HYDRAGEL 7 HR HYDRAGEL 15 HR HYDRAGEL 7 HR HYDRAGEL 15 HR

HYDRAGEL 7 HR Violet Acide / Acid Violet 

Ref. 4102 

HYDRAGEL 15 HR Violet Acide / Acid Violet 

Ref. 4122 

HYDRAGEL 7 HR Amidoschwarz / Amidoblack 

Ref. 4105 

HYDRAGEL 15 HR Amidoschwarz / Amidoblack 

Ref. 4125 

2005/03

UTILISATION 

HYDRAGEL 7 & 15 HR - 2005/03 

L’HYDRAGEL 7 HR et l’HYDRAGEL 15 HR sont des gels d’agarose qui permettent le multifractionnement en tampon alcalin (pH 8,6) des protéines 

du sérum ou de tout autre liquide biologique humain (urine ou liquide céphalo-rachidien, LCR), par électrophorèse dans le système semi-automatique 

HYDRASYS. 

Le système HYDRASYS permet de réaliser toutes les séquences jusqu’à l’obtention du gel prêt pour une analyse qualitative ou quantitative. Les 

protéines séparées sont colorées par une solution de violet acide (analyse qualitative sur sérum, urine ou LCR ou quantitative sur sérum) ou 

d’amidoschwarz (analyse quantitative sur sérum) puis l’excès de colorant est éliminé en milieu acide. 

Pour l’analyse quantitative de sérums uniquement, la densitométrie des gels colorés au violet acide ou à l’amidoschwarz donne une quantification 

relative précise de chaque zone individualisée. 

Chaque gel d’agarose est prévu pour l’analyse de : 

• 7 échantillons dans le kit HYDRAGEL 7 HR, 

• 15 échantillons dans le kit HYDRAGEL 15 HR. 

À usage in vitro exclusivement. 

PRINCIPE DU TEST 

L’électrophorèse des protéines est la méthode de choix en laboratoire d’analyses cliniques pour la recherche des anomalies du profil protéique du 

sérum ou d’autres liquides biologiques humains (LCR ou urine). 

Les techniques d’électrophorèse de zone, effectuées sur différents supports, permettent d’obtenir un fractionnement des protéines en fonction de leur 

charge, dans un tampon de pH donné. L’agarose d’utilisation très facile, a été choisi comme support. La technique HYDRAGEL 7/15 HR permet 

d’obtenir un multifractionnement des protéines en une dizaine de bandes, chaque fraction contenant une ou plusieurs protéines. 

La composition du gel et le choix du colorant (Violet acide ou Amidoschwarz) permettent une excellente résolution et une grande sensibilité, 

particulièrement dans la zone gammaglobuline, l’objectif principal étant de mettre en évidence les profils oligoclonaux. 

L’identification des bandes et l’interprétation qualitative doivent être faites par rapport à un sérum de référence. 

La densitométrie des gels colorés au violet acide ou à l’amidoschwarz donne une quantification relative précise de chaque zone individualisée. 

RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 7 HR ET HYDRAGEL 15 HR 

COMPOSANTS RÉF. N° 4102 RÉF. N° 4122 RÉF. N° 4105 RÉF. N° 4125 Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels 10 gels 10 gels 10 gels Mèches tamponnées (prêtes à l’emploi) 10 sachets de 2 10 sachets de 2 10 sachets de 2 10 sachets de 2 Diluant colorant (solution concentrée) 1 fl. de 60 ml 1 fl. de 60 ml Colorant amidoschwarz (solution concentrée) 1 fl. de 20 ml 1 fl. de 20 ml Colorant violet acide (solution concentrée) 1 fl. de 75 ml 1 fl. de 75 ml Applicateurs (prêts à l’emploi) 

| 1 boîte de 10 (7 dents) 1 boîte de 10 (15 dents) 1 boîte de 10 (7 dents) 1 boîte de 10 (15 dents) Papiers-filtres fins | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS 

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. 

LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. 

1. GELS D’AGAROSE 

Préparation 

Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 8,0 g/l ; tampon tris-barbital, pH 8,6 ± 0,1 ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les gels contiennent 0,18 % de barbital. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! 

Utilisation 

Support pour l’électrophorèse des protéines. 

Conservation, stabilité et signes de détérioration 

Les gels doivent être conservés à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date 

d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet du gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur 

le devant du kit doit être pointée vers le haut). Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur et éviter toute variation 

brutale de température. NE PAS CONGELER. 

Éliminer le gel dans les cas suivants : 

(I) apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ; 

(II) apparition de bactéries ou de moisissures ; 

(III) présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation). 

2. MÈCHES TAMPONNÉES 

Préparation 

Les mèches en éponge tamponnées sont prêtes à l’emploi. Chaque mèche tamponnée contient : tampon tris-barbital, pH 8,7 ± 0,2 ; azoture de 

sodium ; composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les mèches tamponnées contiennent 0,55 % de barbital et 0,30 % d’azoture de sodium. Ne pas avaler ! Très toxique en cas 

d’ingestion ! En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! L’azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou 

toxiques en cas de contact avec des acides, du plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des mèches, éviter tout contact avec ces 

produits. 

Utilisation 

Les mèches en éponge tamponnées jouent un rôle de réservoir de tampon pour l’électrophorèse et assurent le contact entre le gel et les électrodes. 

- 1 - NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français



Les mèches tamponnées peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Elles doivent être conservées horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet des mèches tamponnées. NE PAS CONGELER. 

Éliminer les mèches tamponnées si le sachet est ouvert ou si les mèches sont sèches. 

3. DILUANT COLORANT (Réf. N° 4105 et 4125) 

Préparation 

Le diluant colorant concentré doit être utilisé comme décrit dans le paragrahe " COLORANT AMIDOSCHWARZ ". Il contient une solution acide. 

Utilisation 

Pour la préparation du colorant amidoschwarz. 


Le diluant colorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le 

kit ou sur l’étiquette du flacon de diluant. NE PAS CONGELER. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

4. COLORANT AMIDOSCHWARZ (Réf. N° 4105 et 4125) 

Préparation 

Le colorant amidoschwarz concentré est une solution visqueuse qui peut éventuellement gélifier, ce qui n’affecte absolument pas la qualité de la 

solution finale et son pouvoir de coloration. 

Dans tous les cas, pour obtenir une parfaite reconstitution du colorant, il faut respecter le protocole suivant : 

1. Ajouter environ 15 mL de diluant colorant au flacon d’amidoschwarz concentré. 

2. Refermer soigneusement le flacon. 

3. Agiter très vigoureusement le flacon pendant au minimum 5 secondes. 

4. Verser la solution obtenue dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

5. Renouveler cette opération deux fois, trois fois, si nécessaire. 

6. Verser le reste du diluant dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

7. Compléter à 300 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

8. Agiter parfaitement cette solution pendant 5 à 10 minutes. 

Le colorant est prêt à l’emploi. 

REMARQUE : Une reprise incomplète du colorant peut entraîner une mauvaise coloration de la fraction albumine (baisse du pourcentage ou trou 

blanc dans la fraction). 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; éthylène-glycol, 6,7 % ; composants sans danger aux 


ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. 

La solution diluée est stable pendant 1 mois. 

Ne pas stocker la solution de colorant diluée à proximité d’une source de chaleur. 

5. COLORANT VIOLET ACIDE (Réf. N° 4102 et 4122) 

Préparation 

Le flacon de colorant violet acide concentré doit être complété à 300 ml avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; violet acide, 2 g/l ; éthylène-glycol, 3,25 % ; composants sans danger aux 


ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. La solution diluée 

est stable pendant 6 mois. 

6. APPLICATEURS 

Utilisation 

Applicateurs prédécoupés, à usage unique pour le dépôt des échantillons. 

Conservation 

Les applicateurs doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

7. PAPIERS-FILTRES FINS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption de l’excès de liquide à la surface du gel avant l’application des échantillons. 

Conservation 

Les papiers-filtres fins doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

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RÉACTIFS NÉCESSAIRES 

1. EAU PHYSIOLOGIQUE 

Préparation 

Solution de NaCl 0,15 M (9 g/l) dans l’eau distillée ou déminéralisée. 

Utilisation 

Pour la dilution des échantillons. 


La solution d’eau physiologique peut être conservée à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Éliminer la solution après 3 mois ou s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. Pour une 

conservation prolongée, ajouter 1 g/l d’azoture de sodium. 

2. DÉCOLORANT 

Préparation 

Chaque flacon de décolorant concentré (SEBIA, référence n° 4540 : 10 flacons de 100 ml chacun) doit être dilué au 1/1 000 avec de l’eau distillée ou 

déminéralisée, il permet d'obtenir 100 litres de solution décolorante. Prélever par quantité de 5 ml et compléter à 5 litres avec de l’eau distillée ou 

déminéralisée. 

Après dilution, la solution décolorante contient : acide citrique, 0,5 g/l. 

Utilisation 

Pour la décoloration, c’est-à-dire l’élimination de l’excès de colorant après coloration du gel. 

Pour le rinçage de la cuve de coloration de l’HYDRASYS. 

Pour neutraliser l’acidité du décolorant, mettre dans le flacon de vidange vide, 15 ml de soude à 50 % (solution du commerce). 


Le décolorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou 

sur l’étiquette du flacon de décolorant. Le décolorant dilué est stable pendant 1 semaine à température ambiante, en flacon fermé. 

Éliminer le décolorant dilué s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

En cas de conservation prolongée (au delà d’une semaine) de la solution diluée, ajouter 50 µl/l de ProClin 300 pour prévenir toute prolifération microbienne. 

Le décolorant dilué contenant du ProClin est stable en flacon fermé à température ambiante ou au réfrigérateur jusqu’à la date d’expiration indiquée 

sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

3. SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS 

Préparation 

Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentrée (SEBIA, référence n° 4541 : 10 flacons de 80 ml chacun) doit être complété à 5 litres 

avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution de lavage contient : tampon alcalin, pH 8,8 ± 0,3 ; azoture de sodium. 

ATTENTION : La solution de lavage concentrée contient 0,625 % d'azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! L'azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides, du 

plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des solutions, laver abondamment avec une grande quantité d’eau. 

Utilisation 

Pour le lavage périodique de la cuve de coloration de l’HYDRASYS : Par exemple, pour une utilisation journalière, effectuer un lavage hebdomadaire 

de la cuve de coloration. 

Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d’utilisation. 


Les solutions de lavage concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés. Elles sont stables 

jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. 

Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

4. FLUIDIL 

Préparation 

Le Fluidil (SEBIA, référence n° 4587 : 1 flacon de 5 ml) est prêt à l’emploi. 

Utilisation 

Pour la dilution des échantillons visqueux ou troubles (turbidité induite par la présence d’une cryoglobuline ou d’un cryogel). 


Le Fluidil peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon de 

Fluidil. 

Il ne doit pas y avoir de précipité. 

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES 

1. Système HYDRASYS SEBIA, référence N° 1210 ou N° 1211. 

2. Micropipetteur, manuel ou automatique, tel que HYDRAplus SEBIA, référence N° 1215, pour le chargement des applicateurs. 

3. Chambre humide, référence N° 1270, fournie avec le système HYDRASYS. 

4. Bidons plastiques fournis avec le système HYDRASYS. 

5. Porte-film pour le traitement des demi-gels SEBIA, référence N° 10043110. 

6. Pipettes de 10 µl et 200 µl. 

7. Densitomètre / scanner capable de lire un film de 82 x 51 mm ou 82 x 102 mm à 570 nm (filtre jaune) : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA ou scanner 

équipé du logiciel PHORESIS SEBIA. Se reporter aux instructions de chaque appareil pour son utilisation et sa calibration. 

8. Sérum de contrôle, par exemple, Sérum de Contrôle SEBIA, référence N° 4785. 

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ÉCHANTILLONS À ANALYSER 

Les échantillons à analyser sur HYDRAGEL 7/15 HR peuvent être de trois types : sérum, urine ou liquide céphalo-rachidien (LCR). 

Les protéines du sérum peuvent être quantifiées après coloration au violet acide ou à l’amidoschwarz. 

Prélèvement et conservation des échantillons 

L’analyse se fait sur échantillons frais. Les échantillons doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire d’analyses 

cliniques. Les échantillons peuvent être conservés une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations prolongées, congeler les 

échantillons ; les échantillons congelés sont stables au minimum 1 mois. Les échantillons décongelés peuvent donner, au point de dépôt, une trace 

due à la dénaturation de protéines ou de lipoprotéines. 

La conservation des sérums et des LCR congelés est améliorée par addition à l’échantillon d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

La conservation des urines congelées est améliorée par addition à l’échantillon de tampon HEPES 0,1 M (pH 6,75) et d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

IMPORTANT : Ne pas utiliser de conservateur contenant de l’acide borique. 

Préparation des échantillons 

1. Préparation des échantillons pour analyse qualitative (avec coloration au violet acide) 

Sérum 

Utiliser directement les échantillons non dilués. Après conservation au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) ou congélation, certains sérums (en particulier 

ceux qui contiennent une cryoglobuline ou un cryogel) deviennent visqueux ou troubles. Ces sérums présentent des difficultés de manipulation 

lors du dépôt avec l’applicateur HYDRASYS, car ils ne diffusent que très difficilement sur les dents de l’applicateur. Prétraiter ces sérums avec le 

Fluidil : ajouter 25 µl de Fluidil à 75 µl de sérum, agiter 15 secondes au vortex, puis suivre la technique. 

LCR ou couples LCR/sérum 

L’analyse est réalisée sur des échantillons dont la concentration protéique est d’environ 10 g/l. 

IMPORTANT : La concentration protéique des couples LCR/sérum doit être identique. 

Urines 

L’analyse est réalisée sur des urines non concentrées. Dans le cas où l’on souhaite augmenter la sensibilité de la technique, il est possible d’utiliser 

des urines concentrées. 

- Urines non concentrées : Utiliser directement les échantillons. 

- Urines concentrées : L’analyse est réalisée sur des échantillons dont la concentration protéique est ramenée à environ 5 g/l par 

concentration au moyen d’un dispositif approprié. 

IMPORTANT : Certaines urines contiennent une concentration importante de sels. Il s’ensuit une déformation du gel au cours de la migration qui 

risque de conduire à une perturbation des profils après électrophorèse. Il convient d’éliminer cet excès de sels par une dialyse. 

NOTE : En cas d’urines troubles (concentrées ou non), il est recommandé d’éliminer les particules en centrifugeant les échantillons (pendant 

10 minutes à 3000 rpm) ou par filtration (sur filtre de 0,45 µm) afin d’obtenir une bonne diffusion sur les applicateurs. 

2. Préparation des sérums pour analyse quantitative (avec coloration à l’amidoschwarz ou au violet acide et programme 7/15 HR1) 

Coloration à l’amidoschwarz 

Utiliser directement les échantillons de sérum non dilués. 

Coloration au violet acide 

Diluer au préalable les sérums au 1/4 avec de l’eau physiologique puis suivre la technique. 

Échantillons à éviter 

Ne pas utiliser d’échantillon hémolysé. L’hémolyse entraîne une augmentation des zones alpha-2 et bêta. 

Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène donne une bande proche du point de dépôt. Cette bande peut fausser l’interprétation du test (confusion avec 

une gammapathie). 

TECHNIQUE 

Le système HYDRASYS est un instrument multiparamétrique semi-automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les étapes suivantes : 

application des échantillons, migration électrophorétique, séchage, coloration, décoloration et séchage final. 

Les étapes manuelles sont les suivantes : préparation des échantillons et du gel, lancement des séquences automatiques. 

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS D’HYDRASYS. 

I. PRÉPARATION DE LA MIGRATION 

1. Mettre HYDRASYS sous tension. 

2. Poser un applicateur à plat sur la paillasse, numérotations (puits) vers le haut (Fig. 1). 

- Déposer 10 µl d’échantillon dans chaque puits ; le chargement de l’applicateur ne doit pas excéder 2 minutes. 

- Placer l’applicateur dans la chambre humide, dents vers le haut (en manipulant l’ applicateur par la protection en plastique). Laisser diffuser 

5 minutes après le dépôt du dernier échantillon. Pour une conservation prolongée (8 heures maximum), placer la chambre humide au 

réfrigérateur. Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d’utilisation. 

3. Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

ATTENTION : Ne pas fermer le capot de l’appareil si les chariots sont relevés ! 

4. Sélectionner le programme de migration dans le menu, selon l’analyse souhaitée. 

- Analyse des sérums : Programme «7/15 HR1» pour HYDRAGEL 7 HR et pour HYDRAGEL 15 HR, 

- Analyse des LCR ou couples LCR/sérum : Programme «7/15 HR2» pour HYDRAGEL 7 HR et pour HYDRAGEL 15 HR, 

- Analyse des urines : 

1. non concentrées : Programme «7/15 HR3» pour HYDRAGEL 7 HR et pour HYDRAGEL 15 HR, 

2. concentrées : Programme «7/15 HR2» pour HYDRAGEL 7 HR et pour HYDRAGEL 15 HR. 

5. Sortir les mèches tamponnées de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques. Fixer les mèches sur le chariot porteélectrodes 

à l'aide des languettes perforées. La face de la mèche fixée sur la languette vient en contact avec l'électrode (Fig. 2). 

6. Sortir le gel de son emballage. 

Éliminer rapidement l’excès de liquide en surface, en effleurant le gel avec un papier-filtre fin. 

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ATTENTION : Ne surtout pas laisser le papier-filtre en contact prolongé avec le gel pour éviter sa déshydratation. 

- Déposer 120 µl d'eau distillée ou déminéralisée pour HYDRAGEL 7 HR ou 200 µl pour HYDRAGEL 15 HR sur le plateau de migration dans 

le tiers inférieur du cadre sérigraphié. 

- Placer le gel (face gel orientée vers le haut) sur le plateau contre la barrette, à l'intérieur du cadre sérigraphié (Fig. 3). 

- Donner une forme concave au gel (Fig. 3) et le dérouler sur le plateau jusqu'au contact de la goutte d'eau qui doit se répartir sur toute la 

largeur du gel. Relever légèrement le gel pour éliminer les bulles d'air éventuellement piégées puis dérouler totalement le gel au contact du 

plateau. La goutte d’eau doit s’étaler sous toute la surface du film. 

7. Abaisser l'ensemble des chariots jusqu'en butée. Dans cette position, les mèches ne touchent pas le gel. NE PAS FORCER LA DESCENTE 

DES CHARIOTS. 

8. Sortir l’applicateur de la chambre humide en le manipulant par la protection plastique. 

- Éliminer la protection des dents. 

- Placer l'applicateur en position n° 5 sur le porte-applicateurs. 

IMPORTANT : Les numérotations de l'applicateur sont toujours dirigées vers l'opérateur (Fig. 4). 

9. Fermer le capot du module de migration. 

10. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à gauche du clavier). 

IMPORTANT : Ne rien placer à proximité immédiate de la grille de ventilation (à droite de l'appareil). 

MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente des chariots porte-électrodes et porte-applicateurs pour amener les mèches tamponnées et l’applicateur au contact du gel. 

• Remontée du chariot porte-applicateurs. 

• Programmes "7/15 HR1" et "7/15 HR2" : Migration à 255 V constants, pour HYDRAGEL 7 HR et HYDRAGEL 15 HR, à 20 °C, température contrôlée 

par effet Peltier, jusqu’à 75 Vh accumulés, pendant 18 minutes environ. 

• Programme "7/15 HR3" : Migration à 255 V constants, pour HYDRAGEL 7 HR et HYDRAGEL 15 HR, à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier, 

jusqu’à 40 Vh accumulés, pendant 10 minutes environ. 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Séchage du film pendant 9 minutes à 60 °C, par montée en température du plateau. 

• Refroidissement du plateau, quand la température du plateau atteint 50 °C, un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de 

migration se débloque. Le plateau reste à 50 °C jusqu'à l'ouverture du capot. Après ouverture, la température baisse jusqu’à 20 °C (en moins de 

5 minutes). Une nouvelle migration peut alors être lancée. 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

II. PRÉPARATION DES SÉQUENCES DE TRAITEMENT DU GEL 

1. Ouvrir le capot du module de migration. 

2. Retirer l’applicateur et le jeter. 

3. Relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes, retirer les mèches par les languettes et les jeter. 

4. Récupérer le film pour le traitement suivant. 

5. Nettoyer les électrodes et le plateau de migration avec un papier ouaté humide. 

6. Placer le film sur le porte-film, face gel vers l'opérateur, en procédant comme suit (Fig. 5) : 

- ouvrir le porte-film ; 

- le poser à plat sur la paillasse ; 

- positionner le gel dans les gorges des colonnettes ; 

- refermer le porte-film ; 

- s'assurer que le film soit bien enfoncé dans les gorges des deux colonnettes. 

7. Introduire le porte-film dans le module de traitement / coloration du gel. 

IMPORTANT : Avant de lancer un cycle de coloration, s'assurer que : 

- le flacon de colorant contienne 300 ml de colorant ; 

- le flacon de décolorant contienne 1 litre de décolorant minimum ; 

- le flacon de vidange soit vide. 

Pour le branchement des canaux réactifs : se référer aux instructions affichées sur l’écran de l’appareil (sélectionner la touche : VISU 

CANAUX). 

IMPORTANT : Ne pas oublier d’obturer les canaux non utilisés. 

8. Sélectionner le programme de coloration «HR ACID VIOLET» ou «HR AMIDO» dans le menu. 

Démarrer la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à droite du clavier). 

Pendant toutes les séquences de coloration, décoloration et séchage, le système reste verrouillé. 

Après refroidissement de la cuve, un signal sonore (bip) retentit et le système se débloque (la ventilation se maintient jusqu’à la récupération 

du porte-film). 

III. FIN DU TRAITEMENT DU GEL 

1. Sortir le porte-film du compartiment ; ouvrir le porte-film et retirer le gel sec. 

NOTE : Si des taches bleues résiduelles sont observées sur le gel après coloration / décoloration, une étape de lavage supplémentaire avec 

le programme " LAV. ISOENZ/GEL " permet de les éliminer ou de les atténuer fortement (selon leur intensité) avant lecture au densitomètre / 

scanner. 

2. Si nécessaire, nettoyer le dos du gel (support plastique) avec un papier ouaté humide. 

3. Pour l’analyse quantitative des sérums (coloration au violet acide ou à l’amidoschwarz) lire au densitomètre à 570 nm ou avec un filtre jaune. 

RÉSULTATS 

Contrôle Qualité 

Pour chaque série d’analyses, il est recommandé d’inclure un échantillon normal ou un sérum de contrôle (Sérum de Contrôle SEBIA, référence 

N° 4785). 

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Valeurs (Analyse quantitative) 

La lecture à 570 nm par densitométrie permet de définir les concentrations relatives (pourcentages) de chaque fraction. 


Les valeurs normales (moyenne ± 2 écarts types) pour chaque fraction sur le gel HYDRAGEL 7/15 HR, ont été établies à partir d’une population de 

225 adultes (hommes et femmes), en bonne santé : 

FRACTION HYRYS PHORESIS Albumine 56,2 – 69,0 57,5 – 67,9 Alpha-1 globulines 1,2 – 3,2 1,0 – 3,8 Alpha-2 globulines 7,8 – 13,4 7,2 – 12,8 Bêta globulines 7,4 – 13,4 7,6 – 13,6 

| Gamma globulines | 9,8 – 18,6 | 10,3 – 18,3 | 

Il est recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs normales. 

Interprétation 

Le principe d’interprétation est simple. 

PROTÉINES SÉRIQUES 

L'interprétation est effectuée par comparaison de l'échantillon à analyser avec un échantillon normal. En cas d'augmentation, diminution ou présence 

de fraction supplémentaire, il est nécessaire de poursuivre l'investigation par des tests complémentaires tels que dosages de protéines spécifiques, 

immunoélectrophorèse, immunofixation. 

Parmi les très nombreuses protéines plasmatiques, seules une quinzaine existent en quantité suffisante pour être visualisées sur des gels Haute 

Résolution. Le grand intérêt de la technique HYDRAGEL 7/15 HR est surtout sa grande sensibilité dans la zone cathodique qui permet la détection 

de faibles bandes monoclonales ou oligoclonales (spécialement dans le liquide céphalo-rachidien ou d’autres liquides biologiques). L'interprétation est 

essentiellement qualitative. 

PROTÉINES DU LIQUIDE CÉPHALO-RACHIDIEN 

Toute bande supplémentaire détectée dans la zone des gammaglobulines du LCR sans correspondance dans le sérum devra être confirmée par 

immunofixation (à l’aide des kits HYDRAGEL 3/6 CSF, ou des kits d’immunofixation SEBIA, HYDRAGEL 1/2/4/9 IF) afin de caractériser une synthèse 

intrathécale. La confirmation immunologique est indispensable car il peut exister dans la zone gamma des protéines qui ne sont pas des 

immunoglobulines (fraction tau, anhydrases carboniques, post gamma ou CRP, par exemple). 

NOTE : L’interprétation étant comparative, il est INDISPENSABLE : 

- d’analyser les liquides biologiques (LCR et sérum) prélevés au même moment, en dehors de tout traitement pouvant modifier à court terme le taux 

d’immunoglobulines sériques. 

- de déposer des concentrations protéiques identiques dans les 2 échantillons. Il est donc nécessaire d’effectuer au préalable un dosage des 

protéines totales (ou plus particulièrement un dosage des immunoglobulines), à l’aide de kits adaptés au dosage des protéines en faible 

concentration. 

Le LCR est un milieu biologique à faible taux protéique. La protéinorachie est en moyenne de 0,3 g/l ± 0,15. On y retrouve une quantité relativement 

importante de protéines de faible poids moléculaire, la plupart provenant d'une filtration à partir du sérum, au niveau de la barrière méningée. Pour 

l'analyse sur un gel HYDRAGEL 7/15 HR, le liquide céphalo-rachidien doit être concentré jusqu'à environ 10 g/l. 

Le profil LCR normal met en évidence : 

• la préalbumine, ou transthyrétine : fraction la plus rapide ; 

• l'albumine jusqu'à 75 % du profil protéique ; 

• la zone alpha-1 correspondant essentiellement à l'alpha-1 antitrypsine ; 

• la zone alpha-lipoprotéine ; 

• la zone alpha-2 est très faible. Les protéines de masse moléculaire élevée ne peuvent pas passer au travers de la barrière méningée ; 

• la zone bêta : comportant la transferrine (et en zone bêta-2 : une fraction correspondant à une transferrine moins sialylée) ; 

• la zone gamma : comprenant essentiellement des Ig G, et parfois des Ig A et des Ig M. 

De nombreuses études ont montré une augmentation des gammaglobulines, provenant d'une synthèse des Ig G, au niveau du système nerveux 

central. La stimulation antigénique de cette production d’lg G n'a pas été élucidée. Des hypothèses d'infection virale ou de réaction auto-immune ont 

été avancées. En dehors de la sclérose en plaques, on observe également une augmentation des Ig G, au cours de la maladie démyélinisante 

infantile, au cours de la panencéphalite sclérosante subaiguë, ainsi qu'au cours d'autres maladies infectieuses ou inflammatoires. 

La sclérose en plaques entraîne l’apparition de bandes multiples monoclonales donnant un aspect de répartition oligoclonale des gammaglobulines. 

Ces anomalies apparaissent très rapidement au cours de la maladie, leur intensité peut être très faible ou très forte. Cet aspect oligoclonal a toutefois 

été retrouvé au cours d'autres perturbations du système nerveux central (maladies infectieuses, inflammatoires, ou non inflammatoires), au cours de 

la panencéphalite sclérosante subaigüe, la neurosyphilis, I'encéphalite virale, I'encéphalite méningée, la méningite bactérienne. 

On les a retrouvé, mais beaucoup plus rarement, dans les neuropathies périphériques, les tumeurs, les hydrocéphalies, les maladies dégénératives, 

certaines maladies vasculaires. Tous ces cas ne doivent pas être considérés comme des faux positifs, mais ils indiquent une activité immunologique 

accrue au niveau du système nerveux central. 

Il est impératif dans les cas de LCR à répartition oligoclonale, d'analyser en parallèle le sérum du malade déposé à la même concentration (≈ 10 g/l). 

Dans certaines anomalies Iymphoprolifératives, on peut retrouver l'aspect oligoclonal simultanément dans le sérum et dans le LCR. 

URINE 

L’électrophorèse des urines sur HYDRAGEL 7/15 HR est effectuée pour rechercher un composant monoclonal. Toute bande de la zone gamma ou 

toute augmentation de l’une des zones ß, α1 ou α2 devra être confirmée par immunofixation. 

Des tests complémentaires, dosages néphélémétriques ou électrophorèse sur HYDRAGEL 5 PROTEINURIE SEBIA, référence 4115, sont 

nécessaires pour caractériser les néphropathies tubulaires ou glomérulaires, détectées après électrophorèse dans la technique HYDRAGEL 7/15 HR. 

La technique d’électrophorèse des urines suivie d’une coloration sensible (violet acide) permet d’obtenir un seuil de détection des bandes 

monoclonales (Ig monoclonales, chaînes légères libres) satisfaisant pour la majorité des cas cliniques. Cependant des tableaux cliniques d’amylose 

ou de syndrome de Randall (dépôt de chaînes légères libres) nécessitent pour la confirmation du diagnostic la détection de chaînes légères à faible 

taux. Il sera donc conseillé dans ces cas particuliers de concentrer les urines pour une meilleure sensibilité. 

- 6 -


Tout aspect oligoclonal doit être confirmé par immunofixation à l’aide des kits immunofixation : 

• HYDRAGEL 1 IF SEBIA (référence N° 4301), 

• HYDRAGEL 2/4 IF SEBIA (références N° 4302, 4304 et 4308), 

• HYDRAGEL 9 IF SEBIA (référence N° 4309), 

• HYDRAGEL 3/6 CSF SEBIA (références N° 4350 et 4351), 

• HYDRAGEL 1 BENCE JONES (référence N° 4321), 

• HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES SEBIA (références N° 4322 et 4324). 

Interférences et limites 

Les échantillons décongelés peuvent donner, au point de dépôt, une trace due à la dénaturation de protéines ou de lipoprotéines. 

Ne pas utiliser d’échantillon hémolysé ou de plasma. 

Compte-tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne 

peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales. 

Assistance technique 

Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux. 

Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès 

du Service Technique SEBIA. 

PERFORMANCES 

Analyse qualitative 

Les résultats obtenus sur HYDRAGEL 7/15 HR par analyse qualitative indiquent une très bonne répétabilité et reproductibilité du kit HYDRAGEL 

7/15 HR pour tous les aspects testés. 

L'analyse qualitative de cent seize (116) échantillons différents de sérums, d’urine et de LCR par électrophorèse sur gel HYDRAGEL 7/15 HR et sur 

un autre système en gel d'agarose disponible dans le commerce montre une parfaite corrélation entre les 2 systèmes d'analyse pour la recherche 

d’anomalies du profil protéique, avec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 100 % par rapport à cette dernière technique, calculées selon la 

méthode recommandée (Wendling, 1986). 

La sensibilité de la technique HYDRAGEL 7/15 HR est telle que la limite de détection d’une paraprotéine est de l’ordre de 100 à 300 mg/l pour les 

programmes HR 1 et HR 2 ; et d’une paraprotéine de Bence Jones ou de l’albumine, de l’ordre de 15 à 20 mg/l pour le programme HR 3. 

Analyse quantitative 

Les résultats pour l'ensemble des fractions protéiques (Albumine, Alpha 1, Alpha 2, Bêta et Gamma), les moyennes, les écart-types et les coefficients 

de variations indiquent une très bonne répétabilité et reproductibilité de la technique HYDRAGEL 7/15 HR pour l’analyse quantitative de sérums après 

coloration à l’amidoschwarz et au violet acide ; le coefficient de variation moyen est de 4,0 %. 

Cinquante six (56) sérums ont été analysés par électrophorèse, sur gel HYDRAGEL 7/15 HR avec coloration à l’amidoschwarz et au violet acide, et 

sur un autre système en gel d'agarose disponible dans le commerce. Les résultats quantitatifs montrent une parfaite corrélation entre les 2 systèmes 

d'analyse, avec un coefficient de corrélation moyen de 0,973 et pour les gammaglobulines, une sensibilité moyenne de 87,2 % et une spécificité 

moyenne de 93,2 % par rapport à cette dernière technique, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986). 

Les paramètres de corrélation entre les deux systèmes de gel (y - HYDRAGEL 15 HR) pour chaque fraction sont : 

HYDRAGEL 15 HR (violet acide) HYDRAGEL 15 HR (amidoschwarz) FRACTION Coefficient Pente Intersection-y Limite des % Coefficient Pente Intersection-y Limite des % | 

de corrélation (HYDRAGEL 15 HR) de corrélation (HYDRAGEL 15 HR)| 

Albumine 0,981 0,98 1,89 36,7 – 66,1 0,985 0,96 2,35 36,1 – 67,4 Alpha-1 0,976 0,99 -0,11 1,5 – 7,5 0,982 0,97 -0,03 1,3 – 7,1 Alpha-2 0,982 0,98 -0,14 6,8 – 24,5 0,978 0,96 0,31 5,7 – 24,2 Bêta 0,956 0,91 0,90 5,8 – 19,8 0,918 0,95 0,41 5,4 – 20,0 

| Gamma | 0,991 | 0,99 | -0,16 | 8,3 – 40,0 | 0,990 | 0,94 | 1,05 | 7,2 – 37,5 | 

La sensibilité de la technique HYDRAGEL 7/15 HR est telle que la limite de détection d’une paraprotéine après coloration à l’amidoschwarz et au violet 

acide est de l’ordre de 500 mg/l. 

La technique HYDRAGEL 7/15 HR présente une parfaite linéarité après coloration à l’amidoschwarz ou au violet acide d’un mélange à concentrations 

variables d’albumine (58 g/l) et de gammaglobulines (39 g/l). 

NOTE : Selon la position de la bande monoclonale et le fond polyclonal de la zone des gammaglobulines, le seuil de détection d’une paraprotéine 

peut varier. 

BIBLIOGRAPHIE 

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de sélectivité glomérulaire au cours des glomérulopathies chroniques. Path Biol, 33 : 23-26. 

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sclerosis. Clin Chem, 34 : 764-765. 

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Investigation, 29 : 71-82. 

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laboratoires, 269 : 29-37. 

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in paired serum and cerebrospinal fluid samples. Clin Chem, 30 : 1814-1816. 

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(15) Philipon C. 1989. Protéines urinaires : Intérêt clinique et interprétation. Technique et Biologie, 6 : 239-249. 

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Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. 

PROFIL ÉLECTROPHORÉTIQUE 

+ 

Préalbumine 

Albumine 

Orosomucoïde 

α1 Antitrypsine 

Haptoglobine 

Céruloplasmine 

ß Lipoprotéine 

Complément C3 

ß2 Microglobuline 

Fraction Tau 

α1 Antichymotrypsine 

α Lipoprotéine 

Gc Globuline 

α2 Macroglobuline 

Transferrine 

Hémopexine 

Antithrombine III 

C1 Estérase inhibiteur 

γ Globulines 

G - A - M - D - E 

- 

- 8 -


INTENDED USE 

The HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 15 HR kits are designed for multi-fractionation of proteins from human sera or other biological fluids, such as 

urine and cerebrospinal fluid (CSF), by electrophoresis on alkaline buffered (pH 8.6) agarose gels. The kits are used in conjunction with the semiautomated 

HYDRASYS instrument. The electrophoretic separations are evaluated visually for protein pattern abnormalities. Densitometry can provide 

semi-quantitative, relative values. 

Each agarose gel is intended to run : 

• 7 samples in the HYDRAGEL 7 HR kit, 

• 15 samples in the HYDRAGEL 15 HR kit. 

For In Vitro Diagnostic Use. 

PRINCIPLE OF THE TEST 

Protein electrophoresis is a well established technique routinely used in clinical laboratories for screening of serum and other biological fluids for 

protein abnormalities. It is based on the principle of zone electrophoresis performed on a suitable support medium. Agarose has been developed into 

a versatile and effective support medium. Although most clinical laboratories are satisfied with the «traditional» five-zone pattern of serum proteins, 

high resolution techniques can yield additional diagnostic information. 

On HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 15 HR gels, serum, urine or cerebrospinal fluid (CSF) proteins separate into about ten fractions. Each fraction 

contains one or more proteins. 

The composition of the gel, the electrophoretic conditions and the choice of the stain allow an excellent resolution and a high sensitivity particularly in 

the gamma-zone. To accommodate customer’s preferences, the electrophoretic protein separations can be stained either with acid violet or 

amidoblack. The stained separations are evaluated visually for pattern abnormalities. The visual observations can be complemented by densitometry 

to obtain semi-quantitative, relative values of the individual or combined protein fractions. 

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE HYDRAGEL 7 HR AND HYDRAGEL 15 HR KITS 

ITEMS PN 4102 PN 4122 PN 4105 PN 4125 Agarose Gels (ready to use) 10 gels 10 gels 10 gels 10 gels Buffered Strips (ready to use) 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each Staining solution diluent (stock solution) 1 vial, 60 mL 1 vial, 60 mL Amidoblack Stain (stock solution) 1 vial, 20 mL 1 vial, 20 mL Acid Violet Stain (stock solution) 1 vial, 75 mL 1 vial, 75 mL Applicators (ready to use) 1 pack of 10 (7 teeth) 1 pack of 10 (15 teeth) 1 pack of 10 (7 teeth) 1 pack of 10 (15 teeth) 

| Filter Papers | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 

FOR OPTIMAL RESULTS 

All reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions. 

PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY. 

1. AGAROSE GELS 

Preparation 

Agarose gels are ready to use. Each gel contains: agarose, 0.8 g/dL ; Tris-barbital buffer pH 8.6 ± 0.1 ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Agarose gels contain 0.18 % barbital. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! 

Use 

Support medium for protein electrophoresis. 

Storage, stability and signs of deterioration 

Store the gels horizontally in the original protective packaging at room temperature (15 to 30 °C) or refrigerated (2 to 8 °C). (The arrow on the front of 

the kit box must be pointing upwards). 

Avoid obvious temperature fluctuations during storage (e.g., do not store close to a window or a heat source). The gels are stable until the expiration 

date indicated on the kit package or the gel package labels. DO NOT FREEZE. 

Discard gel when: 

(i) crystals or precipitate form on the gel surface or the gel texture becomes very soft (all these result from freezing the gel), 

(ii) bacterial or mold growth is indicated, 

(iii) abnormal liquid quantity is present in the gel box (as a result of buffer exudation from the gel due to improper storage conditions). 

2. BUFFERED STRIPS 

Preparation 

Buffered sponge strips are ready to use. Each contains: Tris-barbital buffer pH 8.7 ± 0.2 ; sodium azide ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: The buffer in the strips contains 0.55 % barbital and 0.30 % sodium azide. Do not ingest ! Very toxic if swallowed ! If ingested 

consult physician immediately ! When disposing, prevent contact with acids, lead or copper, as these are known to form explosive or toxic 

compounds with sodium azide. 

Use 

Buffered strips function as electrophoresis buffer reservoir and ensure contact between the gel and electrodes. 

- 9 - 

SEBIA INSTRUCTIONS - English



Store the buffered strips horizontally in the original protective packaging at room temperature or refrigerated. (The arrow on the front of the kit box 

must be pointing upwards). 

They are stable until the expiration date indicated on the kit package or buffered strips package label. 

DO NOT FREEZE. 

Discard buffered strips if the package is opened and the strips dry out. 

3. STAINING SOLUTION DILUENT (with PN 4105 and 4125) 

Preparation 

The stock staining solution diluent must be used as described in paragraph " AMIDOBLACK STAIN ". 

It contains an acidic solution. 

Use 

For the preparation of the amidoblack staining solution. 


Store the stock staining solution diluent at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining 

solution diluent vial labels. DO NOT FREEZE. 

Do not add any sodium azide. 

4. AMIDOBLACK STAIN (with PN 4105 and 4125) 

Preparation 

The amidoblack concentrated stain is a visquous solution which may gelify. The integrity of the stock staining solution is not altered by the increase in 

viscosity or solidification. 

In all cases, to obtain a perfect reconstitution of the stain, we advise you to respect the following procedure: 

1. Add 15 mL of stain diluent to the concentrated amidoblack vial. 

2. Close carefully the vial. 

3. Shake very vigorously the vial during approximately 5 seconds. 

4. Pour this solution in the container for staining solution processing. 

5. Repeat this step twice, three times if necessary. 

6. Pour the remaining diluent in the container and complete the volume to 300 mL with distilled or deionized water. 

7. Mix contents of stain cubitainer well for 5 to 10 minutes. 

The staining solution is ready to use. 

NOTE : An incomplete reconstitution of the stain will lead to an under-evaluation of albumin fraction (low percentage or white hole inside the fraction). 

After dilution, the working staining solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; amidoblack, 0.4 g/dL ; ethylene-glycol, 6.7 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels with electrophoretic protein separations. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working staining solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock staining solution 

is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining vial labels. 

Working staining solution is stable for 1 month. 

Do not store the working staining solution close to a heat source. 

5. ACID VIOLET STAIN (with PN 4102 and 4122) 

Preparation 

The vial of the stock acid violet stain to be diluted up to 300 mL with distilled or deionized water. 

After dilution, the working stain solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; acid violet, 0.2 g/dL ; ethylene-glycol, 3.25 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels with electrophoretic protein separations. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working stain solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock stain solution is 

stable until the expiration date indicated on the kit package or stain vial labels. Working stain solution is stable for 6 months. 

6. APPLICATORS 

Use 

Precut, single use applicators for sample application. 

Storage 

Store the applicators in a dry place at room temperature or refrigerated. 

7. FILTER PAPERS 

Use 

Precut, single use, thin absorbent paper pads for blotting excessive moisture off the gel surface before sample application. 

Storage 

Store the thin filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

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REAGENTS REQUIRED 

1. SALINE 

Preparation 

Make 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl solution in distilled or deionized water. 

Use 

To dilute samples. 


Store at room temperature or refrigerated. Discard after 3 months or if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

For longer storage periods, add sodium azide, 0.1 g/dL. 

2. DESTAINING SOLUTION 

Preparation 

Each vial of stock Destaining Solution (SEBIA, PN 4540, 10 vials 100 mL each) to be diluted up to 100 liters with distilled or deionized water. It is 

convenient to dilute only 5 mL of the stock solution to 5 liters, the volume of the destaining solution container. After dilution, the working destaining 

solution contains: citric acid, 0.05 g/dL. 

Use 

For destaining, that is removal of excess and background stain from the gels and for rinsing the staining chamber after cleaning with wash solution. 

To neutralize the acidity of the destaining solution, pour 15 mL of a 50 % solution of Sodium Hydroxide, into the empty waste container. 


Store the stock destaining solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or destaining 

solution vial labels. Working destaining solution is stable for one week at room temperature in a closed bottle. Do not add any sodium azide. 

Discard working destaining solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

To prevent microbial proliferation in the diluted destaining solution to be stored more than one week, add 5 µl/dL of ProClin 300. 

Working destaining solution added with ProClin is stable in a closed bottle at room temperature or refrigerated until the expiration date indicated on the 

kit package or destaining solution vial labels. 

3. HYDRASYS WASH SOLUTION 

Preparation 

Each vial of the stock HYDRASYS Wash Solution (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 mL each) to be diluted up to 5 liters with distilled or deionized water. 

After dilution, the working wash solution contains: alkaline buffer pH 8.8 ± 0.3 ; sodium azide. 

WARNING: The stock wash solution contains 0.625 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Sodium 

azide may lead to formation of explosive or toxic compounds when in contact with acids, lead or copper. Always flush with a large quantity 

of water when disposing. 

Use 

It serves for cleaning of the HYDRASYS Staining Compartment. Use periodically, e.g., if the instrument is used daily, wash the staining compartment 

weekly. 

See the package insert for directions to use. 


Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. They are stable until the expiration date indicated 

on the wash solution vial label. 

Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

4. FLUIDIL 

Preparation 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 mL) is ready to use. 

Use 

To dilute viscous or turbid samples, e.g., sera containing cryoglobulin or cryogel. 


Store at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the Fluidil vial label. 

Fluidil must be free of precipitate. 

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 or PN 1211. 

2. Micropipettor, either manual or automated, such as HYDRAplus SEBIA, PN 1215, for an alternative way of loading the sample applicators. 

3. Wet Storage, PN 1270, Chamber supplied with HYDRASYS. 

4. Container Kit supplied with HYDRASYS. 

5. Gel holder for half-gels SEBIA, PN 10043110. 

6. Pipettes: 10 µl and 200 µl. 

7. Densitometer / scanner capable of scanning 82 x 51 mm or 82 x 102 mm gel plates at 570 nm or with a yellow filter : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

or PHORESIS software for flat-bed scanner. Refer to manufacturer’s instructions for operation and calibration procedures. 

8. Control materials, such as Control Serum, SEBIA PN 4785. 

SAMPLES FOR ANALYSIS 

Samples for qualitative analysis on HYDRAGEL 7/15 HR may be serum, urine or cerebrospinal fluid (CSF). 

Serum proteins may also be quantified after staining with acid violet or amidoblack stain. 

Sample collection and storage 

Fresh samples are recommended for analysis. They must be collected according to established procedures used in clinical laboratory testing. If 

needed, store samples at 2 to 8 °C for up to one week. Frozen samples are stable for at least one month. 

Freezing serum and CSF samples with sodium azide, 0.02 g/dL improves the storage stability. 

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Freezing urine samples with HEPES 0.1 M (pH 6.75) and sodium azide, 0.02 g/dL improves the storage stability. 

Thawed samples may give slight application marks due to protein or lipoprotein denaturation. 

CAUTION: Do not use boric acid as a preservative. 

Sample preparation 

1. Sample preparation for qualitative analysis (with acid violet staining) 

The samples are prepared the same way for staining with either acid violet or amidoblack, unless otherwise noted. 

Serum 

Apply undiluted serum samples. Upon storage at 2 to 8 °C or after freezing, some sera (particularly those containing cryoglobulin or cryogel) may 

become viscous or develop turbidity. Such sera might present application problems due to hindered diffusion through the sample applicator teeth. 

In such case, add 25 µl Fluidil to 75 µl serum and vortex for 15 seconds. Then follow the standard procedure. 

CSF or serum/CSF pairs 

Apply samples with a total protein concentration of about 1.0 g/dL. 

IMPORTANT : Serum and CSF sample pairs must be adjusted to have identical total protein concentration. 

Urines 

Analysis is performed on unconcentrated urine. Concentrate urine if higher sensitivity is needed. Bands are detected when the protein 

concentration per band is about ≥ 2 mg/dL. 

- Unconcentrated urines : Apply neat urine. 

- Concentrated urines : Analysis is performed on samples previously concentrated to a total protein concentration of about 0.5 g/dL. 

IMPORTANT: Some urines contain a high salt concentration. This may cause gel deformation during migration and consequently, distortion of the 

migration profiles. If such a distortion makes interpretation inaccurate, the urine should be dialyzed to remove the salts. 

NOTE : Diffusion of urine samples into the applicator tips may be hindered when the urine (neat or concentrated) is turbid. It is recommended to 

remove the particulates by centrifugation (e.g., 10 minutes at 3,000 rpm) or filtration (e.g., 0.45 µm syringe filter). 

2. Serum preparation for semi-quantitative analysis (with amidoblack or acid violet staining and 7/15 HR1 program) 

Amidoblack staining 

Use undiluted serum samples. 

Acid violet staining 

Use serum samples previously diluted 4 times (1 vol./3 vol.) in saline. Then follow the standard procedure. 

Sample to avoid 

Do not use hemolysed serum samples. Hemolysis increases alpha-2 and beta zones. 

Avoid plasma samples. Fibrinogen gives a band close to the application point which might be taken for a monoclonal immunoglobulin. 

PROCEDURE 

The HYDRASYS system is a semi-automated multi-parameter instrument. The automated steps include processing of HYDRAGEL agarose gels in 

the following sequence: sample application, electrophoretic migration, drying, staining, destaining and final drying. The manual steps include handling 

samples and gels, and setting up the instrument for operation. 

READ CAREFULLY HYDRASYS INSTRUCTION MANUAL. 

I. MIGRATION SET UP 

1. Switch on HYDRASYS instrument. 

2. Place one applicator on a flat surface with the well numbers in the right-side-up position (Fig. 1). 

- Apply 10 µl of sample in each well. Load each applicator within 2 minutes. 

- Place the applicator into the wet storage chamber with the teeth up [handle it by the plastic tooth protection frame]. Let the samples diffuse 

into the teeth for 5 minutes after the last sample application. For later use (up to 8 hours), keep the entire chamber under refrigeration. See 

wet chamber package insert for further details. 

3. Open the lid of the Migration Module and raise the electrode and applicator carriers. 

WARNING: Never close the lid while the carriers are raised ! 

4. Select migration program from the instrument menu (left side of the keyboard). 

- "7/15 HR1" migration program : For undiluted or diluted serum on HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 15 HR, 

- "7/15 HR2" migration program : For diluted serum, concentrated CSF and concentrated urines on HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 

15 HR, 

- "7/15 HR3" migration program : For unconcentrated urines on HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 15 HR. 

5. Remove buffered strips from the package ; handle them by the plastic ends. Engage the punched ends of the strip's plastic backing to the pins 

on the electrode carrier ; the strip's plastic backing must face the carrier (Fig. 2). 

6. Unpack the HYDRAGEL plate. 

- Roll quickly and uniformly one thin filter paper onto the gel surface to absorb the excess of liquid. Remove the paper immediately. 

WARNING: Do not leave the filter paper for a too long contact with the gel to avoid its dehydration. 

- Pool 120 µl of distilled or deionized water for HYDRAGEL 7 HR or 200 µl for HYDRAGEL 15 HR on the lower third of the frame printed on 

the Temperature Control Plate of the migration module. 

- Place the gel plate (the gel side up) with its edge against the stop at the bottom of the printed frame (Fig. 3). 

- Bend the gel and ease it down onto the water pool (Fig. 3). Ensure that no air bubbles are trapped, water is spread underneath the entire 

gel plate and the gel is lined up with the printed frame. 

7. Lower both carriers down. In this position the buffered strips do not touch the gel. DO NOT FORCE THE CARRIERS ALL THE WAY DOWN. 

8. Remove the applicator from the wet chamber. Handle it by the protection frame. 

- Snap off the applicator teeth's protection frame. 

- Place the applicator into position No 5 on the carrier. 

IMPORTANT: The numbers printed on the applicator must face the operator (Fig. 4). 

9. Close the lid of the migration module. 

10. Start the procedure immediately by pressing the green arrow «START» key on the left side of the keyboard. 

IMPORTANT: Make sure that the ventilation air inlet on the right side of the instrument is not blocked. 

- 12 -


MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The two carriers are lowered so that buffered strips and applicator contact the gel surface. 

• Sample applicator carrier rises up. 

• "7/15 HR1" and "7/15 HR2" migration programs : Migration is carried out under 255 V constant current, for HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 

15 HR, at 20 °C, controlled by Peltier effect, until 75 Vh have accumulated, for about 18 minutes. 

• "7/15 HR3" migration program : Migration is carried out under 255 V constant current, for HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 15 HR, at 20 °C, 

controlled by Peltier effect, until 40 Vh have accumulated, for about 10 minutes. 

• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• The temperature of the control plate rises to 60 °C for 9 minutes to dry the gel. 

• The control plate is cooled down ; when it reaches 50 °C, an audible beep signals that the migration module lid unlocks. The plate temperature 

remains at 50 °C until the lid is opened. Then, the temperature keeps decreasing until it reaches 20 °C (in less than 5 minutes) after which a new 

migration run may start. 

NOTE: The migration module lid remains closed during all migration steps. 

II. GEL PROCESSING SET-UP 

1. Open the lid. 

2. Remove the applicator and discard. 

3. Raise both carriers, remove the buffered strips by their plastic ends and discard. 

4. Remove the dried gel film for further processing. 

5. After each use, wipe the electrodes and the temperature control plate with a soft wet tissue. 

6. Open the Gel Holder. Lay it flat and position the dried gel (with gel side facing up) into the grooves of the two rods and close the holder. Make 

sure that the film is correctly positioned inside the holder (Fig. 5). 

7. Place the gel holder into the Gel Processing / Staining Module. 

IMPORTANT: Before starting the gel processing / staining program, check the following: 

- the staining container is filled with 300 mL of staining solution ; 

- the destaining container contains at least 1 liter of destaining solution ; 

- the waste container is empty. 

For reagent line connection: refer to the information displayed on the screen of the instrument (select key: REAGENT LINES). 

IMPORTANT: Do not forget to block up the unused lines. 

8. Select «HR ACID VIOLET» or «HR AMIDO» staining program from the instrument menu and start the run by pressing the «START» key (green 

arrow on the right side of the keyboard). 

During staining, destaining and drying steps, the compartment remains locked. 

After cooling step, an audible beep signals that the compartment unlocks (the ventilation is maintained until the gel holder is removed). 

III. GEL PROCESSING COMPLETION 

1. Remove the gel holder from the compartment, open it and remove the dried gel. 

NOTE : After gel staining / destaining and before densitometry / scanning, a gel may be put through an additional wash step, if needed, to 

further clarify the gel background and to remove any residual stain that may appear as blue spots. Wash the gel using the "WASH 

ISOENZ/GEL" program. 

2. If needed, clean the back side (the plastic support side) of the dry film with a damp soft paper. 

3. Interpret the separations visually for pattern abnormalities. The visual observations may be completed by densitometry at 570 nm or with a 

yellow filter to obtain semi-quantitative, relative values for the individual or combined protein fractions. 

RESULTS 

Quality Control 

It is advised to include a normal sample or control serum (Control serum, SEBIA, PN 4785) into each run of samples. 

Values (quantitative analysis) 

Densitometer scanning (at 570 nm) of stained electrophoregrams yields relative concentrations (percentages) of individual protein zones. 

Normal values (mean ± 2 SD) for individual major electrophoretic serum protein zones on HYDRAGEL 7/15 HR gels have been established from a 

healthy population of 225 adults (men and women): 

FRACTION HYRYS PHORESIS Albumin 56.2 – 69.0 57.5 – 67.9 Alpha-1 globulins 1.2 – 3.2 1.0 – 3.8 Alpha-2 globulins 7.8 – 13.4 7.2 – 12.8 Beta globulins 7.4 – 13.4 7.6 – 13.6 

| Gamma globulins | 9.8 – 18.6 | 10.3 – 18.3 | 

It is recommended each laboratory establishes its own normal values. 

Interpretation 

Interpretation is qualitative. As an aid in interpretation see BIBLIOGRAPHY. 

SERUM PROTEINS 

The interpretation is made by comparing the electrophoregrams of the clinical sample and a normal control. In the case of an increased, decreased 

or additional fraction, it is usually necessary to confirm the observed changes by other tests such as quantification of specific proteins, 

immunoelectrophoresis, or immunofixation. 

Among the very numerous plasma proteins, only about fifteen exist in a sufficient quantity to contribute to the staining intensity of the bands observed 

on HYDRAGEL 7/15 HR gels. The value of HYDRAGEL 7/15 HR gels is primarily in the detection of faint monoclonal or oligoclonal bands. 

- 13 -


CEREBROSPINAL FLUID PROTEINS 

The cerebrospinal fluid (CSF) is a biological liquid with a low protein concentration ; in a normal CSF, it is about 30 ± 15 mg/dL. The majority of CSF 

proteins originate in serum from where they are filtered and transported through the blood - CSF barrier. For analysis on HYDRAGEL 7/15 HR gels, 

the CSF must be concentrated up to about 1 g/dL. 

A normal CSF pattern shows the following order of zones: 

• Prealbumin, or transthyretin, the fastest fraction ; 

• Albumin, the prevalent fraction representing about 75 % of the total proteins ; 

• Alpha 1 zone, consisting primarily to alpha-1 antitrypsin ; 

• Alpha 2 zone, contains primarily high molecular weight proteins ; it is usually very weak since such proteins cannot pass through the blood - CSF 

barrier ; 

• Beta fraction, containing transferrin ; 

• Beta-2 zone, containing primarily carbohydrate (sialic acid) deficient «CSF specific» transferrin also called the Tau protein ; 

• Gamma zone, contains essentially Ig G, and sometimes Ig A and Ig M. 

An increase of immunoglobulins synthesized within the central nervous system (intrathecal synthesis of Ig’s) has been reported in association with 

various disorders of the central nervous system including demyelinating, inflammatory and infectious disorders and auto-immune reactions. 

The intrathecal Ig CSF synthesis is often found associated with reduced heterogeneity of the Ig’s which manifests itself as «oligoclonal banding» 

discerned in high resolution electrophoretic patterns. 

A distinct characteristic of intrathecal Ig CSF synthesis is the presence of oligoclonal Ig bands in CSF and absence of such banding in the serum. 

Therefore, it is necessary : 

• To analyze the CSF & serum pairs collected from the same patient at the same time while excluding any treatment which could affect the sample’s 

concentration of immunoglobulins, 

• To apply identical quantities of proteins (about 1 g/dL) with each of the 2 samples. 

• To subject any abnormal band detected in the gamma zone of CSF, without any corresponding fraction in the serum, to immunofixation analysis. 

The immunological confirmation of the Ig character of such CSF band is necessary since bands other than immunoglobulins may be found in the 

gamma zone (e.g., tau fraction, carbonic anhydrase, post gamma, or CRP). The latter bands do not have the same diagnostic significance as the 

« true », immunoglobulin type oligoclonal bands. 

URINE 

Urine electrophoresis is performed in order to detect monoclonal components and other urinary proteins. 

HYDRAGEL 7/15 HR is used as a screening test for urinary protein. It allows the detection of monoclonal components (which must be confirmed and 

identified by immunofixation), and the detection of proteins of tubular, glomerular or mixed origin (which must be characterized with suitable methods, 

such as molecular sieving in SDS buffer, nephelometric immunoassay or immunofixation with appropriate antibodies). 

CONFIRMATORY TESTS 

When compared to a normal pattern, increased, decreased or additional fractions are observed, confirmatory tests might be needed, such as 

identification and quantification of specific proteins by immunochemical procedures. SEBIA offers a number of specialized tests for the use in 

conjunction with the hydrasys system, for example : 

• monoclonal proteins in serum and urine : 

HYDRAGEL 1 IF SEBIA (PN 4301), HYDRAGEL 2 IF SEBIA (PN 4302), HYDRAGEL 4 IF SEBIA (PN 4304 and 4308) and HYDRAGEL 9 IF SEBIA 

(PN 4309), 

• oligoclonal (Ig’s) banding in CSF : 

HYDRAGEL 3 CSF SEBIA (PN 4350) and HYDRAGEL 6 CSF SEBIA (PN 4351), 

• Bence Jones proteins in urine : 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES SEBIA (PN 4321), HYDRAGEL 2 BENCE JONES SEBIA (PN 4322) and HYDRAGEL 4 BENCE JONES SEBIA (PN 4324), 

• Characterization of tubular or glomerular damage (molecular sieving in SDS buffer) : 

HYDRAGEL 5 PROTEINURIE SEBIA (PN 4115). 

Limitations 

In thawed samples, slight application marks caused by denatured proteins may be seen. 

Do not use hemolyzed and plasma samples. 

Due to the resolution and sensitivity limits of zone electrophoresis, it is possible that some monoclonal components may not be detected with this 

method. 

Troubleshooting 

Call Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instructions for the preparation and storage of materials, and for the 

procedure were carefully followed. 

Kit reagent Safety Data Sheets and informations on waste products elimination are available from the Technical Service of the supplier. 

PERFORMANCE DATA 

Standard materials, sample preparation and procedures were used. All electrophoregrams were evaluated visually. 

Qualitative analysis 

Results obtained on HYDRAGEL 7/15 HR gels indicate a very good reproducibility within and between gels for all the tested aspects and there were 

no visually detectable differences among the repeats. 

Pathological and normal serum samples, CSF / serum pairs and urine samples from 116 patients were run on HYDRAGEL 7/15 HR gels and on 

comparable commercially available high resolution gels. The samples were prepared as recommended by the respective procedures. 

Similarities / dissimilarities of the electrophoretic patterns and the presence of monoclonal or oligoclonal bands were the basis for comparison. The 

visual, qualitative comparison between these two tests has been based on the number of bands and their location. 

The results of the two procedures were in agreement in all 116 samples and were consistent with the clinical diagnosis. 

- 14 -


Semi-quantative analysis 

For the semi-quantitative applications, results obtained with HYDRAGEL 7/15 HR gels indicate a very good reproducibility within and between gels for 

all the tested aspects and there were no visually detectable differences among the repeats, the mean CV was 4.0 %. 

The HYDRAGEL 7/15 HR procedures with acid violet and amidoblack staining alternatives were compared to another commercially available high 

resolution gels procedure (traditional high resolution separations of serum proteins and acid violet staining). 

For the sake of comparison, all electrophoregrams were scanned (yellow filter) as 5-zone separations. 

Clinical serum samples (n = 56) were run with each procedure and the relative concentrations for each fraction were compared using linear regression 

analysis, 0.973 being the mean coefficient correlation for all protein fractions with both staining solutions. 

| HYDRAGEL 15 HR (acid violet) | HYDRAGEL 15 HR (amidoblack) | 

| FRACTION | 

Coefficient 

| 

Slope 

| 

y-intercept 

| 

Range (%) 

| 

Coefficient 

| 

Slope 

| 

y-intercept 

| 

Range (%) 

| 

| | 

correlation 

| | | (HYDRAGEL 15 HR) | 

correlation 

| | | (HYDRAGEL 15 HR) | 

| Albumin | 0.981 | 0.98 | 1.89 | 36.7 – 66.1 | 0.985 | 0.96 | 2.35 | 36.1 – 67.4 | 

| Alpha-1 | 0.976 | 0.99 | -0.11 | 1.5 – 7.5 | 0.982 | 0.97 | -0.03 | 1.3 – 7.1 | 

| Alpha-2 | 0.982 | 0.98 | -0.14 | 6.8 – 24.5 | 0.978 | 0.96 | 0.31 | 5.7 – 24.2 | 

| Beta | 0.956 | 0.91 | 0.90 | 5.8 – 19.8 | 0.918 | 0.95 | 0.41 | 5.4 – 20.0 | 

| Gamma | 0.991 | 0.99 | -0.16 | 8.3 – 40.0 | 0.990 | 0.94 | 1.05 | 7.2 – 37.5 | 

Sensitivity 

A pathological serum containing a monoclonal component (identified and quantitated by other means) was serially diluted with a normal serum and 

the individual dilutions electrophoresed using «HR1» and «HR2» programs. Similarly, a urine sample containing albumin and Bence Jones protein 

(identified and quantitated by other means) was serially diluted and electrophoresed using «HR3» program. The sensitivity was determined from the 

highest serial dilution giving a discernible band upon staining with acid violet. On the «HR1» and «HR2» programs the sensitivity of detection was 

10 - 30 mg/dL (for monoclonal G,K). On the «HR3» program, the sensitivity of detection was 1.5 - 2.0 mg/dL (for albumin and Bence Jones protein). 

Approximately the same staining sensitivity/intensity was observed when the electrophoresis was performed on neat serum followed by staining with 

amido black vs. electrophoresis of a serum diluted 1/4 followed by staining with acid violet. 

NOTE : According to the position of the monoclonal component and polyclonal background in the gamma zone, the detection limit may vary. 

Linearity 

The assays were linear to at least 5.8 g/dL albumin and 3.9 g/dL Ig G for either staining procedure. 

BIBLIOGRAPHY 








43, 2332-2346. 









Acta, 56 : 125-126. 





35 : 1997. 



- 15 -


MIGRATION PATTERN 

+ 

Pre-albumin 

Albumin 

Orosomucoïd 

α1 Antitrypsin 

Haptoglobin 

Ceruloplasmin 

ß Lipoprotein 

C3 Complement 

ß2 Microglobulin 

Tau fraction 

α1 Antichymotrypsin 

α Lipoprotein 

Gc Globulin 

α2 Macroglobulin 

Transferrin 

Hemopexin 

Antithrombin III 

C1 Inhibitor esterase 

γ Globulins 

G - A - M - D - E 

- 16 -


ANWENDUNGSBEREICH 

Die Kits HYDRAGEL 7 HR und HYDRAGEL 15 HR dienen zur hochauflösenden Trennung von Proteinen aus Humanserum oder anderen 

Körperflüssigkeiten (Urin oder Liquor cerebrospinalis, CSF) mittels Elektrophorese auf Agarosegelen in alkalischem Puffer (pH-Wert 8,6). Sie wurden 

für das halbautomatische Elektrophoresegerät HYDRASYS entwickelt. Die getrennten Proteine werden mit Säureviolett gefärbt. Überschüssige 

Färbelösung wird durch eine saure Lösung entfernt. Die gefärbten und getrockneten Gele können visuell auf Anomalien in den Migrationsmustern 

untersucht werden. 

Pro Agarosegel 

• des HYDRAGEL 7 HR Kits können 7 Proben, 

• des HYDRAGEL 15 HR Kits je 15 Proben, 

analysiert werden. 

In-vitro-Diagnostikum. 

TESTPRINZIP 

Die Proteinelektrophorese ist eine weit verbreitete Technik, die in klinischen Labors routinemäßig für das Screening von Serum und anderen 

Körperflüssigkeiten auf Proteinanomalien verwendet wird. Sie basiert auf dem Prinzip der Zonenelektrophorese, die auf einem geeigneten 

Trägermedium durchgeführt wird. Agarose erwies sich als vielseitig einsetzbares und effektives Trägermaterial. Wenngleich in den meisten klinischen 

Labors das «traditionelle» Muster aus fünf Banden für Serumproteine bereits ausreicht, können mit hochauflösenden Verfahren weitere diagnostisch 

wertvolle Informationen gewonnen werden. 

Auf HYDRAGEL 7/15 HR Gelen werden die Serum-, Urin- oder Liquorproteine in etwa 10 Fraktionen getrennt. Jede Fraktion besteht aus einem oder 

mehreren Proteinen. 

Die Zusammensetzung des Gels und die Wahl der Färbelösung ermöglichen insbesondere in der Gammafraktion eine ausgezeichnete Auflösung und 

eine hohe Empfindlichkeit. 

HYDRAGEL 7/15 HR ist ein qualitativer Test. 

IN DEN KITS HYDRAGEL 7 HR UND HYDRAGEL 15 HR ENTHALTENE REAGENZIEN UND MATERIALIEN 

BEZEICHNUNG BESTELL-NR. 4102 BESTELL-NR. 4122 BESTELL-NR. 4105 BESTELL-NR. 4125 Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele 10 Gele 10 Gele 10 Gele Pufferstreifen (gebrauchsfertig) 10 Pack zu 2 Stück 10 Pack zu 2 Stück 10 Pack zu 2 Stück 10 Pack zu 2 Stück Verdünnungslösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 60 ml 1 Fläschchen, 60 ml Amidoschwarz-Färbelösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 20 ml 1 Fläschchen, 20 ml Säureviolett-Färbelösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 75 ml 1 Fläschchen, 75 ml Applikatoren (gebrauchsfertig) 

| 1 Pack zu 10 Stück (7 zähnen) 1 Pack zu 10 Stück (15 zähnen) 1 Pack zu 10 Stück (7 zähnen) 1 Pack zu 10 Stück (15 zähnen) Filterpapier | 1 Pack zu 10 Stück | 1 Pack zu 10 Stück | 1 Pack zu 10 Stück | 1 Pack zu 10 Stück | 

FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE 

Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden. 

BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN. 

1. AGAROSEGELE 

Vorbereitung 

Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält: Agarose, 8,0 g/l ; Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 8,6 ± 0,1 ; Additiva zur Optimierung der Leistung, 

in den verwendeten Konzentrationen unschädlich. 

WARNHINWEIS: Agarosegele enthalten 0,18 % Barbital. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! 

Gebrauch 

Hilfsmedium für die Proteinelektrophorese. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall 

Gele waagerecht in der Originalverpackung bei Raumtemperatur (15 bis 30 °C) aufbewahren. (Der Pfeil auf der Vorderseite der Kit-Schachtel muß 

nach oben zeigen.) NICHT IM KÜHLSCHRANK AUFBEWAHREN ODER EINFRIEREN. Vor Licht und Wärme schützen. Starke 

Temperaturschwankungen während der Lagerung vermeiden. Sie bleiben bis zum Verfallsdatum stabil, das auf der Kit- oder Gelverpackung 

angegeben ist. 

Das Gel ist zu verwerfen bei: 

(i) Kristallen oder Niederschlag auf der Geloberfläche oder sehr weicher Gelstruktur (was darauf hindeutet, daß das Gel gefroren war) ; 

(ii) Bakterien- oder Schimmelpilzbildung ; 

(iii) einer ungewöhnlich stark ausgeprägten Flüssigkeitsansammlung in der Gel-Box (was auf einen Austritt von Puffer aus dem Gel aufgrund 

unsachgemäßer Lagerung hindeutet). 

2. PUFFERSTREIFEN 

Vorbereitung 

Die als Streifen vorliegenden Pufferschwämme sind gebrauchsfertig. Jeder Pufferstreifen enthält: Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 8,7 ± 0,2, Natriumazid ; 

Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Der im Streifen enthaltene Puffer enthält 0,55 % Barbital und 0,30 % Natriumazid. Nicht einnehmen! Nach dem 

versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! Darf bei der Entsorgung nicht mit Säuren, Blei oder Kupfer in Kontakt kommen, da 

sich sonst explosive bzw. toxische Natriumazidverbindungen bilden können. 

Gebrauch 

Die Pufferstreifen fungieren als Elektrophoresepufferreservoir und gewährleisten den Kontakt zwischen dem Gel und den Elektroden. 

- 17 - 

SEBIA ARBEITSANGLEITUNG - Deutsch



Bewahren Sie die Pufferstreifen waagerecht liegend in der Original-Schutzverpackung bei Zimmertemperatur oder gekühlt auf. (Der Pfeil auf der 

Verpackungsschachtel muss nach oben zeigen.) Die Pufferstreifen sind bis zum angegebenen Verfallsdatum auf der Schachtel oder auf dem Etikett 

der Streifen stabil. 

NICHT EINFRIEREN! 

Verwerfen Sie die Pufferstreifen, wenn die Verpackung geöffnet ist und die Streifen ausgetrocknet sind. 

3. VERDÜNNUNGSLÖSUNG (Bestell-Nr. 4105 und Bestell-Nr. 4125) 

Vorbereitung 

Die Amidoschwarz-Verdünnungslösung ist wie im Abschnitt “Amidoschwarz-Färbelösung” beschrieben zu verwenden. 

Die Lösung enthält Zitronensäure. 

Gebrauch 

Zum Herstellen der Amidoschwarz-Färbelösung. 


Konzentrierte Verdünnungslösung im Kühlschrank oder bei Raumtemperatur aufbewahren. Die Lösung ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem 

Kit oder auf dem Flaschenetikett) haltbar. NICHT EINFRIEREN! 

Geben Sie kein Natriumazid zu. 

4. AMIDOSCHWARZ FÄRBELÖSUNG (Bestell-Nr. 4105 und Bestell-Nr. 4125) 

Vorbereitung 

Das Amidoschwarz Färbekonzentrat ist eine hochviskose Flüssigkeit deren Viskosität sich durch Lagerung verändern kann. Die Qualität des 

Färbekonzentrats wird durch höhere Viskosität nicht beeinträchtigt. 

Bitte beachten Sie die folgende Anleitung zum Herstellen der Färbelösung : 

1. 15 ml der Verdünnungslösung zu dem Amidoschwarz Färbekonzentrat geben. 

2. Die Färbekonzentrat Flasche fest verschließen. 

3. Die Flasche für etwa 5 Sekunden kräftig schütteln. 

4. Den Inhalt der Flasche in den Färbecontainer des HYDRASYS überführen. 

5. Schritt 1 – 4 zwei- bis dreimal wiederholen. 

6. Die restliche Verdünnungslösung in den Färbecontainer überführen und mit destilliertem oder deionisiertem Wasser auf 300 ml Gesamtvolumen 

auffüllen. 

7. Den Inhalt des Färbecontainers 5 – 10 Minuten mischen. 

Im Anschluss daran ist die Färbelösung gebrauchsfertig. 

ACHTUNG: Eine unvollständige Lösung des Amidoschwarz Konzentrats kann zu einer Unterbestimmung der Albuminfraktion und/oder zu 

Auslöscheffekten der Albuminfraktion führen. 

Nach der Verdünnung enthält die Färbelösung: Zitronensäurelösung pH ≈ 2 ; 0,4 g/dl Amidoschwarz ; 6,7% Ethylenglycol ; zusätzliche Additive zur 

Optimierung (ungiftig in den verwendeten Konzentrationen). 

WARNUNG: Nicht verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Agarose Gele nach elektrophoretischer Trennung. 

WICHTIG: Die Färbelösung ist für maximal 10 Färbungen konzipiert. Wechseln Sie deshalb die Färbelösung nach 10 Färbungen aus. 


Amidoschwarz- Konzentrat und verdünnte Färbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank verschlossen aufbewahren um Flüssigkeitsverlust 

durch Verdunstung zu vermeiden. Das Amidoschwarz-Konzentrat ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem Kit oder auf dem Flaschenetikett) 

haltbar. 

Verdünnte Färbelösung ist einen Monat haltbar. 

Die gebrauchsfertige Färbelösung nicht neben einer Wärmequelle aufbewahren. 

5. SÄUREVIOLETT-FÄRBELÖSUNG (Bestell-Nr. 4102 und Bestell-Nr. 4122) 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierter Säureviolett-Färbelösung mit destilliertem oder entionisiertem Wasser auf 300 ml auffüllen. 

Nach Verdünnung enthält die gebrauchsfertige Färbelösung: saure Lösung pH ≈ 2 ; Säureviolett, 0,2 g/dl ; Äthylenglykol, 3,25 % ; Zusätze, 

ungefährlich bei den eingesetzten Konzentrationen, nötig für die optimale Durchführung. 

WARNUNG: Nicht Verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Gele nach der elektrophoretischen Proteintrennung. 

WICHTIG: Mit der Färbelösung können lediglich zehn Gele angefärbt werden. Tauschen Sie die Lösung nach zehn Färbeschritten aus. 


Zur Vermeidung von Verdunstungsverlusten sowohl konzentrierte als auch verdünnte Färbelösung in verschlossenen Behältern bei Raumtemperatur 

oder im Kühlschrank aufbewahren. Konzentrierte Färbelösung bleibt bis zum Verfallsdatum stabil, das auf der Kit-Verpackung oder auf dem 

Fläschchenetikett der Färbelösung angegeben ist. Verdünnte Färbelösung bleibt 6 Monate stabil. 

6. APPLIKATOREN 

Gebrauch 

Einmalapplikatoren für den Probenauftrag mit Sollbruchstellen. 

Lagerung 

Applikatoren vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

7. FILTERPAPIER 

Gebrauch 

Dünnes, perforiertes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten überschüssiger Feuchtigkeit von der Geloberfläche vor der Probenapplikation. 

Lagerung 

dünnes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

- 18 -


ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE REAGENZIEN 

1. KOCHSALZLÖSUNG 

Vorbereitung 

Mit destilliertem oder entionisiertem Wasser eine 0,15 mol (9 g/l) -NaCl-Lösung herstellen. 

Gebrauch 

Zur Verdünnung von Proben. 


Bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Die Lösung muß nach 3 Monaten verworfen werden oder wenn sich ihr Aussehen verändert 

hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. Bei längerer Lagerung Natriumazid zugeben, 1 g/l. 

2. ENTFÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte Entfärbelösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4540, 10 Fläschchen zu je 100 ml) mit destilliertem oder entionisiertem 

Wasser auf 100 Liter auffüllen. Es empfiehlt sich, nur 5 ml konzentrierte Lösung auf 5 Liter, dem Fassungsvermögen des Behälters für Entfärbelösung, 

aufzufüllen. Verdünnte Entfärbelösung enthält: Zitronensäure, 0,5 g/l. 

Gebrauch 

Zum Entfärben, d.h. Auswaschen von überschüssiger Farbe und zur Entfernung der Gelhintergrundfärbung sowie zum Spülen des Färbemoduls nach 

der Reinigung mit Waschlösung. 

Zur Neutralisation der sauren Entfärbelösung können 15 ml einer 50 % Natronlauge (NaOH) in den leeren Abfallbehälter gefüllt werden. 


Konzentrierte Entfärbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfallsdatum stabil, das auf der Kit- 

Verpackung oder auf den Fläschchenetiketten der Entfärbelösung angegeben ist. Verdünnte Entfärbelösung bleibt bei Raumtemperatur in einem 

verschlossenen Behälter eine Woche stabil. Kein Natriumazid zugeben. 

Verdünnte Entfärbelösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

Um mikrobielles Wachstum in der verdünnten Entfärbelösung zu verhindern, wenn sie länger als 1 Woche aufgehoben wird, sollten 50 µl/l ProClin 300 

zugesetzt werden. 

Die mit ProClin versetzte, gebrauchsfertige Entfärbelösung ist in der verschlossenen Flasche bei Zimmertemperatur oder gekühlt bis zum 

Verfallsdatum stabil, das auf der Verpackung oder auf den Flaschenetiketten angegeben ist. 

3. HYDRASYS WASCHLÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte HYDRASYS-Waschlösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4541, 10 Fläschchen mit je 80 ml) mit destilliertem oder 

entionisiertem Wasser auf 5 Liter auffüllen. Verdünnte Waschlösung enthält: alkalischen Puffer, pH-Wert 8,8 ± 0,3 ; Natriumazid. 

WARNHINWEIS: Konzentrierte Waschlösung enthält 0,625 % Natriumazid. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort 

den Arzt aufsuchen! Natriumazid kann bei Kontakt mit Säuren, Blei oder Kupfer zu explosiven bzw. toxischen Verbindungen reagieren. Bei 

der Entsorgung stets mit reichlich Wasser nachspülen. 

Gebrauch 

Zum Reinigen des Färbemoduls des HYDRASYS Systems. Die Reinigung in regelmäßigen Abständen durchführen: Wird das Gerät zum Beispiel 

täglich genutzt, sollte das Färbemodul einmal pro Woche gereinigt werden. 

Hinweise zum Gebrauch finden Sie auf der Packungsbeilage. 


Konzentrierte und verdünnte Waschlösung in geschlossenen Behältern bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum 

Verfallsdatum stabil, das auf dem Fläschchenetikett der Waschlösung angegeben ist. 

Verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

4. FLUIDIL 

Vorbereitung 

Fluidil (SEBIA, Bestell-Nr. 4587, 1 Fläschchen, 5 ml) ist gebrauchsfertig. 

Gebrauch 

Zum Verdünnen zähflüssiger oder trüber Proben, z.B. von Kryoglobulin- oder Kryogel-haltigen Seren. 


Bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Es bleibt bis zum Verfallsdatum stabil, das auf dem Fluidil-Fläschchenetikett angegeben ist. 

Fluidil darf kein Präzipitat aufweisen. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE AUSSTATTUNG (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. HYDRASYS System, SEBIA, Bestell-Nr. 1210 oder Nr. 1211. 

2. Für das Beladen der Applikatoren kann alternativ eine manuelle Mikropipette oder der Pipettierautomat HYDRAplus SEBIA, Bestell-Nr. 1215, 

verwendet werden. 

3. Feuchte Kammer, Bestell-Nr.1270, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

4. Behälter-Kit, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

5. Gel-Halter für halbe Gele, SEBIA, Bestell-Nr. 10043110. 

6. Pipetten: 10 µl und 200 µl. 

7. Densitometer / Scanner für das Scannen von 82 x 51 mm oder 82 x 102 mm großen Gelen bei einer Wellenlänge von 570 nm oder mit einem 

Gelbfilter : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA oder PHORESIS Software für Flachbettscanner. Hinweise zur Bedienung und Kalibration entnehmen Sie 

bitte der Bedienungsanleitung des Herstellers. 

8. Material zur Qualitätskontrolle (Kontrollserum, Bestell-Nr. 4785). 

- 19 -


PROBEN FÜR DIE ANALYSE 

Auf HYDRAGEL 7/15 HR Gelen können Serum-, Urin- oder Liquorproben analysiert werden. 

Serumproteine können auch nach dem Färben mit Säureviolett oder Amidoschwarz-Färbelösung quantitativ bestimmt werden. 

Probenentnahme und -lagerung 

Für die Analyse werden frische Proben empfohlen. Die Gewinnung der Proben nach einem gebräuchlichen Verfahren für klinische Labortests 

durchführen. Falls erforderlich, können die Proben bis zu eine Woche bei 2 bis 8 °C gelagert werden. Durch Einfrieren bleiben die Proben mindestens 

einen Monat stabil. 

Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Protein- bzw. Lipoproteindenaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

Die Lagerstabilität gefrorener Serum- erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit Natriumazid, 0,2 g/l, versetzt werden. 

Die Lagerstabilität gefrorener Urin- erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit HEPES 0,1 M (pH-Wert 6,75), und Natriumazid, 0,2 g/l, versetzt werden. 

Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Proteindenaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

WICHTIG: Keine Borsäure als Konservierungsmittel verwenden. 

Probenvorbereitung 

1. Probenvorbereitung (qualitative Analyse) 

Serum 

Unverdünnte Serumproben verwenden. Nach der Lagerung im Kühl- oder Gefrierschrank können manche Serumproben (insbesondere 

Kryoglobulin- oder Kryogel-haltige Proben) zähflüssig oder trüb werden. Derartige Serumproben lassen sich mitunter schwer auftragen, da sie 

kaum durch die Zähne des Probenapplikators diffundieren. In diesen Fällen zu 75 µl Serum 25 µl Fluidil zugeben und 15 Sekunden im 

Rotationsmischer mischen. Anschließend mit dem Standardverfahren fortfahren. 

Liquor oder Kombination Liquor/Serum 

Proben mit einer Gesamt-Proteinkonzentration von etwa 10 g/l auftragen. 

WICHTIG: Serum und Liquor müssen die gleiche Proteinkonzentration aufweisen. 

Urin 

Die Analyse erfolgt an nichtkonzentrierten Urinproben. Wird eine höhere Empfindlichkeit benötigt, können die Proben nach der Konzentrierung 

aufgetragen werden. 

- Nichtkonzentrierte Urinproben: Unverdünnte Proben verwenden. Bei hoher Proteinkonzentration kann der Urin mit Kochsalzlösung bis auf 

ein Verhältnis von etwa 2 g/l verdünnt werden, da sich dadurch deutlichere Muster ergeben. 

- Konzentrierte Urinproben: Die Proben vor der Analyse bis zu einer Gesamt-Proteinkonzentration von etwa 5 g/l konzentrieren. 

WICHTIG: Einige Urinproben sind stark salzhaltig. Dadurch kann es während der Migration zu einer Deformation des Gels und damit zu einer 

Verzerrung der Elektrophoresemuster kommen. Wird die Interpretation durch eine derartige Verzerrung ungenau, sollte der Salzanteil des Urins 

mittels Dialyse entfernt werden. 

ZU BEACHTEN: Die Diffusion der Urinproben in die Applikatorspitzen kann behindert sein, wenn der Urin (nativ oder konzentriert) trüb ist. Es wird 

empfohlen, die Partikel durch Zentrifugation (z.B. 10 Minuten bei 3.000 Upm) oder Filtration (z.B. 0,45 µm Filter) zu entfernen. 

2. Probenvorbereitung (quantitative Analyse) 

Färben mit Amidoschwarz 

Unverdünnte Serumproben verwenden. 

Färben mit Säureviolett 

Serumproben verwenden, die zuvor mit Kochsalzlösung auf das Vierfache verdünnt wurden (1 Vol./3 Vol.). Anschließend mit dem 

Standardverfahren fortfahren. 

Folgende Proben nicht verwenden 

Keine hämolysierten Serumproben verwenden. Die Hämolyse verstärkt die Alpha-2 und Betafraktionen. 

Plasmaproben vermeiden. Das Fibrinogen ergibt eine Bande in der Nähe der Auftragsstelle, die mit monoklonalem Immunglobulin verwechselt werden könnte. 

DURCHFÜHRUNG 

Das HYDRASYS System ist ein halbautomatisches Multiparameter-Gerät, das eine automatische Bearbeitung der HYDRAGEL Agarosegele in der 

nachstehenden Reihenfolge durchführt: Probenapplikation, elektrophoretische Migration, Trocknen, Färben, Entfärben und Endtrocknen. Zu den 

manuellen Schritten gehört die Handhabung der Proben und Gele sowie die Bedienung des Geräts. 

DIE BEDIENUNGSANLEITUNG ZUM HYDRASYS SYSTEM AUFMERKSAM DURCHLESEN. 

I. VORBEREITUNG DER MIGRATION 

1. HYDRASYS einschalten. 

2. Einen Applikator so auf eine ebene Unterlage legen, daß die Nummern (Vertiefungen) nach oben zeigen (siehe Abb. 1). 

- In jede Vertiefung 10 µl unverdünnte Probenflüssigkeit auftragen. Das Füllen eines Applikators darf höchstens 2 Minuten dauern. 

- Den Applikator mit den Zähnen nach oben in die feuchte Kammer legen (nur am Schutzrahmen für die Zähne anfassen). Die Proben nach 

dem Auftragen der letzten Probe 5 Minuten lang in die Zähne einziehen lassen. Erfolgt die Anwendung erst (bis zu 8 Stunden) später, die 

komplette Kammer in den Kühlschrank stellen. Hinweise hierzu finden Sie in der Packungsbeilage zur feuchten Kammer. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen, und die Elektroden-/Applikatoren-Halter nach oben klappen. 

WARNHINWEIS: die Abdeckung bei hochgestellten Elektroden-Applikatoren-Haltern nicht schliessen! 

4. Im Gerätemenü das Migrationsprogramm wählen (an der Tastatur links). 

- Serumanalyse : Für HYDRAGEL 7 HR und HYDRAGEL 15 HR wählen Sie das Migrationsprogramm "7/15 HR1". 

- Liquor- oder kombinierte Liquor-/Serumanalyse : Für HYDRAGEL 7 HR und HYDRAGEL 15 HR wählen Sie das Migrationsprogramm 

"7/15 HR2". 

- Urinanalyse : 

1. Nichtkonzentrierte Urinproben : Für HYDRAGEL 7 HR und HYDRAGEL 15 HR wählen Sie das Migrationsprogramm "7/15 HR3". 

2. Konzentrierte Urinproben : Für HYDRAGEL 7 HR und HYDRAGEL 15 HR wählen Sie das Migrationsprogramm "7/15 HR2". 

5. Die Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus der Packung nehmen. Die Perforation des Plastikfilms in die Stifte des Elektroden-Halters 

einführen. Die Plastikfolie muß dabei zum Applikator-Halter zeigen (siehe Abb. 2). 

- 20 -


6. Das Gel aus der Verpackung nehmen. 

- Ein dünnes Filterpapier vorsichtig und gleichmäßig auf die Oberfläche legen um überschüssige Feuchtigkeit zu entfernen. Das Filterpapier 

sofort wieder entfernen. 

WARNUNG: Das Filterpapier nicht zu lange mit dem Gel in Kontakt lassen, um ein Austrocknen des Gels zu vermeiden. 

- Für HYDRAGEL 7 HR 120 µl und für HYDRAGEL 15 HR 200 µl destilliertes oder entionisiertes Wasser in das untere Drittel des Rahmens 

geben, der auf der Peltier-Platte des Migrationsmoduls aufgedruckt ist. 

- Das Gel (mit der Gelseite nach oben) an die untere Kante des aufgedruckten Rahmens anlegen (siehe Abb. 3). 

- Das Gel biegen und auf dem Wasser abrollen (siehe Abb. 3). Darauf achten, daß keine Luftblasen eingeschlossen werden, das Wasser 

unter der gesamten Gelplatte verteilt ist und das Gel am aufgedruckten Rahmen anliegt. 

7. Beide Halter nach unten klappen. In dieser Position dürfen die Pufferstreifen keinen Kontakt mit dem Gel haben. DIE HALTER NICHT MIT 

GEWALT BIS GANZ NACH UNTEN DRÜCKEN. 

8. Den/die Applikator(en) aus der feuchten Kammer nehmen. Dabei nur am Schutzrahmen anfassen. 

- Den Schutzrahmen für die Zähne entfernen. 

- Den Applikator an Position 5 auf dem Halter einsetzen. 

WICHTIG: Die auf dem/den Applikator(en) aufgedruckten Ziffern müssen immer zum Bediener zeigen (siehe Abb. 4). 

9. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

10. Die Migration sofort starten. Dazu die grüne Pfeiltaste «START» auf der linken Seite der Tastatur drücken. 

WICHTIG: Darauf achten, daß die Lüftungsschlitze an der rechten Geräteseite nicht verdeckt sind. 

MIGRATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Die beiden Halter werden soweit gesenkt, daß die Pufferstreifen und der/die Applikator(en) in Kontakt mit der Geloberfläche kommen. 

• Der Probenapplikator-Halter wird angehoben. 

• Migrationsprogrammen "7/15 HR1" und "7/15 HR2" : Die Migration erfolgt für HYDRAGEL 7 HR und HYDRAGEL 15 HR, unter Anlegen einer 

Gleichspannung von 255 V Gleichstroms, bei einer Temperatur von 20 °C, die durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten wird, bis 75 Vh erreicht sind 

(nach etwa 18 minuten). 

• Migrationsprogramm "7/15 HR3" : Die Migration erfolgt für HYDRAGEL 7 HR und HYDRAGEL 15 HR, unter Anlegen einer Gleichspannung von 255 

V Gleichstroms, bei einer Temperatur von 20 °C, die durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten wird, bis 40 Vh erreicht sind (nach etwa 10 minuten). 

• Der Elektroden-Halter wird angehoben, wodurch der Kontakt zu den Elektroden unterbrochen wird. 

• Zum Trocknen des Gels wird die Temperatur der Peltier-Platte für 9 Minuten auf 60 °C erhöht. 

• Die Platte kühlt ab. Sobald 50 °C erreicht sind, ertönt ein akustisches Signal, um den Bediener darauf aufmerksam zu machen, daß sich die 

Abdeckung des Migrationsmoduls entriegelt. Bis zum Öffnen der Abdeckung wird die Temperatur der Platte auf 50 °C gehalten. Anschließend sinkt 

die Temperatur (in weniger als 5 Minuten) auf 20 °C. Nun kann eine weitere Migration durchgeführt werden. 

HINWEIS: Während der Migration bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

II. VORBEREITUNG DER GELBEARBEITUNG 

1. Die Abdeckung öffnen. 

2. Den/die Applikator(en) herausnehmen und verwerfen. 

3. Beide Halter anheben, die Pufferstreifen an den Plastikenden herausnehmen und verwerfen. 

4. Das Gel für die weitere Bearbeitung herausnehmen. 

5. Die Elektroden und die Peltier-Platte mit einem feuchten Papiertuch abwischen. 

6. Den Gel-Halter öffnen und flach hinlegen. Das getrocknete Gel (mit der Gelseite nach oben) in die Ausfräsung des Gel-Halters einsetzen, und 

den Gel-Halter schließen. Darauf achten, daß das Gel im Halter korrekt positioniert ist (siehe Abb. 5). 

7. Den Gel-Halter in das Gelbearbeitungs-/Färbemodul einsetzen. 

WICHTIG: Vor dem Start des Gelbearbeitungs-/Färbeprogramms überprüfen, daß: 

- der Färbelösungsbehälter 300 ml Färbelösung enthält ; 

- der Entfärbelösungsbehälter mindestens 1 Liter Entfärbelösung enthält ; 

- der Abfallbehälter leer ist. 

Hinweise zum Anschluß an die Reagenzkanäle werden am Monitor des Gerätes angezeigt (drücken Sie dazu die Taste KANAELE). 

WICHTIG: Nicht vergessen, die nicht benötigten Kanäle zu blockieren. 

8. Im Gerätemenü das Färbeprogramm «HR ACID VIOLET» oder «HR AMIDO» wählen, und den Vorgang durch Drücken der «START»-Taste 

(grüner Pfeil auf der rechten Seite der Tastatur) starten. 

Während der Färbe-, Entfärbe- und Trocknungsschritte bleibt das Färbemodul verriegelt. 

Nach einer Abkühlphase des Moduls ertönt ein akustisches Signal, und das Färbemodul entriegelt sich (die Luftkühlung erfolgt solange, bis 

der Gel-Halter entnommen wird). 

III. ABSCHLUSS DER GELBEARBEITUNG 

1. Den Gel-Halter aus dem Färbemodul nehmen, die Bügel nach oben klappen und das getrocknete Gel entnehmen. 

ZU BEACHTEN: Nach der Färbung / Entfärbung des Gels und vor der Densitometrie / dem Scannen kann mit dem Gel ein zusätzlicher 

Waschschritt durchgeführt werden, um den Hintergrund des Gels klarer zu machen und überschüssige Farbe, die als blaue Punkte erscheinen 

kann, zu entfernen. Zu diesem Zweck das Gel mit dem Programm " WASC. ISOENZ/GEL " waschen. 

2. Bei Bedarf die Rückseite (den Plastikfilm) der trockenen Folie mit einem weichen, feuchten Papiertuch reinigen. 

ERGEBNISSE 

Qualitätskontrolle 

Bei jedem Lauf wird empfohlen eine normale Probe oder ein Kontrollserum mitlaufen zu lassen (Kontrollserum, SEBIA, Art.-Nr. 4785). 

Werte (quantitative Analyse) 

Durch Einlesen der gefärbten Elektropherogramme mit einem Densitometer (bei 570 nm) können relative Konzentrationen (in Prozent) individueller 

Proteinfraktionen erhalten werden. 

- 21 -


Aus einer gesunden Population von 225 Erwachsenen (Männer und Frauen) wurden auf HYDRAGEL 7/15 HR Gelen Normalwerte (Mittelwert ± 2 SD) 

für die wichtigsten elektrophoretischen Serumproteinfraktionen bestimmt: 

FRAKTION HYRYS PHORESIS Albumin 56,2 – 69,0 57,5 – 67,9 Alpha-1-Globuline 1,2 – 3,2 1,0 – 3,8 Alpha-2-Globuline 7,8 – 13,4 7,2 – 12,8 Beta-Globuline 7,4 – 13,4 7,6 – 13,6 

| Gamma-Globuline | 9,8 – 18,6 | 10,3 – 18,3 | 

Jedem Labor wir empfohlen eigene Normalwerte festzulegen. 

Interpretation 

Die Interpretation erfolgt qualitativ. 

SERUMPROTEIN (6) 

Die Interpretation erfolgt durch Vergleich der Elektropherogramme der klinischen Probe mit denen einer Normalkontrolle. Im Falle einer Erhöhung bzw. 

Erniedrigung einer Fraktion oder bei Auftreten einer zusätzlichen Fraktion ist es in der Regel erforderlich, die beobachteten Abweichungen durch 

ergänzende Tests, wie die Quantifizierung der spezifischen Proteine, die Immunelektrophorese oder die Immunfixation, zu bestätigen. 

Unter den zahlreichen Plasmaproteinen kommen nur etwa 15 in ausreichender Konzentration vor, um sie auf hochauflösenden Gelen sichtbar zu 

machen. Dank der hohen Empfindlichkeit des HYDRAGEL 7/15 HR Gels im kathodennahen Bereich können schwach gefärbte monoklonale oder 

oligoklonale Banden nachgewiesen werden. Die Interpretation erlaubt primär qualitative Aussagen. 

LIQUORPROTEINE (4,6,11,12,13) 

Banden in der Gammazone von Liquorproben ohne Entsprechung in den Serumproben müssen durch ein Immunfixationsverfahren (HYDRAGEL 

3/6 CSF SEBIA oder SEBIA Immunfixations-Kits, HYDRAGEL 1/2/4/9 IF SEBIA) bestätigt werden, um eine Bewertung der intrathekalen Synthese 

vornehmen zu können. Die immunologische Bestätigung empfiehlt sich, da in der Gammazone neben Immunglobulinen auch andere Banden (z.B. 

Tau-Fraktion, Karboanhydrase, Postgamma- oder C-reaktives Protein) liegen können. 

Hinweis: Da die Interpretation ausschließlich durch Vergleich erfolgt, sind folgende Hinweise zu beachten: 

- Bei Analyse von gleichzeitig abgenommenen Körperflüssigkeiten (Liquor/Serum) darf keine Behandlung erfolgen, die zu einer Veränderung der 

Ig G-Konzentration im Serum führt. 

- Beide Proben müssen identische Protein- bzw. Immunglobulinmengen aufweisen. Die zugrunde liegende Quantifizierung sollte daher eine gute 

Präzision aufweisen und nur mit geeigneten Reagenzien durchgeführt werden. 

Liquor (CSF) ist eine Körperflüssigkeit mit geringer Proteinkonzentration. Die Proteinmenge in normalem CSF beträgt etwa 0,30 g/l ± 0,15. Die 

Mehrzahl der CSF-Proteine geht aus der Filtration der Serumproteine durch die Blut-Liquor-Schranke hervor. Die Analyse auf HYDRAGEL 7/15 HR 

Gelen erfordert die Konzentration des Liquors bis auf etwa 10 g/l. 

Ein normales CSF-Muster weist folgende Reihenfolge der Fraktionen auf: 

• Präalbumin oder Transthyretin: schnellste Fraktion 

• Albumin: mit einem Anteil von etwa 75 % die stärkste Fraktion der Gesamtproteine 

• Alpha-1-Fraktion: entspricht im wesentlichen Alpha-1-Antitrypsin 

• Alpha-Lipoprotein 

• Alpha-2-Fraktion: enthält vor allem Proteine hoher Molmasse, sie ist sehr schwach, da die Proteine die Blut-Liquor-Schranke nicht passieren können 

• Betafraktion: enthält Transferrin 

• Beta-2-Fraktion: enthält vor allem «CSF-spezifisches» Transferrin, die Tau-Fraktion, eine kohlehydratarme (sialinsäurearme) Form des Transferrins 

• Gammafraktion: enthält vor allem Ig G und gelegentlich Ig A und Ig M. 

In zahlreichen Studien wurde eine Zunahme der im Zentralnervensystem synthetisierten Immunglobuline nachgewiesen. Die Ursache für die 

Antigenstimulierung dieser Ig G-Produktion ist noch unbekannt. Hypothesen legen nahe, daß es sich um eine Virusinfektion oder um 

Autoimmunreaktionen handeln könnte. 

Ein Ig G-Anstieg kann nicht nur bei multipler Sklerose, sondern auch bei infantiler Entmarkungskrankheit, subakuter sklerosierender Enzephalitis und 

anderen Entzündungs- und Infektionskrankheiten nachgewiesen werden. 

Multiple Sklerose läßt sich anhand multipler monoklonaler Banden nachweisen, die das oligoklonale Muster von Gammaglobulinen aufweisen. Diese 

Anomalien erscheinen bereits in einem sehr frühen Stadium der Erkrankung. Es können Banden von sehr schwacher bis sehr starker Intensität 

auftreten. 

Dieses oligoklonale Muster wird auch bei anderen Störungen des Zentralnervensystems (entzündlichen und nicht entzündlichen Infektionskrankheiten) 

gefunden. 

Multiple Banden wurden bei sklerosierender Enzephalitis, Neurosyphilis, Virusenzephalitis, Meningoenzephalitis und bakterieller Meningitis 

nachgewiesen. Sie werden ebenfalls, wenn auch seltener, bei peripherer Neuropathie, Tumoren, Hydrozephalie, degenerativen Erkrankungen und 

bestimmten Gefäßleiden gefunden. All diese Fälle dürfen nicht als falsch-positive Ergebnisse gewertet werden, sondern deuten eher auf eine erhöhte 

immunologische Aktivität des Zentralnervensystems hin. Es wird dringend empfohlen, bei derartigen Liquorproben gleichzeitig das Serum des 

betreffenden Patienten (in gleicher Konzentration, d.h. etwa 10 g/l) zu analysieren. Bei einigen lymphoproliferativen Anomalien kann ein oligoklonales 

Muster sowohl im Serum als auch im Liquor nachgewiesen werden. 

Bei oligoklonalen Mustern sollte eine Bestätigung des Befunds mit Immunfixations-Kits erfolgen: 

• HYDRAGEL 1 IF SEBIA (Bestell-Nr. 4301), HYDRAGEL 2/4 IF, SEBIA (Bestell-Nr. 4302, 4304 und 4308), 

• HYDRAGEL 9 IF, SEBIA (Bestell-Nr. 4309), 

• HYDRAGEL 3/6 CSF, SEBIA (Bestell-Nr. 4350 und 4351), 

• HYDRAGEL 1 BENCE JONES, SEBIA (Bestell-Nr. 4321), HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES, SEBIA (Bestell-Nr. 4322 und 4324). 

- 22 -


URIN 

Die Harnelektrophorese dient zum Nachweis monoklonaler Harnbestandteile. 

HYDRAGEL 7/15 HR wird dabei als Screening-Test für Harnproteine eingesetzt. Er ermöglicht den Nachweis monoklonaler Komponenten, diese 

müssen jedoch anschließend durch Immunfixation identifiziert werden. Ferner erlaubt er den Nachweis von Proteinen tubulären, glomerulären oder 

gemischten Ursprungs, die sich dann durch geeignete Methoden (wie die Auftrennung entsprechend der Molekularmasse in SDS-Puffer oder 

spezifische nephelometrische Messungen bzw. die Immunfixation unter Verwendung entsprechender Antikörper) klassifizieren lassen. 

Interferenzen und Einschränkungen 

Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Protein- bzw. Lipoproteindenaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

Keine hämolysierten Serumproben verwenden. 

Plasmaproben vermeiden. 

Es wird darauf hingewiesen, dass aufgrund der derzeitigen Kenntnis des zugrundeliegenden Analysenprinzips (Theorie der Zonenelektrophorese, 

Auflösungsvermögen und Sensitivität) keine Garantie für ein 100 % Erkennen aller monoklonalen Komponenten gewährt werden kann. 

Fehlersuche 

Kommt es trotz sachgerechter Lagerung und Vorbereitung der Materialien und Beachtung der Verfahrensbeschreibung zum Versagen des Tests, 

wenden Sie sich bitte an den SEBIA Kundendienst. 

Datensicherheitsblätter sowie Informationen zur Abfallentsorgung sind bei SEBIA GmbH, Fulda zu erfragen. 

CHARAKTERISTISCHE DATEN 

Es werden standardisierte Materialien, Probenvorbereitungen und Verfahren eingesetzt. Sämtliche Elektropherogramme werden visuell ausgewertet. 

Qualitative Analyse 

Die mit HYDRAGEL 7/15 Gelen erzielten Ergebnisse zeigen unter allen getesteten Gesichtspunkten eine gute Reproduzierbarkeit innerhalb eines 

Gels und zwischen unterschiedlichen Gelen. Innerhalb von Wiederholungen gab es keine visuellen Unterschiede. 

Pathologische und normale Serumproben, gepaarte Serum-/Liquorproben und Urinproben von 116 Patienten wurden auf HYDRAGEL 7/15 HR Gelen 

und auf vergleichbaren, hochauflösenden, kommerziell erhältlichen Gelen getestet. Die Proben wurden entsprechend der jeweilig empfohlenen 

Prozedur vorbereitet. Als Basis für den Vergleich dienten Ähnlichkeiten / Unterschiede bei den elektrophoretischen Mustern und die Gegenwart 

monoklonaler oder oligoklonaler Fraktionen. Der visuelle, qualitative Vergleich zwischen diesen beiden Tests basierte auf der Anzahl der Banden und 

ihrer Lokalisation. In sämtlichen 116 Proben stimmten die Ergebnisse aus beiden Verfahren überein und sie waren in Übereinstimmung mit der 

klinischen Diagnose. 

Semi-quantative Analyse 

Bei der semi-quantitativen Anwendung zeigten die mit der HYDRAGEL 7/15 Prozedur erhaltenen Ergebnisse unter allen getesteten Gesichtspunkten 

eine sehr gute Reproduzierbarkeit innerhalb eines Gels und zwischen unterschiedlichen Gelen. Bei Wiederholungen gab es keine visuell erkennbaren 

Unterschiede. Der mittlere Korrelationskoeffizient betrug 4 %. 

Die HYDRAGEL 7/15 Prozedur mit den alternativen Anfärbungen Säureviolett und Amidoschwarz wurde mit einer weiteren kommerziell erhältlichen 

Gelelektrophorese Prozedur (traditionelle hochauflösende Trennung von Serumproteinen mit Säureviolett-Anfärbung) verglichen: 

Für den Vergleich wurden sämtliche Elektropherogramme als Auftrennung in 5 Fraktionen eingelesen (Gelbfilter). 

Die klinischen Proben (n = 56) wurden mit beiden Prozeduren bestimmt und die relativen Konzentrationen jeder Fraktion wurden einer linearen 

Regressionsanalyse unterzogen. Der mittlere Korrelationskoeffizient von allen Proteinfraktionen betrug bei beiden Färbelösungen 0,973. 

HYDRAGEL 15 HR (Säureviolett) HYDRAGEL 15 HR (Amidoschwarz) FRAKTION Korrelations- Steigung y- Achsenabschnitt Wertebereich (%) Korrelations- Steigung y- Achsenabschnitt Wertebereich (%) koeffizient (HYDRAGEL 15 HR) koeffizient (HYDRAGEL 15 HR) Albumin 0,981 0,98 1,89 36,7 – 66,1 0,985 0,96 2,35 36,1 – 67,4 Alpha-1 0,976 0,99 -0,11 1,5 – 7,5 0,982 0,97 -0,03 1,3 – 7,1 Alpha-2 0,982 0,98 -0,14 6,8 – 24,5 0,978 0,96 0,31 5,7 – 24,2 Beta 0,956 0,91 0,90 5,8 – 19,8 0,918 0,95 0,41 5,4 – 20,0 

| Gamma | 0,991 | 0,99 | -0,16 | 8,3 – 40,0 | 0,990 | 0,94 | 1,05 | 7,2 – 37,5 | 

Empfindlichkeit 

Die Empfindlichkeit wurde aus der höchsten Verdünnungsreihe ermittelt, die eine erkennbare Bande ergibt. Mit den Programmen «HR1» und «HR2» 

betrug die Nachweisempfindlichkeit 100 - 300 mg/l für ein monoklonales Protein (Ig G, Kappa). 

Mit dem Programm «HR3» betrug die Nachweisempfindlichkeit 15 - 20 mg/l (Albumin und Bence Jones Protein). Bei Färbung mit Amidoschwarz und 

mit Säureviolett wurde nahezu dieselbe Nachweisempfindlichkeit beobachtet. 

HINWEIS: Entsprechend der Position der monoklonalen Komponente und des polyklonalen Hintergrundes in der Gamma-Zone kann die 

Detektionsgrenze variieren. 

Linearität 

Die Assays waren bei beiden Färbeverfahren bis mindestens 60 g/l Albumin und 40 g/l Ig G linear. 

LITERATUR 








43, 2332-2346. 

- 23 -










Acta, 56 : 125-126. 





35 : 1997. 



MIGRATIONMUSTER 

+ 

Prä-albumine 

Albumin 

Orosomucoïd 


Haptoglobin 

Ceruloplasmin 


komplément C3 

ß2 Mikroglobulin 

Tau Fraktion 



Gc Globulin 

α2 Makroglobulin 

Transferrin 

Hämopexin 


C1 Esterase-Inhibitor 

γ Globuline 

G - A - M - D - E 

- 

- 24 -


GEBRUIKSAANWIJZING 

De HYDRAGEL 7 HR en HYDRAGEL 15 HR kits zijn ontworpen voor de multifractionering van proteïnen uit menselijke sera of andere biologische 

vloeistoffen (urine of liquor cerebrospinalis, CSF) door middel van elektroforese op alkalisch gebufferde (pH 8,6) agarose-gels. Ze worden gebruikt in 

combinatie met het halfautomatische HYDRASYS instrument. De gescheiden proteïnen worden gekleurd met een zuur-violet oplossing. Overtollige 

kleurstof wordt verwijderd met een zuuroplossing. De gekleurde en gedroogde gels kunnen visueel worden geëvalueerd op afwijkingen in het 

elektroforetisch patroon. 

Iedere agarose-gel is bedoeld voor het testen van: 

• 7 monsters in de HYDRAGEL 7 HR kit, 

• 15 monsters in de HYDRAGEL 15 HR kit. 

Uitsluitend voor gebruik bij in vitro diagnostiek. 

PRINCIPE VAN DE TEST 

Proteïnen-elektroforese is een terdege bewezen methode die in klinische laboratoria routinematig wordt gebruikt voor het doorlichten van serum en 

andere biologische vloeistoffen op proteïnen-afwijkingen. Deze methode is gebaseerd op het principe van zone-elektroforese, uitgevoerd op een 

geschikt hulpmedium. Agarose is ontwikkeld tot een veelzijdig en effectief hulpmedium. Hoewel de meeste klinische laboratoria tevreden zijn met het 

«conventionele» vijf-zone patroon van serumproteïnen, kunnen technieken met een hoog onderscheidingsvermogen extra diagnostische informatie 

opleveren. 

Op HYDRAGEL 7/15 HR gels scheiden de proteïnen in serum, urine of liquor cerebrospinalis (CSF) zich in ongeveer tien fracties. Iedere fractie bevat 

een of meerdere proteïnen. 

De samenstelling van de gel en de keuze van de kleurstof maken een uitstekende resolutie mogelijk, alsmede een hoge gevoeligheid, met name in 

de gamma-zone. 

HYDRAGEL 7/15 HR is een kwalitatieve test. 

REAGENTIA EN MATERIALEN DIE WORDEN BIJGELEVERD IN DE HYDRAGEL 15 HR EN HYDRAGEL 7 HR KITS 

BESTANDDELEN PRODUCTNR. 4102 PRODUCTNR. 4122 PRODUCTNR. 4105 PRODUCTNR. 4125 Agarose-gels (klaar voor gebruik) 10 gels 10 gels 10 gels 10 gels Gebufferde strips (klaar voor gebruik) 10 pk van ieder 2 stuks 10 pk van ieder 2 stuks 10 pk van ieder 2 stuks 10 pk van ieder 2 stuks Verdunner voor de kleuroplossing (concentraat) 1 flesje, 60 ml 1 flesje, 60 ml Amidozwart kleurstof (concentraat) 1 flesje, 20 ml 1 flesje, 20 ml Zuurviolet kleurstof (concentraat) 1 flesje, 75 ml 1 flesje, 75 ml Applicators (klaar voor gebruik) 

| 1 pk van 10 stuks (7 tangen) 1 pk van 10 stuks (15 tangen) 1 pk van 10 stuks (7 tangen) 1 pk van 10 stuks (15 tangen) Velletjes filterpapier | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 

VOOR OPTIMALE RESULTATEN 

Onderdelen uit dezelfde kit dienen altijd samen te worden gebruikt en in overeenstemming met de instructies op de bijsluiter. 

LEES DE GEBRUIKSAANWIJZING ALTIJD ZORGVULDIG DOOR. 

1. AGAROSE-GELS 

Voorbereiding 

De agarose-gels zijn klaar voor gebruik. Iedere gel bevat: agarose, 8,0 g/l ; tris-barbital buffer pH 8,6 ± 0,1 ; additieven, niet-schadelijk in de gebruikte 

concentraties, nodig voor een optimale prestatie. 

WAARSCHUWING: Agarose-gels bevatten 0,18 % barbital. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname dient onmiddellijk een arts 

gewaarschuwd te worden! 

Gebruik 

Hulpmedium voor proteïnen-elektroforese. 

Opslag, stabiliteit en tekenen van verval 

Bewaar de gels horizontaal in de originele veiligheidsverpakking, bij kamertemperatuur (15 tot 30 °C). (De pijl op de voorzijde van de kit-doos dient 

omhoog te wijzen.) NIET KOELEN OF INVRIEZEN. Bewaar de gels niet in de buurt van een venster of een warmtebron. Belangrijke 

temperatuursschommelingen tijdens de opslagperiode dienen vermeden te worden. Ze zijn stabiel tot de laatste gebruiksdatum die vermeld staat op 

de verpakking van de kit of op de etiketten van de gel-verpakking. 

Gooi de gel weg indien: 

(I) 

er zich kristallen of precipitaat vormen op het oppervlak van de gel of wanneer de textuur van de gel erg zacht wordt (dit zijn allemaal gevolgen 

van het invriezen van de gel), 

(II) er zich tekenen voordoen van bacterie- of schimmelgroei, 

(III) er zich een abnormale hoeveelheid vloeistof bevindt in de gel-doos (als gevolg van buffer-afscheiding uit de gel door onjuiste opslagcondities). 

2. GEBUFFERDE STRIPS 

Voorbereiding 

De gebufferde sponsstrips zijn klaar voor gebruik. Iedere strip bevat: tris-barbital buffer pH 8,7 ± 0,2 ; natriumazide ; additieven, niet schadelijk in de 

gebruikte concentraties, nodig voor een optimale prestatie. 

WAARSCHUWING: De buffer in de strips bevat 0,55 % barbital en 0,30 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Bij het weggooien dient ieder contact met zuren, lood of koper vermeden te worden, 

aangezien van deze stoffen bekend is dat ze een explosieve of toxische verbinding kunnen aangaan met natriumazide. 

Gebruik 

Gebufferde strips fungeren als elektroforese-bufferreservoir en zorgen voor contact tussen de gel en de elektrodes. 

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SEBIA INSTRUCTIEBLAD - Nederlands



Bewaar de gebufferde strips horizontaal in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur of in de koeling. (De pijl aan de voorkant van 

de kitdoos dient omhoog te wijzen.) 

De strips blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of de etiketten van de verpakking van 

de gebufferde strips. 

NIET INVRIEZEN. 

Gooi de gebufferde strips weg als de verpakking geopend is en de strips uitdrogen. 

3. VERDUNNER VOOR DE KLEUROPLOSSING (Prod. Nr 4105 en Prod. Nr 4125) 

Bereiding 

De voorraad verdunner voor de kleuroplossing moet toegepast worden volgens de beschrijving in de paragraaf "AMIDOZWART KLEUROPLOSSING". 

Het bevat een zure oplossing. 

Toepassing 

Bij de preparatie van de amidozwart kleuroplossing. 


De voorraad verdunner voor de kleuroplossing wordt bewaard bij kamertemperatuur of gekoeld. De verdunner is stabiel tot de houdbaarheidsdatum 

zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op de labels van de flesjes met verdunner voor de kleuroplossing. DIT PRODUCT NIET 

INVRIEZEN! 

Geen natriumazide toevoegen. 

4. AMIDOZWART KLEUROPLOSSING (Prod. Nr 4105 en Prod. Nr 4125) 

Bereiding 

De geconcentreerde amidozwart kleuringoplossing is een viskeuze oplossing die kan geleren. De integriteit van de basisoplossing wordt niet beïnvloed 

door de toename van de viscositeit of de hardwording. 

In alle gevallen adviseren wij u de hieronder beschreven procedure te volgen om de perfecte kleuring te behouden: 

1. Voeg 15 ml verdunningsmiddel aan het flesje met geconcerteerd amidozwart toe. 

2. Sluit het flesje zorgvuldig. 

3. Schut het flesje nu stevig gedurende ongeveer 5 seconden. 

4. Giet de oplossing in de houder van waaruit de kleuroplossing verwerkt wordt. 

5. Herhaal deze stap tweemaal, zo nodig driemaal. 

6. Giet de resterende verdunner in de houder en vul het volume aan tot 300 ml met gedestilleerd of gedeioniseerd water. 

7. Meng de inhoud van de cubitainer stevig gedurende 5 tot 10 minuten. 

De kleuringoplossing is nu gereed voor gebruik. 

OPMERKING : Een onvolledige oplossing van de kleurstof zal een onvolledige kleuring van de albuminefractie opleveren (een laag percentage of een 

wit gat in de fractie). 

Na verdunning bevat de werkzame verdunde kleuroplossing: zuuroplossing pH ≈ 2 ; amidozwart, 0.4 g/dl ; ethyleenglycol, 6.7 % ; additieven, 

ongevaarlijk bij te toegepaste concentraties die nodig zijn voor optimale werking. 

WAARSCHUWING: Schadelijk bij inname. 

Toepassing 

Bij het kleuren van gels tijdens elektroforetische proteïneseparatie. 

BELANGRIJK : De kleuroplossing is ontwikkeld voor het kleuren van een maximum van 10 gels. Na het kleuren van 10 gels dient u de oplossing te 

vervangen. 


Zowel de standaard als de gebruiksoplossingen dienen bij kamertemperatuur of gekoeld bewaard te worden in gesloten containers om verdamping 

te voorkomen. De standaard kleuroplossing is stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op het 

label van de flesjes met kleuroplossing. 

De gebruiksoplossing is gedurende 1 maand stabiel. 

De verdunde oplossing kleurstof niet in de buurt van een warmtebron bewaren. 

5. ZUURVIOLET KLEURSTOF (Prod. Nr 4102 en Prod. Nr 4122) 

Voorbereiding 

Ieder flesje grondvoorraad zuur-violet kleurstof dient te worden verdund met gedestilleerd of gedeïoniseerd water tot een totaal volume van 300 ml. 

Na verdunning bevat de werkzame kleuringoplossing: zuuroplossing pH ≈ 2 ; zuurviolet, 2 g/l ; ethyleenglycol, 3.25 % ; additieven, in de gebruikte 

concentraties niet schadelijke toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING : Inname is schadelijk. 

Gebruik 

Voor het kleuren van gels bij elektroforetische proteïnenscheidingen. 

BELANGRIJK: De kleuringsoplossing is bedoeld voor het kleuren van slechts 10 gels. Vervang de oplossing na 10 kleuringsfases. 


Bewaar zowel grondvoorraad als werkzame kleurstofoplossing bij kamertemperatuur of gekoeld in afgesloten reservoirs om verdamping te 

voorkomen. Standaardsolutie kleurstof is stabiel tot de laatste gebruiksdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of op de etiketjes van de 

flesjes kleurstof. Werkzame kleurstofoplossing blijft gedurende 6 maanden stabiel. 

6. APPLICATORS 

Gebruik 

Voorgesneden applicators voor eenmalig gebruik, voor het aanbrengen van het monster. 

Opslag 

Bewaar de applicators op een droge plaats bij kamertemperatuur of gekoeld. 

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7. VELLETJES FILTERPAPIER 

Gebruik 

Voorgesneden dunne velletjes absorberend papier voor eenmalig gebruik, voor het opdeppen van overtollig vocht van het oppervlak van de gel vóór 

aanbrenging van de monsters. 

Opslag 

Bewaar de dunne velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

BENODIGDE MAAR NIET BIJGELEVERDE REAGENTIA 

1. FYSIOLOGISCHE ZOUTOPLOSSING 

Voorbereiding 

Maak een oplossing van 0,15 M (9 g/l) NaCl met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Gebruik 

Voor het verdunnen van monsters. 


Bewaren bij kamertemperatuur of in de koeling. Weggooien na 3 maanden of wanneer zich veranderingen voordoen in het uiterlÿk aspect bijvoorbeeld 

wanneer er vertroebeling ontstaat door besmetting met micro-organismen. Voor langere opslagperioden kunt u natriumazide toevoegen, 1 g/l. 

2. ONTKLEURINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Ieder flesje grondvoorraad Ontkleuringsoplossing (SEBIA, Productnr. 4540, 10 flesjes met elk 100 ml) dient te worden verdund met gedestilleerd of 

gedeïoniseerd water tot een totaal volume van 100 liter. Het is handig om slechts 5 ml van de standaardoplossing te verdunnen tot een totaal volume 

van 5 liter, de inhoud van het reservoir ontkleuringsoplossing. Na verdunning bevat de werkzame ontkleuringsoplossing: citroenzuur, 0,5 g/l. 

Gebruik 

Voor het ontkleuren, dat wil zeggen het verwijderen van overtollige en achtergrondkleurstof van de gels en voor het spoelen van de kleuringskamer 

na schoonmaken met reinigingsoplossing. Giet om de zuurgraad van de vlekkenoplosser te neutraliseren 15 mL van een 50 % Sodium Hydroxydeoplossing 

in de lege afvalbak. 


Bewaar de grondvoorraad ontkleuringsoplossing bij kamertemperatuur of gekoeld. Hij is stabiel tot de laatste gebruiksdatum die vermeld staat op de 

verpakking van de kit of op de etiketjes van de flesjes ontkleuringsoplossing. Werkzame ontkleuringsoplossing blijft, bij kamertemperatuur en in een 

afgesloten fles, stabiel gedurende één week. Geen natriumazide toevoegen. 

Gooi de werkzame ontkleuringsoplossing weg wanneer het er anders uit gaat zien, bijvoorbeeld wanneer er vertroebeling ontstaat door besmetting 

met micro-organismen. 

Om te voorkomen dat micro-organismen zich kunnen verspreiden in de verdunde ontkleuringsoplossing wanneer deze langer dan een week bewaard 

moet worden, kunt u er 5 µl/dL ProClin 300 aan toevoegen. 

De verdunde, ProClin bevattende ontkleuringsoplossing blijft, indien bewaard in een afgesloten fles bij kamertemperatuur of in de koeling, stabiel tot 

aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes ontkleuringsoplossing. 

3. HYDRASYS REINIGINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Ieder flesje grondvoorraad HYDRASYS Reinigingsoplossing (SEBIA, Productnr. 4541, 10 flesjes van ieder 80 ml) dient te worden verdund met 

gedestilleerd of gedeïoniseerd water tot een totaal volume van 5 liter. Na verdunning bevat de werkzame reinigingsoplossing: alkalische buffer 

pH 8,8 ± 0,3 ; natriumazide. 

WAARSCHUWING: De grondvoorraad reinigingsoplossing bevat 0,625 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Natriumazide kan leiden tot explosieve of toxische verbindingen met zuren, lood of 

koper wanneer het met deze stoffen in contact komt. Bij het weggooien altijd wegspoelen met een ruime hoeveelheid water. 

Gebruik 

Dit dient voor het schoonmaken van het HYDRASYS Kleuringscompartiment. Gebruik het periodiek ; wanneer het instrument bijvoorbeeld dagelijks 

gebruikt wordt, is het goed om het kleuringscompartiment wekelijks te reinigen. 

Voor gebruiksaanwijzingen verwijzen wij naar de productinformatie. 


Bewaar zowel de grondvoorraad als de werkzame reinigingssolutie in afgesloten reservoirs bij kamertemperatuur of in de koeling. Ze zijn stabiel tot 

de laatste gebruiksdatum die vermeld staat op het etiket van het flesje reinigingssolutie. 

Gooi de werkzame reinigingssolutie weg wanneer hij er anders uit gaat zien, bijvoorbeeld wanneer er vertroebeling ontstaat door besmetting met 

micro-organismen. 

4. FLUIDIL 

Voorbereiding 

Fluidil (SEBIA, Productnr. 4587, 5 ml) is klaar voor gebruik. 

Gebruik 

Voor het verdunnen van viskeuze of troebele monsters, bijvoorbeeld sera die cryoglobuline of cryogel bevatten. 


Bewaren bij kamertemperatuur of in de koeling. Het is stabiel tot de laatste gebruiksdatum die vermeld staat op het flesje Fluidil. 

Het Fluidil moet vrij van neerslag zijn. 

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BENODIGDE MAAR NIET BIJGELEVERDE APPARATUUR EN ACCESSOIRES 

1. HYDRASYS Systeem SEBIA, Prod. Nr. 1210 of Nr 1211. 

2. Micro-pipet, voor handmatig dan wel automatisch gebruik, zoals bijvoorbeeld de HYDRAplus SEBIA, productnr. 1215, als extra keuzemogelijkheid 

voor het vullen van de monsterapplicators. 

3. Natte opslagkamer, Productnr. 1270, bijgeleverd bij de HYDRASYS. 

4. Container Kit bijgeleverd bij de HYDRASYS. 

5. Gel-houder voor half-gels SEBIA, Productnr. 10043110. 

6. Pipetten: 10 µl en 200 µl. 

7. Densitometer / scanner in staat tot scannen van 82 x 51 mm of 82 x 102 mm gelplaten bij 570 nm of met geel filter: HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

of FORESE software voor de scanner met vlakke papier doorvoer. Zie voor gebruiks- en kalibratieprocedures de instructies van de fabrikant. 

8. Materialen voor de kwaliteitscontrole (Controleserum SEBIA, Productnr 4785). 

MONSTERS TER ANALYSE 

Monsters ter analyse op HYDRAGEL 7/15 HR kunnen bestaan uit serum, urine of liquor cerebrospinalis (CSF). 

Serumproteïnen kunnen ook gekwantificeerd worden na kleuring met zuurviolet of amidozwart kleurstof. 

Verzamelen en opslaan van de monsters 

De aanbeveling geldt om voor de analyse verse monsters te gebruiken. Ze dienen verzameld te worden conform de vastgestelde procedures die 

worden gehanteerd bij onderzoeken in klinische laboratoria. Zonodig kunnen monsters gedurende maximaal één week worden bewaard bij 2 tot 8 °C. 

Ingevroren monsters blijven ten minste gedurende één maand stabiel. 

Invriezing van sera en CSF met natriumazide, 0,2 g/l, komt de opslagstabiliteit ten goede. 

Invriezing van urinemonsters met HEPES 0,1 M (pH 6,75) en natriumazide, 0,2 g/l, komt de opslagstabiliteit ten goede. Ontdooide monsters kunnen 

lichte applicatietekens vertonen door denaturatie van proteïnen. 

BELANGRIJK: Gebruik geen boorzuur als conserveermiddel. 

Ontdooide serummonsters kunnen lichte applicatietekens vertonen door denaturatie van proteïnen of lipoproteïnen. 

Voorbereiding van de monsters 

1. Voorbereiding van de monsters (kwalitatieve analyse) 

Serum 

Gebruik onverdunde serummonsters. Als ze bewaard zijn bij 2 tot 8 °C of na invriezing kunnen sommige sera (met name die sera die cryoglobuline 

of cryogel bevatten) stroperig of troebel worden. Dergelijke sera zouden applicatieproblemen kunnen geven doordat de diffusie door de tandjes 

van de monster-applicator wordt belemmerd. In dergelijke gevallen voegt u 25 µl Fluidil toe aan 75 µl serum en mixt u dit in de vortex-mixer 

gedurende 15 seconden. Volg daarna de standaardprocedure. 

CSF of gepaard serum/CSF 

Gebruik monsters met een totale proteïnenconcentratie van ongeveer 10 g/l. 

BELANGRIJK : Serum en CSF dienen een exact gelijke totale proteïneconcentratie te vertonen. 

Urinemonsters 

De analyse wordt uitgevoerd op ongeconcentreerde urine. Als er een hoge gevoeligheid nodig is, kan de urine worden aangebracht na 

concentratie. 

- Ongeconcentreerde urinemonsters : Gebruik zuivere urine. Als de proteïnenconcentratie erg hoog is, is het mogelijk de urine te verdunnen 

met een fysiologische zoutoplossing tot een proteïnenconcentratie is verkregen van ongeveer 2 g/l ; daardoor ontstaat een duidelijker 

patroon. 

- Geconcentreerde urinemonsters : De analyse wordt uitgevoerd op monsters die van tevoren zijn geconcentreerd tot een totale 

proteïnenconcentratie van ongeveer 5 g/l. 

BELANGRIJK: Sommige urinemonsters bevatten een hoge concentratie zout. Dit kan gel-deformatie veroorzaken tijdens de migratie en daardoor 

kunnen de migratieprofielen vertekend raken. Als door een dergelijke vertekening de interpretatie niet nauwkeurig is, dient de urine te worden 

gedialyseerd om de zouten te verwijderen. 

LET OP: Bij troebele urinemonsters (al dan niet geconcentreerd) wordt aanbevolen de hiervoor verantwoordelijke deeltjes te elimineren door 

middel van centrifugatie van de monsters (gedurende 10 minuten bij 3000 toeren per minuut) dan wel door middel van filtratie (op een filter 

van 0,45 µm) teneinde een goede verspreiding te realiseren op de applicators. 

2. Voorbereiding van de monsters (kwantitatieve analyse) 

Kleuring met amidozwart 

Gebruik onverdunde serummonsters. 

Kleuring met zuurviolet 

Gebruik serummonsters die van tevoren 4 maal zijn verdund (1 vol./ 3 vol.) met fysiologische zoutoplossing. Volg daarna de standaardprocedure. 

Monsters die men beter niet kan gebruiken 

Gebruik geen gehemolyseerde serummonsters. Hemolyse veroorzaakt een stijging in alfa-2 en bèta-zones. 

Vermijd plasmamonsters. Fibrinogeen geeft een band dicht bij het applicatiepunt die men per ongeluk zou kunnen aanzien voor een monoclonale 

immunoglobuline. 

PROCEDURE 

Het HYDRASYS systeem is een halfautomatisch multi-parameter instrument. Tot de geautomatiseerde stappen behoort de verwerking van 

HYDRAGEL agarose-gels in de volgende volgorde: monster-applicatie, elektroforetische migratie, drogen, kleuren, ontkleuren en de laatste droogfase. 

Tot de handmatige stappen behoren: het voorbereiden van de monsters en de gel, en het in werking stellen van de automatische stappen. 

LEES DE HYDRASYS GEBRUIKERSHANDLEIDING ZORGVULDIG DOOR. 

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I. MIGRATIE-OPSTELLING 

1. Schakel het HYDRASYS instrument aan. 

2. Plaats één applicator vlak op het tafelblad, met de genummerde applicatieholtes naar boven gericht (Fig. 1). 

- Breng 10 µl monster aan in iedere groef. Vul ieder applicator binnen 2 minuten. 

- Plaats de applicator in de natte opslagkamer met de strips omhoog [houd hem vast aan het plastic beschermframe van de strips]. Laat de 

monsters gedurende 5 minuten na het aanbrengen van het laatste monster in de strips diffuseren. Voor later gebruik (tot maximaal 8 uur 

later) houdt u de gehele kamer onder koeling. Voor nadere gegevens verwijzen wij naar de productinformatie bij de natte opslagkamer. 

3. Open het deksel van de Migratie-module en breng de elektrode en de applicator-dragers omhoog. 

WAARSCHUWING: Nooit het deksel sluiten terwijl de dragers omhoog staan! 

4. Selecteer het migratie-programma uit het menu van het instrument (linkerzijde van het toestenpaneel). 

- Serum-analyse : "7/15 HR1" migratie-programma voor HYDRAGEL 7 HR en HYDRAGEL 15 HR, 

- CSF of CSF/serum analyse : "7/15 HR2" migratie-programma voor HYDRAGEL 7 HR en HYDRAGEL 15 HR, 

- Urine-analyse : 

1. Niet-geconcentreerde urinemonsters : "7/15 HR3" migratie-programma voor HYDRAGEL 7 HR en HYDRAGEL 15 HR, 

2. Geconcentreerde urinemonsters : "7/15 HR2" migratie-programma voor HYDRAGEL 7 HR en HYDRAGEL 15 HR. 

5. Haal de gebufferde strips uit de verpakking ; houd ze vast bij de plastic uiteinden. Druk de geperforeerde uiteinden van de plastic achterkant 

van de strip op de pinnetjes van de elektrodedrager ; de achterkant van de strip dient in de richting van de drager gericht te zijn (Fig. 2). 

6. Pak de HYDRAGEL agarose-gel uit. 

- Rol het dunne filterpapier snel en gelijkmatig uit over het oppervlak van de gel zodat het teveel aan vloeistof geabsorbeerd kan worden. 

Verwijder het filter papier direct. 

WAARSCHUWING : Laat het filterpapier niet te lang in contact met de gel om dehydratatie te voorkomen! 

- Giet 120 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor HYDRAGEL 7 HR of 200 µl voor HYDRAGEL 15 HR op het migratieframe dat 

afgedrukt is op de temperatuurcontroleplaat van de migratiemodule. 

- Plaats de gel-plaat (met de gel-zijde naar boven gekeerd) met de rand tegen de stop aan de onderkant van het afgedrukte frame (Fig. 3). 

- Buig de gel en laat hem zachtjes zakken op het plasje water (Fig. 3). Zorg ervoor dat er geen luchtbelletjes ingesloten worden, dat het water 

zich verspreidt onder de gehele gelplaat en dat de gel parallel ligt aan het afgedrukte frame. 

7. Zet beide dragers omlaag. In deze positie raken de gebufferde strips de gel niet. DRUK DE DRAGERS NIET HELEMAAL NAAR BENEDEN. 

8. Verwijder de applicator uit de natte kamer. Houd hem vast aan het beschermframe. 

- Knik het beschermframe van de tandjes van de applicator eraf. 

- Plaats de applicator in positie nr. 5 op de drager. 

BELANGRIJK: De nummers die afgedrukt staan op de applicator dienen naar de bediener toegekeerd te zijn (Fig. 4). 

9. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

10. Start de procedure onmiddellijk door op de «START»-toets met de groene pijl te drukken aan de linkerzijde van het toetsenpaneel. 

BELANGRIJK: Zorg ervoor dat de luchtinlaat voor ventilatie, aan de rechterzijde van het instrument, niet geblokkeerd is. 

MIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE STAPPEN 

• De twee dragers worden omlaag gebracht zodat de gebufferde strips en de applicator contact maken met het oppervlak van de gel. 

• De monster-applicator-drager komt omhoog. 

• "7/15 HR1" en "7/15 HR2" migratie-programma : Die migratie wordt uitgevoerd bij een constant voltage van 255 V voor HYDRAGEL 7 HR en 

HYDRAGEL 15 HR bij 20 °C, gecontroleerd door het Peltier–effect, tot een accumulatie van 75 Vh, gedurende ongeveer 18 minuten. 

• "7/15 HR3" migratie-programma : Die migratie wordt uitgevoerd bij een constant voltage van 255 V voor HYDRAGEL 7 HR en HYDRAGEL 15 HR 

bij 20 °C, gecontroleerd door het Peltier–effect, tot een accumulatie van 40 Vh, gedurende ongeveer 10 minuten. 

• De elektrode-drager komt omhoog om de elektrodes los te koppelen. 

• De temperatuur van de controleplaat stijgt tot 60 °C gedurende 9 minuten om de gel te drogen. 

• De controleplaat koelt af ; wanneer hij een temperatuur bereikt van 50 °C klinkt er een hoge toon om aan te geven dat het deksel van de 

migratiemodule ontgrendeld wordt. De temperatuur van de plaat blijft op 50 °C totdat het deksel geopend wordt. Vervolgens blijft de temperatuur 

dalen totdat er een temperatuur bereikt is van 20 °C (in minder dan 5 minuten) waarna er een volgende migratieronde gestart kan worden. 

OPMERKING: Het deksel van de migratiemodule blijft gesloten tijdens alle migratiestappen. 

II. OPSTELLING VAN DE GEL-VERWERKING 

1. Open het deksel. 

2. Verwijder de applicator en gooi hem weg. 

3. Haal beide dragers omhoog, verwijder de gebufferde strips aan hun plastic uiteinden en gooi ze weg. 

4. Neem de gedroogde gel-film eruit voor verdere bewerking. 

5. Veeg na ieder gebruik de elektrodes en de temperatuur-controleplaat af met een zacht vochtig doekje. 

6. Open de gel-houder. Leg hem vlak en positioneer de gedroogde gel (met de gel-zijde omhoog gekeerd) in de groeven van de twee staafjes 

en sluit de houder. Zorg ervoor dat de film correct gepositioneerd is binnen in de houder (Fig. 5). 

7. Plaats de gel-houder in de Gel-verwerkings- / Kleurings-Module. 

BELANGRIJK: Voordat u begint met het gel-verwerkings- / kleuringsprogramma dient u eerst het volgende te controleren: 

- het kleurstofreservoir dient gevuld te zijn met 300 ml kleurstofoplossing ; 

- het ontkleuringsreservoir dient ten minste 1 liter ontkleuringsoplossing te bevatten ; 

- de afvalbak dient leeg te zijn. 

Voor de lijnaansluiting van de reagentia verwijzen wij naar de informatie die staat afgebeeld op het scherm van het instrument (selecteer de 

toets: REAGENT LINES). 

BELANGRIJK: Vergeet niet om de niet-gebruikte lijnen af te stoppen. 

8. Selecteer «HR ACID VIOLET» of «HR AMIDO» kleuringsprogramma uit het menu van het instrument en start de test door op de «START»- 

toets te drukken (groene pijl aan de rechterzijde van het toetsenpaneel). 

Gedurende de kleur-, ontkleuren droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

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III. VOLTOOIING VAN DE GEL-VERWERKING 

1 Haal de gel-houder uit het compartiment, open hem en haal de gedroogde gel eruit. 

LET OP: Na het kleuren of ontkleuren van gels en voorafgaand aan densitometrie of scannen, kunt u een extra spoelfase van de gel toevoegen 

om de achtergrond nog duidelijker te maken en eventueel resterende kleurstof in de vorm van blauwe vlekjes, te verwijderen. Spoel de gel 

met behulp van het "WASH ISOENZ/GEL"-programma. 

2. Zonodig kunt u de achterkant (de zijde van de plastic steun) van de droge film schoonmaken met een enigszins vochtig, zacht papiertje. 

RESULTATEN 

Kwaliteitscontrole 

Het wordt aangeraden om een normaal monster of een controleserum (Control serum, SEBIA, PN 4785) in elke serie monsters op te nemen. 

Waarden (kwantitatieve analyse) 

Scannen met een densitometer (bij 570 nm) van gekleurde elektroforegrammen levert de relatieve concentraties (percentages) van de afzonderlijke 

proteïne zones op. 

Normale waarden (gemiddeld ± 2 SD) voor de belangrijke afzonderlijke elektroforetische serum proteïne zones op HYDRAGEL 7/15 HR gels zijn 

verkregen uit een gezonde populatie van 225 volwassenen (mannen en vrouwen): 

FRACTIE HYRYS PHORESIS Albumine 56.2 – 69.0 57.5 – 67.9 Alfa-1 globulinen 1.2 – 3.2 1.0 – 3.8 Alfa-2 globulinen 7.8 – 13.4 7.2 – 12.8 Beta globulinen 7.4 – 13.4 7.6 – 13.6 

| Gamma globulinen | 9.8 – 18.6 | 10.3 – 18.3 | 

Het wordt aanbevolen dat elk laboratorium zijn eigen normale waarden vast stelt. 

Interpretatie 

De interpretatie is kwalitatief. 

SERUM-PROTEINE (6) 

De interpretatie wordt uitgevoerd door de elektroforegrammen van het klinische monster te vergelijken met een normaal controlepreparaat. In het geval 

van een toegenomen, afgenomen of extra fractie is het doorgaans nodig om de geconstateerde veranderingen te bevestigen met behulp van andere 

tests, zoals kwantificatie van specifieke proteïnen, immuno-elektroforese of immunofixatie. 

Onder de zeer talrijke plasmaproteïnen zijn er slechts ongeveer vijftien die in voldoende kwantiteit voorkomen om gevisualiseerd te worden op High 

Resolution gels. Wat HYDRAGEL 7/15 HR gel zo waardevol maakt is zijn gevoeligheid in de kathode-zone, waardoor detectie van zwakke 

monoclonale of oligoclonale banden mogelijk wordt. De interpretatie is in principe kwalitatief. 

LIQUOR CEREBROSPINALIS PROTEINEN 

Iedere extra band die gedetecteerd wordt in de gamma-zone van CSF, zonder dat daar een corresponderende fractie in het serum tegenover staat, 

dient bevestigd te worden door middel van een immunofixatie-procedure (HYDRAGEL 3/6 CSF SEBIA of SEBIA immunofixatie kits, HYDRAGEL 

1/2/4/9 IF SEBIA) teneinde de intrathecale synthese te karakteriseren. De immunologische bevestiging is noodzakelijk omdat het mogelijk is dat er in 

de gamma-zone nog andere banden worden gedetecteerd dan immunoglobulinen (tau-fractie, koolzuur-anhydrase, post-gamma of CRP, 

bijvoorbeeld). 

Opmerking : De interpretatie is strikt vergelijkend. Het is dus absoluut noodzakelijk om: 

- biologische vloeistoffen (CSF / serum) te analyseren die tegelijkertijd verzameld zijn zonder dat er sprake is van enige behandeling die de 

concentratie van Ig G in het serum zou kunnen doen veranderen. 

- ervoor te zorgen dat de hoeveelheden proteïnen of immunoglobulinen van de beide toe te passen monsters exact gelijk zijn. Het is dus noodzakelijk 

om van tevoren kwantificatie uit te voeren met een degelijke mate van nauwkeurigheid en met de daartoe aangewezen reagentia. 

Liquor cerebrospinalis (CSF) is een biologische vloeistof met een lage concentratie proteïnen. De hoeveelheid proteïnen in normale CSF is ongeveer 

0,30 g/l ± 0,15. De meerderheid van de CSF-proteïnen is afkomstig van het serum van waaruit ze worden gefilterd en getransporteerd door de bloed 

- CSF barrière. Voor analyse op HYDRAGEL 7/15 HR gels dient de CSF te worden geconcentreerd tot ongeveer 10 g/l. 

Een normaal CSF-patroon vertoont de volgende zone-volgorde: 

• Pre-albumine, of transthyretine, de snelste fractie ; 

• Albumine, de meestvoorkomende fractie, die ongeveer 75 % vertegenwoordigt van het totaal aan proteïnen ; 

• Alfa-1 zone, die hoofdzakelijk bestaat uit alfa-1 antitrypsine ; 

• Alfa lipoproteïne ; 

• Alfa-2 zone, die voornamelijk proteïnen bevat met een hoog moleculair gewicht, en die dus zeer zwak is aangezien proteïnen niet door de bloed - 

CSF barrière heen kunnen ; 

• Bèta-fractie, die transferrine bevat ; 

• Bèta-2 zone, die hoofdzakelijk «CSF-specifiek» transferrine bevat, de tau-fractie, een vorm van transferrine met een tekort aan koolhydraten 

(sialzuur) ; 

• Gamma-zone, die in principe Ig G bevat en soms Ig A en Ig M. 

Bij veel studies is een toename aangetoond van immunoglobulinen afkomstig van een synthese binnen het centraal zenuwstelsel. Er is tot op heden 

nog geen verklaring gevonden voor de antigene stimulatie van deze Ig G-productie. Wel zijn er hypothesen naar voren gebracht die spreken over een 

virus-infectie en auto-immuunreacties. 

Afgezien van multipele sclerose kan er een toename aan Ig G worden gedetecteerd bij demyelinating infantile disease, subacute scleroserende 

panencephalitis en ook bij andere ontstekingsreacties en infectieziekten. 

- 30 -


Multipele sclerose wordt opgespoord door middel van meerdere monoclonale banden die een oligoclonaal aspect van gammaglobulinen aan het licht 

brengen. Deze afwijkingen verschijnen al vrij vroeg in het verloop van de aandoening. De intensiteit van de verschillende banden kan variëren van 

zeer zwak tot zeer sterk. 

Dit oligoclonale aspect is ook aangetroffen bij andere aandoeningen van het centraal zenuwstelsel (infectieziekten met of zonder ontstekingsreactie). 

Meervoudige banden zijn opgespoord bij scleroserende panencephalitis, neurosyfilis, virale encephalitis, meningo-encephalitis en bacteriële 

meningitis. Verder zijn ze ook aangetroffen, zij het meer zelden, bij perifere neuropathie, tumoren, hydrocephalie, degeneratieve aandoeningen en 

vasculaire stoornissen. Al deze gevallen dienen niet beschouwd te worden als valse positieven, maar als een indicatie van verhoogde immunologische 

activiteit van het centraal zenuwstelsel. De uitdrukkelijke aanbeveling geldt dat dergelijke CSF’s tegelijkertijd geanalyseerd worden met het serum van 

de patiënt (met dezelfde proteïnenconcentratie, ongeveer 10 g/l). Bij sommige lymfoproliferatieve afwijkingen kan er een oligoclonaal aspect worden 

gedetecteerd in zowel het serum als in CSF. 

Ieder oligoclonaal patroon dient bevestigd te worden door middel van nader onderzoek op immunofixatie kits: 

• HYDRAGEL 1 IF SEBIA (Productnr. 4301), HYDRAGEL 2/4 IF, SEBIA (Productnr. 4302, 4304, 4308), 

• HYDRAGEL 9 IF, SEBIA (Productnr. 4309), 

• HYDRAGEL 3/6 CSF, SEBIA (Productnr. 4350, 4351), 

• HYDRAGEL 1 BENCE JONES, SEBIA (Productnr. 4321), HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES, SEBIA (Productnr. 4322, 4324). 

URINE 

Urine-elektroforese wordt uitgevoerd teneinde monoclonale componenten op te sporen. 

HYDRAGEL 7/15 HR wordt gebruikt als doorlichtingssysteem voor urineproteïnen. Dit maakt de detectie mogelijk van een monoclonale component, 

die dient te worden geïdentificeerd door middel van immunofixatie, alsmede de detectie van proteïne van tubulaire of glomerulaire afkomst of van 

gemengde afkomst, die met daartoe geschikte methoden dient te worden gekarakteriseerd (moleculair zeven in SDS-buffer of specifieke 

nephelemetrische metingen of immunofixatie met de juiste antistoffen). 

Interferentie en begrenzingen 

Ontdooide serummonsters kunnen lichte applicatietekens vertonen door denaturatie van proteïnen of lipoproteïnen. 

Gebruik geen gehemolyseerde serummonsters. 

Vermijd plasmamonsters. 

Met het oog op de resolutie- en gevoeligheidsbeperkingen van zone-elektroforese is het mogelijk dat niet alle monoclonale componenten met deze 

methode volledig worden gedetecteerd. 

Troubleshooting 

Bel de technische dienst van de leverancier als de test mislukt terwijl u de instructies voor voorbereiding en opslag van materialen, en voor de 

procedure, nauwkeurig hebt gevolgd. 

De veiligheidsbladen behorend bij de reagentia in de Kit als ook informatie over de verwerking van afval of restproducten kunt u verkrijgen bij de 

Technische Dienst van de leverancier. 

UITVOERINGSGEGEVENS 

Standaard materialen, monstervoorbereiding en procedures werden gebruikt. Alle elektroforegrammen werden visueel geëvalueerd 

Kwalitatieve analyse 

De resultaten die werden verkregen op HYDRAGEL 7/15 HR gels indiceren een zeer goede reproduceerbaarheid binnen en tussen gels met 

betrekking tot alle geteste aspecten en tussen de herhalingen vielen geen visueel waarneembare verschillen op. 

Pathologische en normale serummonsters, CSF / serumparen en urinemonsters van 116 patiënten werden op HYDRAGEL 7/15 HR gels gebracht en 

op vergelijkbare, in de markt verkrijgbare «high resolution» gels. De monsters werden volgnes de aanbevelingen aangemaakt gebruikmakend van de 

respectievelijke procedures. 

Overeenkomsten / verschillen tussen de elektroforetische patronen en de aanwezigheid van monoklonale of oligoklonale banden vormden de basis 

voor de vergelijking. De visuele kwalitatieve vergelijking tussen deze beide testen werd gebaseerd op het aantal banden en hun locatie. 

De resultaten van twee procedures waren in overeenstemming in alle 116 monsters en waren consistent met de klinische diagnose. 

Semi-kwantitatieve analyse 

Voor de semi-kwantitatieve toepassingen geven de resultaten die werden verkregen met de HYDRAGEL 7/15 HR gels een zeer goede 

reproduceerbaarheid binnen en tussen de gels voor alle geteste en tussen de herhalingen vielen geen visueel waarneembare verschillen op en de 

gemiddelde CV was 4.0 %. 

De HYDRAGEL 7/15 HR procedures met de alternatieven voor kleuring, zuurviolet en amidozwart, werden vergeleken met andere in de handel 

verkrijgbare «high resolution» gels procedures (traditionele «high resolution» afscheidingen van serum proteïnen en kleuring met zuurviolet). 

Voor het doel van de vergelijking werden alle elektroforegrammen gescanned (geelfilter) als 5-zone scheidingen. 

Klinische serummonsters (n = 56) werden via elk van de procedures getest en de relatieve concentraties voor elke fractie werden vergeleken, 

gebruikmakend van lineaire regressie analyse, 0.973 bleek de gemiddelde correlatiecoëfficiënt voor alle proteïnefracties te zijn met beide 

kleuringoplossingen. 

HYDRAGEL 15 HR (zuurviolet) HYDRAGEL 15 HR (amidozwart) FRACTIE Correlatiecoëfficiënt Helling y-intercept Bereik (%) Correlatiecoëfficiënt Helling y-intercept Bereik (%) Albumine 0,981 0,98 1,89 36,7 – 66,1 0,985 0,96 2,35 36,1 – 67,4 Alfa-1 0,976 0,99 -0,11 1,5 – 7,5 0,982 0,97 -0,03 1,3 – 7,1 Alfa-2 0,982 0,98 -0,14 6,8 – 24,5 0,978 0,96 0,31 5,7 – 24,2 Beta 0,956 0,91 0,90 5,8 – 19,8 0,918 0,95 0,41 5,4 – 20,0 

| Gamma | 0,991 | 0,99 | -0,16 | 8,3 – 40,0 | 0,990 | 0,94 | 1,05 | 7,2 – 37,5 | 

- 31 -


Gevoeligheid 

De gevoeligheid werd bepaald aan de hand van de hoogste seriële verdunning die een waarneembare band te zien gaf. Op de «HR1» en «HR2» 

programma’s was de detectiegevoeligheid 100 - 300 mg/l voor een monoclonale proteïne (G, Kappa). 

Op het «HR3» programma was de detectiegevoeligheid 15 - 20 mg/l (albumine en Bence Jones proteïne). Ongeveer dezelfde gevoeligheid werd 

geobserveerd met kleuring met amidozwart en zuurviolet. 

LET OP: Afhankelijk van de positie van de monoclonale band en de polyclonale achtergrond van de gammaglobulinenzone kan de 

detecteringsdrempel van een paraproteïne variëren. 

Lineariteit 

De proeven waren lineair tot ten minste 58 g/l albumine en 39 g/l Ig G voor beide kleuringsprocedures. 

BIBLIOGRAFIE 








43, 2332-2346. 









Acta, 56 : 125-126. 





35 : 1997. 



MIGRATIEPATROON 

+ 

Pre-albumine 

Albumine 

Orosomcoïde 

α1 Antitrypsine 

Haptoglobine 

Ceruloplasmine 

ß Lipoproteïne 

C3 Complement 

ß2 Microglobuline 

Tau Fractie 

α1 Antichymotrypsine 

α Lipoproteïne 

Gc Globuline 

α2 Macroglobuline 

Transferrine 

Hemopexine 

Antithrombine III 

C1 esterase-remmer 

γ Globuline 

G - A - M - D - E 

- 

- 32 -


UTILIZZO 

I kits HYDRAGEL 7 HR e HYDRAGEL 15 HR, sono stati progettati per il multifrazionamento delle proteine del siero umano o di altri fluidi biologici 

(urine o fluidi cerebro spinali, CSF), mediante elettroforesi su gel di agarosio tamponato in mezzo alcalino (pH 8.6). I kits sono usati in combinazione 

con il sistema semi-automatico HYDRASYS. 

Le proteine separate, sono colorate con una soluzione di violetto acido. L’eccesso di colorante viene rimosso con una soluzione acida. I gels colorati 

ed essiccati possono essere valutati visivamente per tracciati elettroforetici anormali. 

Ogni gel di agarosio permette di processare: 

• 7 campioni con il kit HYDRAGEL 7 HR, 

• 15 campioni con il kit HYDRAGEL 15 HR. 

Per uso diagnostico in vitro. 

PRINCIPIO DEL METODO 

L’elettroforesi delle proteine è una tecnica diffusissima, comunemente usata nei laboratori clinici per la ricerca nel siero ed in altri fluidi biologici di 

alterazioni proteiche. Tale tecnica è basata sul principio della elettroforesi zonale effettuata su di un adatto mezzo di supporto. L’agarosio è stato reso 

un versatile ed efficace mezzo di supporto. Benche’ la maggior parte dei laboratori clinici siano soddisfatti con la «tradizionale» separazione a 5 zone 

delle sieroproteine, le tecniche ad alta risoluzione possono dare informazioni addizionali diagnostiche. 

Sui gels HYDRAGEL 7/15 HR le proteine presenti nel siero, urina, liquido cerebro spinale (CSF) vengono separate in circa 10 frazioni. Ogni frazione 

contiene una o piu’ proteine. 

La composizione del gel e la scelta del colorante permette una eccellente risoluzione ed un’alta sensibilita’ particolarmente nella zona gamma. 

HYDRAGEL 7/15 HR e’ un test qualitativo 

REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEI KITS HYDRAGEL 7 HR E HYDRAGEL 15 HR 

COMPONENTI PN 4102 PN 4122 PN 4105 PN 4125 Gels di Agarosio (pronti all’uso) 10 gels 10 gels 10 gels 10 gels Strisce tamponate (pronte all’uso) 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 Diluente per la soluzione colorante (soluzione concentrata) 1 flacone da 60 ml 1 flacone da 60 ml Colorante Amidoschwarz (soluzione concentrata) 1 flacone da 20 ml 1 flacone da 20 ml Colorante Violetto Acido (soluzione concentrata) 1 flacone da 75 ml 1 flacone da 75 ml Applicatori (pronti all’uso) 1 conf. da 10 (7 dentini) 1 conf. da 10 (15 dentini) 1 conf. da 10 (7 dentini) 1 conf. da 10 (15 dentini) 

| Cartine da filtro sottili | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 

PER RISULTATI OTTIMALI 

I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit. 

LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO. 

1. GELS DI AGAROSIO 

Preparazione 

I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gels di agarosio contiene: agarosio, 8,0 g/l ; tampone tris-barbital pH 8.6 ± 0.1 ; additivi, non pericolosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: I gels di agarosio contengono 0.18 % di barbital. Non ingerire! Se ingerito consultare immediatamente un medico ! 

Utilizzo 

Mezzo di supporto per elettroforesi proteiche. 

Conservazione, stabilità e segni di deterioramento 

Conservare i gels orizzontalmente nella confezione originale protettiva a temperatura ambiente (15 - 30 °C). (La freccia sulla scatola del kit deve 

essere rivolta verso l’alto). NON REFRIGERARE NE’ CONGELARE. 

Evitare la conservazione vicino ad una finestra o ad una fonte di calore. Evitare forti variazioni di temperatura durante la conservazione. 

I gels sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. 

Non utilizzare il gel quando: 

(i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe conseguenze del 

congelamento del gel) ; 

(ii) sono presenti muffe o flora batterica ; 

(iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni 

di conservazione improprie). 

2. STRISCE TAMPONATE 

Preparazione 

Le strisce di spugna tamponate sono pronte all’uso. Ogni striscia contiene: tampone tris-barbital pH 8.7 ± 0.2 ; sodio azide ; additivi, non pericolosi 

alle concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: Il tampone nelle strisce contiene 0.55 % di barbital e 0.30 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerite consultare 

immediatamente un medico! Quando smaltite, evitare il contatto con acidi, piombo o rame poiché possono originare composti esplosivi o 

tossici con la sodio azide. 

Utilizzo 

Le strisce di spugna tamponate funzionano da riserva di tampone per l’elettroforesi ed assicurano il contatto tra il gel e gli elettrodi. 

- 33 - 

FOGLIO DI ISTRUZIONI SEBIA - Italiano



Conservare le strisce tamponate orizzontalmente nella loro confezione protettiva, a temperatura ambiente o in frigorifero. (La freccia sulla scatola del 

kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Le strisce sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichetta della confezione delle strisce. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare le strisce se la confezione è aperta e le strisce sono asciutte. 

3. DILUENTE PER LA SOLUZIONE COLORANTE (PN 4105 e 4125) 

Preparazione 

Il diluente per il colorante deve essere utilizzato come descritto nel paragrafo "COLORANTE AMIDOSCHWARZ". 

Contiene una soluzione acida. 

Utilizzo 

Per la preparazione della soluzione colorante amidoschwarz. 


Conservare il diluente concentrato per il colorante a temperatura ambiente o in frigorifero. E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola 

del kit o sull’etichetta del diluente. NON CONGELARE. 

Non aggiungere sodio azide. 

4. COLORANTE AMIDOSCHWARZ (PN 4105 e 4125) 

Preparazione 

Il colorante amidoschwarz concentrato è una soluzione viscosa, che può eventualmente gelificare, senza che la qualità della soluzione finale e del 

suo potere colorante siano minimamente alterati. 

Per ottenere una perfetta ricostituzione del colorante, bisogna rispettare il seguente protocollo. 

1. Aggiungere circa 15 mL di diluente del colorante al flacone di amidoschwarz concentrato. 

2. Chiudere accuratamente il flacone. 

3. Agitare con molto vigore il flacone per almeno 5 secondi. 

4. Versare la soluzione ottenuta nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

5. Ripetere questa operazione due o tre volte se necessario. 

6. Versare il resto del diluente nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

7. Completare a 300 mL con acqua distillata o demineralizzata. 

8. Agitare perfettamente questa soluzione per 5 - 10 minuti. 

Il colorante è pronto all’uso. 

NOTA : Una risospensione incompleta del colorante può causare una cattiva colorazione della frazione albumina (percentaule bassa di albumina o 

svuotamento al centro della frazione). 

Dopo la diluizione, la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; Etilen-glicol, 6,7 % ; componenti, non pericolosi 

alle concentrazioni utilizzate, necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Per la colorazione dei gels dopo la separazione elettroforetica delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinata alla colorazione di solamente 10 gels. Sostituire la soluzione colorante dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare sia la soluzione concentrata del colorante sia quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero, in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione concentrata del colorante è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. 

Il colorante diluito è stabile 1 mese. 

Non conservare la soluzione di colorante diluita in prossimità di una sorgente di calore. 

5. COLORANTE VIOLETTO ACIDO (PN 4102 e 4122) 

Preparazione 

Ogni flacone di colorante violetto acido, in soluzione concentrata, deve essere diluito a 300 ml con acqua distillata o deionizzata. Dopo la diluizione, 

la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; Violetto acido, 2 g/l ; Etilen-glicol, 3,25 % ; componenti non pericolosi alle concentrazioni 

utilizzate necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Colorazione dei gels dopo la separazione elettroforetica delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinato alla colorazione di soli 10 gels. Sostituire la soluzione dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare sia la soluzione concentrata del colorante che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero, in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione concentrata del colorante è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. Il 

colorante diluito è stabile per 6 mesi. 

6. APPLICATORI 

Utilizzo 

Applicatori monouso, pretagliati, per l’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare gli applicatori lontano dall’umidità a temperatura ambiente o in frigorifero. 

7. CARTINE DA FILTRO 

Utilizzo 

Cartine sottili monouso, pretagliate, per l’eliminazione dell’eccesso di liquido dalla superficie del gel prima dell’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro sottili in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

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REAGENTI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. SOLUZIONE FISIOLOGICA 

Preparazione 

Preparare una soluzione di NaCl 0.15 M (9 g/l) in acqua distillata o deionizzata. 

Utilizzo 

Per diluire i campioni. 

Conservazione, stabilita’ e segni di deterioramento 

Conservare a temperatura ambiente o in frigorifero. Eliminare dopo 3 mesi oppure in caso di cambiamento visibile es. opacita’ dovuta a 

contaminazione microbiologica. Per conservazione per lunghi periodi, aggiungere sodio azide, 1 g/l. 

2. DECOLORANTE 

Preparazione 

Ogni flacone di soluzione decolorante concentrata (SEBIA, PN 4540, 10 flaconi da 100 ml ciascuno) deve essere diluito a 100 litri con acqua 

deionizzata o distillata. Per convenienza diluire solo 5 ml di soluzione concentrata a 5 litri, ossia al volume della tanica della soluzione decolorante. 

Dopo la diluizione la soluzione decolorante contiene: acido citrico, 0.5 g/l. 

Utilizzo 

Come decolorante, ossia per rimuovere l’eccesso di colorante e la colorazione di fondo dal gel e per il risciacquo della camera di colorazione dopo 

un lavaggio con soluzione di lavaggio. Per neutralizzare l’acidità della soluzione decolorante versare, nella tanica vuota dei liquidi reflui, 15 mL di una 

soluzione al 50 % di Idrossido di Sodio. 


Conservare la soluzione decolorante concentrata a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza 

indicata sulla scatola del kit o sulla etichetta del decolorante. La soluzione diluita del decolorante è stabile per una settimana a temperatura ambiente 

in flacone chiuso. Non aggiungere sodio azide. 

Gettare la soluzione decolorante diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

Per prevenire le proliferazioni microbiche nella soluzione decolorante diluita, da conservare oltre una settimana, aggiungere 5 µl/dL di ProClin 300. 

La soluzione decolorante diluita addizionata con ProClin e conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in bottiglia chiusa, è stabile fino alla data 

di scadenza indicata sulla confezione o sull’etichetta del flacone di decolorante. 

3. SOLUZIONE DI LAVAGGIO HYDRASYS 

Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione di Lavaggio concentrata HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 flaconi da 80 ml ciascuno) deve essere diluito a 5 litri con acqua 

distillata o deionizzata. Dopo la diluizione la soluzione di lavaggio contiene: tampone alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; sodio azide. 

AVVERTENZA: La soluzione di lavaggio concentrata contiene 0.625 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerita consultare immediatamente 

un medico! La sodio azide può portare alla formazione di composti tossici o esplosivi se posta a contatto con acidi, piombo o rame. Quando 

smaltita, fare scorrere un’abbondante quantità di acqua. 

Utilizzo 

Serve per lavare il compartimento di colorazione di HYDRASYS. Usare periodicamente ; per esempio, se lo strumento è usato giornalmente, lavare 

il compartimento di colorazione settimanalmente. 

Consultare l’inserto nella confezione per la procedura di utilizzo. 


Conservare sia la soluzione lavaggio concentrata che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso. Entrambe le soluzioni 

sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. 

Gettare la soluzione di lavaggio diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

4. FLUIDIL 

Preparazione 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 ml) è pronto all’uso. 

Utilizzo 

Per diluire campioni viscosi o torbidi, per esempio, sieri contenenti crioglobuline o criogel. 


Conservare a temperatura ambiente o in frigorifero. Fluidil è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone. 

Fluidil deve essere privo di precipitato. 

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Dispensatore manuale, o in alternativa, per il caricamento degli applicatori dei campioni, campionatore automatico HYDRAplus SEBIA, PN 1215. 

3. Camera umida, PN 1270, fornita con HYDRASYS. 

4. Kit di taniche fornito con HYDRASYS. 

5. Porta strisce per meta’ gel SEBIA, PN 10043110. 

6. Pipette: 10 µl e 200 µl. 

7. Densitometro / scanner in grado di effettuare la scansione di gels 82 x 51 mm o 82 x 102 mm a 570 nm o con filtro giallo: HYRYS SEBIA, DVSE 

SEBIA o programma PHORESIS per Scanner a piano fisso. Fare riferimento alle istruzioni del produttore per le procedure di lavoro e di 

calibrazione. 

8. Materiali per il controllo di qualità (Siero di Controllo SEBIA, PN 4785). 

CAMPIONI PER L’ANALISI 

I campioni per l’analisi su HYDRAGEL 7/15 HR possono essere siero, urina, fluido cerebro spinale (CSF). 

Dopo la colorazione con violetto acido o amidoschwarz, le sieroproteine possono anche essere quantificate. 

Raccolta e conservazione del campione 

Per l’analisi sono raccomandati campioni di siero freschi. I sieri devono essere prelevati seguendo la procedura convenzionale per i tests clinici di 

laboratorio. Se necessario conservare i sieri a 2 - 8 °C fino ad una settimana ; per conservazioni più lunghe, mantenere i campioni congelati. I campioni 

congelati sono stabili per almeno 1 mese. I campioni scongelati possono dare luogo a leggeri segni nel punto di applicazione causati dalla 

denaturazione delle proteine o delle lipoproteine. 

- 35 -


I sieri e CFS congelati con aggiunta di sodio azide, 0.2 g/l migliorano la stabilita’ di conservazione. 

Urine congelate con aggiunta di HEPES 0.1 M (pH 6.75) e di sodio azide, 0.2 g/l migliorano la stabilita’ di conservazione. Campioni scongelati possono 

dare leggeri segni di applicazione a causa della denaturazione delle proteine. 

IMPORTANTE: Non usare acido borico come conservante. 

Preparazione del campione 

1. Preparazione del campione (analisi qualitativa) 

Siero 

Applicare campioni di siero non diluito. Dopo una conservazione a 2 - 8 °C o dopo congelamento, alcuni sieri (particolarmente quelli che 

contengono crioglobuline o criogel) possono diventare viscosi o sviluppare torbidita’. Questi sieri possono presentare problemi di applicazione 

dovuti alla ostacolata diffusione nel dente di applicazione del campione. In questi casi aggiungere 25 µl di Fluidil a 75 µl di siero e agitare con un 

vortex per 15 sec. Seguire quindi la procedura standard. 

CSF o coppia siero-CSF 

Applicare campioni con una concentrazione proteica totale di circa 10 g/l. 

IMPORTANTE: siero e CSF devono avere l’identica concentrazione proteica totale. 

Urine 

l’analisi viene svolta su urine non concentrate. Se e’ richiesta una alta sensibilità, l’urina puo’ essere applicata dopo una concentrazione. 

- Urine non concentrate 

Applicare urina limpida. Se la concentrazione proteica e’ molto alta e’ possibile diluire l’urina con soluzione fisiologica al fine di ottenere una 

concentrazione proteica di circa 2 g/l. Questo produce un tracciato piu’ chiaro. 

- Urine concentrate 

l’analisi viene fatta su campioni precedentemente concentrati ad un valore di concentrazione proteica totale di circa 5 g/l. 

IMPORTANTE: Alcune urine contengono alta concentrazione di sale. Questo puo’ causare deformazione del gel durante la migrazione e, 

conseguentemente, distorsione dei profili di migrazione. Se questa distorsione rende l’interpretazione inaccurata, l’urina deve essere dializzata 

per rimuovere i sali. 

NOTA: La diffusione nei dentini degli applicatori di campioni di urina (intera o concentrata) torbidi, può essere ostacolata. Si raccomanda di 

rimuovere il particolato centrifugando i campioni (es., 10 minuti a 3000 rpm) o per filtrazione (es., filtri da siringa 0.45 µm). 

2. Preparazione del campione (analisi quantitativa) 

Colorante amidoschwarz 

Utilizzare campioni di siero intero. 

Colorante violetto acido 

Utilizzare campioni di siero diluiti 4 volte (1vol./3vol.) in soluzione fisiologica, quindi, seguire la procedura standard. 

Campioni da evitare 

Non utilizzare campioni di siero emolizzati. L’emolisi causa un aumento delle zone alfa-2 e beta. 

Evitare campioni di plasma. Il fibrinogeno dà luogo ad una banda vicino al punto di applicazione che può essere scambiata per una immunoglobulina 

monoclonale. 

PROCEDURA 

Il sistema HYDRASYS è uno strumento semi-automatico multiparametrico. Le fasi automatiche includono il trattamento dei gels di agarosio 

HYDRAGEL, nella seguente sequenza: applicazione del campione, migrazione elettroforetica, essiccazione, colorazione, decolorazione ed 

essiccazione finale. Le fasi manuali includono la manipolazione dei campioni e dei gels e la preparazione dello strumento per l’uso. 

LEGGERE ATTENTAMENTE IL MANUALE DI ISTRUZIONE HYDRASYS. 

I. MIGRAZIONE 

1. Accendere lo strumento HYDRASYS. 

2. Posizionare un applicatore su di una superficie piana con i numeri dei pozzetti correttamente orientati verso l’alto (Fig. 1). 

- Applicare 10 µl di campione intero in ogni pozzetto. Caricare ciascun applicatore entro 2 minuti. 

- Inserire l’applicatore nella camera umida di conservazione con i dentini rivolti verso l’alto (maneggiare gli applicatori mediante la cornice 

protettiva in plastica). Lasciare che i campioni diffondano nei dentini per 5 minuti dall’applicazione dell’ultimo campione. Mantenere la 

camera così preparata in frigorifero se si intende usare gli applicatori più tardi (fino ad 8 ore). 

Consultare l’inserto all’interno della confezione della camera umida per ulteriori dettagli. 

3. Aprire lo sportello del modulo di migrazione ed alzare le cornici mobili porta elettrodi e porta applicatori. 

AVVERTENZA: Non chiudere mai lo sportello se le cornici mobili sono alzate! 

4. Selezionare dal menù dello strumento (lato sinistro della tastiera) il programma di migrazione. 

- Analisi del siero : "7/15 HR1" per HYDRAGEL 7 HR e HYDRAGEL 15 HR. 

- Analisi di CSF o CSF/siero : "7/15 HR2" per HYDRAGEL 7 HR e HYDRAGEL 15 HR. 

- Analisi urine : 

1. per urine non concentrate, "7/15 HR3" per HYDRAGEL 7 HR e HYDRAGEL 15 HR, 

2. per urine concentrate, "7/15 HR2" per HYDRAGEL 7 HR e HYDRAGEL 15 HR. 

5. Estrarre le strisce tamponate dalla confezione ; maneggiarle mediante le estremità in plastica. Agganciare le estremità in plastica forate, sugli 

spinotti della cornice porta elettrodi ; le estremità in plastica della striscia devono essere rivolte verso la cornice mobile (Fig. 2). 

6. Estrarre il gel dalla confezione. 

- Eliminare rapidamente l’eccesso di liquido in superficie, tamponando il gel con una carta assorbente sottile 

ATTENZIONE : Fate attenzione a non lasciare la carta da filtro troppo a lungo a contatto con il gel per evitarne la disidratazione. 

- Dispensare sul terzo inferiore del riquadro stampato sulla Piastra di Controllo Temperatura del modulo di migrazione, 120 µl di acqua 

distillata o deionizzata per HYDRAGEL 7 HR o 200 µl per HYDRAGEL 15 HR. 

- Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 3). 

- Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia di acqua (Fig. 3). Assicurarsi che non siano rimaste intrappolate bolle d’aria. L’acqua deve essere 

uniformemente stratificata al di sotto della lastrina di gel e questa deve essere allineata all’interno del riquadro stampato. 

7. Abbassare entrambe le cornici mobili. In questa posizione le strisce tamponate non toccano il gel. NON FORZARE LE CORNICI MOBILI AD 

ABBASSARSI ULTERIORMENTE. 

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8. Estrarre l’applicatore dalla camera di umidificazione. Maneggiare gli applicatori mediante la cornice di protezione. 

- Staccare la cornice di protezione dei dentini dell’applicatore. 

- Inserire l’applicatore, sulla cornice mobile, in posizione No. 5. 

IMPORTANTE: I numeri stampati sugli applicatori devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 4). 

9. Chiudere lo sportello del modulo di migrazione. 

10. Avviare la procedura immediatamente premendo la freccia verde «START» sul lato sinistro della tastiera. 

IMPORTANTE: Assicurarsi che la griglia di ventilazione sul lato destro dello strumento non sia ostruita. 


MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate e gli applicatori entrino in contatto con il gel. 

• La cornice mobile porta applicatori si alza. 

• Programma di migrazione "7/15 HR1" e "7/15 HR2" : La migrazione ha luogo in condizioni di tensione costante (255 V) a 20 °C, controllati mediante 

effeto Peltier, fino ad accumulare 75 Vh (per circa 18 minuti). 

• Programma di migrazione "7/15 HR3" : La migrazione ha luogo in condizioni di tensione costante (255 V) a 20 °C, controllati mediante effeto Peltier, 

fino ad accumulare 40 Vh (per circa 10 minuti). 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• La temperatura della piastra sale fino a 60 °C, tale temperatura è mantenuta 9 minuti per essiccare il gel. 

• La piastra viene raffreddata ; quando raggiunge 50 °C un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. La 

temperatura della piastra rimane a 50 °C finchè lo sportello non viene alzato. Quindi la temperatura continua a diminuire fin al raggiungimento 

di 20 °C (in meno di 5 minuti) e cosi’ puo’ iniziare un nuovo ciclo di migrazione. 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione. 

II. TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Aprire lo sportello. 

2. Rimuovere e gettare gli applicatori. 

3. Alzare entrambe le cornici mobili, togliere le strisce tamponate mediante le estremità in plastica e gettarle. 

4. Estrarre il gel essiccato pronto per le fasi successive. 

5. Dopo ogni utilizzo, pulire gli elettrodi e la Piastra di Controllo Temperatura con della carta soffice inumidita. 

6. Aprire il telaio porta gel. Metterlo in posizione piana ed inserire la lastrina (con il gel rivolto verso l’operatore) nelle scanalature delle due guide, 

quindi chiudere il telaio. Assicurarsi che il gel sia correttamente posizionato all’interno del telaio (Fig. 5). 

7. Inserire il telaio porta gel nel Modulo di trattamento/colorazione del gel. 

IMPORTANTE: Prima di avviare il programma di trattamento/colorazione del gel controllare che: 

- la tanica del colorante contenga 300 ml di soluzione colorante. 

- la tanica del decolorante contenga almeno 1 litro di soluzione decolorante. 

- la tanica dei liquidi reflui sia vuota. 

Per la connessione dei reagenti: riferirsi alle informazioni mostrate sul visore dello strumento (premere il tasto: VISUAL CANALI). 

IMPORTANTE: Non dimenticare di chiudere gli ingressi dei reagenti non utilizzati. 

8. Selezionare il programma di colorazione "HR ACID VIOLET" o "HR AMIDO" dal menù dello strumento ed avviare la procedura premendo il 

tasto «START» (freccia verde sul lato destro dello strumento). 

Durante i cicli di colorazione, decolorazione e asciugatura, il compartimento rimane bloccato. 

Dopo il ciclo di raffreddamento, un segnale acustico indica che il compartimento è sbloccato (la ventilazione è mantenuta fino a quando il 

supporto del gel viene rimosso) 

III. COMPLETAMENTO DEL TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Rimuovere il telaio porta gel dal compartimento ; aprirlo e rimuovere il gel essiccato. 

NOTA: Se dopo la fase di colorazione/decolorazione sul gel sono visibili macchie blu residuali, una fase addizionale di lavaggio con il 

programma "LAV. ISOENZ/GEL", prima della lettura densitometrica, permette di eliminarle o di attenuarle fortemente. 

2. Se necessario pulire il retro della lastrina essiccata (la faccia con la plastica di supporto) con una carta soffice inumidita. 

RISULTATI 

Controllo di qualità 

Si consiglia di includere un campione normale o un siero di controllo (Siero di controllo, SEBIA, PN 4785) in ciascuna corsa elettroforetica. 

Valori (analisi quantitativa) 

La scansione densitometrica (a 570 nm) degli elettroforegrammi, fornisce la concentrazione relativa (percentuale) delle singole frazioni proteiche. 

I valori normali (media ± 2 DS) delle principali frazioni sieroproteiche ottenute per elettroforesi su gels HYDRAGEL 7/15 HR, sono stati stabiliti su una 

popolazione adulta sana di 225 soggetti (uomini e donne): 

FRAZIONE HYRYS PHORESIS Albumina 56.2 – 69.0 57.5 – 67.9 Alfa-1 globuline 1.2 – 3.2 1.0 – 3.8 Alfa-2 globuline 7.8 – 13.4 7.2 – 12.8 Beta globuline 7.4 – 13.4 7.6 – 13.6 

| Gamma globuline | 9.8 – 18.6 | 10.3 – 18.3 | 

Si raccomanda a ciascun laboratorio di stabilire i propri valori normali. 

- 37 -


Interpretazione 

L’interpretazione e’ qualitativa. 

SIEROPROTEINE 

L’interpretazione è fatta comparando l’elettroforegramma del campione da analizzare con quello di un controllo normale. Nel caso di una frazione 

aumentata, diminuita o supplementare è solitamente necessario confermare le modificazioni osservate mediante tests complementari come la 

quantificazione delle proteine specifiche, l’immunoelettroforesi o l’immunofissazione. 

Tra le numerosissime proteine plasmatiche, solamente circa quindici sono presenti in una concentrazione tale da essere visualizzate su gels High 

Resolution (ad alta risoluzione). Il pregio del gel HYDRAGEL 7/15 HR è la sua sensibilità in zona catodica che permette la rilevazione di deboli bande 

monoclonali o oligoclonali. L’interpretazione è essenzialmente qualitativa. 

PROTEINE DEL FLUIDO CEREBROSPINALE 

Ogni banda addizionale rilevata nella zona gamma del CSF, senza alcune frazione corrispondente nel siero, deve essere confermata da una 

procedura di immunofissazione ( HYDRAGEL 3/6 CSF SEBIA oppure SEBIA kits di immunofissazione) al fine di caratterizzare la sintesi intratecale. 

La conferma immunologica è necessaria perchè è possibile rilevare, in zona gamma, altre bande al posto delle immunoglobuline (frazione tau, anidrasi 

carbonica, postgamma, o CRP per esempio). 

Nota: l’interpretazione è strettamente comparativa. È quindi assolutamente necessario: 

- Analizzare i fluidi biologici (CSF/siero) prelevati nello stesso tempo senza alcun trattamento che possa modificare la concentrazione di 

immunoglobuline nel siero. 

- Applicare l’identica quantità di proteine o di immunoglobuline fra i due campioni. È pertanto necessario eseguire precedentemente una 

quantificazione con una buona precisione e reagenti appropriati. 

Il fluido cerebrospinale (CSF) è un liquido biologico con una bassa concentrazione proteica. Il contenuto proteico, in un CSF normale, è di circa 

0.30 g/l ± 0.15. La maggior parte delle proteine del CSF deriva dalla filtrazione delle sieroproteine attraverso la barriera emato-encefalica. 

Per analisi su gels ad alta risoluzione, il CSF deve essere concentrato fino a circa 6 g/l. 

Un CSF normale mostra un quadro con il seguente ordine di frazioni: 

• Prealbumina, la frazione più veloce ; 

• Albumina, la frazione prevalente rappresentante circa il 75 % delle proteine totali ; 

• Frazione Alfa-1, corrispondente essenzialmente alla Alfa-1 antitripsina ; 

• Alfa lipoproteina ; 

• Zona Alfa-2, contenente principalmente proteine ad alto peso molecolare ; conseguentemente molto tenue a causa delle poche proteine che 

possono attraversare la barriera emato-encefalica ; 

• Frazione Beta, contenente transferrina ; 

• Zona Beta-2 contenente principalmente transferrina «CFS specifica», la frazione tau, una forma di transferrina deficiente di carboidrati (acido 

sialico) ; 

• Zona Gamma, contenente essenzialmente Ig G e, talvolta, Ig A e Ig M. 

Molti studi hanno dimostrato un aumento di immunoglobuline derivante da una sintesi all’interno del Sistema Nervoso Centrale. La stimolazione 

antigenica di questa produzione di Ig G non è ancora stata spiegata. Sono state proposte ipotesi di infezione virale e di reazioni auto-immunitarie. 

Riguardo alla Sclerosi Multipla, un aumento di Ig G può essere rilevato durante la malattia demielinizzante infantile, la panencefalite sclerosante 

subacuta e malattie infettive. 

La Sclerosi Multipla è rilevabile grazie alle bande monoclonali multiple che danno un aspetto oligoclonale alle gammaglobuline. Queste anormalità 

appaiono precocemente durante il decorso della malattia. L’intensità delle bande può variare da molto debole a molto forte. 

Questo aspetto oligoclonale è stato trovato inoltre in altri disturbi del sistema nervoso centrale (malattie infettive infiammatorie o non infiammatorie). 

Bande multiple sono state rilevate durante la panencefalite sclerosante, la neurosifilide, l’encefalite virale, la meningoencefalite e la meningite 

batterica. Inoltre sono state trovate, anche se più raramente, in neuropatie periferiche, tumori, idrocefalite, malattie degenerative e disordini vascolari. 

Tutti questi casi non devono essere considerati quali falsi positivi ma come indicazione di una aumentata attività immunologica del sistema nervoso 

centrale. E’ fortemente raccomandato di analizzare allo stesso tempo, liquor e siero del paziente (alla stessa concentrazione, ossia circa 6 g/l). In 

alcuni disordini linfoproliferativi, il quadro oligoclonale può essere rilevato sia nel siero che nel liquor. 

Qualsiasi quadro oligoclonale deve essere confermato mediante successive analisi su kits di immunofissazione: 

• HYDRAGEL 1 IF SEBIA (PN 4301), HYDRAGEL 2/4 IF SEBIA (PN 4302, 4304 e 4308), 

• HYDRAGEL 9 IF SEBIA (PN 4309), 

• HYDRAGEL 3/6 CSF SEBIA (PN 4350 e 4351), 

• HYDRAGEL 1 BENCE JONES SEBIA (PN 4321), HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES SEBIA (PN 4322 e 4324). 

URINE 

L’elettroforesi delle urine viene fatta per rilevare componenti monoclonali. 

HYDRAGEL 7/15 HR viene usato come sistema di screening per le proteine urinarie. Permette la rilevazione di componenti monoclonali che devono 

essere identificate per mezzo di immunoffisazione, e la rilevazione di proteine di origine tubulare o glomerulare o mista che devono essere 

caretterizzate con metodi idonei (setaccio molecolare in tampone SDS o specifiche misure nefelometriche o immunofissazione con anticorpi 

appropriati). 

Interferenze e limitazioni 

I campioni scongelati possono dare luogo a leggeri segni nel punto di applicazione causati dalla denaturazione delle proteine o delle lipoproteine. 

Non utilizzare campioni di siero emolizzati. 

Evitare campioni di plasma. 

Per i limiti di risoluzione e sensibilità dell’elettroforesi zonale, è possibile che alcune componenti monoclonali possano non essere rilevate con questo 

metodo. 

- 38 -


Eliminazione errori 

Contattare il Servizio di Assistenza Tecnica del fornitore quando, nonostante siano state seguite accuratamente le istruzioni per la preparazione e 

conservazione dei materiali e per la procedura di impiego, i risultati del test non rispettino le caratteristiche. 

Le Schede di Sicurezza dei componenti del kit e le informazioni per lo smaltimento dei rifiuti sono disponibili presso il Servizio di Assistenza Tecnica 

SEBIA. 

DATI SULLE PRESTAZIONI 

Sono state utilizzate procedure, preparazione dei campioni e materiali standard. Tutti gli elettroforegrammi sono stati interpretati visivamente. 

Analisi qualitativa 

I risultati ottenuti su HYDRAGEL 7/15 HR indicano una riproducibilità molto buona nella serie e tra serie per tutti gli aspetti analizzati, inoltre tra le 

ripetizioni non sono state apprezzate differenze visibili. 

Su gels HYDRAGEL 7/15 HR e su comparabili gels ad alta risoluzione, disponibili in commercio, sono stati processati campioni di siero patologici e 

normali, coppie CSF/siero e campioni di urina di 116 pazienti. I campioni sono stati preparati come raccomandato dalle rispettive procedure. 

La base della comparazione è stata lo studio delle eguaglianze/diseguaglianze tra i quadri elettroforetici e della presenza di bande monoclonali o 

oligoclonali. La comparazione qualitativa visiva tra questi due test è stata basata sullo studio del numero di bande e della loro posizione. 

I risultati delle due procedure sono stati concordanti per tutti i 116 campioni e coerenti con le diagnosi cliniche. 

Analisi semi-quantitativa 

Per le applicazioni semi-quantitative, i risultati ottenuti con i gels HYDRAGEL 7/15 HR indicano una riproducibilità molto buona nella serie e tra serie 

per tutti gli aspetti analizzati inoltre, tra le ripetizioni, non sono state apprezzate differenze visibili, il CV medio è risultato del 4,0 %. 

Le metodiche HYDRAGEL 7/15 HR con colorante violetto acido e amidonero sono state comparate ad una metodica su gel ad alta risoluzione 

reperibile in commercio (separazione tradizionale delle sieroproteine ad alta risoluzione colorata in violetto acido). 

Per la comparazione, tutti gli elettroforegrammi sono stati scansionati (filtro giallo) con una separazione a 5 frazioni. 

I campioni di siero (n = 56) sono stati processati con ciascuna procedura e le concentrazioni relative di ogni frazione sono state comparate utilizzando 

l’analisi di regressione lineare, 0,973 è stato il coefficiente di correlazione medio per tutte le frazioni proteiche con ambedue le soluzioni di colorazione. 

HYDRAGEL 15 HR (violetto acido) HYDRAGEL 15 HR (amidonero) FRAZIONE R Pendenza y Intercetta Range R Pendenza y Intercetta Range Albumina 0.981 0.98 1.89 36.7 – 66.1 0.985 0.96 2.35 36.1 – 67.4 Alfa-1 0.976 0.99 -0.11 1.5 – 7.5 0.982 0.97 -0.03 1.3 – 7.1 Alfa-2 0.982 0.98 -0.14 6.8 – 24.5 0.978 0.96 0.31 5.7 – 24.2 Beta 0.956 0.91 0.90 5.8 – 19.8 0.918 0.95 0.41 5.4 – 20.0 

| Gamma | 0.991 | 0.99 | -0.16 | 8.3 – 40.0 | 0.990 | 0.94 | 1.05 | 7.2 – 37.5 | 

Sensibilità 

La sensibilità è stata determinata dalla più alta diluizione scalare in grado di dare una banda riconoscibile. Sui programmi «HR1» e «HR2» la sensibilità 

di rivelazione è stata di 100-300 mg/l per una proteina monoclonale (G, Kappa). 

Sul programma «HR3» la sensibilità di rivelazione è stata di 15 - 20 mg/l (albumina e proteina di Bence- Jones). Con colorazione nero d’amido e 

violetto acido sono state osservate circa le stesse sensibilità. 

NOTA: In funzione della posizione della banda monoclonale e del fondo policlonale della zona delle gammaglobuline, il limite di rilevamento di una 

paraproteina può variare. 

Linearità 

I dosaggi sono stati rilevati lineari fino ad almeno 58 g/l di albumina e 39 g/l di Ig G per entrambe le procedure di colorazione. 

BIBLIOGRAFIA 








43, 2332-2346. 









Acta, 56 : 125-126. 




- 39 -



35 : 1997. 



PATTERN DI MAGRAZIONE 

+ 

Pre-albumina 

Albumina 

Orosomucoide 

α1 Antitripsina 

Aptoglobina 

Ceruloplasmina 

ß Lipoproteina 

Complemento C3 

ß2 Microglobulina 

Frazione tau 

α1 Antichimotripsina 

α Lipoproteina 

Gc Globulina 

α2 Macroglobulina 

Transferrina 

Emopexina 

Antitrombina III 

Esterasi inhibitore C1 

γ Globuline 

G - A - M - D - E 

- 

- 40 -


ESPECIFICACIONES DE USO 

Los kits HYDRAGEL 7 HR e HYDRAGEL 15 HR (HR, Alta Resolución) están diseñados para el multifraccionamiento de las proteínas séricas humanas 

o de las proteínas de otros fluidos biológicos (orina o líquido cefalorraquídeo, LCR) mediante electroforesis en geles de agarosa tamponados 

alcalinamente (pH 8.6). Se utilizan junto con el instrumento semiautomático HYDRASYS. Las proteínas separadas se tiñen con una solución de 

violeta ácido. El exceso de tinción se elimina con una solución ácida. Los geles teñidos y secados pueden ser interpretados visualmente para la 

detección de anormalidades en el patrón electroforético. 

Cada gel de agarosa está destinado para procesar: 

• 7 muestras en el kit HYDRAGEL 7 HR, 

• 15 muestras en el kit HYDRAGEL 15 HR. 

Para Uso Diagnóstico In Vitro. 

PRINCIPIO DEL TEST 

La electroforesis de proteínas es una técnica bien establecida que se usa rutinariamente en los laboratorios clínicos para la investigación de 

anormalidades proteicas en suero y otros fluidos biológicos. Está basada en el principio de la electroforesis de zona realizada en un medio de soporte 

adecuado. La agarosa ha sido desarrollada para obtener un medio de soporte versátil y efectivo. Aunque la mayoría de laboratorios clínicos están 

satisfechos con el «tradicional» patrón de cinco bandas de las proteínas séricas, las técnicas de alta resolución pueden proporcionar información 

adicional para el diagnóstico. 

En los geles HYDRAGEL 7/15 HR, las proteínas séricas, las urinarias o las del LCR se separan en unas diez fracciones. Cada fracción contiene una 

o más proteínas. 

La composición del gel y la elección del colorante permiten una resolución excelente y una elevada sensibilidad, particularmente en la zona gamma. 

El HYDRAGEL 7/15 HR es un ensayo cualitativo. 

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KITS HYDRAGEL 15 HR E HYDRAGEL 7 HR 

ARTÍCULO PN 4102 PN 4122 PN 4105 PN 4105 Geles de Agarosa (listos para su uso) 10 geles 10 geles 10 geles 10 geles Esponjas Tamponadas (listas para su uso) 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 Diluyente del colorante (solución stock) 1 vial, 60 ml 1 vial, 60 ml Colorante Negro Amido (solución stock) 1 vial, 20 ml 1 vial, 20 ml Colorante Violeta Acido (solución stock) 1 vial, 75 ml 1 vial, 75 ml Aplicadores (listos para su uso) 1 caja de 10 (7 dientes) 1 caja de 10 (15 dientes) 1 caja de 10 (7 dientes) 1 caja de 10 (15 dientes) 

| Papeles de Filtro | 1 bolsa de 10 | 1 bolsa de 10 | 1 bolsa de 10 | 1 bolsa de 10 | 

PARA OBTENER RESULTADOS ÓPTIMOS 

Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y según las instrucciones incluidas. 

LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES. 

1. GELES DE AGAROSA 

Preparación 

Los geles de agarosa están listos para su uso. Cada gel contiene: agarosa, 8.0 g/l ; tampón tris-barbital pH 8.6 ± 0.1 ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones utilizadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Los geles de agarosa contienen barbital 0.18 %. ¡No ingerir! ¡Si se ingiere consultar al médico inmediatamente! 

Uso 

Medio de soporte para la electroforesis de proteínas. 

Almacenamiento, estabilidad y señales de deterioro 

Almacenar los geles en posición horizontal en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente (15 a 30 °C). (La flecha situada en la 

parte frontal de la caja del kit debe apuntar hacia arriba). NO REFIGERAR NI CONGELAR. Evitar el almacenaje en un lugar cercano a una ventana 

o a una fuente de calor. Evitar variaciones de temperatura importantes durante el almacenaje. Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en 

la caja del kit y en sus recipientes protectores. 

Desechar el gel cuando: 

(i) haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelación del gel), 

(ii) se observe crecimiento bacteriano o fúngico, 

(iii) se evidencie una cantidad excesiva de líquido en el recipiente del gel (consecuencia de la exudación del tampón debida a un almacenamiento 

inadecuado). 

2. ESPONJAS TAMPONADAS 

Preparación 

Las tiras de esponja tamponadas están listas para su uso. Cada una contiene: tampón tris-barbital pH 8.7 ± 0.2 ; azida sódica ; aditivos, inocuos a 

las concentraciones utilizadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: El tampón de las esponjas contiene barbital 0.55 % y azida sódica 0.30 %. ¡No ingerir! ¡Si se ingiere consultar al médico 

inmediatamente! Al desechar evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su tendencia a formar compuestos explosivos 

o tóxicos en contacto con la azida sódica. 

Uso 

Las esponjas tamponadas funcionan como un reservorio del tampón de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos. 

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INSTRIUCCIONES SEBIA - Español



Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. 

Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora (la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). 

Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora. NO LAS CONGELE. 

Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa está abierta o si las esponjas están secas. 

3. DILUYENTE DEL COLORANTE (PN 4105 y 4125) 

Preparación 

El diluyente del colorante concentrado debe ser usado como se ha descrito en el párrafo "COLORANTE NEGRO AMIDO". Contiene una solución 

ácida. 

Uso 

Para la preparación del colorante negro amido. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

El diluyente del colorante concentrado puede conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada 

en el kit o en la etiqueta del vial de diluyente. NO LO CONGELE. 

No le añada azida sódica. 

4. COLORANTE NEGRO AMIDO (PN 4105 y 4125) 

Preparación 

El colorante negro amido concentrado es una solución viscosa que puede gelificarse, lo que no afecta de ningún modo a la calidad de la solución 

final y su capacidad de coloración. 

Para obtener una perfecta reconstitución del colorante, siempre hay que prepararlo como se indica a continuación : 

1. Añada unos 15 mL de diluyente del colorante en el vial de negro amido concentrado. 

2. Cierre el vial con cuidado. 

3. Agite el vial intensamente durante un mínimo de 5 segundos. 

4. Vierta la solución obtenida en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

5. Repita esta operación dos veces, o tres veces si es necesario. 

6. Vierta el resto de diluyente en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

7. Complete hasta 300 mL con agua destilada o desionizada. 

8. Agite esta solución de 5 a 10 minutos. 

El colorante está listo para usar. 

NOTA : Una reconstitución incompleta del colorante puede implicar una mala coloración de la fracción albúmina (disminución de su porcentaje o 

aparición de un agujero blanco en el centro de la fracción). 

Después de la dilución, la solución colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; negro amido, 4 g/L ; etilén-glicol, 6,7 % ; aditivos inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Nocivo en caso de ingestión. 

Uso 

Para la coloración de los geles después de la separación electroforética de las proteínas. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para colorear sólo 10 geles. Cambie el colorante después de 10 usos. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

Las soluciones de colorante concentrada y diluida pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera, en contenedores cerrados para evitar 

la evaporación. La solución concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de colorante. 

La solución diluida es estable durante 1 mes. 

No almacene la solución de colorante diluida cerca de una fuente de calor. 

5. COLORANTE VIOLETA ÁCIDO (PN 4102 y 4122) 

Preparación 

Cada vial de la solución stock del colorante violeta ácido se diluye hasta 300 ml con agua destilada o desionizada. 

Después de la dilución, la solución de trabajo del colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; violeta ácido, 0.2 g/dL ; etilén-glicol, 3.25 % ; aditivos, 

inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Es perjudicial si se ingiere. 

Uso 

Para la tinción de geles con separaciones electroforéticas de proteínas. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para la coloración de 10 geles. Cambie el colorante después de su utilización en 10 coloraciones. 


Almacenar las soluciones stock y de trabajo a temperatura ambiente o refrigeradas, en contenedores cerrados para evitar la evaporación. La solución 

stock del colorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. La solución de trabajo del colorante 

es estable durante 6 meses. 

6. APLICADORES 

Uso 

Aplicadores precortados, de un solo uso, para la aplicación de la muestra. 

Almacenamiento 

Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados. 

7. PAPELES DE FILTRO 

Uso 

Papeles de filtro finos absorbentes precortados, de un solo uso, para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicación de 

la muestra. 

Conservación 

Les papeles de filtro finos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera. 

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REACTIVOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. SALINA 

Preparación 

Preparar una solución de NaCl 0.15 M (9 g/l) en agua destilada o desionizada. 

Uso 

Para diluir las muestras. 


Almacenar a temperatura ambiente o refrigerada. Desechar después de 3 meses o si cambia su aspecto, por ejemplo, se vuelve turbia debido a 

contaminación microbiana. Para períodos de almacenaje más prolongados, añadir azida sódica, 1 g/l. 

2. SOLUCIÓN DECOLORANTE 

Preparación 

Cada vial de la Solución Decolorante stock (SEBIA, PN 4540, 10 viales de 100 ml) se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada. Es 

conveniente diluir sólo 5 ml de la solución stock hasta 5 litros, volumen del contenedor de solución decolorante. Después de la dilución, la solución 

decolorante de trabajo contiene: ácido cítrico, 0.5 g/l. 

Uso 

Para desteñir, esto es, la eliminación del exceso de tinción y la coloración de fondo de los geles, y para enjuagar la cámara de tinción después de la 

limpieza con solución de lavado. Para neutralizar la acidez del decolorante, introduzca dentro del contenedor de desechos vacío 15 ml de sosa al 

50 % (solución comercial). 


Almacenar la solución decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o 

en las etiquetas del vial. La solución decolorante de trabajo es estable durante una semana a temperatura ambiente en una botella cerrada. No añadir 

azida sódica. 

Desechar la solución decolorante de trabajo si cambia su aspecto, por ejemplo, se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

Para evitar la proliferación microbiana en la solución decolorante diluida que se vaya a almacenar durante más de una semana, añada 5 µl/dL de 

ProClin 300. 

El decolorante diluido al que se ha añadido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de 

caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante. 

3. SOLUCIÓN DE LAVADO HYDRASYS 

Preparación 

Cada vial de la Solución de Lavado HYDRASYS stock (SEBIA, PN 4541, 10 viales de 80 ml) se diluye hasta 5 litros con agua destilada o desionizada. 

Después de la dilución, la solución de lavado de trabajo contiene: tampón alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; azida sódica. 

ATENCIÓN: La solución de lavado stock contiene azida sódica 0.625 %. ¡No ingerir! ¡Si se ingiere consultar al médico inmediatamente! La 

azida sódica puede dar lugar a la formación de compuestos explosivos o tóxicos al entrar en contacto con ácidos, plomo o cobre. Lavar 

siempre con gran cantidad de agua al desechar. 

Uso 

Sirve para limpiar el Compartimento de Tinción del HYDRASYS. Utilizarla periódicamente, por ejemplo, si el instrumento se usa diariamente lavar el 

compartimento de tinción semanalmente. 

El modo de empleo se encuentra en la hoja de instrucciones. 


Almacenar las soluciones de lavado stock y de trabajo en contenedores cerrados a temperatura ambiente o refrigerados. Son estables hasta la fecha 

de caducidad indicada en la etiqueta del vial. 

Desechar la solución de lavado de trabajo si cambia su aspecto, por ejemplo, se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

4. FLUIDIL 

Preparación 

El Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 ml) está listo para su uso. 

Uso 

Para diluir muestras viscosas o turbias, por ejemplo, sueros que contengan crioglobulinas o criogeles. 


Almacenar a temperatura ambiente o refrigeradas. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial. 

El Fluidil debe estar exento de precipitados. 

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Cámara de Almacenaje Húmeda, PN 1270, suministrada con el HYDRASYS. 

3. Kit de Contenedores suministrado con el HYDRASYS. 

4. Soporte del Gel para medios geles SEBIA, PN 10043110. 

5. Pipetas: 10 µl y 200 µl. 

6. Densitómetro / escáner capaz de leer geles de 82 x 51 mm ó 82 x 102 mm a 570 nm o con un filtro amarillo, p. ej., HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

o el programa PHORESIS para escáner de sobremesa. Observar las indicaciones del fabricante para los procedimientos de operación y 

calibración. 

7. Materiales de control de calidad (Suero Control SEBIA, PN 4785). 

MUESTRAS PARA ANÁLISIS 

En el HYDRAGEL 7/15 HR se pueden analizar muestras de suero, orina o líquido cefalorraquídeo (LCR). 

Las proteínas séricas también pueden cuantificarse después de la tinción con violeta ácido o negro amido. 

Extracción y almacenamiento de muestras 

Se recomienda analizar muestras frescas. Deben obtenerse conforme a los procedimientos establecidos de uso en el laboratorio clínico. Si es 

necesario, almacenar las muestras entre 2 y 8 °C hasta una semana. Las muestras congeladas son estables durante un mes por lo menos. 

Las muestras de suero descongeladas pueden dar lugar a leves marcas de aplicación debidas a la desnaturalización de proteínas o lipoproteínas. 

Congelar los sueros y LCR con azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. 

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Congelar las orinas con HEPES 0.1 M (pH 6.75) y azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. Las muestras descongeladas pueden 

dar lugar a leves marcas de aplicación debidas a la desnaturalización de proteínas. 

IMPORTANTE: No utilizar ácido bórico como conservante. 

Preparación de las muestras 

1. Preparación de las muestras (análisis cualitativo) 

Suero 

Aplicar muestras de suero sin diluir. Bajo almacenaje entre 2 y 8 °C o después de la congelación, algunos sueros (particularmente aquellos que 

contengan crioglobulina o criogel) pueden volverse viscosos o desarrollar turbidez. Tales sueros podrían presentar problemas de aplicación 

debido a la difusión dificultada a través de los dientes del aplicador de muestra. En estos casos, añadir 25 µl de Fluidil a 75 µl de suero y agitar 

en el vórtex durante 15 segundos. Continuar entonces con el procedimiento habitual. 

LCR o la pareja suero/LCR 

Aplicar las muestras con una concentración total de proteínas de unos 10 g/l. 

IMPORTANTE : El suero y el LCR deben presentar idéntica concentración total de proteínas. 

Orinas 

El análisis se lleva a cabo con orinas sin concentrar. Si se necesita una elevada sensibilidad, se puede aplicar la orina después de haberla 

concentrado. 

- Orinas no concentradas: Aplicar la orina tal cual. Si la concentración de proteínas es muy elevada, es posible diluir la orina con salina para 

obtener una concentración de proteínas de unos 2 g/l, lo que proporciona un patrón más claro. 

- Orinas concentradas: El análisis se realiza con muestras previamente concentradas hasta una concentración total de proteínas de unos 

5 g/l. 

IMPORTANTE: Algunas orinas contienen una elevada concentración de sales. Esto puede provocar la deformación del gel durante la migración 

y, por consiguiente, deformación de los perfiles de migración. Si tal deformación hace la interpretación inexacta, la orina debería dializarse para 

eliminar las sales. 

NOTA : En caso de orinas turbias (concentradas o no), se recomienda eliminar las partículas, centrifugando las muestras (durante 10 minutos a 

3000 rpm) o por filtración (en un filtro de 0,45 µm) para obtener una buena difusión en los aplicadores. 

2. Preparación de las muestras (análisis cuantitativo) 

Tinción con negro amido 

Utilizar muestras de suero sin diluir. 

Tinción con violeta ácido 

Utilizar muestras de suero previamente diluidas 4 veces (1 vol./3 vol.) con salina. Seguir entonces con el procedimiento habitual. 

Muestras a descartar 

No usar muestras de suero hemolisadas. La hemólisis incrementa las fracciones alfa-2 y beta. 

Evitar usar muestras de plasma. El fibrinógeno da lugar a una banda cerca del punto de aplicación que puede ser confundida con una inmunoglobulina 

monoclonal. 

PROCEDIMIENTO 

El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautomático multiparamétrico. Las etapas automáticas incluyen el procesado de los geles de agarosa 

HYDRAGEL en la siguiente secuencia: aplicación de la muestra, migración electroforética, secado, tinción, decoloración y secado final. Las etapas 

manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles, y la puesta en marcha del instrumento para el funcionamiento. 

LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS 

I. PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACIÓN 

1. Encender el HYDRASYS. 

2. Colocar un aplicador en una superficie plana con los números de los pocillos en la cara superior (Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de muestra en cada pocillo. Cargar el aplicador en el plazo de 2 minutos. 

- Colocar el aplicador en la cámara de almacenaje húmeda con el peine hacia arriba [asirlo por el plástico protector del peine]. Dejar que las 

muestras difundan en los dientes del aplicador durante 5 minutos después de la última aplicación de muestra. Para un uso posterior (hasta 

8 horas), mantener toda la cámara refrigerada. Ver la hoja de instrucciones de la cámara húmeda para más detalles. 

3. Abrir la tapa del Módulo de Migración y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador. 

ATENCIÓN: ¡Nunca cerra la tapa mientras los soportes estén elevados! 

4. Seleccionar el programa de migración en el menú del instrumento (lado izquierdo del teclado). 

- Análisis de suero : "7/15 HR1" para HYDRAGEL 7 HR y HYDRAGEL 15 HR. 

- Análisis de LCR o de LCR/suero : "7/15 HR2" para HYDRAGEL 7 HR y HYDRAGEL 15 HR. 

- Análisis de orina : 

1. Orinas no concentradas : "7/15 HR3" para HYDRAGEL 7 HR y HYDRAGEL 15 HR. 

2. Orinas concentradas : "7/15 HR2" para HYDRAGEL 7 HR y HYDRAGEL 15 HR. 

5. Extraer las esponjas tamponadas de su envoltorio ; asirlas por los extremos de plástico. Engarzar los extremos de plástico agujereados con 

las puntas metálicas del soporte ; los extremos de plástico deben quedar encarados al soporte (Fig. 2). 

6. Abrir el contenedor del HYDRAGEL. 

- Extienda un papel de filtro fino de manera rápida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de líquido. Retire el papel 

inmediatamente. 

ADVERTENCIA: Para evitar que se deshidrate, no deje que el papel de filtro contacte con el gel durante mucho tiempo. 

- Dispensar 120 µl de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 7 HR o 200 µl para el HYDRAGEL 15 HR en el tercio inferior del 

marco serigrafiado en la Placa de Control de Temperatura del módulo de migración. 

- Colocar el gel (con el lado de agarosa hacia arriba) con su borde inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado (Fig. 3). 

- Aplicar el gel en la superficie, haciéndolo contactar con el agua (Fig. 3). Asegurarse de que no se formen burbujas de aire, que el agua esté 

extendida bajo toda la superficie del gel y que éste esté alineado con el marco serigrafiado. 

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7. Devolver ambos soportes a su posición original. En esta posición las esponjas tamponadas no tocan el gel. NO FORZAR LOS SOPORTES 

HACIA ABAJO. 

8. Sacar el aplicador de la cámara húmeda. Asirlo por el plástico protector. 

- Romper el plástico protector de los dientes del peine. 

- Colocar el aplicador en la posición No 5 del soporte. 

IMPORTANTE: Los números impresos en el aplicador deben quedar de cara al usuario (Fig. 4). 

9. Cerrar la tapa del módulo de migración. 

10. Iniciar el procedimiento inmediatamente presionando la tecla «START» (flecha verde) situada en el lado izquierdo del teclado. 

IMPORTANTE: Asegurarse de que la toma de aire del lado derecho del instrumento no está bloqueada. 

MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Los dos soportes descienden, con lo cual las esponjas tamponadas y el aplicador entran en contacto con la superficie del gel. 

• El soporte del aplicador se eleva. 

• Programa de migración "7/15 HR1" y "7/15 HR2" : La migración se realiza a voltaje constante de 255 V a 20 °C, controlados por efecto Peltier, 

hasta que se hayan acumulado 75 Vh (durante unos 18 minutos). 

• Programa de migración "7/15 HR3" : La migración se realiza a voltaje constante de 255 V a 20 °C, controlados por efecto Peltier, hasta que se 

hayan acumulado 40 Vh (durante unos 10 minutos). 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos. 

• La temperatura de la placa de control asciende hasta 60 °C durante 9 minutos para secar el gel. 

• La placa de control es enfriada ; cuando alcanza 50 °C, un pitido indica que la tapa del módulo de migración se desbloquea. La temperatura de la 

placa permanece a 50 °C hasta que se abre la tapa. Entonces, la temperatura va descendiendo hasta que llega a 20 °C (en menos de 5 minutos), 

momento en el que se puede comenzar una nueva migración. 

NOTA: La tapa del módulo de migración permanece cerrada durante todas las etapas de la migración. 

II. PUESTA EN MARCHA DEL PROCESADO DEL 

1. Abrir la tapa. 

2. Sacar el aplicador y desechar. 

3. Elevar ambos soportes, extraer las esponjas tamponadas por sus extremos de plástico y desechar. 

4. Retirar el gel secado para su procesado posterior. 

5. Después de cada uso limpiar los electrodos y la placa de control de temperatura con un pañuelo de papel suave humedecido. 

6. Abrir el Soporte del Gel. Colocar el gel secado (con el lado de agarosa hacia arriba) en los orificios de las dos varillas y cerrar el soporte. 

Asegurase de que el gel está colocado correctamente en el soporte (Fig. 5). 

7. Colocar el soporte del gel en el Módulo de Procesado / Tinción. 

IMPORTANTE: Antes de iniciar el programa de procesado / tinción, comprobar lo siguiente: 

- el contenedor de colorante contiene 300 ml de colorante ; 

- el contenedor de decolorante contiene como mínimo 1 litro de solución decolorante ; 

- el contenedor de deshechos está vacío. 

Para conocer en qué posiciones conectar los reactivos: consultar la información que aparece en la pantalla del instrumento (seleccionar la 

tecla: VER CANALES). 

IMPORTANTE: No olvidar bloquear los canales no utilizados. 

8. Seleccionar el programa de tinción «HR ACID VIOLET» o «HR AMIDO» en el menú del instrumento e iniciar el proceso presionando la tecla 

«START» (flecha verde situada en el lado derecho del teclado). 

Durante la tinción, la decoloración, el lavado y el secado del gel el compartimento permanece bloqueado. 

Después del enfriamiento de la cubeta, una señal sonora (bip) suena y el sistema se desbloquea (la ventilación se mantiene hasta la 

recuperación del porta-films). 

III. FINALIZACIÓN DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Retirar el soporte del gel del compartimento, abrirlo y extraer el gel ya seco. 

NOTA : Si se observan manchas azules residuales en los geles después de la coloración / decoloración, una etapa de lavado suplementario 

con el programa " LAV. ISOENZ/GEL " permite eliminarlas o atenuarlas (según su intensidad) antes de su lectura en densitómetro o escáner. 

2. Si es necesario, limpiar el reverso del gel (el lado de soporte de plástico) con un papel suave y húmedo. 

RESULTADOS 

Control de calidad 

Se aconseja incluir una muestra normal o un suero control (Suero Control de Proteínas, SEBIA, PN 4785) en cada análisis de muestras. 

Valores (análisis cuantitativo) 

La lectura densitométrica (a 570 nm) de las separaciones electroforéticas teñidas proporciona las concentraciones relativas (porcentajes) de las 

fracciones de proteína individuales. 

Los valores normales (media ± 2 SD) de las fracciones electroforéticas principales de las proteínas séricas en los geles HYDRAGEL 7/15 HR han 

sido establecidos a partir de una población sana integrada por 225 adultos (hombres y mujeres): 

FRACCIÓN HYRYS PHORESIS Albúmina 56.2 – 69.0 57.5 – 67.9 Alfa-1 globulinas 1.2 – 3.2 1.0 – 3.8 Alfa-2 globulinas 7.8 – 13.4 7.2 – 12.8 Beta globulinas 7.4 – 13.4 7.6 – 13.6 

| Gamma globulinas | 9.8 – 18.6 | 10.3 – 18.3 | 

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de normalidad. 

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Interpretación 

La interpretación es cualitativa. 

PROTEÍNAS SÉRICAS (6) 

La interpretación se realiza comparando los electroforetogramas de la muestra clínica y un control normal. En caso de que exista alguna fracción 

aumentada, disminuida o adicional, normalmente es necesario confirmar los cambios observados mediante otras pruebas tales como la cuantificación 

de proteínas específicas, inmunoelectroforesis, o inmunofijación. 

Entre las numerosísimas proteínas plasmáticas, sólo alrededor de quince existen en cantidad suficiente para ser visualizadas en los geles de Alta 

Resolución (HR). La importancia del gel HYDRAGEL 7/15 HR está en su sensibilidad en la zona catódica, que permite la detección de bandas 

monoclonales u oligoclonales débiles. La interpretación es esencialmente cualitativa. 

PROTEÍNAS DEL LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO (4,6,11,12,13) 

Cualquier banda adicional detectada en la fracción gamma del LCR, sin ninguna fracción correspondiente en el suero debe ser confirmada mediante 

un procedimiento de inmunofijación (HYDRAGEL 3/6 CSF SEBIA o kits de inmunofijación SEBIA, HYDRAGEL 1/2/4/9 IF SEBIA), con el fin de 

caracterizar la síntesis intratecal. La confirmación inmunológica es necesaria porque es posible detectar en la fracción gamma bandas que no 

corresponden a inmunoglobulinas (fracción tau, anhidrasa carbónica, pos gamma, o PCR, por ejemplo). 

NOTA : La interpretación es estrictamente comparativa. Es por lo tanto absolutamente necesario: 

- Analizar los fluidos biológicos (LCR / suero) obtenidos al mismo tiempo sin ningún tratamiento que pudiese modificar la concentración de Ig G en 

el suero. 

- Aplicar cantidades idénticas de proteínas o de inmunoglobulinas en las 2 muestras. Por lo tanto es necesario realizar una cuantificación previa con 

una buena precisión y reactivos apropiados. 

El líquido cefalorraquídeo (LCR) es un líquido biológico con una concentración de proteínas baja. La cantidad de proteína en un LCR normal es de 

unos 0.30 g/l ± 0.15. La mayoría de proteínas del LCR tiene su origen en el suero, desde donde son filtradas y transportadas a través de la barrera 

hematoencefálica. Para analizarlo en los geles HYDRAGEL 7/15 HR, el LCR debe estar concentrado hasta unos 10 g/l. 

Un patrón de LCR normal muestra el siguiente orden de fracciones: 

• Prealbúmina, o transtiretina, la fracción más rápida ; 

• Albúmina, la fracción predominante, que representa alrededor del 75 % del total de proteínas ; 

• Fracción alfa-1, integrada principalmente por la alfa-1 antitripsina ; 

• Alfa lipoproteínas ; 

• Fracción alfa-2, que contiene ante todo proteínas de alto peso molecular ; por consiguiente, es muy débil ya que las proteínas no pueden atravesar 

la barrera hematoencefálica ; 

• Fracción beta, que contiene transferrina ; 

• Fracción beta-2, que contiene ante todo transferrina «específica de LCR», la fracción tau, una forma de transferrina que carece de un carbohidrato 

(ácido siálico) ; 

• Fracción gamma, que esencialmente contiene Ig G, y a veces Ig A e Ig M. 

Muchos estudios han mostrado un incremento de inmunoglobulinas procedentes de una síntesis dentro del Sistema Nervioso Central. La estimulación 

antigénica de esta producción de Ig G no ha sido explicada todavía. Se han propuesto hipótesis que hablan de infecciones víricas y reacciones 

autoinmunes. 

Junto a la Esclerosis Múltiple, un aumento de Ig G puede ser detectado durante la enfermedad desmielinizante infantil, panencefalitis esclerosante 

subaguda y también durante otros desórdenes inflamatorios e infecciosos. 

La esclerosis múltiple se detecta mediante múltiples bandas monoclonales que revelan un aspecto oligoclonal de las gammaglobulinas. Estas 

anormalidades aparecen muy pronto durante el curso de la enfermedad. La intensidad de las diferentes bandas puede variar desde muy débil a muy 

fuerte. 

Este aspecto oligoclonal ha sido encontrado también durante otros desórdenes del sistema nervioso central (enfermedades infecciosas inflamatorias o no). 

Se han detectado múltiples bandas durante la panencefalitis esclerosante, neurosífilis, encefalitis vírica, meningoencefalitis y meningitis bacteriana. 

También se han encontrado, pero raramente, en la neuropatía periférica, tumores, hidrocefalia, enfermedades degenerativas y desórdenes 

vasculares. Todos estos casos no deben ser considerados como falsos positivos, sino como una indicación de una actividad inmunológica aumentada 

del sistema nervioso central. Se recomienda encarecidamente que tales LCR sean analizados simultáneamente con el suero del paciente (a la misma 

concentración de proteínas, esto es unos 10 g/l). En algunas anormalidades linfoproliferativas se puede detectar un aspecto oligoclonal tanto en el 

suero como en el LCR. 

Cualquier patrón oligoclonal tiene que ser confirmado mediante investigaciones posteriores con kits de inmunofijación: 

• HYDRAGEL 1 IF SEBIA (PN 4301), HYDRAGEL 2/4 IF, SEBIA (PN 4302, 4304, 4308), 

• HYDRAGEL 9 IF, SEBIA (PN 4309), 

• HYDRAGEL 3/6 CSF, SEBIA (PN 4350, 4351), 

• HYDRAGEL 1 BENCE JONES, SEBIA (PN 4321), HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES, SEBIA (PN 4322, 4324). 

ORINA (1,2,3,5,7,8,9,10,14,15) 

La electroforesis de orina se realiza con el fin de detectar componentes monoclonales. 

El HYDRAGEL 7/15 HR se utiliza como un sistema de despistaje de proteínas urinarias. Permite la detección de componentes monoclonales que 

deben identificarse mediante inmunofijación, y la detección de proteínas de origen tubular, glomerular o mixto que deben ser caracterizadas con 

métodos adecuados (filtración molecular en tampón SDS o medidas nefelométricas específicas o inmunofijación con anticuerpos apropiados). 

Interferencias y limitaciones 

Las muestras de suero descongeladas pueden dar lugar a leves marcas de aplicación debidas a la desnaturalización de proteínas o lipoproteínas. 

No usar muestras de suero hemolisadas. 

Evitar usar muestras de plasma. 

Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no puede darse 

ninguna garantía respecto a la detección de la totalidad de todos los componente monoclonales. 

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Resolución de problemas 

Avisar al Servicio de Atención Técnica del distribuidor cuando el test no funcione, pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la 

preparación y almacenaje de los materiales y para el procedimiento a seguir. 

Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como las informaciones relativas a la eliminación de los desechos, están disponibles 

en el Servicio de Asistencia Técnica de su distribuidor. 

CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS 

Se usaron materiales, preparación de las muestras y procedimientos estándar. Todas las separaciones electroforéticas fueron evaluadas visualmente. 

Análisis cualitativo 

Los resultados obtenidos con los geles HYDRAGEL 7/15 HR indican una muy buena reproducibilidad intra e interserial en todos los aspectos 

probados y no hubieron diferencias detectables visualmente entre las réplicas. 

Se analizaron muestras patológicas y normales de suero, parejas LCR/suero y orina procedentes de 116 pacientes en geles HYDRAGEL 7/15 HR y 

en un sistema comercial comparable de geles de alta resolución. Las muestras se prepararon como se recomienda en los procedimientos respectivos. 

Los parecidos / diferencias de los patrones electroforéticos y la presencia de bandas monoclonales u oligoclonales fueron los aspectos comparados. 

La comparación visual o cualitativa entre estas dos pruebas se ha basado en el número de bandas y su posición. 

Los resultados de los dos procedimientos concordaron en las 116 muestras y eran consecuentes con el diagnóstico clínico. 

Análisis semicuantitativo 

En las aplicaciones semicuantitativas, los resultados obtenidos con los geles HYDRAGEL 7/15 HR indican una muy buena reproducibilidad intra e 

interserial en todos los aspectos probados y no hubieron diferencias detectables visualmente entre las réplicas ; el CV medio era 4.0 %. 

Los procedimientos HYDRAGEL 7/15 HR con las opciones de tinción con violeta ácido y negro amido fueron comparados con otro procedimiento 

comercial de geles de alta resolución (separaciones de alta resolución tradicionales de las proteínas séricas y tinción con violeta ácido). 

Para una mejor comparación, todas las separaciones electroforéticas fueron leídas (con un filtro amarillo) como separaciones de 5 fracciones. 

Se analizaron muestras de suero clínicas (n = 56) con cada procedimiento y se compararon las concentraciones relativas de cada fracción usando 

un análisis de regresión lineal, siendo 0.973 el coeficiente de correlación medio en todas las fracciones proteicas con ambas soluciones de tinción. 

HYDRAGEL 15 HR (violeta ácido) HYDRAGEL 15 HR (negro amido) FRACCIÓN Coeficiente Pendiente Intersección en y Gama (%) Coeficiente Pendiente Intersección en y Gama (%) de correlación (HYDRAGEL 15 HR) de correlación (HYDRAGEL 15 HR) Albúmina 0.981 0.98 1.89 36.7 – 66.1 0.985 0.96 2.35 36.1 – 67.4 Alfa-1 0.976 0.99 -0.11 1.5 – 7.5 0.982 0.97 -0.03 1.3 – 7.1 Alfa-2 0.982 0.98 -0.14 6.8 – 24.5 0.978 0.96 0.31 5.7 – 24.2 Beta 0.956 0.91 0.90 5.8 – 19.8 0.918 0.95 0.41 5.4 – 20.0 

| Gamma | 0.991 | 0.99 | -0.16 | 8.3 – 40.0 | 0.990 | 0.94 | 1.05 | 7.2 – 37.5 | 

Sensibilidad 

La sensibilidad se determinó a partir de la máxima dilución seriada que proporcionaba una banda distinguible. En los programas « HR1» y « HR2 » 

la sensibilidad de detección fue de 100 - 300 mg/l para una proteína monoclonal (G, Kappa). 

En el programa « HR3 », la sensibilidad de detección fue de 15 - 20 mg/l (albúmina y proteína de Bence Jones). Se observaron aproximadamente 

las mismas sensibilidades al utilizar negro amido y violeta ácido como colorantes. 

NOTA: El límite de detección puede variar en función de la posición de la banda monoclonal y el fondo policlonal de la fracción de las 

gammaglobulinas. 

Linealidad 

Los métodos fueron lineales hasta al menos 58 g/l de albúmina y 39 g/l de Ig G para ambos procedimientos de tinción. 

BIBLIOGRAFÍA 







(5) Joachim GR, Cameron JS, Chwartz M, Belker EL. 1964. Selectivity of protein excretion in patients with the nephrotic syndrome. J Clin Invest, 43, 

2332-2346. 









Acta, 56 : 125-126. 




- 47 -



35 : 1997. 



PATRÓN DE MIGRACIÓN 

+ 

Pre-albúmina 

Albúmina 

Orosomcoide 


Haptoglobina 


Lipoproteinas ß 


ß2 Microglobulina 

Fracción tau 

α1 Antiquimotripsina 

Lipoproteínas α 

Globulina Gc 


Transferrina 

Hemopexina 

Antithrombina III 

Esterasa del inhibidor C1 

γ Globulinas 

G - A - M - D - E 

- 

- 48 -


UTILIZAÇÃO 

Os kits HYDRAGEL 7 HR e HYDRAGEL 15 HR destinam-se ao multi-fraccionamento em meio alcalino (pH 8,6) das proteínas do soro humano ou de 

outros fluídos biológicos (urina ou liquido céfalo-raquidiano, LCR), por electroforese em geles de agarose no aparelho semi-automático HYDRASYS. 

O sistema HYDRASYS permite realizar todas as sequências até à obtenção do gel pronto para análise qualitativa ou quantitativa. As proteínas 

separadas são coradas com violeta ácido (análise qualitativa em soro, urina ou LCR ou quantitativa em soro) ou negro de amido (análise quantitativa 

em soro). O excesso de corante é eliminado com uma solução ácida. As electroforeses resultantes podem ser analisadas visualmente. Para a análise 

quantitativa (unicamente de soros, com qualquer um dos corantes) a avaliação por densitómetria dá uma quantificação relativa precisa de cada zona 

individual. 

Cada gel de agarose poderá analisar: 

• 7 amostras no kit HYDRAGEL 7 HR, 

• 15 amostras no kit HYDRAGEL 15 HR. 

Para diagnóstico in vitro. Registado no INFARMED. 

PRINCÍPIO DO TESTE 

A electroforese das proteínas séricas e de outros fluídos é uma análise muito útil, usada em rotina nos laboratórios de análises clínicas, com vista à 

detecção de anomalias no perfil proteico. Baseia-se nos princípios da electroforese de zona executada num suporte adequado. A agarose tem sido 

utilizada por ser um meio de suporte versátil e eficaz. Embora para a maioria dos diagnósticos, as proteínas sejam separadas apenas em cinco 

fracções, as técnicas de alta resolução podem fornecer informações adicionais úteis para o diagnóstico. 

Nos geles de HYDRAGEL 7/15 HR, as proteínas do soro, urina ou liquido céfalo-raquidiano (LCR) separam-se em cerca de 10 fracções. Cada fracção 

contem uma ou mais proteínas. 

A composição do gel e a selecção do corante (Violeta Ácido ou Negro de Amido) permitem uma excelente resolução e uma elevada sensibilidade, 

especialmente na zona das gamaglobulinas, tendo como objectivo pôr em evidencia os perfis oligoclonais. 

A identificação das bandas deve ser feita em relação a um soro controlo e a interpretação é qualitativa. 

A avaliação por densitómetria dos geles corados com vileta ácido ou negro de amido dá uma quantificação relativa precisa de cada zona individual. 

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS NOS KITS HYDRAGEL 7 HR E HYDRAGEL 15 HR 

ITEM REF. N° 4102 REF. N° 4122 REF. N° 4105 REF. N° 4125 Geles de agarose (prontos a usar) 10 geles 10 geles 10 geles 10 geles Tiras de tampão (prontas a usar) 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 Diluente da solução corante (solução concentrada) 1 frasco, 60 ml 1 frasco, 60 ml Corante negro de amido (solução concentrada) 1 frasco, 20 ml 1 frasco, 20 ml Corante violeta ácido (solução concentrada) 1 frasco, 75 ml 1 frasco, 75 ml Aplicadores (prontos a usar) 1 caixa de 10 (7 dentes) 1 caixa de 10 (15 dentes) 1 caixa de 10 (7 dentes) 1 caixa de 10 (15 dentes) 

| Papéis de filtro finos | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 

PARA OPTIMIZAÇÃO DOS RESULTADOS 

Os elementos de um mesmo kit devem ser utilizados em conjunto, e de acordo com as instruções de utilização. 

LER ATENTAMENTE AS INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO. 

1. GELES DE AGAROSE 

Preparação 

Os geles de agarose estão prontos a usar. Cada gel contém: agarose, 8 g/l ; tampão tris-barbital pH 8,6 ± 0,1 ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Os geles de agarose contêm 0,18 % de barbital. Não ingerir! Se ingerido, consultar imediatamente um médico! 

Utilização 

Suporte para a electroforese das proteínas. 

Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração 

Armazenar os geles horizontalmente, nas embalagens protectoras de origem, à temperatura ambiente (15 - 30 °C) ou no frigorífico (2 - 8 °C) (a seta 

existente na parte da frente da caixa do kit deve ficar voltada para cima). São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit e nos rótulos 

das embalagens dos geles. Evitar variações da temperatura durante o armazenamento (ex: não armazenar perto de uma janela ou de uma fonte de 

calor). 

NÃO CONGELAR! 

Deitar fora o gel quando: 

(i) houver cristais ou precipitados na superfície do gel ou quando a textura do gel for muito macia (isto sucede se o gel for congelado) ; 

(ii) há desenvolvimento de bactérias ou fungos ; 

(iii) estiver presente uma quantidade anormal de líquido na embalagem do gel (resultante da exsudação do gel devido a condições de 

armazenamento inadequadas). 

2. TIRAS DE TAMPÃO 

Preparação 

As tiras de tampão estão prontas a usar. Cada uma contém: tampão tris-barbital pH 8,7 ± 0,2 ; azida de sódio ; aditivos, não perigosos nas 


AVISO: As tiras contêm 0,55 % de barbital e 0,30 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerido, consultar imediatamente um médico! A azida 

de sódio pode formar complexos explosivos ou tóxicos em caso de contacto com ácidos, chumbo ou cobre. 

Utilização 

Tampão para a electroforese. 

- 49 - 

INSTRUÇÕES DE USO SEBIA - Português



As tiras de tampão podem ser conservadas à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). 

As tiras de tampão devem ser conservadas horizontalmente dentro da embalagem protectora (a seta na parte da frente da caixa deve permanecer 

apontada para cima). 

As tiras são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou na embalagem protectora das tiras. NÃO CONGELAR. 

3. DILUENTE DA SOLUÇÃO CORANTE (ref. n° 4105 e 4125) 

Preparação 

O diluente da solução corante deverá ser utilizado como está descrito no parágrafo " SOLUÇÃO CORANTE NEGRO DE AMIDO ". 

Contém uma solução ácida. 

Utilização 

Para a preparação das soluções de corante negro de amido. 


Armazenar o diluente à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. NÃO 

CONGELAR. 

Não adicionar azida de sódio. 

4. CORANTE NEGRO DE AMIDO (ref. n° 4105 e 4125) 

Preparação 

O corante negro de amido concentrado, é uma solução viscosa que pode eventualmente gelificar, o que não afecta nada a qualidade da solução final 

e o seu poder de coloração. 

Em qualquer caso, para obter uma perfeita reconstituição do corante, é necessário que seja respeitado o procedimento seguinte: 

1. Adicionar cerca de 15 ml do diluente do corante ao frasco do negro de amido concentrado. 

2. Fechar cuidadosamente o frasco. 

3. Agitar muito vigorosamente o frasco durante pelo menos 5 segundos. 

4. Transferir esta solução para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

5. Repetir esta etapa duas vezes ou se necessário 3 vezes. 

6. Transferir o diluente restante para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

7. Completar o volume para 300 ml com água destilada ou desmineralizada. 

8. Agitar muito bem esta solução durante 5 a 10 minutos. 

A solução corante está pronta a utilizar. 

NOTA : Uma reconstituição incompleta do corante pode provocar uma má coloração da fracção de albumina (baixa da percentagem ou lacuna dentro 

da fracção). 

Após diluição, a solução de corante contém: solução ácida pH ≈ 2 ; negro de amido, 4 g/l ; etilenoglicol, 6,7% ; aditivos, não perigosos nas 


AVISO: Nocivo em caso de ingestão. 

Utilização 

Para corar geles depois da electroforese das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar a solução de corante concentrada e a solução diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico em frascos fechados para evitar a 

evaporação. 

A solução concentrada é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos. 

A solução diluída de corante é estável por um mês. 

Não guardar a solução de trabalho do corante próximo de uma fonte de calor. 

5. CORANTE VIOLETA ÁCIDO (ref. n° 4102 e 4122) 

Preparação 

O frasco de corante concentrado deve ser diluído até 300 ml com água destilada ou desmineralizada. Após diluição, a solução de corante contém: 

solução ácida, pH ≈ 2 ; violeta ácido 2 g/l ; etiilenoglicol, 3,25 % ; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar o 

ensaio. 

AVISO: Nocivo em caso de ingestão! 

Utilização 

Para corar os geles após a electroforese das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar tanto a solução concentrada como a diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico em frascos fechados para evitar a evaporação. A 

solução concentrada é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. A solução diluída é estável durante 6 meses. 

6. APLICADORES 

Utilização 

Aplicadores pré-cortados, de utilização única, para aplicação das amostras. 

Armazenamento 

Armazenar os aplicadores em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

7. PAPÉIS DE FILTRO FINOS 

Utilização 

Pré-cortados, de utilização única, estes finos papéis absorventes destinam-se à absorção do excesso de líquido da superfície do gel antes da 

aplicação da amostra. 

Armanezamento 

Armazenar os papéis de filtro finos em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

- 50 -


REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. SORO FISIOLÓGICO 

Preparação 

Preparar uma solução a 0,15 M (9 g/l) de NaCl em água destilada ou desmineralizada. 

Utilização 

Para diluir as amostras. 


Armazenar à temperatura ambiente ou no frigorífico. Deitar fora após 3 meses ou se notar alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva 

devido a contaminação microbiana. Para períodos de armazenamento mais longos adicionar 1 g/l de azida de sódio. 

2. SOLUÇÃO DESCORANTE 

Preparação 

Cada frasco de solução descorante concentrada (SEBIA, ref. n° 4540, 10 frascos de 100 ml cada) deve ser diluída a 1/1000 com água destilada ou 

desmineralizada e permite obter 100 litros de solução total. É conveniente diluir apenas 5 ml da solução concentrada de cada vez, para o volume 

final de 5 litros (a capacidade do recipiente onde se vai colocar a solução descorante). Após diluição, a solução descorante contém: ácido cítrico, 

0,5 g/l. 

Utilização 

Na descoloração, isto é, remoção do excesso de corante do gel. No enxaguamento da câmara de coloração, após lavagem. 

Para neutralizar a acidez do descorante, adicionar ao frasco de despejo 15 ml de soda a 50 %. 


Armazenar a solução descorante concentrada à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos dos frascos da solução descorante. A solução descorante diluída é estável por uma semana à temperatura ambiente, quando conservada 

em recipiente fechado. Não adicionar azida de sódio. 

Deitar fora a solução diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar tornar turva devido a contaminação microbiana. 

Em caso de conservação prolongada (superior a uma semana) da solução diluída, adicionar 50 µl/l de ProClin 300 para evitar a proliferação 

microbiana. 

A solução descorante diluída contendo ProClin é estável à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). É estável até ao 

fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco do descolorante. 

3. SOLUÇÃO DE LAVAGEM HYDRASYS 

Preparação 

Cada frasco da solução de lavagem HYDRASYS (SEBIA, ref. n° 4541, 10 frascos de 80 ml cada) deve ser diluído para obtenção do volume final de 

5 litros com água destilada ou desmineralizada. Após diluição, a solução de lavagem contém: tampão alcalino pH 8,8 ± 0,3 ; azida de sódio. 

AVISO: A solução de lavagem contém 0,625 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! Quando em 

contacto com ácidos, chumbo ou cobre, a azida de sódio pode levar à formação de compostos explosivos ou tóxicos. Quando deitar fora 

lavar abundantemente com grandes quantidades de água. 

Utilização 

Para a lavagem da câmara de coloração do HYDRASYS. Utilizar periodicamente. Por exemplo, se o aparelho for utilizado diariamente, fazer a 

lavagem da câmara de coloração uma vez por semana. 

Ver as instruções de utilização incluídas na embalagem. 


Armazenar a solução concentrada e a solução diluída em recipientes fechados à temperatura ambiente ou no frigorífico. A solução concentrada é 

estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco da solução de lavagem. 

Deitar fora a solução de lavagem diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar tornar turva devido a contaminação microbiana. 

4. FLUIDIL 

Preparação 

O Fluidil (SEBIA, ref. n° 4587, 5 ml) vem pronto a ser usado. 

Utilização 

Destina-se a diluir amostras viscosas ou turvas, por exemplo, soro contendo uma crioglobulina ou um criogel. 


Armazenar à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco de Fluidil. 

O Fluidil não deve conter quaisquer precipitados. 

EQUIPAMENTO E ACESSÓRIOS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. Sistema HYDRASYS, ref. n° 1210 ou ref. n° 1211. 

2. HYDRAplus SEBIA, ref. n° 1215, micropipetador, manual ou automático, como alternativa na pipetagem das amostras para os aplicadores 

respectivos. 

3. Câmara húmida, ref. n° 1270, fornecida com o HYDRASYS. 

4. Frascos de plástico fornecidos com o HYDRASYS. 

5. Suportes para meios geles SEBIA, ref. n° 10043110 

6. Pipetas: 10 µl e 200 µl. 

7. Densitómetro/scanner capaz de ler um gel 82 x 51 mm ou 82 x 102 mm a 570 nm (filtro amarelo): HYRIS SEBIA, DVSE SEBIA ou um scanner 

equipado com PHORESIS SEBIA. Ler as instruções de utilização de cada aprelho para utilização e calibração. 

8. Soro controlo, por exemplo, Soro de controlo SEBIA, ref. n° 4785. 

- 51 -


AMOSTRAS 

As amostras para análise com o HYDRAGEL 7/15 HR podem ser de soro, urina ou liquido céfalo-raquidiano (LCR). 

As proteínas do soro podem ser quantificadas após coloração com violeta ácido ou negro de amido. 

Colheita e conservação das amostras 

É recomendada a utilização de amostras frescas. As amostras devem ser colhidas de acordo com os métodos utilizados nos laboratórios de análises 

clínicas. As amostras podem ser conservadas uma semana no frigorífico (2 - 8 °C). Para conservações prolongadas, congelar as amostras. As 

amostras congeladas são estáveis durante pelo menos um mês. As amostras descongeladas podem levar ao aparecimento de ligeiras bandas no 

ponto de aplicação, devido à desnaturação das proteínas ou lipoproteínas. 

O congelamento das urinas com azida de sódio a 0,2 g/l e HEPES 0,1 M (pH 6,75) e dos soros e LCR com azida de sódio a 0,2 g/l aumenta a 

estabilidade do armazenamento. 

IMPORTANTE: Não utilizar ácido bórico como conservante. 

Preparação das amostras 

1. Preparação das amostras para análise qualitativa (com coloração com violeta ácida) 

Soro 

Usar directamente amostras de soro não diluídas. Após conservação a 2 - 8 °C ou congelamento, alguns soros (especialmente os que contêm 

uma crioglobulina ou um criogel) podem tornar-se viscosos ou turvos. Estes soros podem apresentar problemas na aplicação porque difundem 

com muita dificuldade pelos dentes do aplicador de amostras. Neste caso adicionar 25 µl de Fluidil a 75 µl de soro e agitar no vortex durante 

15 segundos. Depois seguir a técnica normal. 

LCR ou par LCR/soro 

Aplicar amostras com uma concentração total de proteínas de cerca de 10 g/l. 

IMPORTANTE: O soro e o LCR devem apresentar a mesma concentração total de proteínas. 

Urinas 

Aanálise é feita em urinas não concentradas. Se for requerida uma elevada sensibilidade, podemos usar urina concentrada. 

- Urinas não concentradas : Aplicar directamente as urinas não concentradas. 

- Urinas concentradas : A análise é efectuada em amostras previamente concentradas a um valor total de concentração de proteínas de 5 g/l. 

IMPORTANTE: Algumas urinas contêm um elevado teor de sais. Isso pode provocar uma deformação do gel durante a migração e, 

consequentemente, uma distorção do perfil electroforético. Para evitar este problema é necessário eliminar os sais por meio de diálise. 

NOTA: No caso de urinas turvas (concentradas ou não), recomenda-se a eliminação das partículas por centrifugação das amostras (durante 

10 minutos a 3000 rpm) ou por filtração (com filtro de 0,45 µm), de modo a obter uma boa difusão nos aplicadores. 

2. Preparação dos soros para a análise quantitativa (com coloração com negro de amido ou violeta ácido e utilizando o programa 7/15 HR1) 

Coloração com negro de amido 

Utilizar directamente as amostras de soro não diluídas 

Coloração com violeta ácido 

Utilizar amostras previamente diluídas a 1/4 com soro fisiológico ; depois seguir a técnica. 

Amostras a evitar 

Não utilizar amostras hemolisadas: a hemólise aumenta as zonas alfa-2 e beta. 

Não utilizar amostras de plasma. O fibrinogénio leva ao aparecimento de uma banda perto do ponto de aplicação que pode ser confundida com uma 

gamapatia monoclonal e aumentar a percentagem da zona correspondente. 

TÉCNICA 

O sistema HYDRASYS é um aparelho semi-automático multi-paramétrico. Os passos automáticos incluem o tratamento dos geles de agarose 

HYDRAGEL segundo as etapas seguintes: aplicação da amostra, migração electroforética, secagem, coloração, descoloração e secagem final. Os 

passos manuais são os seguintes: preparação das amostras e dos geles e lançamento das sequências automáticas. 

LER ATENTAMENTE O MANUAL DE INSTRUÇÕES DO HYDRASYS. 

I. PREPARAÇÃO DA MIGRAÇÃO 

1. Ligar o aparelho HYDRASYS. 

2. Colocar um aplicador numa superfície plana com os números dos poços voltados para cima (Fig. 1): 

- Aplicar 10 µl de amostra em cada poço. A pipetagem das amostras em cada aplicador não deve ultrapassar o tempo de dois minutos. 

- Colocar o aplicador na câmara húmida com os dentes voltados para cima (segure-o pela protecção de plástico). Deixar as amostras 

difundirem-se pelos dentes durante 5 minutos após a aplicação da última amostra. Para uma conservação prolongada (8 horas no máximo), 

colocar a câmara húmida no frigorífico. 

Ver as instruções de utilização da câmara húmida para mais detalhes. 

3. Abrir a tampa da câmara de migração e levantar os suportes do aplicador e dos eléctrodos. 

AVISO: Nunca fechar a tampa quando os suportes estão levantados! 

4. Seleccionar o programa de migração a partir do menu do aparelho (lado esquerdo do teclado): 

- Análise de soro : programa de migração “7/15 HR1” para o HYDRAGEL 7 HR e para o HYDRAGEL 15 HR. 

- Análise de LCR ou dos pares LCR/soro : programa de migração “7/15 HR2” para o HYDRAGEL 7 HR e para o HYDRAGEL 15 HR. 

- Análise de urinas : 

1. Urinas não concentradas: programa de migração “7/15 HR3” para o HYDRAGEL 7 HR e para o HYDRAGEL 15 HR. 

2. Urinas concentradas: programa de migração “7/15 HR2” para o HYDRAGEL 7 HR e para o HYDRAGEL 15 HR. 

5. Retirar as tiras de tampão da embalagem ; colocar as tiras de tampão sobre os eléctrodos, fixando as extremidades de plástico perfuradas 

aos pinos do suporte dos eléctrodos. A face das tiras de tampão onde estão fixadas as partes de plástico fica em contacto com os eléctrodos. 

(Fig. 2). 

6. Desempacotar a placa HYDRAGEL. 

- Eliminar rapidamente o excesso de líquido da superfície do gel com a ajuda de um papel de filtro fino. 

ATENÇÃO: Não deixar o papel de filtro em contacto prolongado com o gel, para evitar a sua desidratação. 

- 52 -


- Aplicar 120 µl de água destilada ou desionisada para o HYDRAGEL 7 HR ou 200 µl para o HYDRAGEL 15 HR no terço inferior do quadro 

impresso na placa de migração. 

- Colocar o gel virado para cima, contra a parte inferior do quadro impresso na placa de migração (Fig. 3). 

- Dar uma forma côncava ao gel (Fig. 3) e baixá-lo lentamente até contacto com a gota de água. A gota deve repartir-se por toda a largura 

do gel. Ajustar ligeiramente o gel de modo a eliminar as bolhas de ar que se tenham formado. Baixar o gel até ficar na horizontal. 

7. Baixar os dois suportes. Nesta posição as tiras de tampão não tocam no gel. NÃO FORÇAR A DESCIDA DOS SUPORTES MANUALMENTE. 

8. Retirar o aplicador da câmara húmida. Segurá-lo pela estrutura de protecção plástica. 

- Quebrar e retirar a protecção dos dentes. 

- Colocar o aplicador na posição n° 5 do suporte. 

IMPORTANTE: Os números impressos no aplicador devem ficar virados para o operador (Fig. 4). 

9. Fechar a tampa da câmara de migração. 

10. Dar início imediatamente ao processo apoiando em “START” (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

IMPORTANTE: Assegure-se de que a grelha de ventilação não está bloqueada (à direita do aparelho). 

MIGRAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Descida dos suportes do aplicador e dos eléctrodos de forma a que as tiras de tampão e o aplicador contactem com a superfície do gel. 

• Subida do aplicador de amostras. 

• Programa "7/15 HR1" e "7/15 HR2" : A migração é feita à potência constante de 255 V para o HYDRAGEL 7 HR e o HYDRAGEL 15 HR, a 20 °C, 

controlada por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 75 Vh, durante cerca de 18 minutos. 

• Programa "7/15 HR3" : A migração é feita à potência constante de 255 V para o HYDRAGEL 7 HR e o HYDRAGEL 15 HR, a 20 °C, controlada por 

efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 40 Vh, durante cerca de 10 minutos. 

• Os eléctrodos são desligados com a subida do suporte. 

• Secagem do gel a 60 °C durante cerca de 9 minutos. 

• A placa de migração é arrefecida ; quando chega aos 50 °C ouve-se um sinal sonoro que indica que a tampa da câmara de migração foi 

desbloqueada. A temperatura da placa permanece a 50 °C até que a tampa seja aberta. Depois, a temperatura continua a decrescer até chegar 

aos 20 °C (em menos de 5 minutos). Pode dar-se início a um novo processo de migração. 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante todos os passos da migração. 

II. PREPARAÇÃO DAS SEQUÊNCIAS DE TRATAMENTO DO GEL 

1. Abrir a tampa. 

2. Retirar o aplicador e deitá-lo fora. 

3. Levantar os suportes, retirar as tiras de tampão pegando-lhes pelas suas extremidades de plástico e deitá-las fora. 

4. Retirar o gel para tratamento posterior. 

5. Depois de cada utilização, limpar os eléctrodos e a placa de migração com um pano macio e húmido. 

6. Colocar o gel no suporte da câmara de coloração (gel virado para cima) da seguinte maneira (Fig. 5): 

- Abrir o suporte. 

- Colocá-lo na bancada. 

- Encaixar o gel nas ranhuras existentes. 

- Fechar o suporte. 

- Verificar se o gel está bem encaixado. 

7. Colocar o suporte do gel na câmara de coloração. 

IMPORTANTE: Antes de dar início ao programa de coloração do gel, verificar o seguinte: 

- se o frasco do corante está cheio com 300 ml de solução corante ; 

- se o frasco de descorante contem pelo menos 1 litro de solução descorante ; 

- se o frasco de despejo está vazio. 

Para seleccionar os canais de entrada dos reagentes: consultar a informação indicada no ecrã do aparelho (premir a tecla: “VER CANAIS”). 

IMPORTANTE: Não esquecer de tapar os canais não utilizados. 

8. Seleccionar o programa de coloração “HR ACID VIOLET” ou “HR AMIDO” no menu do aparelho. Iniciar a operação premindo a tecla “START” 

(flecha verde no lado direito do teclado). 

Durante as sequências de coloração, descoloração e secagem o sistema permanece fechado. Após arrefecimento da câmara, ouve-se um 

sinal sonoro e o sistema desbloqueia (a ventilação mantém-se até que se retire o gel). 

III. FINALIZAÇÃO DO TRATAMENTO DO GEL 

1. Retirar o suporte da câmara, abrir e remover o gel seco. 

NOTA: Caso se observem manchas azuis residuais no gel após coloração / descoloração, pode-se realizar uma etapa de lavagem 

suplementar com o programa " LAV. ISOENZ/GEL ", que permite eliminar ou atenuar grandemente as manchas (em termos de intensidade) 

antes da leitura com o densitómetro / scanner. 

2. Se necessário, limpar a parte de trás (suporte plástico) do gel seco com um papel macio e húmido. 

3. Para análise quantitativa dos soros (coloração com violeta ácido ou negro de amido), ler no densitómetro a 570 nm ou com filtro amarelo. 

RESULTADOS 

Controlo de qualidade 

Em cada série de amostras é aconselhável incluir uma amostra normal ou uma amostra de controlo (Soro de controlo SEBIA, ref. n° 4785). 

Valores (Análise quantitativa) 

A leitura a 570 nm por densitómetria permite definir as concentrações relativas (percentagens) de cada fracção. 

- 53 -


Os valores normais (média mais 2 desvios padrões) para cada fracção no HYDRAGEL 7/15 HR, foram estabelecidos a partir de uma população de 

225 adultos (homens e mulheres) saudáveis: 

FRACÇÂO HYRYS PHORESIS Albumina 56,2 – 69,0 57,5 – 67,9 Alfa-1-globulinas 1,2 – 3,2 1,0 – 3,8 Alfa-2-globulinas 7,8 – 13,4 7,2 – 12,8 Beta globulinas 7,4 – 13,4 7,6 – 13,6 

| Gama globulinas | 9,8 – 18,6 | 10,3 – 18,3 | 

É recomendado que cada laboratório estabeleça os seus próprios valores normais 

Interpretação 

O princípio de interpretação é simples. 

PROTEÍNAS SÉRICAS 

A interpretação é feita por comparação da electroforese da amostra em estudo com a da amostra de referência. No caso de haver uma fracção que 

esteja aumentada, diminuída ou que não apareça normalmente, é necessário confirmar as alterações por meio de outras técnicas, tais como a 

quantificação das proteínas específicas, a imunoelectroforese ou a imunofixação. 

Apenas cerca de 15 entre as numerosas proteínas do soro existem em quantidade suficiente para poderem ser visualizadas nos geles de alta 

resolução (HR). A vantagem do HYDRAGEL 7/15 HR é a sua grande sensibilidade na zona catódica, o que permite a detecção de fracas bandas 

monoclonais ou oligoclonais (especialmente no líquido céfalo-raquidiano ou outros líquidos biológicos). A interpretação é essencialmente qualitativa. 

PROTEÍNAS NO LIQUIDO CÉFALO-RAQUIDIANO 

Qualquer banda adicional detectada na zona gama do LCR, sem que haja uma fracção correspondente no soro, deve ser confirmada por uma técnica 

de imunofixação (HYDRAGEL 3/6 CSF, ou kits de imunofixação da SEBIA, HYDRAGEL 1/2/4/9 IF), de forma a caracterizar a síntese intratecal. A 

confirmação imunológica é necessária, uma vez que é possível detectar outras bandas na zona gama que não as das imunoglobulinas (fracção tau, 

anidrase carbónica, post gama ou CRP, por exemplo). 

NOTA: A interpretação é estritamente comparativa. Assim, é INDESPENSÁVEL: 

- Analisar os fluídos biológicos (LCR/soro) colhidos ao mesmo tempo e sem qualquer tratamento que possa modificar as concentrações das 

imunoglobulinas no soro. 

- Aplicar quantidades idênticas de proteínas ou de imunoglobulinas nas duas amostras. Para isso é necessário executar uma quantificação prévia 

precisa. 

O liquido céfalo-raquidiano (LCR) é um líquido biológico com uma baixa concentração de proteínas. A quantidade de proteínas num LCR normal é 

cerca de 0,3 g/l ± 0,15. A maioria das proteínas do LCR provêm do soro, de onde são filtradas e transportadas através do sangue - barreira 

hematoencefálica. Para análise em geles de HYDRAGEL 7/15 HR, o LCR tem de ser concentrado até cerca de 10 g/l. 

Um perfil eletroforético de LCR normal tem as seguintes bandas: 

• Préalbumina ou transtirretina, a fracção mais rápida ; 

• Albumina, que representa cerca de 75 % do total de proteínas ; 

• Zona alfa-1, composta principalmente por antitripsina alfa-1 ; 

• Alfa lipoproteína ; 

• Zona alfa-2, que contém principalmente proteínas de elevado peso molecular ; consequentemente muito fraca, já que as proteínas não conseguem 

passar através do sangue - barreira hematoencefálica ; 

• Fracção beta ; contendo transferrina ; 

• Zona beta-2, contendo principalmente transferrina “específica do LCR”, a fracção tau, que é uma forma de transferrina deficiente em carbohidratos 

(ácido siálico) ; 

• Zona gama, que contem essencialmente Ig G e, por vezes, Ig A e Ig M. 

Muitos estudos mostraram um aumento das imunoglobulinas devido a síntese das mesmas no Sistema Nervoso Central (SNC). A estimulação 

antigénica da produção destas Ig G não foi ainda explicada. Algumas hipóteses foram propostas, tais como as infecções virais e as reacções 

autoimunes. 

Para além do caso da esclerose múltipla, pode ainda ser detectado um aumento das Ig G na doença infantil da desmielinização, na panencefalite 

esclerosante sub-aguda e ainda durante outras doenças inflamatórias ou infecciosas. 

A esclerose múltipla é detectada por bandas monoclonais múltiplas, que mostram um aspecto oligoclonal das gamaglobulinas. Estas anomalias 

surgem muito cedo, no início do desenvolvimento da doença. A intensidade das diferentes bandas pode ir de muito ténue a muito forte. 

O aspecto oligoclonal foi também detectado durante outras alterações do SNC (doenças infecciosas, inflamatórias ou não inflamatórias). Foram 

detectadas bandas múltiplas durante a panencefalite esclerosante, a neurosífilis, a encefalite viral, a meningoencefalite e as meningites bacterianas. 

Foram também encontradas, mas mais raramente, na neuropatia periférica, tumores, hidrocefalia, doenças degenerativas e doenças vasculares. 

Nenhuns destes casos deve ser considerado como falso positivo, mas como indicação de uma actividade imunológica acrescida do SNC. 

Recomenda-se que tais LCRs sejam analisados ao mesmo tempo que os soros dos doentes (com a mesma concentração de proteínas, isto é, cerca 

de 10 g/l). Em certas anomalias linfoproliferativas pode ser detectado um aspecto oligoclonal tanto no soro como no LCR. 

URINA 

A electroforese da urina é efectuada para a detecção de componentes monoclonais. 

Qualquer banda na zona gama ou qualquer aumento de uma das zonas ß, alfa-1 ou alfa-2 deverá ser confirmada por imunofixação. A utilização do 

HYDRAGEL 5 PROTEINURIE, ref. n° 4115, está mais adaptada para a caracterização das nefropatias (tubulares ou glomerulares). Testes 

complementares (doseamentos nefelométricos por exemplo) são necessários para a caracterização das nefropatias após electroforese no 

HYDRAGEL 7/15 HR. 

Atécnica de electroforese de urinas com uma coloração sensível (violeta ácido), permite obter um meio de detecção de bandas monoclonais (Ig 

monoclonais, cadeias leves livres) satisfatórios para a maioria destes casos clínicos. No caso de quadros clínicos de amilose ou síndrome de Randall 

(deposição de cadeias leves livres), é necessário para a confirmação do diagnóstico a detecção de taxas de cadeias leves. Neste caso é aconselhável 

concentrar as urinas para melhorar a sensibilidade. 

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Qualquer aspecto oligoclonal deve ser confirmado por imunofixação com a ajuda dos kits de imunofixação: 

• HYDRAGEL 1 IF SEBIA (ref. n° 4301). 

• HYDRAGEL 2/4 IF SEBIA (ref. n° 4302, 4304, 4308). 

• HYDRAGEL 9 IF SEBIA (ref. n° 4309). 

• HYDRAGEL 3/6 CSF SEBIA (ref. n° 4350, 4351). 

• HYDRAGEL 1 BENCE JONES (ref. n° 4321). 

• HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES (ref. n° 4322, 4324). 

Interferências e Limitações 

Amostras congeladas podem originar ligeiras marcas no ponto de aplicação, devido à desnaturação das proteínas ou lipoproteínas. 

Não utilize amostras hemolizadas ou de plasma. 

De acordo com os princípios analíticos das técnicas actuais (princípios de electroforese de zona, resolução e sensibilidade), não pode ser dada 

qualquer garantia quanto à detecção total de todos os compostos monoclonais. 

Assistência técnica 

Em caso de maus resultados contactar os serviços técnicos do fornecedor ainda que tenham sido seguidas, escrupulosamente, as instruções para 

a preparação e armazenamento dos reagentes, assim como as instruções de utilização da técnica. 

Estão disponíveis nos Serviços Técnicos da SEBIA fichas de dados de segurança dos diversos reagentes do kit, bem como informação relativa à 

eliminação dos desperdícios. 

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO 

Todas as amostras foram interpretadas visualmente. 

Análise qualitativa 

Os resultados obtidos com o HYDRAGEL 7/15 HR em análise qualitativa indicam uma boa repetibilidade e reproductibilidade do kit HYDRAGEL 

7/15 HR em relação a todos os aspectos testados. 

Aanálise qualitativa de 116 amostras de soros, urinas e LCR por electroforese no gel HYDRAGEL 7/15 HR e em outro sistema de gel de agarose 

disponível comercialmente, mostra uma correlação perfeita entre os 2 sistemas de análise para a detecção de anomalias do perfil proteíco, com uma 

sensibilidade de 100 % e uma especificidade de 100 % em relação à última técnica (calculados segundo o método recomendado (Wendling, 1986). 

A sensibilidade da técnica HYDRAGEL 7/15 HR é o limite de detecção de uma paraproteína ; nos programas "HR1" e "HR2" a sensibilidade de 

detecção foi de 100 - 300 mg/l e de uma paraproteína Bence Jones ou albumina, na ordem de 15 - 20 mg/l no programa "HR3". 

Análise quantitativa 

Os resultados para a determinação das fracções proteícas (albumina, alfa-1, alfa-2, beta e gama), as médias, desvio padrão e coeficientes de 

variação indicam uma muito boa repetibilidade e reproductibilidade da técnica HYDRAGEL 7/15 HR para a análise quantitativa de soros após 

coloração com negro de amido e violeta ácido ; o coeficiente de variação médio é de 4,0 %. 

Analisaram-se por electroforese 56 amostras, com o gel HYDRAGEL 7/15 HR com coloração de negro de amido e violeta ácido, e com outro sistema 

de gel de agarose disponível comercialmente. Os resultados quantitativos demonstram uma perfeita correlação entre os dois sistemas de análise, 

com um coeficiente de correlação médio de 0,973 e, para as gamaglobulinas, uma sensibilidade média de 87,2 % e uma especificidade média de 

93,2 % em relação à última técnica, calculadas segundo o método recomendado (Wendling, 1986). 

Os parâmetros de correlação entre os dois sistemas de gel para cada fracção são: 

HYDRAGEL 15 HR violeta ácido HYDRAGEL 15 HR negro de amido Fracção R Declive Intercepção-y Limite das % R Declive Intercepção-y Limite das % (HYDRAGEL 15 HR) (HYDRAGEL 15 HR) Albumina 0,981 0,98 1,89 36,7 – 66,1 0,985 0,96 2,35 36,1 – 67,4 Alfa-1 0,976 0,99 -0,11 1,5 – 7,5 0,982 0,97 -0,03 1,3 – 7,1 Alfa-2 0,982 0,98 -0,14 6,8 – 24,5 0,978 0,96 0,31 5,7 – 24,2 Beta 0,956 0,91 0,90 5,8 – 19,8 0,918 0,95 0,41 5,4 – 20,0 

| Gama | 0,991 | 0,99 | -0,16 | 8,3 – 40,0 | 0,990 | 0,94 | 1,05 | 7,2 – 37,5 | 

A sensibilidade da técnica HYDRAGEL 7/15 HR é idêntica ao limite de detecção de uma paraproteína após coloração com negro de amido e violeta 

ácido, na ordem de 500 mg/l. 

Atécnica HYDRAGEL 7/15 HR apresenta uma linearidade perfeita após coloração com negro de amido ou violeta ácido de uma escala de 

concentrações variáveis de albumina (58 g/l) e de gamaglobulinas (39 g/l). 

NOTA: Consoante a posição da banda monoclonal e do fundo policlonal na zona das gamaglobulinas, o limite de detecção de uma paraproteína pode 

variar. 

BIBLIOGRAFIA 








43, 2332-2346. 





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Acta, 56 : 125-126. 





35 : 1997. 





PERFIL DE MIGRAÇÃO 

+ 

Préalbumina 

Albumina 

Orosomucóide 


Haptoglobina 


ß lipoproteína 


ß2 Macroglobulina 

Fracção Tau 

α1 Antiquimotripsina 

α Lipoproteína 

Gc Globulinas 


Transferrina 

Hemopexina 

Antithrombina III 

C1 Esterase inibidor 

γ Globulinas 

G - A - M - D - E 

- 

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ANVÄNDNINGSOMRÅDE 

HYDRAGEL 7 HR och HYDRAGEL 15 HR kit är designade för multifraktionering av proteiner från humant sera eller andra biologiska vätskor, såsom 

urin eller cerebrospinalvätska (CSF), genom elektrofores på basiskt buffrade (pH 8.6) agarosgeler. Kiten används tillsammans med det halvautomatiska 

HYDRASYS instrumentet. De elektroforetiska separationerna utvärderas visuellt för abnormala proteinmönster. Densitometri kan ge 

semi-kvantitativa, relativa värden. 

Varje agarosgel är avsedd för: 

• 7 prov ; HYDRAGEL 7 HR kit, 

• 15 prov ; HYDRAGEL 15 HR kit. 

Endast för "in vitro" diagnostik. 

TESTPRINCIPER 

Elektrofores av proteiner är en väletablerad teknik som används rutinmässigt vid kliniska laboratorier för screening av serum eller andra biologiska 

vätskor för proteinabnormaliteter. Det är baserat på principen hos zonelektrofores som utförs på ett lämpligt hjälpmedium. Agaros har utvecklats till ett 

mångsidigt och användbart hjälpmedium. Även om de flesta laboratorier nöjer sig med "traditionellt" femzon-mönster hos serumproteiner, kan 

högupplösningsteknik ge ytterligare diagnostisk information. 

För HYDRAGEL 7 HR och HYDRAGEL 15 HR geler, kan proteiner separeras i ca. 10 fraktioner för serum, urin eller cerebrospinal vätska (CSF) Varje 

fraktion innehåller en eller flera proteiner. 

Sammansättningen av gelen, de elektroforetiska förhållandena och valet av infärgning ger en utmärkt upplösning och en hög känslighet, speciellt i 

gammazonen. För att tillmötesgå användarens preferenser, kan de elektroforetiska proteinsepareringarna färgas antingen med acidviolett eller 

amidosvart. De elektroforetiska separationerna utvärderas visuellt för abnormala proteinmönster. De visuella observationerna kan komplementeras 

med densitometri för att erhålla semi-kvantitativa, relativa värden för inviduella eller kombinerade proteinfraktioner. 

MEDFÖLJANDE REAGENSER OCH MATERIAL I SATSERNA : HYDRAGEL 7 HR OCH HYDRAGEL 15 HR 

OBJEKT PN 4102 PN 4122 PN 4105 PN 4125 Agaros Geler (klar att anv.) 10 geler 10 geler 10 geler 10 geler Buffrade Strips (klar att anv.) 10 förp. 2 i varje 10 förp. 2 i varje 10 förp. 2 i varje 10 förp. 2 i varje Färgspädningslösning (stamlösning) 1 rör, 60 mL 1 rör, 60 mL Amidosvart färg (stamlösning) 1 rör, 20 mL 1 rör, 20 mL Acidviolett (stamlösning) 1 rör, 75 mL 1 rör, 75 mL Applikatorer (klar att anv.) 

| 1 förp. med 10 (7 tänder) 1 förp. med 10 (15 tänder) 1 förp. med 10 (7 tänder) 1 förp. med 10 (15 tänder) Filterpapper | 1 förp m. 10 | 1 förp m. 10 | 1 förp m. 10 | 1 förp m. 10 | 

FÖR OPTIMALA RESULTAT 

Reagenser från samma kit måste användas tillsammans och enligt de instruktioner som anges på förpackningens insticksblad. 

LÄS NOGGRANNT FÖRPACKNINGENS INSTICKSBLAD 

1. AGAROSGELER 

Förberedelse 

Agaros geler är färdiga för användning. Varje gel innehåller: agaros, 0.8 g/dL ; Tris-barbital buffert pH 8.6 ± 0.1 ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Agarosgeler innehåller 0.18 % barbital. Färtär inte ! Om så sker, kontakta läkare omedelbart. 

Användning 

Hjälpmedium för proteinelektrofores. 

Lagring, stabilitet och tecken på förändring 

Förvara gelerna upprätt, i originalförpackningen och vid rumstemperatur (15 till 30 °C) eller i kyla (2 till 8 °C). (Pilen på förpackningens framsida måste 

peka uppåt). 

Undvik temperaturförändringar under förvaringen (t.ex., förvara inte gelen nära fönster eller värmekälla). Gelerna är stabila fram till angivet 

utgångsdatum på förpackningen. 

FRYS INTE GELEN. 

Släng gelen om: 

(i) kristaller eller fällning bildas på gelytan eller gelkonsistensen blir väldigt mjuk (inträffar när gelen varit fryst), 

(ii) bakteriell tillväxt eller mögeltillväxt påvisas, 

(iii) onormal mängd vätska är närvarande i påsförpckningen (som ett resultat av buffertutsöndring från gelen på grund av felaktiga 

lagringsförhållanden). 

2. BUFFRADE STRIPS 

Förberedelse 

Buffrade strips är färdiga att använda. Varje innehåller: Tris-barbital buffert pH 8.7 ± 0.2 ; natriumsyra ; tillsatser, ofarliga vid använda koncentrationer, 

men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Bufferten i stripsen innehåller 0.55 % barbital och 0.30 % natriumazid. Förtär inte, svälj inte ! Mycket giftigt ! Kontakta läkare 

omedelbart ! Vid avyttring, undvik kontakt med syra, bly eller koppar, då dessa kan bilda explosiva eller giftiga föreningar med natriumsyra 

(syra). 

Användning 

Buffrade strips fungerar som en elektroforetisk buffertreservoar och säkerställer kontakt mellan gelen och elektroderna. 

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SEBIA INSTRUKTIONER - Svenska



Förvara stripsen vid rumstemperatur eller i kyla. De är stabila fram till angivet utgångsdatum på förpackningen. Förvaras ej i kylskåp. 

Kasta om förpackningen är öppen eller om stripsen är uttorkade. FRYS INTE. 

3. FÄRGSPÄDNINGSLÖSNING (med PN 4105 och 4125) 

Förberedelse 

Diluent till stamfärglösning måste användas som beskrivs i paragraf " AMIDOSVART FÄRGNING ". 

Den innehåller sur lösning. 

Användning 

För preparering av Amidosvart färglösning. 


Förvara spädningslösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller flaskans etikett. 

FRYS INTE. 

Tillsätt inte Natriumacid. 

4. AMIDOSVART FÄRG (med PN 4105 och 4125) 

Förberedelse 

Amidosvart koncentratet är visköst och kan bli trögflytande. Egenskaperna hos stamlösningen påverkas ej av ökad viskositet eller löslighet. 

För att uppnå en perfekt rekonstituering av färgen, vänligen respektera nedansående procedur: 

1. Tillsätt 15 ml färgdiluent till vialen amidosvartkoncentrat. 

2. Stäng vialen omsorgsfullt. 

3. Skaka vialen kraftigt i c:a 5 sekunder. 

4. Häll lösningen i behållaren för färgprocessning. 

5. Repetera dessa steg 2 eller 3 gånger om nödvändigt. 

6. Överför återstående diluent till behållaren och fyll upp till 300 ml med destillerat eller avjoniserat vatten. 

7. Blanda innehållet i behållaren noga 5 till 10 minuter. Färglösningen är nu redo att användas. 

NOTERA: En icke komplett reconstituerad färglösning kan leda till en undervärdering av albuminfraktionen (lågt procenttal eller vita hål i fraktionen). 

Efter spädning innehåller arbetsfärglösningen : sur lösning pH ≈ 2 ; amidosvart, 0.4 g/dL ; etylen-glykol, 6.7 % ; tillsatser, ofarliga vid använda 


VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För infärgning av geler vid elektroforetisk proteinseparering. 

VIKTIGT : Färglösning är avsedd för färgning av 10 geler. Byt färg efter 10 färgningssteg. 


Lagra både stam- och bruks- lösningar vid rumstemperatur eller i kylskåp i väl tillslutna behållare för att förhindra avdunstning. Stamfärglösningen är 

hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskans etikett. Brukslösning är hållbar i 1 månad. 

Förvara inte arbetsfärglösningen i närheten av en värmekälla. 

5. ACIDVIOLETT (med PN 4102 och 4122) 

Förberedelse 

Flaskan med stamfärglösningen skall spädas upp till 300 mL med destillerat eller avjonat vatten. 

Efter spädning, innehåller arbetslösningen : sur lösning pH ≈ 2 ; acidviolett, 0.2 g/dL ; etylen-glykol, 3.25 % ; tillsatser, ofarliga vid använda 


VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För infärgning av geler vid elektroforetisk proteinseparering. 


Lagra både stam- och bruks-lösning vid rumstemperatur eller i kylskåp i stängda behållare för att förhindra avdunstning. Stamfärglösningen är stabil 

fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskornas etiketter. Färdigspädd färglösning är hållbar i 1 år. 

6. APPLIKATORER 

Användning 

Tillskurna applikatorer för engångsbruk. För provapplikationer. 

Förvaring 

Förvara applikatorerna på en torr plats, rumstempererat eller i kylskåp. 

7. FILTERPAPPER 

Användning 

Tunnt tillskurna och absorberande pappersbitar för engångsbruk. Används för borttagning av fukt på gelytan innan provutförande. 

Förvaring 

Förvara de tunna filterpappren på ett torrt ställe i rumstemperatur eller i kylskåp. 

ERFORDERLIGA REAGENSER 

1. SALTLÖSNING 

Förberedelse 

Gör 0.15 M (0.9 g/dL) fysiologisk NaCl lösning i destillerat eller avjoniserat vatten. 

Användning 

För provspädning. 

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Lagra vid rumstemperatur eller i kylskåp. Avyttra efter 3 månader om lösningen ändrar utseende, t.ex., blir grumlig på grund av mikrobiell 

kontaminering. För längre förvaringstid, tillsätt natriumsyra, 0.1 g/dL. 

2. AVFÄRGNINGSLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska med stamlösning av (SEBIA, PN 4540, 10 flaskor 100 mL i varje) skall spädas upp till 100 liter med destillerat eller avjoniserat vatten. Det 

är lämpligt att endast späda 5 mL av stamlösningen till 5 liter, volymen hos behållaren för avfärgningslösning. Efter spädning innehåller den färdiga 

avfärgningslösningen: citronsyra, 0.05 g/dL. 

Användning 

För avfärgning, vilket innebär borttagning av överflödig färg samt bakgrundsfärg från gelerna samt för avsköljning av färgfacket efter rengöring med 

tvättlösningen. 

För att neutralisera den sura avfärgningslösningen, häll 15 mL av en 50 % Natriumhydroxidlösning, in i den tomma avfallsbehållaren. 


Lagra stamlösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är stabil till angivet utgångsdatum på avfärgningslösningens förpackning eller på 

flasketiketterna. Brukslösningen är hållbar i en vecka under förutsättning att den förvaras i en stängd flaska vid rumstemperatur. Tillsätt ej natriumazid. 

Kassera den färdigspädda avfärgningslösningen om den förändras i utseende t.ex., blir grumlig p.g.a. mikrobiell kontaminering 

För att förhindra mikrobiell tillväxt i den spädda avfärgningslösningen (vid lagring mer än 1 vecka) tillsätt 5 µl/dL av ProClin 300. 

Bruksavfärgningslösning tillsatt med ProClin är hållbar i stängd flaska, till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på avfärgninglösningens 

flasketiketter, förvarad vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

3. HYDRASYS TVÄTTLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska av stamlösning av (SEBIA PN 4541, 10 flaskor, 80 mL i varje) skall spädas upp till 5 liter med destillerat eller avjoniserat vatten. Efter 

spädning innehåller den färdiga tvättlösningen: alkalisk buffert pH 8.8. ± 0.3 ; natriumacid. 

VARNING: Stamlösningen innehåller 0,625 % natrieumacid. Farlig att förtära, kontakta läkare omedelbart. Natriumacid kan leda till bildning 

av explosiva eller giftiga ämnen vid kontakt med syror, bly eller koppar. Spola alltid med en stor mängd vatten efter det att lösningen hällts 

ut. 

Användning 

Lösningen används för rengöring av HYDRASYS färgfack. Använd regelbundet t.ex. om instrumentet används dagligen, tvätta färgfacket varje vecka. 

Se förpackningens insticksblad. 


Lagra stam- och bruks- tvättlösningen i stängda behållare vid rumstemperatur eller i kylskåp. Lösningarna är stabila fram tillangivet utgångsdatum på 

tvättlösningflaskornas etiketter. 

Släng den färdigspädda tvättlösningen om den förändras i utseende, t.ex. blir grumlig vid mikrobiell kontaminering. 

4. FLUIDIL, SPÄDNINGSVÄTSKA 

Förberedelse 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 mL) är färdig för användning. 

Användning 

För spädning av viskösa eller grumliga prov, t.ex. serum som innehåller kryoglobulin eller kryogel. 


Förvara vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är stabil tillangivet utgångsdatum på Fluidilflaskans etikett. 

Fluidil måste vara fri från fällning. 

UTRUSTNING OCH NÖDVÄNDIGA TILLBEHÖR 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 eller PN 1211. 

2. Mikropipett,manuell eller automatisk, som t.ex. HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ett alternativt sätt att ladda provapplikatorerna. 

3. Fuktkammare, PN 1270, kammare levererad med HYDRASYS. 

4. Behållarsats levererad med HYDRASYS. 

5. Gelhållare för halva geler SEBIA, PN 10043110. 

6. Pipetter: 10 µl och 200 µl. 

7. Densitometer / scanner kapabel att scanna 82 x 51 mm eller 82 x 102 mm gelplattor vid 570 nm eller med ett gult filter : HYRYS SEBIA, DVSE 

SEBIA eller PHORESIS mjukvara anpassat för en flat-bed scanner. Se tillverkarens instruktioner för åtgärder och kalibreringsrutiner. 

8. Kontrollmaterial, som t.ex. "Control Serum"/kontrollserum, SEBIA PN 4785. 

PROV FÖR ANALYS 

Prov för kvalitativ analys på HYDRAGEL 7/15 HR kan vara serum, urin eller cerebrospinalvätska (CSF). 

Serumproteiner kan även kvantifieras efter färgning med acidviolet eller amidosvart. 

Provinsamling och lagring 

Färska prov rekommenderas för analys. Prov måste insamlas enligt de etablerade rutiner som används vid kliniska laboratorier. 

Vid behov, lagra proven vid 2 till 8 °C upp till en vecka. Prov som förvarats i kylskåp är hållbara minst 1 månad. 

Frysning av serum och CSF prover med natriumazid, 0.02 g/dL ökar lagringsstabiliteten. 

Frysning av urinprover med HEPES 0.1 M (pH 6.75) och natriumazid, 0.02 g/dL ökar lagringsstabiliteten. 

Tinade prover kan ge lätta appliceringsmärken på grund av protein- eller lipoproteindenaturering. 

VAR FÖRSIKTIG: Använd inte borsyra som konserveringsmedel. 

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Provförberedelse 

1. Provförberedelse för kvalitativ analys (med acidviolett infärgning) 

Proven prepareras på samma sätt för färgning med antingen acidviolett eller amidosvart färg, om inte annat har angivits. 

Serum 

Använd outspädda serumprov. Efter lagring vid 2 to 8 °C eller efter frysning, kan vissa sera (speciellt de som innehåller kryoglobulin eller kryogel) 

bli viskösa eller utveckla grumlighet. Sådana sera kan ge appliceringsproblem på grund av att diffusionen genom tänderna i provapplikatorn 

förhindras. I sådant fall, tillsätt 25 µl Fluidil till 75 µl serum och vortexa i 15 sekunder. Följ därefter normalt förfaringssätt. 

CSF or serum/CSF pairs 

Använd prov med en total proteinkoncentration på ca.1.0 g/dL. 

VIKTIGT : Serum och CSF provpar måste justeras så de har identiska totala proteinkoncentrationer. 

Urinprov 

Analys genomförs på okoncentrerat urin. Krävs högre känslighet utförs provet på koncentrerat urin. Band detekteras när proteinkoncentrationen 

per band är ungefär 2 mg/dL. 

- Okoncentrerade urinprov : Använd ospätt urin. 

- Koncentrerade urinprov : Analys utförs på prov som tidigare koncentrerats till en total proteinkoncentration på ungefär 0.5 g/dL. 

VIKTIGT: En del urinprover innehåller hög saltkoncentration. Detta kan ge upphov till geldeformering under migrering och som en konsekvens en 

störning av migrationsprofilerna. Om en sådan störning gör tolkningen felaktig, måste urinprovet dialyseras för bortagning av salterna. 

NOTERA : Diffusion av urinprover in i applikatorspetsarna kan förhindras när urinen (ren eller koncentrerad) är grumlig. Det rekommenderas att 

avlägsna partiklar med centrifugering (t.ex. 10 minuter vid 3,000 rpm) eller filtrering (t.ex., 0.45 µm filter för sterilfiltrering). 

2. Serum förberedelse för semi-kvantitativ analys (med amidosvart eller acidviolett och programmet 7/15 HR1) 

Amidosvart färgning 

Använd outspädda serumprov. 

Acidviolett färgning 

Använd serumprov som tidigare spätts 4 gånger (1 vol./3 vol.) i saltlösning. Följ därefter normalt förfaringssätt. 

Prov att undvika 

Använd inte hemolyserade serumprov. Hemolys ökar alpha-2 och betazoner. 

Undvik plasmaprov. Fibrinogen ger ett band i närheten av appliceringspunkten som kan tas för monoklonalt immunoglobulin. 

FÖRFARINGSSÄTT 

HYDRASYS systemet är ett halvautomatiskt multi-parameter instrument. De automatiska stegen inkluderar bearbetning av HYDRAGEL agarosgeler 

i följande ordning: provapplicering, elektroforetisk migrering, torkning, färgning, avfärgning och slutlig torkning. De manuella stegen inkluderar 

hantering av prov och geler samt att förbereda instrumentet för arbete. 

LÄS NOGGRANNT HYDRASYS BRUKSANVISNING. 

I. MIGRERING 

1. Starta HYDRASYS instrumentet. 

2. Placera en applikator på en slät yta med brunnarnas nummer 1-15 i position vä till höger och med rätt sida uppåt (Fig. 1). 

- Applicera 10 µl prov i varje brunn. Ladda varje applikator inom 2 minuter. 

- Placera applikatorn i fuktkammaren med tänderna uppåt [hantera den med hjälp av tändernas skyddsram]. Låt proverna diffundera in i 

tänderna i 5 minuter efter sista provappliceringen. För senare användning (upp till 8 timmar), förvara fuktkammaren i kylskåp. 

Se bruksanvisning för fuktkammaren. 

3. Öppna luckan till Migrationsmodulen, och lyft upp elektrod- och applikatorhållaren. 

VARNING: Stäng aldrig luckan när hållaren är i höjt läge! 

4. Välj migrationsprogram på instrumentmenyn (tangentbordets vänstra sida). 

- "7/15 HR1" migrations program : för outspätt och utspätt serum på HYDRAGEL 7 HR och HYDRAGEL 15 HR, 

- "7/15 HR2" migrations program : För spätt serum, koncentrerad CSF och koncentrerad urin på HYDRAGEL 7 HR och HYDRAGEL 15 HR, 

- "7/15 HR3" migrations program : För okoncentrerad urin på HYDRAGEL 7 HR and HYDRAGEL 15 HR. 

5. Ta ur de buffrade stripsen ur förpackningen ; ta dem i plaständarna. Sätt de hålstansade ändarna hos stripsens plaststöd till pinnarna hos 

elektrodbäraren ; stripsens plaststöd måste vara vända mot elektrodbäraren (Fig. 2). 

6. Ta ut HYDRAGEL plattan. 

- Rulla snabbt och jämt med ett tunt filterpapper på gelytan för bortagning av överflödig vätska. Ta direkt bort pappret. 

VARNING: För att undvika uttorkning : låt inte filterpappret vara i kontakt med gelen under längre tid. 

- Pipettera120 µl destillerat eller avjoniserat vatten för HYDRAGEL 7 HR eller 200 µl för HYDRAGEL 15 HR på den nedre tredjedelen från 

främre upphöjda kanten på den inritade ramen på migreringsplattan i migrationsmodulen. 

- Placera gelplattan (gelsidan uppåt) med kanterna mot stoppet i botten på den tryckta ramen (Fig. 3). 

- Böj gelen och släpp den försiktigt ned i vattendroppen (Fig. 3). Förvissa dig om att inga luftbubblor finns kvar, att vattnet fördelar sig under 

hela gelplattan och att gelen är i linje med den tryckta ramen. 

7. Sänk / tryck ned bägge hållarna. I detta läge berör inte de buffrade stripsen gelen.TRYCK INTE HÅLLAREN HELT NED. 

8. Avlägsna applikatorn från fuktkammaren. Håll i den skyddande ramen. 

- Avlägsna applikatorns tandskyddsram. 

- Placera applikatorn i position nummer 5 på hållaren. 

VIKTIGT: Det tryckta numret på applikatorn måste vara vänt mot operatören (Fig. 4). 

9. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

10. Starta proceduren omedelbart genom att trycka ned den gröna pilen "START" på den vänstra sidan av tangentbordet. 

VIKTIGT: Förvissa dig om att ventilationsintaget på instrumentets högra sida inte är blockerat. 

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MIGRATION – AUTOMATISERADE STEG - BESKRIVNING 

• De två hållarna sänker sig så att de buffrade stripsen och applikatorerna får kontakt med gelytan. 

• Provapplikatorn höjer sig. 

• "7/15 HR1" and "7 /15 HR2" migrationsprogram : Migration utförs vid 255 V konstant strömstyrka, för HYDRAGEL 7 HR och HYDRAGEL 15 HR, 

vid 20 °C, kontrollerat av Peltiereffekten, tills 75 Vh har ackumulerats, under ca. 18 minuter. 

• "7/15 HR3" migrationsprogram : Migration utförs vid 255 V konstant strömstyrka, gällande för HYDRAGEL 7 HR och HYDRAGEL 15 HR, vid 20 °C, 

kontrollerat av Peltiereffekten, tills 40 Vh har ackumulerats, under ca. 10 minuter. 

• Elektrodhållaren höjer sig för koppla ur elektroderna. 

• Kontrollplattans temperatur ökar till 60 °C under 9 minuter för att torka gelen. 

• Kontrollplattan kyls ner ; när 50 °C uppnåtts, en ljudsignal hörs och luckan till migrationsmodulen öppnas. Plattans temperatur hålls vid 50 °C tills 

luckan öppnas. Därefter sjunker temperaturen ner till 20 °C (under 5 minuter) Därefter kan en ny migrationskörning startas. 

NOTERA: Locket till migrationsmodulen förblir stängt under alla migrationsstegen. 

II. GELBEARBETNING 

1. Öppna locket. 

2. Avlägsna applikatorn och släng. 

3. Lyft båda hållarna, ta tag i plastsidan hos de buffrade stripsen och avlägsna dem. 

4. Avlägsna den torkade gelfilmen för vidare bearbetning. 

5. Efter varje användning, torka av elektroderna och temperaturkontrollplattan med en fuktad mjuk pappersnäsduk. 

6. Öppna Gelhållaren. Lägg ned den torkade gelen i rätt läge (med gelsidan vänd uppåt). Lägg den i fördjupningarna i de två listerna och stäng 

hållaren. Förvissa dig om att filmen är korrekt placerad inuti hållaren (Fig. 5). 

7. Placera gelhållaren i modulen för gelbearbetning/färgning. 

VIKTIGT: Innan start av gelbearbetning / färgningsprogram, kontrollera följande: 

- avfärgningsbehållaren är fylld med 300 mL of färgningslösning ; 

- behållaren för avfärgning innehåller minst 1 liter avfärgningslösning ; 

- avfallsbehållaren är tom. 

För reagenslinjeförbindelse: Hänvisas till visad information på instrumentets skärm (välj tangent: "REAGENT LINES"). 

VIKTIGT: Glöm inte att spärra oanvända linjer. 

8. Välj "HR ACID VIOLET" eller "HR AMIDO" färgningsprogram på instrumentmenyn och starta körningen genom att trycka på knappen "START" 

(grön pil på tangentbordets högra sida). 

Under färgning, avfärgning och torkningssteg, förblir facket låst. 

Efter kylningssteget, hörs en ljudsignal när facket öppnas (ventilation upprätthålls tills gelhållaren avlägsnas). 

III. SLUTFÖRANDE AV GELBEARBETNING 

1. Avlägsna gelhållaren från facket, öppna och avlägsna den torkade gelen. 

NOTERA : Efter gelfärgning/avfärgning och innan densitometri/scanning, kan en gel genomgå ett ytterligare tvättsteg, om nödvändigt, för att 

ytterligare klargöra gelbakgrunden och avlägsna färgrester som kan framträda som blåa fläckar. Tvätta gelen med användning av programmet 

"WASH ISOENZ/GEL". 

2. Om nödvändigt, rengör den torra filmens baksida (stödsidan av plast) med ett fuktat mjukt papper. 

3. Tolka separationerna visuellt för abnormala mönster. Visuella observationer kan kompletteras densitometri vid 570 nm eller med ett gult filter 

för att erhålla semi-kvantitativa, relativa värden gällande för inviduella eller kombinerade proteinfraktioner. 

RESULTAT 

Kvalitetskontroll 

Det rekommenderas att inkludera ett normalt prov eller kontrollserum ("Control serum", SEBIA, PN 4785) i varje provkörning. 

Värden (kvantitativ analys) 

Scanning med densitometer (vid 570 nm) på färgade elektroforetogram ger relativa koncentrationer (i procent) för invididuella proteinzoner. 

Normalvärden (medel ± 2 SD) för individuella betydande elektroforetiska serumproteinzoner hos HYDRAGEL 7/15 HR geler har fastställts för en frisk 

population på 225 vuxna (män och kvinnor): 

FRAKTION HYRYS PHORESIS Albumin 56.2 – 69.0 57.5 – 67.9 Alfa-1 globuliner 1.2 – 3.2 1.0 – 3.8 Alfa-2 globuliner 7.8 – 13.4 7.2 – 12.8 Beta globuliner 7.4 – 13.4 7.6 – 13.6 

| Gamma globuliner | 9.8 – 18.6 | 10.3 – 18.3 | 

Det rekommenderas att varje laboratorium fastställer sina egna normalvärden. 

Tolkning 

Tolkningen är kvalitativ. För tolkningshjälp se BIBLIOGRAFI. 

- 61 -


SERUMPROTEINER 

Tolkningen görs genom jämförelse av elektroforetogram för kliniska prov och en normalkontroll. Ifall av en ökad, minskad eller en ytterligare fraktion, 

är det nödvändigt att bekräfta observerade ändringar med hjälp av andra tester som t.ex. kvantifiering av specifika proteiner, immunoelektrofores, eller 

immunofixering. 

Bland de många plasmaproteinerna existerar endast ungefär femton i tillräcklig kvantitet för att bidraga till färgintensiteten hos banden som observeras 

hos HYDRAGEL 7/15 HR geler. Värdet hos HYDRAGEL 7/15 HR geler är primärt hos detektering av svaga monoklonala och oligoklonala band. 

CEREBROSPINALVÄTSKEPROTEINER 

Cerebrospinal vätska (CSF) är en biologisk vätska med låg proteinkoncentration ; hos en normal CSF, ligger den på 30 ± 15 mg/dL. Huvuddelen av 

CSF proteiner härrör från serum, där de filtrerats och transporterats genom blodet - CSF barriär. För analys på HYDRAGEL 7/15 HR geler, måste CSF 

koncentreras upp till 1 g/dL. 

Ett normalt CSF mönster uppvisar följande zonordning : 

• Prealbumin, eller transthyretin, den snabbaste fraktionen ; 

• Albumin, gängse fraktion representerar ca. 75 % av totalt antal proteiner ; 

• Alpha 1 zon, innehåller huvudsakligen alpha-1 antitrypsin ; 

• Alpha 2 zon, innehåller huvudsakligen proteiner med hög molekylärvikt ; de är vanligtvis mycket svaga då dessa proteiner inte kan passera genom 

blodet - CSF barriär ; 

• Beta fraktion, innehåller transferrin ; 

• Beta-2 zon, innehåller primärt kolhydratlöst (sialinsyra) "CSF specifikt" transferrin också kallat Tau protein ; 

• Gamma zon, innehåller i huvudsak Ig G, och ibland Ig A och Ig M. 

En ökning hos immunoglobuliner syntetiserade inom centrala nervsystemet (intrathecal syntes av Ig’s) har rapporterats i samband med flera sjukdomar 

hos centrala nervsystemet inklusive demyelinering, inflammatoriska och infektiösa sjukdomar och autoimmuna reaktioner. 

Den intrathecala Ig CSF syntesen återfinns ofta associerat med reducerad heterogenitet hos Ig:na visar sig som "oligoclonal bandning" urskiljt i 

elektroforetiska band vid hög upplösning. 

Ett distikt karaktärsdrag hos intrathecal Ig CSF syntes är närvaron av oligoklonala Ig band hos CSF och frånvaron av dessa band i serumet. 

Därför är det nödvändigt: 

• Att analysera CSF & serum i par som tagits samtidigt från samma patient och vid samma tidpunkt medan man exkluderat behandling som kunnat 

påverkat provets koncentration av immunoglobuliner : 

• Att använda identisk proteinmängd (ca.1 g/dL) för var och ett av de två proven. 

• Att utföra immunofixeringsanalys hos varje abnormalt band som detekteras i gammazonen hos CSF, utan någon korresponderande fraktion hos 

serumet. 

Den immunologiska bekräftelsen att ett sådan CSF band är av Ig-karaktär är nödvändigt eftersom andra band än immunoglobuliner kan återfinnas i 

gammazonen (t.ex. tau fraktionen, karbanhydras, post gamma, eller CRP). De senare banden har inte samma diagnostiska signifikans som " äkta " 

oligoklonala band av immunoglobintypen. 

URIN 

Urinelektrofores görs för att upptäcka monoklonala komponenter och andra urinproteiner. 

HYDRAGEL 7/15 HR används som ett screeningtest för proteiner i urinen. Testet ger möjlighet att upptäcka monoklonala komponenter (de måste 

bekräftas och identifieras med hjälp av immunofixering), samt detektering av proteiner av tubulärt, glomerulärt eller blandat ursprung (vilken måste 

karakteriseras med lämpliga metoder, som t.ex. molekulär separering i SDS buffert, nefelometrisk immunoanalys eller immunofixation med passande 

antikroppar). 

KONFIRMATORISKA TESTER 

När ökade, minskade eller ytterligare fraktioner observeras vid jämförelse med ett normalt mönster, kan tester som styrker resultaten behövas, som 

t.ex. identifiering och kvantifiering av specifika proteiner med hjälp av immunokemiska metoder. SEBIA tillhandahåller ett antal specialiserade tester 

för användning tillsammans med HYDRASYS systemet, t.ex. : 

• monoklonala proteiner i serum och urin : 

HYDRAGEL 1 IF SEBIA (PN 4301), HYDRAGEL 2 IF SEBIA (PN 4302), HYDRAGEL 4 IF SEBIA (PN 4304 och 4308) och HYDRAGEL 9 IF SEBIA 

(PN 4309), 

• oligoklonala (Ig’s) band i CSF : 

HYDRAGEL 3 CSF SEBIA (PN 4350) och HYDRAGEL 6 CSF SEBIA (PN 4351), 

• Bence Jones proteiner i urin : 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES SEBIA (PN 4321), HYDRAGEL 2 BENCE JONES SEBIA (PN 4322) och HYDRAGEL 4 BENCE JONES SEBIA 

(PN 4324), 

• Karaktärisering av tubulär eller glomerulär skada (molekulär separering i SDS buffert) : 


Begränsningar 

I upptinade prover kan lätta applikationsmärken orsakas av denaturerade proteiner. 

Använd inte hemolyserade prov eller plasmaprov. 

På grund av upplösnings- och sensitivitetsbegränsningar hos zonelektrofores, är det möjligt att vissa monoklonala komponenter inte blir upptäckta 

med denna metod. 

Felsökning 

Ring leverantörens tekniska support om testet misslyckas trots att givna instruktioner följts för materialförvaring och förberedlese av test. 

Varuinformationsblad för reagenserna i kiten och information för avfallshantering finns tilgängliga hos leverantören. 

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PRESTANDADATA 

Standardmaterial, provförberedelse och tillvägagångssätt användes. Alla elektroforetogram utvärderades visuellt. 

Kvalitativ analys 

Resultat som uppnåtts med HYDRAGEL 7/15 HR geler indikerar en mycket god reproducerbarhet inom och mellan serier för alla de testade 

aspekterna och det fanns inga visuellt detekterbara skillnader mellan replikaten. 

Patologiska och normala serumprov, CSF / serum par och urinprov från 116 patienter kördes på HYDRAGEL 7/15 HR geler och på kommersiellt 

tillgängliga och jämförbara högupplösande geler. Proven preparerades som rekommenderats för respektive metod. 

Likheter/olikheter hos de elektroforetiska mönstren och närvaron av monoklonala eller oligoklonala band var basen för jämförelsen. Den visuella och 

kvalitativa jämförelsen mellan dessa två tester har baserats på antal band och deras placering. 

Resultaten för dessa två tillvägagångssätt var i överensstämmelse för alla 116 prov och förenliga med den kliniska diagnosen. 

Semi-kvantitativ analys 

För semi-kvantitativa tillämpningar, indikerar resultat som uppnåtts med HYDRAGEL 7/15 HR geler en mycket god reproducerbarhet inom och mellan 

serier för alla testade aspekter och det fanns inga visuellt detekterbara skillnader mellan replikaten. Medel CV var 4.0 %. 

Tillämpningar för HYDRAGEL 7/15 HR med färgningsalternativ för acidviolett och amidosvart, jämfördes med andra kommersiellt tillgängliga 

högupplösande geler (traditionell högupplösande separation av serumproteiner och acidviolett infärgning). 

För jämförelseändamål, scannades alla elektroforetogram (gult filter) som 5-zonssepareringar. 

Kliniska serumprov (n = 56) kördes för varje procedur och relativa koncentrationer för varje fraktion jämfördes med hjälp av linjär regressionsanalys,där 

0.973 var medel korrelationskoefficient för alla proteinfraktioner. Detta gällde för båda färgningslösningarna. 

HYDRAGEL 15 HR (metylviolett) HYDRAGEL 15 HR (amidoblack) FRAKTION Koefficient Kurva y-brytpunkt Område (%) Koefficient Kurva y-brytpunkt Område (%) korrelation (HYDRAGEL 15 HR) korrelation (HYDRAGEL 15 HR) Albumin 0.981 0.98 1.89 36.7 – 66.1 0.985 0.96 2.35 36.1 – 67.4 Alfa-1 0.976 0.99 -0.11 1.5 – 7.5 0.982 0.97 -0.03 1.3 – 7.1 Alfa-2 0.982 0.98 -0.14 6.8 – 24.5 0.978 0.96 0.31 5.7 – 24.2 Beta 0.956 0.91 0.90 5.8 – 19.8 0.918 0.95 0.41 5.4 – 20.0 

| Gamma | 0.991 | 0.99 | -0.16 | 8.3 – 40.0 | 0.990 | 0.94 | 1.05 | 7.2 – 37.5 | 

Sensitivitet 

Ett patologiskt serum med innehåll av monoklonala komponenter (som identifierats och kvantifierats på andra sätt) blev seriellt spätt med ett normalt 

serum och de enskilda spädningarna genomgick elektrofores med hjälp av programmen "HR1" och "HR2". På samma sätt, blev ett urinprov 

innehållande albumin och Bence Jones proteiner (som identifierats och kvantifierats på andra sätt) seriellt spätt och genomgick elektrofores med hjälp 

av programmet "HR3". Sensitivteten fastställdes från den högsta seriella spädningen vilket gav ett märkbart/utskiljbart band vid färgning med 

acidviolett. För programmen "HR1" och "HR2" var detektionskänsligheten 10 - 30 mg/dL (för monoklonala G,K). För programmet "HR3", var 

detektionskänsligheten 1.5 - 2.0 mg/dL (för albumin och Bence Jones proteiner). Ungefär samma känslighet/intensitet vid infärgning observerades när 

elektrofores utfördes på ospätt serum följt av infärgning med amidosvart jämfört med elektrofores av ett serum som spätts 1/4 följt av infärgning med 

acidviolett. 

Notera: Beroende på position av monoklonal komponent och polyklonal bakgrund i gammazonen kan detektionsnivån variera. 

Linearitet 

Analyserna var linjära vid minst 5.8 g/dL albumin och 3.9 g/dL Ig G för båda färgningsprocedurerna. 

BIBLIOGRAFI 








43, 2332-2346. 









Acta, 56 : 125-126. 





35 : 1997. 





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MIGRATIONSMÖNSTER 

+ 

Pre-albumin 

Albumin 

Orosomucoïd 


Haptoglobin 

Ceruloplasmin 


C3 Complement 

ß2 Microglobulin 

Tau fraction 



Gc Globulin 

α2 Macroglobulin 

Transferrin 

Hemopexin 


C1 Inhibitor esterase 

γ Globulins 

G - A - M - D - E 

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ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

Τα κιτ HYDRAGEL 7 HR και HYDRAGEL 15 HR είναι σχεδιασµένα για την πολύ-κλασµατοποίηση των πρωτεϊνών του ανθρώπινου ορού και 

άλλων βιολογικών υγρών, όπως ούρα και εγκεφαλονωτιαίο υγρό (ENY), µε ηλεκτροφόρηση σε αλκαλική γέλη αγαρόζης (pH 8.6). Τα κιτ 

χρησιµοποιούνται µε την ηµι-αυτοµατοποιηµένη συσκευή ηλεκτροφόρησης HYDRASYS. Τα προκύπτοντα ηλεκτροφορήµατα 

αξιολογούνται οπτικά. Η πυκνοµέτρηση προσφέρει σχετική ποσοτικοποίηση των επιµέρους ζωνών. 

Κάθε gel αγαρόζης προορίζεται για την ανάλυση : 

• 7 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 7 HR, 

• 15 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 15 HR. 

Για In Vitro διαγνωστική χρήση. 

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

Η ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών είναι µια καθιερωµένη τεχνική η οποία χρησιµοποιείται καθηµερινά στα κλινικά εργαστήρια για την εξέταση 

ορού και άλλων σωµατικών υγρών. Βασίζεται στις αρχές της ηλεκτροφόρησης ζώνης πραγµατοποιούµενη σε κατάλληλο υποστηρικτικό 

µέσο. Η αγαρόζη έχει αναπτυχθεί σε ένα πολυχρηστικό και αποτελεσµατικό υποστηρικτικό µέσο. Παρότι τα περισσότερα κλινικά 

εργαστήρια αρκούνται στον «παραδοσιακό» διαχωρισµό των πρωτεϊνών του ορού σε πέντε ζώνες, οι τεχνικές υψηλής ανάλυσης µπορούν 

να παρέχουν πρόσθετες διαγνωστικές πληροφορίες. 

Στα gel HYDRAGEL 7 HR και HYDRAGEL 15 HR, οι πρωτεΐνες του ορού, των ούρων και του ΕΝΥ διαχωρίζονται σε δέκα περίπου κλάσµατα. 

Κάθε κλάσµα περιέχει µία ή δύο πρωτεΐνες. 

Η σύνθεση του gel, οι συνθήκες ηλεκτροφόρησης και η επιλογή της χρωστικής επιτρέπουν άριστη ανάλυση και υψηλή ευαισθησία 

ιδιαίτερα στη γάµµα ζώνη. Για την ικανοποίηση των αναγκών του χειριστή, τα ηλεκτροφορήµατα µπορούν να χρωστούν είτε µε όξινη ιώδη 

χρωστική είτε µε amidoblack. Τα χρωσµένα ηλεκτροφορήµατα αξιολογούνται οπτικά για τυχόν ανωµαλίες. Οι οπτικές παρατηρήσεις 

µπορούν να συµπληρωθούν µε πυκνοµέτρηση για τη σχετική ηµι-ποσοτικοποίηση µεµονωµένων ή συνδυασµών επιµέρους ζωνών. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ HYDRAGEL 7 HR ΚΑΙ HYDRAGEL 15 HR 

ΕΙ∆ΟΣ PN 4102 PN 4122 PN 4105 PN 4125 Gel αγαρόζης (έτοιµα προς χρήση) 10 gel 10 gel 10 gel 10 gel Ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος (έτοιµες προς χρ.) 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 Μέσο αραίωσης διαλύµατος χρώσης (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 60 mL 1 φιαλίδιο, 60 mL Χρωστική amidoblack (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 20 mL 1 φιαλίδιο, 20 mL Όξινη ιώδης χρωστική (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 75 mL 1 φιαλίδιο, 75 mL Εφαρµογείς (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 (7 δόντια) 

| 1 συσκ. των 10 (15 δόντια) 1 συσκ. των 10 (7 δόντια) 1 συσκ. των 10 (15 δόντια) ∆ιηθητικά χαρτιά | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 

ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιµοποιούνται πάντα µαζί και σύµφωνα µε τις οδηγίες χρήσης. 

ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ. 

1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ 

Προετοιµασία 

Τα gel αγαρόζης είναι έτοιµα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει: αγαρόζη, 0.8 g/dL, αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα tris-barbital pH 8.6 ± 0.1, 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Τα gel αγαρόζης περιέχουν 0.18 % βαρβιτάλη. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! 

Χρήση 

Μέσο για ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών. 

Φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης 

Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου (15 έως 30 °C) ή στη συντήρηση (2 έως 8 °C). (Το βέλος 

στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή 

θερµότητας. Αποφύγετε τις µεγάλες διακυµάνσεις θερµοκρασίας κατά τη φύλαξη. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τα gel όταν: 

(i) σχηµατιστούν κρύσταλλοι ή ίζηµα στην επιφάνεια του gel ή αν η υφή του gel γίνει πολύ µαλακή (όλα αυτά προκύπτουν αν το gel 

καταψυχθεί), 

(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή µούχλα, 

(iii) υπάρχει µεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα στο κουτί του gel (αποτέλεσµα της εξίδρωσης του ρυθµιστικού διαλύµατος από το 

gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης). 

2. ΤΑΙΝΙΕΣ ΜΕ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Σπογγώδεις ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα έτοιµες προς χρήση. Καθεµιά περιέχει: αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα tris-barbital pH 8.7 ± 0.2, 


ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το ρυθµιστικό διάλυµα στις ταινίες περιέχει 0.55 % βαρβιτάλη και 0.30 % αζίδιο του νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν το 

καταπιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! Όταν το πετάτε αποφύγετε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή χαλκό, καθώς µπορεί να σχηµατιστούν 

εκρηκτικές ή τοξικές ενώσεις µε το αζίδιο του νατρίου. 

Χρήση 

Οι ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα λειτουργούν ως δεξαµενή ρυθµιστικού διαλύµατος για την ηλεκτροφόρηση και εξασφαλίζουν επαφή 

µεταξύ του gel και των ηλεκτροδίων. 

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Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά



Φυλάσσετε τις ταινίες σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένουν σταθερές µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και της συσκευασίας των ταινιών. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τις ταινίες αν η συσκευασία τους έχει ανοιχθεί και οι ταινίες έχουν στεγνώσει. 

3. ΜΕΣΟ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΧΡΩΣΗΣ (µε τα PN 4105 και 4125) 


Το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής πρέπει να χρησιµοποιείται όπως περιγράφεται στην παράγραφο “ΧΡΩΣΤΙΚΗ 

AMIDOBLACK“. 

Περιέχει όξινο διάλυµα. 

Χρήση 

Για την παρασκευή του διαλύµατος χρωστικής amidoblack. 


Φυλάσσετε το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής σε θερµοκρασία δωµατίου ή στοψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου. 

4. ΧΡΩΣΤΙΚΗ AMIDOBLACK (µε τα PN 4105 και 4125) 


Η πυκνή χρωστική amidoblack είναι ένα ιξώδες διάλυµα το οποίο ενδέχεται να µετατραπεί σε γέλη. Η καταλληλότητα του πυκνού 

διαλύµατος χρωστικής δεν επηρεάζεται από την αύξηση της γλοιότητάς του ή τη στερεοποίησή του. 

Σε όλες τις περιπτώσεις, για να επιτύχετε τέλεια ανασύσταση της χρωστικής, σας συνιστούµε να ακολουθήσετε την εξής διαδικασία : 

1. Προσθέστε 15 mL του µέσου αραίωσης χρωστικής στο φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος. 

2. Κλείστε προσεκτικά το φιαλίδιο. 

3. Ανακινήστε έντονα το φιαλίδιο για περίπου 5 δευτερόλεπτα. 

4. Αδειάστε αυτό το διάλυµα στο δοχείο που προορίζεται για την επεξεργασία του διαλύµατος χρωστικής. 

5. Επαναλάβετε αυτό το βήµα δύο φορές, ή τρεις αν χρειάζεται. 

6. Αδειάστε το υπόλοιπο µέσο αραίωσης στο δοχείο και συµπληρώστε µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ έως όγκου 300 mL. 

7. Ανακινήστε καλά τα περιεχόµενα του δοχείου για 5 - 10 λεπτά. 

Το διάλυµα χρωστικής είναι έτοιµο προς χρήση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η ατελής ανασύσταση της χρωστικής θα οδηγήσει σε υποεκτίµηση του κλάσµατος της αλβουµίνης. 

Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ≈ 2, amidoblack, 0.4 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 6.7 %, 


ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για τη χρώση των gel µετά από ηλεκτροφορητικό διαχωρισµό πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυµα χρωστικής είναι σχεδιασµένο για χρώση µόνο 10 gel. Αλλάξτε το διάλυµα µετά από 10 διαδικασίες χρώσης. 


Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα χρωστικής είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας 

του κιτ και των φιαλιδίων. 

Το διάλυµα εργασίας είναι σταθερό για 1 µήνα. 

Μην αποθηκεύετε το διάλυµα χρώσης κοντά σε πηγή θερµότητας. 

5. ΟΞΙΝΗ ΙΩ∆ΗΣ ΧΡΩΣΤΙΚΗ (µε τα PN 4102 και 4122) 


Φιαλίδιο µε πυκνή όξινη ιώδη χρωστική προς αραίωση στα 300 mL µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. 

Μετά την αραίωση, το αραιωµένο διάλυµα της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ≈ 2, ιώδη χρωστική, 0.2 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 

3.25 %, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για τη χρώση των gel µετά από ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυµα χρωστικής είναι σχεδιασµένο για χρώση µόνο 10 gel. Αλλάξτε το διάλυµα µετά από 10 διαδικασίες χρώσης. 


Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και 

των φιαλιδίων της χρωστικής. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για 6 µήνες. 

6. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ 

Χρήση 

Έτοιµοι, εφαρµογείς µιας χρήσης για τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσετε τους εφαρµογείς σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

7. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΛΕΠΤΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα της υγρασίας από την επιφάνεια του gel πριν την τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

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ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ 

1. ΧΛΩΡΙΟΝΑΤΡΙΟΥΧΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Προετοιµάστε διάλυµα 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl σε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. 

Χρήση 

Για την έκπλυνση ερυθροκυττάρων και αραίωση των αιµολυµάτων. 


Φυλάσσεται σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Πετάξτε το διάλυµα µετά 3 µήνες ή αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω 

µικροβιακής επιµόλυνσης. Για µεγαλύτερη περίοδο διατήρησης προσθέστε αζίδιο του νατρίου, 0.1 g/dL. 

2. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ 


Κάθε φιαλίδιο ∆ιαλύµατος Αποχρωµατισµού (SEBIA, PN 4540, 10 φιαλίδια, 100 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 100 λίτρα απεσταγµένου 

ύδατος. Είναι ευχερές να αραιώνονται µόνο 5 mL του διαλύµατος σε 5 λίτρα, τον όγκο του περιέκτη του διαλύµατος αποχρωµατισµού. 

Μετά την αραίωση το διάλυµα αποχρωµατισµού περιέχει: κιτρικό οξύ 0.05 g/dL. 

Χρήση 

Για αποχρωµατισµό, δηλαδή αφαίρεση της περίσσειας χρωστικής από τη γέλη. 

Για καθαρισµό του τµήµατος χρώσης. 

Για την εξουδετέρωση της οξύτητας του διαλύµατος αποχρωµατισµού, προσθέστε 15 mL διαλύµατος 50 % υδροξειδίου του νατρίου, στο 

κενό δοχείο αχρήστων. 


Φυλάσσετε το διάλυµα προ της αραίωσης σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για µια εβδοµάδα σε θερµοκρασία δωµατίου σε κλειστό δοχείο. Μην προσθέτετε 

αζίδιο του νατρίου. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

Για να αποτρέψετε πολλαπλασιασµό µικροβίων στο αραιωµένο διάλυµα αποχρωµατισµού αν πρόκειται να το φυλάξετε για περισσότερο 

από µια εβδοµάδα, προσθέστε 5 µL/dL ProClin 300. 

Το διάλυµα εργασίας στο οποίο έχει προστεθεί ProClin είναι σταθερό σε κλειστό δοχείο σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

3. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΕΚΠΛΥΝΣΗΣ HYDRASYS 


Κάθε φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος έκπλυνσης HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 φιαλίδια, 80 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 5 λίτρα, 

µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Μετά την αραίωση το διάλυµα εργασίας περιέχει:αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα pH 8.8 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το πυκνό διάλυµα περιέχει 0.625 % αζίδιο του νατρίου. Μην το πίνετε! Αν το πιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό! Το 

αζίδιο του νατρίου µπορεί να οδηγήσει σε σχηµατισµό εκρηκτικών ή τοξικών ουσιών όταν έρχεται σε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή χαλκό. 

Πάντοτε ξεπλένετε µε άφθονο νερό όταν το πετάτε. 

Χρήση 

Το διάλυµα έκπλυνσης χρησιµεύει για την αποµάκρυνση των µη κακατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από τα gel. Χρησιµεύει επίσης για 

καθαρισµό του θαλάµου χρώσης του HYDRASYS. Χρησιµοποιείτε το περιοδικά, π.χ. αν το όργανο λειτουργεί καθηµερινά, πλένετε το 

θάλαµο χρώσης κάθε εβδοµάδα. 

∆είτε το φύλλο οδηγιών για οδηγίες χρήσης. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η 

οποία σηµειώνεται στις ετικέττες των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

4. FLUIDIL 


Το Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 φιαλίδιο, 5 mL) είναι έτοιµο προς χρήση. 

Χρήση 

Για τη διάλυση ιξωδών ή θολών δειγµάτων, π.χ. οροί µε κρυοσφαιρίνες. 


Φυλάσσεται σε θερµοκρασία δωµατίου. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στην ετικέτα του φιαλιδίου του 

Fluidil. 

Το Fluidil πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 ή PN 1211. 

2. Σύστηµα µικροπιπεττών, χειροκίνητο ή αυτόµατο, όπως το HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ως εναλλακτικός τρόπος φόρτωσης των 

εφαρµογέων δειγµάτων ή των εφαρµογέων αντιορών. 

3. Θάλαµος Υγρής Φύλαξης, PN 1270, παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

4. Κιτ περιεκτών παρεχόµενο µε το HYDRASYS. 

5. Στατήρας gel για µισά gel, SEBIA, PN 10043110. 

6. Πιπέττες: 10 µL και 200 µL. 

7. Πυκνόµετρο / σαρωτής µε δυνατότητα σάρωσης gel 82 x 51 mm ή 82 x 102 mm στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο, π.χ. HYRYS SEBIA, 

DVSE SEBIA ή PHORESIS. Ανατρέξτε στις οδηγίες χρήσης και βαθµονόµησης του κατασκευαστή. 

8. Υλικά ελέγχου, όπως Ορός Ελέγχου, SEBIA PN 4785. 

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∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ 

Τα δείγµατα για ποιοτική ανάλυση στο HYDRAGEL 7/15 HR µπορεί να είναι ορός, ούρα ή ΕΝΥ. 

Οι πρωτεΐνες του ορού µπορούν επίσης να ποσοτικοποιηθούν µετά από χρώση µε όξινη ιώδη χρωστική ή χρωστική amidoblack. 

Λήψη και διατήρηση δειγµάτων 

Η ανάλυση συνιστάται να γίνεται σε φρέσκα δείγµατα. Πρέπει να συλλέγονται σύµφωνα µε τις καθιερωµένες διαδικασίες κλινικής 

εργαστηριακής πρακτικής. Αν χρειάζεται, διατηρήστε τα δείγµατα στο ψυγείο στους 2 ως 8 °C για έως µια εβδοµάδα. 

Κατεψυγµένα δείγµατα ορού και ΕΝΥ µε αζίδιο του νατρίου, 0.02 g/dL, ή κατεψυγµένα δείγµατα ούρων µε HEPES 0.1 M (pH 6.75) και αζίδιο 

του νατρίου, 0.02 g/dL παρουσιάζουν αυξηµένη σταθερότητα. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αποφύγετε το βορικό οξύ ως συντηρητικό. 

Προετοιµασία των δειγµάτων 

1. Προετοιµασία των δειγµάτων για ποιοτική ανάλυση (µε χρώση µε όξινη ιώδη χρωστική) 

Τα δείγµατα παρασκευάζονται µε τον ίδιο τρόπο είτε βαφτούν µε την όξινη ιώδη χρωστική είτε µε amidoblack, εκτός αν σηµειώνεται 

διαφορετικά. 

Ορός 

Χρησιµοποιείτε µη αραιωµένα δείγµατα ορού. Μετά από ψύξη ή κατάψυξη, µερικοί οροί (ιδιαίτερα εκείνοι που περιέχουν κρυοσφαιρίνες) 

µπορεί να γίνουν ιξώδεις ή να αναπτύξουν θολερότητα. Τέτοιοι οροί µπορεί να παρουσιάσουν προβλήµατα εφαρµογής λόγω παρακώλυσης 

της διάχυσης στα δόντια του εφαρµογέα δείγµατος. Σε αυτήν την περίπτωση, προσθέστε 25 µL Fluidil σε 75 µL ορού και περιδινήστε 

(vortex) για 15 sec. Στη συνέχεια ακολουθήστε την τυπική διαδικασία. 

ΕΝΥ ή ορός / Ζεύγη ΕΝΥ 

Χρησιµοποιείτε δείγµατα µε συγκέντρωση ολικής πρωτεΐνης περίπου 1.0 g/dL. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Ζεύγη δειγµάτων ορού και ΕΝΥ πρέπει να ρυθµίζονται στην ίδια συγκέντρωση ολικής πρωτεΐνης. 

Ούρα 

Η ανάλυση γίνεται σε µη συµπυκνωµένα ούρα. Συµπυκνώστε τα ούρα αν απαιτείται µεγαλύτερη ευαισθησία. Οι ζώνες ανιχνεύονται αν η 

συγκέντρωση πρωτεΐνης ανά ζώνη είναι περίπου ≥ 2 mg/dL. 

- Μη συµπυκνωµένα ούρα : Χρησιµοποιήστε δείγµατα ούρων χωρίς επεξεργασία. 

- Συµπυκνωµένα ούρα : Η ανάλυση γίνεται σε συµπυκνωµένα ούρα σε συνολική συγκέντρωση πρωτεΐνης περίπου 0.5 g/dL. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μερικές φορές τα ούρα περιέχουν υψηλές συγκεντρώσεις αλάτων. Αυτό µπορεί να προκαλέσει παραµόρφωση του gel κατά 

την ηλεκτροφόρηση και συνεπώς αλλοίωση των προφίλ ηλεκτροφόρησης. Αν η αλλοίωση αυτή καθιστά την ερµηνεία των αποτελεσµάτων 

ανακριβή, τα ούρα πρέπει να διυλιστούν για να απαλλαγούν από τα άλατα. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η διάχυση των δειγµάτων ούρων στις υποδοχές του εφαρµογέα µπορεί να παρακωλύεται όταν τα ούρα είναι θολά. Συνιστάται 

η αποµάκρυνση των σωµατιδίων µε φυγοκέντρηση (π.χ. 10 min στις 3,000 rpm) ή διήθηση (π.χ. ηθµός 0.45 µm). 

2. Προετοιµασία του ορού για ηµιποσοτική ανάλυση (µε amidoblack ή όξινη ιώδη χρωστική και το πρόγραµµα 7/15 HR1) 

Χρώση amidoblack 

Χρησιµοποιείτε µη αραιωµένα δείγµατα ορού. 

Όξινη ιώδης χρωστική 

Χρησιµοποιείτε δείγµατα ορού αραιωµένα 4 φορές (1 vol./3 vol.) σε φυσιολογικό ορό. Στη συνέχεια ακολουθήστε την τυπική 

διαδικασία. 

∆είγµατα προς αποφυγή 

Αποφύγετε αιµολυµένα δείγµατα. Η αιµόλυση αυξάνει τις ζώνες άλφα-2 και βήτα. 

Αποφύγετε δείγµατα πλάσµατος. Το ινωδογόνο δίνει µια ζώνη στο ίχνος αναφοράς κοντά στο σηµείο εφαρµογής η οποία θα µπορούσε να 

εκληφθεί ως µονοκλωνική ανοσοσφαιρίνη. 

∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ 

Το σύστηµα HYDRASYS είναι ένα ηµι-αυτοµατοποιηµένο πολυπαραµετρικό όργανο. Τα αυτοµατοποιηµένα στάδια λειτουργίας 

περιλαµβάνουν την επεξεργασία των gel αγαρόζης HYDRAGEL µε την ακόλουθη σειρά: εφαρµογή δειγµάτων, ηλεκτροφόρηση, στέγνωµα, 

χρώση, αποχρωµατισµός και τελικό στέγνωµα. Τα χειροκίνητα στάδια περιλαµβάνουν το χειρισµό των δειγµάτων και των gel καθώς και την 

προετοιµασία του οργάνου για λειτουργία. ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙ∆ΙΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ ΤΟΥ HYDRASYS. 

I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 

1. Θέστε το HYDRASYS σε λειτουργία. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα σε µια επίπεδη επιφάνεια µε τους αριθµούς των βοθρίων στη δεξιά πλευρά (Εικ. 1). 

-Τοποθετήστε 10 µL από τα αιµολυµένα δείγµατα στα βοθρία του εφαρµογέα. Φορτώστε τον εφαρµογέα εντός 2 min. 

-Τοποθετήστε τον εφαρµογέα στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον από το πλαστικό 

προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών). 

-Αφήστε τα δείγµατα να διαχυθούν στα δόντια για 5 min µετά την τοποθέτηση του τελευταίου δείγµατος. Για ύστερη χρήση (ως 

8 ώρες), φυλάξτε όλον το θάλαµο στο ψυγείο. 

Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες. 

3. Ανοίξτε το καπάκι της Μονάδας Ηλεκτροφόρησης και σηκώστε τους φορείς των ηλεκτροδίων και του εφαρµογέα. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Ποτέ µην κλείνετε το καπάκι ενώ οι φορείς είναι σηκωµένοι! 

4. Επιλέξτε το πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης από το µενού του οργάνου (αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου). 

-Πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης “7/15 HR1”: Για αραιωµένα και µη δείγµατα ορού στο HYDRAGEL 7 HR και στο HYDRAGEL 15 HR, 

-Πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης “7/15 HR2”: Για αραιωµένα δείγµατα ορού, συµπυκνωµένο ΕΝΥ και συµπυκνωµένα ούρα στο 

HYDRAGEL 7 HR και στο HYDRAGEL 15 HR, 

-Πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης “7/15 HR3”: Για µη συµπυκνωµένα ούρα στο HYDRAGEL 7 HR και στο HYDRAGEL 15 HR. 

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5. Αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από τη συσκευασία τους. Κρατήστε τις από την πλαστική άκρη τους. Προσαρµόστε 

την τρυπηµένη άκρη των ταινιών στις ακίδες του φορέα ηλεκτροδίων, το πλαστικό κάλυµµα της ταινίας πρέπει να είναι στραµµένο 

προς το φορέα (Εικ. 2). 

6. Ανοίξτε τη συσκευασία του HYDRAGEL. 

-Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού. 

Αφαιρέστε το χαρτί αµέσως. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην αφήνετε το διηθητικό χαρτί σε επαφή µε το gel επί µακρόν για να µην αφυδατωθεί. 

-Εισαγάγετε 120 µL απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ για το HYDRAGEL 7 HR ή 200 µL για το HYDRAGEL 15 HR µέχρι το 

κατώτερο τρίτο της κλίµακας που είναι τυπωµένη στην Πλάκα Ελέγχου Θερµοκρασίας της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

-Τοποθετήστε την πλάκα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα της 

τυπωµένης κλίµακας (Εικ. 3). 

-Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας του νερού. (Εικ. 3). Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, 

ότι το νερό έχει απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε την τυπωµένη κλίµακα. 

7. Κατεβάστε και τους δύο φορείς. Σε αυτήν τη θέση, οι ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος δεν αγγίζουν το gel. ΜΗΝ ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ 

ΦΟΡΕΙΣ ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ. 

8. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα από τον υγρό θάλαµο. Κρατήστε τον από το προστατευτικό κάλυµµα. 

-Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα. 

-Τοποθετήστε τον εφαρµογέα στη θέση No 5 του φορέα. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα πρέπει να είναι στραµµένοι προς τον χειριστή (Εικ. 4) 

9. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

10. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Βεβαιωθείτε ότι η είσοδος αερισµού στη δεξιά πλευρά του οργάνου είναι ελεύθερη. 

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι δύο φορείς χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα και ο εφαρµογέας να είναι σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. 

• Ο φορέας του εφαρµογέα σηκώνεται. 

• Προγράµµατα ηλεκτροφόρησης “7/15 HR1” και “7/15 HR2”: Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται υπό συνεχή τάση 255 V για το 

HYDRAGEL 7 HR και το HYDRAGEL 15 HR, στους 20 °C, µέχρι να συµπληρωθούν 75 Vh, για περίπου 18 min. 

• Πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης “7/15 HR3”: Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται υπό συνεχή τάση 255 V για το HYDRAGEL 7 HR και το 

HYDRAGEL 15 HR, στους 20 °C, µέχρι να συµπληρωθούν 75 Vh, για περίπου 40 Vh, για περίπου 10 min. 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Η θερµοκρασία της πλακέτας ελέγχου αυξάνεται στους 60 °C για 9 min για να στεγνώσει το gel. 

• Η πλακέτα ελέγχου κρυώνει. Όταν φτάσει τους 50 °C, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας ηλεκτροφόρησης. Η 

θερµοκρασία της πλακέτας ελέγχου παραµένει στους 50 °C µέχρι να ανοιχθεί το καπάκι. Στη συνέχεια η θερµοκρασία συνεχίζει να 

πέφτει µέχρι τους 20 °C (σε λιγότερο από 5 min) και στη συνέχεια µπορεί να ακολουθήσει νέα ηλεκτροφόρηση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

II. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Ανοίξτε το καπάκι. 

2. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα και πετάξτε τον. 

3. Σηκώστε και τους δύο φορείς, αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από την πλαστική άκρη τους και πετάξτε τις. 

4. Αφαιρέστε το στεγνωµένο gel για περαιτέρω επεξεργασία. 

5. Μετά από κάθε χρήση, σκουπίστε τα ηλεκτρόδια και την πλάκα ελέγχου θερµοκρασίας µε µαλακό υγρό πανάκι. 

Βεβαιωθείτε ότι τα ηλεκτρόδια και η πλάκα είναι στεγνά µετά από κάθε χρήση. 

Τα ηλεκτρόδια πρέπει να καθαρίζονται συστηµατικά µετά από κάθε χρήση. 

6. Ανοίξτε τον στατήρα των gel. Τοποθετήστε το στεγνό gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) στις αύλακες και κλείστε τον 

στατήρα. Βεβαιωθείτε ότι το film είναι σωστά τοποθετηµένο µέσα στον στατήρα (Εικ. 5). 

7. Τοποθετήστε τον στατήρα στη Μονάδα Επεξεργασίας / Χρώσης των gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν την έναρξη της επεξεργασίας / χρώσης των gel, ελέγξτε τα ακόλουθα: 

-ο περιέκτης χρώσης είναι γεµάτος µε 300 mL χρωστικού διαλύµατος, 

-ο περιέκτης διαλύµατος αποχρωµατισµού περιέχει τουλάχιστον 1 λίτρο διαλύµατος αποχρωµατισµού, 

-ο περιέκτης αχρήστων είναι κενός. 

Για τη σύνδεση των γραµµών των αντιδραστηρίων: ανατρέξτε στις πληροφορίες που εµφανίζονται στην οθόνη του οργάνου 

(επιλέξτε: REAGENT LINES). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μην ξεχνάτε να αποφράσσετε τις µη χρησιµοποιούµενες γραµµές. 

8. Επιλέξτε το πρόγραµµα χρώσης «HR ACID VIOLET» ή «HR AMIDO» από το µενού του οργάνου και αρχίστε τη διαδικασία πατώντας 

το πλήκτρο «START» (πράσινο βέλος στη δεξιά πλευρά του πληκτρολογίου). 

Κατά τα στάδια χρώσης, αποχρωµατισµού και στεγνώµατος, η µονάδα παραµένει κλειδωµένη. 

Μετά το στάδιο ψύξης, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας (ο αερισµός διατηρείται µέχρι την αφαίρεση του 

στατήρα των gel). 

III. ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Αφαιρέστε τον στατήρα των gel από τη µονάδα, ανοίξτε τον και αφαιρέστε το στεγνό gel. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Μετά τη χρώση / αποχρωµατισµό και πριν τη σάρωση, το gel µπορεί να υποβληθεί σε ένα επιπλέον βήµα πλύσης, αν 

χρειάζεται, για τον καλύτερο καθαρισµό του background του gel και την αποµάκρυνση υπολειπόµενης χρωστικής που µπορεί να 

παραµένει ως µπλε κηλίδες. Πλύνετε το gel χρησιµοποιώντας το πρόγραµµα “ WASH ISOENZ/GEL”. 

2. Αν χρειάζεται, καθαρίστε την πίσω (πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό χαρτί. 

3. ∆ιαβάστε οπτικά τα ηλεκτροφορήµατα για τυχόν ανωµαλίες. Οι οπτικές παρατηρήσεις µπορεί να συµπληρωθούν µε πυκνοµέτρηση 

στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο για την παροχή ηµιποσοτικών σχετικών τιµών για µεµονωµένα ή συνδυασµένα πρωτεϊνικά 

κλάσµατα. 

- 69 -


ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Ποιοτικός έλεγχος 

Συνιστάται να περιλαµβάνεται ένας φυσιολογικός ορός ή ορός ελέγχου (Ορός Ελέγχου, SEBIA, PN 4785) σε κάθε σειρά δειγµάτων. 

Τιµές (ποσοτική ανάλυση) 

Η πυκνοµετρική σάρωση (στα 570 nm) των χρωσµένων ηλεκτροφορηµάτων παρέχει σχετικές συγκεντρώσεις (ποσοστά) µεµονωµένων 

πρωτεϊνικών ζωνών. 

Οι φυσιολογικές τιµές (µ.ο. ± 2 SD) για µεµονωµένες κύριες ηλεκτροφορητικές πρωτεϊνικές ζώνες σε gel HYDRAGEL 7/15 HR έχουν 

εξαχθεί από υγιή πληθυσµό 225 ενηλίκων (ανδρών και γυναικών): 

ΚΛΑΣΜΑ HYRYS PHORESIS Αλβουµίνη 56.2 – 69.0 57.5 – 67.9 α-1 σφαιρίνες 1.2 – 3.2 1.0 – 3.8 α-2 σφαιρίνες 7.8 – 13.4 7.2 – 12.8 β σφαιρίνες 7.4 – 13.4 7.6 – 13.6 

| γ σφαιρίνες | 9.8 – 18.6 | 10.3 – 18.3 | 

Συνιστάται κάθε εργαστήριο να διαµορφώνει τις δικές του φυσιολογικές τιµές. 

Ερµηνεία 

Η ερµηνεία είναι ποιοτική. Επικουρικά δες ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ. 

Πρωτεΐνες ορού 

Η ερµηνεία γίνεται µε σύγκριση των ηλεκτροφορηµάτων µε φυσιολογικό δείγµα. Στην περίπτωση αυξηµένου, µειωµένου ή πρόσθετου 

κλάσµατος, είναι συνήθως απαραίτητο να επιβεβαιώνεται η παρατήρηση µε άλλες δοκιµασίες, όπως ποσοτικοποίηση συγκεκριµένων 

πρωτεϊνών µε ανοσοηλεκτροφόρηση ή ανοσοκαθήλωση. 

Μεταξύ των πολυάριθµων πρωτεϊνών του πλάσµατος µόνο περίπου δεκαπέντε βρίσκονται σε επαρκή συγκέντρωση για να συνεισφέρουν 

στην ένταση της χρώσης των ζωνών στα gel HYDRAGEL 7/15 HR. Η αξία των gel HYDRAGEL 7/15 HR έγκειται πρωτευόντως στην ανίχνευση 

ασθενών µονοκλωνικών ή ολιγοκλωνικών ζωνών. 

Πρωτεΐνες εγκεφαλονωτιαίου υγρού 

Το ΕΝΥ είναι ένα βιολογικό υγρό µε χαµηλή συγκέντρωση πρωτεϊνών. Στο φυσιολογικό ΕΝΥ περίπου 30 ± 15 mg/dL. Η πλειονότητα των 

πρωτεϊνών του ΕΝΥ προέρχονται από το ορό από όπου διηθούνται και µεταφέρονται µέσω του αιµατοεγκεφαλικού φραγµού. Για ανάλυση 

στα gel HYDRAGEL 7/15 HR, το ΕΝΥ πρέπει να είναι συµπυκνωµένο σε περίπου 1 g/dL. 

Το φυσιολογικό ΕΝΥ παρουσιάζει την ακόλουθη σειρά ζωνών: 

• Προαλβουµίνη ή τρανσθυρεΐνη, το ταχύτερο κλάσµα, 

• Αλβουµίνη, το κυρίαρχο κλάσµα που αντιστοιχεί στο 75 % περίπου των ολικών πρωτεϊνών, 

• Άλφα 1 ζώνη, αποτελούµενη κυρίως από άλφα-1 αντιτρυψίνη, 

• Άλφα 2 ζώνη, περιέχει κυρίως πρωτεΐνες υψηλού µοριακού βάρους. Είναι συνήθως πολύ ασθενής αφού αυτές οι πρωτεΐνες δεν µπορούν 

να περάσουν τον ΑΕΦ, 

• Βήτα κλάσµα, περιέχει τρανσφερρίνη, 

• Βήτα-2 ζώνη, περιέχει κυρίως πτωχή σε υδατάνθρακες (σιαλικό οξύ) τρανσφερρίνη «ειδική για το ΕΝΥ» ονοµαζόµενη επίσης πρωτεΐνη 

Ταυ, 

• Γάµµα ζώνη, περιέχει ουσιαστικά Ig G και ενίοτε Ig A και Ig M. 

Αυξηµένη σύνθεση ανοσοσφαιρινών στο ΚΝΣ έχει αναφερθεί σε συσχέτιση µε ποικίλες διαταραχές του ΚΝΣ όπως αποµυελινωτικές, 

φλεγµονώδεις και λοιµώδεις διαταραχές και αυτοάνοσες αντιδράσεις. 

Η ενδοθηκική σύνθεση Ig στο ΕΝΥ συχνά σχετίζεται µε µειωµένη ετερογένεια των Ig η οποία εκδηλώνεται ως «ολιγοκλωνικές ζώνες» 

διακρινόµενες µε ηλεκτροφόρηση υψηλής ανάλυσης. 

Ιδιαίτερο χαρακτηριστικό της ενδοθηκικής σύνθεσης Ig είναι η παρουσία ολιγοκλωνικών ζωνών Ig στο ΕΝΥ και απουσία αυτών στον ορό. 

Εποµένως είναι απαραίτητο : 

• Να αναλύονται ζεύγη ΕΝΥ και ορού από τον ίδιο ασθενή ταυτόχρονα, πριν από οποιαδήποτε θεραπεία η οποία θα µπορούσε να 

επηρεάσει τη συγκέντρωση ανοσοσφαιρινών στο δείγµα. 

• Να εφαρµόζονται ίδιες ποσότητες πρωτεϊνών (περίπου 1 g/dL) µε καθένα από τα δύο δείγµατα. 

• Να υποβάλλεται κάθε µη φυσιολογική ζώνη που ανιχνεύεται στη γάµµα ζώνη του ΕΝΥ, χωρίς αντίστοιχο κλάσµα στον ορό, σε 

ανοσοκαθήλωση. 

Η ανοσολογική επιβεβαίωση του ανοσοσφαιρινικού χαρακτήρα µιας ζώνης στο ΕΝΥ είναι απαραίτητη αφού και άλλες ζώνες µη 

αντιστοιχούσες σε ανοσοσφαιρίνες µπορούν να βρεθούν στη γάµµα ζώνη (π.χ. κλάσµα ταυ, καρβονική ανυδράση, µετά γάµµα ή CRP). Οι 

τελευταίες ζώνες δεν έχουν την ίδια διαγνωστική σηµασία µε τις «αληθείς» ανοσοσφαιρινικού τύπου ολιγοκλωνικές ζώνες. 

Ούρα 

Η ηλεκτροφόρηση ούρων γίνεται για την ανίχνευση µονοκλωνικών στοιχείων και άλλων πρωτεϊνών των ούρων. Το HYDRAGEL 7/15 HR 

χρησιµοποιείται ως δοκιµασία διαγνωστικού ελέγχου για πρωτεΐνες ούρων. Επιτρέπει την ανίχνευση µονοκλωνικών κλασµάτων (που 

πρέπει να επιβεβαιωθεί και να ταυτοποιηθεί µε ανοσοκαθήλωση) και την ανίχνευση πρωτεϊνών σωληναριακής, σπειραµατικής ή µικτής 

προέλευσης (η οποίες πρέπει να χαρακτηρίζονται µε κατάλληλες µεθόδους, όπως νεφελοµετρική ανοσοµέτρηση ή ανοσοκαθήλωση µε 

κατάλληλα αντισώµατα). 

- 70 -


∆οκιµασίες επιβεβαίωσης 

Όταν σε σύγκριση µε φυσιολογικά ηλεκτροφορήµατα, παρατηρούνται αυξηµένα, µειωµένα ή πρόσθετα κλάσµατα, απαιτούνται δοκιµασίες 

επιβεβαίωσης, όπως ταυτοποίηση και ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών µε ανοσοχηµικές µεθόδους. Η SEBIA προσφέρει πολλές εξειδικευµένες 

δοκιµασίες για χρήση µε το σύστηµα HYDRASYS system, π.χ. : 

• µονοκλωνικές πρωτεΐνες σε ορό και ούρα : 

HYDRAGEL 1 IF SEBIA (PN 4301), HYDRAGEL 2 IF SEBIA (PN 4302), HYDRAGEL 4 IF SEBIA (PN 4304 και 4308) και HYDRAGEL 9 IF SEBIA 

(PN 4309), 

• ολιγοκλωνικές (Ig) ζώνες στο ΕΝΥ : 

HYDRAGEL 3 CSF SEBIA (PN 4350) και HYDRAGEL 6 CSF SEBIA (PN 4351), 

• Πρωτεΐνες Bence Jones στα ούρα : 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES SEBIA (PN 4321), HYDRAGEL 2 BENCE JONES SEBIA (PN 4322) και HYDRAGEL 4 BENCE JONES SEBIA 

(PN 4324), 

• Χαρακτηρισµός σωληναριακής ή σπειραµατικής βλάβης (µοριακή διήθηση σε διάλυµα SDS) : 


Περιορισµοί 

Σε αποψυγµένα δείγµατα, µπορεί να παρατηρηθούν ελαφρά σηµάδια στο σηµείο εφαρµογής από µετουσιωµένες πρωτεΐνες. 

Μην χρησιµοποιείτε αιµολυµένα δείγµατα και δείγµατα πλάσµατος. 

Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης, είναι πιθανό κάποια µονοκλωνικά στοιχεία να µην 

ανιχνεύονται µε αυτήν τη µέθοδο. 

Αντιµετώπιση προβληµάτων 

Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιµασίας και φύλαξης των 

υλικών και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά. 

Τα Φύλλα ∆εδοµένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται επίσης από την 

Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή. 

∆Ε∆ΟΜΕΝΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 

Χρησιµοποιήθηκαν τυπικά υλικά και οι συνήθεις διαδικασίες. Όλα τα ηλεκτροφορήµατα ερµηνεύτηκαν οπτικά. 

Ποιοτική ανάλυση 

Τα αποτελέσµατα µε τα gel HYDRAGEL 7/15 HR υποδεικνύουν πολύ καλή αναπαραγωγιµότητα εντός και µεταξύ gel για όλες τις 

εξετασθείσες παραµέτρους και δεν υπήρξαν ορατές διαφορές ανάµεσα στις επαναλήψεις. 

Παθολογικά και φυσιολογικά δείγµατα ορού, ζεύγη ορού / ΕΝΥ και δείγµατα ούρων από116 ασθενείς έτρεξαν σε gel HYDRAGEL 7/15 HR 

και σε συγκρίσιµα εµπορικά gel υψηλής ανάλυσης. Τα δείγµατα παρασκευάστηκαν όπως συνιστάται από τις αντίστοιχες µεθόδους. 

Οι οµοιότητες και διαφορές των ηλεκτροφορηµάτων και η παρουσία µονοκλωνικών ή ολιγοκλωνικών ζωνών αποτέλεσε τη βάση 

σύγκρισης. Η οπτική, ποιοτική σύγκριση µεταξύ των δύο δοκιµασιών βασίστηκε στον αριθµό των ζωνών και τη θέση τους. 

Τα αποτελέσµατα των δύο δοκιµασιών συµφωνούσαν και στους 116 ασθενείς µεταξύ τους και µε την κλινική διάγνωση. 

Ηµι-ποσοτική ανάλυση 

Για τις ηµιποσοτικές εφαρµογές, τα αποτελέσµατα µε τα gel HYDRAGEL 7/15 HR υποδεικνύουν πολύ καλή αναπαραγωγιµότητα εντός και 

µεταξύ gel για όλες τις εξετασθείσες παραµέτρους και δεν υπήρξαν ορατές διαφορές ανάµεσα στις επαναλήψεις. Ο µέσος CV ήταν 4.0 %. 

Οι διαδικασίες HYDRAGEL 7/15 HR µε χρώση είτε µε όξινη ιώδη χρωστική είτε µε amidoblack συγκρίθηκαν µε άλλα συγκρίσιµα εµπορικά 

gel υψηλής ανάλυσης. 

Για χάρη σύγκρισης όλα τα ηλεκτροφορήµατα σαρώθηκαν (κίτρινο φίλτρο) ως 5 ζωνών. 

∆είγµατα ορού (n = 56) έτρεξαν και στα δύο κιτ και οι σχετικές συγκεντρώσεις για κάθε κλάσµα συγκρίθηκαν µε ανάλυση γραµµικής 

παλινδρόµησης. Ο µέσος συντελεστής συσχέτισης για όλα τα πρωτεϊνικά κλάσµατα κα µε τα δύο χρωστικά διαλύµατα ήταν 0.973. 

HYDRAGEL 15 HR (όξινη ιώδης) HYDRAGEL 15 HR (amidoblack) ΚΛΑΣΜΑ Συντελεστής Κλίση Τοµή του y Εύρος (%) | Συντελεστής Κλίση Τοµή του y Εύρος (%) συσχέτισης (HYDRAGEL 15 HR)| συσχέτισης (HYDRAGEL 15 HR) Αλβουµίνη 0.981 0.98 1.89 36.7 – 66.1 0.985 0.96 2.35 36.1 – 67.4 α-1 0.976 0.99 -0.11 1.5 – 7.5 0.982 0.97 -0.03 1.3 – 7.1 α-2 0.982 0.98 -0.14 6.8 – 24.5 0.978 0.96 0.31 5.7 – 24.2 ß 0.956 0.91 0.90 5.8 – 19.8 0.918 0.95 0.41 5.4 – 20.0 

| γ | 0.991 | 0.99 | -0.16 | 8.3 – 40.0 | 0.990 | 0.94 | 1.05 | 7.2 – 37.5 | 

Ευαισθησία 

Ένας παθολογικός ορός µε µονοκλωνικό κλάσµα (ταυτοποιηµένο και ποσοτικοποιηµένο µε άλλα µέσα) αραιώθηκε σειριακά µε 

φυσιολογικό ορό και οι αραιώσεις ηλεκτροφορήθηκαν µε τα προγράµµατα «HR1» και «HR2». Οµοίως ένα δείγµα ούρων περιέχον 

αλβουµίνη και πρωτεΐνες Bence Jones (ταυτοποιηµένες και ποσοτικοποιηµένες µε άλλα µέσα) αραιώθηκε σειριακά µε φυσιολογικό ορό 

και οι αραιώσεις ηλεκτροφορήθηκαν µε το πρόγραµµα «HR3. Η ευαισθησία προσδιορίστηκε από την υψηλότερη αραίωση στην οποία 

προέκυψε ορατή ζώνη µετά από χρώση µε όξινο ιώδες. Στα προγράµµατα «HR1» και «HR2» η ευαισθησία ήταν 10 - 30 mg/dL (για 

µονοκλωνικές G,k). Στο πρόγραµµα «HR3», η ευαισθησία ήταν 1.5 - 2.0 mg/dL (για την αλβουµίνη και την πρωτεΐνη Bence Jones). Περίπου 

η ίδια ευαισθησία παρατηρήθηκε σε µη αραιωµένο ορό µε χρώση amido black έναντι ορού αραιωµένου 1/4 µε χρώση µε όξινο ιώδες. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ανάλογα µε τη θέση του µονοκλωνικού κλάσµατος και του πολυκλωνικού υποβάθρου, το όριο ανίχνευσης ενδέχεται να 

ποικίλλει. 

Γραµµικότητα 

Οι µέθοδοι ήταν γραµµικές έως τουλάχιστον τα 5.8 g/dL για την αλβουµίνη και 3.9 g/dL για την Ig G και για τις δύο διαδικασίες χρώσης. 

- 71 -


ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 








43, 2332-2346. 









Acta, 56 : 125-126. 





35 : 1997. 





ΗΛEKTPOΦOPHTIKO ΠPOΦIΛ 

+ 

Προαλβουµίνη 

Αλβουµίνη 

Οροµουκοιδές 

α1 αντιτρυψίνη 

απτοσφαιρίνη 

σερουλοπλασµίνη 

§ λιποπρωτεΐνη 

C3 συστατικό του 

συµπληρώµατος 

β2 µικροσφαιρίνη 

Κλάσµα πρωτεΐνης Τ 

α1 αντιχυµοθρυψίνη 

α λιποπρωτεΐνη 

GC σφαιρίνη 

α2 µακροσφαιρίνη 

τρανσφερρίνη 

αιµοπηξίνη 

Αντιθροµβίνη ΙΙΙ 

Αναστολέας της C1-εστεράσης 

γ σφαιρίνες 

G - A - M - D - E 

- 

- 72 -


For en dansk version af dette pakningsvedlæg, henvend Dem til den danske distributør af produkter fra SEBIA : 

ILS ApS Gydevang 22A DK-3450 Allerød 

Tlf : +45 48 14 18 50 

Fax : +45 48 14 18 60 

e-mail : ils@ilsdk.dk 

- 73 - 

SEBIA INSTRUKTION - Dansk


SCHÉMAS / FIGURES 

Figure 1 Figure 2 

1 2 3 4 567 8 9 10 11 121314 15 

Figure 3 Figure 4 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

Figure 5 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 

- 74 -

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Rue de la Fusée, 62 

Raketstraat, 62 

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