se vinte e nove amostras diferentes de urina e soro patológicas (21 urinas e 8 soros), que continham uma ou mais cadeias leves livres 

kapa ou lambda, e sete amostras sem proteína de Bence Jones (6 urinas e 1 soro) em paralelo com a técnica HYDRAGEL 9 BENCE JONES e com 

outro sistema de geles de agarose disponível comercialmente. Os resultados obtidos mostram uma perfeita correlação entre os dois sistemas de 

análise e são postas em evidência as mesmas bandas para todas as amostras patológicas analisadas com os dois tipos de geles e as sete amostras 

sem paraproteína de Bence Jones não apresentaram qualquer banda monoclonal nos dois sistemas de análise. 

BIBLIOGRAFIA 



1994, 397 pp. 

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ANVÄNDNINGSOMRÅDE 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES och HYDRAGEL 9 BENCE JONES Kiten är designade 

för kvalitativ detektion och identifiering av Bence Jones proteiner, monoklonala fria " light chains " kappa och lambda, i humant urin och serum, genom 

immunofixerings-elektrofores. Detektion av Bence Jones proteiner fungerar som en kvalitativ hjälp vid identifieringen av monoklonala gammopatier. 

Varje agarosgel är avsedd för: 

- Ett prov : HYDRAGEL 1 BENCE JONES kit, 

- Två prov : HYDRAGEL 2 BENCE JONES kit, 

- Fyra prov : HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit, 

- Nio prov : HYDRAGEL 9 BENCE JONES kit. 

Endast för in vitro diagnostik. 

TESTPRINCIPER 

Abnormala band hos elektroforetiska mönster, primärt dem hos beta- och gamma-globulin zonerna, misstänks alltid vara monoklonala proteiner och 

därmed en indikation på gammopatier. För identifiering av dessa abnormala band används immunofixeringstekniken. 

Immunofixerings-elektrofores tillåter proteinerna att fästa in situ (på plats) efter elektrofores, genom formation av olösliga komplex med motsvarande 

antisera. 

Bence Jones proteintest utförs i anslutning till det semi-automatiserade HYDRASYS systemet för att genomföra alla steg som är nödvändiga för att 

få geler färdiga för tolkning : 

1. Provet genomgår samtidig elektrofores i sex spår på en basiskt buffrad agarosgel. 

2. Efter elektrofores fixeras ett spår (ELP) som en referens som visar det elektroforetiska mönstret hos provets proteiner. De återstående fem spåren 

immunofixeras med respektive antisera : trivalent " anti-heavy chains " (gamma, alfa & mu), anti-kappa fria och bundna " light chains ", anti-lambda 

fria och bundna " light chains ", anti-kappa fri " light chain " och anti-lambda fri " light chain ". 

3. De ofällda, lösliga proteinerna avlägsnas från gelen genom blottning och tvättning. Precipitat av antigen-antikropps komplex fångas i gelmatrisen. 

4 De fällda proteinerna visualiseras med färgning av acidviolett färg. Överflödsfärg avlägsnas med en sur lösning. 

5. De immunoprecipiterade banden jämförs sedan med motsvarande abnormala band som ses i det elektroforetiska mönstret hos provet och 

identifieras från reaktion, eller frånvaro av reaktion, med individuella antisera. 

Denna enkla och snabba teknik, ger en klar och fullt tolkningsbar bild. 

REAGENSER OCH MATERIAL SOM MEDFÖLJER KITEN: HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES OCH HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT PN 4821 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT PN 4822 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT PN 4824 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KIT PN 4883* Agaros geler (färdiga att anv.) 10 geler 10 geler 80 geler Buffrade strips (färdiga att anv.) 10 förp. med 2 10 förp. med 2 80 förp. med 2 Acidviolett färg (stamlösning) 1 flaska, 75 mL 1 flaska, 75 mL 8 flaskor, 75 mL Fixativ lösning (färdig att anv.) 1 flaska, 14.4 mL Immunoglobuliner av icke-humant däggdjursursprung gamma, alfa, 1 flaska, 10.8 mL mu " heavy chains " (trivalent) (färdig att anv.) Immunoglobuliner av icke-humant däggdjursursprung kappa free 1 flaska, 10.8 mL and bound light chains (färdig att anv.) Immunoglobuliner av icke-humant däggdjursursprung lambda free 1 flaska, 10.8 mL and bound light chains (färdig att anv.) Immunoglobuliner av icke-humant däggdjursursprung kappa free 1 flaska, 10.8 mL light chains (färdig att anv.) Immunoglobuliner av icke-humant däggdjursursprung lambda free 1 flaska, 10.8 mL light chains (färdig att anv.) Applikatorer (färdiga att anv.) 1 förp. med 10 2 förp. med 10 24 förp. med 10 Filterpapper - tunna 1 förp. med 10 1 förp. med 10 8 förp. med 10 Filterpapperkammar 1 förp. med 10 2 förp. med 10 24 förp. med 10 

| Filterpapper - tjocka | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 8 förp. med 10 | 


NOTERA : Fixativ lösning och antisera levereras separat, med undantag för MAXI-KIT (Se: EJ LEVERERADE MEN NÖDVÄNDIGA REAGENSER). 

FÖR OPTIMALA RESULTAT 

Reagenser från samma kit måste användas tillsammans enligt de instruktioner som finns beskrivet på förpackningens insticksblad. 

LÄS NOGGRANNT FÖRPACKNINGENS INSTICKSBLAD. 

1. AGAROS GELER 

Förberedelse 

Agaros geler är färdiga att använda. Varje gel innehåller: agaros, 0.8 g/dL, tris-barbital buffert pH 9.1 ± 0.1 ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Agaros geler innehåller 0.31 % barbital och 0.34 % natriumbarbital. Förtär inte ! Vid förtäring, kontakta läkare omedelbart ! 

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SEBIA INSTRUKTIONER - Svenska

Användning 

Hjälpmedel för proteinelektrofores och immunofixering. 

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Lagring, stabilitet och tecken på förändring 

Förvara gelerna liggande i originalförpackningen, vid rumstemperatur (15 till 30 °C) eller i kylskåp (2 till 8 °C). (Pilen på förpackningens framsida måste 

peka uppåt). De är hållbara fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på gelförpackningens etiketter. 

Undvik förvaring nära fönster eller värmekälla. Undvik större temperaturvariationer under lagring. 

FRYS INTE IN GELEN. 

Släng gelen om: 

(i) kristaller eller fällning bildats på gelytan eller om gelkonsistensen blivit väldigt mjuk (inträffar när gelen varit fryst), 

(ii) bakteriell tillväxt eller mögeltillväxt påvisas, 

(iii) onormal mängd vätska är närvarande i påsförpackningen (som ett resultat av buffertutsöndring från gelen på grund av felaktiga 

lagringsförhållanden). 

2. BUFFRADE STRIPS 

Förberedelse 

Buffrade svampstrips är färdiga att använda. Varje strips innehåller: tris-barbital buffert pH 9.1 ± 0.3 ; natriumazid ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer, men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Bufferten i stripsen innehåller 0.92 % barbital, 1.03 % natriumbarbital och 0.30 % natriumazid. Förtär inte ! Vid förtäring kontakta 

läkare omedelbart ! Vid avyttring, undvik kontakt med syra, bly eller koppar, då dessa kan bilda explosiva eller giftiga föreningar med 

natriumazid. 

Användning 

Buffrade strips fungerar som en elektroforetisk buffertreservoar och säkerställer kontakt mellan gelen och elektroderna. 


Förvara de buffrade stripsen liggande och i dess originalförpackningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. (Pilen för förpackningens framsida måste 

peka uppåt). 

De är hållbara fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på stripsens förpackningsetikett. 

FRYS INTE STRIPSEN. 

Kasta! om förpackningen är öppen eller om stripsen är uttorkade. 

3. ACIDVIOLETT FÄRG 

Förberedelse 

Flaskan med acidviolett stamfärglösning skall spädas upp till 300 mL med destillerat eller avjoniserat vatten. 

Efter spädning innehåller den färdiga färgningslösningen: sur lösning pH ≈ 2 ; acidviolett, 0.2 g/dL ; etylen-glykol, 3.25 % ; tillsatser, ofarliga vid 

använda koncentrationer men nödvändiga för optimal prestanda. 

VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För färgning av geler efter elektroforetisk proteinseparering och immunofixering. 

VIKTIGT : Färgningslösningen är avsedd för färgning av endast 10 geler. Byt lösning efter 10 färgningsprocedurer. 


Lagra både stam- och bruksfärgningslösningar vid rumstemperatur eller i kylskåp i väl tillslutna behållare för att förhindra avdunstning. 

Stamfärglösningen är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskornas etiketter. 

Bruksfärglösningen är hållbar i 6 månader. 

4. FIXATIV LÖSNING (med PN 4883) 

Förberedelse 

Fixativ lösning är färdig att använda. Den innehåller: sur lösning samt tillsatser ofarliga vid använda koncentrationerna men nödvändiga för optimala 

prestanda. För identifiering och som en hjälp att övervaka användningen, är fixativet färgat med en ofarlig färg som dels matchar färgen på 

glasflaskans etikett och gällande spår på mallen för reagensapplicering. 

Användning 

Används för fixering av elektroforetiskt separerade proteiner i referensspåret (ELP). 

NOTERA : Fixativ lösning är endast avsedd för immunofixering med 1, 2, 4 och 9 BENCE JONES masker. 

VIKTIGT: För att undvika kontaminering mellan reagens, var noggrann med att sätta tillbaka skruvlocket på motsvarande flaska efter varje användning. 


Förvara fixativ lösning vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på fixativlösningens 

flasketiketter. 

Fixativ lösning måste vara fri från fällning. 

5. ANTISERA (med PN 4883) 

Förberedelse 

Antisera är färdigt att använda. Alla antisera är totala immunoglobuliner av icke-humant däggdjursursprung. För att lätt identifiera antisera och som en 

hjälp att övervaka användningen, är antisera och glasflaskornas etiketter färgade med ofarliga distinkta färger. 

Om antiserum visar en lätt grumlighet, lämna antiserumflaskan vid rumstemperatur i minst 10 minuter. Detta bör vara tillräckligt för att lösningen skall 

klarna: om grumligheten kvarstår skall detta inte på något sätt påverka den immunologiska reaktionen. Vid fall av olösliga precipitat, rekommenderas 

att centrifugera antiserum i 5 minuter vid 3000 rpm. 

Användning 

För immunofixering av proteiner efter elektrofores. 

NOTERA : Antisera är avsett för immunofixering med 1, 2, 4 and 9 BENCE JONES masker. 

Antisera kan härröra från olika djurarter. Blanda aldrig två olika antiseraflaskor, även med samma specificitet och byt ALLTID pipettspets vid byte 

mellan antiserumflaskor. 

VIKTIGT: För att undvika kontaminering mellan reagens, var noggrann med att sätta tillbaka skruvlocket på motsvarande flaska efter varje användning.



Förvara antisera i kylskåp (2 till 8 °C). De är hållbara fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på antiserumflaskornas etiketter. 

NOTERA: Under transport kan antisera förvaras utan kyla (15 till 30 °C) under 15 dagar utan några negativa effekter på prestandan. 

6. APPLIKATORER 

Användning 

Tillskurna applikatorer för engångsbruk. För provapplicering på gel. 

Lagring 

Förvara applikatorerna på en torr plats, vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

7. FILTERPAPPER - TUNNA 

Användning 

Tunnt tillskurna och absorberande pappersbitar för engångsbruk. Används för bortagning av fukt på gelytan innan provapplicering. 

Förvaring 

Förvara de tunna filterpappren på ett torrt ställe vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

8. FILTERPAPPERKAMMAR 

Användning 

För engångsbruk, tillskurna tjocka absorberande papperskammar för borttagning av överflödig fixativ lösning och antisera från gelytan efter 

immunofixering. 

9. FILTERPAPPER - TJOCKA 

Användning 

För engångsbruk, tjocka absorberande pappersbitar för blottning av oprecipiterade proteiner på gelen efter immunofixering. 

Förvaring 

Förvara de tjocka filterpappren på ett torrt ställe vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

EJ LEVERERADE MEN NÖDVÄNDIGA REAGENSER 

1. ANTISERA OCH FIXATIV LÖSNING - FÖRPACKNING (för 4821, 4822 och 4824 kit) 

Förpackning med antisera och fixativ lösning, GAM, K, L för immunofixering, Standard mask, SEBIA, PN 4835, innehåller 3 antisera flaskor (antigamma, 

alfa, mu " heavy chains ", anti-kappa fria och bundna " light chains " och anti-lambda fria och bundna " light chains ") (1 mL i varje) och 1 flaska 

fixativ lösning, 2.5 mL. De är avsedda för immunofixering med 1, 2, 4 och 9 BENCE JONES masker, SEBIA. 

1.1 ANTISERA 

Hänvisning till paragraf 5. 

1.2 FIXATIV LÖSNING 

Hänvisning till paragraf 4. 

2. FÖRPACKNING MED ANTISERA FÖR FRIA ”LÄTTA KEDJOR” (för 4821, 4822 och 4824 kit) 

Förpackningen med antisera, anti-kappa fria " light chains " och anti-lambda fria " light chains " för immunofixering, Standard mask, SEBIA, PN 4836, 

innehåller 2 flaskor med antisera, 1 mL i varje. De är avsedda för immunofixering med 1, 2, 4 och 9 BENCE JONES masker, SEBIA. 

Förberedelse, användning, lagring, stabilitet och tecken på förändring : Hänvisning till tidigare paragraf 5. 

3. STAMAVFÄRGNINGSLÖSNING 

Varje flaska med stamavfärgningslösning (SEBIA, PN 4540, 10 flaskor 100 mL i varje) skall spädas upp till 100 liter med destillerat eller avjoniserat 

vatten. Lämpligt är att endast späda 5 mL av stamlösning till 5 liter, som är volymen hos behållaren för avfärgningslösningen. Efter spädning innehåller 

den färdiga avfärgningslösningen: citronsyra, 0.5 g/L. 

Användning 

För avfärgning, dvs. borttagning av överflöds- samt bakgrundsfärg från gelerna. 

För rengöring av färgfacket efter tvättsteget. 

För att neutralisera den sura avfärgningslösningen tillsätt 15 mL av en 50 % Natrium-hydroxidlösning, in i den tomma avfallsbehållaren. 


Förvara stamlösning vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på avfärgningslösningens förpackning eller på 

flasketiketterna. 

FRYS INTE IN AVFÄRGNINGSLÖSNINGEN. 

Den färdigspädda avfärgningsslösningen är hållbar i en vecka under förutsättning att den förvaras i en väl tillsluten flaska vid rumstemperatur. Tillsätt 

inte natriumazid. 

Kassera brukslösning om den förändras i utseende t.ex., blir grumlig p.g.a. mikrobiell kontaminering. 

För att förhindra mikrobiell tillväxt i den spädda avfärgningslösningen (vid lagring mer än 1 vecka) tillsätt 5 µl/dL av ProClin 300. 

Bruksavfärgningslösning tillsatt med ProClin är hållbar i väl tillsluten flaska, förvarad vid rumstemperatur eller i kylskåp till angivet utgångsdatum på 

förpackningen eller på avfärgninglösningens flasketiketter. 

4. HYDRASYS TVÄTTLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska av HYDRASYS stamtvättlösning (SEBIA, PN 4541, 10 flaskor, 80 mL i varje) skall spädes upp till 5 liter med destillerat eller avjoniserat 

vatten. Efter spädning innehåller den färdiga tvättlösningen : alkalisk buffert pH 8.8 ± 0.3 ; natriumazid. 

VARNING: Brukstvättlösning innehåller 0.625 % natriumazid. Färtär ej ! Vid förtäring, kontakta läkare omedelbart ! Natriumazid kan leda till 

bildning av explosiva eller giftiga ämnen vid kontakt med syror, bly eller koppar. Spola alltid med en stor mängd vatten vid avyttring. 

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Användning 

HYDRASYS tvättlösning är avsedd för borttagning av oprecipiterade proteiner från gelerna. Den används även för rengöring av HYDRASYS färgfack. 

Använd regelbundet. Om instrumentet används dagligen, tvätta färgfacket varje vecka. 

Se förpackningsbilagan för användarinstruktioner. 


Lagra stam- och brukstvättlösningarna i stängda behållare vid rumstemperatur eller i kylskåp. Lösningarna är hållbara till angivet utgångsdatum på 

tvättlösningens flasketikett 

Kassera brukstvättlösningen om den förändras i utseende, t.ex. blir grumlig på grund av mikrobiell kontaminering. 

5. SALTLÖSNING 

Förberedelse 

Förbered en 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl lösning i destillerat eller avjoniserat vatten. 

Användning 

För spädning av prov, vid behov. 


Förvara koksaltlösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Avyttra efter 3 månader eller om lösningen ändrar utseende, t.ex., blir grumlig på grund 

av mikrobiell kontaminering. För längre förvaringstid, tillsätt natriumazid, 0.1 g/dL. 

UTRUSTNING OCH NÖDVÄNDIGA TILLBEHÖR MEN INTE MEDLEVERERADE 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 eller PN 1211. 

2. Mikropipett, manuell eller automatisk, t.ex. HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ett alternativt sätt att ladda provapplikatorerna. 

3. Fuktkammare, PN 1270, levererad med HYDRASYS. 

4. Behållarsats, levererad med HYDRASYS. 

5. Mallguide SEBIA levererad med HYDRASYS. 

6. Tillbehörskit för HYDRASYS IF, SEBIA, PN 1260. 

7. Tillbehörskit för HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES, SEBIA, PN 1267. 

8. Tillbehörskit för HYDRASYS 9 BENCE JONES, SEBIA, PN 1266. 

9. Pipetter: 10 µL och 200 µL. 

PROV FÖR ANALYS 

Provinsamling och förvaring 

• Analys genomförs vanligtvis på färskt urin. 

Om nödvändigt, förvara urinproven vid 2 till 8 °C upp till en vecka. För längre förvaringstider frys urinproven. Infrysning med HEPES 0.1 M (pH 6.75) 

och natriumazid, 0.02 g/dL ökar hållbarheten. Frusna urinprover är hållbara minst en månad. Tinade prover kan ge lätta appliceringsmärken på 

grund av proteindenaturering. 

VIKTIGT: Använd inte borsyra som konserveringsmedel. 

• Vid analys av serum, måste de utföras enligt etablerade rutiner som används vid kliniska laboratorier. Vid behov, lagra serum vid 2 till 8 °C upp till 

en vecka. För längre förvaringstider, frys in proven. Frusna serumprov är hållbara minst en månad. Tinade prover kan ge lätta appliceringsmärken 

på grund av protein- eller lipoproteindenaturering. 

Förberedelse av prov 

Urinprov 

Analys genomförs på okoncentrerat urin. Detektionsnivån hos Bence Jones proteiner ligger generellt inom 1 - 5 mg/dl. Koncentrera urinproven om 

laboratoriets rutiner så kräver, eller om en högre sensitivitet önskas. En 20-100 faldig koncentration är vanligtvis tillräckligt. 

NOTERA : Diffundering av urinprover in i applikatorspetsarna kan hindras när urinen (ospädd eller koncentrerad) är grumlig. Det rekommenderas att 

avlägsna partiklarna med centrifugering (t.ex. 10 minuter vid 3,000 rpm) eller sterilfiltrering (t.ex., 0.45 µm filter). 

Serum 

Förutom urin kan även patientens serum testas för Bence Jones proteiner. 

Späd serum i NaCl eller spädningslösning (diluent) för immunofixering, spädd 1/ 4 (1 del spädningslösningdiluent + 3 delar destillerat eller avjoniserat 

vatten): 1/10 för ELP, GAM, K och L spåren (1 del serum, 9 delar spädd spädningslösning (diluent) eller NaCl) och 1/3 (1 del serum, 2 delar spädd 

spädningslösning eller NaCl) för Kf och Lf spåren. 

NOTERA: Om den totala nivån av immunoglobuliner är < 0.5 g/dL, rekommenderas att använda lägre spädning av serumprov i NaCl eller 

spädningslösning (diluent) för immunofixering spädd enligt : 1 del spädningsmedel (diluent), 3 delar destillerat eller avjoniserat vatten t.ex., späd 

serumet 1/5 för ELP, GAM, K och L spåren (1 del serum, 4 delar spädd spädningslösning " diluent " eller saltlösning) och 1/2 (1 del serum, 1 del spädd 

spädningslösning eller NaCl) för Kf och Lf spåren. 

För Ig D och/eller Ig E analys, använd samma spädningar som för kappa och lambda fria och bundna " light chains " 

VARNING: 

• Undvik plasmaprov. Fibrinogen ger ett band i närheten av appliceringspunkten som kan tas för monoklonalt immunoglobulin. 

• En del urinprover innehåller hög saltkoncentration. Detta kan ge upphov till geldeformering under migrering och som en konsekvens, störning av 

migrationsprofilerna. Om en sådan störning gör tolkningen felaktig, måste urinprovet dialyseras för att avlägsna salterna. 

• På grund av bakteriell kontaminering kan immunoglobulin (paraprotein) närvarande i urinet genomgå en proteolys. Detta leder till en positiv reaktion 

med anti-fri " light chain " antiserum. I detta fall, kan ett serumparaprotein som är eliminerat i urinen, visa ett monoklonalt band med det trivalenta 

antiserumet, och med en av de anti-fri " light chain" och bundna antisera samt med motsvarande anti-fri " light chain " antiserum. 

• Polymerisering av Bence Jones proteiner sänker generellt detektionskänsligheten hos anti-fria " light chains " antisera då polymeriseringen kan 

blockera epitoper som normalt reagerar med anti-fri " light chain " antisera. Då misstanke om Bence Jones protein finns, men ingen detektion 

uppnås, depolymerisera innan elektrofores : blanda 100 µL urin med 5 µL beta-merkaptoetanol spätt 1:10 med NaCl och använd. 

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TILLVÄGAGÅNGSSÄTT 

HYDRASYS systemet är ett halvautomatiskt multi-parameter instrument. De automatiska stegen inkluderar bearbetning av HYDRAGEL agarosgeler 

i följande ordning: Provapplicering, elektroforetisk migrering, inkubering med fixativ lösning och antisera, torkning, färgning, avfärgning och slutlig 

torkning av gelen. De manuella stegen inkluderar hantering av prov och geler, applicering av fixativ och antisera samt att förbereda instrumentet för 

arbete. 

LÄS NOGGRANT HYDRASYS INSTRUKTIONSMANUAL. 

I. MIGRERING 

1. Starta HYDRASYS instrumentet. 

2. Placera en applikator för HYDRAGEL 1 BENCE JONES eller HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 prov), två applikatorer för HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 prov) eller tre applikatorer för HYDRAGEL 9 BENCE JONES, på en slät yta med brunnarnas nummer (angivna på höger 

sida) vända uppåt (Fig. 1). 

- Applicera 10 µL prov i varje brunn. Ladda varje applikator inom 2 minuter. 

| MIGRERINGS- / IMMUNOFIXERINGSSPÅR | 

BRUNNAR nr. : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 PROV nr. 1 ELLER 3 2 3 4 5 6 7 PROV nr. 2 ELLER 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES PROV nr. 1, 4 ELLER 7 1 2 3 4 5 6 PROV nr. 2, 5 ELLER 8 7 8 9 10 11 12 

| PROV nr. 3, 6 ELLER 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

NOTERA: Gällande för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, används inte brunnarna med nummer 1, 8 och 15 i detta test ; de kan markeras med 

en filtpenna för att undvika att fylla dem av misstag. 

- Placera applikatorn(applikatorerna) i fuktkammaren med tänderna vända uppåt [hantera den (dem) med hjälp av applikatorns 

plastskyddsram]. 

- Låt proverna diffundera in i tänderna under 5 minuter efter sist gjorda provapplicering. 

Se förpackningsbilagan för fuktkammaren för ytterligare detaljer. 

2. Öppna luckan till Migrationsmodulen, och lyft upp elektrod- och applikatorhållarna. 

VARNING: Stäng aldrig luckan när hållarna är i höjt läge. ! 

4. Välj "1 BJ SM/DM" migrationsprogram för HYDRAGEL 1 BENCE JONES, “2/4 BJ-UP SM/DM” för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 eller 

“9 BJ SM ” för HYDRAGEL 9 BENCE JONES, på instrumentmenyn (tangentbordets vänstra sida). 

5. Ta ur de buffrade stripsen ur förpackningen; ta dem i plaständarna. Sätt de hålstansade ändarna på elektrodhållarens pinnar ; stripsens 

plaststöd måste vara vända mot elektrodhållaren (Fig. 2). 

6. Ta ur HYDRAGEL agaros gelplatta. 

- Rulla snabbt och jämt med ett tunt filterpapper på gelytan för bortagning av överflödig vätska. Ta bort pappret omedelbart. 

VARNING: För att undvika uttorkning : låt inte filterpappret vara i kontakt med gelen under längre tid. 

- Pipettera 120 µL destillerat eller avjoniserat vatten för HYDRAGEL 1 BENCE JONES eller 200 µL för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 och 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, på den lägre tredjedelen av ramen som är tryckt på migrations-modulens temperaturkontrollplatta. 

- Placera gelplattan (gelsidan uppåt) med kanterna mot stoppet i botten på den tryckta ramen (Fig. 3). 

- Böj gelen och släpp den försiktigt ned i vattendroppen (Fig. 3). Förvissa dig om att inga luftbubblor finns kvar, att vattnet fördelar sig under 

hela gelplattan och att gelen är i linje med den tryckta ramen. 

7. Fäll ned båda hållarna. I detta läge berör inte de buffrade stripsen gelen. TRYCK INTE NED HÅLLARNA HELT. 

8. Avlägsna applikatorn (applikatorerna) från fuktkammaren. [hantera den (dem) med hjälp av applikatorns plastskyddsram] 

- Avlägsna applikatorns tandskyddsram. 

- Placera applikatorn (applikatorerna) på hållaren : 

- Med HYDRAGEL 1 BENCE JONES eller HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 prov), i position nr. 6, 

- Med HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 prov), i position nr. 3 och 9, 

- Med HYDRAGEL 9 BENCE JONES, i position nr. 2, 6 och 10. 

För att öka reproducerbarheten hos provappliceringen, finjustera alltid applikatorerna mot hållarens vänstra sida. 

VIKTIGT: De tryckta nummren på applikatorn (applikatorerna) måste vara vända mot operatören (Fig. 4). 

9. Förvissa dig om att hållarna är i nedsänkt läge. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

10. Starta proceduren omedelbart genom att trycka ned den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. 

VIKTIGT: Förvissa dig om att ventilationsintaget på instrumentets högra sida inte är blockerat. 

MIGRERING – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Båda hållarna sänker sig så att de buffrade stripsen och applikatorn (applikatorerna) får kontakt med gelytan. 

• Provapplikatorn höjer sig. 

• Migrering sker under 10 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL 1 BENCE JONES och under 20 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4, tills 42 Vh har ackumulerats (under ca 9 minuter) och under 20 W konstant strömstyrka tills 31 Vh har ackumulerats (under ca. 

7 minuter) för HYDRAGEL 9 BENCE JONES, vid 20 °C kontrollerat av Peltiereffekten. 

• Elektrodhållaren höjer sig för att koppla ur elektroderna. 

• En ljudsignal hörs och luckan till migrationsmodulen öppnas. Följande meddelande visas på skärmen: " AS"/applicering av reagens. 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under alla migrationsstegen. 

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II. IMMUNOFIXERING 

1. Öppna luckan till Migrationsmodulen. 

2. Avlägsna provapplikatorn (applikatorerna) och kassera. 

3. Lyft upp båda hållarna, avlägsna de buffrade stripsen genom att hålla i dess plaständarna och kassera. 

- Ta bort båda hållarna. 

- Torka av elektroderna med en mjuk fuktig servett. 

- Lämna kvar gelen på sin plats i migrationsmodulen. 

4. Förbered antiseramallen för reagensapplicering enligt följande (Fig. 5): 

- Placera antiseramallen på den förankrande metallstången (masken kan stanna kvar i migrationsmodulen under hela proceduren). 

- Håll antiseramasken i handtaget och placera den på metallstången (skårorna i linje med markeringarna). 

- Fäll ned masken på gelen. 

- Justera mallens position för perfekt placering i linje mellan de elektroforetiska profilerna och mallens brunnar (se tillbehörskit för HYDRASYS 

9 BENCE JONES SEBIA, PN 1266, för instruktioner). 

5. Applicera reagenserna enligt följande: 

VOLYM (µl) SPÅR Mall Mall REAGENS FÄRG 1, 2 e 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 fixativ lösning gul GAM 25 15 trivalent antiserum violett K 25 15 anti-kappa "light chain" (fri & bundet) antiserum grön L 25 15 anti-lambda "light chain" (fri & bundet) antiserum blå Kf 25 15 anti-kappa fri "light chain" antiserum brandgul 

| Lf | 25 | 15 | anti-lambda fri "light chain" antiserum | röd | 

NOTERA: För att undvika sammanblandning, visas reagensfärgerna både på flasketiketterna och på appliceringmallens brunnar. 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES : Det rekommenderas att applicera antisera i följande ordning: lambda fria, kappa fria, lambda, kappa och 

GAM, och slutligen, fixativ lösning. 

- Pipettera reagenserna, undvik luftbubblor vid pipettspetsen. 

- Applicera reagenserna (Fig. 6): 

- Håll pipetten upprätt och låt spetsen lätt vila mot brunnens botten. 

- Injicera reagenset så att det sprider i spåret utan att några luftbubblor bildas. 

6. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

7. Starta proceduren omedelbart genom att trycka ned den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. Ett meddelande 

"[INCUBATION]"/inkubering visas på skärmen. 

IMMUNOFIXERING – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Inkubering vid 20 °C under 10 minuter (kontrollerat av Peltiereffekten). 

• En ljudsignal hörs och luckan till migrationsmodulen öppnas. Följande meddelande visas på skärmen: "❊ AS (SM)"/ta bort reagenser. 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under inkubering. 

III. BORTTAGNING AV ÖVERFLÖDIGA REAGENSER 

1. Öppna luckan till migrationsmodulen. 

2. Avlägsna överflödigt reagens med filterpapperkammarna : en kam för 1 BENCE JONES och 2 för BENCE JONES mallar, två kammar för 

4 BENCE JONES mall och tre kammar för 9 BENCE JONES mall (Fig. 7) : 

- Sätt kammen (kammarna) i 30 ° vinkel mot dig i öppningen i mallens fördjupningar så att tänderna berör den vertikala sidan. 

- Se till att tänderna försiktigt når vätskeytan genom att vinkla kammen (kammarna) i 45° vinkel så att vätskan kan absorberas i tänderna 

(Fig. 8). 

VIKTIGT: Tänderna får inte röra gelen. Varje kam måste vara lutad (45°). Om den är i upprätt läge, kan den skada gelen. 

3. Starta proceduren genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

BORTTAGNING AV REAGENS - BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Reagenserna absorberas under 15 sekunder vid 20 °C (kontrollerat av Peltiereffekten). 

• En ljudsignal hörs. Följande meddelande visas på skärmen : " PAP.". 

IV. BLOTTNING AV GEL 

1. Avlägsna kammen (kammarna). 

2. Kontrollera att reagenserna har absorberats vilket visas genom: 

- frånvaro av reagenser på gelen. 

- tanden är färgad till sin fulla längd. 

Om absorbering av reagens är otillräcklig, sätt in samma filterpapperkam igen (i samma position) och repetera manuellt 

borttagningsproceduren. 

3. Ta tag i fliken på masken för reagensapplicering, lyft upp och avlägsna den. 

4. Applicera ett tjockt filterpapper på gelen: 

- Luta filterpappret i 45° vinkel. Passa in filterpapprets nedre del mot gelkanten. 

- Sänk ned den på gelen. 

VARNING: Tryck med stadig hand på filterpapprets hela yta för att uppnå perfekt kontakt med gelen. 

5. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

6. Starta proceduren genom att trycka på tangenten "START" key (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

7. Rengör appliceringsmallen med en liten borste (t.ex., tandborste). ANVÄND INTE ALKOHOL ELLER LÖSNINGAR. Innan återanvändning, 

förvissa dig om att mallen är helt torr ; avlägsna vattendroppar från brunnarna med ett mjukt papper. 

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BLOTTNING – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Blottning vid 40 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 3 minuter. 

• En ljudsignal hörs. Följande meddelande visas på skärmen "❊ PAP." / ta bort papper. 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under blottning. 

V. TORKNING AV GEL 

1. Öppna luckan till migrationsmodulen. 

2. Ta bort filterpappret och låt gelen vara kvar på sin plats. 

3. Stäng luckan. 

4. Starta proceduren genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

TORKNING - BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Torkning vid 50 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 6 minuter. 

• En ljudsignal hörs och luckan öppnas. Plattans temperatur stannar vid 50 °C tills luckan öppnas. 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under torkningsproceduren. 

VI. GELBEARBETNING 

1. Öppna luckan. 

2. Avlägsna den torkade gelfilmen för vidare användning. 

3. Öppna Gelhållaren. Lägg den platt med gelsidan uppåt i fördjupningarna på de två listerna och stäng hållaren. Förvissa dig om att filmen är 

korrekt placerad inuti hållaren (Fig. 9). 

4. Placera gelhållaren i modulen för gelbearbetning/färgning. 

VIKTIGT: Innan start av färgningsprogrammet, kontrollera följande : 

- att behållaren för tvättlösning innehåller minst 400 mL tvättlösning ; 

- att färgningsbehållaren är fylld med 300 mL färgningslösning ; 

- att behållaren för avfärgning innehåller minst 1 liter avfärgningslösning ; 

- att avfallsbehållaren är tom. 

För reagenslinjeförbindelse: Hänvisas till visad information på instrumentets skärm (välj tangent: "REAGENT LINES"). 

VIKTIGT: Glöm inte att spärra oanvända linjer. 

5. Välj "IF ACID VIOLET" färgningsprogram på instrumentmenyn och starta körningen genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på 

tangentbordets högra sida). 

Under färgning-, avfärgning- och torkningsstegen, förblir facket låst. 

Efter kylningssteget, hörs en ljudsignal när facket öppnas (ventilation upprätthålls tills gelhållaren avlägsnas). 

NOTERA: 

- När luckan öppnas fortsätter migrationplattans temperatur att sjunka tills den når 20 °C (inte mer än 5 minuter). Därefter kan en ny migrationskörning 

startas. 

- Placera åter provapplikator- och elektrodhållaren i sina platser. 

- Torka temperaturkontrollplattan med en mjuk fuktad servett. 

VII.SLUTFÖRANDE AV GELBEARBETNING 

1. Avlägsna gelhållaren från facket, öppna den och av ta bort den torkade gelen. 

2. Om nödvändigt, rengör den torra filmens baksida (stödsidan av plast) med ett fuktat mjukt papper. 

ANMÄRKNING : Längden hos de elektroforetiska migreringarna kan vara något olika för geler innehållande 2 eller 3 analysspår, utan några 

ofördelaktiga effekter på utförandet. 

RESULTAT 

Tolkning 

Närvaro av ett Bence Jones protein i urinen karaktäriseras av : 

- ett monoklonalt band detekterat med en av de anti fria och bundna "light chains" kappa eller lambda antisera (K eller L spåren), 

- samma monoklonala band detekteras med motsvarande anti fri " light chain " antiserum (KF eller LF spåren), 

- ingen reaktion med trivalent antiserum (GAM spåret). 

Serum paraprotein eliminerat i urinen utan Bence Jones protein karaktäriseras av: 

- ett monoklonalt band detekterat med trivalent antiserum, 

- samma band detekterat med en av anti fria och bundna "light chain" antisera, och 

- ingen reaktion med motsvarande anti fri "light chain" antiserum. 

Serum paraprotein eliminerat i urinen associerat med ett Bence Jones protein karaktäriseras av: 

- ett monoklonalt band detekterat med trivalent antiserum, 

- samma band detekterat med en av anti fria och bundna "light chain" antisera, 

- ett monoklonalt band detekterat med en av de anti fria och bundna "light chain" antisera. Detta band migrerar generellt inte på samma nivå 

som det som detekteras med trivalent antiserum, 

- samma band detekterat med en av anti fri "light chain" antisera. 

I sällsynta fall kan de två banden migrera tillsammans (i detta fall är färgningen i "light chain" spåret starkare än det i GAM spåret). 

Polymeriserade varianter av Bence Jones protein karaktäriseras av: 

- ingen reaktion med trivalent antiserum, 

- flera band visas med en av anti fria och bundna light chain antisera, 

- samma band kan även detekteras med motsvarande fri "light chain" antiserum. 

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Begränsningar 

Användning av andra antisera än de som är specifika för immunofixering med standard mask kan påverka resultaten. 

På grund av upplösnings- och sensitivitetsbegränsningar hos zonelektrofores, är det möjligt att vissa monoklonala komponenter inte blir upptäckta 

med denna metod. 

Felsökning 

Ring leverantörens tekniska support om testet misslyckas trots att givna instruktioner följts för materialförvaring och förberedlese av test. 

Varuinformationsblad för reagenserna i kiten och information om avfallshantering finns tilgängliga hos leverantörens tekniska serviceavdelning. 

PRESTANDADATA 


Reproducerbarhet 

Geler - till - Gel 

Fyra urinprov innehållande icke-polymeriserade, antingen lambda eller kappa, Bence Jones "light chain" kördes vart och ett på 10 geler från samma 

batch med användning av standardprocedur HYDRAGEL 4 BENCE JONES kitet. 

Lot - till - Lot 

Två urinprov användes innehållande icke-polymeriserade antingen kappa eller lambda, Bence Jones "light chain". Varje prov applicerades i alla (24) 

spår på två HYDRAGEL 4 BENCE JONES geler. En av de två gelerna immunofixerades anti-fria & bundna "light chain" antiserum och den andra gelen 

med anti-fria "light chain" antiserum. Geler från de tre olika batcherna användes på detta sätt för varje prov. 

Resultat: Bence Jones proteinerna identifierades korrekt i varje prov och på alla geler, där fanns inga falskt positiva resultat och inga skillnader 

observerades mellan körningarna. 

Tillförlitlighet – Detektion och identifiering av Bence Jones Proteiner 

Trettiosex (36) urin- och tio serumprov, patologiska och normala, analyserades med HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit och en annan kommersiellt 

tillgängligt system för immunofixering. Resultaten för de två immunofixeringsprocedurerna stämde helt överens, och med erhållna resultat och diagnos 

från ett sjukhus. 


Reproducerbarhet och specificitet inom gel 

Reproducerbarhet inom gel påvisades med två urinprov (ett prov med lambda Bence Jones "light chain" och ett prov med kappa Bence Jones "light 

chain") och ett prov med ett lambda "light chain" paraprotein och ett lambda Bence Jones "light chain". Ett prov kördes på två batcher HYDRAGEL 

9 BENCE JONES geler. Alla testade prover gav identiska resultat för de två batcherna samt typiska mönster för den typ av prover som testades. 

Upprepad immunofixering visade förväntade monoklonala band med de tre patologiska proven. 

Reproducerbarhet och specificitet mellan serie 

Reproducerbarhet mellan serie påvisades på åtta patologiska prov (fem urinprov och tre serumprov med Bence Jones proteiner) och på ett normalt 

urinprov, utan Bence Jones proteiner. Proven kördes på 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES geler från tre batcher. Alla testade patologiska prov gav 

identiska resultat på varje gel samt typiska mönster som förväntades för den typ av prov som testades och inga monoklonala band detekterades efter 

immunofixering av det normala urinprovet. 

Tillförlitlighet 

Tjugonio (29) patologiska urin- och serumprov (21 urin- och 8 serumprov) med en eller flera kappa eller lambda Bence Jones proteiner, och sju prov 

(6 urin- och 1 serumprov) utan Bence Jones proteiner, kördes på Hydrasys instrumentet och med HYDRAGEL 9 BENCE JONES proceduren och ett 

annat kommersiellt tillgängligt agarose gel system för immunofixering. Uppnådda resultat för de två immunofixeringsprocedurerna stämde helt 

överens: identiska band detekterades hos alla patologiska prov för varje system eller procedur, och inga monoklonala band detekterades efter 

immunofixering av de normala proven. 

BIBLIOGRAFI 



1994, 397 pp. 

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ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

Τα κιτ HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES και HYDRAGEL 9 BENCE JONES είναι 

σχεδιασµένα για την ποιοτική ανίχνευση και ταυτοποίηση των πρωτεϊνών Bence Jones, µονοκλωνικές ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες κάππα 

ή λάµδα, σε ανθρώπινο ορό ή ούρα, µε ηλεκτροφορητική ανοσοκαθήλωση. Η ανίχνευση πρωτεϊνών Bence Jones χρησιµεύει ως µέσο 

ποιοτικής εκτίµησης κατά την ταυτοποίηση µονοκλωνικών γαµµαπαθειών. 

Κάθε πηκτή αγαρόζης προορίζεται για την ανάλυση : 

- ενός δείγµατος στο κιτ HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- δύο δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- τεσσάρων δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- εννέα δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Για In Vitro ∆ιαγνωστική Χρήση. 

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

Οι µη φυσιολογικές ζώνες στα ηλεκτροφορήµατα πρωτεϊνών ορού και ούρων, ιδιαίτερα εκείνες που αντιστοιχούν σε β- και γ-σφαιρίνες, 

είναι πάντα ύποπτες ως πιθανές µονοκλωνικές πρωτεΐνες και εποµένως ως ένδειξη µονοκλωνικής γαµµαπάθειας. Για την ταυτοποίηση 

αυτών των µη φυσιολογικών ζωνών, εφαρµόζεται η τεχνική της ανοσοκαθήλωσης. 

Η ηλεκτροφόρηση µε ανοσοκαθήλωση είναι µια απλή τεχνική η οποία επιτρέπει τη σταθεροποίηση in situ των πρωτεϊνών µετά την 

ηλεκτροφόρηση, καθώς σχηµατίζονται µη διαλυτά συµπλέγµατα των πρωτεϊνών µε τα αντίστοιχα αντισώµατα. 

Η δοκιµασία για τις πρωτεΐνες Bence Jones πραγµατοποιείται µε το ηµι-αυτοµατοποιηµένο σύστηµα HYDRASYS και περιλαµβάνει όλα τα 

απαραίτητα βήµατα για τη λήψη gel έτοιµων για ερµηνεία : 

1. Το δείγµα ηλεκτροφορείται ταυτόχρονα σε έξι ίχνη σε αλκαλική γέλη αγαρόζης. 

2. Μετά την ηλεκτροφόρηση, ένα ίχνος (ELP) χρησιµεύει ως ίχνος αναφοράς παρέχοντας το ηλεκτροφορητικό προφίλ των πρωτεϊνών 

του δείγµατος. Τα υπόλοιπα πέντε ίχνη υφίστανται ανοσοκαθήλωση µε αντίστοιχους αντιορούς : τριδύναµος έναντι βαρέων αλύσων 

(γάµµα, άλφα και µι), έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλύσων κάππα, έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών 

αλύσων λάµδα, έναντι ελεύθερων ελαφρών αλύσων κάππα και έναντι ελεύθερων ελαφρών αλύσων λάµδα. 

3. Οι µη κατακρηµνισθείσες διαλυτές πρωτεΐνες αποµακρύνονται από το gel µε στύπωµα και έκπλυνση. Το ίζηµα του συµπλέγµατος 

αντιγόνου – αντισώµατος παγιδεύεται στο στρώµα του gel. 

4. Οι κατακρηµνισθείσες πρωτεΐνες γίνονται ορατές µε χρώση µε όξινη ιώδη χρωστική. Η περίσσεια χρωστικής αποµακρύνεται µε όξινο 

διάλυµα. 

5. Οι ανοσοκαθηλωµένες ζώνες συγκρίνονται στη συνέχεια µε τις αντίστοιχες ύποπτες ζώνες του ηλεκτροφορητικού προφίλ του 

δείγµατος και ταυτοποιούνται σύµφωνα µε την αντίδραση ή την απουσία αντίδρασης µε κάθε αντιορό. 

Η απλή και γρήγορη αυτή τεχνική παρέχει σαφείς και ευχερώς ερµηνευόµενες εικόνες. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES ΚΑΙ HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT PN 4821 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT PN 4822 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT PN 4824 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KIT PN 4883* Gel αγαρόζης (έτοιµα προς χρήση) 10 gel 10 gel 80 gel Ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος (έτοιµες προς χρ.) 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 80 συσκ. των 2 Όξινη ιώδης χρωστική (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 75 mL 1 φιαλίδιο, 75 mL 8 φιαλίδια, 75 mL έκαστο Μονιµοποιητικό διάλυµα (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 14.4 mL Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι γάµµα, άλφα, 1 φιαλίδιο, 10.8 mL µι βαρέων αλυσίδων (τριδύναµος αντιορός) (έτοιµος προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι ελεύθερων και 1 φιαλίδιο, 10.8 mL συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων κάππα (έτοιµο προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά ελεύθερων και 1 φιαλίδιο, 10.8 mL συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων λάµδα (έτοιµο προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι 1 φιαλίδιο, 10.8 mL ελεύθερων αλυσίδων κάππα (έτοιµο προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι 1 φιαλίδιο, 10.8 mL ελεύθερων αλυσίδων λάµδα (έτοιµο προς χρήση) Εφαρµογείς (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 2 συσκ. των 10 24 συσκ. των 10 ∆ιηθητικά χαρτιά - Λεπτά 1 συσκ. των 10 1 συσκ. των 10 8 συσκ. των 10 ∆ιηθητικά χαρτιά - Κτενοειδή 1 συσκ. των 10 2 συσκ. των 10 24 συσκ. των 10 

| ∆ιηθητικά χαρτιά - Αδρά | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 8 συσκ. των 10 | 


ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το µονιµοποιητικό διάλυµα και οι αντιοροί παρέχονται χωριστά από τα κιτ µε εξαίρεση το MAXI-KIT (Βλέπε ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ 

ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ). 

ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιµοποιούνται πάντα µαζί και σύµφωνα µε τις οδηγίες χρήσης. 

ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ. 

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Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά

1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ 


Προετοιµασία 

Τα gel αγαρόζης είναι έτοιµα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει: αγαρόζη, 0.8 g/dL, ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.1 ± 0.1, πρόσθετα, 

µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Τα gel αγαρόζης περιέχουν 0.31 % βαρβιτάλη και 0.34 % νατριούχο βαρβιτάλη. Μην το καταπίνετε! Αν καταποθεί, 

αναζητήστε αµέσως ιατρική συµβουλή! 

Χρήση 

Μέσο για ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών και ανοσοκαθήλωση. 

Φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης 

Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου (15 έως 30 °C) ή στο ψυγείο (2 έως 8 °C). (Το βέλος 

στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Είναι σταθερά µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των gel. 

Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή θερµότητας. Αποφύγετε τις µεγάλες διακυµάνσεις θερµοκρασίας κατά τη 

φύλαξη. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τα gel όταν : 

(i) σχηµατιστούν κρύσταλλοι ή ίζηµα στην επιφάνεια του gel ή αν η υφή του gel γίνει πολύ µαλακή (όλα αυτά προκύπτουν αν το gel 

καταψυχθεί), 

(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή µούχλα, 

(iii) υπάρχει µεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα υγρού στο κουτί του gel (αποτέλεσµα της εξίδρωσης του ρυθµιστικού διαλύµατος 

από το gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης). 

2. ΤΑΙΝΙΕΣ ΜΕ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Σπογγώδεις ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα έτοιµες προς χρήση. Καθεµιά περιέχει: ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.1 ± 0.3, 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το ρυθµιστικό διάλυµα στις ταινίες περιέχει 0.92 % βαρβιτάλη, 1.03 % νατριούχο βαρβιτάλη και 0.30 % αζίδιο του 

νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν καταποθεί, αναζητήστε αµέσως ιατρική συµβουλή! Όταν το πετάτε αποφύγετε επαφή µε οξέα, µόλυβδο 

ή χαλκό, καθώς µπορεί να σχηµατιστούν εκρηκτικές ή τοξικές ενώσεις µε το αζίδιο του νατρίου. 

Χρήση 

Οι ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα λειτουργούν ως δεξαµενή ρυθµιστικού διαλύµατος για την ηλεκτροφόρηση και εξασφαλίζουν επαφή 

µεταξύ του gel και των ηλεκτροδίων. 


Φυλάσσετε τις ταινίες οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. (Το βέλος στην πρόσθια επιφάνεια 

του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). 

Είναι σταθερά µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και της συσκευασίας των ταινιών. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τις ταινίες αν η συσκευασία τους έχει ανοιχθεί και οι ταινίες έχουν στεγνώσει. 

3. ΟΞΙΝΗ ΙΩ∆ΗΣ ΧΡΩΣΤΙΚΗ 


Φιαλίδιο µε πυκνό διάλυµα όξινης ιώδους χρωστικής προς αραίωση στα 300 mL µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. 

Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ≈ 2, ιώδη χρωστική, 0.2 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 3.25 %, 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για χρώση των gel µετά από ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών και ανοσοκαθήλωση. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυµα χρωστικής είναι σχεδιασµένο για χρώση µόνο 10 gel. Αλλάξτε το διάλυµα µετά από 10 διαδικασίες χρώσης. 


Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα χρωστικής είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας 

του κιτ και των φιαλιδίων. Το διάλυµα εργασίας είναι σταθερό για 6 µήνες. 

4. ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ (PN 4883) 


Το µονιµοποιητικό διάλυµα είναι έτοιµο προς χρήση. Περιέχει: όξινο διάλυµα, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες 

συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. Για την εύκολη αναγνώρισή του και την παρακολούθηση της χρήσης του, το µονιµοποιητικό 

διάλυµα είναι χρωµατισµένο µε µη επιβλαβή χρωστική η οποία ταιριάζει µε το χρώµα της ετικέττας του φιαλιδίου. 

Χρήση 

Για τη µονιµοποίηση των ηλεκτροφορητικά διαχωρισµένων πρωτεϊνών του ίχνους αναφοράς (ELP). 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το µονιµοποιητικό διάλυµα είναι ειδικό για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε τις καλύπτρες 1, 2, 4 και 9 BENCE JONES. 

ΠΡΟΣΟΧΗ: Προς αποφυγή οποιασδήποτε ανάµιξης των αντιδραστηρίων, τοποθετήστε προσεκτικά το καπάκι στο αντίστοιχο φιαλίδιο µετά 

από κάθε χρήση. 


Φυλάσσετε το µονιµοποιητικό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

Το µονιµοποιητικό διάλυµα πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

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5. ΑΝΤΙΟΡΟΙ (µε το PN 4883) 


Έτοιµοι προς χρήση. Όλοι οι αντιοροί είναι προερχόµενες από θηλαστικά πλήρεις αντι-ανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες. Για την εύκολη 

αναγνώριση των αντιορών και την παρακολούθηση της χρήσης τους, οι αντιοροί είναι χρωµατισµένοι µε ευδιάκριτες µη επιβλαβείς 

χρωστικές οι οποίες ταιριάζουν µε το χρώµα της ετικέττας του φιαλιδίου. 

Όταν ο αντιορός παρουσιάζει ελαφρά θολερότητα, αφήστε το φιαλίδιο του αντιορού σε θερµοκρασία δωµατίου για τουλάχιστον 10 min. 

Με τον τρόπο αυτό θα πρέπει το διάλυµα να ξαναγίνει διαυγές. Ωστόσο, αν η θολερότητα παραµένει, δεν θα επηρεάσει την ανοσολογική 

αντίδραση. Σε περίπτωση σχηµατισµού αδιάλυτου ιζήµατος, συνιστάται να φυγοκεντρηθεί ο αντιορός για 5 min στις 3000 rpm. 

Χρήση 

Για ανοσοκαθήλωση ηλεκτροφορηµένων πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Οι αντιοροί είναι ειδικοί για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε τις καλύπτρες 1, 2, 4 και 9 BENCE JONES. 

Οι αντιοροί µπορεί να προέρχονται από διαφορετικά είδη ζώων. Μην αναµιγνύετε δύο αντιορούς από διαφορετικά φιαλίδια, ακόµη και µε 

την ίδια ειδικότητα, και αλλάζετε ΠΑΝΤΑ το ρύγχος της πιπέττας όταν αλλάζετε φιαλίδια αντιορού. 

ΠΡΟΣΟΧΗ: Προς αποφυγή οποιασδήποτε ανάµιξης των αντιδραστηρίων, τοποθετήστε προσεκτικά το καπάκι στο αντίστοιχο φιαλίδιο µετά 

από κάθε χρήση. 


Φυλάσσετε τους αντιορούς στο ψυγείο (2 έως 8 °C). Είναι σταθεροί µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της 

συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κατά τη µεταφορά, οι αντιοροί µπορούν να παραµείνουν εκτός ψυγείου (στους 15 ως 30 °C) επί 15 ηµέρες χωρίς δυσµενείς 

επιδράσεις στην απόδοσή τους. 

6. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ 

Χρήση 

Εφαρµογείς µιας χρήσης για τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσετε τους εφαρµογείς σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

7. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΛΕΠΤΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης, λεπτά απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα της υγρασίας από την επιφάνεια του gel πριν την τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

8. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΚΤΕΝΟΕΙ∆Η 

Χρήση 

Μιας χρήσης, αδρά απορροφητικά κτενοειδή χαρτιά για στύπωµα της περίσσειας µονιµοποιητικού διαλύµατος και αντιορών από την 

επιφάνεια του gel µετά την ανοσοκαθήλωση. 

9. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - Α∆ΡΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης, αδρά απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα των µη κατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από την επιφάνεια του gel µετά την 

ανοσοκαθήλωση. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 

1. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ ΑΝΤΙΟΡΩΝ ΚΑΙ ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟΥ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ (για τα κιτ 4821, 4822 και 4824) 

Η συσκευασία των αντιορών GAM, K, L και διαλύµατος µονιµοποίησης για ανοσοκαθήλωση, µε απλή κάλυψη(standard mask), SEBIA 

PN 4835, περιέχει 3 φιαλίδια αντιορού (αντι-γάµµα, άλφα, µι και αντι-κάππα (ελεύθερες και συνδεδεµένες ελαφρές αλυσίδες) και αντιλάµδα 

(ελεύθερες και συνδεδεµένες ελαφρές αλυσίδες) (1 mL έκαστο) και 1 φιαλίδιο διαλύµατος µονιµοποίησης, 2.5 mL. Οι αντιοροί είναι 

ειδικοί για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε τις καλύπτρες 1, 2, 4 και 9 BENCE JONES. 

1.1 ΑΝΤΙΟΡΟΙ 

Βλ. προηγούµενη παράγραφο 5. 

1.2 ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 

Βλ. προηγούµενη παράγραφο 4. 

2. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ ΑΝΤΙΟΡΩΝ ΓΙΑ ΕΛΕΥΘΕΡΕΣ ΕΛΑΦΡΕΣ ΑΛΥΣΙ∆ΕΣ (για τα κιτ 4821, 4822 και 4824) 

Η συσκευασία των αντιορών για ανοσοκαθήλωση κ και λ ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων, µε απλή κάλυψη (standard mask), SEBIA, PN 4836, 

περιέχει ένα φιαλίδιο αντιορού αντι-κάππα και ένα φιαλίδιο αντιορού αντι-λάµδα, 1 mL έκαστο. Οι αντιοροί είναι ειδικοί για τη διαδικασία 

ανοσοκαθήλωσης µε τις καλύπτρες 1, 2, 4 και 9 BENCE JONES. 

Προετοιµασία, χρήση, φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης : Βλ. προηγούµενη παράγραφο 5. 

3. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ 


Κάθε φιαλίδιο πυκνού ∆ιαλύµατος Αποχρωµατισµού (SEBIA, PN 4540, 10 φιαλίδια, 100 mL έκαστο) αραιώνεται έως όγκου 100 λίτρων µε 

απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Είναι ευχερές να αραιώνονται µόνο 5 mL του πυκνού διαλύµατος σε όγκο 5 λίτρα, τον όγκο του 

περιέκτη του διαλύµατος αποχρωµατισµού. Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας αποχρωµατισµού περιέχει: κιτρικό οξύ, 0.5 g/dL. 

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Χρήση 

Για αποχρωµατισµό, δηλαδή αφαίρεση της περίσσειας χρωστικής από τη γέλη. 

Για καθαρισµό του τµήµατος χρώσης µετά το στάδιο της πλύσης. 

Για την εξουδετέρωση της οξύτητας του διαλύµατος αποχρωµατισµού, προσθέστε 15 mL διαλύµατος 50 % υδροξειδίου του νατρίου, στο 

κενό δοχείο αχρήστων. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Το διάλυµα εργασίας είναι σταθερό για µια εβδοµάδα σε 

θερµοκρασία δωµατίου σε κλειστό δοχείο. Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

Για να αποτρέψετε πολλαπλασιασµό µικροβίων στο αραιωµένο διάλυµα αποχρωµατισµού αν πρόκειται να το φυλάξετε για περισσότερο 

από µια εβδοµάδα, προσθέστε 5 µL/dL ProClin 300. 

Το διάλυµα εργασίας στο οποίο έχει προστεθεί ProClin είναι σταθερό σε κελιστό δοχείο σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

4. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΠΛΥΣΗΣ HYDRASYS 


Κάθε φιαλίδιο του πυκνού ∆ιαλύµατος Πλύσης HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 φιαλίδια, 80 mL το καθένα) αραιώνεται σε όγκο 5 λίτρα, µε 

απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας περιέχει : αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα pH 8.8 ± 0.3, αζίδιο του 

νατρίου. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το πυκνό διάλυµα πλύσης περιέχει 0.625 % αζίδιο του νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν καταποθεί, αναζητήστε αµέσως 

ιατρική συµβουλή! Το αζίδιο του νατρίου µπορεί να οδηγήσει στο σχηµατισµό εκρηκτικών ή τοξικών ενώσεων ερχόµενο σε επαφή µε οξέα, 

µόλυβδο ή χαλκό. Πάντοτε ξεπλένετε µε άφθονο νερό όταν το πετάτε. 

Χρήση 

Το διάλυµα πλύσης χρησιµεύει για την αποµάκρυνση των µη κακατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από τα gel. Χρησιµεύει επίσης για 

καθαρισµό του θαλάµου χρώσης του HYDRASYS. Χρησιµοποιείτε το περιοδικά, π.χ. αν το όργανο χρησιµοποιείται καθηµερινά, πλένετε το 

θάλαµο χρώσης κάθε εβδοµάδα. 

∆είτε το φύλλο οδηγιών για οδηγίες χρήσης. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα και το διάλυµα εργασίας σε κλειστά δοχεία σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερά µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες των φιαλιδίων. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

5. ΧΛΩΡΙΟΝΑΤΡΙΟΥΧΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Ετοιµάστε διάλυµα 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl σε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. 

Χρήση 

Για την αραίωση δειγµάτων, εφόσον χρειάζεται. 


Φυλάσσετε το διάλυµα NaCl σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Πετάξτε το µετά από 3 µήνες ή αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση 

λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. Για µεγαλύτερες περιόδους διατήρησης, προσθέστε αζίδιο του νατρίου, 0.1 g/dL. 

ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 ή PN 1211. 

2. Σύστηµα µικροπιπεττών, χειροκίνητο ή αυτόµατο, όπως το HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ως εναλλακτικός τρόπος φόρτωσης των 

εφαρµογέων δειγµάτων. 

3. Θάλαµος Υγρής Φύλαξης, PN 1270, παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

4. Κιτ περιεκτών παρεχόµενο µε το HYDRASYS. 

5. Οδηγός µήτρας SEBIA παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

6. Κιτ συµπληρωµατικών εξαρτηµάτων για το HYDRASYS IF SEBIA, PN 1260. 

7. Κιτ συµπληρωµατικών εξαρτηµάτων για το HYDRASYS 1 IF / 1 BENCE JONES, SEBIA, PN 1267. 

8. Κιτ συµπληρωµατικών εξαρτηµάτων για το HYDRASYS 9 BENCE JONES, SEBIA, PN 1266. 

9. Πιπέττες: 10 µL και 200 µL. 

∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ 

Λήψη και διατήρηση δειγµάτων 

• Η ανάλυση γίνεται γενικά σε φρέσκα δείγµατα ούρων. 

Αν χρειάζεται, τα δείγµατα µπορούν να φυλάσσονται επί ως µια εβδοµάδα στο ψυγείο (2 ως 8 °C). Για µεγαλύτερες περιόδους 

διατήρησης, καταψύξτε τα δείγµατα. Κατάψυξη των δειγµάτων ούρων µε HEPES 0.1 M (pH 6.75) και αζίδιο του νατρίου, 0.02 g/dL, 

βελτιώνει τη σταθερότητα τους. Τα κατεψυγµένα δείγµατα είναι σταθερά για τουλάχιστον ένα µήνα. Τα αποψυγµένα δείγµατα µπορεί 

να δώσουν ελαφρά σηµάδια στο σηµείο εφαρµογής οφειλόµενα σε µετουσίωση πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αποφύγετε το βορικό οξύ ως συντηρητικό. 

• Οι οροί πρέπει να λαµβάνονται σύµφωνα µε τις καθιερωµένες διαδικασίες στην κλινική εργαστηριακή πράξη. Αν χρειάζεται, τα δείγµατα 

µπορούν να φυλάσσονται επί ως µια εβδοµάδα στο ψυγείο (2 ως 8 °C). Για µεγαλύτερες περιόδους διατήρησης, καταψύξτε τα δείγµατα. 

Τα κατεψυγµένα δείγµατα είναι σταθερά για τουλάχιστον ένα µήνα. Τα αποψυγµένα δείγµατα µπορεί να δώσουν ελαφρά σηµάδια στο 

σηµείο εφαρµογής οφειλόµενα σε µετουσίωση πρωτεϊνών ή λιποπρωτεϊνών. 

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Προετοιµασία των δειγµάτων 

Ούρα 

Η ανάλυση γίνεται σε µη συµπυκνωµένα ούρα. Το επίπεδο ανίχνευσης της πρωτεΐνης Bence Jones βρίσκεται γενικά µεταξύ 1 και 5 mg/dL. 

Συµπυκνώστε τα ούρα αν απαιτείται από τις καθιερωµένες πρακτικές στο εργαστήριο ή αν απαιτείται µεγαλύτερη ευαισθησία. 20 – 

100πλάσια συγκέντρωση είναι γενικά επαρκής. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η διάχυση των δειγµάτων ούρων στα άκρα του εφαρµογέα µπορεί να παρακωλύεται όταν τα ούρα είναι θολά. Συνιστάται η 

αποµάκρυνση των σωµατιδίων µε φυγοκέντρηση (π.χ. 10 min στις 3,000 rpm) ή διήθηση (π.χ. ηθµός 0.45 µm). 

Οροί 

Εκτός από τα ούρα µπορεί να αναλυθεί και ορός για πρωτεΐνη Bence Jones. 

Αραιώστε το ορό µε φυσιολογικό ορό ή µέσο αραίωσης για ανοσοκαθήλωση το οποίο έχει προηγουµένως αραιωθεί 1/4 (1 µέρος µέσο 

αραίωσης µε 3 µέρη απεσταγµένου ή απιονισµένου ύδατος): 1/10 για τα ίχνη ELP, GAM, K και L (1 µέρος ορού, 9 µέρη αραιωµένου µέσου 

αραίωσης ή φυσιολογικού ορού) και 1/3 (1 µέρος ορού, 2 µέρη αραιωµένου µέσο αραίωσης ή φυσιολογικού ορού) για τα ίχνη Kf και Lf. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Αν το επίπεδο ολικής ανοσοσφαιρίνης είναι < 0.5 g/dL, συνιστάται να χρησιµοποιούνται µικρότερες αραιώσεις των 

δειγµάτων: 1 µέρος µέσο αραίωσης, 3 µέρη απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Για παράδειγµα, αραιώστε 1/5 τον ορό για τα ίχνη ELP, GAM, 

K και L (1 µέρος ορού, 4 µέρη αραιωµένου διαλύτη ή φυσιολογικού ορού) και (1 µέρος ορού, 1 µέρος αραιωµένου διαλύτη ή φυσιολογικού 

ορού) για τα ίχνη Kf και Lf. 

Για ανάλυση Ig D και/ή Ig E, εφαρµόστε τις ίδιες αραιώσεις µε εκείνες για τις ελεύθερες και συνδεδεµένες κάππα και λάµδα ελαφρές 

αλυσίδες. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΕΙΣ: 

• Αποφύγετε δείγµατα πλάσµατος. Το ινωδογόνο δίνει µια ζώνη κοντά στο σηµείο εφαρµογής, η οποία θα µπορούσε να εκληφθεί ως 

µονοκλωνική πρωτεΐνη. 

• Μερικές φορές τα ούρα περιέχουν υψηλές συγκεντρώσεις αλάτων. Αυτό µπορεί να προκαλέσει παραµόρφωση του gel κατά την 

ηλεκτροφόρηση και συνεπώς αλλοίωση των προφίλ ηλεκτροφόρησης. Αν η αλλοίωση αυτή καθιστά την ερµηνεία των αποτελεσµάτων 

ανακριβή, τα ούρα πρέπει να απαλλαγούν από τα άλατα. 

• Λόγω βακτηριακής επιµόλυνσης, η ανοσοσφαιρίνη (παραπρωτεΐνη) µπορεί να υποστεί πρωτεόλυση. Αυτό θα οδηγούσε σε θετική 

αντίδραση µε τον ορό έναντι των ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. Σε αυτήν την περίπτωση, µια παραπρωτεΐνη του ορού η οποία 

αποβάλλεται στα ούρα µπορεί να δώσει µια µονοκλωνική ζώνη µε τον τριδύναµο αντιορό και µε έναν από τους αντιορούς έναντι 

ελαφρών συνδεδεµένων και ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων και µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

• Ο πολυµερισµός των πρωτεϊνών Bence Jones γενικά µειώνει την ευαισθησία ανίχνευσης µε τους αντιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών 

αλυσίδων, καθώς ο πολυµερισµός µπορεί να αποκλείσει τους επιτόπους οι οποίοι κανονικά αντιδρούν µε αυτούς τους αντιορούς. Όταν 

δεν επιτυγχάνεται ανίχνευση και υπάρχει υποψία πρωτεϊνών Bence Jones, αποπολυµερίστε πριν την ηλεκτροφόρηση: αναµίξτε 100 µL 

ούρων µε 5 µL βήτα-µερκαπτοαιθανόλη αραιωµένη 1:10 µε φυσιολογικό ορό. 

∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ 

Το σύστηµα HYDRASYS είναι ένα ηµι-αυτοµατοποιηµένο πολυπαραµετρικό όργανο. Τα αυτοµατοποιηµένα στάδια λειτουργίας 

περιλαµβάνουν την επεξεργασία των gel αγαρόζης HYDRAGEL µε την ακόλουθη σειρά: εφαρµογή δείγµατος, ηλεκτροφόρηση, επώαση µε 

µονιµοποιητικό διάλυµα και αντιορούς, στέγνωµα, χρώση, αποχρωµατισµός και τελικό στέγνωµα. Τα µη αυτοµατοποιηµένα στάδια 

περιλαµβάνουν το χειρισµό των δειγµάτων και των gel, την εφαρµογή µονιµοποιητικού διαλύµατος και αντιορών και τη ρύθµιση της 

συσκευής για λειτουργία. 

∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙ∆ΙΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ ΤΟΥ HYDRASYS. 

I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 

1. Θέστε το HYDRASYS σε λειτουργία. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES ή HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (ανάλυση 2 δειγµάτων), δύο 

εφαρµογείς για το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (ανάλυση 4 δειγµάτων) ή τρεις εφαρµογείς για το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, 

σε µια επίπεδη επιφάνεια µε τους αριθµούς των βοθρίων στη δεξιά πλευρά (Εικ. 1). 

- Εφαρµόστε 10 µL ορού σε κάθε βοθρίο. Φορτώστε κάθε εφαρµογέα εντός 2 min. 

| ΙΧΝΟΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ/ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗΣ | 

ΒΟΘΡΙΑ ΑΡ. : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ∆ΕΙΓΜΑ ΑΡ. 1 Ή 3 2 3 4 5 6 7 ∆ΕΙΓΜΑ ΑΡ. 2 Ή 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES ∆ΕΙΓΜΑ ΑΡ. 1, 4 Ή 7 1 2 3 4 5 6 ∆ΕΙΓΜΑ ΑΡ. 2, 5 Ή 8 7 8 9 10 11 12 

| ∆ΕΙΓΜΑ ΑΡ. 3, 6 Ή 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Στο HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, τα βοθρία αρ. 1, 8 και 15 δεν χρησιµοποιούνται. Μπορούν να σηµειωθούν µε έναν 

µαρκαδόρο για να αποφευχθεί λανθασµένη τοποθέτηση δείγµατος σε αυτά. 

- Τοποθετήστε τον/τους εφαρµογέα/είς στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον/τους από το πλαστικό 

προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών). 

- Αφήστε τα δείγµατα να διαχυθούν στα δόντια για 5 min µετά την τοποθέτηση του τελευταίου δείγµατος. 

Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες. 

3. Ανοίξτε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης και σηκώστε τους φορείς των ηλεκτροδίων και των εφαρµογέων. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Ποτέ µην κλείνετε το καπάκι ενώ οι φορείς είναι σηκωµένοι! 

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4. Επιλέξτε το πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης «1 BJ SM/DM» για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES, το «2/4 BJ-UP SM/DM» για το 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ή το «9 BJ SM» για το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, από το µενού της συσκευής (αριστερή πλευρά 

του πληκτρολογίου). 

5. Αφαιρέστε της ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από τη συσκευασία τους, κρατώντας τις από τις πλαστικές τους άκρες. 

Προσαρµόστε τη διάτρητη άκρη των ταινιών στις ακίδες του φορέα ηλεκτροδίων. Το πλαστικό κάλυµµα της ταινίας πρέπει να είναι 

στραµµένο προς το φορέα (Εικ. 2). 

6. Αποσυσκευάστε το gel HYDRAGEL. 

- Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού. 

Αποµακρύνετε αµέσως το χαρτί. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην αφήνετε το διηθητικό χαρτί σε επαφή µε το gel επί µακρόν για να µην αφυδατωθεί. 

- Εισαγάγετε 120 µL απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES ή 200 µL για το HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4 ή το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, µέχρι το κατώτερο τρίτο του πλαισίου που είναι τυπωµένο στην Πλακέτα Ελέγχου 

Θερµοκρασίας της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

- Τοποθετήστε την πλάκα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα του 

τυπωµένου πλαισίου κλίµακας (Εικ. 3). 

- Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας του νερού (Εικ. 3). Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, 

ότι το νερό έχει απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε το τυπωµένο πλαίσιο. 

7. Κατεβάστε τους δύο φορείς. Σε αυτήν τη θέση, οι ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος δεν αγγίζουν τοgel. ΜΗΝ ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ ΦΟΡΕΙΣ 

ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ. 

8. Αφαιρέστε τον/τους εφαρµογέα/είς από τον υγρό θάλαµο. Κρατήστε τον/τους εφαρµογέα/είς από το προστατευτικό κάλυµµα. 

- Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα. 

- Τοποθετήστε τον/τους εφαρµογέα/είς στο φορέα : 

- Με το HYDRAGEL 1 BENCE JONES ή το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 δείγµατα), στη θέση No 6, 

- Με το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 δείγµατα), στις θέσεις No 3 και 9, 

- Με το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, στις θέσεις No 2, 6 και 10. 

Για να αυξήσετε την επαναληψιµότητα της εφαρµογής των δειγµάτων, τοποθετείτε πάντα τους εφαρµογείς στην αριστερή πλευρά 

του φορέα. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα δειγµάτων πρέπει να είναι πάντα στραµµένοι προς το χειριστή (βλ. εικ. 4). 

9. Βεβαιωθείτε ότι οι φορείς είναι κατεβασµένοι. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

10. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Βεβαιωθείτε ότι η είσοδος αερισµού στη δεξιά πλευρά του οργάνου είναι ελεύθερη. 

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι δύο φορείς χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα και ο/οι εφαρµογέας/είς να έρθουν σε επαφή µε την επιφάνεια του 

gel. 

• Ο φορέας των εφαρµογέων δειγµάτων ανυψώνεται. 

• Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται υπό σταθερή ισχύ 10 W για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES και 20 W για το HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4, µέχρι να συµπληρωθούν 42 Vh (για περίπου 9 min) και υπό 20 W µέχρι να συµπληρωθούν 31 Vh (για περίπου 7 min) για το 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, στους 20 °C. 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : 

« AS». 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

II. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗΣ 

1. Ανοίξτε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

2. Αφαιρέστε τον/τους εφαρµογέα/είς και πετάξτε τον/τους. 

3. Σηκώστε και τους δύο φορείς, αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από την πλαστική άκρη τους και πετάξτε τις. 

- Αφαιρέστε και τους δύο φορείς. 

- Σκουπίστε τα ηλεκτρόδια µε µαλακό υγρό απορροφητικό χαρτί. 

- Αφήστε το gel στη θέση του στη µονάδα ηλεκτροφόρησης. 

4. Ετοιµάστε τη µήτρα εφαρµογής των αντιδραστηρίων ως εξής (Εικ. 5): 

- Τοποθετήστε τον οδηγό της µήτρας στο clip συγκράτησης (ο οδηγός µπορεί να παραµένει στη µονάδα ηλεκτροφόρησης µόνιµα). 

- Κρατώντας τη µήτρα από το ωτίο της τοποθετήστε την στον οδηγό (µε το δεξιό clip στην εγκοπή). 

- Χαµηλώστε το πάνω στο gel. 

- Προσαρµόστε τη θέση της µήτρας ώστε να τα βοθρία της να είναι τέλεια ευθυγραµµισµένα µε τα ηλεκτροφορητικά ίχνη (για 

οδηγίες βλ. το κιτ βοηθητικών εξαρτηµάτων για το HYDRASYS 9 BENCE JONES SEBIA, PN 1266). 

5. Τοποθετήστε τα αντιδραστήρια ως εξής: 

Όγκος (µl) ΒΟΘΡΙΟ Μήτρα Μήτρα ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΟ ΧΡΩΜΑ 1, 2 & 4 BJ 9 BJ ELP 40 20 µονιµοποιητικό διάλυµα κίτρινο GAM 25 15 τριδύναµος αντιορός ιώδες K 25 15 αντιορός αντι-κάππα ελαφρές αλυσίδες (ελεύθερες και συνδεδεµένες) πράσινο L 25 15 αντιορός αντι-λάµδα ελαφρές αλυσίδες (ελεύθερες και συνδεδεµένες) µπλε Kf 25 15 αντιορός αντι-κάππα ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες πορτοκαλί 

| Lf | 25 | 15 | αντιορός αντι-λάµδα ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες | κόκκινο | 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για την αποφυγή σφαλµάτων, τα χρώµατα των αντιδραστηρίων εµφανίζονται τόσο στις ετικέττες των φιαλιδίων όσο 

και δίπλα στα βοθρία της µήτρας. 

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HYDRAGEL 9 BENCE JONES : Συνιστάται η τοποθέτηση των αντιορών µε την ακόλουθη σειρά : λάµδα ελεύθερες, κάππα 

ελεύθερες, λάµδα, κάππα και GAM και, τέλος, το µονιµοποιητικό διάλυµα. 

- Αναρροφάτε τα αντιδραστήρια αποφεύγοντας φυσαλίδες αέρα στο ρύγχος της πιπέττας. 

- Τοποθετήστε τα αντιδραστήρια (Εικ. 6) : 

- Κρατήστε την πιπέττα κατακόρυφα και ακουµπήστε το ρύγχος της ελαφρά στο βοθρίο. 

- Εγχύστε το αντιδραστήριο έτσι ώστε να απλωθεί στο βοθρίο χωρίς να παγιδευτούν φυσαλίδες. 

6. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

7. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. Η 

λέξη «[INCUBATION]» εµφανίζεται στην οθόνη. 

ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Επώαση στους 20 °C για 10 min (ελεγχόµενη µε το φαινόµενο Peltier). 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : 

«❊ AS (SM)». 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια της επώασης. 

III. ΑΠΟΜΑΚΡΥΝΣΗ ΤΗΣ ΠΕΡΙΣΣΕΙΑΣ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ 


2. Αποµακρύνετε την περίσσεια αντιδραστηρίων µε το κτενοειδές διηθητικό χαρτί : ένα χαρτί για τις µήτρες 1 BENCE JONES και 

2 BENCE JONES, δύο για τη µήτρα 4 BENCE JONES και τρία για τη µήτρα 9 BENCE JONES (Εικ. 7) : 

- Εισαγάγετε το διηθητικό χαρτί υπό γωνία 30 ° στις σχισµές στο κάτω άκρο των βοθρίων της µήτρας ώστε τα δόντια να αγγίζουν 

την κάθετη πλευρά µακριά από το χειριστή. 

- Αφήστε τα δόντια να ακουµπήσουν µαλακά στο υγρό δίνοντας κλίση 45° στο κτενοειδές διηθητικό χαρτί (Εικ. 8). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Τα δόντια δεν πρέπει να έρχονται σε επαφή µε την πηκτή. Το κτενοειδές διηθητικό χαρτί πρέπει να είναι υπό κλίση 

(45°). Αν είναι κάθετο µπορεί να προκαλέσει βλάβη στο gel. 


ΑΠΟΜΑΚΡΥΝΣΗ ΤΩΝ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Τα αντιδραστήρια αφήνονται να απορροφηθούν από τα βοθρία για 15 sec στους 20 °C. 

• Ακούγεται ένα ηχητικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : « PAP.». 

IV. ΣΤΥΠΩΜΑ ΤΟΥ GEL 

1. Αποµακρύνετε το(α) χαρτί(ιά). 

2. Ελέγξτε αν τα αντιδραστήρια απορροφήθηκαν, όπως µαρτυρούν: 

- η απουσία αντιδραστηρίων από gel. 

- όλο το µήκος των δοντιών έχει χρωµατιστεί. 

Αν η απορρόφηση των αντιδραστηρίων είναι ατελής, επαναλάβετε τη διαδικασία µε το κτενοειδές διηθητικό χαρτί. 

3. Κρατήστε τη µήτρα εφαρµογής αντιδραστηρίων από το ωτίο της, σηκώστε την και αφαιρέστε την. 

4. Τοποθετήστε ένα αδρό διηθητικό χαρτί στο gel: 

- ευθυγραµµίστε την άκρη του διηθητικού χαρτιού µε την άκρη του gel (δώστε του κλίση 45°). 

- χαµηλώστε το πάνω στο gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πιέστε σταθερά σε όλη την επιφάνεια του gel ώστε να εξασφαλιστεί καλή προσκόλληση. 

5. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 


7. Καθαρίστε τη µήτρα µε µικρή βούρτσα (π.χ. οδοντόβουρτσα). ΜΗ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΕ ΑΛΚΟΟΛΗ Ή ∆ΙΑΛΥΤΕΣ. Πριν την 

ξαναχρησιµοποιήσετε, βεβαιωθείτε ότι η µήτρα είναι τελείως στεγνή. Αποµακρύνετε τυχόν σταγονίδια νερού χτυπώντας την σε 

µαλακό χαρτί. 

ΣΤΥΠΩΜΑ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Στύπωµα στους 40 °C, για 3 min. 

• Ακούγεται ένα ηχητικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «❊ PAP.». 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια της επώασης. 

V. ΣΤΕΓΝΩΜΑ ΤΟΥ GEL 


2. Αφαιρέστε το διηθητικό χαρτί και αφήστε το gel στη θέση του. 

3. Κλείστε το καπάκι. 


ΣΤΕΓΝΩΜΑ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Στέγνωµα στους 50 °C ελεγχόµενο µε το φαινόµενο Peltier, για 6 min. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Η θερµοκρασία της πλάκας παραµένει στους 50 °C 

µέχρι να ανοιχθεί το καπάκι. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια του στεγνώµατος. 

VI. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Ανοίξτε το καπάκι. 

2. Αφαιρέστε το στεγνωµένο gel για περαιτέρω επεξεργασία. 

3. Ανοίξτε το στατήρα των gel. Τοποθετήστε το στεγνό gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) στις αύλακες των δύο ράβδων και 

κλείστε τον στατήρα. Βεβαιωθείτε ότι το film είναι σωστά τοποθετηµένο µέσα στον στατήρα (Εικ. 9). 

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4. Τοποθετήστε τον στατήρα στη Μονάδα Επεξεργασίας / Χρώσης των gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν την έναρξη του προγράµµατος επεξεργασίας / χρώσης των gel, ελέγξτε τα ακόλουθα : 

- ο περιέκτης διαλύµατος πλύσης περιέχει τουλάχιστον 400 mL διαλύµατος πλύσης, 

- ο περιέκτης χρωστικής είναι γεµάτος µε 300 mL χρωστικού διαλύµατος, 

- ο περιέκτης διαλύµατος αποχρωµατισµού περιέχει τουλάχιστον 1 λίτρο διαλύµατος αποχρωµατισµού, 

- ο περιέκτης αχρήστων είναι κενός. 

Για τη σύνδεση των γραµµών των αντιδραστηρίων: ανατρέξτε στις πληροφορίες που εµφανίζονται στην οθόνη του οργάνου 

(επιλέξτε: REAGENT LINES). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μην ξεχνάτε να αποφράσσετε τις µη χρησιµοποιούµενες γραµµές. 

5. Επιλέξτε το πρόγραµµα χρώσης «IF ACID VIOLET» από το µενού του οργάνου και αρχίστε τη διαδικασία πατώντας το πλήκτρο 

«START» (πράσινο βέλος στη δεξιά πλευρά του πληκτρολογίου). 

Κατά τα στάδια χρώσης, αποχρωµατισµού και στεγνώµατος, η µονάδα παραµένει κλειδωµένη. 

Μετά το στάδιο ψύξης, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας (ο αερισµός διατηρείται µέχρι την αφαίρεση του 

στατήρα των gel). 

ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ: 

- Η θερµοκρασία της πλάκας της µονάδας ηλεκτροφόρησης µειώνεται από τη στιγµή που ανοίγει το καπάκι µέχρι να φτάσει τους 20 °C 

(σε λιγότερο από 5 min). Τότε µπορεί να αρχίσει νέα ηλεκτροφόρηση. 

- Επαναφέρετε τους φορείς των εφαρµογέων δειγµάτων και των ηλεκτροδίων στη θέση τους. 

- Σκουπίστε την πλάκα ελέγχου της θερµοκρασίας µε µαλακό υγρό απορροφητικό χαρτί. 

VII. ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Αφαιρέστε τον στατήρα των gel από τη µονάδα, ανοίξτε τον και αφαιρέστε το στεγνό gel. 

2. Αν χρειάζεται, καθαρίστε την πίσω (πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό µαλακό χαρτί. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα µήκη των ηλεκτροφορηµάτων ενδέχεται να είναι ελαφρώς διαφορετικά στα gel µε 2 ή 3 σειρές ανάλυσης, χωρίς 

δυσµενή επίδραση στην απόδοση. 

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Ερµηνεία 

Η παρουσία πρωτεΐνης Bence Jones στα ούρα χαρακτηρίζεται από: 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων 

κάππα ή λάµδα (ίχνη K ή L), 

- η ίδια µονοκλωνική ζώνη ανιχνεύεται µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων (ίχνη KF ή LF), 

- καµία αντίδραση µε τον τριδύναµο αντιορό (ίχνος GAM). 

Παραπρωτεΐνη στον ορό αποβαλλόµενη στα ούρα χωρίς πρωτεΐνη Bence Jones χαρακτηρίζεται από: 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- η ίδια ζώνη ανιχνεύεται µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων και 

- καµία αντίδραση µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Παραπρωτεΐνη στον ορό αποβαλλόµενη στα ούρα σχετιζόµενη µε πρωτεΐνη Bence Jones χαρακτηρίζεται από: 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- η ίδια ζώνη ανιχνεύεται µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων και 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων. Η 

ζώνη αυτή γενικά δεν κινείται στο ίδιο επίπεδο µε εκείνη που ανιχνεύεται µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- η ίδια ζώνη ανιχνεύεται µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Σε σπάνιες περιπτώσεις, οι δύο ζώνες κινούνται µαζί (τότε, η χρώση στο ίχνος των ελαφρών αλυσίδων είναι εντονότερη από ό,τι 

στο ίχνος GAM). 

Πολυµερισµένες µορφές πρωτεΐνης Bence Jones χαρακτηρίζονται από: 

- καµία αντίδραση µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- πολλές ζώνες ανιχνευόµενες µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων, 

- οι ίδιες ζώνες µπορεί επίσης να ανιχνεύονται µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Περιορισµοί 

Η χρήση άλλων αντιορών από τους ειδικούς για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε απλή κάλυψη µπορεί να επηρεάσει τα αποτελέσµατα. 

Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης ζώνης, είναι πιθανό κάποια µονοκλωνικά στοιχεία να µην 

ανιχνεύονται µε αυτήν τη µέθοδο. 

Αντιµετώπιση προβληµάτων 

Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιµασίας και φύλαξης των 

υλικών και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά. 

Τα Φύλλα ∆εδοµένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται από την Τεχνική 

Υπηρεσία του προµηθευτή. 

- 78 -


∆Ε∆ΟΜΕΝΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 


Αναπαραγωγιµότητα 

Μεταξύ των gel 

Τέσσερα δείγµατα ούρων περιέχοντα µη πολυµερισµένες, λάµδα ή κάππα, πρωτεΐνες Bence Jones έτρεξαν το καθένα σε 10 gel από την 

ίδια παρτίδα εφαρµόζοντας την τυπική διαδικασία µε το κιτ HYDRAGEL 4 BENCE JONES. 

Μεταξύ των παρτίδων 

Χρησιµοποιήθηκαν δύο δείγµατα ούρων περιέχοντα µη πολυµερισµένες, λάµδα ή κάππα, πρωτεΐνες Bence Jones. Κάθε δείγµα έτρεξε και 

στα 24 ίχνη δύο gel HYDRAGEL 4 BENCE JONES. Το ένα από τα δύο gel ανοσοκαθηλώθηκε µε αντιορό έναντι ελεύθερων και 

συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων και το άλλο µε αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. Χρησιµοποιήθηκαν gel από τρεις 

διαφορετικές παρτίδες γα κάθε δείγµα. 

Αποτελέσµατα : Οι πρωτεΐνες Bence Jones ταυτοποιήθηκαν ορθά σε κάθε δείγµα και σε όλα τα gel, δεν υπήρξαν ψευδώς θετικά και δεν 

παρατηρήθηκαν διαφορές µεταξύ των επαναλήψεων. 

Ακρίβεια - Ανίχνευση και ταυτοποίηση πρωτεϊνών Bence Jones 

Τριάντα έξι δείγµατα ούρων και δέκα δείγµατα ορού, παθολογικά και φυσιολογικά, αναλύθηκαν µε το κιτ HYDRAGEL 4 BENCE JONES και 

µε άλλο παρόµοιο εµπορικά διαθέσιµο σύστηµα ανοσοκαθήλωσης σε gel αγαρόζης. Τα αποτελέσµατα των δύο διαδικασιών 

ανοσοκαθήλωσης ήταν σε πλήρη συµφωνία µεταξύ τους και µε τα αποτελέσµατα που προσφέρθηκαν από νοσοκοµείο. 


Αναπαραγωγιµότητα στο ίδιο gel και ειδικότητα 

Αναπαραγωγιµότητα στο ίδιο gel καταδείχθηκε σε δύο δείγµατα ούρων (ένα δείγµα µε λάµδα αλυσίδες Bence Jones και ένα µε κάππα 

αλυσίδες Bence Jones) και σε ένα δείγµα ορού µε παραπρωτεΐνη ελαφράς αλυσίδας λάµδα και πρωτεΐνη Bence Jones λάµδα αλυσίδων. 

Κάθε δείγµα έτρεξε σε δύο παρτίδες gel HYDRAGEL 9 BENCE JONES. Όλες οι επαναλήψεις απέδωσαν όµοια αποτελέσµατα για τις 

2 παρτίδες και αναµενόµενα για τα δείγµατα που αναλύθηκαν. Η ανοσοκαθήλωση ανέδειξε επανειληµµένα τις αναµενόµενες 

µονοκλωνικές ζώνες στα τρία παθολογικά δείγµατα. 

Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel και ειδικότητα 

Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ gel καταδείχθηκε σε οκτώ παθολογικά δείγµατα (πέντε δείγµατα ούρων και τρία δείγµατα ορού µε πρωτεΐνη 

Bence Jones) και σε ένα φυσιολογικό δείγµα ούρων, χωρίς πρωτεΐνη Bence Jones. Τα δείγµατα έτρεξαν σε 10 gel HYDRAGEL 9 BENCE 

JONES από τρεις παρτίδες. Όλα τα αναλυθέντα παθολογικά δείγµατα έδωσαν ίδια αποτελέσµατα σε κάθε gel και αναµενόµενα για το 

είδος του δείγµατος που αναλύθηκε, ενώ δεν ανιχνεύθηκε µονοκλωνική ζώνη στο φυσιολογικό δείγµα ούρων. 

Ακρίβεια 

Είκοσι εννέα παθολογικά δείγµατα ορού και ούρων (8 και 21 αντίστοιχα), µε µία ή περισσότερες κάππα ή λάµδα πρωτεΐνες Bence Jones, 

και επτά δείγµατα (6 ούρων και 1 ορού), χωρίς πρωτεΐνες Bence Jones, αναλύθηκαν µε το κιτ HYDRAGEL 9 BENCE JONES και παρόµοια, 

εµπορικά διαθέσιµη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης σε πηκτή αγαρόζης. Τα αποτελέσµατα των δύο διαδικασιών ανοσοκαθήλωσης ήταν σε 

πλήρη συµφωνία µεταξύ τους : ίδιες ζώνες ανιχνεύθηκαν σε όλα τα παθολογικά δείγµατα και µε τα δύο συστήµατα και δεν ανιχνεύθηκαν 

µονοκλωνικές ζώνες στα φυσιολογικά δείγµατα. 

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 



1994, 397 pp. 

- 79 -


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Tlf : +45 48 14 18 50 

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SEBIA INSTRUKTION - Dansk

3 

4 

2 


SCHÉMAS / FIGURES 

Figure 1 Figure 2 

1 2 3 4 567 8 9 10 11 121314 15 


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

Figure 5 

Figure 6 

sebia 

3 4 

1 2 

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SCHÉMAS / FIGURES 


Figure 9 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

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