HYDRAGEL 7 ß1-ß2 HYDRAGEL 15 ß1-ß2 HYDRAGEL 30 ß1-ß2

HYDRAGEL 7 ß1-ß2 

Ref. 4101 

HYDRAGEL 15 ß1-ß2 

Ref. 4121 

HYDRAGEL 30 ß1-ß2 

Ref. 4141 

2005/02

HYDRAGEL 7, 15 & 30 ß1-ß2 - 2005/02 

UTILISATION 

L’HYDRAGEL 7 ß1-ß2 et l’HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 sont des gels d’agarose qui permettent la séparation en tampon alcalin (pH 8,5), des protéines 

du sérum humain et de l’urine, par électrophorèse dans le système semi-automatique HYDRASYS. Les protéines du sérum normal humain sont 

séparées en six fractions majeures. 

Le système HYDRASYS permet de réaliser toutes les séquences jusqu’à l’obtention du gel prêt pour l’analyse qualitative ou quantitative. Les protéines 

séparées sont colorées par une solution d’amidoschwarz et l’excès de colorant est éliminé en milieu acide. Les profils électrophorétiques sont 

analysés visuellement pour détecter les anomalies. La densitométrie donne une quantification relative précise de chaque zone individualisée. 

Chaque gel d’agarose est prévu pour l’analyse de : 

• 7 échantillons pour le kit HYDRAGEL 7 ß1-ß2, 

• 15 échantillons pour le kit HYDRAGEL 15 ß1-ß2, 

• 30 échantillons pour le kit HYDRAGEL 30 ß1-ß2. 

À usage in vitro exclusivement. 

PRINCIPE DU TEST 1-16 

L’électrophorèse des protéines du sérum ou d’autres liquides biologiques humains est une analyse très utile en laboratoire d’analyses cliniques pour 

rechercher les modifications du profil protéique. Des techniques d’électrophorèse de zone ont été développées, sur différents supports, chacun 

donnant un fractionnement des protéines sériques en fonction de leur charge, dans un tampon de pH donné. L’agarose, d’utilisation très facile, a été 

choisi comme support. Il donne une séparation des constituants sériques humains en cinq fractions de mobilité différente (voir le kit HYDRAGEL 

PROTEIN(E)). Mais quand une meilleure résolution est nécessaire, les protéines peuvent être séparées en six fractions majeures en utilisant le kit 

HYDRAGEL ß1-ß2 : albumine, alpha-1 globulines, alpha-2 globulines, bêta-1 globulines, bêta-2 globulines et gamma globulines. Chaque zone 

contient un ou plusieurs constituants sériques. Le profil électrophorétique de l’urine ressemble à celui du sérum. Néanmoins, la présence et l’intensité 

relative des fractions dépendent fortement de la capacité de filtration des reins. 

RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 7, 15 ET 30 ß1-ß2 

COMPOSANTS RÉF. N° 4101 RÉF. N° 4121 RÉF. N° 4141 Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels 10 gels 10 gels Mèches tamponnées (prêtes à l’emploi) 10 sachets de 2 10 sachets de 2 10 sachets de 2 Diluant colorant (solution concentrée) 1 fl. de 60 ml 1 fl. de 60 ml 1 fl. de 60 ml Colorant amidoschwarz (solution concentrée) 1 fl. de 20 ml 1 fl. de 20 ml 1 fl. de 20 ml Applicateurs (prêts à l’emploi) 1 boîte de 10 (7 dents) 1 boîte de 10 (15 dents) 2 boîtes de 10 (15 dents) 

| Papiers-filtres fins | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS 

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. 

LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. 

1. GELS D’AGAROSE 

Préparation 

Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 8 g/l ; tampon Tris-barbital, pH 8,5 ± 0,1 ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les gels contiennent 0,61 % de barbital. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! 

Utilisation 

Support pour l’électrophorèse des protéines. 

Conservation, stabilité et signes de détérioration 

Les gels doivent être conservés à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date 

d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet du gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur 

le devant du kit doit être pointée vers le haut). Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. Éviter toute variation 

brutale de température. 

NE PAS CONGELER. 

Éliminer le gel dans les cas suivants : 

(I) apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ; 

(II) apparition de bactéries ou de moisissures ; 

(III) présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation). 

2. MÈCHES TAMPONNÉES 

Préparation 

Les mèches en éponge tamponnées sont prêtes à l’emploi. Chaque mèche tamponnée contient : tampon Tris-barbital, pH 8,5 ± 0,3 ; azoture de 

sodium ; composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les mèches tamponnées contiennent 1,38 % de barbital et 0,225 % d’azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, 

consulter immédiatement un médecin ! L’azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des 

acides, du plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des mèches, éviter tout contact avec ces produits. 

Utilisation 

Les mèches en éponge tamponnées jouent un rôle de réservoir de tampon pour l’électrophorèse et assurent le contact entre le gel et les électrodes. 


Les mèches tamponnées peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Elles doivent être conservées horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet des mèches tamponnées. NE PAS CONGELER. 

Éliminer les mèches tamponnées si le sachet est ouvert ou si les mèches sont sèches. 

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NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français


3. DILUANT COLORANT 

Préparation 

Le diluant colorant concentré doit être utilisé comme décrit dans le paragraphe " COLORANT AMIDOSCHWARZ ". Il contient une solution acide. 

Utilisation 

Pour la préparation du colorant amidoschwarz. 


Le diluant colorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le 

kit ou sur l’étiquette du flacon de diluant. NE PAS CONGELER. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

4. COLORANT AMIDOSCHWARZ 

Préparation 

Le colorant amidoschwarz concentré est une solution visqueuse qui peut éventuellement gélifier, ce qui n’affecte absolument pas la qualité de la 

solution finale et son pouvoir de coloration. 

Dans tous les cas, pour obtenir une parfaite reconstitution du colorant, il faut respecter le protocole suivant : 

1. Ajouter environ 15 mL de diluant colorant au flacon d’amidoschwarz concentré. 

2. Refermer soigneusement le flacon. 

3. Agiter très vigoureusement le flacon pendant au minimum 5 secondes. 

4. Verser la solution obtenue dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

5. Renouveler cette opération deux fois, trois fois, si nécessaire. 

6. Verser le reste du diluant dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

7. Compléter à 300 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

8. Agiter parfaitement cette solution pendant 5 à 10 minutes. 

Le colorant est prêt à l’emploi. 

REMARQUE : Une reprise incomplète du colorant peut entraîner une mauvaise coloration de la fraction albumine (baisse du pourcentage ou trou 

blanc dans la fraction). 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; éthylène-glycol, 6,7 % ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. 

La solution diluée est stable pendant 1 mois. 

Ne pas stocker la solution de colorant diluée à proximité d’une source de chaleur. 

5. APPLICATEURS 

Utilisation 

Applicateurs prédécoupés, à usage unique pour le dépôt des échantillons. 

Conservation 

Les applicateurs doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

6. PAPIERS-FILTRES FINS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption de l’excès de liquide à la surface du gel avant l’application des échantillons. 

Conservation 

Les papiers-filtres fins doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

RÉACTIFS NÉCESSAIRES 

1. DÉCOLORANT 

Préparation 

Chaque flacon de décolorant concentré (SEBIA, référence N° 4540 : 10 flacons de 100 ml chacun) doit être dilué au 1/1 000 avec de l’eau distillée 

ou déminéralisée, il permet d'obtenir 100 litres de solution décolorante. Prélever par quantité de 5 ml et compléter à 5 litres avec de l’eau distillée ou 

déminéralisée. Après dilution, la solution décolorante contient : acide citrique, 0,5 g/l. 

Utilisation 

Pour la décoloration, c’est-à-dire l’élimination de l’excès de colorant après coloration du gel. 

Pour le rinçage de la cuve de coloration après lavage. 

Pour neutraliser l’acidité du décolorant, mettre dans le flacon de vidange vide, 15 ml de soude à 50 % (solution du commerce). 


Le décolorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou 

sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

Le décolorant dilué est stable pendant 1 semaine à température ambiante, en flacon fermé. 

Éliminer le décolorant dilué s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

En cas de conservation prolongée (au delà d’une semaine) de la solution diluée, ajouter 50 µl/l de ProClin 300 pour prévenir toute prolifération microbienne. 

Le décolorant dilué contenant du ProClin est stable en flacon fermé à température ambiante ou au réfrigérateur jusqu’à la date d’expiration indiquée 

sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

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2. SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS 

Préparation 

Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentrée (SEBIA, référence N° 4541 : 10 flacons de 80 ml chacun) doit être complété à 5 litres 

avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution de lavage contient : tampon alcalin, pH 8,8 ± 0,3 ; azoture de sodium. 

ATTENTION : La solution de lavage concentrée contient 0,625 % d'azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! L'azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides, du 

plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des solutions, laver abondamment avec une grande quantité d’eau. 

Utilisation 

Pour le lavage périodique de la cuve de coloration de l’HYDRASYS : Par exemple, pour une utilisation journalière, effectuer un lavage hebdomadaire 

de la cuve de coloration. 

Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d’utilisation. 


Les solutions de lavage concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés. Elles sont stables 

jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. 

Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

3. FLUIDIL 

Préparation 

Le Fluidil (SEBIA, référence N° 4587 : 1 flacon de 5 ml) est prêt à l’emploi. 

Utilisation 

Pour la dilution des échantillons visqueux ou troubles (turbidité induite par la présence d’une cryoglobuline ou d’un cryogel). 


Le Fluidil peut être conservé à température ambiante. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon de Fluidil. 

Il ne doit pas y avoir de précipité. 

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES 

1. Système HYDRASYS SEBIA, référence N° 1210 ou N° 1211. 

2. Micropipetteur, manuel ou automatique, tel que HYDRAplus SEBIA, référence N° 1215, pour le chargement des applicateurs. 

3. Chambre humide, référence N° 1270, fournie avec le système HYDRASYS. 

4. Bidons plastiques fournis avec le système HYDRASYS. 

5. Pipettes de 10 µl et 200 µl. 

6. Densitomètre / scanner capable de lire un film de 82 x 51 mm ou 82 x 102 mm à 570 nm (filtre jaune) : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA ou Scanner 

équipé du logiciel PHORESIS SEBIA. Se reporter aux instructions de chaque appareil pour son utilisation et sa calibration. 

7. Porte-film pour le traitement des demi-gels SEBIA, référence n° 10043110. 

ÉCHANTILLONS À ANALYSER 

Prélèvement et conservation des échantillons 

L’analyse se fait sur échantillons frais. Les sérums ou les urines doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire 

d’analyses cliniques. 

Les échantillons peuvent être conservés une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). 

NOTE : La fraction bêta-2 et la fraction C3 du complément, disparaissent après 3 jours. 

Pour des conservations prolongées, congeler les échantillons ; les échantillons congelés sont stables au minimum 1 mois. 

La conservation des sérums congelés est améliorée par addition à l’échantillon d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

La conservation des urines congelées est améliorée par addition à l’échantillon de tampon HEPES 0,1 M (pH 6,75) et d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

IMPORTANT : Ne pas utiliser de conservateur contenant de l’acide borique. 

Les échantillons décongelés peuvent donner, au point de dépôt, une trace due à la dénaturation de protéines ou de lipoprotéines. 

Plus le sérum vieillit, plus les bêta lipoprotéines sont anodiques. De même, après congélation, les bêta lipoprotéines sont beaucoup plus anodiques 

que sur sérums frais : leur migration varie de la zone bêta à la zone alpha-2 voire alpha-1. 

Préparation des échantillons 

1. Sérums 

Utiliser directement les échantillons de sérum non dilués. 

Après conservation au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) ou congélation, certains sérums (en particulier ceux qui contiennent une cryoglobuline ou un 

cryogel) deviennent visqueux ou troubles. Ces sérums présentent des difficultés de manipulation lors du dépôt avec l’applicateur HYDRASYS, car 

ils ne diffusent que très difficilement sur les dents de l’applicateur. Prétraiter ces sérums avec le Fluidil : ajouter 25 µl de Fluidil à 75 µl de sérum, 

agiter 15 secondes au vortex, puis suivre la technique. 

2. Urines concentrées 

L’analyse est réalisée sur des échantillons dont la concentration protéique est ramenée à environ 15 - 20 g/l par concentration au moyen d’un 

dispositif approprié. 

IMPORTANT : Certaines urines contiennent une concentration importante de sels. Il s’ensuit une déformation du gel au cours de la migration qui 

risque de conduire à une perturbation des profils après électrophorèse. Il convient d’éliminer cet excès de sels par une dialyse. 

En cas d’urines troubles (concentrées ou non), il est recommandé d’éliminer les particules en centrifugeant les échantillons 

(pendant 10 minutes à 3000 rpm) ou par filtration (sur filtre de 0,45 µm) afin d’obtenir une bonne diffusion sur les applicateurs. 

Échantillons à éviter 

• Ne pas utiliser d’échantillon hémolysé. L’hémolyse entraîne une augmentation des zones alpha-2 et bêta. 

• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène donne une bande proche du point de dépôt. Cette bande peut fausser l’interprétation du test (confusion 

avec une gammapathie et augmentation du pourcentage de la fraction correspondante). 

• Ne pas utiliser les échantillons d’urine anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, des dégradations enzymatiques peuvent les altérer. 

- 3 -


TECHNIQUE 

Le système HYDRASYS est un instrument multiparamétrique semi-automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les étapes suivantes : 

application des échantillons, migration électrophorétique, séchage, coloration, décoloration et séchage final. 

Les étapes manuelles sont les suivantes : préparation des échantillons et du gel, lancement des séquences automatiques. 

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS D’HYDRASYS. 

I. PRÉPARATION DE LA MIGRATION 

1. Mettre HYDRASYS sous tension. 

2. Poser un applicateur pour HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 échantillons) et HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 échantillons), ou deux applicateurs pour 

HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 échantillons), à plat sur la paillasse, numérotations (puits) vers le haut (Fig. 1). 

- Déposer 10 µl de sérum pur ou d’urine concentrée dans chaque puits ; le chargement de chaque applicateur ne doit pas excéder 2 minutes. 

- Placer l’(es) applicateur(s) dans la chambre humide, dents vers le haut (en manipulant l’(es) applicateur(s) par la protection en plastique). 

Laisser diffuser 5 minutes après le dépôt du dernier échantillon. 

Pour une conservation prolongée (8 heures maximum), placer la chambre humide au réfrigérateur. 

Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d’utilisation. 

3. Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

ATTENTION : Ne pas fermer le capot de l’appareil si les chariots sont relevés ! 

4. Sélectionner le programme de migration «7 B1-B2» pour HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ou «15/30 B1-B2» pour HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 dans le menu. 

5. Sortir les mèches tamponnées de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques. Fixer les mèches sur le chariot 

porte-électrodes à l'aide des languettes perforées. La face de la mèche fixée sur la languette vient en contact avec l'électrode (Fig. 2). 

6. Sortir le gel de son emballage. 

- Éliminer rapidement l’excès de liquide en surface, en effleurant le gel avec un papier-filtre fin. 

ATTENTION : Ne surtout pas laisser le papier-filtre en contact prolongé avec le gel pour éviter sa déshydratation. 

- Déposer 120 µl d'eau distillée ou déminéralisée pour HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ou 200 µl pour HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, sur le plateau de 

migration dans le tiers inférieur du cadre sérigraphié. 

- Placer le gel (face gel orientée vers le haut) sur le plateau contre la barrette, à l'intérieur du cadre sérigraphié (Fig. 3). 

- Donner une forme concave au gel (Fig. 3) et le dérouler sur le plateau jusqu'au contact de la goutte d'eau qui doit se répartir sur toute la 

largeur du gel. Relever légèrement le gel pour éliminer les bulles d'air éventuellement piégées, puis dérouler totalement le gel au contact 

du plateau. La goutte d’eau doit s’étaler sous toute la surface du film. 

7. Abaisser l'ensemble des chariots jusqu'en butée. Dans cette position, les mèches tamponnées ne touchent pas le gel. NE PAS FORCER LA 

DESCENTE DES CHARIOTS. 

8. Sortir l’(es) applicateur(s) de la chambre humide en le(s) manipulant par la protection plastique. 

- Éliminer la protection des dents. 

- Pour l’analyse de 7 et de 15 échantillons, placer l'applicateur en position N° 6 sur le porte-applicateurs. 

- Pour l’analyse de 30 échantillons, placer les applicateurs en positions N° 3 et 9 sur le porte-applicateurs. 

IMPORTANT : Les numérotations de l'applicateur sont toujours dirigées vers l'opérateur (Fig. 4). 

9. Fermer le capot du module de migration. 

10. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à gauche du clavier). 

IMPORTANT : Ne rien placer à proximité immédiate de la grille de ventilation (à droite de l'appareil). 

MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente des chariots porte-électrodes et porte-applicateurs pour amener les mèches tamponnées et l’(es) applicateur(s) au contact du gel. 

• Remontée du chariot porte-applicateurs. 

• Migration à 10 W constants pour HYDRAGEL 7 ß1-ß2, ou à 20 W constants pour HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, à 20 °C, température contrôlée par effet 

Peltier, jusqu’à 36 Vh accumulés (pendant environ 7 minutes). 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Séchage du film à 65 °C, pendant 10 minutes par montée en température du plateau. 

• Refroidissement du plateau, quand la température du plateau atteint 50 °C, un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de 

migration se débloque. Le plateau reste à 50 °C jusqu'à l'ouverture du capot. Après ouverture, la température baisse jusqu’à 20 °C (en moins de 

5 minutes). Une nouvelle migration peut alors être lancée. 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

II. PRÉPARATION DES SÉQUENCES DE TRAITEMENT DU GEL 

1. Ouvrir le capot du module de migration. 

2. Retirer l’(es) applicateur(s) et le(s) jeter. 

3. Relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes, retirer les mèches par les languettes et les jeter. 

4. Récupérer le film pour le traitement suivant. 

5. Nettoyer les électrodes et le plateau de migration avec un papier ouaté humide. 

6. Placer le film sur le porte-film, face gel vers l'opérateur, en procédant comme suit (Fig. 5) : 

- ouvrir le porte-film ; 

- le poser à plat sur la paillasse ; 

- positionner le gel dans les gorges des colonnettes ; 

- refermer le porte-film ; 

- s'assurer que le film soit bien enfoncé dans les gorges des deux colonnettes. 

7. Introduire le porte-film dans le module de traitement / coloration du gel. 

IMPORTANT : Avant de lancer un cycle de coloration, s'assurer que : 

- le flacon de colorant contienne 300 ml de colorant ; 

- le flacon de décolorant contienne 1 litre de décolorant minimum ; 

- le flacon de vidange soit vide. 

- 4 -


Pour le branchement des canaux réactifs : se référer aux instructions affichées sur l’écran de l’appareil (sélectionner la touche : VISU 

CANAUX). 

IMPORTANT : Ne pas oublier d’obturer les canaux non utilisés. 

8. Sélectionner le programme de coloration «PROT./B1-B2/Hb» dans le menu. 

Démarrer la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à droite du clavier). 

Pendant toutes les séquences de coloration, décoloration et séchage, le système reste verrouillé. 

Après refroidissement de la cuve, un signal sonore (bip) retentit et le système se débloque (la ventilation se maintient jusqu’à la récupération 

du porte-film). 

III. FIN DU TRAITEMENT DU GEL 

1. Sortir le porte-film du compartiment ; ouvrir le porte-film et retirer le gel sec. 

NOTE : Si des taches bleues résiduelles sont observées sur le gel après coloration / décoloration, une étape de lavage supplémentaire avec 

le programme " LAV. ISOENZ/GEL " permet de les éliminer ou de les atténuer fortement (selon leur intensité) avant lecture au densitomètre / 

scanner. 

2. Si nécessaire, nettoyer le dos du gel (support plastique) avec un papier ouaté humide. 

3. Lire au densitomètre / scanner à 570 nm ou avec un filtre jaune. 

NOTE : Pour les gels à rangées multiples (2 ou 3), les longueurs de migration peuvent être sensiblement différentes, sans aucune conséquence 

sur les résultats. 

RÉSULTATS 

Contrôle Qualité 

Pour chaque série d’analyses, il est recommandé d’inclure un sérum de contrôle (tel que le Sérum de Contrôle SEBIA, référence N° 4785). 

Valeurs 

La lecture à 570 nm par densitométrie permet de définir les concentrations relatives (pourcentages) de chaque fraction. 

Les valeurs normales (moyenne ± 2 écarts types) pour chaque fraction sérique sur gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, ont été établies à partir d’une 

population de 136 adultes (hommes et femmes), en bonne santé. 

La quantification des protéines en UV sur CAPILLARYS donne des valeurs similaires à la néphélémétrie (en particulier pour l’albumine). SEBIA 

propose donc une standardisation des valeurs obtenues sur HYDRAGEL en réalisant une calibration des systèmes de lecture. 

Valeurs sans standardisation Valeurs standardisées sur CAPILLARYS 

FRACTION HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumine 60,3 - 72,8 % 54,3 - 65,5 % Alpha-1 globulines 1,0 - 2,6 % 1,2 - 3,3 % Alpha-2 globulines 7,2 - 11,8 % 8,3 - 15,0 % Bêta-1 globulines 5,6 - 9,1 % 6,5 - 11,5 % Bêta-2 globulines 2,2 - 5,7 % 2,5 - 7,2 % 

| Gamma globulines | 6,2 - 15,4 % | 7,1 - 19,5 % | 

Il est recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs normales. 

Interprétation 1-16 

Pour des informations complémentaires sur l'interprétation des profils obtenus, Cf. BIBLIOGRAPHIE. 

Sur certains échantillons, une bande fine plus ou moins focalisée, correspondant à une partie du complément C3, peut être observée sous la zone 

Bêta-2, voir PROFIL ÉLECTROPHORÉTIQUE. 

Interférences et limites 

Voir ÉCHANTILLONS À ANALYSER. 

Compte-tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune 

garantie ne peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales. 

Assistance technique 

Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux. 

Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès 

du Service Technique SEBIA. 

PERFORMANCES 

Analyse des sérums 

Les résultats suivants, obtenus à l’aide du densitomètre HYRYS, SEBIA, sur HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 par analyse quantitative indiquent une très 

bonne répétabilité et reproductibilité du kit HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 pour tous les aspects testés, avec un coefficient de variation moyen de 4 %. 

Répétabilité intra-essai 

Trois sérums ont été analysés sur gels HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 de 2 lots différents, à raison de 28 dépôts par gel. Les moyennes, écart-types (ET) 

et coefficients de variation (CV) (n = 28) ont été calculés pour chaque échantillon sur chaque lot. Le tableau suivant présente les résultats obtenus 

pour un des trois échantillons : 

- 5 -


FRACTION MOYENNE (%) ET CV (%) Albumine 50,8 ; 51,5 0,8 ; 1,3 1,6 ; 2,5 Alpha-1 2,9 ; 2,9 0,1 ; 0,1 3,2 ; 3,7 Alpha-2 8,8 ; 8,7 0,1 ; 0,2 1,2 ; 2,8 Bêta-1 8,6 ; 8,2 0,3 ; 0,2 4,0 ; 2,2 Bêta-2 5,3 ; 5,4 0,2 ; 0,5 4,4 ; 8,5 

| Gamma | 24,1 ; 23,3 | 0,4 ; 0,6 | 1,7 ; 2,4 | 

Reproductibilité 

Quinze sérums ont été analysés sur gels HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 de 2 lots différents pendant 5 jours consécutifs, chaque échantillon déposé sur les 

rangées inférieure et supérieure de chaque gel. Les moyennes, écart-types (ET) et coefficients de variation (CV) ont été calculés quotidiennement 

pour chaque échantillon sur chaque lot. Le tableau suivant présente les limites de l’ensemble des résultats des ET et CV obtenus sur 5 jours pour tous 

les échantillons sur un seul lot (n = 150). 

FRACTION ET CV (%) MOYENNE CV (%) Albumine 0,3 ; 2,1 0,5 ; 3,2 1,4 Alpha-1 0,1 ; 0,2 3,3 ; 10,2 4,8 Alpha-2 0,1 ; 0,3 1,2 ; 6,0 2,8 Bêta-1 0,1 ; 0,7 2,7 ; 8,2 4,3 Bêta-2 0,2 ; 0,7 6,1 ; 17,8 11,0 

| Gamma | 0,5 ; 1,1 | 2,9 ; 9,6 | 5,2 | 

Exactitude 

L’analyse de 112 échantillons différents, normaux et pathologiques, par électrophorèse sur gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 et sur un autre système en 

gel d’agarose disponible dans le commerce montrent une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse, avec, pour les gammaglobulines, 

une sensibilité de 83,8 % et une spécificité de 98,7 % par rapport à cette dernière technique, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 

1986). Le tableau suivant présente les résultats de régression linéaire, y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 : 

Fraction Coefficient Intersection Pente Limites des % de corrélation avec l’axe y (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albumine 0,989 0,318 1,010 36,1 - 70,8 Alpha-1 0,967 0,009 0,952 1,0 - 10,4 Alpha-2 0,981 0,002 0,985 5,6 - 22,9 Bêta-1 - Bêta-2 0,950 0,475 0,950 9,5 - 22,3 

| Gamma | 0,988 | 0,134 | 0,988 | 5,1 - 28,1 | 

Sensibilité 

Un sérum pathologique avec une protéine monoclonale à 26,8 g/l est dilué en série : migration des dilutions sur gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 et sur 

un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce. Après comparaison à l’oeil nu de chaque gel, la plus forte dilution permettant de voir 

la bande monoclonale est la même dans les deux systèmes de gels (1/128). La plus faible concentration détectée d’une bande monoclonale est donc 

de 0,21 g/l. 

NOTE : Selon la position de la bande monoclonale et le fond polyclonal de la zone des gammaglobulines, le seuil de détection d’une paraprotéine 

peut varier. 

Analyse des urines concentrées 

Les résultats obtenus sur gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 après analyse quantitative et qualitative indiquent une très bonne répétabilité et reproductibilité 

du kit HYDRAGEL 15 & 30 ß1-ß2 pour tous les aspects testés. L’analyse qualitative de 28 échantillons différents par électrophorèse sur gel 

HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 et sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce montre une parfaite corrélation entre les deux 

systèmes d’analyse. La sensibilité de la technique HYDRAGEL 15 & 30 ß1-ß2 pour l’analyse d’urine concentrée est telle que la limite de détection 

d’une paraprotéine urinaire est de l’ordre de 0,24 g/l. 

BIBLIOGRAPHIE 

(1) Brouet J.C. Les cryoglobulinémies. La Presse Médicale, 1983, 12, p. 2991 à 2996. 

(2) Brouet J.C. Orientation diagnostiquée en cas d’anomalies des immunoglobulines plasmatiques (Ig E exclues). La Revue du Praticien, n° 9, 21/03/91, 

p. 782 à 785. 

(3) Garnier J.P., Laurent D., Clauvel J.P., Danon F., Bousquet B., Dreux C. Dosages des protéines sériques : cause d’erreur en cas d’immunoglobuline 

monoclonale. Act. Pharm. Biol. Clin., 1987, 4, p. 275 à 278. 

(4) Guinan J.E.C., Kenny D.F., Gatengy P.A. Detection and typing of paraproteins : comparison of different methods in a routine diagnostic laboratory. 

Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 

(5) Keren D.F., “High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation”, Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 2nd ed., 

1994, 397 pp. 

(6) Le Carrer D. Gammapathies monoclonales : mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 - Première partie : Les techniques de diagnostic 

protéinologique, principes et limites. L’Eurobiologiste, 1991, Tome XXV, n° 194, p. 203 à 212. 

(7) Le Carrer D. Gammapathies monoclonales : mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 - Seconde partie : Diagnostic protéinologique du 

myélome, de la maladie de Waldenström et des autres gammapathies monoclonales. L’Eurobiologiste, 1991, Tome XXV, n° 195, p. 283 à 285. 

(8) Le Carrer D. Intérêt du profil protéique, cible immunitaire en biologie clinique. Revue Française des Laboratoires, 1993. 

(9) Le Carrer D. Électrophorèse et Immunofixation des Protéines Sériques, Interprétations illustrées. Laboratoires SEBIA, 1994, 120 pp. 

(10) Le Carrer D. L’interprétation de l’électrophorèse des protéines. L’Eurobiologiste, 1989 - Tome XXIII, n° 182, p. 27 à 33. 

(11) North M.L. Détection et caractérisation d’une immunoglobuline monoclonale. Revue Française des Laboratoires, Mars 1990, n° 203, p. 54 à 58. 

- 6 -


(12) Peltre G. Électrophorèse, les trois principes de base. Technique et Biologie, 1990, 1, p. 16 à 23. 

(13) Sicard D. Du bon usage de l’électrophorèse des protéines. Le Concours Médical, 05.05.90, 1990, 112, 16, p. 1513 à 1515. 

(14) Van Den Abelle. Électrophorèse des protéines sériques. Intérêt, limites, apport du profil protéique. Larc Medical, 1987, n° 7, Vol VI, p. 348 à 351. 

(15) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. Impact- 

Internat, Septembre 1986. 

(16) Wicher J.T., Spence C.E. Serum protein electrophoresis - An out moded test. Ann. Clin. Biochem., 1987, 24, p. 133 à 139. 

PROFIL ÉLECTROPHORÉTIQUE 

+ 

Albumine 

Orosomucoïde 

α1 Antitrypsine 

α1 Antichymotrypsine 

Ceruloplasmine 

GC Globuline 

α2 Macroglobuline 

Haptoglobine 

α Lipoprotéine 

Transferrine 

Hémopexine 

Plasminogène 

Fibronectine 

β Lipoprotéine 

Complément C3 

γ Globulines 

G - A - M - D - E 

- 

- 7 -


INTENDED USE 

The HYDRAGEL 7, 15 and 30 ß1-ß2 kits are intended for separation of proteins in human serum and urine by electrophoresis on alkaline buffered 

(pH 8.5) agarose gels. By design, the normal serum proteins separate into six major fractions. The kits are used in conjunction with the semi-automated 

HYDRASYS instrument. The separated proteins are stained with amidoblack. The electrophoregrams are interpreted visually for pattern abnormalities. 

Densitometry provides accurate, relative quantification of individual zones. 

Each agarose gel is intended to run: 

• 7 samples in the HYDRAGEL 7 ß1-ß2 kit, 

• 15 samples in the HYDRAGEL 15 ß1-ß2 kit, 

• 30 samples in the HYDRAGEL 30 ß1-ß2 kit. 

For In Vitro Diagnostic Use. 

PRINCIPLE OF THE TEST 1-15 

Protein electrophoresis is a well established technique routinely used in clinical laboratories for screening of serum and other body fluids for protein 

abnormalities. It is based on the principles of zone electrophoresis performed on a suitable support medium. Agarose has been developed into a versatile 

and effective support medium. In routine diagnostic applications, serum proteins are separated into five major fractions (e.g., HYDRAGEL PROTEIN(E) 

kits). When a greater resolution is required, then the proteins can be separated into six major fractions using the HYDRAGEL ß1-ß2 kits : albumin, 

alpha-1 globulins, alpha-2 globulins, beta-1 globulins, beta-2 globulins and gamma globulins. Each zone contains one or more serum proteins. The urine 

protein patterns resemble those of serum. However, the relative intensities of the fractions or their presence may vary greatly depending on the filtration 

capability of the kidney. 

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE HYDRAGEL 7, 15 AND 30 ß1-ß2 KITS 

ITEMS PN 4101 PN 4121 PN 4141 Agarose Gels (ready to use) 10 gels 10 gels 10 gels Buffered Strips (ready to use) 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each Staining solution diluent (stock solution) 1 vial, 60 mL 1 vial, 60 mL 1 vial, 60 mL Amidoblack Stain (stock solution) 1 vial, 20 mL 1 vial, 20 mL 1 vial, 20 mL Applicators (ready to use) 1 pack of 10 (7 teeth) 1 pack of 10 (15 teeth) 2 packs of 10 (15 teeth) 

| Filter Papers | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 

FOR OPTIMAL RESULTS 

All reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions. 

PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY. 

1. AGAROSE GELS 

Preparation 

Agarose gels are ready to use. Each gel contains: agarose, 0.8 g/dL ; Tris-barbital buffer pH 8.5 ± 0.1 ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Agarose gels contain 0.61 % barbital. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! 

Use 

Support medium for protein electrophoresis. 

Storage, stability and signs of deterioration 

Store the gels horizontally in the original protective packaging at room temperature (15 to 30 °C) or refrigerated (2 to 8 °C). They are stable until the 

expiration date indicated on the kit package and the gel package labels. (The arrow on the front of the kit box must be pointing upwards). Avoid storage 

close to a window or to a heat source. Avoid important variation of temperature during storage. 

DO NOT FREEZE. 

Discard when: 

(i) crystals or precipitate form on the gel surface or the gel texture becomes very soft (all these result from freezing the gel), 

(ii) bacterial or mold growth is indicated, 

(iii) abnormal quantity of liquid is present in the gel box (as a result of buffer exudation from the gel due to improper storage conditions). 

2. BUFFERED STRIPS 

Preparation 

Buffered sponge strips are ready to use. Each contains: Tris-barbital buffer pH 8.5 ± 0.3 ; sodium azide ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: The buffer in the strips contains 1.38 % barbital and 0.225 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested consult physician 

immediately ! When disposing, prevent contact with acids, lead or copper, as these are known to form explosive or toxic compounds with 

sodium azide. 

Use 

Buffered strips function as electrophoresis buffer reservoir and ensure contact between the gel and electrodes. 


Store the buffered strips horizontally in the original protective packaging at room temperature or refrigerated. (The arrow on the front of the kit box 

must be pointing upwards). 

They are stable until the expiration date indicated on the kit package or buffered strips package label. 

DO NOT FREEZE. 

Discard buffered strips if the package is opened and the strips dry out. 

- 8 - 

SEBIA INSTRUCTIONS - English


3. STAINING SOLUTION DILUENT 

Preparation 

The stock staining solution diluent must be used as described in paragraph " AMIDOBLACK STAIN ". 

It contains an acidic solution. 

Use 

For the preparation of the amidoblack staining solution. 


Store the stock staining solution diluent at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining 

solution diluent vial labels. DO NOT FREEZE. 

Do not add any sodium azide. 

4. AMIDOBLACK STAIN 

Preparation 

The amidoblack concentrated stain is a visquous solution which may gelify. The integrity of the stock staining solution is not altered by the increase in 

viscosity or solidification. 

In all cases, to obtain a perfect reconstitution of the stain, we advise you to respect the following procedure: 

1. Add 15 mL of stain diluent to the concentrated amidoblack vial. 

2. Close carefully the vial. 

3. Shake very vigorously the vial during approximately 5 seconds. 

4. Pour this solution in the container for staining solution processing. 

5. Repeat this step twice, three times if necessary. 

6. Pour the remaining diluent in the container and complete the volume to 300 mL with distilled or deionized water. 

7. Mix contents of stain cubitainer well for 5 to 10 minutes. 

The staining solution is ready to use. 

NOTE : An incomplete reconstitution of the stain will lead to an under-evaluation of albumin fraction (low percentage or white hole inside the fraction). 

After dilution, the working staining solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; amidoblack, 0.4 g/dL ; ethylene-glycol, 6.7 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels with electrophoretic protein separations. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working staining solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock staining solution 

is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining vial labels. 

Working staining solution is stable for 1 month. 

Do not store the working staining solution close to a heat source. 

5. APPLICATORS 

Use 

Precut, single use applicators for sample application. 

Storage 

Store the applicators in a dry place at room temperature or refrigerated. 

6. FILTER PAPERS 

Use 

Precut, single use, thin absorbent paper pads for blotting excessive moisture off the gel surface before sample application. 

Storage 

Store the thin filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

REAGENTS REQUIRED 

1. DESTAINING SOLUTION 

Preparation 

Each vial of stock Destaining Solution (SEBIA, PN 4540, 10 vials, 100 mL each) to be diluted up to 100 liters with distilled or deionized water. It is 

convenient to dilute only 5 mL of the stock solution to 5 liters, the volume of the destaining solution container. After dilution, the working destaining 

solution contains: citric acid, 0.05 g/dL. 

Use 

For destaining, that is removal of excess and background stain from the gels. 

For rinsing of the staining compartment after wash step. 

To neutralize the acidity of the destaining solution, pour 15 mL of a 50 % solution of Sodium Hydroxide, into the empty waste container. 


Store the stock destaining solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or destaining 

solution vial labels. Working destaining solution is stable for one week at room temperature in a closed bottle. Do not add any sodium azide. 

Discard working destaining solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

To prevent microbial proliferation in the diluted destaining solution to be stored more than one week, add 5 µL/dL of ProClin 300. 

Working destaining solution added with ProClin is stable in a closed bottle at room temperature or refrigerated until the expiration date indicated on the 

kit package or destaining solution vial labels. 

- 9 -


2. HYDRASYS WASH SOLUTION 

Preparation 

Each vial of the stock HYDRASYS Wash Solution (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 mL each) to be diluted up to 5 liters with distilled or deionized water. 

After dilution, the working wash solution contains: alkaline buffer pH 8.8 ± 0.3 ; sodium azide. 

WARNING: The stock wash solution contains 0.625 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Sodium 

azide may lead to formation of explosive or toxic compounds when in contact with acids, lead or copper. Always flush with a large quantity 

of water when disposing. 

Use 

It serves for cleaning of the HYDRASYS Staining Compartment. Use periodically, e.g., if the instrument is used daily, wash the staining compartment 

weekly. 

See the package insert for directions to use. 


Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. They are stable until the expiration date indicated 

on the wash solution vial label. 

Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

3. FLUIDIL 

Preparation 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 mL) is ready to use. 

Use 

To dilute viscous or turbid samples, e.g., sera containing cryoglobulin or cryogel. 


Store at room temperature. It is stable until the expiration date indicated on the Fluidil vial label. 

Fluidil must be free of precipitate. 

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 or PN 1211. 

2. Micropipettor, either manual or automated, such as HYDRAplus SEBIA, PN 1215, for an alternative way of loading the sample applicators. 

3. Wet Storage Chamber, PN 1270, supplied with HYDRASYS. 

4. Container Kit supplied with HYDRASYS. 

5. Pipettes: 10 µL and 200 µL. 

6. Densitometer / scanner capable of scanning 82 x 51 mm or 82 x 102 mm gels at 570 nm or with a yellow filter, e.g., HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

or PHORESIS software for flat-bed scanner. Refer to manufacturer’s instructions for operation and calibration procedures. 

7. Gel holder for half-gels SEBIA, PN 10043110. 

SAMPLES FOR ANALYSIS 

Sample collection and storage 

Fresh serum samples are recommended for analysis. Sera and urine must be collected according to established procedures used in clinical laboratory 

testing. Refrigerate samples (2 to 8 °C) as soon as possible after collection for up to one week. (NOTE : the beta-2 fraction, C3 complement, 

disappears after 3 days). For longer storage periods, keep samples frozen (stable at least one month). 

Freezing serum samples with sodium azide, 0,02 g/dL improves the storage stability. 

Freezing urine samples with HEPES 0.1 M (pH 6.75) and sodium azide, 0,02 g/dL improve the storage stability. 

IMPORTANT: Avoid boric acid as preservative. 

Thawed samples can give slight application marks due to protein or lipoprotein denaturation. Storage at 2 to 8 °C and freezing cause anodic shift 

of beta-lipoproteins from beta-zone to alpha-2 or alpha-1 zones ; the older the serum, the greater the shift. 

Sample preparation 

1. Sera 

Use undiluted serum samples. 

Upon storage at 2 to 8 °C or after freezing, some sera (particularly those containing cryoglobulin or cryogel) may become viscous or develope 

turbidity. Such sera might present application problems due to hindered diffusion through the sample applicator teeth. In such case, add 

25 µL Fluidil to 75 µL serum and vortex for 15 seconds. Then follow the standard procedure. 

2. Concentrated urines 

Analysis is performed on samples previously concentrated to a total protein concentration of about 1.5 - 2.0 g/dL (with an adapted device). 

IMPORTANT: Some urines have a salt content. This can cause a gel deformation during migration and consequently, distortion of the migration 

profiles. If such a distortion makes interpretation inacurate, the urine should be dialyzed to remove the salts. 

Diffusion of urine samples into the applicator tips may be hindered when the urine (neat or concentrated) is turbid. It is 

recommended to remove the particulates by centrifugation (e.g., 10 minutes at 3,000 rpm) or filtration (e.g., 0.45 µm syringe filter). 

Sample to avoid 

• Do not use hemolysed serum samples. Hemolysis increases alpha-2 and beta-zones. 

• Avoid plasma samples. Fibrinogen gives a band close to the application point which might be taken for a monoclonal immunoglobulin and would 

offset percentage of corresponding zone. 

• Avoid aged, improperly stored urine samples where enzymatic degradation of proteins might occur. 

- 10 -


PROCEDURE 

The HYDRASYS system is a semi-automated multi-parameter instrument. The automated steps include processing of HYDRAGEL agarose gels in 

the following sequence: sample application, electrophoretic migration, drying, staining, destaining and final drying. The manual steps include handling 

samples and gels, and setting up the instrument for operation. 

READ CAREFULLY HYDRASYS INSTRUCTION MANUAL. 

I. MIGRATION SET UP 

1. Switch on HYDRASYS instrument. 

2. Place one applicator for HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 samples) and HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 samples), or two applicators for HYDRAGEL 

ß1-ß2 15/30 (30 samples), on a flat surface with the well numbers in the right-side-up position (Fig. 1). 

- Apply 10 µL of neat serum or concentrated urine sample in each welll. Load each applicator within 2 minutes. 

- Place the applicator(s) into the wet storage chamber with the teeth up. [Handle it (them) by the plastic tooth protection frame]. Let the 

samples diffuse into the teeth for 5 minutes after the last sample application. For later use (up to 8 hours), keep the entire chamber under 

refrigeration. 

See wet chamber package insert for further details. 

3. Open the lid of the Migration Module and raise the electrode and applicator carriers. 

WARNING: Never close the lid while the carriers are raised ! 

4. Select «7 B1-B2» migration program for HYDRAGEL 7 ß1-ß2 or «15/30 B1-B2» migration program from the instrument menu (left side of the 

keyboard). 

5. Remove buffered strips from the package ; handle them by the plastic ends. Engage the punched ends of the strip's plastic backing to the pins 

on the electrode carrier ; the strip's plastic backing must face the carrier (Fig. 2). 

6. Unpack the HYDRAGEL plate. 

- Roll quickly and uniformly one thin filter paper onto the gel surface to absorb the excess of liquid. Remove the paper immediately. 

WARNING: Do not leave the filter paper for a too long contact with the gel to avoid its dehydration. 

- Pool 120 µL of distilled or deionized water for HYDRAGEL 7 ß1-ß2, or 200 µL for HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, on the lower third of the frame 

printed on theTemperature Control Plate of the migration module. 

- Place the gel plate (the gel side up) with its edge against the stop at the bottom of the printed frame (Fig. 3). 

- Bend the gel and ease it down onto the water pool (Fig. 3). Ensure that no air bubbles are trapped, water is spread underneath the entire 

gel plate and the gel is lined up with the printed frame. 

7. Lower both carriers down. In this position the buffered strips do not touch the gel. DO NOT FORCE THE CARRIERS ALL THE WAY DOWN. 

8. Remove the applicator(s) from the wet chamber. Handle it (them) by the protection frame. 

- Snap off the applicator teeth's protection frame. 

- For 7 and 15 samples analysis, place the aplicator into position No 6 on the carrier. 

- For 30 samples analysis, place the two applicators each into position No 3 and 9. 

IMPORTANT: The numbers printed on the applicator(s) must face the operator (Fig. 4). 

9. Close the lid of the migration module. 

10. Start the procedure immediately by pressing the green arrow «START» key on the left side of the keyboard. 

IMPORTANT: Make sure that the ventilation air inlet on the right side of the instrument is not blocked. 

MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The two carriers are lowered so that buffered strips and applicator(s) contact the gel surface. 

• Sample applicator carrier rises up. 

• Migration is carried out under 10 W constant for HYDRAGEL 7 ß1-ß2 or 20 W constant for HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, at 20 °C controlled by Peltier 

effect, until 36 Vh have accumulated, for about 7 minutes. 

• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• The temperature of the control plate rises to 65 °C for 10 minutes to dry the gel. 

• The control plate is cooled down ; when it reaches 50 °C, an audible beep signals that the migration module lid unlocks. The plate temperature 

remains at 50 °C until the lid is opened. Then, the temperature keeps decreasing until it reaches 20 °C (in less than 5 minutes) after which a new 

migration run may start. 

NOTE: The migration module lid remains closed during all migration steps. 

II. GEL PROCESSING SET-UP 

1. Open the lid. 

2. Remove the applicator(s) and discard. 

3. Raise both carriers, remove the buffered strips by their plastic ends and discard. 

4. Remove the dried gel film for further processing. 

5. After each use, wipe the electrodes and the temperature control plate with a soft wet tissue. 

6. Open the Gel Holder. Lay it flat and position the dried gel (with gel side facing up) into the grooves of the two rods and close the holder. Make 

sure that the film is correctly positioned inside the holder (Fig. 5). 

7. Place the gel holder into the Gel Processing / Staining Module. 

IMPORTANT: Before starting the gel processing / staining program, check the following: 

- the staining container is filled with 300 mL of staining solution ; 

- the destaining container contains at least 1 liter of destaining solution ; 

- the waste container is empty. 

For reagent line connection: refer to the information displayed on the screen of the instrument (select key: REAGENT LINES). 

IMPORTANT: Do not forget to block up the unused lines. 

8. Select «PROT./B1-B2/Hb» staining program from the instrument menu and start the run by pressing the «START» key (green arrow on the 

right side of the keyboard). 

During staining, destaining and drying steps, the compartment remains locked. 

After cooling step, an audible beep signals that the compartment unlocks (the ventilation is maintained until the gel holder is removed). 

- 11 -


III. GEL PROCESSING COMPLETION 

1. Remove the gel holder from the compartment, open it and remove the dried gel. 

NOTE : After gel staining / destaining and before densitometry / scanning, a gel may be put through an additional wash step, if needed, to 

further clarify the gel background and to remove any residual stain that may appear as blue spots. Wash the gel using the " WASH 

ISOENZ/GEL " program. 

2. If needed, clean the back side (the plastic support side) of the dry film with a damp soft paper. 

3. Scan using a densitometer / scanner at 570 nm or with a yellow filter. 

NOTE : The lengths of electrophoretic migrations may be slightly different with gels containing 2 or 3 analysis rows, without any adverse effects 

on performance. 

RESULTS 

Quality control 

It is advised to include an assayed control serum (Control Serum, SEBIA PN 4785) into each run of samples. 

Values 

Densitometer scanning (at 570 nm or with a yellow filter) of stained electrophoregrams yields relative concentrations (percentages) of individual protein 

zones. 

Normal values (mean ± 2 SD) for individual major electrophoretic serum protein zones on HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels in the HYDRASYS system 

have been established from a healthy population of 136 adults (men and women). 

The protein quantification in UV on CAPILLARYS gives similar values to nephelometric procedure (especially for albumin). SEBIA proposes a 

HYDRAGEL - CAPILLARYS/NEPHELOMETRIC Equivalency of values obtained on HYDRAGEL after calibration of scanning systems. 

Without HYDRAGEL With HYDRAGEL CAPILLARYS/NEPHELOMETRIC CAPILLARYS/NEPHELOMETRIC Equivalency Values Equivalency Values FRACTION HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumin 60.3 - 72.8 % 54.3 - 65.5 % Alpha-1 globulins 1.0 - 2.6 % 1.2 - 3.3 % Alpha-2 globulins 7.2 - 11.8 % 8.3 - 15.0 % Beta-1 globulins 5.6 - 9.1 % 6.5 - 11.5 % Beta-2 globulins 2.2 - 5.7 % 2.5 - 7.2 % 

| Gamma globulins | 6.2 - 15.4 % | 7.1 - 19.5 % | 

It is recommended each laboratory establishes its own normal values. 

Interpretation 1-15 

As an aid in interpretation of serum and urine protein electrophoregrams, see BIBLIOGRAPHY. 

Some serum samples may show a small, fairly sharp band corresponding to a component of C3 complement that migrates cathodic to the Beta-2 

zone. See MIGRATION PATTERN. 

Interference and Limitations 

See SAMPLES FOR ANALYSIS. 

Due to the resolution and sensitivity limits of zone electrophoresis, it is possible that some monoclonal components may not be detected with this 

method. 

Troubleshooting 

Call Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instruction for the preparation and storage of materials, and for the 

procedure were carefully followed. 

Kit reagent Safety Data Sheets and informations on waste products elimination are available from the Technical Service of the supplier. 

PERFORMANCE DATA 

Reproducibility within gel and run 

Three (3) different serum samples each were run in 28 tracks on a HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gel from each of the 2 lots tested. The means, SD and 

CV (n = 28) were calculated for each sample, each zone and each gel/lot. The table shows the values for sample A from the two gels/lots tested. 

Similar results were obtained for samples B and C. 

ZONE MEAN (%) SD CV (%) Albumin 50.8 ; 51.5 0.8 ; 1.3 1.6 ; 2.5 Alpha 1 2.9 ; 2.9 0.1 ; 0.1 3.2 ; 3.7 Alpha 2 8.8 ; 8.7 0.1 ; 0.2 1.2 ; 2.8 Beta 1 8.6 ; 8.2 0.3 ; 0.2 4.0 ; 2.2 Beta 2 5.3 ; 5.4 0.2 ; 0.5 4.4 ; 8.5 

| Gamma | 24.1 ; 23.3 | 0.4 ; 0.6 | 1.7 ; 2.4 | 

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Reproducibility between gels and runs 

Fifteen (15) different serum samples were run on one gel each from two lots of HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels for five consecutive days. Each sample 

was applied in two tracks on each gel (upper and lower row). The daily and total means, SD and CV were calculated for each sample and each zone. 

The results were essentially the same for all samples and both lots. The following example shows the ranges of SD and CV calculated for individual 

samples over the period of 5 days and the mean CV calculated from the pooled CV’s for all samples and days and one lot (n = 150). 

ZONE SD CV (%) MEAN CV (%) Albumin 0.3 ; 2.1 0.5 ; 3.2 1.4 Alpha 1 0.1 ; 0.2 3.3 ; 10.2 4.8 Alpha 2 0.1 ; 0.3 1.2 ; 6.0 2.8 Beta 1 0.1 ; 0.7 2.7 ; 8.2 4.3 Beta 2 0.2 ; 0.7 6.1 ; 17.8 11.0 

| Gamma | 0.5 ; 1.1 | 2.9 ; 9.6 | 5.2 | 

Accuracy 

Pathological and normal serum samples (n = 112) were run on HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels and HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels. The 

correlation parameters calculated for individual zones from the pooled data for HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels vs. The comparative gel systems 

(y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) were : 

ZONE Correlation Coefficient y-Intercept Slope Range of % Values (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albumin 0.989 0.318 1.010 36.1 - 70.8 Alpha 1 0.967 0.009 0.952 1.0 - 10.4 Alpha 2 0.981 0.002 0.985 5.6 - 22.9 Beta 1 - Beta 2 0.950 0.475 0.950 9.5 - 22.3 

| Gamma | 0.988 | 0.134 | 0.988 | 5.1 - 28.1 | 

Sensitivity 

Serial dilutions of two serum samples, each with a monoclonal protein, were electrophoresed on HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels. The highest dilution 

with a discernible monoclonal band corresponded to 44 and 21 mg/dL of the monoclonal protein for the two samples, respectively. 

NOTE : According to the position of the monoclonal component and polyclonal background in the gamma zone, the detection limit may vary. 

Concentrated urines analysis 

Results obtained with HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels indicate a very good reproducibility within and between runs for concentrated urines samples after 

quantitative and qualitative analysis. Twenty eight (28) different samples (pathological and normal urines) were run on HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels 

and another commercially available agarose gel system. There were no visually detectable differences among the two systems. The sensitivity of 

detection was determined from the highest serial dilutions of a monoclonal urinary protein giving a discernible band at 0.024 g/dL. 

BIBLIOGRAPHY 


(2) Brouet J.C. Orientation diagnostiquée en cas d’anomalies des immunoglobulines plasmatiques (Ig E exclues). La Revue du Praticien, n° 9, 

21/03/91, p. 782 à 785. 

(3) Garnier J.P., Laurent D., Clauvel J.P., Danon F., Bousquet B., Dreux C. Dosages des protéines sériques : cause d’erreur en cas 

d’immunoglobuline monoclonale. Act. Pharm. Biol. Clin., 1987, 4, p. 275 à 278. 


Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 

(5) Keren D.F., “High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation”, Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

2nd ed., 1994, 397 pp. 

(6) Le Carrer D. Gammapathies monoclonales : mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 - Première partie : Les techniques de 

diagnostic protéinologique, principes et limites. L’Eurobiologiste, 1991, Tome XXV, n° 194, p. 203 à 212. 

(7) Le Carrer D. Gammapathies monoclonales : mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 - Seconde partie : Diagnostic protéinologique 

du myélome, de la maladie de Waldenström et des autres gammapathies monoclonales. L’Eurobiologiste, 1991, Tome XXV, n° 195, p. 283 à 285. 








(15) Wicher J.T., Spence C.E. Serum protein electrophoresis - An out moded test. Ann. Clin. Biochem., 1987, 24, p. 133 à 139. 

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MIGRATION PATTERN 

+ 

Albumin 

Orosomucoid 

α1 Antitrypsin 

α1 Antichymotrypsin 

Ceruloplasmin 

GC Globulin 

α2 Macroglobulin 

Haptoglobin 

α Lipoprotein 

Transferrin 

Hemopexin 

Plasminogen 

Fibronectin 

β Lipoprotein 

C3 Complement 

γ Globulins 

G - A - M - D - E 

- 

- 14 -


ANWENDUNGSBEREICH 

Die gelen HYDRAGEL 7 ß1-ß2 und HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 dienen zur elektro-phoretischen Auftrennung von Proteinen in Humanserum und Urin 

auf Agarosegelen in alka-lischem Puffer (pH-Wert 8,5). Die normalen Serumproteine werden in sechs Hauptfraktionen getrennt und mit Amidoschwarz 

gefärbt. Die Kits wurden für das halbautomatische Elektrophoresegerät HYDRASYS entwickelt. 

Die Auswertung der Elektropherogramme kann entweder qualitativ durch visuellen Vergleich oder für eine exakte relative Quantifizierung (%) der 

einzelnen Fraktionen durch Densitometrie erfolgen. 

Pro Agarosegel 

• des HYDRAGEL 7 ß1-ß2 Kits können 7 Proben, 

• des HYDRAGEL 15 ß1-ß2 Kits können 15 Proben, 

• des HYDRAGEL 30 ß1-ß2 Kits können 30 Proben, 

analysiert werden. 

In-vitro-Diagnostikum. 

TESTPRINZIP 1-16 

Die Proteinelektrophorese ist eine weit verbreitete Technik, die in klinischen Labors routinemäßig für das Screening von Serum und anderen 

Körperflüssigkeiten auf Proteinanomalien verwendet wird. Sie basiert auf dem Prinzip der Zonenelektrophorese, die auf einem geeigneten 

Trägermedium durchgeführt wird. Agarose erwies sich als ein vielseitig einsetz-bares und effektives Trägermaterial. Für die meisten diagnostischen 

Anwendungen wird das herkömmliche Serumproteinmuster mit fünf Banden (z.B. HYDRAGEL PROTEIN Kits) genutzt. Ist eine bessere Auflösung 

erforderlich, können die Proteine in sechs Hauptfraktionen mit den HYDRAGEL ß1-ß2 Kits getrennt werden: Albumin, Alpha-1-Globuline, Alpha-2- 

Globuline, Beta-1-Globuline, Beta-2-Globuline und Gammaglobuline. Jede Zone enthält ein oder mehrere Serumproteine. Die Urinproteinmuster 

ähneln den Serumproteinmustern. Dennoch kann die relative Intensität der Urinfraktionen beträchtlich variieren, weil sie jeweils von der 

Filtrationskapazität der Nieren abhängt. 

IN DEN KITS HYDRAGEL 7, 15 UND 30 ß1-ß2 ENTHALTENE REAGENZIEN UND MATERIALIEN 

BEZEICHNUNG BESTELL-NR. 4101 BESTELL-NR. 4121 BESTELL-NR. 4141 Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele 10 Gele 10 Gele Pufferstreifen (gebrauchsfertig) 10 Pack zu 2 Stück 10 Pack zu 2 Stück 10 Pack zu 2 Stück Verdünnungslösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 60 ml 1 Fläschchen, 60 ml 1 Fläschchen, 60 ml Amidoschwarz-Färbelösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 20 ml 1 Fläschchen, 20 ml 1 Fläschchen, 20 ml Applikatoren (gebrauchsfertig) 1 Pack zu 10 Stück 1 Pack zu 10 Stück 2 Packs zu 10 Stück 

| Filterpapier | 1 Pack zu 10 Stück | 1 Pack zu 10 Stück | 1 Pack zu 10 Stück | 

FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE 

Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden. 

BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN. 

1. AGAROSEGELE 

Vorbereitung 

Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält: Agarose, 8 g/l ; Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 8,5 ± 0,1 ; Additiva zur Optimierung der Leistung, 

in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Die Agarosegele enthalten 0,61 % Barbital. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt 

aufsuchen! 

Gebrauch 

Hilfsmedium für die Proteinelektrophorese. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall 

Gele waagerecht in der Originalverpackung bei Raumtemperatur (15 bis 30 °C) oder im Kühlschrank (2 bis 8 °C) aufbewahren. (Der Pfeil auf der 

Vorderseite der Kit-Schachtel muß nach oben zeigen.) Eine Lagerung in der Nähe eines Fensters oder einer Hitzequelle ist zu vermeiden. Starke 

Temperaturschwankungen sind zu vermeiden. NICHT EINFRIEREN. 

Sie bleiben bis zum Verfalldatum stabil, das auf dem Etikett der Kit- oder Gelverpackung angegeben ist. 

Das Gel ist zu verwerfen bei: 

(i) Kristallen oder Niederschlag auf der Geloberfläche oder sehr weicher Gelstruktur (was darauf hindeutet, daß das Gel gefroren war) ; 

(ii) Bakterien- oder Schimmelpilzbildung ; 

(iii) einer ungewöhnlich stark ausgeprägten Flüssigkeitsansammlung in der Gel-Box (was auf einen Austritt von Puffer aus dem Gel aufgrund 

unsachgemäßer Lagerung hindeutet). 

2. PUFFERSTREIFEN 

Vorbereitung 

Die als Streifen vorliegenden Pufferschwämme sind gebrauchsfertig. Jeder Pufferstreifen enthält: Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 8,5 ± 0,3 ; Natriumazid; 

Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Der im Streifen enthaltene Puffer enthält 1,38 % Barbital und 0,225 % Nakiumazid. Nicht einnehmen! Nach dem 

versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! Darf bei der Entsorgung nicht mit Säuren, Blei oder Kupfer in Kontakt kommen, da 

sich sonst explosive bzw. toxische Natriumazidverbindungen bilden können. 

Gebrauch 

Die Pufferstreifen fungieren als Elektrophoresepufferreservoir und gewährleisten den Kontakt zwischen dem Gel und den Elektroden. 

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SEBIA ARBEITSANLEITUNG - Deutsch



Bewahren Sie die Pufferstreifen waagerecht liegend in der Original-Schutzverpackung bei Zimmertemperatur oder gekühlt auf. (Der Pfeil auf der 

Verpackungsschachtel muss nach oben zeigen.) Die Pufferstreifen sind bis zum angegebenen Verfallsdatum auf der Schachtel oder auf dem Etikett 

der Streifen stabil. 

NICHT EINFRIEREN! 

Verwerfen Sie die Pufferstreifen, wenn die Verpackung geöffnet ist und die Streifen ausgetrocknet sind. 

3. VERDÜNNUNGSLÖSUNG 

Vorbereitung 

Die Amidoschwarz-Verdünnungslösung ist wie im Abschnitt “Amidoschwarz-Färbelösung” beschrieben zu verwenden. 

Die Lösung enthält Zitronensäure. 

Gebrauch 

Zum Herstellen der Amidoschwarz-Färbelösung. 


Konzentrierte Verdünnungslösung im Kühlschrank oder bei Raumtemperatur aufbewahren. Die Lösung ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem 

Kit oder auf dem Flaschenetikett) haltbar. NICHT EINFRIEREN! 

Geben Sie kein Natriumazid zu. 

4. AMIDOSCHWARZ FÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Das Amidoschwarz Färbekonzentrat ist eine hochviskose Flüssigkeit deren Viskosität sich durch Lagerung verändern kann. Die Qualität des 

Färbekonzentrats wird durch höhere Viskosität nicht beeinträchtigt. 

Bitte beachten Sie die folgende Anleitung zum Herstellen der Färbelösung : 

1. 15 ml der Verdünnungslösung zu dem Amidoschwarz Färbekonzentrat geben. 

2. Die Färbekonzentrat Flasche fest verschließen. 

3. Die Flasche für etwa 5 Sekunden kräftig schütteln. 

4. Den Inhalt der Flasche in den Färbecontainer des HYDRASYS überführen. 

5. Schritt 1 – 4 zwei- bis dreimal wiederholen. 

6. Die restliche Verdünnungslösung in den Färbecontainer überführen und mit destilliertem oder deionisiertem Wasser auf 300 ml Gesamtvolumen 

auffüllen. 

7. Den Inhalt des Färbecontainers 5 – 10 Minuten mischen. 

Im Anschluss daran ist die Färbelösung gebrauchsfertig. 

ACHTUNG: Eine unvollständige Lösung des Amidoschwarz Konzentrats kann zu einer Unterbestimmung der Albuminfraktion und/oder zu 

Auslöscheffekten der Albuminfraktion führen. 

Nach der Verdünnung enthält die Färbelösung: Zitronensäurelösung pH ≈ 2 ; 0,4 g/dl Amidoschwarz ; 6,7% Ethylenglycol ; zusätzliche Additive zur 

Optimierung (ungiftig in den verwendeten Konzentrationen). 

WARNUNG: Nicht verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Agarose Gele nach elektrophoretischer Trennung. 

WICHTIG: Die Färbelösung ist für maximal 10 Färbungen konzipiert. Wechseln Sie deshalb die Färbelösung nach 10 Färbungen aus. 


Amidoschwarz- Konzentrat und verdünnte Färbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank verschlossen aufbewahren um Flüssigkeitsverlust 

durch Verdunstung zu vermeiden. Das Amidoschwarz-Konzentrat ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem Kit oder auf dem Flaschenetikett) 

haltbar. 

Verdünnte Färbelösung ist einen Monat haltbar. 

Die gebrauchsfertige Färbelösung nicht neben einer Wärmequelle aufbewahren. 

5. APPLIKATOREN 

Gebrauch 

Einmalapplikatoren für den Probenauftrag. 

Lagerung 

Applikatoren vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

6. FILTERPAPIER 

Gebrauch 

Dünnes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten überschüssiger Flüssigkeit von der Gel-oberfläche vor dem Probenauftrag. 

Lagerung 

Dünnes Filterpapier, vor Feuchtigkeit geschützt, bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank lagern. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE REAGENZIEN 

1. ENTFÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte Entfärbelösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4540, 10 Fläschchen zu je 100 ml) mit destilliertem oder entionisiertem 

Wasser auf 100 Liter auffüllen. Es empfiehlt sich, nur 5 ml konzentrierte Lösung auf 5 Liter, dem Fassungsvermögen des Behälters für die 

Entfärbelösung, aufzufüllen. Verdünnte Entfärbelösung enthält: Zitronensäure, 0,5 g/l. 

Gebrauch 

Zum Entfärben, d.h. Auswaschen von überschüssiger Farbe und zur Entfernung der Gelhintergrundfärbung. 

Zum Spülen der Färbekammer nach dem Waschen. 

Zur Neutralisation der sauren Entfärbelösung können 15 ml einer 50 % Natronlauge (NaOH) in den leeren Abfallbehälter gefüllt werden. 


Konzentrierte Entfärbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit- 

Verpackung oder auf dem Fläschchenetikett der Entfärbelösung angegeben ist. Verdünnte Entfärbelösung bleibt bei Raumtemperatur in einem 

verschlossenen Behälter eine Woche stabil. Kein Natriumazid zugeben. 

- 16 -


Verdünnte Entfärbelösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

Um mikrobielles Wachstum in der verdünnten Entfärbelösung zu verhindern, wenn sie länger als 1 Woche aufgehoben wird, sollten 

50 µl/l ProClin 300 zugesetzt werden. 

Die mit ProClin versetzte, gebrauchsfertige Entfärbelösung ist in der verschlossenen Flasche bei Zimmertemperatur oder gekühlt bis zum Verfallsdatum 

stabil, das auf der Verpackung oder auf den Flaschenetiketten angegeben ist. 

2. HYDRASYS WASCHLÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte HYDRASYS Waschlösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4541, 10 Fläschchen zu je 80 ml) mit destilliertem oder 

entionisiertem Wasser auf 5 Liter auffüllen. Verdünnte Waschlösung enthält: alkalischen Puffer, pH-Wert 8,8 ± 0,3 ; Natriumazid. 

WARNHINWEIS: Konzentrierte Waschlösung enthält 0,625 % Natriumazid. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort 

den Arzt aufsuchen! Natriumazid kann bei Kontakt mit Säuren, Blei oder Kupfer zu explosiven bzw. toxischen Verbindungen reagieren. Bei 

der Entsorgung stets mit reichlich Wasser nachspülen. 

Gebrauch 

Sie wird zum Reinigen des HYDRASYS Färbemoduls eingesetzt. Die Reinigung in regelmäßigen Abständen durchführen: Wird das Gerät zum Beispiel 

täglich genutzt, sollte das Färbemodul einmal pro Woche gereinigt werden. 

Hinweise zum Gebrauch finden Sie auf der Packungsbeilage. 


Konzentrierte und verdünnte Waschlösung in geschlossenen Behältern bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf dem Fläschchenetikett der Waschlösung angegeben ist. 

Verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

3. FLUIDIL 

Vorbereitung 

Fluidil (SEBIA, Bestell-Nr. 4587, 5 ml) ist gebrauchsfertig. 

Gebrauch 

Zum Verdünnen zähflüssiger oder trüber Proben, z.B. von Kryoglobulin- oder Kryogel-haltigen Seren. 


Bei Raumtemperatur aufbewahren. Es bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf Kit-Verpackung oder auf dem Fluidil-Fläschchenetikett angegeben ist. 

Fluidil darf kein Präzipitat aufweisen. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE AUSSTATTUNG 

1. HYDRASYS System, SEBIA, Bestell-Nr. 1210 oder Nr. 1211. 

2. Für das Beladen der Applikatoren kann alternativ eine manuelle Mikropipette oder der Pipettierautomat HYDRAplus SEBIA, Bestell-Nr. 1215, 

verwendet werden. 

3. Feuchte Kammer, Bestell-Nr. 1270, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

4. Behälter-Kit, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

5. Pipetten: 10 µl und 200 µl. 

6. Densitometer / Scanner für das Scannen von 82 x 51 mm oder 82 x 102 mm großen Gelen bei 570 nm oder unter Verwendung eines Gelbfilters, 

z.B. HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA oder PHORESIS Software für Flachbettscanner. Hinweise zur Bedienung und Kalibration entnehmen Sie bitte 

der Bedienungsanleitung des Herstellers. 

7. Gel-Halter für halbe Gele, SEBIA, Bestell-Nr. 10043110. 

PROBEN FÜR DIE ANALYSE 

Probensammlung und -lagerung 

Für die Analyse wird frisches Probenmaterial empfohlen. Die Gewinnung von Serum und Urin nach einem gebräuchlichen Verfahren für klinische Tests 

durchführen. Die Proben sollten nach der Gewinnung umgehend bei 2 - 8 °C gekühlt und können bis zu eine Woche gelagert werden. (HINWEIS: die 

Beta-2-Fraktion und C3 Complement verschwinden nach 3 Tagen). Bei längerer Lagerung die Proben einfrieren. Durch einfaches Einfrieren bleiben 

die Proben für mindestens einen Monat. 

Die Lagerstabilität gefrorener Serum erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit Natriumazid, 0,2 g/l, versetzt werden. 

Die Lagerstabilität gefrorener Urin erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit HEPES, 0,1 M (pH-Wert 6,75), und Natriumazid, 0,2 g/l, versetzt werden. 

WICHTIG: Keine Borsäure als Konservierungsmittel verwenden. 

Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Protein- bzw. Lipoprotein-denaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

Durch die Lagerung bei 2 - 8 °C und das Einfrieren der Proben kommt es zu einer anodischen Verschiebung der Beta-Lipoproteine von der 

Beta–1–Zone zur Alpha-2- bis hin zur Alpha-1-Zone ; je älter die Proben sind, desto größer ist die Verschiebung. 

Probenvorbereitung 

1. Serumproben 

Unverdünnte Serumproben verwenden. Nach der Lagerung im Kühl- oder Gefrierschrank können manche Serumproben (insbesondere 

Kryoglobulin- oder Kryogel-haltige Proben) zähflüssig oder trüb werden. Derartige Serumproben lassen sich mitunter schwer auftragen, da sie 

kaum durch die Zähne des Probenapplikators diffundieren. In diesen Fällen zu 75 µl Serum 25 µl Fluidil zugeben und für 15 Sekunden im 

Rotationsmischer mischen. Anschließend mit dem Standardverfahren fortfahren. 

2. KonzentrierteUrinproben 

Wird die analyse an Urinproben durchgefürt, die (mit einen geeigneten verfahren) bis zu einem gehalt von 15 - 20 g/l konzentriert wurden. 

WICHTIG: Einige Urinproben sind stark salzhaltig. Dardurch kann es während der Migration zur einer Deformation des Gels und damit zur einer 

Verzerrung der Elektrophoresemuster kommen. Dies läßt sich durch Entfernen des Salzanteils mittels Dialyse vermeiden. 

Die Diffusion der Urinproben in die Applikatorspitzen kann behindert sein, wenn der Urin (nativ oder konzentriert) trüb ist. Es wird 

empfohlen, die Partikel durch Zentrifugation (z.B. 10 Minuten bei 3.000 Upm) oder Filtration (z.B. 0,45 µm Filter) zu entfernen. 

Folgende Proben nicht verwenden 

• Keine hämolysierten Proben verwenden, weil durch die Hämolyse die Alpha-2- und Beta-Fraktionen erhöht werden. 

• Plasmaproben vermeiden. Das Fibrinogen ergibt eine Bande in der Nähe der Auftragstelle, die mit monoklonalem Immunglobulin verwechselt 

werden könnte und durch Überlagerung zu einer Verfälschung des prozentualen Anteils einer dort vorhandenen Fraktion führen würde. 

• Keine zu alten oder ungeeignet gelagerte Urinproben verwenden, weil ein enzymatischer Abbau der Proteine auftreten könnte. 

- 17 -


DURCHFÜHRUNG 

Das HYDRASYS System ist ein halbautomatisches Multiparameter-Gerät, das eine automatische Bearbeitung der HYDRAGEL Agarosegele in der 

nachstehenden Reihenfolge durchführt: Probenapplikation, elektrophoretische Migration, Trocknen, Färben, Entfärben und Endtrocknen. Zu den 

manuellen Schritten gehört die Handhabung der Proben und Gele sowie die Bedienung des Geräts. 

DIE BEDIENUNGSANLEITUNG ZUM HYDRASYS SYSTEM AUFMERKSAM DURCHLESEN. 

I. VORBEREITUNG DER MIGRATION 

1. HYDRASYS einschalten. 

2. Bei Verwendung von HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 Proben) bzw. HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 Proben) einen oder bei Verwendung von HYDRAGEL 

ß1-ß2 15/30 (30 Proben) zwei Probenapplikatoren so auf eine ebene Unterlage legen, daß die Nummern (Vertiefungen) nach oben zeigen 

(siehe Abb. 1). 

- In jede Vertiefung des Applikators 10 µl unverdünntes Serum oder aufkonzentrierten Urin geben. Jeder Applikator sollte innerhalb von zwei 

Minuten beladen werden. 

- Den/die Applikator(en) mit den Zähnen nach oben in die feuchte Kammer legen (nur am Schutzrahmen für die Zähne anfassen). Die Proben 

nach dem Auftragen der letzten Probe 5 Minuten lang in die Zähne einziehen lassen. Erfolgt die Anwendung erst (bis zu 8 Stunden) später, 

die komplette Kammer in den Kühlschrank stellen. 

Hinweise hierzu finden Sie in der Packungsbeilage zur feuchten Kammer. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen, und die Elektroden-/Applikatoren-Halter nach oben klappen. 

WARNHINWEIS: Die Abdeckung bei hochgestelltem Elektroden-/Applikatoren-Halter nicht schliessen! 

4. Bei Verwendung von HYDRAGEL 7 ß1-ß2 im Gerätemenü das Programm «7 B1-B2» und bei Verwendung von HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 das 

Programm «15/30 B1-B2» wählen (an der Tastatur links). 

5. Die Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus der Packung nehmen. Die Perforation des Plastikfilms in die Stifte des Elektroden-Halters 

einführen. Die Plastikfolie muß dabei zum Applikator-Halter zeigen (siehe Abb. 2). 

6. Das Gel aus der Verpackung nehmen. 

- Ein dünnes Filterpapier vorsichtig und gleichmäßig auf die Oberfläche legen um überschüssige Feuchtigkeit zu entfernen. Das Filterpapier 

sofort wieder entfernen. 

WARNUNG: Das Filterpapier nicht zu lange auf dem Gel lassen, um ein Austrocknen des Gels zu verhindern. 

- Für HYDRAGEL 7 ß1-ß2 120 µl und für HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 200 µl destilliertes oder entionisiertes Wasser in das untere Drittel des 

Rahmens geben, der auf der Peltier-Platte des Migrationsmoduls aufgedruckt ist. 

- Das Gel (mit der Gelseite nach oben) an die untere Kante des aufgedruckten Rahmens anlegen (siehe Abb. 3). 

- Das Gel biegen und auf dem Wasser abrollen (siehe Abb. 3). Darauf achten, daß keine Luftblasen eingeschlossen werden, das Wasser 

unter der gesamten Gelplatte verteilt ist und das Gel am aufgedruckten Rahmen anliegt. 

7. Beide Halter nach unten klappen. In dieser Position dürfen die Pufferstreifen keinen Kontakt mit dem Gel haben. DIE HALTER NICHT MIT 

GEWALT BIS GANZ NACH UNTEN DRÜCKEN. 

8. Den/die Applikator(en) aus der feuchten Kammer nehmen. Dabei nur am Schutzrahmen anfassen. 

- Den Schutzrahmen für die Zähne entfernen. 

- Bei Verwendung von HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 Proben) und HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 Proben) den Applikator an Position 6 auf dem Halter 

einsetzen. 

- Bei Verwendung von HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 Proben) je einen Applikator an Position 3 und 9 einsetzen. 

WICHTIG: Die auf dem/den Applikator(en) aufgedruckten Ziffern müssen immer zum Bediener zeigen (siehe Abb. 4). 

9. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

10. Die Migration sofort starten. Dazu die grüne Pfeiltaste «START» auf der linken Seite der Tastatur drücken. 

WICHTIG: Darauf achten, daß die Lüftungsschlitze an der rechten Geräteseite nicht verdeckt sind. 

MIGRATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Die beiden Halter werden soweit gesenkt, daß die Pufferstreifen und der/die Applikator(en) in Kontakt mit der Geloberfläche kommen. 

• Der Probenapplikator-Halter wird angehoben. 

• Die Migration erfolgt für HYDRAGEL 7 ß1-ß2 unter Anlegen eines Gleichstroms von 10 W oder für HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 unter Anlegen eines 

Gleichstroms von 20 W bei einer Temperatur von 20 °C, die durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten wird, bis 36 Vh erreicht sind (nach etwa 

7 Minuten). 

• Der Elektroden-Halter wird angehoben, wodurch der Kontakt zu den Elektroden unterbrochen wird. 

• Zum Trocknen des Gels wird die Temperatur der Peltier-Platte für 10 Minuten auf 65 °C erhöht. 

• Die Platte kühlt ab. Sobald 50 °C erreicht sind, ertönt ein akustisches Signal, um den Bediener darauf aufmerksam zu machen, daß sich die 

Abdeckung des Migrationsmoduls entriegelt. Bis zum Öffnen der Abdeckung wird die Temperatur der Platte auf 50 °C gehalten. Anschließend sinkt 

die Temperatur (in weniger als 5 Minuten) auf 20 °C. Nun kann eine weitere Migration durchgeführt werden. 

HINWEIS: Während der Migration bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

II. VORBEREITUNG DER GELBEARBEITUNG 

1. Die Abdeckung öffnen. 

2. Den/die Applikator(en) herausnehmen und verwerfen. 

3. Beide Halter anheben, die Pufferstreifen an den Plastikenden herausnehmen und verwerfen. 

4. Das Gel für die weitere Bearbeitung herausnehmen. 

5. Die Elektroden und die Peltier-Platte mit einem feuchten Papiertuch abwischen. 

6. Den Gel-Halter öffnen und flach hinlegen. Das getrocknete Gel (mit der Gelseite nach oben) in die Ausfräsung des Gel-Halters einsetzen, und 

den Gel-Halter schließen. Darauf achten, daß das Gel im Halter korrekt positioniert ist (siehe Abb. 5). 

7. Den Gel-Halter in das Gelbearbeitungs-/Färbemodul einsetzen. 

WICHTIG: Vor dem Start des Gelbearbeitungs-/Färbeprogramms überprüfen, daß: 

- der Färbelösungsbehälter 300 ml Färbelösung enthält ; 

- der Entfärbelösungsbehälter mindestens 1 Liter Entfärbelösung enthält ; 

- der Abfallbehälter leer ist. 

- 18 -


Hinweise zum Anschluß an die Reagenzkanäle werden am Monitor des Gerätes angezeigt (drücken Sie dazu die Taste KANAELE). 

WICHTIG: Nicht vergessen, die nicht benötigten Kanäle zu blockieren. 

8. Im Gerätemenü das Färbeprogramm «PROT./B1-B2/Hb» wählen, und den Vorgang durch Drücken der «START»-Taste (grüner Pfeil auf der 

rechten Seite der Tastatur) starten. 

Während der Färbe-, Entfärbe- und Trocknungsschritte bleibt das Färbemodul verriegelt. 

Nach einer Abkühlphase des Moduls ertönt ein akustisches Signal, und das Färbemodul entriegelt sich (die Luftkühlung erfolgt solange, bis 

der Gel-Halter entnommen wird). 

III. ABSCHLUSS DER GELBEARBEITUNG 

1. Den Gel-Halter aus dem Färbemodul nehmen, die Bügel nach oben klappen und das getrocknete Gel entnehmen. 

ZU BEACHTEN: Nach der Färbung / Entfärbung des Gels und vor der Densitometrie / dem Scannen kann mit dem Gel ein zusätzlicher 

Waschschritt durchgeführt werden, um den Hintergrund des Gels klarer zu machen und überschüssige Farbe, die als blaue Punkte erscheinen 

kann, zu entfernen. Zu diesem Zweck das Gel mit dem Programm "WASC. ISOENZ/GEL" waschen. 

2. Bei Bedarf die Rückseite (den Plastikfilm) der trockenen Folie mit einem weichen, feuchten Papiertuch reinigen. 

3. Mit einem Densitometer / Scanner bei einer Wellenlänge von 570 nm oder unter Verwendung eines Gelbfilters scannen. 

HINWEIS: Die Migrationslänge kann bei Gelen mit 2 oder 3 Analysereihen unterschiedlich sein, ohne jegliche Beeinträchtigung der Leistung. 

ERGEBNISSE 

Qualitätskontrolle 

Es empfiehlt sich, bei jeder Analysenserie ein getestetes Kontrollserum (z.B. SEBIA Kontrollserum, Bestell-Nr. 4785) mitzuführen. 

Werte 

Das Lesen der gefärbten Elektropherogramme mit dem Densitometer (bei 570 nm bzw. unter Verwendung eines Gelbfilters) ergibt relative 

Konzentrationen (Prozentangaben) für die einzelnen Proteinfraktionen. 

Mit HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 Gelen wurden auf dem HYDRASYS System bei einer Gruppe von 136 gesunden Erwachsenen (Frauen und Männer) 

für die einzelnen elektrophoretischen Serumprotein-Hauptfraktionen folgende Normalwerte (Mittelwert ± 2 SD) ermittelt. 

Die Protein Quantifizierung im UV-Licht mit CAPILLARYS ergibt die gleichen Werte, wie die nephelometrischen Methode (besonders für Albumin). 

SEBIA empfiehlt nach dem Einrichten des Scanner-Systems eine Standardisierung der über HYDRAGEL erhaltenen Werte. 

Werte ohne Standardisierung Werte mit CAPILLARYS Standardisierung FRAKTION HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumin 60,3 - 72,8 % 54,3 - 65,5 % Alpha-1-Globuline 1,0 - 2,6 % 1,2 - 3,3 % Alpha-2-Globuline 7,2 - 11,8 % 8,3 - 15,0 % Beta-1-Globuline 5,6 - 9,1 % 6,5 - 11,5 % Beta-2-Globuline 2,2 - 5,7 % 2,5 - 7,2 % 

| Gammaglobuline | 6,2 - 15,4 % | 7,1 - 19,5 % | 

Jedes Labor sollte eigene Normalbereiche ermitteln. 

Interpretation 1-16 

Die angegebenen Literaturhinweise dienen als Hilfe für die Interpretation von Serum- und Urinelektropherogrammen. 

Manche Serumproben können eine schmale, ziemlich scharfe Bande auf der kathodischen Seite der Beta-2 Zone aufweisen, die einer Komponente 

des C3-Komplements entspricht. Siehe MIGRATIONSMUSTER. 

Interferenzen und Einschränkungen 

Siehe PROBEN FÜR DIE ANALYSE. 

Es wird darauf hingewiesen, dass aufgrund der derzeitigen Kenntnis des zugrundeliegenden Analysenprinzips (Theorie der Zonenelektrophorese, 

Auflösungsvermögen und Sensitivität) keine Garantie für ein 100 % Erkennen aller monoklonalen Komponenten gewährt werden kann. 

Fehlersuche 

Kommt es trotz sachgerechter Lagerung und Vorbereitung der Materialien und Beachtung der Verfahrensbeschreibung zum Versagen des Tests, 

wenden Sie sich bitte an den SEBIA Kundendienst. 

Datensicherheitsblätter sowie Informationen zur Abfallentsorgung sind bei SEBIA GmbH, Fulda zu erfragen. 

LEISTUNGSDATEN 

Die Densitometrische Auswertung erfolgte mit einem HYRYS Densitometer von SEBIA mit einem Gelbfilter. 

Reproduzierbarkeit innerhalb eines Gels 

Drei unterschiedliche Serumproben wurden in 28 Spuren auf HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 Gele zweier getesteter Chargen aufgetragen. Für beide Proben 

wurden die Mittelwerte, SD und VK für jede Probenfraktion und jede Charge berechnet. Es sind die Ergebnisse der Probe A in der folgenden Tabelle 

dargestellt. Die Proben B und C ergaben entsprechende Ergebnisse : 

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FRAKTION MITTELWERT (%) SD VK (%) Albumin 50,8 ; 51,5 0,8 ; 1,3 1,6 ; 2,5 Alpha 1 2,9 ; 2,9 0,1 ; 0,1 3,2 ; 3,7 Alpha 2 8,8 ; 8,7 0,1 ; 0,2 1,2 ; 2,8 Beta 1 8,6 ; 8,2 0,3 ; 0,2 4,0 ; 2,2 Beta 2 5,3 ; 5,4 0,2 ; 0,5 4,4 ; 8,5 

| Gamma | 24,1 ; 23,3 | 0,4 ; 0,6 | 1,7 ; 2,4 | 

Von Gel zu Gel (Inter-Assay) 

Fünfzehn verschiedene Serumproben wurden an fünf aufeinanderfolgenden Tagen auf je einem HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 Gel zweier verschiedener 

Chargen getestet. Jede Probe wurde in zwei Spuren auf jedem Gel (obere und untere Reihe) aufgetragen. Die Tages- und Gesamtmittelwerte, SD 

und VK berechnet. Die Ergebnisse entsprechen einander bezüglich der einzelnen Proben und Chargen. Das folgende Beispiel zeigt die Bereiche der 

SD und VK nach Berechnung für die einzelnen Proben über den Zeitraum von 5 Tagen und dem mittleren VK aus den ermittelten VK’s für alle Proben 

und Tage und einer Charge (n=150). 

FRAKTION SD VK (%) MITTLERER VK (%) Albumin 0,3 ; 2,1 0,5 ; 3,2 1,4 Alpha 1 0,1 ; 0,2 3,3 ; 10,2 4,8 Alpha 2 0,1 ; 0,3 1,2 ; 6,0 2,8 Beta 1 0,1 ; 0,7 2,7 ; 8,2 4,3 Beta 2 0,2 ; 0,7 6,1 ; 17,8 11,0 

| Gamma | 0,5 ; 1,1 | 2,9 ; 9,6 | 5,2 | 

Richtigkeit 

Pathologische und normale Serumproben (n= 112) wurden auf HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 Gelen, sowie auf HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 untersucht. 

Die Korrelations-Werte der einzelnen Fraktionen der gepoolten Daten für HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gegen das verglichene Gelsystem 

(y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) waren : 

Fraktion Korrelations- Y- Steigung Bereich der % Werte Koeffizient Achsendurchgang (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albumin 0,989 0,318 1,010 36,1 - 70,8 Alpha 1 0,967 0,009 0,952 1,0 - 10,4 Alpha 2 0,981 0,002 0,985 5,6 - 22,9 Beta 1 - Beta 2 0,950 0,475 0,950 9,5 - 22,3 

| Gamma | 0,988 | 0,134 | 0,988 | 5,1 - 28,1 | 

Sensitivität 

Serielle Verdünnungen zweier Serumproben, jede mit einem monoklonalen Protein, wurden auf einem HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 Gel elektrophoretisch 

aufgetrennt. Die höchste Verdünnung mit einer noch wahrnehmbaren monoklonalen Bande entsprach 0.44 und 0.21 g/l der monoklonalen Proteine 

der jeweiligen Proben. 

HINWEIS: Entsprechend der Position der monoklonalen Komponente und des polyklonalen Hintergrundes in der Gamma-Zone kann die 

Detektionsgrenze variieren. 

Analyse von konzentrierten Urinen 

Die Ergebnisse, die auf dem HYDRAGEL 15/30 ß1-ß2 Gelen erzielt wurden, zeigen eine sehr gute Inter– und Intra-Assay-Reproduzierbarkeit für 

konzentrierte Urine nach quantitativer und qualitativer Analyse. Achtundzwanzig (28) verschiedene Proben (pathologische und normale Urine) wurden 

auf HYDRAGEL 15/30 ß1-ß2 Gelen und einem anderen handelsüblichen Agarosegelsystem aufgetrennt. Es waren keine visuellen Unterschiede 

zwischen den beiden Systemen erkennbar. Die Nachweisgrenze wurde von den höchsten seriellen Verdünnungen eines monoklonalen Urinproteins 

mit einer gerade noch erkennbaren Bande bei 0,24 g/L (240 mg/l) nachgewiesen. 

LITERATUR 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 










- 20 -







MIGRATIONSMUSTER 

+ 

Albumin 

Orosomucoïd 

α1 Antitrypsin 

α1 Antichymotrypsin 

Ceruloplasmin 

GC Globulin 

α2 Makroglobulin 

Haptoglobin 

a Lipoprotein 

Transferrin 

Hämopexin 

Plasminogen 

Fibronektin 

β Lipoprotein 

Complement C3 

γ Globuline 

G - A - M - D - E 

- 

- 21 -


GEBRUIKSAANWIJZING 

De HYDRAGEL 7 ß1-ß2 en HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels zijn bedoeld voor de scheiding van proteïnen in menselijk serum en urine door middel van 

elektroforese op alkalisch gebufferde agarose-gels (pH 8,5). De opzet is dat de normale serumproteïnen zich opsplitsen in zes hoofdfracties. De kits 

worden gebruikt in combinatie met het halfautomatische HYDRASYS-instrument. De gescheiden proteïnen worden gekleurd met behulp van 

amidozwart. De electroferogrammen worden visueel geïnterpreteerd op patroonafwijkingen. Densitometrie levert vervolgens een nauwkeurige 

relatieve kwantificatie van de afzonderlijke zones. 

Iedere gel is bedoeld voor de analyse van: 

• 7 monsters in de HYDRAGEL 7 ß1-ß2 kit, 

• 15 monsters in de HYDRAGEL 15 ß1-ß2 kit, 

• 30 monsters in de HYDRAGEL 30 ß1-ß2 kit. 

Voor gebruik bij in vitro diagnostiek. 

PRINCIPE VAN DE TEST 1-16 

Proteïne-elektroforese is een bekende techniek die routinematig wordt gehanteerd in klinische laboratoria voor het screenen van serum en andere 

lichaamsvloeistoffen op proteïne-afwijkingen. Deze techniek is gebaseerd op de principes van zone-elektroforese, uitgevoerd op een geschikt 

ondersteuningsmedium. Agarose is ontwikkeld tot een veelzijdig en effectief ondersteuningmedium. Bij routinetoepassingen in de diagnostiek worden 

serumproteïnen opgesplitst in vijf hoofdfracties (b.v. HYDRAGEL PROTEIN(E) kits). Wanneer een hogere resolutie vereist is, kunnen de proteïnen 

worden opgesplitst in zes hoofdfracties met behulp van de HYDRAGEL ß1-ß2 kits: albumine, alfa-1-globulinen, alfa-2-globulinen, bèta-1-globulinen, 

bèta-2-globulinen en gamma-globulinen. Iedere zone bevat één of meer serumproteïnen. De patronen van urineproteïnen lijken op die van serum. De 

relatieve intensiteit van de facties of hun aanwezigheid kunnen echter zeer uiteenlopen, afhankelijk van de filtercapaciteit van de nier. 

DE HYDRAGEL 7, 15 EN 30 ß1-ß2 KITS BEVATTEN DE VOLGENDE REAGENTIA EN ANDERE MATERIALEN 

BESTANDDELEN PROD. NR. 4101 PROD. NR. 4121 PROD. NR. 4141 Agarose-gels (klaar voor gebruik) 10 gels 10 gels 10 gels Gebufferde strips (klaar voor gebruik) 10 pakjes van 2 st. 10 pakjes van 2 st. 10 pakjes van 2 st. Verdunner voor de kleuroplossing (geconcentreerde oplossing) 1 flesje van 60 ml 1 flesje van 60 ml 1 flesje van 60 ml Amidozwartoplossing (geconcentreerde oplossing) 1 flesje van 20 ml 1 flesje van 20 ml 1 flesje van 20 ml Monster-malplaatjes 1 pakje van 10 stuks 1 pakje van 10 stuks 2 pakjes van 10 stuks 

| Stripjes filterpapier | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 

VOOR OPTIMALE RESULTATEN 

Onderdelen uit dezelfde kit dienen altijd samen te worden gebruikt en in overeenstemming met de instructies op de bijsluiter. 

LEES DE GEBRUIKSAANWIJZING ALTIJD ZORGVULDIG DOOR. 

1. AGAROSE-GELS 

Voorbereiding 

De agarose-gels zijn klaar voor gebruik. Iedere gel bevat: agarose, 8 g/l ; Tris-barbital buffer, pH 8,5 ± 0,1 ; in de gebruikte concentraties niet 

schadelijke toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De agarose-gels bevatten 0,61 % barbital. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname dient onmiddellijk een 

arts gewaarschuwd te worden! 

Gebruik 

Draagmedium voor proteïnenelektroforese. 

Opslag, stabiliteit en tekenen van verval 

De gels moeten horizontaal worden opgeslagen in de originele beschermende verpakking en bij kamertemperatuur (15 tot 30 °C) of gekoeld 

(2 tot 8 °C) bewaard worden. De gels zijn stabiel tot de houdbaarheidsdatum die op de verpakking, of op het verpakkingslabel van de gel, staat 

aangegeven. (De pijl op de voorzijde van de verpakking moet naar boven wijzen.) Vermijd opslag dicht bij een raam of een warmtebron. Vermijd 

belangrijke temperatuurwisselingen tijdens de opslag. NIET INVRIEZEN. 

Verwijder de gel wanneer er : 

(I) 

zich kristallen of neerslag op het oppervlak van de gel vormen, of wanneer de textuur van de oppervlakte van de gel erg zacht wordt (dit geeft 

aan dat de gel bevroren is geweest) ; 

(II) bacteriële of schimmelgroei wordt waargenomen ; 

(III) een abnormale hoeveelheid vloeistof in de gelbox aanwezig is (wijst erop dat afscheiding van buffer uit de gel heeft plaatsgevonden tijdens 

onjuiste opslagomstandigheden). 

2. GEBUFFERDE STRIPS 

Voorbereiding 

Gebufferde sponsstrips zijn gereed voor gebruik. Elke strip bevat: Tris-barbital buffer, pH 8,5 ± 0,3 ; natriumazide ; in de gebruikte concentraties niet 

schadelijke toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De gebufferde strips bevatten 1,38 % barbital en 0,225 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke 

inname dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Bij verwijdering contact met zuren, lood of koper vermijden aangezien deze 

explosieve of giftige verbindingen aangaan met natriumazide. 

Gebruik 

Gebufferde sponsstrips fungeren als bufferreservoir bij elektroforese en zorgen voor contact tussen de gel en de elektroden. 


Bewaar de gebufferde strips horizontaal in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur of in de koeling. (De pijl aan de voorkant van 

de kitdoos dient omhoog te wijzen.) 

De strips blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of de etiketten van de verpakking van 

de gebufferde strips. 

NIET INVRIEZEN. 

Gooi de gebufferde strips weg als de verpakking geopend is en de strips uitdrogen. 

- 22 - 

SEBIA INSTRUCTIEBLAD - Nederlands


3. VERDUNNER VOOR DE KLEUROPLOSSING 

Bereiding 

De voorraad verdunner voor de kleuroplossing moet toegepast worden volgens de beschrijving in de paragraaf "AMIDOZWART KLEUROPLOSSING". 

Het bevat een zure oplossing. 

Toepassing 

Bij de preparatie van de amidozwart kleuroplossing. 


De voorraad verdunner voor de kleuroplossing wordt bewaard bij kamertemperatuur of gekoeld. De verdunner is stabiel tot de houdbaarheidsdatum 

zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op de labels van de flesjes met verdunner voor de kleuroplossing. DIT PRODUCT NIET 

INVRIEZEN! 

Geen natriumazide toevoegen. 

4. AMIDOZWART KLEUROPLOSSING 

Bereiding 

De geconcentreerde amidozwart kleuringoplossing is een viskeuze oplossing die kan geleren. De integriteit van de basisoplossing wordt niet beïnvloed 

door de toename van de viscositeit of de hardwording. 

In alle gevallen adviseren wij u de hieronder beschreven procedure te volgen om de perfecte kleuring te behouden: 

1. Voeg 15 ml verdunningsmiddel aan het flesje met geconcerteerd amidozwart toe. 

2. Sluit het flesje zorgvuldig. 

3. Schut het flesje nu stevig gedurende ongeveer 5 seconden. 

4. Giet de oplossing in de houder van waaruit de kleuroplossing verwerkt wordt. 

5. Herhaal deze stap tweemaal, zo nodig driemaal. 

6. Giet de resterende verdunner in de houder en vul het volume aan tot 300 ml met gedestilleerd of gedeioniseerd water. 

7. Meng de inhoud van de cubitainer stevig gedurende 5 tot 10 minuten. 

De kleuringoplossing is nu gereed voor gebruik. 

OPMERKING : Een onvolledige oplossing van de kleurstof zal een onvolledige kleuring van de albuminefractie opleveren (een laag percentage of een 

wit gat in de fractie). 

Na verdunning bevat de werkzame verdunde kleuroplossing: zuuroplossing pH ≈ 2 ; amidozwart, 0.4 g/dl ; ethyleenglycol, 6.7 % ; additieven, 

ongevaarlijk bij te toegepaste concentraties die nodig zijn voor optimale werking. 

WAARSCHUWING: Schadelijk bij inname. 

Toepassing 

Bij het kleuren van gels tijdens elektroforetische proteïneseparatie. 

BELANGRIJK : De kleuroplossing is ontwikkeld voor het kleuren van een maximum van 10 gels. Na het kleuren van 10 gels dient u de oplossing te 

vervangen. 


Zowel de standaard als de gebruiksoplossingen dienen bij kamertemperatuur of gekoeld bewaard te worden in gesloten containers om verdamping 

te voorkomen. De standaard kleuroplossing is stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op het 

label van de flesjes met kleuroplossing. 

De gebruiksoplossing is gedurende 1 maand stabiel. 

De verdunde oplossing kleurstof niet in de buurt van een warmtebron bewaren. 

5. APPLICATORS 

Gebruik 

Voorgesneden applicators, voor eenmalig gebruik, voor het aanbrengen van de monsters. 

Opslag 

De applicators op een droge plaats bij kamertemperatuur of gekoeld bewaren. 

6. FILTERPAPIER - DUN 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het absorberen van overtollige vloeistof van het oppervlak van de gel net voor het aanbrengen van 

de monsters. 

Opslag 

Bewaar de dunne velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

BENODIGDE REAGENTIA 

1. ONTKLEURINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Elk flesje ontkleuringsoplossing (SEBIA, prod. nr. 4540, 10 flesjes, 100 ml elk) wordt verdund tot 100 liter met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Het is praktisch om een verdunning van een klein deel van het concentraat aan te maken, bijvoorbeeld 5 ml concentraat te verdunnen tot 5 liter, de 

inhoud van de container voor de ontkleuringsoplossing. Na verdunning bevat de ontkleuringsoplossing: citroenzuur, 0,5 g/l. 

Gebruik 

Voor het ontkleuren van gels, d.w.z. het verwijderen van overtollige en achtergrondkleurstof van de gels. 

Voor het spoelen van het kleurcompartiment na de wasstap. 

Giet om de zuurgraad van de vlekkenoplosser te neutraliseren 15 mL van een 50 % Sodium Hydroxyde-oplossing in de lege afvalbak. 


De concentraat-ontkleuringsoplossing is stabiel bij kamertemperatuur of gekoeld tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de verpakking of 

de labels op de flesjes met ontkleuringsoplossing. De verdunde ontkleuringsoplossing is, in een afgesloten fles en bij kamertemperatuur, gedurende 

1 maand stabiel. Geen natriumazide toevoegen. 

Verwijder de verdunde buffer zodra er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

Om te voorkomen dat micro-organismen zich kunnen verspreiden in de verdunde ontkleuringsoplossing wanneer deze langer dan een week bewaard 

moet worden, kunt u er 5 µL/dL ProClin 300 aan toevoegen. 

De verdunde, ProClin bevattende ontkleuringsoplossing blijft, indien bewaard in een afgesloten fles bij kamertemperatuur of in de koeling, stabiel tot 

aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes ontkleuringsoplossing. 

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2. HYDRASYS SPOELOPLOSSING 

Voorbereiding 

Ieder flesje geconcentreerde HYDRASYS Spoeloplossing (SEBIA, prod. nr. 4541, 10 flesjes, 80 ml elk) wordt verdund tot 5 liter met gedestilleerd of 

gedeïoniseerd water. 

Na verdunning bevat de werkzame spoeloplossing: alkalische buffer, pH 8,8 ± 0,3 ; natriumazide. 

WAARSCHUWING: De geconcentreerde spoeloplossing bevat 0,625 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Bij verwijdering contact met zuren, lood of koper vermijden, aangezien deze 

explosieve of giftige verbindingen aangaan met natriumazide, en spoelen met ruime hoeveelheden water. 

Gebruik 

Voor het spoelen van het HYDRASYS Kleuringscompartiment. Gebruik periodiek, d.w.z. als het instrument dagelijks wordt gebruikt, spoelt u het 

kleuringscompartiment wekelijks. 

Voor verdere instructies met betrekking tot het gebruik wordt u verwezen naar de bijsluiter in de verpakking. 


De geconcentreerde oplossing en de verdunde oplossing in gesloten flessen bewaren, bij kamertemperatuur of gekoeld. De oplossingen blijven stabiel 

tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de kit of de labels op de flesjes met spoelolpossing. Ruim de verdunde spoeloplossing op zodra hij 

van uiterlÿk verandert, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

3. FLUIDIL 

Voorbereiding 

Fluidil (SEBIA, prod. nr. 4587, 1 flesje, 5 ml) is gereed voor gebruik. 

Gebruik 

Voor de verdunning van viskeuze of troebele monsters, bijvoorbeeld sera die cryoglobuline of cryogel bevatten. 


Bewaren bij kamertemperatuur. Blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de labels op de flesjes met Fluidil. 

Het Fluidil moet vrij van neerslag zijn. 

BENODIGDE UITRUSTING EN ACCESSOIRES 

1. HYDRASYS Systeem SEBIA, prod. nr. 1210 of nr. 1211. 

2. Micro-pipet, voor handmatig dan wel automatisch gebruik, zoals bijvoorbeeld de HYDRAplus SEBIA, prod. nr. 1215, als extra keuzemogelijkheid 

voor het vullen van de monsterapplicators. 

3. Natte Opslagkamer, prod. nr. 1270, geleverd met HYDRASYS. 

4. Container Kit, geleverd met HYDRASYS. 

5. Pipetten: 10 µl en 200 µl. 

6. Densitometer / scanner in staat tot scannen van 82 x 51 mm of 82 x 102 mm gelplaten bij 570 nm of met geel filter: HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

of FORESE software voor de scanner met vlakke papier doorvoer. Zie voor gebruiks- en kalibratieprocedures de instructies van de fabrikant. 

7. Gelhouder voor halve gels SEBIA, prod. nr. 10043110. 

MONSTERS VOOR ANALYSE 

Verzameling en opslag van monsters 

De aanbeveling geldt dat de analyse wordt uitgevoerd op verse monsters. Serum en urine dienen te worden verzameld volgens de vaste procedures 

die gelden voor het uitvoeren van testen in klinische laboratoria. Plaats de monsters zo snel mogelijk na verzameling in de koeling (bij 2 tot 8 °C), en 

laat ze daar maximaal gedurende één week staan. (OPMERKING: de bèta-2-fractie, C3-complement, verdwijnt na 3 dagen). Voor langere 

opslagperioden kunt u de monsters invriezen (ze blijven dan ten minste een maand stabiel). 

Invriezing van sera met natriumazide, 0,2 g/l, komt de opslagstabiliteit ten goede. 

Invriezen urine met HEPES 0,1 M (pH 6,75) en natriumazide, 0,2 g/l bevordert de kwaliteit van de opslag. 

BELANGRIJK: Gebruik geen boorzuur als conserveermiddel. 

Ontdooide monsters kunnen lichte applicatiesporen vertonen vanwege denaturatie van de proteïne of de lipoproteïne. Opslag bij 2 tot 8 °C en invriezen 

veroorzaken een anodische verschuiving van bèta-lipoproteïnen in serum uit de bèta-1-zone tot de alfa-2- of alfa-1-zones ; hoe ouder het serum, hoe 

groter de verschuiving. 

Voorbereiding van het monster 

1. Serummonsters 

Gebruik pure serummonsters. Nadat ze in de koeling zijn geplaatst bij 2 tot 8 °C of na invriezing kunnen sommige sera (met name die welke 

cryoglobuline of cryogel bevatten) stroperig worden of vertroebeling gaan vertonen. Dergelijke sera zouden problemen kunnen geven bij de 

applicatie door een belemmerde diffusie door de tandjes van de monsterapplicator. In dergelijke gevallen kunt u 25 µl Fluidil toevoegen aan 75 µl 

serum, en dit gedurende 15 seconden in de vortexmixer zetten. Volg daarna de standaard procedure. 

2. Geconcentreerde urinemonsters 

Wordt de analyse uitgevoerd op urinemonsters die geconcentreerd zijn tot 15 - 20 g/l (met een aangepast apparaat). 

BELANGRIJK: Sommige urinemonsters bevatten een hoge concentratie zout. Dit kan gel-deformatie veroorzaken tijdens de migratie en daardoor 

kunnen de migratieprofielen vertekend raken. Als door een dergelijke vertekening de interpretatie niet nauwkeurig is, dient de urine 

te wordengedialyseerd om de zouten te verwijderen. 

Bij troebele urinemonsters (al dan niet geconcentreerd) wordt aanbevolen de hiervoor verantwoordelijke deeltjes te elimineren 

door middel van centrifugatie van de monsters (gedurende 10 minuten bij 3000 toeren per minuut) dan wel door middel van filtratie 

(op een filter van 0,45 µm) teneinde een goede verspreiding te realiseren op de applicators. 

Te vermijden monsters 

• Gebruik geen gehemolyseerde serummonsters. Hemolyse zorgt voor een verhoging in alfa-2- en bèta-zones. 

• Vermijd het gebruik van plasmamonsters. Fibrinogeen geeft een band te zien dicht bij het applicatiepunt, die per abuis zou kunnen worden 

aangezien voor een monoclonale immunoglobuline, waardoor een vertekening zou ontstaan van het percentage van de corresponderende zone. 

• Vermijd het gebruik van oude of onder verkeerde omstandigheden bewaarde urinemonsters waarbij zich enzymatische degradatie van de proteïnen 

zou kunnen voordoen. 

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PROCEDURE 

Het HYDRASYS systeem is een multiparameter-instrument. Tot de geautomatiseerde stappen behoort de bewerking van HYDRAGEL agarose-gels 

in de volgende volgorde: applicatie van de monsters, elektroforetische migratie, drogen, kleuren, ontkleuren en de laatste droogfase. Tot de 

handmatige stappen behoren: het voorbereiden van de monsters en de gel, en het in werking stellen van de automatische stappen. 

LEES HET HYDRASYS-INSTRUCTIEHANDBOEK NAUWKEURIG. 

I. VOORBEREIDING VAN DE MIGRATIE 

1. Schakel het HYDRASYS instrument in. 

2. Plaats één voor HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 monsters) en ß1-ß2 15/30 (15 monsters) of twee voor HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 monsters) 

applicator(s) vlak op het tafelblad, met de genummerde applicatieholtes naar boven gericht (Fig. 1). 

- Breng 10 µl puur serum of geconcentreerd urinemonster aan in iedere holte. Vul alle applicators binnen 2 minuten. 

- Plaats de applicator(s) in de natte opslagkamer, met de strips omhoog. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe van de strips. Laat 

de monsters gedurende 5 minuten, na de applicatie van het laatste monster, in de strips trekken. 

Voor later gebruik (maximaal 8 uur) dient de gehele natte kamer in de koeling gezet te worden. 

Voor verdere gebruiksinstructies wordt u verwezen naar de bijsluiter van de natte kamer. 

3. Open het deksel van de Migratiemodule en til de dragers van de elektroden en de applicators op. 

WAARSCHUWING: sluit het deksel niet als de dragers nog omhoog staan. 

4. Selecteer het «7 B1-B2» migratieprogramma voor HYDRAGEL 7 ß1-ß2 of het «15/30 B1-B2» migratieprogramma voor 

HYDRAGEL ß1–ß2 15/30, uit het menu op het instrument (linkerzijde van het bedieningspaneel). 

5. Neem de gebufferde strips uit de verpakking ; manipuleer deze aan de plastic uiteinden. Druk de geperforeerde uiteinden van de plastic 

achterzijde van de strips over de pinnen op de elektrodedrager ; de plastic achterzijden van de strips moeten in de richting van de drager 

liggen (Fig. 2). 

6. Pak de HYDRAGEL agarose-gel uit. 

- Rol een dun filter voorzichtig en gelijkmatig over het oppervlak om zo het teveel aan vloeistof te absorberen. Verwijder het filterpapier direct. 

WAARSCHUWING : Laat het filtreerpapier niet te lang in contact met de gel om dehydratatie van de gel te vermijden. 

- Giet 120 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor HYDRAGEL 7 ß1-ß2 of 200 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor HYDRAGEL 

ß1-ß2 15/30 op het migratieframe dat afgedrukt is op de temperatuurcontroleplaat van de migratiemodule. 

- Plaats de gelplaat (de gelzijde omhoog) met de rand tegen de begrenzer aan de onderzijde van het afgedrukte frame (Fig. 3). 

- Buig de gel en breng deze naar beneden in het water (Fig. 3). Zorg ervoor dat er geen luchtbellen worden ingesloten, dat het water zich 

onder de gehele gelplaat verspreidt (Fig. 3) en dat de gel parallel met het afgedrukte frame ligt. 

7. Breng beide dragers omlaag. In deze positie raken de gebufferde strips de gel niet. FORCEER DE DRAGERS NIET HELEMAAL NAAR 

BENEDEN. 

8. Haal de applicator(s) uit de natte kamer. Manipuleer deze aan het beschermframe. 

- Klik het beschermframe los van de strips van de applicator(s). 

- Plaats de applicator met HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 monsters) en HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 monsters) in positie nr. 6 op de drager. 

- Plaats de applicators met HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 monsters) respectievelijk in positie nr. 3 en nr. 9. 

BELANGRIJK: De nummers die op de applicator(s) zijn geprint moeten door de bediener gelezen kunnen worden (Fig. 4). 

9. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

10. Start de procedure ogenblikkelijk door het indrukken van de «START»-knop (groene pijl aan de linkerzijde van het bedieningspaneel). 

BELANGRIJK: Zorg ervoor dat de ventilatieopening aan de rechterzijde van het instrument niet geblokkeerd is. 

MIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE FASEN 

• De beide dragers worden omlaag gebracht zodat de gebufferde strips en applicator(s) in contact komen met de gel. 

• De drager van de monsterapplicator komt omhoog. 

• Migratie wordt uitgevoerd bij een constante stroom van 10 W bij HYDRAGEL 7 ß1-ß2 of bij een constante stroom van 20 W bij HYDRAGEL ß1-ß2 

15/30, bij een temperatuur van 20 °C, gecontroleerd door het Peltier-effect, tot 36 Vh is opgebouwd (gedurende ongeveer 7 minuten). 

• De elektrodedrager komt omhoog, zodat de elektroden uitgeschakeld worden. 

• De temperatuur van de controleplaat stijgt tot 65 °C, en de gel wordt gedurende 10 minuten gedroogd. 

• De controleplaat wordt afgekoeld ; als deze een temperatuur van 50 °C bereikt klinkt er een piepsignaal dat aangeeft dat het deksel van de module 

ontsloten wordt. De temperatuur van de plaat blijft op 50 °C totdat het deksel geopend wordt. Na opening blijft de temperatuur dalen tot deze 20 °C 

bereikt (in minder dan 5 minuten) waarna een nieuwe migratiecyclus kan beginnen. 

OPMERKING: Gedurende alle migratiestappen blijft het deksel van de migratiemodule vergrendeld. 

II. VOORBEREIDING VAN DE GELVERWERKINGSFASEN 

1. Open het deksel van de migratiemodule. 

2. Verwijder de monsterapplicator(s) en doe deze weg. 

3. Breng beide dragers omhoog, verwijder de gebufferde strips aan hun plastic uiteinden en doe deze weg. 

4. Neem de gedroogde gelfilm eruit voor verdere bewerking. 

5. Maak de elektroden schoon met een vochtig doekje. 

6. Open de gelhouder. Leg deze vlak op het rooster en plaats de gedroogde gel (met de gelkant naar boven gericht) in de spleten van de beide 

stangen. Sluit de houder. Zorg ervoor dat de film op de juiste wijze in de houder geplaatst is (Fig. 5). 

7. Plaats de gelhouder in de gelverwerkings-/ kleuringsmodule. 

BELANGRIJK: Voordat u kunt beginnen met het gelverwerkings-/ kleuringsprogramma, moet het volgende gecontroleerd worden: 

- de kleuringscontainer is gevuld met 300 ml kleuringsoplossing ; 

- de ontkleuringscontainer bevat ten minste 1 liter ontkleuringsoplossing ; 

- de afvalcontainer is leeg. 

Voor de aansluiting van reagent lines: u wordt verwezen naar de informatie op het scherm op het instrument (keuzetoets: REAGENT LINES). 

BELANGRIJK: Vergeet niet de ongebruikte lijnen te blokkeren. 

- 25 -


8. Selecteer het «PROT./B1-B2/Hb» kleuringsprogramma uit het menu op het instrument. Stel de procedure in werking door het indrukken van 

de «START»-knop (groene pijl op de rechterzijde van het bedieningspaneel). 

OPMERKING: Veeg de temperatuurcontroleplaat af met een vochtig doekje. 

Gedurende de kleur-, ontkleuren droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

III. AFRONDING VAN DE GELVERWERKING 

1. Verwijder de gelhouder uit het compartiment ; open de gelhouder en haal de gedroogde gel eruit. 

LET OP: Na het kleuren of ontkleuren van gels en voorafgaand aan densitometrie of scannen, kunt u een extra spoelfase van de gel 

toevoegen om de achtergrond nog duidelijker te maken en eventueel resterende kleurstof in de vorm van blauwe vlekjes, te verwijderen. Spoel 

de gel met behulp van het ‘WASH ISOENZ/GEL’-programma. 

2. Indien nodig kunt u de achterzijde van de gel (plastic steun) met een vochtig doekje schoonmaken. 

3. Scan de droge gel met een densitometer / scanner met een geel filter of bij 570 nm. 

NOOT: Voor de gels met verschilende rijen (2 of 3) kunnen de migratielengtes aanzienlijk verschillen, zonder de resultaten te beïnvloeden. 

RESULTATEN 

Kwaliteitscontrole 

Het wordt aanbevolen een controleserum (Controleserum, SEBIA prod. nr. 4785) toe te voegen aan elke serie monsters. 

Waarden 

Scannen met de densitometer bij 570 nm, of met geel filter, van gekleurde elektroforegrammen levert de relatieve concentraties (percentages) van de 

afzonderlijke proteïnenzones op. 

Normale waarden (gemiddeld ± 2 SD) voor de afzonderlijke proteïnenzones in HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels zijn vastgesteld op basis van een 

gezonde populatie van 136 volwassenen (mannen en vrouwen). 

De proteïnekwantificering in UV op CAPILLARYS produceert waarden vergelijkbaar met die verkregen via de nefelometrische procedure (in het 

bijzonder bij albumine). SEBIA stelt daarom een standaardisatie van de waarden, zoals verkregen op HYDRAGEL, voor na kalibrering van de 

scanningsystemen. 

Zonder standaardisatie van waarden Met standaardisatie van waarden op CAPILLARYS ZONE HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumine 60,3 - 72,8 % 54,3 - 65,5 % Alfa-1 globulinen 1,0 - 2,6 % 1,2 - 3,3 % Alfa-2 globulinen 7,2 - 11,8 % 8,3 - 15,0 % Bèta-1 globulinen 5,6 - 9,1 % 6,5 - 11,5 % Bèta-2 globulinen 2,2 - 5,7 % 2,5 - 7,2 % 

| Gamma globulinen | 6,2 - 15,4 % | 7,1 - 19,5 % | 

Het wordt aanbevolen dat elk laboratorium zijn eigen normaalwaarden vaststelt. 

Interpretatie 1-16 

Voor aanwijzingen voor de interpretatie van electroferogrammen van serum- en urineproteïne de BIBLIOGRAFIE. 

Op sommige serummonsters kan een dunne, min of meer scherp begrensde band worden waargenomen onder de Bèta-2-zone, die correspondeert 

met een gedeelte van het C3-complement. Zie het ELEKTROFORETISCH PROFIEL. 

Interferentie en begrenzingen 

Zie MONSTERS TER ANALYSE. 

Met het oog op de resolutie- en gevoeligheidsbeperkingen van zone-elektroforese is het mogelijk dat niet alle monoclonale componenten met deze 

methode volledig worden gedetecteerd. 

Troubleshooting 

Bel de technische dienst van de leverancier als de test mislukt terwijl de instructies voor de voorbereiding en opslag van materialen, en voor de 

procedure, nauwkeurig werden gevolgd. 

De veiligheidsbladen behorend bij de reagentia in de Kit als ook informatie over de verwerking van afval of restproducten kunt u verkrijgen bij de 

Technische Dienst van de leverancier. 

UITSLAGEN 

Alle densitometrie werd met de HYRYS densitometer SEBIA met geel filter uitgevoerd. 

Reproduceerbaarheid binnen een gel 

Drie (3) verschillende serummonsters werden elk in 28 banen op twee verschillende lotnummers HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels geanalyseerd. De 

gemiddelden, SD en CV (n = 28) zijn voor elk serum, elke zone en elk lotnummer berekend. De hiernavolgende tabel toont de verkregen resultaten 

voor monster A van de verschillende lotnummers gels. De resultaten voor de monsters B en C waren grotendeels hetzelfde en zijn niet afgebeeld. 

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ZONE GEMIDDELDE (%) SD CV (%) Albumine 50,8 - 51,5 0,1 - 1,3 1,6 - 2,5 Alfa 1 2,9 - 2,9 0,1 - 0,1 3,2 - 3,7 Alfa 2 8,8 - 8,7 0,1 - 0,2 1,2 - 2,8 Bèta 1 8,6 - 8,2 0,3 - 0,2 4,0 - 2,2 Bèta 2 5,3 - 5,4 0,2 - 0,5 4,4 - 8,5 

| Gamma | 24,1 - 23,3 | 0,4 - 0,6 | 1,7 - 2,4 | 

Reproduceerbaarheid tussen gels en series 

Vijftien (15) verschillende serummonsters werden elk, gedurende 5 opeenvolgende dagen, getest op HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gel van 2 verschillende 

lotnummers. Elk monster werd op twee banen op elke gel aangebracht (bovenste en onderste rij). De dagelijkse en totale gemiddelde CV, SD en CV 

zijn voor elke zone berekend. De resultaten waren voor alle monsters en beide partijen goeddeels hetzelfde. De hiernavolgende tabel toont het bereik 

van SD en CV dat is berekend van de individuele monsters over de periode van 5 dagen, en een gemiddelde CV waarde berekend uit de verzamelde 

CV's van alle monsters (n = 150). 

ZONE SD CV (%) GEMIDDELDE CV (%) Albumine 0,3 - 2,1 0,5 - 3,2 1,4 Alfa 1 0,1 - 0,2 3,3 - 10,2 4,8 Alfa 2 0,1 - 0,3 1,2 - 6,0 2,8 Bèta 1 0,1 - 0,7 2,7 - 8,2 4,3 Bèta 2 0,2 - 0,7 6,1 - 17,8 11,0 

| Gamma | 0,5 - 1,1 | 2,9 - 9,6 | 5,2 | 

Nauwkeurigheid 

Pathologische en normale sera (n = 112) werden op HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels en op HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 toegepast. De correlatieparameters 

zoals berekend van de individuele zones van de verzamelde data voor HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels versus vergelijkbare 

gelsystemen ( y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) waren: 

Zone Correlatiecoëfficiënt y-intercept gradiënt bereik % waarden (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albumine 0,989 0,318 1,010 36,1 - 70,8 Alfa-1 0,967 0,009 0,952 1,0 - 10,4 Alfa-2 0,981 0,002 0,985 5,6 - 22,9 Bèta1-bèta2 0,950 0,475 0,950 9,5 - 22,3 

| Gamma | 0,988 | 0,134 | 0,988 | 5,1 - 28,1 | 

Gevoeligheid 

Op seriële verdunningen van twee serummonsters, elk met een monoclonale proteïne, werd elektroforese toegepast op HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels. 

De hoogste verdunning waarbij een monoclonale band te onderscheiden viel kwam voor de beide monsters overeen met respectievelijk 0,44 en 

0,21 g/l van de monoclonale proteïne. 

LET OP: Afhankelijk van de positie van de monoclonale band en de polyclonale achtergrond van de gammaglobulinenzone kan de 

detecteringsdrempel van een paraproteïne variëren. 

Geconcentreerde urineanalyse 

De resultaten die werden verkregen met HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels laten een zeer goede reproduceerbaarheid zien, zowel binnen als tussen runs 

met geconcentreerde urinemonsters, na kwantitatieve en kwalitatieve analyse. Achtentwintig (28) verschillende monsters (van pathologische en 

normale urine) werden op de HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gels en op een andere commercieel beschikbaar agarose gelsysteem aangebracht. Er waren 

geen visueel herkenbare verschillen tussen de beide systemen. De gevoeligheid van de detectie werd afgeleid uit de hoogste seriële oplossingen van 

een monoklonaal urine proteïne dat een nog te onderscheiden band liet zien bij een verdunning van 0.024 g/dL. 

BIBLIOGRAFIE 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 









- 27 -








MIGRATIEPATRONEN 

+ 

Albumine 

Orosomucoïde 

α1 Antitrypsine 

α1 Antichymotrypsine 

Ceruloplasmine 

GC Globuline 

α2 Macroglobuline 

Haptoglobine 

α Lipoproteïne 

Transferrine 

Hemopexine 

Plasminogen 

Fibronectine 

β Lipoproteïne 

C3 Complement 

γ Globuline 

G - A - M - D - E 

- 

- 28 -


UTILIZZO 

I gels HYDRAGEL 7 ß1-ß2 e HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 sono stati progettati per la separazione delle proteine del siero umano e delle urine mediante 

elettroforesi su gel di agarosio tamponato in mezzo alcalino (pH 8.5). Lo scopo è di separare le proteine del siero umano normale nelle sei frazioni 

principali. Tali kits sono usati in combinazione con il sistema semi-automatico HYDRASYS. 

Le proteine separate, sono colorate con amidoschwarz. Gli elettroforegrammi possono essere valutati visivamente per l’interpretazione dei quadri 

anormali. La densitometria fornisce un’accurata quantificazione relativa delle singole zone. 

Ogni gel di agarosio permette di processare: 

• 7 campioni con il kit HYDRAGEL 7 ß1-ß2, 

• 15 campioni nel kit HYDRAGEL 15 ß1-ß2, 

• 30 campioni nel kit HYDRAGEL 30 ß1-ß2. 

Per uso diagnostico in vitro. 

PRINCIPIO DEL METODO 1-16 

L’elettroforesi delle proteine è una tecnica diffusissima, comunemente usata nei laboratori clinici per la ricerca nel siero ed in altri fluidi biologici di 

alterazioni proteiche. Tale tecnica è basata sul principio della elettroforesi zonale effettuata su un adatto mezzo di supporto. L’agarosio è stato reso 

un versatile ed efficace mezzo di supporto. Per la maggior parte delle applicazioni diagnostiche le sieroproteine sono separate nelle cinque frazioni 

principali (es., kits HYDRAGEL PROTEIN(E)). Quando è richiesta una maggiore risoluzione in zona beta, le sieroproteine possono essere separate 

in sei frazioni utilizzando i kits HYDRAGEL ß1-ß2: albumina, alfa-1 globuline, alfa-2 globuline, beta-1 globuline, beta-2 globuline e gamma globuline. 

Ogni zona contiene una o più sieroproteine. I quadri delle proteine urinarie assomigliano a quelli del siero. Comunque, l’intensità relativa delle frazioni 

o la loro presenza può variare fortemente in funzione della capacità di filtrazione dei reni. 

REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEI KITS HYDRAGEL 7, 15 E 30 ß1-ß2 

COMPONENTI PN 4101 PN 4121 PN 4141 Gels di Agarosio (pronti all’uso) 10 gels 10 gels 10 gels Strisce tamponate (pronte all’uso) 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 Diluente per la soluzione colorante (soluzione concentrata) 1 flacone da 60 ml 1 flacone da 60 ml 1 flacone da 60 ml Colorante Amidoschwarz (soluzione concentrata) 1 flacone da 20 ml 1 flacone da 20 ml 1 flacone da 20 ml Applicatori (pronti all’uso) 1 confezione da 10 1 confezione da 10 2 confezioni da 10 

| Cartine da filtro sottili | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 

PER RISULTATI OTTIMALI 

I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit. 

LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO. 

1. GELS DI AGAROSIO 

Preparazione 

I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gels di agarosio contiene: agarosio, 8 g/l ; tampone Tris-barbital pH 8.5 ± 0.1 ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: I gels di agarosio contengono 0.61 % di barbital. Non ingerire! Se ingerito consultare immediatamente un medico! 

Utilizzo 

Mezzo di supporto per elettroforesi proteiche. 

Conservazione, stabilità e segni di deterioramento 

Conservare i gels orizzontalmente, nella confezione originale protettiva, a temperatura ambiente (15 - 30 °C) o in frigorifero (2 - 8 °C). (La freccia sulla 

scatola del kit deve essere rivolta verso l’alto). Evitare la conservazione nelle seguenti condizioni : in prossimità di fenestre ; in prossimità di sorgenti 

di calore ; in presenza di brusche e/o significative variazioni di temperatura. NON CONGELARE. 

I gels sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. 

Non utilizzare il gel quando: 

(i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe conseguenze del 

congelamento del gel) 

(ii) è presente muffa o flora batterica 

(iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni 

di conservazione improprie). 

2. STRISCE TAMPONATE 

Preparazione 

Le strisce di spugna tamponate sono pronte all’uso. Ogni striscia contiene: tampone Tris-barbital pH 8.5 ± 0.3 ; sodio azide ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: Il tampone nelle strisce contiene 1.38 % di barbital e 0.225 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerite consultare 

immediatamente un medico! Quando smaltite, evitare il contatto con acidi, piombo o rame poiché possono originare composti esplosivi o 

tossici con la sodio azide. 

Utilizzo 

Le strisce di spugna tamponate funzionano da riserva di tampone per l’elettroforesi ed assicurano il contatto tra il gel e gli elettrodi. 


Conservare le strisce tamponate orizzontalmente nella loro confezione protettiva, a temperatura ambiente o in frigorifero. (La freccia sulla scatola del 

kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Le strisce sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichetta della confezione delle strisce. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare le strisce se la confezione è aperta e le strisce sono asciutte. 

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FOGLIO DI ISTRUZIONI SEBIA - Italiano


3. DILUENTE PER LA SOLUZIONE COLORANTE 

Preparazione 

Il diluente per il colorante deve essere utilizzato come descritto nel paragrafo "COLORANTE AMIDOSCHWARZ". 

Contiene una soluzione acida. 

Utilizzo 

Per la preparazione della soluzione colorante amidoschwarz. 


Conservare il diluente concentrato per il colorante a temperatura ambiente o in frigorifero. E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola 

del kit o sull’etichetta del diluente. NON CONGELARE. 

Non aggiungere sodio azide. 

4. COLORANTE AMIDOSCHWARZ 

Preparazione 

Il colorante amidoschwarz concentrato è una soluzione viscosa, che può eventualmente gelificare, senza che la qualità della soluzione finale e del 

suo potere colorante siano minimamente alterati. 

Per ottenere una perfetta ricostituzione del colorante, bisogna rispettare il seguente protocollo. 

1. Aggiungere circa 15 mL di diluente del colorante al flacone di amidoschwarz concentrato. 

2. Chiudere accuratamente il flacone. 

3. Agitare con molto vigore il flacone per almeno 5 secondi. 

4. Versare la soluzione ottenuta nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

5. Ripetere questa operazione due o tre volte se necessario. 

6. Versare il resto del diluente nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

7. Completare a 300 mL con acqua distillata o demineralizzata. 

8. Agitare perfettamente questa soluzione per 5 - 10 minuti. 

Il colorante è pronto all’uso. 

NOTA : Una risospensione incompleta del colorante può causare una cattiva colorazione della frazione albumina (percentaule bassa di albumina o 

svuotamento al centro della frazione). 

Dopo la diluizione, la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; Etilen-glicol, 6,7 % ; componenti, non pericolosi 

alle concentrazioni utilizzate, necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Per la colorazione dei gels dopo la separazione elettroforetica delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinata alla colorazione di solamente 10 gels. Sostituire la soluzione colorante dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare sia la soluzione concentrata del colorante sia quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero, in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione concentrata del colorante è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. 

Il colorante diluito è stabile 1 mese. 

Non conservare la soluzione di colorante diluita in prossimità di una sorgente di calore. 

5. APPLICATORI 

Utilizzo 

Applicatori monouso, pretagliati, per l’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare gli applicatori lontano dall’umidità a temperatura ambiente o in frigorifero. 

6. CARTINE DA FILTRO 

Utilizzo 

Cartine sottili monouso, pretagliate, per l’eliminazione dell’eccesso di liquido dalla superficie del gel prima dell’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro sottili in luogo secco a temperatura ambiente o in frigorifero. 

REAGENTI RICHIESTI 

1. SOLUZIONE DECOLORANTE 

Preparazione 

Ogni flacone di soluzione decolorante concentrata (SEBIA, PN 4540, 10 flaconi da 100 ml ciascuno) deve essere diluito a 100 litri con acqua 

deionizzata o distillata. Per convenienza diluire solo 5 ml di soluzione concentrata a 5 litri, ossia al volume della tanica della soluzione decolorante. 

Dopo la diluizione la soluzione decolorante contiene: acido citrico, 0.5 g/l. 

Utilizzo 

Come decolorante, ossia per rimuovere l’eccesso di colorante e la colorazione di fondo dal gel. 

Per il risciacquo del compartimento di colorazione dopo la fase di lavaggio. 

Per neutralizzare l’acidità della soluzione decolorante versare, nella tanica vuota dei liquidi reflui, 15 mL di una soluzione al 50 % di Idrossido di Sodio. 


Conservare la soluzione decolorante concentrata a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza 

indicata sulla scatola del kit o sulla etichetta del decolorante. La soluzione diluita del decolorante è stabile per una settimana a temperatura ambiente 

in flacone chiuso. Non aggiungere sodio azide. 

Eliminare la soluzione decolorante diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

Per prevenire le proliferazioni microbiche nella soluzione decolorante diluita, da conservare oltre una settimana, aggiungere 5 µL/dL di ProClin 300. 

La soluzione decolorante diluita addizionata con ProClin e conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in bottiglia chiusa, è stabile fino alla data 

di scadenza indicata sulla confezione o sull’etichetta del flacone di decolorante. 

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2. SOLUZIONE DI LAVAGGIO HYDRASYS 


Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione di Lavaggio concentrata HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 flaconi da 80 ml ciascuno) deve essere diluito a 5 litri con acqua 

distillata o deionizzata. Dopo la diluizione la soluzione di lavaggio contiene: tampone alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; sodio azide. 

AVVERTENZA: La soluzione di lavaggio concentrata contiene 0.625 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerita consultare immediatamente 

un medico! La sodio azide può portare alla formazione di composti tossici o esplosivi se posta a contatto con acidi, piombo o rame. Quando 

smaltita, fare scorrere un’abbondante quantità di acqua. 

Utilizzo 

Per lavare il compartimento di colorazione di HYDRASYS. Usare periodicamente ; per esempio, se lo strumento è usato giornalmente lavare il 

compartimento di colorazione settimanalmente. 

Consultare l’inserto nella confezione per la procedura di utilizzo. 


Conservare sia la soluzione di lavaggio concentrata che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso. Entrambe le 

soluzioni sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. 

Eliminare la soluzione di lavaggio diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

3. FLUIDIL 

Preparazione 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 ml) è pronto all’uso. 

Utilizzo 

Per diluire campioni viscosi o torbidi, per esempio, sieri contenenti crioglobuline o criogel. 


Conservare a temperatura ambiente. Fluidil è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone. 

Fluidil deve essere privo di precipitato. 

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Dispensatore manuale, o in alternativa, per il caricamento degli applicatori dei campioni, campionatore automatico HYDRAplus SEBIA , PN 1215. 

3. Camera umida, PN 1270, fornita con HYDRASYS. 

4. Kit di taniche fornito con HYDRASYS. 

5. Pipette: 10 µl e 200 µl. 

6. Densitometro / scanner in grado di effettuare la scansione di gels 82 x 51 mm o 82 x 102 mm a 570 nm o con filtro giallo: HYRYS SEBIA, DVSE 

SEBIA o programma PHORESIS per Scanner a piano fisso. Fare riferimento alle istruzioni del produttore per le procedure di lavoro e di 

calibrazione. 

7. Telaio porta gel per gel da 7, SEBIA, PN 10043110. 

CAMPIONI PER L’ANALISI 

Raccolta e conservazione del campione 

Per l’analisi sono raccomandati campioni freschi. I sieri e le urine devono essere prelevati seguendo le procedure convenzionali per i tests clinici di 

laboratorio. Refrigerare i campioni (2 - 8 °C) subito dopo il prelievo fino ad una settimana. (NOTA: le frazioni beta-2 o C3 del complemento scompaiono 

dopo 3 giorni). Per periodi di conservazioni più lunghi, mantenere i campioni congelati (stabili almeno 1 mese). 

I sieri congelati con aggiunta di sodio azide, 0.2 g/l migliorano la stabilita’ di conservazione. 

I urine congelati con HEPES 0.1 M (pH 6.75) e sodio azide, 0.2 g/l si migliora la conservazione. 

IMPORTANTE: Non usare acido borico come conservante. 

I campioni scongelati possono dare luogo a leggeri segni nel punto di applicazione causati dalla denaturazione delle proteine o delle lipoproteine. La 

conservazione a 2 - 8 °C ed il congelamento causano, nel siero, lo spostamento anodico delle beta-lipoproteine dalla zona beta-1 alle zone alfa-1 o 

alfa-2 ; più vecchio è il siero, maggiore è tale spostamento. 

Preparazione del campione 

1. Sieri 

Utilizzare campioni di siero non diluiti. Dopo refrigerazione a 2 - 8 °C o congelamento, alcuni sieri (in particolare quelli contenenti crioglobuline o 

criogel), possono diventare viscosi o torbidi. Tali sieri possono presentare problemi di applicazione dovuti alla impedita diffusione nei dentini 

dell’applicatore. In tali casi, aggiungere 25 µl di Fluidil a 75 µl di campione ed agitare per 15 secondi. Seguire quindi la procedura standard. . 

2. Urine concentrate 

L’analisi viene svolta con campione concentrato fino a 15 - 20 g/l (con idoneo mezzo). 

IMPORTANTE: Alcune urine hanno un alto contenuto di sali. Questo puo produrre una deformazione del gel durante la migrazione e, quindi, 

distorsione del profilo elettroforetico. Per evitare questo problema e necessario eliminare i sali con una dialisi. 

La diffusione nei dentini degli applicatori di campioni di urina (intera o concentrata) torbidi, può essere ostacolata. Si raccomanda 

di rimuovere il particolato centrifugando i campioni (es., 10 minuti a 3000 rpm) o per filtrazione (es., filtri da siringa 0.45 µm). 

Campioni da evitare 

• Non utilizzare campioni di siero emolizzati. L’emolisi causa un aumento delle zone alfa-2 e beta. 

• Evitare campioni di plasma. Il fibrinogeno dà luogo ad una banda vicino al punto di applicazione che può essere scambiata per una immunoglobulina 

monoclonale ed alterare la quantificazione percentuale della zona beta corrispondente. 

• Evitare campioni di urina vecchi o conservati impropriamente nei quali può intervenire la degradazione enzimatica delle proteine. 

- 31 -


PROCEDURA 

Il sistema HYDRASYS è uno strumento semi-automatico multiparametrico. Le fasi automatiche includono il trattamento dei gels di agarosio 

HYDRAGEL, nella seguente sequenza: applicazione del campione, migrazione elettroforetica, essiccazione, colorazione, decolorazione ed 

essiccazione finale. Le fasi manuali includono la manipolazione dei campioni e dei gels e la preparazione dello strumento per l’uso. 

LEGGERE ATTENTAMENTE IL MANUALE DI ISTRUZIONE HYDRASYS. 

I. MIGRAZIONE 

1. Accendere lo strumento HYDRASYS. 

2. Posizionare un applicatore per HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 campioni) e per HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 campioni), o due applicatori per 

HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 campioni) su di una superficie piana con i numeri dei pozzetti correttamente orientati verso l’alto (Fig. 1). 

- Applicare in ogni pozzetto 10 µl di siero intero o di urina concentrata. Caricare ciascun applicatore entro 2 minuti. 

- Inserire l’applicatore(i) nella camera umida di conservazione con i dentini rivolti verso l’alto (maneggiare i depositori mediante la cornice 

protettiva in plastica). Lasciare che i campioni diffondano nei dentini per 5 minuti dall’applicazione dell’ultimo campione. Mantenere la 

camera così preparata in frigorifero se si intende usare gli applicatori più tardi (fino ad 8 ore). Consultare l’inserto all’interno della confezione 

della camera umida per ulteriori dettagli. 

3. Aprire lo sportello del modulo di migrazione ed alzare le cornici mobili porta elettrodi e porta applicatori. 

AVVERTENZA: Non chiudere mai lo sportello se le cornici mobili sono alzate! 

4. Selezionare dal menù dello strumento (lato sinistro della tastiera) il programma di migrazione «7 B1-B2» per il gel HYDRAGEL 

7 ß1-ß2, il programma di migrazione «15/30 B1-B2» per il gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30. 

5. Estrarre le strisce tamponate dalla confezione ; maneggiarle mediante le estremità in plastica. Agganciare le estremità in plastica forate sugli 

spinotti della cornice porta elettrodi ; le estremità in plastica della striscia devono essere rivolte verso la cornice mobile (Fig. 2). 

6. Estrarre il gel dalla confezione. 

- Eliminare rapidamente l’eccesso di liquido dalla superficie del gel, facendo aderire sul gel una cartina da filtro sottile. 

AVVERTENZA: Non lasciare assolutamente la cartine da filtro in contatto prolungato con il gel in modo da evitare la sua disidratazione. 

- Dispensare sul terzo inferiore del riquadro stampato sulla Piastra di Controllo Temperatura del modulo di migrazione, 120 µl di acqua 

distillata o deionizzata per HYDRAGEL 7 ß1-ß2 o 200 µl per HYDRAGEL ß1-ß2 15/30. 

- Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 3). 

- Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia di acqua (Fig. 3). Assicurarsi che non siano rimaste intrappolate bolle d’aria. L’acqua deve essere 

uniformemente stratificata al di sotto della lastrina di gel e questa deve essere allineata all’interno del riquadro stampato. 

7. Abbassare entrambe le cornici mobili. In questa posizione le strisce tamponate non toccano il gel. NON FORZARE LE CORNICI MOBILI AD 

ABBASSARSI ULTERIORMENTE. 

8. Estrarre l’applicatore(i) dalla camera di umidificazione. Maneggiare gli applicatori mediante la cornice di protezione. 

- Staccare la cornice di protezione dei dentini dell’applicatore. 

- Con 7 e 15 campioni inserire l’applicatore, sulla cornice mobile, in posizione No. 6, con 30 campioni inserire i due applicatori rispettivamente 

in posizione No. 3 e 9. 

IMPORTANTE: I numeri stampati sugli applicatori devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 4). 

9. Chiudere lo sportello del modulo di migrazione. 

10. Avviare la procedura immediatamente, premendo la freccia verde «START» sul lato sinistro della tastiera. 

IMPORTANTE: Assicurarsi che la griglia di ventilazione sul lato destro dello strumento non sia ostruita. 

MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate e gli applicatori entrino in contatto con il gel. 

• La cornice mobile porta applicatori si alza. 

• Ha luogo la migrazione in condizioni di potenza costante 10 W per HYDRAGEL 7 ß1-ß2 o 20 W per HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, a 20 °C controllati 

mediante effetto Peltier, fino ad accumulare 36 Vh (per circa 7 minuti). 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• La temperatura della piastra sale fino a 65 °C, tale temperatura è mantenuta 10 minuti per essiccare il gel. 

• La piastra viene raffreddata ; quando raggiunge 50 °C un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. La 

temperatura della piastra rimane a 50 °C finchè lo sportello non viene alzato. 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione. 

II. TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Aprire lo sportello. 

2. Rimuovere e gettare gli applicatori. 

3. Alzare entrambe le cornici mobili, togliere le strisce tamponate mediante le estremità in plastica e gettarle. 

4. Estrarre il gel essiccato pronto per le fasi successive. 

5. Dopo ogni utilizzo, pulire gli elettrodi e la Piastra di Controllo Temperatura con della carta soffice inumidita. 

6. Aprire il telaio porta gel. Metterlo in posizione piana ed inserire la lastrina (con il gel rivolto verso l’operatore) nelle scanalature delle due guide, 

quindi chiudere il telaio. Assicurarsi che il gel sia correttamente posizionato all’interno del telaio (Fig. 5). 

7. Inserire il telaio porta gel nel Modulo di trattamento/colorazione del gel. 

IMPORTANTE: Prima di avviare il programma di trattamento/colorazione del gel controllare che: 

- la tanica del colorante contenga 300 ml di soluzione colorante. 

- la tanica del decolorante contenga almeno 1 litro di soluzione decolorante. 

- la tanica dei liquidi reflui sia vuota. 

Per la connessione dei reagenti: riferirsi alle informazioni mostrate sul visore dello strumento (premere il tasto: VISUAL CANALI). 

IMPORTANTE: Non dimenticare di chiudere gli ingressi dei reagenti non utilizzati. 

8. Selezionare il programma di colorazione «PROT./B1-B2/Hb» dal menù dello strumento ed avviare la procedura premendo il tasto «START» 

(freccia verde sul lato destro dello strumento). 

Durante i cicli di colorazione, decolorazione e asciugatura, il compartimento rimane bloccato. 

Dopo il ciclo di raffreddamento, un segnale acustico indica che il compartimento è sbloccato (la ventilazione è mantenuta fino a quando il 

supporto del gel viene rimosso) 

- 32 -


III. COMPLETAMENTO DEL TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Rimuovere il telaio porta gel dal compartimento ; aprirlo e rimuovere il gel essiccato. 

NOTA: Se dopo la fase di colorazione/decolorazione sul gel sono visibili macchie blu residuali, una fase addizionale di lavaggio con il 

programma "LAV. ISOENZ/GEL", prima della lettura densitometrica, permette di eliminarle o di attenuarle fortemente. 

2. Se necessario pulire il retro della lastrina essiccata (la faccia con la plastica di supporto) con una carta soffice inumidita. 

3. Effettuare la scansione usando un densitometro / scanner a 570 nm o con filtro giallo. 

NOTA : Le lunghezze di migrazione dei gels con 2 o 3 righe analitiche possono essere sensibilmente differenti, senza alcuna conseguenza sui 

risultati. 

RISULTATI 

Controllo Qualità 

Si consiglia di includere, in ogni gruppo di campioni processati, un siero di controllo (Esiero di controllo, SEBIA PN 4785). 

Valori 

La lettura densitometrica (a 570 nm o con filtro giallo) del protidogramma fornisce le concentrazioni relative (percentuali) delle singole zone proteiche. 

I valori normali (media ± 2 DS) per le principali frazioni sieroproteiche, su gels HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, sono stati determinati su una popolazione 

sana di 136 adulti (uomini e donne). 

La quantificazione delle proteine con gli UV su CAPILLARYS da’ dei valori simili alla nefelometria (in particolare per l’albumina). SEBIA propone 

dunque una standardizzazione dei valori ottenuti su HYDRAGEL effettuando una calibrazione dei sistemi di lettura. 

Valori senza standardizzazione Valori standardizzati su CAPILLARYS FRAZIONE HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumina 60.3 - 72.8 % 54.3 - 65.5 % Alfa-1 globuline 1.0 - 2.6 % 1.2 - 3.3 % Alfa-2 globuline 7.2 - 11.8 % 8.3 - 15.0 % Bèta-1 globuline 5.6 - 9.1 % 6.5 - 11.5 % Bèta-2 globuline 2.2 - 5.7 % 2.5 - 7.2 % 

| Gamma globuline | 6.2 - 15.4 % | 7.1 - 19.5 % | 

Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire i propri valori normali. 

Interpretazione 1-16 

Per ulteriori informazioni sull’interpretazione degli elettroforegrammi delle sieroproteine o delle urine concentrate, vedi BIBLIOGRAFIA. 

Su taluni campioni, una piccola banda più o meno focalizzata, corrispondente ad una porzione del complemento C3, può essere visibile catodicamente 

alla zona Beta-2. Vedi QUADRO DI MIGRAZIONE. 

Interferenze e limitazioni 

Vedi CAMPIONI PER L’ANALISI. 

Per i limiti di risoluzione e sensibilità dell’elettroforesi zonale, è possibile che alcune componenti monoclonali possano non essere rilevate con questo 

metodo. 

Eliminazione errori 

Contattare il Servizio di Assistenza Tecnica del fornitore quando, nonostante siano state seguite accuratamente le istruzioni per la preparazione e 

conservazione dei materiali e per la procedura di impiego, i risultati del test non rispettino le caratteristiche. 

Le Schede di Sicurezza dei componenti del kit e le informazioni per lo smaltimento dei rifiuti sono disponibili presso il Servizio di Assistenza Tecnica 

SEBIA. 

DATI SULLE PRESTAZIONI 

Riproducibilità nella serie 

Tre diversi campioni di siero sono stati processati ciascuno nelle 28 piste di gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 provenienti da due lotti testati. Per ciascun 

campione sono state calcolate, medie, SD e CV (n = 28) di ogni frazione ed ogni gel/lotto. La tabella mostra i dati relativi al campione A per ciascuno 

dei due lotti testati. Risultati analoghi sono stati ottenuti per i campioni B e C. 

FRAZIONE MEDIA (%) SD CV (%) Albumina 50.8 ; 51.5 0.8 ; 1.3 1.6 ; 2.5 Alfa 1 2.9 ; 2.9 0.1 ; 0.1 3.2 ; 3.7 Alfa 2 8.8 ; 8.7 0.1 ; 0.2 1.2 ; 2.8 Beta 1 8.6 ; 8.2 0.3 ; 0.2 4.0 ; 2.2 Beta 2 5.3 ; 5.4 0.2 ; 0.5 4.4 ; 8.5 

| Gamma | 24.1 ; 23.3 | 0.4 ; 0.6 | 1.7 ; 2.4 | 

Riproducibilità tra gels e tra serie 

Quindici (15) diversi campioni di siero sono stati processati su due gel provenienti da lotti distinti di HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 per cinque giorni 

consecutivi. Ogni campione è stato applicato su due piste di uno stesso gel (fila superiore ed inferiore). Per ciascun campione ed ogni frazione sono 

stati calcolati medie, SD e CV giornalieri e totali. I risultati sono sostanzialmente gli stessi per tutti i campioni e ambedue i lotti. L’esempio seguente 

mostra gli intervalli di SD e CV calcolati per un singolo campione nel periodo di 5 giorni ed il CV medio calcolato dall’aggregazione dei CV relativi a 

tutti i campioni e tutti i giorni di un lotto (n = 150). 

- 33 -


FRAZIONE SD CV (%) CV (%) MEDIO Albumina 0.3 ; 2.1 0.5 ; 3.2 1.4 Alfa 1 0.1 ; 0.2 3.3 ; 10.2 4.8 Alfa 2 0.1 ; 0.3 1.2 ; 6.0 2.8 Beta 1 0.1 ; 0.7 2.7 ; 8.2 4.3 Beta 2 0.2 ; 0.7 6.1 ; 17.8 11.0 

| Gamma | 0.5 ; 1.1 | 2.9 ; 9.6 | 5.2 | 

Accuratezza 

Campioni di siero normali e patologici (n = 112) sono stati processati su gels HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 e su HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. I 

parametri di correlazione, calcolati per le singole frazioni, ottenuti dai dati aggregati dei gels HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 contro il sistema di 

comparazione (y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) sono stati: 

FRAZIONE Coefficiente y - intercetta Pendenza Variazione dei valori % di Correlazione (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albumina 0.989 0.318 1.010 36.1 - 70.8 Alfa 1 0.967 0.009 0.952 1.0 - 10.4 Alfa 2 0.981 0.002 0.985 5.6 - 22.9 Beta 1 - Beta 2 0.950 0.475 0.950 9.5 - 22.3 

| Gamma | 0.988 | 0.134 | 0.988 | 5.1 - 28.1 | 

Sensibilità 

Su gels HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 sono state processate le diluizioni scalari di due campioni di siero, ambedue contenenti una proteina monoclonale. 

La più alta diluizione con una banda monoclonale distinguibile è corrisposta, rispettivamente per i due campioni, a 0.44 e 0.21 g/l di concentrazione 

della proteina monoclonale. 

NOTA: In funzione della posizione della banda monoclonale e del fondo policlonale della zona delle gammaglobuline, il limite di rilevamento di una 

paraproteina può variare. 

Analisi delle urine concentrate 

Dopo l’analisi quantitativa e qualitativa dei campioni di urina concentrati, i risultati ottenuti con i gels HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 indicano una 

riproducibilità molto buona nella serie e tra serie. 

Ventotto (28) campioni diversi (urine normali e patologiche) sono stati processati su HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 e su un’altro sistema su gel d’agarosio, 

disponibile in commercio. Tra i due sistemi non ci sono state differenze apprezzabili visivamente. La sensibilità è stata determinata dalla più alta 

diluizione scalare di una proteina urinaria monoclonale in grado di dare una banda visibile a 0,024 g/dL. 

BIBLIOGRAFIA 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 












(15) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. 

Impact-Internat, Septembre 1986. 


- 34 -


QUADRO DI MIGRAZIONE 

+ 

Albumina 

Orosomucoide 

α1 Antitripsina 

α1 Antichimotripsina 

Ceruloplasmina 

GC Globulina 

α2 Macroglobulina 

Aptoglobina 

α Lipoproteina 

Transferrina 

Emopexina 

Plasminogeno 

Fibronectina 

β Lipoproteina 

Complemento C3 

γ Globulina 

G - A - M - D - E 

- 

- 35 -


ESPECIFICACIONES DE USO 

Los geles HYDRAGEL 7 ß1-ß2 y HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 están diseóados para la separación de las proteínas del suero y orina humanas mediante 

electroforesis en geles de agarosa alcalinos (pH 8.5). Las proteínas del suero humano normal se separan en seis fracciones principales. Los kits se 

utilizan junto con el instrumento semiautomático HYDRASYS. Las proteínas separadas se tiñen con negro amido. Las separaciones electroforéticas 

son evaluadas visualmente para la detección de anormalidades en el patrón de migración. La densitometría proporciona una cuantificación relativa 

exacta de las fracciones individuales. 

Cada gel de agarosa está diseñado para procesar : 

• 7 muestras en el kit HYDRAGEL 7 ß1-ß2, 

• 15 muestras en el kit HYDRAGEL 15 ß1-ß2, 

• 30 muestras en el kit HYDRAGEL 30 ß1-ß2. 

Para Uso Diagnóstico In Vitro. 

PRINCIPIO DEL TEST 1-16 

La electroforesis de proteínas es una técnica arraigada que se utiliza rutinariamente en los laboratorios clÌnicos para investigar la presencia de 

anormalidades proteicas en el suero y en otros fluidos corporales. Está basada en los principios de la electroforesis de zona realizada en un medio 

de soporte adecuado. La agarosa se ha convertido en un medio de soporte versátil y efectivo. Para aplicaciones diagnósticas de rutina, las proteínas 

séricas se separan en cinco fracciones principales (por ejemplo, en los kits HYDRAGEL PROTEIN(E)). Cuando es necesaria una mayor resolución, 

las proteÌnas pueden separarse en seis fracciones principales utilizando los kits HYDRAGEL ß1-ß2 15/30: albúmina, alfa-1 globulinas, alfa-2 

globulinas, beta-1 globulinas, beta-2 globulinas y gamma globulinas. Cada fracción contiene una o más proteínas séricas. Los patrones proteicos de 

la orina se parecen a los del suero. Sin embargo, las intensidades relativas de las fracciones o su presencia pueden variar enormemente en función 

de la capacidad de filtración del riñón. 

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KITS HYDRAGEL 7, 15 Y 30 ß1-ß2 

ARTÍCULO PN 4101 PN 4121 PN 4141 Geles de agarosa (listos para su uso) 10 geles 10 geles 10 geles Esponjas tamponadas (listas para su uso) 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 Diluyente del colorante (solución stock) 1 frasco, 60 ml 1 frasco, 60 ml 1 frasco, 60 ml Colorante Negro Amido (solución stock) 1 frasco, 20 ml 1 frasco, 20 ml 1 frasco, 20 ml Aplicadores (listos para su uso) 1 caja de 10 1 caja de 10 2 cajas de 10 

| Papeles de filtro | 1 bolsa de 10 | 1 bolsa de 10 | 1 bolsa de 10 | 

PARA OBTENER RESULTADOS ÓPTIMOS 

Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y según las instrucciones incluidas. 

LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES. 

1. GELES DE AGAROSA 

Preparación 

Los geles de agarosa están listos para su uso. Cada gel contiene: agarosa, 8 g/l ; tampón Tris-barbital pH 8.5 ± 0.1 ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Los geles de agarosa contienen barbital 0.61 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, consultar inmediatamente al 

médico ! 

Uso 

Medio de soporte para la electroforesis de proteínas. 

Almacenamiento, estabilidad y señales de deterioro 

Almacenar los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente (15 a 30 °C) o refrigerados (2 a 8 °C). Son 

estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit y en sus recipientes protectores. (La flecha situada en la cara frontal de la caja del 

kit debe apuntar hacia arriba). Evitar su almacenamiento cerca de una ventana o de una fuente de calor. Evitar variaciones importantes de 

temperatura durante su almacenamiento. NO CONGELAR. 

Desechar cuando: 

(i) haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelación del gel) ; 

(ii) se observe crecimiento bacteriano o fúngico ; 

(iii) se evidencie una cantidad excesiva de líquido en el recipiente del gel (consecuencia de la exudación del tampón debida a un almacenamiento 

inadecuado). 

2. ESPONJAS TAMPONADAS 

Preparación 

Las esponjas tamponadas están listas para su uso. Contienen: tampón Tris-barbital pH 8.5 ± 0.3 ; azida sódica ; aditivos, inocuos a las 


ATENCIÓN: El tampón de las esponjas contiene barbital 1.38 % y azida sódica 0.225 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, 

consultar inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su tendencia a 

formar compuestos explosivos con la azida sódica. 

Uso 

Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio de tampón de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos. 

- 36 - 

INSTRUCCIONES SEBIA - Español



Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. 

Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora (la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). 

Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora. NO LAS CONGELE. 

Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa está abierta o si las esponjas están secas. 

3. DILUYENTE DEL COLORANTE 

Preparación 

El diluyente del colorante concentrado debe ser usado como se ha descrito en el párrafo "COLORANTE NEGRO AMIDO". Contiene una solución 

ácida. 

Uso 

Para la preparación del colorante negro amido. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

El diluyente del colorante concentrado puede conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada 

en el kit o en la etiqueta del vial de diluyente. NO LO CONGELE. 

No le añada azida sódica. 

4. COLORANTE NEGRO AMIDO 

Preparación 

El colorante negro amido concentrado es una solución viscosa que puede gelificarse, lo que no afecta de ningún modo a la calidad de la solución 

final y su capacidad de coloración. 

Para obtener una perfecta reconstitución del colorante, siempre hay que prepararlo como se indica a continuación : 

1. Añada unos 15 mL de diluyente del colorante en el vial de negro amido concentrado. 

2. Cierre el vial con cuidado. 

3. Agite el vial intensamente durante un mínimo de 5 segundos. 

4. Vierta la solución obtenida en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

5. Repita esta operación dos veces, o tres veces si es necesario. 

6. Vierta el resto de diluyente en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

7. Complete hasta 300 mL con agua destilada o desionizada. 

8. Agite esta solución de 5 a 10 minutos. 

El colorante está listo para usar. 

NOTA : Una reconstitución incompleta del colorante puede implicar una mala coloración de la fracción albúmina (disminución de su porcentaje o 

aparición de un agujero blanco en el centro de la fracción). 

Después de la dilución, la solución colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; negro amido, 4 g/L ; etilén-glicol, 6,7 % ; aditivos inocuos a las 


ATENCIÓN: Nocivo en caso de ingestión. 

Uso 

Para la coloración de los geles después de la separación electroforética de las proteínas. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para colorear sólo 10 geles. Cambie el colorante después de 10 usos. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

Las soluciones de colorante concentrada y diluida pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera, en contenedores cerrados para evitar 

la evaporación. La solución concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de colorante. 

La solución diluida es estable durante 1 mes. 

No almacene la solución de colorante diluida cerca de una fuente de calor. 

5. APLICADORES 

Uso 

Aplicadores precortados de un solo uso para la aplicación de la muestra. 

Almacenamiento 

Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados. 

6. PAPELES DE FILTRO 

Uso 

Papeles finos absorbentes precortados, de un solo uso, para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicación de la muestra. 

Conservación 

Conserve los papeles de filtro finos en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera. 

REACTIVOS NECESARIOS 

1. SOLUCIÓN DECOLORANTE 

Preparación 

Cada vial de Solución Decolorante stock (SEBIA, PN 4540, 10 viales de 100 ml) se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada. Es 

conveniente diluir sólo 5 ml de la solución stock hasta 5 litros, volumen del contenedor de la solución decolorante. Después de la dilución, la solución 

decolorante de trabajo contiene: ácido cítrico, 0.5 g/l. 

Uso 

Para la destinción, ésto es, la eliminación del exceso de tinción y la coloración de fondo de los geles. 

Para el lavado del compartimento de coloración. 

Para neutralizar la acidez del decolorante, introduzca dentro del contenedor de desechos vacío 15 ml de sosa al 50 % (solución comercial). 


Almacenar la solución decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada. La solución stock de decolorante es estable hasta la fecha de 

caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. NO CONGELAR. La solución decolorante de trabajo es estable una semana a 

temperatura ambiente en un contenedor cerrado. No añadir azida sódica. 

Desechar la solución decolorante de trabajo si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

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Para evitar la proliferación microbiana en la solución decolorante diluida que se vaya a almacenar durante más de una semana, añada 5 µL/dL de ProClin 300. 

El decolorante diluido al que se ha añadido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de 

caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante. 

2. SOLUCIÓN DE LAVADO HYDRASYS 

Preparación 

Cada vial de la Solución stock de lavado HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 viales, 80 ml cada uno) se diluye hasta 5 litros con agua destilada o 

desionizada. Después de la dilución, la solución de lavado de trabajo contiene: tampón alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; azida sódica. 

ATENCIÓN: La solución stock de lavado contiene azida sódica 0.625 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, consultar 

inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su tendencia a formar 

compuestos explosivos con la azida sódica. Lavar siempre con gran cantidad de agua. 

Uso 

Sirve para limpiar el Compartimento de Tinción del HYDRASYS. Usar periódicamente, p. ej., si el instrumento se usa a diario, lavar el compartimento 

de tinción semanalmente. 

Ver la hoja de instrucciones para las indicaciones de uso. 


Almacenar ambas soluciones de lavado, stock y de trabajo, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados. La solución stock de 

lavado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial. 

Desechar la solución de trabajo de lavado si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

3. FLUIDIL 

Preparación 

El Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 ml) está listo para su uso. 

Uso 

Para diluir muestras turbias o viscosas, p. ej., sueros que contienen crioglobulinas o criogeles. 


Almacenar a temperatura ambiente. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial de Fluidil. 

El Fluidil debe estar exento de precipitados. 

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Micropipeteador, manual o automatico, como el HYDRAplus SEBIA, PN 1215, para cargar los aplicadores de muestra de una forma alternativa. 

3. Cámara húmeda, PN 1270, suministrada con el HYDRASYS. 

4. Kit de Contenedores suministrado con el HYDRASYS. 

5. Pipetas: 10 µl y 200 µl. 

6. Densitómetro / esccáner apaz de leer geles de 82 x 51 mm o 82 x 102 mm a 570 nm o con un filtro amarillo, p. ej., HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

o el programa PHORESIS para escáner de sobremesa. Observar las indicaciones del fabricante para los procedimientos de operación y 

calibración. 

7. Soporte del Gel para medios geles SEBIA, PN 10037120. 

MUESTRAS PARA ANALISIS 

Extracción y almacenamiento de las muestras 

Se recomienda analizar muestras frescas. El suero y la orina deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en los 

laboratorios clínicos. Refrigere las muestras (2 a 8 °C) tan pronto como sea posible después de su obtención, durante una semana. (NOTA: la fracción 

beta-2, el complemento C3, desaparece al cabo de 3 días). Para períodos de almacenamiento más prolongados, almacene las muestras congeladas 

(son estables durante un mes al menos). 

Congelar los sueros con azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. 

Congelar orina con HEPES 0.1 M (pH 6.75) y azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. 

IMPORTANTE: No utilizar ácido bórico como conservante. 

Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicación debidas a la desnaturalización de proteínas o lipoproteínas. El 

almacenamiento entre 2 y 8 °C y la congelación causan un desplazamiento anódico de las beta-lipoproteínas del suero, desde la fracción beta-1 hasta 

las fracciones alfa-2 o alfa-1 ; cuanto más antiguo sea el suero mayor será el desplazamiento. 

Preparación de las muestras 

1. Suero 

Use muestras de suero no diluidas. Al almacenarlos entre 2 y 8 °C o congelarlos, algunos sueros, especialmente aquellos que contengan 

crioglobulinas o criogeles, pueden volverse viscosos o desarrollar turbidez. Tales sueros podrían presentar problemas de aplicación debidos a la 

difusión dificultada a través de los dientes del aplicador de muestras. En tal caso, añada 25 µl de Fluidil a 75 µl de suero y agite la mezcla en el 

vórtex durante 15 segundos. Siga entonces con el procedimiento habitual. 

2. Orinas concentradas 

El análisis se lleva a cabo con orinas concentradas hasta 15 - 20 g/l (con un mecanismo adaptado). 

IMPORTANTE: Algunas orinas presentan un alto contenido de sales. Esto puede provocar que el gel se deforme durante la migración y, por lo 

tanto, distorsión de los perfiles electroforéticos. Para evitar este problema es necesario eliminar las sales con una diálisis. 

En caso de orinas turbias (concentradas o no), se recomienda eliminar las partículas, centrifugando las muestras (durante 10 

minutos a 3000 rpm) o por filtración (en un filtro de 0,45 µm) para obtener una buena difusión en los aplicadores. 

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Muestras a descartar 

• No utilice muestras de suero hemolizadas. La hemólisis incrementa las fracciones alfa-2 y beta. 

• No utilice muestras de plasma. El fibrinógeno da lugar a una banda cerca del punto de aplicación que puede ser confundida con una 

inmunoglobulina monoclonal y afectaría al porcentaje de la fracción beta correspondiente. 

• No utilice muestras de orina muy antiguas o almacenadas incorrectamente en las que pueda haber tenido lugar degradación enzimática de las 

proteínas. 

PROCEDIMIENTO 

El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautomático multiparamétrico. Las etapas automáticas incluyen el procesado de los geles de agarosa 

HYDRAGEL en la siguiente secuencia: aplicación de la muestra, migración electroforética, secado, tinción, destinción y secado final. Las etapas 

manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles, y la puesta en marcha del instrumento para la operación. 

LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS. 

I. PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACIÓN 

1. Encender el HYDRASYS. 

2. Colocar un aplicador para el HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 muestras) y HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 muestras), o dos aplicadores para el 

HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 muestras), en una superficie plana con los números de los pocillos en la cara superior (Fig. 1). 

- Aplique 10 µl de muestra de suero sin diluir o de orina concentrada en cada pocillo. Cargar cada aplicador en el plazo máximo de 2 minutos. 

- Colocar el(los) aplicador(es) en la cámara húmeda con el peine hacia arriba [asirlos por el plástico protector del peine]. Dejar difundir las 

muestras a través de los papeles del peine durante 5 minutos, después de la aplicación de la última muestra. Para uso posterior (hasta 

8 horas), guardar todo el conjunto en refrigeración. 

Ver la hoja de instrucciones de la cámara húmeda para más detalles. 

3. Abrir la puerta del Módulo de migración y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador. 

ATENCIÓN: ¡Nunca cerrar la puerta cuando los soportes están elevados! 

4. Seleccionar el programa de migración «7 B1-B2» para el HYDRAGEL 7 ß1-ß2, o el programa de migración «15/30 B1-B2» para el 

HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 en el menú del instrumento (mitad izquierda del teclado). 

5. Sacar las esponjas tamponadas de su envoltorio ; asirlas por los extremos de plástico. Engarzar los extremos de plástico agujereados con 

las puntas metálicas del soporte de los electrodos ; los extremos de plástico deben quedar encarados al soporte (Fig. 2). 

6. Abrir el contenedor del HYDRAGEL. 

- Extienda un papel de filtro fino de manera rápida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de líquido. Retire el papel 

inmediatamente. 

ADVERTENCIA: No deje que el papel de filtro contacte demasiado rato con el gel para evitar que se deshidrate. 

- Dispensar 120 µl de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 7 ß1-ß2, ó 200 µl para el HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, en el tercio 

inferior del marco serigrafiado en la Superficie de Control de Temperatura del módulo de migración. 

- Colocar el gel (la cara de agarosa hacia arriba) con su lado inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado (Fig. 3). 

- Aplicar el gel en la superficie, haciéndolo contactar con el agua (Fig. 3). Asegurarse que no queden burbujas, que el agua esté extendida 

bajo toda la superficie del gel y que éste esté alineado con el marco serigrafiado. 

7. Devolver ambos soportes a su posición original. Las esponjas tamponadas no deben tocar el gel. NO FORZAR LOS SOPORTES HACIA 

ABAJO. 

8. Extraer el(los) aplicador(es) de la cámara húmeda. Asirlo(s) por el plástico protector. 

- Romper el plástico protector precortado del peine. 

- Con 7 y 15 muestras colocar el aplicador en la posición No 6 del soporte. 

- Con 30 muestras colocar los dos aplicadores en las posiciones No 3 y 9. 

IMPORTANTE: Los números impresos en el(los) aplicador(es) deben quedar de cara al usuario (Fig. 4). 

9. Cerrar la puerta del módulo de migración. 

10. Iniciar el procedimiento inmediatamente, presionando la tecla «START» (flecha verde)en el lado izquierdo del teclado. 

IMPORTANTE: Asegurarse que la toma de aire en el lado derecho del instrumento no está bloqueada. 

MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Los dos soportes descienden, con lo cual esponjas tamponadas y aplicador(es) entran en contacto con la superficie del gel. 

• El soporte del aplicador se eleva. 

• La migración se realiza a una corriente constante de 10 W en el caso del HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ó 20 W en el caso de HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, a 

una temperatura controlada por efecto Peltier de 20 °C, con un acumulado de 36 Vh (para 7 minutos). 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos. 

• La temperatura de la Superficie de Control de Temperatura se eleva a 65 °C durante 10 minutos para el secado de el gel. 

• La Superficie de Control de Temperatura se enfría ; cuando alcanza los 50 °C, un pitido audible indica que la puerta del módulo de migración queda 

desbloqueada. La temperatura permanece a 50 °C hasta que se abre la puerta. Luego, la temperatura desciende hasta 20 °C (en menos de 

5 minutos) después de lo cual puede iniciarse una nueva migración. 

NOTA: La puerta del módulo de migración permanece bloqueada durante todas las etapas de la migración. 

II. PUESTA EN MARCHA DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Abrir la puerta del módulo de migración. 

2. Extraer el(los) aplicador(es) y desechar. 

3. Elevar ambos soportes, extraer las esponjas tamponadas por sus extremos de plástico y desechar. 

4. Extraer el gel seco para el procesamiento posterior. 

5. Después de cada uso, limpiar los electrodos y la Superficie de Control de Temperatura con un paño suave humedecido. 

6. Extraer el Soporte del Gel. Dejarlo en una superficie plana y encajar el gel seco (con la superficie de agarosa de cara arriba) en las muescas 

de los dos cilindros. Cerrar el Soporte del Gel. Asegurarse que el gel está posicionado correctamente en su soporte (Fig. 5). 

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7. Colocar el soporte del gel en el Módulo de Tinción y Procesamiento. 

IMPORTANTE: Antes de iniciar el programa de tinción y procesamiento del gel, controlar: 

- el contenedor de colorante tiene 300 ml de solución de tinción ; 

- el contenedor de decolorante tiene al menos 1 litro de solución decolorante ; 

- el contenedor de desechos está vacío. 

Para la conexión de los reactivos : consultar la información mostrada en la pantalla del instrumento (seleccionar la tecla : VER CANALES). 

IMPORTANTE: No olvidar bloquear los canales no utilizados. 

8. Seleccionar el programa de tinción «PROT./B1-B2/Hb» en el menú del instrumento e iniciar el ciclo presionando la tecla «START» (flecha 

verde de la parte derecha del teclado). 

Durante todas las secuencias de coloración, decoloración y secado, el sistema permanece bloqueado. 

Después del enfriamiento de la cubeta, una señal sonora (bip) suena y el sistema se desbloquea (la ventilación se mantiene hasta la 

recuperación del porta-films). 

III. FINALIZACIÓN DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Extraer el Soporte del Gel de su compartimento, abrirlo y extraer el gel seco. 

NOTA : Si se observan manchas azules residuales en los geles después de la coloración / decoloración, una etapa de lavado suplementario 

con el programa " LAV. ISOENZ/GEL " permite eliminarlas o atenuarlas (según su intensidad) antes de su lectura en densitómetro o escáner. 

2. Si es necesario, limpiar la superficie trasera (la cara del soporte plástico) del gel seco con un paño suave humedecido. 

3. Realizar la densitometría / escáner a 570 nm o con un filtro amarillo. 

NOTA: En los geles con varias filas de muestras (2 ó 3), las longitudes de migración pueden ser ligeramente diferentes, sin ninguna repercusión 

en los resultados. 

RESULTADOS 

Control de calidad 

Se aconseja incluir un suero control (Suero Control, SEBIA PN 4785) en cada análisis de muestras. 

Valores 

El barrido densitométrico (a 570 nm o con un filtro amarillo) de los geles teñidos proporciona las concentraciones relativas (porcentajes) de las 

fracciones individuales de proteína. 

Los valores normales (media ± 2 SD) para las fracciones proteicas electroforéticas principales en los geles HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 en el sistema 

HYDRASYS han sido establecidos a partir de una población sana de 136 adultos (hombres y mujeres). 

La cuantificación de las proteínas en UV en el CAPILLARYS proporciona valores similares a los de la nefelometría (en especial para la albúmina). 

SEBIA propone una estandarización de los valores obtenidos en HYDRAGEL realizando una calibración de los sistemas de lectura. 

Valores sin estandarización Valores estandarizados en el CAPILLARYS FRACCIÓN HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albúmina 60.3 - 72.8 % 54.3 - 65.5 % Alfa-1 globulinas 1.0 - 2.6 % 1.2 - 3.3 % Alfa-2 globulinas 7.2 - 11.8 % 8.3 - 15.0 % Beta-1 globulinas 5.6 - 9.1 % 6.5 - 11.5 % Beta-2 globulinas 2.2 - 5.7 % 2.5 - 7.2 % 

| Gamma globulinas | 6.2 - 15.4 % | 7.1 - 19.5 % | 

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de normalidad. 

Interpretación 1-16 

Para consultas sobre la interpretación de las separaciones electroforéticas de proteínas séricas y urinarias, vea la BIBLIOGRAFÍA. 

En ciertas muestras, una banda fina más o menos focalizada, correspondiente a una parte del complemento C3 puede observarse en la zona Beta 2, 

ver PERFIL ELECTROFORÉTICO. 

Interferencias y limitaciones 

Vea MUESTRAS PARA ANILISIS. 

Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no puede darse 

ninguna garantía respecto a la detección de la totalidad de todos los componente monoclonales. 

Resolución de problemas 

Lamar al Servicio de Asistencia Técnica del distribuidor cuando falle el funcionamiento de la prueba pese a haber seguido cuidadosamente las 

instrucciones para la preparación y conservación de los materiales y para el procedimiento de la técnica. 

Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como las informaciones relativas a la eliminación de los desechos, están disponibles 

en el Servicio de Asistencia Técnica de su distribuidor. 

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CARACTERISTICAS TECNICAS 

Todas la densitometría se realizó utilizando el densitómetro HYRYS, con el filtro amarillo. 

Reproducibilidad Intra-geles 

Tres (3) muestras de suero diferentes fueron analizadas cada una en 28 pistas de un gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 de cada uno de los dos lotes 

controlados. Se calcularon las medias, DS y CV (n = 28) para cada muestra, cada zona y cada gel/lote. La tabla muestra los valores correspondientes 

a la muestra A obtenidos a partir de los dos geles/lotes controlados. Se obtuvieron resultados similares para las muestras B y C. 

FRACCIÓN MEDIA (%) DS CV (%) Albúmina 50.8 ; 51.5 0.8 ; 1.3 1.6 ; 2.5 Alfa 1 2.9 ; 2.9 0.1 ; 0.1 3.2 ; 3.7 Alfa 2 8.8 ; 8.7 0.1 ; 0.2 1.2 ; 2.8 Beta 1 8.6 ; 8.2 0.3 ; 0.2 4.0 ; 2.2 Beta 2 5.3 ; 5.4 0.2 ; 0.5 4.4 ; 8.5 

| Gamma | 24.1 ; 23.3 | 0.4 ; 0.6 | 1.7 ; 2.4 | 

Reproducibilidad Inter-geles e Inter-análisis 

Quince (15) muestras de suero diferentes fueron analizadas en un gel, cada uno de dos lotes de geles HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, durante cinco días 

consecutivos. Cada muestra fue aplicada en dos pistas de cada gel (filas superior e inferior). Se calcularon las medias, DS y CV diarios y totales para 

cada muestra y fracción. Los resultados fueron esencialmente los mismos para todas las muestras y para ambos lotes. El ejemplo siguiente muestra 

los rangos de DS y CV calculados para muestras individuales durante el período de 5 días y el CV medio calculado a partir de los CV agrupados de 

todas las muestras y días y un lote (n =150). 

FRACCION DS CV (%) CV MEDIO (%) Albúmina 0.3 ; 2.1 0.5 ; 3.2 1.4 Alfa 1 0.1 ; 0.2 3.3 ; 10.2 4.8 Alfa 2 0.1 ; 0.3 1.2 ; 6.0 2.8 Beta 1 0.1 ; 0.7 2.7 ; 8.2 4.3 Beta 2 0.2 ; 0.7 6.1 ; 17.8 11.0 

| Gamma | 0.5 ; 1.1 | 2.9 ; 9.6 | 5.2 | 

Exactitud 

Se analizaron muestras de suero patológicas y normales (n = 112) en geles HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 y en geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. 

Los parámetros de correlación calculados para fracciones individuales a partir del conjunto de datos de los geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

respecto a los sistemas de geles comparados (y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) fueron: 

FRACCION Coeficiente Punto de corte en y Pendiente Rango de Valores en % de Correlación (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albúmina 0.989 0.318 1.010 36.1 - 70.8 Alfa 1 0.967 0.009 0.952 1.0 - 10.4 Alfa 2 0.981 0.002 0.985 5.6 - 22.9 Beta 1 – Beta 2 0.950 0.475 0.950 9.5 - 22.3 

| Gamma | 0.988 | 0.134 | 0.988 | 5.1 - 28.1 | 

Sensibilidad 

Se sometieron a electroforesis en geles HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 diluciones seriadas de dos muestras de suero, cada una con una proteína 

monoclonal. La mayor dilución con una banda monoclonal discernible correspondía a 0.44 y 0.21 g/l de la proteína monoclonal, para las dos muestras 

respectivamente. 

NOTA: El límite de detección puede variar en función de la posición de la banda monoclonal y el fondo policlonal de la fracción de las 

gammaglobulinas. 

Análisis de orinas concentradas 

Los resultados obtenidos con los geles HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 indican una muy buena reproducibilidad intra e interseriales para muestras de orina 

concentradas después de un análisis cuantitativo y cualitativo. Veintiocho (28) muestras diferentes (orinas patológicas y normales) fueron analizadas 

en geles HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 y en otro sistema comercial de geles de agarosa. No hubo diferencias detectables visualmente entre los dos 

sistemas. La sensibilidad de detección se determinó a partir de la mayor dilución serial de una proteína monoclonal urinaria, que proporcionó una 

banda distinguible a 0.024 g/dL. 

BIBLIOGRAFÍA 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 

- 41 -
















PATRÓN DE MIGRACIÓN 

+ 

Albúmina 

Orosomucoide 


α1 Antiquimotripsina 


Globulina GC 


Haptoglobina 

Lipoproteínas α 

Transferrina 

Hemopexina 

Plasminogeno 

Fibronectina 

Lipoproteínas β 


γ Globulinas 

G - A - M - D - E 

- 

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UTILIZAÇÃO 

Os kits de HYDRAGEL 7, 15 e 30 ß1-ß2 são geles de agarose que se destinam à separação em meio alcalino (pH 8,5), das proteínas humanas 

séricas e urinárias em seis fracções principais, por electroforese no aparelho semi-automático HYDRASYS. O sistema HYDRASYS permite realizar 

todas as sequências até à obtenção do gel pronto para análise qualitativa ou quantitativa. As proteínas separadas são coradas com negro de amido. 

O excesso de corante é eliminado em meio ácido. As electroforeses resultantes podem ser analisadas visualmente ou ser avaliadas por densitómetria, 

o que dá uma quantificação relativa e precisa de cada zona individual. 

Cada gel de agarose poderá analisar: 

• 7 amostras no kit HYDRAGEL 7 ß1-ß2, 

• 15 amostras no kit HYDRAGEL 15 ß1-ß2, 

• 30 amostras no kit HYDRAGEL 30 ß1-ß2. 

Para diagnóstico in vitro. Registado no INFARMED. 

PRINCÍPIO DO TESTE 1-16 

A electroforese das proteínas séricas e de outros fluídos é uma análise muito útil, usada em rotina nos laboratórios de análises clínicas, com vista à 

detecção de anomalias no perfil proteico. Baseia-se nos princípios da electroforese de zona executada num suporte adequado. A agarose tem sido 

utilizada por ser um meio de suporte versátil e eficaz. Para a maioria dos diagnósticos, as proteínas são apenas separadas em cinco fracções 

(ex. : kits HYDRAGEL PROTEIN(E)). Para uma melhor resolução, as proteínas do soro podem ser separadas em seis fracções principais, de acordo 

com a sua carga a um determinado pH: albumina, alfa-1 globulinas, alfa-2 globulinas, beta-1 globulinas, beta-2 globulinas e gama globulinas. Cada 

zona contém uma ou mais proteínas do soro. Os padrões das proteínas na urina são semelhantes aos do soro. No entanto, as intensidades relativas 

das fracções ou a sua presença podem variar de acordo com a capacidade de filtração do rim. 

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS NOS KITS HYDRAGEL 7, 15 E 30 ß1-ß2 

ITEM REF. N° 4101 REF. N° 4121 REF. N° 4141 Geles de agarose (prontos a usar) 10 geles 10 geles 10 geles Tiras de tampão (prontas a usar) 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 Diluente da solução corante (solução concentrada) 1 frasco de 60 ml 1 frasco de 60 ml 1 frasco de 60 ml Corante negro de amido (solução concentrada) 1 frasco de 20 ml 1 frasco de 20 ml 1 frasco de 20 ml Aplicadores (prontos a usar) 1 pacote de 10 (7 dentes) 

| 1 pacote de 10 (15 dentes) 2 pacotes de 10 (15 dentes) Papéis de filtro finos | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 

PARA OPTIMIZAÇÃO DOS RESULTADOS 

Os elementos de um mesmo kit devem ser utilizados em conjunto, e de acordo com as instruções de utilização. 

LER ATENTAMENTE AS INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO. 

1. GELES DE AGAROSE 

Preparação 

Os geles de agarose estão prontos a usar. Cada gel contém: agarose, 8 g/l ; tampão tris-barbital pH 8,5 ± 0,1 ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Os geles de agarose contêm 0,61 % de barbital. Não ingerir! Se ingerido, consultar imediatamente um médico! 

Utilização 

Suporte para a electroforese das proteínas. 

Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração 

Armazenar os geles horizontalmente, nas embalagens protectoras de origem, à temperatura ambiente (15 - 30 °C) ou no frigorífico (2 - 8 °C) (a seta 

existente na parte da frente da caixa do kit deve ficar voltada para cima). Os geles são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos das embalagens dos geles. Evitar variações da temperatura durante o armazenamento (ex: não armazenar perto de uma janela ou de 

uma fonte de calor). 

NÃO CONGELAR! 

Deitar fora o gel quando: 

(i) houver cristais ou precipitados na superfície do gel ou quando a textura do mesmo for muito macia (isto sucede se o gel for congelado) ; 

(ii) há desenvolvimento de bactérias ou fungos ; 

(iii) estiver presente uma quantidade anormal de líquido na embalagem do gel (resultante da exsudação do gel devido a condições de 

armazenamento inadequadas). 

2. TIRAS DE TAMPÃO 

Preparação 

As tiras de esponja com tampão estão prontas a usar. Cada uma contém : tampão tris-barbital pH 8,5 ± 0,3 ; azida de sódio ; aditivos, não perigosos 

nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: As tiras contêm 1,38 % de barbital e 0,225 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingeridas, consultar imediatamente um médico! 

Quando deitar fora as tiras evitar o seu contacto com ácidos, chumbo ou cobre já que estes elementos formam compostos explosivos ou 

tóxicos com a azida de sódio. 

Utilização 

As tiras de tampão funcionam como reservatório de tampão da electroforese e asseguram o contacto entre o gel e os eléctrodos. 

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INSTRUÇÕES DE USO SEBIA - Português



As tiras de tampão podem ser conservadas à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). 

As tiras de tampão devem ser conservadas horizontalmente dentro da embalagem protectora (a seta na parte da frente da caixa deve permanecer 

apontada para cima). 

As tiras são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou na embalagem protectora das tiras. NÃO CONGELAR. 

3. DILUENTE DA SOLUÇÃO CORANTE 

Preparação 

O diluente da solução corante deverá ser utilizado como está descrito no parágrafo " SOLUÇÃO CORANTE NEGRO DE AMIDO ". 

Contém uma solução ácida. 

Utilização 

Para a preparação das soluções de corante negro de amido. 


Armazenar o diluente à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. NÃO 

CONGELAR. 

Não adicionar azida de sódio. 

4. CORANTE NEGRO DE AMIDO 

Preparação 

O corante negro de amido concentrado, é uma solução viscosa que pode eventualmente gelificar, o que não afecta nada a qualidade da solução final 

e o seu poder de coloração. 

Em qualquer caso, para obter uma perfeita reconstituição do corante, é necessário que seja respeitado o procedimento seguinte: 

1. Adicionar cerca de 15 ml do diluente do corante ao frasco do negro de amido concentrado. 

2. Fechar cuidadosamente o frasco. 

3. Agitar muito vigorosamente o frasco durante pelo menos 5 segundos. 

4. Transferir esta solução para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

5. Repetir esta etapa duas vezes ou se necessário 3 vezes. 

6. Transferir o diluente restante para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

7. Completar o volume para 300 ml com água destilada ou desmineralizada. 

8. Agitar muito bem esta solução durante 5 a 10 minutos. 

A solução corante está pronta a utilizar. 

NOTA : Uma reconstituição incompleta do corante pode provocar uma má coloração da fracção de albumina (baixa da percentagem ou lacuna dentro 

da fracção). 

Após diluição, a solução de corante contém: solução ácida pH ≈ 2 ; negro de amido, 4 g/l ; etilenoglicol, 6,7% ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Nocivo em caso de ingestão. 

Utilização 

Para corar geles depois da electroforese das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar a solução de corante concentrada e a solução diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico em frascos fechados para evitar a 

evaporação. 

A solução concentrada é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos. 

A solução diluída de corante é estável por um mês. 

Não guardar a solução de trabalho do corante próximo de uma fonte de calor. 

5. APLICADORES 

Utilização 

Aplicadores pré-cortados, de utilização única, para aplicação das amostras. 

Armazenamento 

Armazenar os aplicadores em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

6. PAPEL DE FILTRO 

Utilização 

Pré-cortados, de utilização única, estes finos papéis absorventes destinam-se à absorção do excesso de líquido da superfície do gel antes da 

aplicação da amostra. 

Armazenamento 

Armazenar os papéis de filtro finos num local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. SOLUÇÃO DESCORANTE 

Preparação 

Cada frasco de solução descorante concentrada (SEBIA, ref. n° 4540, 10 frascos de 100 ml cada) deve ser diluída a 1/1000 com água destilada ou 

desmineralizada e permite obter 100 litros de solução total. É conveniente diluir apenas 5 ml da solução concentrada de cada vez, para o volume 

final de 5 litros (a capacidade do recipiente onde se vai colocar a solução descorante). Após diluição, a solução descorante contém: ácido cítrico ; 

0,5 g/l. 

Utilização 

Na descoloração, isto é, remoção do excesso de corante do gel. No enxaguamento da câmara de coloração, após lavagem. 


Armazenar a solução descorante concentrada à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos dos frascos da solução descorante. A solução descorante diluída é estável por uma semana à temperatura ambiente, quando conservada 

em recipiente fechado. Não adicionar azida de sódio. 

Deitar fora a solução diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

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Em caso de conservação prolongada (mais de uma semana) da solução diluída, adicionar 50 µl/l de ProClin 300 para evitar a proliferação bacteriana. 

A solução descorante diluída contendo ProClin é estável à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). É estável até ao 

fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco do descolorante. 

2. SOLUÇÃO DE LAVAGEM HYDRASYS 

Preparação 

Cada frasco de solução de lavagem concentrada HYDRASYS (SEBIA, ref. n° 4541, 10 frascos de 80 ml cada) deve ser diluído para a obtenção do 

volume final de 5 litros com água destilada ou desmineralizada. Após diluição, a solução de lavagem contém: tampão alcalino pH 8,8 ± 0,3 ; azida de 

sódio. 

AVISO: A solução de lavagem contem 0,625 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! Quando em 

contacto com ácidos, chumbo ou cobre a azida de sódio pode levar à formação de compostos explosivos ou tóxicos. Quando deitar fora 

lavar abundantemente com grandes quantidades de água. 

Utilização 

Para a lavagem da câmara de coloração do HYDRASYS. Utilizar periodicamente. Por exemplo, se o aparelho for utilizado diariamente, fazer a 

lavagem da câmara de coloração uma vez por semana. 

Ver as instruções de utilização incluídas na embalagem. 


Armazenar a solução concentrada e a solução diluída em recipientes fechados à temperatura ambiente ou no frigorífico. A solução concentrada é 

estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco da solução de lavagem. 

Deitar fora a solução de lavagem diluída houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

3. FLUIDIL 

Preparação 

O Fluidil (SEBIA ref. n° 4587, 5 ml) vem pronto a ser usado. 

Utilização 

Destina-se a diluir amostras viscosas ou turvas, por exemplo, soro contendo uma crioglobulina ou um criogel. 


Armazenar à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco de Fluidil. 

O Fluidil não deve conter quaisquer precipitados. 

EQUIPAMENTOS E ACESSÓRIOS NECESSÁRIOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, ref. n° 1210 ou ref. n° 1211. 

2. HYDRAplus SEBIA, ref. n° 1215, micropipetador, manual ou automático, como alternativa na pipetagem das amostras para os aplicadores 

respectivos. 

3. Câmara húmida, ref. n° 1270, fornecida com o HYDRASYS. 

4. Frascos de plástico fornecidos com o HYDRASYS. 

5. Pipetas: 10 µl e 200 µl. 

6. Densitómetro / scanner capaz de ler geles de 82 x 51 mm ou 82 x 102 mm a 570 nm (filtro amarelo), por exemplo, HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

ou Scanner equipado do software PHORESIS SEBIA. Para a sua utilização e calibração seguir as instruções de cada aparelho. 

7. Suportes para meios geles SEBIA, ref. n° 10043110. 

AMOSTRAS 

Colheita e conservação das amostras 

É recomendada a utilização de amostras frescas. Os soros e as urinas devem ser colhidos de acordo com os métodos utilizados nos laboratórios de 

análises clínicas. As amostras devem ser refrigeradas (2 - 8 °C) o mais depressa possível após colheita, até uma semana. (NOTA: As fracções beta–2 

e a fracção C3 do complemento desaparecem ao fim de 3 dias). 

Para conservações prolongadas, congelar as amostras. As amostras congeladas são estáveis durante pelo menos um mês. O congelamento das 

urinas com azida de sódio a 0,2 g/l e HEPES 0,1 M (pH 6,75) e dos soros com azida de sodio a 0,2 g/l aumenta a estabilidade do armazenamento. 

IMPORTANTE: Não usar ácido bórico como conservante. 

As amostras descongeladas podem levar ao aparecimento de ligeiras bandas no ponto de aplicação, devido à desnaturação das proteínas ou 

lipoproteínas. 

Quanto mais velhas forem as amostras, mais as ß lipoproteínas são anódicas. Do mesmo modo, após congelamento, as ß lipoproteínas são muito 

mais anódicas do que no soro fresco: a sua migração varia da zona ß até às zonas α-2 ou α-1. 

Preparação da amostra 

1.Soro 

Utilizar directamente amostras de soro puras. Após conservação a 2 - 8 °C ou congelamento, alguns soros (especialmente os que contêm uma 

crioglobulina ou um criogel) podem tornar-se viscosos ou turvos. Estes soros podem apresentar problemas na aplicação porque difundem com 

muita dificuldade pelos dentes do aplicador de amostras. Neste caso, adicionar 25 µl de Fluidil a 75 µl de soro e agitar no vortex durante 

15 segundos. Depois, seguir a técnica normal. 

2.Urina concentrada 

A urina deve ser concentrada até 15 – 20 g/l de proteínas totais (com um dispositivo adaptado). 

IMPORTANTE:Algumas urinas contêm um elevado teor em sais. Isso pode provocar uma deformação do gel durante a migração e, 

consequentemente, uma distorção do perfil electroforético. Para evitar este problema é necessário eliminar os sais por meio de 

diálise. 

No caso de urinas turvas (concentradas ou não), recomenda-se a eliminação das partículas por centrifugação das amostras 

(durante 10 minutos a 3000 rpm) ou por filtração (com filtro de 0,45 µm), de modo a obter uma boa difusão nos aplicadores. 

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Amostras a evitar 

• Não utilizar amostras hemolisadas: a hemólise aumenta as zonas alfa-2 e beta. 

• Não utilizar amostras de plasma. O fibrinogénio leva ao aparecimento de uma banda perto do ponto de aplicação que pode ser confundida com 

uma gamapatia monoclonal e aumentar a percentagem da zona correspondente. 

• Evitar amostras de urina armazenadas à muito tempo ou mal armazenadas, uma vez que pode ocorrer a degradação enzimática das proteínas. 

TÉCNICA 

O sistema HYDRASYS é um aparelho semi-automático multi-paramétrico. Os passos automáticos incluem o tratamento dos geles de agarose 

HYDRAGEL segundo as etapas seguintes: aplicação da amostra, migração electroforética, secagem, coloração, descoloração e secagem final. Os 

passos manuais são os seguintes: preparação das amostras e dos geles e lançamento das sequências automáticas. 

LER ATENTAMENTE O MANUAL DE INSTRUÇÕES DO HYDRASYS. 

I. PREPARAÇÃO DA MIGRAÇÃO 

1. Ligar o aparelho HYDRASYS. 

2. Colocar um aplicador para o HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 amostras) e HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 amostras) ou dois aplicadores para o 

HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 amostras), numa superfície plana com os números dos poços voltados para cima (Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de soro puro ou urina concentrada em cada poço. A pipetagem das amostras em cada aplicador não deve ultrapassar o tempo 

de dois minutos. 

- Colocar o(s) aplicador(es) na câmara húmida com os dentes voltados para cima. (Segure-o(s) pela protecção de plástico). Deixar as 

amostras difundirem-se pelos dentes durante cinco minutos após a aplicação da última amostra. Para uma conservação prolongada 

(8 horas no máximo), colocar a câmara húmida no frigorífico. 

Ver as instruções de utilização da câmara húmida para mais detalhes. 

3. Abrir a tampa da câmara de migração e levantar os suportes do aplicador e dos eléctrodos. 

AVISO: Nunca fechar a tampa quando os suportes estão levantados! 

4. Seleccionar o programa de migração "7 B1-B2 " para o HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ou "15/30 B1-B2 " para o HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 no menu 

apresentado pelo aparelho. 

5. Retirar as tiras de tampão da embalagem ; colocar as tiras de tampão sobre os eléctrodos fixando as extremidades de plástico perfuradas 

aos pinos do suporte dos eléctrodos. A face das tiras de tampão onde estão fixadas as partes de plástico fica em contacto com os eléctrodos. 

(Fig. 2). 

6. Desempacotar a placa HYDRAGEL. 

- Eliminar rapidamente o excesso de líquido da superfície do gel com a ajuda de um papel de filtro fino. 

ATENÇÃO: Não deixar o papel de filtro em contacto prolongado com o gel, para evitar a sua desidratação. 

- Aplicar 120 µl de água destilada ou desmineralizada para o HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ou 200 µl para o HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 no terço inferior 

do quadro impresso na placa de migração. 

- Colocar o gel virado para cima, contra a parte inferior do quadro impresso na placa de migração (Fig. 3). 

- Dar uma forma côncava ao gel (Fig. 3) e baixá-lo lentamente até contacto com a gota de água. A gota deve repartir-se por toda a largura 

do gel. Ajustar ligeiramente o gel de modo a eliminar as bolhas de ar que se tenham formado. Baixar o gel até ficar na horizontal. 

7. Baixar os dois suportes. Nesta posição as tiras de tampão não tocam no gel. NÃO FORÇAR A DESCIDA DOS SUPORTES MANUALMENTE. 

8. Retirar o(s) aplicador(es) da câmara húmida. Segurá-lo(s) pela estrutura de protecção plástica. 

- Quebrar e retirar a protecção dos dentes. 

- Para analisar 7 e 15 amostras, colocar o aplicador na posição nº 6 do suporte. 

- Para analisar 30 amostras, colocar os aplicadores nas posições nº 3 e 9 do suporte. 

IMPORTANTE: Os números impressos nos aplicadores devem ficar virados para o operador (Fig. 4). 

9. Fechar a tampa da câmara de migração. 

10. Dar início imediatamente ao processo apoiando em "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

IMPORTANTE: Assegure-se de que a grelha de ventilação não está tapada (à direita do aparelho). 

MIGRAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Descida dos suportes do aplicador e dos eléctrodos de forma a que as tiras de tampão e o(s) aplicador(es) contactem com a superfície do gel. 

• Subida do aplicador de amostras. 

• A migração é feita à potência constante de 10 W, para o HYDRAGEL 7 ß1-ß2, ou a 20 W, para o HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, a 20 °C, controlada 

por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 36 Vh, durante cerca de 7 minutos. 

• Os eléctrodos são desligados com a subida do suporte. 

• Secagem do gel a 65 °C durante cerca de 10 minutos. 

• A placa de migração é arrefecida ; quando chega aos 50 °C ouve-se um sinal sonoro que indica que a tampa da câmara de migração foi 

desbloqueada. A temperatura da placa permanece a 50 °C até que a tampa seja aberta. Depois, a temperatura continua a decrescer até chegar 

aos 20 °C (em menos de 5 minutos). Pode dar-se início a um novo processo de migração. 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante todos os passos da migração. 

II. PREPARAÇÃO DAS SEQUÊNCIAS DE TRATAMENTO DO GEL 

1. Abrir a tampa. 

2. Retirar o(s) aplicador(es) e deitá-lo(s) fora. 

3. Levantar os suportes, retirar as tiras de tampão pegando-lhes pelas suas extremidades de plástico e deitá-las fora. 

4. Retirar o gel para tratamento posterior. 

5. Depois de cada utilização, limpar os eléctrodos e a placa de migração com um pano macio e húmido. 

6. Colocar o gel no suporte da câmara de coloração (gel virado para cima) da seguinte maneira (Fig. 5): 

- Abrir o suporte. 

- Colocá-lo na bancada. 

- Encaixar o gel nas ranhuras existentes. 

- Fechar o suporte. 

- Verificar se o gel está bem encaixado. 

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7. Colocar o suporte do gel na câmara de coloração. 

IMPORTANTE: Antes de dar início ao programa de coloração do gel, verificar o seguinte: 

- se o frasco do corante está cheio com 300 ml de solução corante ; 

- se o frasco de descorante contem pelo menos 1 litro de solução descorante ; 

- se o frasco de despejo está vazio. 

Para seleccionar os canais de entrada dos reagentes: consultar a informação indicada no ecrã do aparelho (premir a tecla: VER CANAIS). 

IMPORTANTE: Não esquecer de tapar os canais não utilizados. 

8. Seleccionar o programa de coloração "PROT./B1-B2/Hb" no menu do aparelho. Iniciar a operação premindo a tecla "START" (tecla verde no 

lado direito do teclado). 

Durante todas as sequências de coloração, descoloração e secagem a câmara permanece fechada. Após arrefecimento da câmara ouve-se 

um sinal sonoro que indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. A ventilação é mantida até que o suporte seja retirado. 

III. FINALIZAÇÃO DO TRATAMENTO DO GEL 

1. Retirar o suporte da câmara, abrir e remover o gel seco. 

NOTA: Caso se observem manchas azuis residuais no gel após coloração / descoloração, pode-se realizar uma etapa de lavagem 

suplementar com o programa " LAV. ISOENZ/GEL ", que permite eliminar ou atenuar grandemente as manchas (em termos de intensidade) 

antes da leitura com o densitómetro / scanner. 

2. Se necessário, limpar a parte de trás (o lado do plástico) do gel seco com um papel macio e húmido. 

3. Ler num densitómetro / scanner a 570 nm ou com filtro amarelo. 

NOTA : Para os geles com linhas de migração múltiplas (2 ou 3), as extensões da migração podem ser sensivelmente diferentes, sem qualquer 

consequência negativa nos resultados. 

RESULTADOS 

Controlo de qualidade 

Em cada série de amostras é aconselhável incluir um soro de controlo (Soro de controlo, SEBIA ref. n° 4785). 

Valores 

A leitura por densitometria (a 570 nm ou com filtro amarelo) permite definir as concentrações relativas (percentagens) de cada fracção. 

Os valores normais (média ± 2 SD) para cada fracção, obtida no gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 no sistema HYDRASYS foram estabelecidos a partir 

de uma população saudável de 136 adultos (homens e mulheres). 

A quantificação das proteínas por UV no CAPILLARYS dá valores semelhantes ao procedimento por nefelometria (principalmente para a albumina). 

A SEBIA propõe uma padronização dos valores obtidos com HYDRAGEL após calibração dos sistemas de leitura. 

Valores sem padronização Valores padronizados no CAPILLARYS 

FRACÇÃO HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumina 60,3 - 72,8 % 54,3 - 65,5 % Alfa-1 globulinas 1,0 - 2,6 % 1,2 - 3,3 % Alfa-2 globulinas 7,2 - 11,8 % 8,3 - 15,0 % Beta-1 globulinas 5,6 - 9,1 % 6,5 - 11,5 % Beta-2 globulinas 2,2 - 5,7 % 2,5 - 7,2 % 

| Gama globulinas | 6,2 - 15,4 % | 7,1 - 19,5 % | 

Recomenda-se que cada laboratório estabeleça os seus próprios valores normais. 

Interpretação 1-16 

Para mais informações na interpretação das electroforeses das proteínas do soro consultar a BIBLIOGRAFIA. 

Em certas amostras, uma faixa fina mais ou menos focalizada corresponde a uma parte do complemento C3. Pode ser observada junto da zona 

beta 2, ver PERFIL ELECTROFORÉTICO. 

Limitações 

Ver AMOSTRAS PARA ANÁLISE. 

De acordo com os princípios analíticos das técnicas actuais (princípios de electroforese de zona, resolução e sensibilidade), não pode ser dada 

qualquer garantia quanto à detecção total de todos os compostos monoclonais. 

Assistência técnica 

Em caso de maus resultados contactar os serviços técnicos do fornecedor ainda que tenham sido seguidas, escrupulosamente, as instruções para 

a preparação e armazenamento dos reagentes, assim como as instruções de utilização da técnica. 

Estão disponíveis nos Serviços Técnicos da SEBIA fichas de dados de segurança dos diversos reagentes do kit, bem como informação relativa à 

eliminação dos desperdícios. 

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO 

Os resultados que se seguem, obtidos com um densitómetro HYRYS, SEBIA, usando o HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 em análise quantitativa, indicam 

uma muito boa repetibilidade e reproductibilidade do kit HYDRAGEL 15 & 30 ß1-ß2 em relação a todos os aspectos testados, com um coeficiente de 

variação médio de 4 %. 

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Reprodutibilidade intra-ensaio 

Três amostras diferentes de soro, foram executadas em 28 pistas diferentes de geles HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, de 2 lotes diferentes. As médias, DP 

e CV (n = 28) foram calculados para cada amostra, e cada lote. A tabela mostra os valores obtidos para uma das três amostras. 

FRACÇÃO MÉDIA (%) DP CV (%) Albumina 50,8 ; 51,5 0,8 ; 1,3 1,6 ; 2,5 α1 2,9 ; 2,9 0,1 ; 0,1 3,2 ; 3,7 α2 8,8 ; 8,7 0,1 ; 0,2 1,2 ; 2,8 ß1 8,6 ; 8,2 0,3 ; 0,2 4,0 ; 2,2 ß2 5,3 ; 5,4 0,2 ; 0,5 4,4 ; 8,5 

| γ | 24,1 ; 23,3 | 0,4 ; 0,6 | 1,7 ; 2,4 | 

Reprodutibilidade inter-ensaios 

15 amostras de soro diferentes foram executadas em um gel de dois lotes diferentes do kit HYDRAGEL 15 & 30 ß1-ß2, durante 5 dias consecutivos. 

Cada amostra foi aplicada em duas posições diferentes de cada gel (pistas superiores e inferiores). As médias diárias e totais, SD e CV foram 

calculados para cada amostra e para cada lote. Os resultados foram essencialmente os mesmos para todas as amostras e para os dois lotes. O 

exemplo seguinte mostra os intervalos de SD e CV calculados para cada amostra individualmente durante o período de 5 dias e o CV médio calculado 

do conjunto de CV para todas as amostras de um só lote (n = 150). 

FRACÇÃO DP CV (%) CV MÉDIA (%) Albumina 0,3 ; 2,1 0,5 ; 3,2 1,4 α1 0,1 ; 0,2 3,3 ; 10,2 4,8 α2 0,1 ; 0,3 1,2 ; 6,0 2,8 ß1 0,1 ; 0,7 2,7 ; 8,2 4,3 ß2 0,2 ; 0,7 6,1 ; 17,8 11,0 

| γ | 0,5 ; 1,1 | 2,9 ; 9,6 | 5,2 | 

Precisão 

Amostras de 112 soros, normais e patológicos, foram executadas em geles de HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 e noutro sistema em gel de agarose 

disponível comercialmente. Os dois sistemas mostram uma perfeita correlação tendo-se encontrado uma sensibilidade de 83,8 % e uma 

especificidade de 98,7 % para as gamaglobulinas em relação a esta segunda técnica, calculados segundo o método recomendado (Wendling, 1986). 

O quadro seguinte mostra os resultados da regressão linear (y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30): 

FRACÇÃO Coeficiente Intercepção - y Declive Limites de valores %* de correlação (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albumina 0,989 0,318 1,010 36,1 - 70,8 α-1 0,967 0,009 0,952 1,0 - 10,4 α-2 0,981 0,002 0,985 5,6 - 22,9 ß1-ß2 0,950 0,475 0,950 9,5 - 22,3 

| γ | 0,988 | 0,134 | 0,988 | 5,1 - 28,1 | 

Sensibilidade 

Um soro patológico com uma proteína monoclonal de 26,8 g/l foi diluída em série: migração das diluições no gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 e noutro 

sistema em gel de agarose disponível comercialmente. Após comparação visual de cada gel, a maior diluição que permite ver a banda monoclonal 

é a mesma para os dois sistemas (1/128). A concentração mais fraca detectada, de uma banda monoclonal, é de 0,21 g/l. 

NOTA: Consoante a posição da banda monoclonal e do fundo policlonal na zona das gamaglobulinas, o limite de detecção de uma paraproteína pode 

variar. 

Análise de urinas concentradas 

Os resultados obtidos com o gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 após análise quantitativa e qualitativa indicam uma boa repetibilidade e reproductibilidade 

do kit HYDRAGEL 15 & 30 ß1-ß2 em relação a todos os aspectos ensaiados. A análise qualitativa de 28 amostras diferentes por electroforese no gel 

HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 e noutro sistema de gel de agarose disponível comercialmente, mostra uma correlação perfeita entre os dois sistemas de 

análise. A sensibilidade da técnica HYDRAGEL 15 & 30 ß1-ß2 para análise de urina concentrada é a mesma que o limite de detecção de uma 

paraproteína urinária, na ordem de 0,24 g/l. 

BIBLIOGRAFIA 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 



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PERFIL ELECTROFORÉTICO 

+ 

Albumina 

Orosomucóide 


α1 Antiquimotripsina 


GC Globulina 


Haptoglobina 

α Lipoproteína 

Transferrina 

Hemopexina 

Plasminogéneo 

Fibronectina 

β Lipoproteína 


γ Globulinas 

G - A - M - D - E 

- 

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ANVÄNDNINGSOMRÅDE 

HYDRAGEL 7, 15 och 30 ß1-ß2 kit är avsedda för separation av proteiner i humant serum och urin genom elektrofores på basiskt buffrade (pH 8.5) 

agarosgeler. De normala serumproteinerna separeras i sex huvudfraktioner. Kiten används tillsammans med det semi-automatiska instrumentet 

HYDRASYS. Separerade proteiner infärgas med amidoblack. De elektroforetiska separationerna utvärderas visuellt för abnormala proteinmönster. 

Densitometri ger noggrann, relativ kvantifiering av inviduella zoner. 

Varje agarosgel är avsedd för prov 

• 7 prov HYDRAGEL 7 ß1-ß2 kitet, 

• 15 prov HYDRAGEL 15 ß1-ß2 kitet, 

• 30 prov HYDRAGEL 30 ß1-ß2 kitet. 

Endast för "Invitro" diagnostik. 

TESTPRINCIPER 1-16 

Elektrofores av proteiner är en väletablerad teknik som används rutinmässigt vid kliniska laboratorier för screening av serum och andra biologiska 

vätskor för proteinabnormaliteter. Det är baserat på principen hos zonelektrofores som utförs på ett lämpligt hjälpmedium. Agaros har utvecklats till ett 

mångsidigt och användbart hjälpmedium. 

I rutinmässiga diagostiska applikationer, separeras serumproteiner in i fem huvudfraktioner (t.ex. HYDRAGEL PROTEIN(E) kit). När en högre 

upplösning krävs kan proteinerna delas upp i sex huvudfraktioner med HYDRAGEL ß1-ß2 kit : albumin, alfa-1 globuliner, alfa-2 globuliner, beta-1 

globuliner, beta-2 globuliner och gammaglobuliner. Varje zon innehåller ett eller flera serumproteiner. Proteinmönstren för urin liknar dem för serum. 

Dock kan de relativa intensiteterna hos fraktionerna eller deras närvaro variera mycket beroende på njurarnas filtreringskapacitet. 

MEDFÖLJANDE REAGENSER OCH MATERIAL I KIT : HYDRAGEL 7, 15 OCH 30 ß1-ß2 

OBJEKT PN 4101 PN 4121 PN 4141 Agaros Geler (klar att använda) 10 geler 10 geler 10 geler Buffrade Strips (klar att använda) 10 förp. med 2 i varje 10 förp. med 2 i varje 10 förp. med 2 i varje Färgspädningslösning (stamlösning) 1 rör, 60 mL 1 rör, 60 mL 1 rör, 60 mL Amidoblack färg (stamlösning) 1 rör, 20 mL 1 rör, 20 mL 1 rör, 20 mL Applikatorer (klar att använda) 1 förp. med 10 (7 tänder) 1 förp. med 10 (15 tänder) 2 förp. med 10 (15 tänder) 

| Filterpapper | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 

FÖR OPTIMALA RESULTAT 

Reagenser från samma sats måste användas ihop och enligt de instruktioner som anges på förpackningens insticksblad. 

LÄS NOGGRANNT INSTICKBLADET I FÖRPACKNINGEN. 

1. AGAROS GELER 

Förberedelse 

Agarosgeler är färdiga för användning. Varje gel innehåller : agaros, 0.8 g/dL ; Tris-barbital buffert pH 8.5 ± 0.1 ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimal prestanda. 

VARNING: Agarosgeler innehåller 0.61 % barbital. Förtär inte ! Vid förtäring, kontakta läkare omedelbart. 

Användning 

Hjälpmedium för proteinelektrofores. 

Lagring, stabilitet och tecken på förändring 

Förvara gelerna horisontellt på plan yta i originalförpackningen och vid rumstemperatur (15 till 30 °C) eller i kylskåp (2 till 8 °C) (Pilen på förpackningens 

framsida måste peka uppåt). 

Undvik kraftiga temperaturväxlingar under förvaringen (t.ex., förvara inte gelen nära ett fönster eller värmekälla). Gelerna är hållbara till angivit 

utgångsdatum på förpackningen. 

FRYS INTE GELEN. 

Kassera gelen om : 

(i) kristaller eller fällning bildats på gelytan eller om gelkonsistensen blivit väldigt mjuk (inträffar när gelen varit fryst), 

(ii) om bakteriell tillväxt eller mögeltillväxt påvisas, 

(iii) det är onormal mängd vätska i påsförpackningen (som ett resultat av buffertutsöndring från gelen på grund av felaktiga lagringsförhållanden). 

2. BUFFRADE STRIPS 

Förberedelse 

Buffrade strips är färdiga att använda. Varje strip innehåller: Tris-barbital buffert pH 8.5 ± 0.3 ; natriumazid ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer, men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Bufferten i stripsen innehåller 1.38 % barbital and 0.225 % natriumazid. Förtär inte, svälj inte ! Mycket giftigt ! Kontakta läkare 

omedelbart ! Vid avyttring, undvik kontakt med syra, bly eller koppar, då dessa kan bilda explosiva eller giftiga föreningar med natriumazid 

(syra). 

Användning 

Buffrade strips fungerar som en elektroforetisk buffertreservoar och säkerställer kontakt mellan gelen och elektroderna. 


Förvara stripsen vid rumstemperatur eller i kylskåp. De är hållbara fram till angivet utgångsdatum på förpackningen. FRYS INTE. 

Kassera ! om förpackningen är öppen eller om stripsen är uttorkade. 

- 50 - 

SEBIA INSTRUKTIONER - Svenska

3. FÄRGSPÄDNINGSLÖSNING 

Förberedelse 

Diluent till stamfärglösning måste användas som beskrivs i paragraf " AMIDOSVART FÄRGNING ". 

Den innehåller sur lösning. 

Användning 

För preparering av Amidosvart färglösning. 



Förvara spädningslösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller flaskans etikett. 

FRYS INTE. 

Tillsätt inte Natriumacid. 

4. AMIDOSVART FÄRG 

Förberedelse 

Amidosvart koncentratet är visköst och kan bli trögflytande. Egenskaperna hos stamlösningen påverkas ej av ökad viskositet eller löslighet. 

För att uppnå en perfekt rekonstituering av färgen, vänligen respektera nedansående procedur: 

1. Tillsätt 15 ml färgdiluent till vialen amidosvartkoncentrat. 

2. Stäng vialen omsorgsfullt. 

3. Skaka vialen kraftigt i c:a 5 sekunder. 

4. Häll lösningen i behållaren för färgprocessning. 

5. Repetera dessa steg 2 eller 3 gånger om nödvändigt. 

6. Överför återstående diluent till behållaren och fyll upp till 300 ml med destillerat eller avjoniserat vatten. 

7. Blanda innehållet i behållaren noga 5 till 10 minuter. Färglösningen är nu redo att användas. 

NOTERA: En icke komplett reconstituerad färglösning kan leda till en undervärdering av albuminfraktionen (lågt procenttal eller vita hål i fraktionen). 

Efter spädning innehåller arbetsfärglösningen : sur lösning pH ≈ 2 ; amidosvart, 0.4 g/dL ; etylen-glykol, 6.7 % ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För infärgning av geler vid elektroforetisk proteinseparering. 

VIKTIGT : Färglösning är avsedd för färgning av 10 geler. Byt färg efter 10 färgningssteg. 


Lagra både stam- och bruks- lösningar vid rumstemperatur eller i kylskåp i väl tillslutna behållare för att förhindra avdunstning. Stamfärglösningen är 

hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskans etikett. Brukslösning är hållbar i 1 månad. 

Förvara inte arbetsfärglösningen i närheten av en värmekälla. 

5. APPLIKATORER 

Användning 

Tillskurna applikatorer för engångsbruk. För provapplicering. 

Förvaring 

Förvara applikatorerna på en torr plats, rumstempererat eller i kylskåp. 

6. FILTERPAPPER - TUNNA 

Användning 

Tunnt tillskurna och absorberande pappersbitar för engångsbruk. Används för borttagning av fukt på gelytan innan provapplicering. 

Förvaring 

Förvara filterpappren på ett torrt ställe i rumstemperatur eller i kylskåp. 

ERFORDERLIGA REAGENSER 

1. AVFÄRGNINGSLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska med koncentrat av avfärgningslösning (SEBIA, PN 4540, 10 x 100 mL ) skall spädas upp till 100 liter med destillerat eller avjoniserat 

vatten. Lämpligt är att endast späda 5 mL av stamlösning till 5 liter, vilket är volymen hos behållaren för avfärgningslösning. Efter spädning innehåller 

den bruksfärdiga avfärgningslösningen: citronsyra, 0.05 g/dL. 

Användning 

För avfärgning, vilket innebär borttagning av överflödig färg och bakgrundsfärg från gelerna, samt för avsköljning av färgfacket efter tvättsteget. 

För att neutralisera den sura avfärgningslösningen, häll 15 mL av 50 % natriumhydroxidlösning, in i den tomma avfallsbehållaren. 


Lagra stamlösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på förpackning eller på flasketiketterna. Brukslösning 

av avfärgningsslösning är hållbar i en vecka under förutsättning att den förvaras i en väl tillsluten flaska i rumstemperatur. Tillsätt ej natriumazid. 

Kassera den färdigspädda avfärgningslösningen om den förändras i utseende t.ex., blir grumlig p.g.a. mikrobiell kontaminering 

För att förhindra mikrobiell tillväxt i den spädda avfärgningslösningen (vid lagring mer än 1 vecka) tillsätt 5 µl/dL av ProClin 300. 

Bruksavfärgningslösning tillsatt med ProClin är hållbar i stängd flaska, till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på avfärgninglösningens 

flasketiketter, förvarad vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

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2. HYDRASYS TVÄTTLÖSNING 


Förberedelse 

Varje flaska av stamlösning för HYDRASYS tvättlösning (SEBIA PN 4541, 10 x 80 mL) skall spädas upp till 5 liter med destillerat eller avjoniserat 

vatten. Efter spädning innehåller den bruksfärdiga tvättlösningen: alkalisk buffer pH 8.8. ± 0.3 ; natriumazid. 

VARNING: Tvättstamlösningen innehåller 0,625 % natriumazid. Farlig vid förtäring, kontakta läkare omedelbart. Natriumazid kan leda till 

bildning av explosiva eller giftiga ämnen vid kontakt med syror, bly eller koppar. Spola alltid med en stor mängd vatten efter det att 

lösningen hällts ut. 

Användning 

Lösningen används för rengöring av HYDRASYS färgfack. Används regelbundet om daglig användning av instrumentet sker. Tvätta färgfacket varje 

vecka. 

Se bruksanvisning i förpackningen. 


Lagra stam- och bruksfärdig- tvättlösningen i stängda behållare vid rumstemperatur eller i kylskåp. Lösningarna är stabila fram till angivet 

utgångsdatum på flaskornas etiketter. 

Släng den färdigspädda tvättlösningen om den förändras i utseende, t.ex. blir grumlig vid mikrobiell kontaminering. 

3. FLUIDIL 

Förberedelse 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 mL) är färdig för användning. 

Användning 

För spädning av viskösa eller grumliga prov, t.ex. serum som innehåller kryoglobulin eller kryogel. 


Förvara vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på flaskans etikett. 

Fluidil måste vara fri från fällning. 

UTRUSTNING OCH NÖDVÄNDIGA TILLBEHÖR 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 eller PN 1211. 

2. Mikropipetter, antingen manuella eller automatiska, som t.ex. HYDRAplus SEBIA, PN 1215, för ett alternativt sätt att ladda applikatorerna med 

patientprov. 

3. Fuktkammare, PN 1270, levererad med HYDRASYS. 

4. Behållarkit levererad med HYDRASYS. 

5. Pipetter: 10 µL och 200 µL. 

6. Densitometer / scanner kapabel att scanna 82 x 51 mm eller 82 x 102 mm gelplattor vid 570 nm eller med ett gult filter : HYRYS SEBIA, DVSE 

SEBIA eller PHORESIS mjukvara anpassat för en flat-bed scanner. Se tillverkarens instruktioner för funktion och kalibreringsrutiner. 

7. Gelhållare för halva geler SEBIA, PN 10043110. 

PROV FÖR ANALYS 

Provtagning och förvaring 

Färskt serum prov rekommenderas för analys. Sera och urin måste insamlas enligt etablerade rutiner som används vid kliniska laboratorier. 

Kylförvara proven (2 till 8 °C) snarast efter provtagning, förvaring upp till en vecka i kyl. (NOTERA : beta-2 fraktion, C3 komplement, försvinner efter 

3 dagar). För längre förvaring frys proven (stabila minst en månad). 

Infrysning av serumprov med natriumazid 0,02 g/dL förlänger lagringsstabiliteten. 

Infrysning av urinprov med HEPES 0.1 M (pH 6.75) och natriumazid, 0,02 g/dL, förlänger lagringsstabiliteten. 

VIKTIGT: Undvik borsyra som konserveringsmedel. 

Tinade prover kan ge lätta appliceringsmärken på grund av protein- eller lipoproteindenaturering. 

Förvaring vid 2 till 8 °C och frysning orsakar anodisk förskjutning av beta-lipoproteiner från betazonen till alfa-2 eller alfa-1 zonen ; ju äldre serumet, 

desto större förskjutning. 

Provförberedelse 

1. Sera 

Använd outspädda serumprov. Efter kyl- eller frys-förvaring, kan vissa sera (speciellt de som innehåller kryoglobulin eller kryogel) bli viskösa 

eller utveckla grumlighet. Sådana sera kan ge appliceringsproblem på grund av att diffusionen genom tänderna i provapplikatorn förhindras. I 

sådant fall, tillsätt 25 µL Fluidil till 75 µL serum och vortexa i 15 sekunder. Följ därefter normalt förfaringssätt 

2. Koncentrerade urinprov 

Analys utförs på prover som tidigare koncentrerats till en total proteinkoncentration på 1.5 - 2.0 g/dL (med en lämplig utrustning). 

VIKTIGT: En del urinprover innehåller hög saltkoncentration. Detta kan ge upphov till geldeformering under migrering och som en konsekvens, 

distorsion av migrationsprofilerna. Om en sådan distorsion gör tolkningen felaktig, måste urinprovet dialyseras för bortagning av 

salterna. 

Diffusion av urinprover in i applikatorspetsarna kan förhindras när urinen (ren eller koncentrerad) är grumlig. Det rekommenderas att 

avlägsna partiklar med centrifugering (t.ex. 10 minuter vid 3,000 rpm) eller filtrering (t.ex., 0.45 µm filter för sterilfiltrering). 

Prov att undvika 

• Använd inte hemolyserade serumprov. Hemolys ökar alpha-2 och betazoner. 

• Undvik plasmaprov. Fibrinogen ger ett band nära appliceringspunkten som kan tas för monoklonalt immunoglobulin och ge felaktigt procenttal för 

motsvarande zon. 

• Undvik gamla, felaktigt förvarade urinprover där enzymatisk nedbrytning av proteiner kan ha förekommit. 

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FÖRFARINGSSÄTT 

HYDRASYS systemet är ett halvautomatiskt multi-parameter instrument. De automatiska stegen inkluderar bearbetning av HYDRAGEL agarosgeler 

i följande ordning: provapplicering, elektroforetisk migrering, torkning, färgning, avfärgning och slutlig torkning. De manuella stegen inkluderar 

hantering av prov och geler samt att förbereda instrumentet för arbete. 

LÄS NOGGRANNT HYDRASYS BRUKSANVISNINGAR. 

I. MIGRERING 

1. Starta HYDRASYS instrumentet. 

2. Placera en applikator för HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 prover) och HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 prover), eller två applikatorer för HYDRAGEL 

ß1–ß2 15/30 (30 prover) på en plan yta med brunnarnas nummer 1-15 i position vä till höger med rätt sida uppåt (Fig. 1). 

- Applicera 10 µL rent serum eller koncentrerat urinprov i varje brunn. Ladda varje applikator inom 2 minuter. 

- Placera applikatorn (-erna) i fuktkammaren med tänderna uppåt [hantera den med hjälp av tändernas skyddsram]. Låt proverna absorberas 

i 5 minuter efter det att sista provet applicerats. För senare användning (upp till 8 timmar), förvara då fuktkammaren i kylskåp. 

Se bruksanvisning för fuktkammaren för ytterligare detaljer. 

3. Öppna luckan till Migrationsmodulen, och lyft upp applikator/elektrodarmen. 

VARNING: Stäng aldrig luckan när armen är i uppfällt läge! 

4. Välj "7 B1-B2" migration program för HYDRAGEL 7 ß1-ß2 eller "15/30 B1-B2" migration program på instrumentmenyn (tangentbordets vänstra 

sida). 

5. Ta ur de buffrade stripsen ur förpackningen; ta dem i plaständarna. Sätt de hålstansade ändarna på stripsen till pinnarna på elektrodramen ; 

stripsens plaststöd måste vara vända mot elektrodbäraren (Fig. 2). 

6. Ta ut HYDRAGEL plattan : 

- Rulla snabbt och jämt filterpapperet (tunna) över gelytan för att absorbera överflödig vätska. Ta bort pappret omedelbart. 

VARNING: För att undvika uttorkning : låt inte filterpappret vara i kontakt med gelen under längre tid. 

- Häll 120 µL destillerat eller avjonat vatten för HYDRAGEL 7 ß1-ß2 eller 200 µL för HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 på den första tredjedelen från 

främre kanten på migreringskammarens utritade ram. 

- Placera gelplattan (gelsidan uppåt) med dess kant mot stoppet i botten på den tryckta ramen (Fig. 3). 

- Böj gelen och släpp den försiktigt ned i vattenpoolen (Fig. 3). Förvissa dig om att inga luftbubblor finns kvar, att vattnet fördelar sig under 

hela gelplattan och att gelen är i linje med den tryckta ramen. 

7. Fäll ner applikator/elektrodarmen tills det tar stopp. I detta läge berör inte de buffrade stripsen gelen.TVINGA INTE HÅLLARNA HELA VÄGEN 

NED. 

8. Avlägsna applikatorn (-erna) från fuktkammaren. Håll den (dem) i den skyddande ramen. 

- Avlägsna skyddsramen. 

- För analys av 7 och 15 prover, placera applikatorn i position nr 6 på hållaren. 

- För analys av 30 prover, placera de två applikatorerna i position nr 3 och 9. 

VIKTIGT: Det tryckta numret på applikatorn (-erna) måste vara vänt mot operatören (Fig. 4). 

9. Stäng locket till migrationsmodulen. 

10. Starta proceduren omedelbart genom att trycka ned den gröna pilen "START" på den vänstra sidan av tangentbordet. 

VIKTIGT: Förvissa dig om att ventilationsintaget på instrumentets högra sida inte är blockerat. 

MIGRATION – BESKRIVNING AV DE AUTOMATISERADE STEGEN 

• De två hållarna applikator/elektrodarm sänker sig så att de buffrade stripsen och applikatorerna får kontakt med gelytan. 

• Provapplikatorhållaren höjer sig. 

• Migration utförs vid 10 W konstant för HYDRAGEL 7 ß1-ß2 och 20 W konstant för HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, vid 20 °C, kontrollerat av Peltiereffekten, 

tills 36 Vh har ackumulerats, under ca. 7 minuter. 

• Elektrodhållaren fälls upp för koppla från elektroderna. 

• kontrollplattans temperatur ökar till 65 °C under 10 minuter för att torka gelen. 

• kontrollplattan kyls ner ; när den uppnått 50 °C hörs en ljudsignal och luckan till migrationsmodulen låses upp. Plattans temperatur hålls vid 50 °C 

tills luckan öppnas. Därefter sjunker temperaturen ner till 20 °C (på mindre än 5 minuter) Därefter kan en ny migrationskörning startas. 

NOTERA : Locket till migrationsmodulen förblir stängt under alla migrationsstegen. 

II. GELBEARBETNING 

1. Öppna locket. 

2. Avlägsna applikatorn (-erna) och släng. 

3. Fäll upp applikator/elektrod hållarna, avlägsna och kassera de buffrade stripsen genom att ta dem i plaständarna. 

4. Avlägsna den torkade gelfilmen för vidare bearbetning. 

5. Efter varje användning, torka av elektroderna och temperaturkontrollplattan med en fuktad mjuk pappersnäsduk. 

6. För färgning,öppna gelhållaren. Lägg den platt på bordet och för den torkade gelen (med gelsidan uppåt) ned i skåran på de två listerna och 

stäng hållaren. Förvissa dig om att filmen är korrekt placerad inuti hållaren (Fig. 5). 

7. Placera gelhållaren i modulen för färgning. 

VIKTIGT: Innan start av färgningsprogram, kontrollera följande: 

- att avfärgningsbehållaren är fylld med 300 mL färgningslösning ; 

- att behållaren för avfärgning innehåller minst 1 liter avfärgningslösning ; 

- att avfallsbehållaren är tom. 

För reagensslangförbindelse: Hänvisas till visad information på instrumentets skärm (välj tangent: "REAGENT LINES”). 

VIKTIGT: Glöm inte att spärra icke använda reagenslinjer. 

8. Välj "PROT./B1-B2/Hb" färgningsprogram på instrumentmenyn och starta körningen genom att trycka på knappen "START" (grön pil på 

tangentbordets högra sida). 

Under färgning-, avfärgning- och torknings-steg, förblir facket låst. 

Efter kylningssteget, hörs en ljudsignal när facket öppnas (ventilation upprätthålls tills gelhållaren avlägsnas). 

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III. SLUTFÖRANDE AV GELBEARBETNING 

1. Avlägsna gelhållaren från facket, öppna och avlägsna den torkade gelen. 

NOTERA : Efter gelfärgning/avfärgning och innan densitometri/scanning, kan en gel genomgå ett ytterligare tvättsteg, om nödvändigt, för att 

ytterligare avlägsna färgrester som kan framträda som blå fläckar. Tvätta gelen med användning av programmet "WASH ISOENZ/GEL". 

2. Om nödvändigt, rengör den torra filmens baksida (stödsidan av plast) med ett fuktat mjukt papper. 

3. Scanna med en densitometer/scanner vid 570 nm eller med ett gult filter. 

ANMÄRKNING : Längden hos de elektroforetiska migreringarna kan vara något olika för geler innehållande 2 eller 3 analysspår, utan några 

ofördelaktiga effekter på utförandet. 

RESULTAT 

Kvalitetskontroll 

Det rekommenderas att inkludera ett kontrollserum (“Control serum”, SEBIA, PN 4785) i varje körning av patientprov. 

Värden 

Scanning med densitometer (vid 570 nm eller med ett gult filter) på färgade elektroforesogram ger relativa koncentrationer (i procent) för invididuella 

proteinzoner. 

Normalvärden (medel ± 2 SD) för individuella betydande elektroforetiska serumproteinzoner hos HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 geler i HYDRASYS 

systemet har fastställts från en frisk population på 136 vuxna (män och kvinnor). 

UV-proteinkvantifiering med CAPILLARYS ger liknande värden som med ett nefelometrisk metod (speciellt för albumin). SEBIA föreslår en 

standardisering av erhållna värden hos HYDRAGEL efter kalibrering av scanningssystemen. 

Utan standardiseringsvärden Med CAPILLARYS standardiseringsvärden ZON HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumin 60.3 - 72.8 % 54.3 - 65.5 % Alfa-1 globuliner 1.0 - 2.6 % 1.2 - 3.3 % Alfa-2 globuliner 7.2 - 11.8 % 8.3 - 15.0 % Beta-1 globuliner 5.6 - 9.1 % 6.5 - 11.5 % Beta-2 globuliner 2.2 - 5.7 % 2.5 - 7.2 % 

| Gamma globuliner | 6.2 - 15.4 % | 7.1 - 19.5 % | 

Det rekommenderas att varje laboratorium fastställer sina egna normalvärden. 

Tolkning 1-16 

För hjälp vid tolkning av elektroforetiska mönster för serum och urinproteiner, se BIBLIOGRAFI. Vissa serumprover kan visa ett litet, ganska skarpt 

band motsvarande en komponent hos C3 komplement som migrerar katodiskt till beta-2 zonen. Se MIGRATION PATTERN (migrationsmönster). 

Interferens och begränsningar 

Se PROV FÖR ANALYS. 

På grund av begränsningar när det gäller upplösning och känslighet hos zonelektrofores, är det möjligt att vissa monoklonala komponenter inte 

detekteras med denna metod. 

Felsökning 

Ring leverantörens tekniska support om testet misslyckas trots att manualen samt givna instruktioner för materialförvaring och förberedelse av test 

följts. 

Säkerhetsinformation för reagenserna i kiten och information för avfallshantering finns tillgängliga hos leverantörens tekniska serviceavdelning. 

PRESTANDADATA 

Reproducerbarhet inom gel och körning 

Tre (3) olika serumprover var var och en körda i 28 spår på en HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 gel från var och en av de två testade partierna. Medelvärdena, 

SD och CV (n = 28) beräknades för varje prov, varje zon och varje gel/lot. Tabellen visar värdena för prov A från de två gelerna/batcherna som testades. 

Liknande resultat erhölls för proverna B och C. 

ZON MEDEL (%) SD CV (%) Albumin 50.8 ; 51.5 0.8 ; 1.3 1.6 ; 2.5 Alfa 1 2.9 ; 2.9 0.1 ; 0.1 3.2 ; 3.7 Alfa 2 8.8 ; 8.7 0.1 ; 0.2 1.2 ; 2.8 Beta 1 8.6 ; 8.2 0.3 ; 0.2 4.0 ; 2.2 Beta 2 5.3 ; 5.4 0.2 ; 0.5 4.4 ; 8.5 

| Gamma | 24.1 ; 23.3 | 0.4 ; 0.6 | 1.7 ; 2.4 | 

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Reproducerbarhet mellan geler och körningar 

Femton (15) olika serumprover kördes på en gel var från två olika partier av HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 geler i fem på varandra följande dagar. Varje 

prov applicerades i två spår på varje gel (övre och undre rad). De dagliga och totala medelvärdena, SD och CV beräknades för varje prov och varje 

zon. Resultaten var väsentligen de samma för alla prover och båda batcherna. Följande resultat visar området för SD och CV beräknat för individuella 

prover över en period av 5 dagar och medelvärdet för CV beräknat från de sammanslagna värdena för CV för alla prover och dagar och ett parti 

(n = 150). 

ZON SD CV (%) MEDEL CV (%) Albumin 0.3 ; 2.1 0.5 ; 3.2 1.4 Alfa 1 0.1 ; 0.2 3.3 ; 10.2 4.8 Alfa 2 0.1 ; 0.3 1.2 ; 6.0 2.8 Beta 1 0.1 ; 0.7 2.7 ; 8.2 4.3 Beta 2 0.2 ; 0.7 6.1 ; 17.8 11.0 

| Gamma | 0.5 ; 1.1 | 2.9 ; 9.6 | 5.2 | 

Precision 

Patologiska och normala serumprover (n = 112) kördes på HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 geler och HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler. 

Korrelationsparametrarna beräknade för individuella zoner från sammanslagen data för HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler vs. jämförbara 

gelsystem (y = HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) var : 

ZON Korrelationskoefficient y-intercept Kurva Område i % värden (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Albumin 0.989 0.318 1.010 36.1 - 70.8 Alfa 1 0.967 0.009 0.952 1.0 - 10.4 Alfa 2 0.981 0.002 0.985 5.6 - 22.9 Beta 1 - Beta 2 0.950 0.475 0.950 9.5 - 22.3 

| Gamma | 0.988 | 0.134 | 0.988 | 5.1 - 28.1 | 

Sensitivitet 

Seriella spädningar av två serumprover, varje med ett monoklonalt protein, genomgick elektrofores på HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 geler. Den högsta 

spädningen med ett urskiljbart monoklonalt band motsvarade 44 respektive 21 mg/dL av monoklonala proteiner för de två proven. 

Analys av koncentrerad urin 

Erhållna resultat med HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 geler indikerar en mycket god reproducerbarhet inom och mellan körningar för koncentrerade 

urinprover efter kvantitativ och kvalitativ analys. Tjugoåtta (28) olika prover (patologiska och normala urinprover) kördes på HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 

geler och ett annat kommersiellt tillgängligt agarosgel-system. Där fanns inga visuellt detekterbara skillnader mellan de två systemen. 

Detektionskänsligheten bestämdes från den högsta seriella spädningen av ett monoklonalt urinprotein som gav ett urskiljbart band, till 0.024 g/dL. 

BIBLIOGRAFI 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 















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MIGRATIONSMÖNSTER 

+ 

Albumin 

Orosomukoid 

α1-Antitrypsin 

α1-Antikymotrypsin 

Ceruloplasmin 

Gc-Globulin 

α2-Makroglobulin 

Haptoglobin 

α-Lipoprotein 

Transferrin 

Hemopexin 

Plasminogen 

Fibronektin 

β-Lipoprotein 

C3-Komplement 

γ-Globulin 

G - A - M - D - E 

- 

- 56 -


ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

Τα κιτ HYDRAGEL 7, 15 και 30 ß1-ß2 είναι σχεδιασµένα για το διαχωρισµό πρωτεϊνών του ανθρώπινου ορού και ούρων µε ηλεκτροφόρηση 

σε αλκαλική (pH 8.5) γέλη αγαρόζης. Λόγω σχεδιασµού, οι φυσιολογικές πρωτεΐνες του ορού διαχωρίζονται σε έξι κύρια κλάσµατα. Τα κιτ 

χρησιµοποιούνται µε την ηµι-αυτοµατοποιηµένη συσκευή ηλεκτροφόρησης HYDRASYS. Οι διαχωρισµένες πρωτεΐνες υφίστανται χρώση 

µε amidoblack. Τα προκύπτοντα ηλεκτροφορήµατα αξιολογούνται οπτικά. Η πυκνοµέτρηση προσφέρει ακριβή, σχετική ποσοτικοποίηση 

των επιµέρους ζωνών. 

Κάθε gel αγαρόζης προορίζεται για την ανάλυση : 

• 7 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 7 ß1-ß2, 

• 15 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 15 ß1-ß2, 

• 30 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 30 ß1-ß2. 

Για In Vitro διαγνωστική χρήση. 

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 1-16 

Η ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών είναι µια καθιερωµένη τεχνική η οποία χρησιµοποιείται καθηµερινά στα κλινικά εργαστήρια για την εξέταση 

ορού και άλλων σωµατικών υγρών. Βασίζεται στις αρχές της ηλεκτροφόρησης ζώνης πραγµατοποιούµενης σε κατάλληλο υποστηρικτικό 

µέσο. Η αγαρόζη έχει αναπτυχθεί σε ένα πολυχρηστικό και αποτελεσµατικό υποστηρικτικό µέσο. Στις καθηµερινές διαγνωστικές 

εφαρµογές, οι πρωτεΐνες του ορού διαχωρίζονται σε πέντε κύρια κλάσµατα (π.χ. στα κιτ HYDRAGEL PROTEIN(E)). Όταν απαιτείται 

µεγαλύτερη ανάλυση, οι πρωτεΐνες µπορούν να διαχωριστούν σε έξι κύρια κλάσµατα µε τα κιτ HYDRAGEL ß1-ß2 : αλβουµίνη, άλφα-1 

σφαιρίνες, άλφα-2 σφαιρίνες, βήτα-1 σφαιρίνες, βήτα-2 σφαιρίνες και γάµµα σφαιρίνες. Κάθε ζώνη περιέχει µία ή περισσότερες πρωτεΐνες 

του ορού. Τα προφίλ των πρωτεϊνών των ούρων οµοιάζουν µε αυτά του ορού. Ωστόσο, οι σχετικές εντάσεις των κλασµάτων ή η παρουσία 

τους µπορεί να ποικίλλουν ευρέως ανάλογα µε τη διηθητική επάρκεια του νεφρού. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ HYDRAGEL 7, 15 ΚΑΙ 30 ß1-ß2 

ΕΙ∆ΟΣ PN 4101 PN 4121 PN 4141 Gel αγαρόζης (έτοιµα προς χρήση) 10 gel 10 gel 10 gels Ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος (έτοιµες προς χρ.) 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 Μέσο αραίωσης διαλύµατος χρώσης (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 60 mL 1 φιαλίδιο, 60 mL 1 φιαλίδιο, 60 mL Χρωστική amidoblack (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 20 mL 1 φιαλίδιο, 20 mL 1 φιαλίδιο, 20 mL Εφαρµογείς (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 (7 δόντια) 1 συσκ. των 10 (15 δόντια) 2 συσκ. των 10 (15 δόντια) 

| ∆ιηθητικά χαρτιά | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 

ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιµοποιούνται πάντα µαζί και σύµφωνα µε τις οδηγίες χρήσης. 

ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ. 

1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ 

Προετοιµασία 

Τα gel αγαρόζης είναι έτοιµα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει: αγαρόζη, 0.8 g/dL, ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 8.5 ± 0.1, πρόσθετα, 

µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Τα gel αγαρόζης περιέχουν 0.31 % βαρβιτάλη και 0.34 % νατριούχο βαρβιτάλη. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, 

συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! 

Χρήση 

Μέσο για ηλεκτροφόρηση και ανοσοκαθήλωση πρωτεϊνών. 

Φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης 

Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου (15 έως 30°C) ή στη συντήρηση (2 έως 8 °C). (Το βέλος 

στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή 

θερµότητας. Αποφύγετε τις µεγάλες διακυµάνσεις θερµοκρασίας κατά τη φύλαξη. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τα gel όταν: 

(i) σχηµατιστούν κρύσταλλοι ή ίζηµα στην επιφάνεια του gel ή αν η υφή του gel γίνει πολύ µαλακή (όλα αυτά προκύπτουν αν το gel 

καταψυχθεί), 

(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή µούχλα, 

(iii) υπάρχει µεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα στο κουτί του gel (αποτέλεσµα της εξίδρωσης του ρυθµιστικού διαλύµατος από το 

gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης). 

2. ΤΑΙΝΙΕΣ ΜΕ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Σπογγώδεις ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα έτοιµες προς χρήση. Καθεµιά περιέχει: ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 8.5 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το ρυθµιστικό διάλυµα στις ταινίες περιέχει 0.92 % βαρβιτάλη, 1.03 % νατριούχο βαρβιτάλη και 0.30 % αζίδιο του 

νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! Όταν το πετάτε αποφύγετε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή 

χαλκό, καθώς µπορεί να σχηµατιστούν εκρηκτικές ή τοξικές ενώσεις µε το αζίδιο του νατρίου. 

Χρήση 

Οι ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα λειτουργούν ως δεξαµενή ρυθµιστικού διαλύµατος για την ηλεκτροφόρηση και εξασφαλίζουν επαφή 

µεταξύ του gel και των ηλεκτροδίων. 

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Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά



Φυλάσσετε τις ταινίες σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένουν σταθερές µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και της συσκευασίας των ταινιών. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τις ταινίες αν η συσκευασία τους έχει ανοιχθεί και οι ταινίες έχουν στεγνώσει. 

3. ΜΕΣΟ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΧΡΩΣΗΣ 


Το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής πρέπει να χρησιµοποιείται όπως περιγράφεται στην παράγραφο “ΧΡΩΣΤΙΚΗ 

AMIDOBLACK“. 

Περιέχει όξινο διάλυµα. 

Χρήση 

Για την παρασκευή του διαλύµατος χρωστικής amidoblack. 


Φυλάσσετε το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής σε θερµοκρασία δωµατίου ή στοψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου. 

4. ΧΡΩΣΤΙΚΗ AMIDOBLACK 


Η πυκνή χρωστική amidoblack είναι ένα ιξώδες διάλυµα το οποίο ενδέχεται να µετατραπεί σε γέλη. Η καταλληλότητα του πυκνού 

διαλύµατος χρωστικής δεν επηρεάζεται από την αύξηση της γλοιότητάς του ή τη στερεοποίησή του. 

Σε όλες τις περιπτώσεις, για να επιτύχετε τέλεια ανασύσταση της χρωστικής, σας συνιστούµε να ακολουθήσετε την εξής διαδικασία : 

1. Προσθέστε 15 mL του µέσου αραίωσης χρωστικής στο φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος. 

2. Κλείστε προσεκτικά το φιαλίδιο. 

3. Ανακινήστε έντονα το φιαλίδιο για περίπου 5 δευτερόλεπτα. 

4. Αδειάστε αυτό το διάλυµα στο δοχείο που προορίζεται για την επεξεργασία του διαλύµατος χρωστικής. 

5. Επαναλάβετε αυτό το βήµα δύο φορές, ή τρεις αν χρειάζεται. 

6. Αδειάστε το υπόλοιπο µέσο αραίωσης στο δοχείο και συµπληρώστε µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ έως όγκου 300 mL. 

7. Ανακινήστε καλά τα περιεχόµενα του δοχείου για 5 - 10 λεπτά. 

Το διάλυµα χρωστικής είναι έτοιµο προς χρήση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η ατελής ανασύσταση της χρωστικής θα οδηγήσει σε υποεκτίµηση του κλάσµατος της αλβουµίνης. 

Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ≈ 2, amidoblack, 0.4 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 6.7 %, 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για τη χρώση των gel µετά από ηλεκτροφορητικό διαχωρισµό πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυµα χρωστικής είναι σχεδιασµένο για χρώση µόνο 10 gel. Αλλάξτε το διάλυµα µετά από 10 διαδικασίες χρώσης. 


Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα χρωστικής είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας 

του κιτ και των φιαλιδίων. 

Το διάλυµα εργασίας είναι σταθερό για 1 µήνα. 

Μην αποθηκεύετε το διάλυµα χρώσης κοντά σε πηγή θερµότητας. 

5. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ 

Χρήση 

Έτοιµοι, εφαρµογείς µιας χρήσης για τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσετε τους εφαρµογείς σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

6. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα της υγρασίας από την επιφάνεια του gel πριν την τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Αποθήκευση 

Τα λεπτά διηθητικά χαρτιά αποθηκεύονται σε στεγνό µέρος, σε θερµοκρασία δωµατίου ή σε ψύξη. 

ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ 

1. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ 


Κάθε φιαλίδιο ∆ιαλύµατος Αποχρωµατισµού (SEBIA, PN 4540, 10 φιαλίδια, 100 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 100 λίτρα απεσταγµένου 

ύδατος. Είναι ευχερές να αραιώνονται µόνο 5 mL του διαλύµατος σε 5 λίτρα, τον όγκο του περιέκτη του διαλύµατος αποχρωµατισµού. 

Μετά την αραίωση το διάλυµα αποχρωµατισµού περιέχει: κιτρικό οξύ 0.05 g/dL. 

Χρήση 

Για αποχρωµατισµό, δηλαδή αφαίρεση της περίσσειας χρωστικής από τη γέλη. 

Για καθαρισµό του τµήµατος χρώσης. 

Για την εξουδετέρωση της οξύτητας του διαλύµατος αποχρωµατισµού, προσθέστε 15 mL διαλύµατος 50 % υδροξειδίου του νατρίου, στο 

κενό δοχείο αχρήστων. 


Φυλάσσετε το διάλυµα προ της αραίωσης σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για µια εβδοµάδα σε θερµοκρασία δωµατίου σε κλειστό δοχείο. Μην προσθέτετε 

αζίδιο του νατρίου. 

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Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

Για να αποτρέψετε πολλαπλασιασµό µικροβίων στο αραιωµένο διάλυµα αποχρωµατισµού αν πρόκειται να το φυλάξετε για περισσότερο 

από µια εβδοµάδα, προσθέστε 5 µL/dL ProClin 300. 

Το διάλυµα εργασίας στο οποίο έχει προστεθεί ProClin είναι σταθερό σε κλειστό δοχείο σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

2. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΕΚΠΛΥΝΣΗΣ HYDRASYS 


Κάθε φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος έκπλυνσης HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 φιαλίδια, 80 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 5 λίτρα, 

µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Μετά την αραίωση το διάλυµα εργασίας περιέχει: αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα pH 8.8 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το πυκνό διάλυµα περιέχει 0.625 % αζίδιο του νατρίου. Μην το πίνετε! Αν το πιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό! Το 

αζίδιο του νατρίου µπορεί να οδηγήσει σε σχηµατισµό εκρηκτικών ή τοξικών ουσιών όταν έρχεται σε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή χαλκό. 

Πάντοτε ξεπλένετε µε άφθονο νερό όταν το πετάτε. 

Χρήση 

Το διάλυµα έκπλυνσης χρησιµεύει για την αποµάκρυνση των µη κακατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από τα gel. Χρησιµεύει επίσης για 

καθαρισµό του θαλάµου χρώσης του HYDRASYS. Χρησιµοποιείτε το περιοδικά, π.χ. αν το όργανο λειτουργεί καθηµερινά, πλένετε το 

θάλαµο χρώσης κάθε εβδοµάδα. 

∆είτε το φύλλο οδηγιών για οδηγίες χρήσης. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η 

οποία σηµειώνεται στις ετικέττες των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

3. FLUIDIL 


Το Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 φιαλίδιο, 5 mL) είναι έτοιµο προς χρήση. 

Χρήση 

Για τη διάλυση ιξωδών ή θολών δειγµάτων, π.χ. οροί µε κρυοσφαιρίνες. 


Φυλάσσεται σε θερµοκρασία δωµατίου. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στην ετικέτα του φιαλιδίου του 

Fluidil. 

Το Fluidil πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 ή PN 1211. 

2. Σύστηµα µικροπιπεττών, χειροκίνητο ή αυτόµατο, όπως το HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ως εναλλακτικός τρόπος φόρτωσης των 

εφαρµογέων δειγµάτων. 

3. Θάλαµος Υγρής Φύλαξης, PN 1270, παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

4. Κιτ περιεκτών παρεχόµενο µε το HYDRASYS. 

5. Πιπέττες: 10 µL και 200 µL. 

6. Πυκνόµετρο / σαρωτής µε δυνατότητα σάρωσης gel 82 x 51 mm ή 82 x 102 mm στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο, π.χ. HYRYS SEBIA, 

DVSE SEBIA ή PHORESIS. Ανατρέξτε στις οδηγίες χρήσης και βαθµονόµησης του κατασκευαστή. 

7. Στατήρας gel για µισά gel, SEBIA, PN 10043110. 

∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ 

Λήψη και διατήρηση δειγµάτων 

Η ανάλυση συνιστάται να γίνεται σε φρέσκα δείγµατα. Ο ορός και τα ούρα πρέπει να συλλέγονται σύµφωνα µε τις καθιερωµένες 

διαδικασίες κλινικής εργαστηριακής πρακτικής. ∆ιατηρήστε τα δείγµατα στο ψυγείο στους 2 ως 8 °C για έως µια εβδοµάδα (ΣΗΜΕΙΩΣΗ : 

το κλάσµα βήτα-2, κλάσµα C3 του συµπληρώµατος, εξαφανίζεται µετά από 3 ηµέρες). Για µακρότερη διατήρηση, διατηρήστε τα 

κατεψυγµένα (σταθερά για τουλάχιστον ένα µήνα). 

Κατεψυγµένα δείγµατα ορού µε αζίδιο του νατρίου, 0.02 g/dL, ή κατεψυγµένα δείγµατα ούρων µε HEPES 0.1 M (pH 6.75) και/ή αζίδιο του 

νατρίου, 0.02 g/dL διατηρούνται περισσότερο. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αποφύγετε το βορικό οξύ ως συντηρητικό. 

Τα αποψυγµένα δείγµατα µπορεί να δώσουν ελαφρά σηµάδια στο σηµείο εφαρµογής οφειλόµενα σε µετουσίωση πρωτεϊνών ή 

λιποπρωτεϊνών. Η διατήρηση στους 2 ως 8 °C και η κατάψυξη µπορούν να προκαλέσουν µετακίνηση προς την άνοδο των βήταλιποπρωτεϊνών 

από τη βήτα-ζώνη στην άλφα-2 ή άλφα-1. Όσο πιο παλιός ο ορός, τόσο µεγαλύτερη η µετακίνηση. 

Προετοιµασία των δειγµάτων 

1. Οροί 

Χρησιµοποιείτε µη αραιωµένα δείγµατα ορού. 

Μετά από ψύξη ή κατάψυξη, µερικοί οροί (ιδιαίτερα εκείνοι που περιέχουν κρυοσφαιρίνες) µπορεί να γίνουν ιξώδεις ή να αναπτύξουν 

θολερότητα. Τέτοιοι οροί µπορεί να παρουσιάσουν προβλήµατα εφαρµογής λόγω παρακώλυσης της διάχυσης στα δόντια του 

εφαρµογέα δείγµατος. Σε αυτήν την περίπτωση, προσθέστε 25 µL Fluidil σε 75 µL ορού και περιδινήστε (vortex) για 15 sec. Στη 

συνέχεια ακολουθήστε την τυπική διαδικασία. 

2. Συµπυκνωµένα ούρα 

Η ανάλυση γίνεται σε δείγµατα συµπυκνωµένα σε συνολική πρωτεϊνική συγκέντρωση περίπου 1.5 - 2.0 g/dL (µε κατάλληλη συσκευή). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μερικές φορές τα ούρα περιέχουν υψηλές συγκεντρώσεις αλάτων. Αυτό µπορεί να προκαλέσει παραµόρφωση του gel 

κατά την ηλεκτροφόρηση και συνεπώς αλλοίωση των προφίλ ηλεκτροφόρησης. Αν η αλλοίωση αυτή καθιστά την 

ερµηνεία των αποτελεσµάτων ανακριβή, τα ούρα πρέπει να απαλλαγούν από τα άλατα. 

Η διάχυση των δειγµάτων ούρων στις υποδοχές του εφαρµογέα µπορεί να παρακωλύεται όταν τα ούρα είναι θολά. 

Συνιστάται η αποµάκρυνση των σωµατιδίων µε φυγοκέντρηση (π.χ. 10 min στις 3,000 rpm) ή διήθηση (π.χ. ηθµός 

0.45 µm). 

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∆είγµατα προς αποφυγή 

• Αποφύγετε αιµολυµένα δείγµατα. Η αιµόλυση αυξάνει τις ζώνες άλφα-2 και βήτα. 

• Αποφύγετε δείγµατα πλάσµατος. Το ινωδογόνο δίνει µια ζώνη στο ίχνος αναφοράς κοντά στο σηµείο εφαρµογής η οποία θα µπορούσε 

να εκληφθεί ως µονοκλωνική ανοσοσφαιρίνη και επηρεάζει τη µέτρηση της σχετικής συγκέντρωσης της ζώνης. 

• Αποφύγετε παλαιά, πληµµελώς διατηρηµένα δείγµατα ούρων, στα οποία µπορεί να έχει συµβεί ενζυµατική διάσπαση των πρωτεϊνών. 

∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ 

Το σύστηµα HYDRASYS είναι ένα ηµι-αυτοµατοποιηµένο πολυπαραµετρικό όργανο. Τα αυτοµατοποιηµένα στάδια λειτουργίας 

περιλαµβάνουν την επεξεργασία των gel αγαρόζης HYDRAGEL µε την ακόλουθη σειρά: εφαρµογή δειγµάτων, ηλεκτροφόρηση, στέγνωµα, 

χρώση, αποχρωµατισµός και τελικό στέγνωµα. Τα χειροκίνητα στάδια περιλαµβάνουν το χειρισµό των δειγµάτων και των gel καθώς και την 

προετοιµασία του οργάνου για λειτουργία. ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙ∆ΙΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ ΤΟΥ HYDRASYS. 

I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 

1. Θέστε το HYDRASYS σε λειτουργία. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα για το HYDRAGEL 7 ß1-ß2 (7 δείγµατα) και το HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (15 δείγµατα) ή δύο 

εφαρµογείς για το HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 (30 δείγµατα) σε µια επίπεδη επιφάνεια µε τους αριθµούς των βοθρίων στη δεξιά 

πλευρά (Εικ. 1). 

- Τοποθετήστε 10 µL από τα δείγµατα στα βοθρία του εφαρµογέα. Φορτώστε κάθε εφαρµογέα εντός 2 min. 

- Τοποθετήστε τον εφαρµογέα στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον από το πλαστικό 

προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών). Αφήστε τα δείγµατα να διαχυθούν στα δόντια για 5 min µετά την τοποθέτηση του 

τελευταίου δείγµατος. 

Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες. 

3. Ανοίξτε το καπάκι της Μονάδας Ηλεκτροφόρησης και σηκώστε τους φορείς των ηλεκτροδίων και του εφαρµογέα. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Ποτέ µην κλείνετε το καπάκι ενώ οι φορείς είναι σηκωµένοι! 

4. Επιλέξτε το πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης «7 B1-B2» για το HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ή το «15/30 B1-B2» από το µενού του οργάνου 

(αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου). 

5. Αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από τη συσκευασία τους. Κρατήστε τις από την πλαστική άκρη τους. Προσαρµόστε 

τη σηµαδεµένη άκρη των ταινιών στις ακίδες του φορέα ηλεκτροδίων, το πλαστικό κάλυµµα της ταινίας πρέπει να είναι στραµµένο 

προς το φορέα (Εικ. 2). 

6. Ανοίξτε τη συσκευασία του HYDRAGEL. 

- Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού. 

Αφαιρέστε το χαρτί αµέσως. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην αφήνετε το διηθητικό χαρτί σε επαφή µε το gel επί µακρόν για να µην αφυδατωθεί. 

- Εισαγάγετε 120 µL απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ για το HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ή 200 µL για το HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, µέχρι 

το κατώτερο τρίτο της κλίµακας που είναι τυπωµένη στην Πλάκα Ελέγχου Θερµοκρασίας της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

- Τοποθετήστε την πλακέτα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα της 

τυπωµένης κλίµακας (Εικ. 3). 

- Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας του νερού. (Εικ. 3). Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, 

ότι το νερό έχει απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε την τυπωµένη κλίµακα. 

7. Κατεβάστε και τους δύο φορείς. Σε αυτήν τη θέση, οι ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος δεν αγγίζουν το gel. ΜΗΝ ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ 

ΦΟΡΕΙΣ ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ. 

8. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα από τον υγρό θάλαµο. Κρατήστε τον από το προστατευτικό κάλυµµα. 

- Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα. 

- Για ανάλυση 7 και 15 δειγµάτων, τοποθετήστε τον εφαρµογέα στη θέση N° 6 του φορέα. 

- Για ανάλυση 30 δειγµάτων, τοποθετήστε τους δύο εφαρµογείς στις θέσεις N° 3 και 9. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα πρέπει να είναι στραµµένοι προς τον χειριστή (Εικ. 4). 

9. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

10. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Βεβαιωθείτε ότι η είσοδος αερισµού στη δεξιά πλευρά του οργάνου είναι ελεύθερη. 

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι δύο φορείς χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα και ο εφαρµογέας να είναι σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. 

• Ο φορέας του εφαρµογέα σηκώνεται. 

• Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται υπό συνεχές ρεύµα 10 W για το HYDRAGEL 7 ß1-ß2 ή 20 W για το HYDRAGEL ß1-ß2 15/30, στους 

20 °C, µέχρι να συµπληρωθούν 36 Vh, για περίπου 7 min. 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Η θερµοκρασία της πλακέτας ελέγχου αυξάνεται στους 65 °C για 15 min για να στεγνώσει το gel. 

• Η πλακέτα ελέγχου κρυώνει. Όταν φτάσει τους 50 °C, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας ηλεκτροφόρησης. Η 

θερµοκρασία της πλακέτας ελέγχου παραµένει στους 50 °C µέχρι να ανοιχθεί το καπάκι. Στη συνέχεια η θερµοκρασία συνεχίζει να 

πέφτει µέχρι τους 20 °C (σε λιγότερο από 5 min) και στη συνέχεια µπορεί να ακολουθήσει νέα ηλεκτροφόρηση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

II. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Ανοίξτε το καπάκι. 

2. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα και πετάξτε τον. 

3. Σηκώστε και τους δύο φορείς, αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από την πλαστική άκρη τους και πετάξτε τις. 

4. Αφαιρέστε το στεγνωµένο gel για περαιτέρω επεξεργασία. 

5. Μετά από κάθε χρήση, σκουπίστε τα ηλεκτρόδια και την πλάκα ελέγχου θερµοκρασίας µε µαλακό υγρό πανάκι. 

6. Ανοίξτε τον στατήρα των gel. Τοποθετήστε το στεγνό gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) στις αύλακες και κλείστε τον 

στατήρα. Βεβαιωθείτε ότι το film είναι σωστά τοποθετηµένο µέσα στον στατήρα (Εικ. 5). 

- 60 -


7. Τοποθετήστε τον στατήρα στη Μονάδα Επεξεργασίας / Χρώσης των gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν την έναρξη της επεξεργασίας / χρώσης των gel, ελέγξτε τα ακόλουθα: 

- ο περιέκτης χρώσης είναι γεµάτος µε 300 mL χρωστικού διαλύµατος, 

- ο περιέκτης διαλύµατος αποχρωµατισµού περιέχει τουλάχιστον 1 λίτρο διαλύµατος αποχρωµατισµού, 

- ο περιέκτης αχρήστων είναι κενός. 

Για τη σύνδεση των γραµµών των αντιδραστηρίων: ανατρέξτε στις πληροφορίες που εµφανίζονται στην οθόνη του οργάνου 

(επιλέξτε: REAGENT LINES). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μην ξεχνάτε να αποφράσσετε τις µη χρησιµοποιούµενες γραµµές. 

8. Επιλέξτε το πρόγραµµα χρώσης «PROT./B1-B2/Hb» από το µενού του οργάνου και αρχίστε τη διαδικασία πατώντας το πλήκτρο 

«START» (πράσινο βέλος στη δεξιά πλευρά του πληκτρολογίου). 

Κατά τα στάδια χρώσης, αποχρωµατισµού και στεγνώµατος, η µονάδα παραµένει κλειδωµένη. 

Μετά το στάδιο ψύξης, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας (ο αερισµός διατηρείται µέχρι την αφαίρεση του 

στατήρα των gel). 

III. ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Αφαιρέστε τον στατήρα των gel από τη µονάδα, ανοίξτε τον και αφαιρέστε το στεγνό gel. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μετά τη χρώση / αποχρωµατισµό και πριν την πυκνοµέτρηση / σάρωση, το gel µπορεί να περάσει από ένα ακόµη στάδιο 

έκπλυνσης, αν χρειάζεται, για τον περαιτέρω καθαρισµό του background και την αποµάκρυνση υπολειπόµενης χρώσης η οποία 

µπορεί να εµφανίζεται µε τη µορφή µπλε κηλίδων. Πλύνετε το gel µε το πρόγραµµα “ WASH ISOENZ/GEL “. 

2. Αν χρειαστεί, καθαρίστε την πίσω (πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό χαρτί. 

3. Σαρώστε µε πυκνόµετρο / σαρωτή στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα µήκη των ηλεκτροφορηµάτων ενδέχεται να είναι ελαφρώς διαφορετικά στα gel µε 2 ή 3 σειρές ανάλυσης, χωρίς 

δυσµενή επίδραση στην απόδοση. 

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Ποιοτικός έλεγχος 

Συνιστάται να περιλαµβάνεται ένας ορός ελέγχου (Ορός Ελέγχου, SEBIA PN 4785) σε κάθε σειρά δειγµάτων. 

Τιµές 

Η σάρωση (στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο) των χρωσµένων ηλεκτροφορηµάτων παρέχει σχετικές συγκεντρώσεις (ποσοστά) των 

επιµέρους πρωτεϊνικών ζωνών. 

Οι φυσιολογικές τιµές (µ.ο. ± 2 SD) για τις επιµέρους κύριες ηλεκτροφορητικές ζώνες των πρωτεϊνών του ορού στα gel ΗYDRAGEL ß1-ß2 

15/30 στο σύστηµα HYDRASYS έχουν εξαχθεί από ένα υγιή πληθυσµό 136 ενηλίκων (ανδρών και γυναικών). 

Η ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνών σε UV στο σύστηµα CAPILLARYS αποδίδει παρόµοιες τιµές µε τη νεφελοµετρική µέθοδο (ειδικά για την 

αλβουµίνη). Η SEBIA προτείνει τυποποίηση των λαµβανόµενων τιµών µε το HYDRAGEL µετά από βαθµονόµηση των συστηµάτων 

σάρωσης. 

Χωρίς τιµές τυποποίησης Με τιµές τυποποίησης CAPILLARYS ΖΩΝΗ HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Αλβουµίνη 60.3 - 72.8 % 54.3 - 65.5 % α-1 σφαιρίνες 1.0 - 2.6 % 1.2 - 3.3 % α-2 σφαιρίνες 7.2 - 11.8 % 8.3 - 15.0 % β-1 σφαιρίνες 5.6 - 9.1 % 6.5 - 11.5 % β-2 σφαιρίνες 2.2 - 5.7 % 2.5 - 7.2 % 

| γ σφαιρίνες | 6.2 - 15.4 % | 7.1 - 19.5 % | 

Συνιστάται κάθε εργαστήριο να διαµορφώνει τις δικές του φυσιολογικές τιµές. 

Ερµηνεία 1-16 

Επικουρικά για την ερµηνεία των ηλεκτροφορηµάτων πρωτεϊνών του ορού και των ούρων βλ. τη ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ. 

Μερικά δείγµατα ορού µπορεί να παρουσιάσουν µια µικρή, αρκετά εµφανή ζώνη αντιστοιχούσα στο συστατικό του συµπληρώµατος C3 που 

κινείται καθοδικά ως προς τη β2-ζώνη. Βλ. ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΤΙΚΑ ΠΡΟΦΙΛ. 

Παρεµβολές και περιορισµοί 

Βλέπε ∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ. 

Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης, είναι πιθανό κάποια µονοκλωνικά στοιχεία να µην 

ανιχνεύονται µε αυτήν τη µέθοδο. 

Αντιµετώπιση προβληµάτων 

Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιµασίας και φύλαξης των 

υλικών και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά. 

Τα Φύλλα ∆εδοµένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται επίσης από την 

Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή. 

- 61 -


∆Ε∆ΟΜΕΝΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 

Αναπαραγωγιµότητα εντός των gel και σειράς ανάλυσης 

Τρία (3) διαφορετικά δείγµατα ορού έτρεξαν το καθένα σε 28 ίχνη σε gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 από 2 παρτίδες. Η µέση τιµή, η SD και ο 

CV (n = 28) υπολογίστηκαν για κάθε δείγµα, κάθε ζώνη και κάθε gel/παρτίδα. Ο πίνακας δείχνει τις τιµές για το δείγµα A από τα δύο gel / 

παρτίδες που αναλύθηκαν. Παρόµοια αποτελέσµατα προέκυψαν για τα δείγµατα B και C. 

ΖΩΝΗ Μ.Ο. (%) SD CV (%) Αλβουµίνη 50.8 ; 51.5 0.8 ; 1.3 1.6 ; 2.5 α 1 2.9 ; 2.9 0.1 ; 0.1 3.2 ; 3.7 α 2 8.8 ; 8.7 0.1 ; 0.2 1.2 ; 2.8 β 1 8.6 ; 8.2 0.3 ; 0.2 4.0 ; 2.2 β 2 5.3 ; 5.4 0.2 ; 0.5 4.4 ; 8.5 

| γ | 24.1 ; 23.3 | 0.4 ; 0.6 | 1.7 ; 2.4 | 

Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel και των σειρών 

∆εκαπέντε (15) διαφορετικά δείγµατα ορού έτρεξαν σε gel από δύο παρτίδες HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 για πέντε διαδοχικές ηµέρες. Κάθε 

δείγµα εφαρµόστηκε σε δύο ίχνη σε κάθε gel (άνω και κάτω σειρά). Η ηµερήσια και συνολική µέση τιµή, η SD και ο CV υπολογίστηκαν για 

κάθε δείγµα και κάθε ζώνη. Τα αποτελέσµατα ήταν ουσιαστικά όµοια για όλα τα δείγµατα και στις δύο παρτίδες. Ο ακόλουθος πίνακας 

παρουσιάζει το εύρος της SD και του CV για τα δείγµατα κατά την περίοδο των 5 ηµερών και τον µέσο CV από τους συγκεντρωµένους 

CV για όλα τα δείγµατα και ηµέρες για τη µία παρτίδα (n = 150). 

ΖΩΝΗ SD CV (%) ΜΕΣΟΣ CV (%) Αλβουµίνη 0.3 ; 2.1 0.5 ; 3.2 1.4 α 1 0.1 ; 0.2 3.3 ; 10.2 4.8 α 2 0.1 ; 0.3 1.2 ; 6.0 2.8 β 1 0.1 ; 0.7 2.7 ; 8.2 4.3 β 2 0.2 ; 0.7 6.1 ; 17.8 11.0 

| γ | 0.5 ; 1.1 | 2.9 ; 9.6 | 5.2 | 

Ακρίβεια 

Παθολογικά και φυσιολογικά δείγµατα ορού (n = 112) έτρεξαν σε gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 και HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. Οι 

παράµετροι συσχέτισης για τις µεµονωµένες ζώνες από τα συγκεντρωµένα δεδοµένα για τα συγκρινόµενα συστήµατα gel (y = HYDRAGEL 

ß1-ß2 15/30) ήταν : 

ΖΩΝΗ Συντελεστής συσχέτισης Τοµή του y Κλίση Εύρος % τιµών (HYDRAGEL ß1-ß2 15/30) Αλβουµίνη 0.989 0.318 1.010 36.1 - 70.8 α 1 0.967 0.009 0.952 1.0 - 10.4 α-2 0.981 0.002 0.985 5.6 - 22.9 β 1 - β 2 0.950 0.475 0.950 9.5 - 22.3 

| γ | 0.988 | 0.134 | 0.988 | 5.1 - 28.1 | 

Ευαισθησία 

Σειριακές αραιώσεις δύο δειγµάτων ορού, καθένα µε µια µονοκλωνική πρωτεΐνη, ηλεκτροφορήθηκαν σε gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30. Η 

µεγαλύτερη αραίωση µε διακριτή µονοκλωνική ζώνη αντιστοιχούσε σε 44 και 21 mg/dL µονοκλωνικής πρωτεΐνης για τα δύο δείγµατα, 

αντίστοιχα. 

Ανάλυση συµπυκνωµένων ούρων 

Τα αποτελέσµατα που λαµβάνονται µε τα gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 δείχνουν πολύ καλή αναπαραγωγιµότητα εντός και µεταξύ σειρών 

για τα δείγµατα συµπυκνωµένων ούρων µετά από ποσοτική και ποιοτική ανάλυση. Είκοσι οκτώ (28) διαφορετικά δείγµατα (παθολογικά και 

φυσιολογικά) έτρεξαν σε gel HYDRAGEL ß1-ß2 15/30 και σε συγκρίσιµο σύστηµα gel αγαρόζης. ∆εν υπήρχαν οπτικά εµφανείς διαφορές 

µεταξύ των συστηµάτων. Η ευαισθησία ανίχνευσης προσδιορίστηκε από τις υψηλότερες αραιώσεις µονοκλωνικής πρωτεΐνης που έδωσαν 

ορατή ζώνη στα 0.024 g/dL. 

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 





- 62 -












ΗΛEKTPOΦOPHTIKO ΠPOΦIΛ 

+ 

Αλβουµίνη 

Οροµουκοειδές 

α1 αντιτρυψίνη 

α1 αντιχυµοθρυψίνη 

σερουλοπλασµίνη 

GC σφαιρίνη 

α2 µακροσφαιρίνη 

απτοσφαιρίνη 

α λιποπρωτεΐνη 

τρανσφερρίνη 

αιµοπηξίνη 

πλασµινογόνο 

ινονεκτίνη 

β λιποπρωτεΐνη 

C3 συστατικό του 

συµπληρώµατος 

γ σφαιρίνες 

G - A - M - D - E 

- 

- 63 -


For en dansk version af dette pakningsvedlæg, henvend Dem til den danske distributør af produkter fra SEBIA : 

ILS ApS Gydevang 22A DK-3450 Allerød 

Tlf : +45 48 14 18 50 

Fax : +45 48 14 18 60 

e-mail : ils@ilsdk.dk 

- 64 - 

SEBIA INSTRUKTION - Dansk


SCHÉMAS / FIGURES 

Figure 1 Figure 2 

1 2 3 4 567 8 9 10 11 121314 15 

Figure 3 Figure 4 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

Figure 5 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 

- 65 -

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Rue de la Fusée, 62 

Raketstraat, 62 

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HYDRAGEL 7 ß1-ß2 HYDRAGEL 15 ß1-ß2 HYDRAGEL 30 ß1-ß2

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