HYDRAGEL 2 IF HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 9 IF

HYDRAGEL 1 IF Violet Acide / Acid Violet 

Ref. 4301 


Ref. 4302 


Ref. 4304 

Ref. 4381* 

HYDRAGEL 4 IF Amidoschwarz / Amidoblack 

Ref. 4308 


Ref. 4309 

Ref. 4382** 

Masque dynamique / Dynamic mask 

2005/03

HYDRAGEL 1, 2, 4 & 9 IF - 2005/03 

UTILISATION 

Les kits HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF et 9 IF permettent la détection des protéines monoclonales dans le sérum humain et dans l’urine, par immunofixation 

sur gel d’agarose dans le système semi-automatique HYDRASYS. 

Le système HYDRASYS permet de réaliser toutes les séquences jusqu’à l’obtention du gel prêt pour l’interprétation. Les protéines sont séparées en 

tampon alcalin (pH 9,1) puis immunoprécipitées par les antisérums des différentes spécificités : anti-chaînes lourdes gamma (Ig G), alpha (Ig A), et mu 

(Ig M) et anti-chaînes légères kappa et lambda (libres et liées). Après immunofixation, les protéines précipitées sont colorées par une solution de violet 

acide ou d’amidoschwarz. L’excès de colorant est éliminé en milieu acide. 

Chaque gel d’agarose est prévu pour l’analyse de : 

- 1 échantillon pour le kit HYDRAGEL 1 IF, 

- 2 échantillons pour le kit HYDRAGEL 2 IF, 

- 4 échantillons pour les kits HYDRAGEL 4 IF, 

- 9 échantillons pour les kits HYDRAGEL 9 IF. 

Les kits HYDRAGEL 4 IF sont proposés au choix avec colorant violet acide ou amidoschwarz. 

À usage in vitro exclusivement. 

PRINCIPE DU TEST 

Les immunoglobulines monoclonales, marqueurs des gammapathies, sont détectées lors de l’électrophorèse des protéines. Elles se présentent sous 

forme de bandes anormales situées essentiellement dans les zones bêta ou gamma globulines. L’immunofixation effectuée à l’aide d’antisérums 

monospécifiques permet l’identification des bandes monoclonales dépistées par électrophorèse. 

Elle se réalise en quatre étapes : 

1. Séparation électrophorétique des protéines en gel d’agarose. 

2. Fixation et immunoprécipitation des protéines séparées par électrophorèse : application du fixateur et des antisérums sur le gel, au niveau des pistes 

de migration. Le fixateur et les antisérums diffusent dans le gel. Le fixateur précipite toutes les protéines et les anticorps précipitent les antigènes 

correspondants. 

3. Élimination des protéines non précipitées par pompage et lavage. Les protéines précipitées restent piégées dans le gel. 

4. Coloration des protéines et comparaison de la position des bandes immunoprécipitées avec celle des bandes anormales observées après 

électrophorèse des protéines. 

Pour identifier de façon précise la nature de la bande monoclonale, l’échantillon est testé sur six pistes. Après électrophorèse, une piste (ELP) sert de 

référence grâce à la précipitation par le fixateur de toutes les protéines présentes ; les cinq autres pistes permettent de caractériser la ou les bandes 

monoclonales grâce à des anticorps spécifiques anti-chaînes lourdes gamma (Ig G), alpha (Ig A) et mu (Ig M) et anti-chaînes légères kappa et lambda 

(libres et liées). 

Cette technique simple et rapide donne une image claire et très facilement interprétable. 

RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF ET HYDRAGEL 9 IF 

KIT HYDRAGEL 1 IF RÉF. N° 4301 KIT HYDRAGEL 2 IF RÉF. N° 4302 KITS HYDRAGEL 4 IF RÉF. N° 4304 RÉF. N° 4308 RÉF. N° 4381* KITS HYDRAGEL 9 IF RÉF. N° 4309 RÉF. N° 4382** Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels 10 gels 10 gels 80 gels Mèches tamponnées (prêtes à l'emploi) 10 sachets de 2 10 sachets de 2 10 sachets de 2 80 sachets de 2 Diluant colorant (solution concentrée) 1 fl. de 60 ml Colorant amidoschwarz (solution concentrée) 1 fl. de 20 ml Colorant violet acide (solution concentrée) 1 fl. de 75 ml 1 fl. de 75 ml 8 fl. de 75 ml Diluant (prêt à l’emploi) 1 fl. de 3,2 ml 1 fl. de 32 ml 1 fl. de 32 ml 2 fl. de 80 ml 3 fl. de 80 ml Fixateur (prêt à l’emploi) 1 fl. de 2,9 ml Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes lourdes gamma (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes lourdes alpha (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes lourdes mu (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes légères kappa (libres et liées) (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère anti- 1 fl. de 2,0 ml chaînes légères lambda (libres et liées) (prêtes à l’emploi) Applicateurs (prêts à l’emploi) 1 boîte de 10 2 boîtes de 10 2 boîtes de 10 16 boîtes de 10 3 boîtes de 10 24 boîtes de 10 Barrettes antisérums (prêtes à l’emploi) 1 boîte de 10 1 boîte de 10 1 boîte de 10 8 boîtes de 10 Papiers-filtres fins 1 sachet de 10 1 sachet de 10 1 sachet de 10 8 sachets de 10 

| Papiers-filtres épais | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 8 sachets de 10 | 

(*) HYDRAGEL 4 IF MAXI-KIT (**) HYDRAGEL 9 IF MAXI-KIT 

NOTE : Le fixateur et les antisérums sont commercialisés séparément sauf pour les MAXI-KITS (voir RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS). 

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS 

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. 

LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. 

- 1 - 

NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français


1. GELS D’AGAROSE 

Préparation 

Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 8 g/l ; tampon tris-barbital, pH 9,1 ± 0,1 ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les gels contiennent 0,31 % de barbital et 0,34 % de barbital sodé. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! 

Utilisation 

Support pour l’électrophorèse et l’immunofixation des protéines. 

Conservation, stabilité et signes de détérioration 

Les gels peuvent être conservés à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date d’expiration 

indiquée sur le kit ou sur le sachet du gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du 

kit doit être pointée vers le haut). Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. Éviter toute variation brutale de 

température. 

NE PAS CONGELER. 

Éliminer le gel dans les cas suivants : 

(I) Apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ; 

(II) Apparition de bactéries ou de moisissures ; 

(III) Présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation). 

2. MÈCHES TAMPONNÉES 

Préparation 

Les mèches en éponge tamponnées sont prêtes à l’emploi. Chaque mèche tamponnée contient : tampon tris-barbital, pH 9,1 ± 0,3 ; azoture de sodium ; 

composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les mèches tamponnées contiennent 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sodé et 0,30 % d’azoture de sodium. Ne pas avaler ! 

En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! L’azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas 

de contact avec des acides, du plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des mèches, éviter tout contact avec ces produits. 

Utilisation 

Les mèches en éponge tamponnées jouent un rôle de réservoir de tampon pour l’électrophorèse et assurent le contact entre le gel et les électrodes. 


Les mèches tamponnées peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Elles doivent être conservées horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet des mèches tamponnées. NE PAS CONGELER. 

Éliminer les mèches tamponnées si le sachet est ouvert ou si les mèches sont sèches. 

3. DILUANT COLORANT (Réf. N° 4308) 

Préparation 

Le diluant colorant concentré doit être utilisé comme décrit dans le paragrahe " COLORANT AMIDOSCHWARZ ". Il contient une solution acide. 

Utilisation 

Pour la préparation du colorant amidoschwarz. 


Le diluant colorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le 

kit ou sur l’étiquette du flacon de diluant. NE PAS CONGELER. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

4. COLORANT AMIDOSCHWARZ (Réf. N° 4308) 

Préparation 

Le colorant amidoschwarz concentré est une solution visqueuse qui peut éventuellement gélifier, ce qui n’affecte absolument pas la qualité de la 

solution finale et son pouvoir de coloration. 

Dans tous les cas, pour obtenir une parfaite reconstitution du colorant, il faut respecter le protocole suivant : 

1. Ajouter environ 15 mL de diluant colorant au flacon d’amidoschwarz concentré. 

2. Refermer soigneusement le flacon. 

3. Agiter très vigoureusement le flacon pendant au minimum 5 secondes. 

4. Verser la solution obtenue dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

5. Renouveler cette opération deux fois, trois fois, si nécessaire. 

6. Verser le reste du diluant dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

7. Compléter à 300 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

8. Agiter parfaitement cette solution pendant 5 à 10 minutes. 

Le colorant est prêt à l’emploi. 

REMARQUE : Une reprise incomplète du colorant peut entraîner une mauvaise coloration de la fraction albumine (baisse du pourcentage ou trou 

blanc dans la fraction). 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; éthylène-glycol, 6,7 % ; composants sans danger aux 


ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. 

La solution diluée est stable pendant 1 mois. 

Ne pas stocker la solution de colorant diluée à proximité d’une source de chaleur. 

- 2 -


5. COLORANT VIOLET ACIDE (Réf. N° 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 et 4382) 

Préparation 

Le flacon de violet acide concentré doit être complété à 300 ml avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; violet acide, 2 g/l ; éthylène-glycol, 3,25 % ; composants sans danger aux 


ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique et immunofixation des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. La solution diluée 

est stable pendant 6 mois. 

6. DILUANT 

Préparation 

Le diluant est prêt à l’emploi. Il contient : tampon alcalin pH 7,5 ± 0,3 ; bleu de bromophénol ; composants sans danger aux concentrations utilisées, 

nécessaires pour des perfomances optimales. 

Utilisation 

Pour la dilution des échantillons. Le bleu de bromophénol permet de vérifier la bonne application des échantillons et la qualité de la migration. 


Le diluant peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette 

du flacon de diluant. 

Il ne doit pas y avoir de précipité. 

7. COFFRET D’ANTISÉRUMS ET DE FIXATEUR (Réf. N° 4381 et 4382) 

7.1. ANTISÉRUMS 

Préparation 

Les antisérums sont prêts à l’emploi. Ils contiennent des immunoglobulines totales de mammifère anti-humaines. Chaque réactif a une couleur 

spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. La couleur est rappelée sur les étiquettes des flacons. 

Lorsque les antisérums présentent un léger trouble ou précipité, il suffit généralement de mettre les flacons à température ambiante environ 10 minutes 

avant leur utilisation. Si le trouble persiste, il ne perturbe en rien la réaction immunologique. Dans le cas de précipité insoluble, il est recommandé de 

centrifuger les antisérums pendant 5 minutes à 3000 rpm. 

Utilisation 

Pour l’immunoprécipitation des protéines séparées par électrophorèse. 

Les antisérums peuvent être d’origines animales différentes. Il est donc impératif de ne pas mélanger deux flacons différents d’antisérums, y compris 

de la même spécificité, et de TOUJOURS changer l’embout de la pipette lors d’un changement de flacon. 

IMPORTANT : Pour éviter toute contamination entre les différents réactifs, il est impératif de remettre chaque bouchon sur le flacon correspondant 

après toute utilisation. 


Les antisérums doivent être conservés au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur les 

étiquettes des flacons d’antisérum. 

NOTE : Durant le transport, les antisérums peuvent rester à température ambiante (entre 15 et 30 °C) pendant 15 jours sans que cela n’affecte la 

qualité du test. 

7.2. FIXATEUR 

Préparation 

Le fixateur est prêt à l’emploi. Il contient : une solution acide et des composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des 

performances optimales. 

Il a une couleur spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. 

Utilisation 

Pour la fixation des protéines séparées par électrophorèse sur la piste référence (ELP). 

IMPORTANT : Pour éviter toute contamination entre les différents réactifs, il est impératif de remettre chaque bouchon sur le flacon correspondant 

après toute utilisation. 


Le fixateur peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette 

du flacon de fixateur. 


8. APPLICATEURS 

Utilisation 

Applicateurs prédécoupés, à usage unique pour le dépôt des échantillons. 

Conservation 

Les applicateurs doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

9. BARRETTES ANTISÉRUMS 

Utilisation 

Barrettes colorées, à usage unique, pour le dépôt du fixateur et des antisérums pour l’immunofixation. 

ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes contenant des antisérums. 

10. PAPIERS-FILTRES FINS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption de l’excès de liquide à la surface du gel avant l’application des échantillons. 

- 3 -


Conservation 

Les papiers-filtres fins doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

11. PAPIERS-FILTRES ÉPAIS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption des protéines non précipitées du gel après l’étape d’immunofixation. 

Conservation 

Les papiers-filtres épais doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS 

1. COFFRET D’ANTISÉRUMS ET DE FIXATEUR IF (pour les kits 4301, 4302, 4304, 4308 et 4309) 

Le coffret Antisérums et Fixateur pour immunofixation IF (SEBIA, référence N° 4315) contient cinq flacons d’antisérums et un flacon de fixateur de 1 ml 

chacun, spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec le masque dynamique. 

1.1. ANTISÉRUMS 

Voir paragraphe précédent 7.1. 

1.2. FIXATEUR 

Voir paragraphe précédent 7.2. 

2. DÉCOLORANT 

Préparation 

Chaque flacon de décolorant concentré (SEBIA, référence N° 4540 : 10 flacons de 100 ml chacun) doit être dilué au 1/1000 avec de l’eau distillée ou 

déminéralisée, il permet d'obtenir 100 litres de solution décolorante. 

Prélever par quantité de 5 ml et compléter à 5 litres avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution décolorante contient : acide citrique, 0,5 g/l. 

Utilisation 

Pour la décoloration, c’est-à-dire l’élimination de l’excès de colorant après coloration du gel. 

Pour le rinçage de la cuve de coloration après lavage. 

Pour neutraliser l’acidité du décolorant, mettre dans le flacon de vidange vide, 15 ml de soude à 50 % (solution du commerce). 


Le décolorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou 

sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

Le décolorant dilué est stable pendant 1 semaine à température ambiante, en flacon fermé. 

Éliminer le décolorant dilué s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

En cas de conservation prolongée (au delà d’une semaine) de la solution diluée, ajouter 50 µl/l de ProClin 300 pour prévenir toute prolifération microbienne. 

Le décolorant dilué contenant du ProClin est stable en flacon fermé à température ambiante ou au réfrigérateur jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le 

kit ou sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

3. SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS 

Préparation 

Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentrée (SEBIA, référence N° 4541 : 10 flacons de 80 ml chacun) doit être complété à 5 litres 

avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution de lavage contient : tampon alcalin, pH 8,8 ± 0,3 ; azoture de sodium. 

ATTENTION : La solution de lavage concentrée contient 0,625 % d'azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! L'azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides, du 

plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des solutions, laver abondamment avec une grande quantité d’eau. 

Utilisation 

Pour le lavage du gel après immunofixation afin d’éliminer les protéines résiduelles non précipitées. 

Pour le lavage périodique de la cuve de coloration de l’HYDRASYS : par exemple, pour une utilisation journalière, effectuer un lavage hebdomadaire 

de la cuve de coloration. 

Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d’utilisation. 


Les solutions de lavage concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés. Elles sont stables 

jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. 

Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

4. FLUIDIL 

Préparation 

Le Fluidil (SEBIA, référence N° 4587 : 1 flacon de 5 ml) est prêt à l’emploi. 

Utilisation 

Pour la dilution des échantillons visqueux ou troubles (turbidité induite par la présence d’une cryoglobuline ou d’un cryogel). 


Le Fluidil peut être conservé à température ambiante. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon de Fluidil. 


- 4 -


ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES 

1. Système HYDRASYS SEBIA, référence N° 1210 ou N° 1211. 

2. Micropipetteur, manuel ou automatique, tel que HYDRAplus SEBIA, référence N° 1215, pour le chargement des applicateurs ou des barrettes 

antisérums. 

3. Chambre humide, référence N° 1270, fournie avec le système HYDRASYS. 

4. Bidons plastiques fournis avec le système HYDRASYS. 

5. Barre métallique du masque SEBIA, fournie avec le système HYDRASYS 

6. Masque dynamique, SEBIA, référence N° 1255. 

7. Pipettes de 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl et 200 µl. 

ÉCHANTILLONS À ANALYSER 

Prélèvement et conservation des échantillons 

L’analyse se fait sur échantillons frais. Les sérums ou les urines doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire 

d’analyses cliniques. 

Les échantillons peuvent être conservés une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations prolongées, congeler les échantillons ; 

les échantillons congelés sont stables au minimum 1 mois. 

La conservation des sérums congelés est améliorée par addition à l’échantillon d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

La conservation des urines congelées est améliorée par addition à l’échantillon de tampon HEPES 0,1 M (pH 6,75) et/ou d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

IMPORTANT : Ne pas utiliser de conservateur contenant de l’acide borique. 

Les échantillons décongelés peuvent donner, au point de dépôt, une trace due à la dénaturation de protéines ou de lipoprotéines. 

Préparation des échantillons 

1. Sérums 

Afin d’éviter des phénomènes de zone, par excès d’antigène, les échantillons de sérum doivent être déposés dilués. 

Diluer 1 échantillon pour HYDRAGEL 1 IF, 2 ou 4 échantillons pour l’HYDRAGEL IF 2/4 selon le kit et 9 échantillons pour HYDRAGEL 9 IF. 

| PISTE | SÉRUM (µl) | DILUANT (µl) | 

| Piste immunologique G | 20 | 100 | 

| Profil électrophorétique ELP et autres pistes immunologiques | 30 | 60 | 

Cas particuliers 

• Si le taux d’immunoglobulines est supérieur à 20 g/l (cas d’hypergammaglobulinémie), il est recommandé d’augmenter le facteur de dilution des 

échantillons (sauf pour la piste ELP) afin d’obtenir une concentration normale en immunoglobulines. 

• Si le taux d’immunoglobulines est inférieur à 5 g/l (cas d’hypogammaglobulinémie), il est recommandé de diminuer le facteur de dilution des 

échantillons. 

• Pour une recherche de chaînes légères libres sériques ou urinaires, il est recommandé d’utiliser le programme " BENCE JONES ". 

Pour cela, le test pourra être réalisé avec le kit IF et avec les antisérums ANTI-KAPPA LIBRE (SEBIA, référence N° 4370) et ANTI-LAMBDA 

LIBRE (SEBIA, référence N° 4371) ou avec le kit HYDRAGEL 1, 2, 4 ou 9 BENCE JONES (SEBIA, références N° 4321, 4322, 4324 ou 4329). 

En cas de recherche de chaînes libres sériques, diluer le sérum dans de l’eau physiologique ou dans le diluant pour immunofixation prédilué au 

1/4 (1 volume de diluant + 3 volumes d’eau distillée ou déminéralisée) au 1/10 pour les pistes ELP, GAM, K et L (1 volume de sérum + 9 volumes 

de diluant prédilué ou d’eau physiologique) et au 1/3 (1 volume de sérum + 2 volumes de diluant prédilué ou d’eau physiologique) pour les pistes 

révélées avec les antisérums anti-kappa libres et anti-lambda libres. 

Si le taux d’immunoglobulines est inférieur à 5 g/l, il est recommandé de moins diluer le sérum ; par exemple, au 1/5 pour les pistes ELP, GAM, 

K et L et au 1/2 pour les pistes Kl et Ll. 

• Après conservation au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) ou congélation, certains sérums (en particulier ceux qui contiennent une cryoglobuline ou 

un cryogel) deviennent visqueux ou troubles. Ces sérums présentent des difficultés de manipulation lors du dépôt avec l’applicateur HYDRASYS, 

car ils ne diffusent que très difficilement sur les dents de l’applicateur. Prétraiter ces sérums avec le Fluidil : ajouter 25 µl de Fluidil à 75 µl de 

sérum, agiter 15 secondes au vortex, puis suivre la technique. 

• Certaines paraprotéines sont polymérisées, le sérum présente alors une bande d'allure "monoclonale" sur toutes les pistes. Préparer une 

solution réductrice en ajoutant 1 % de ß-mercaptoéthanol (BME) dans le Fluidil. Prétraiter ces sérums par cette solution : ajouter 25 µl de solution 

réductrice à 75 µl de sérum pur, agiter au vortex et laisser en contact 15 minutes minimum (30 minutes maximum), puis suivre la technique. 

• Pour l’analyse des Ig D et/ou des Ig E, appliquer les mêmes dilutions que pour les chaînes légères libres et liées. 

2. Urines concentrées 

La plupart des échantillons d’urines doivent être concentrés, au moyen d’un dispositif approprié, pour ramener la concentration protéique totale à 

environ 5 g/l ou la concentration en immunoglobines totales à environ 1 g/l. Si la concentration protéique urinaire n’est pas connue, concentrer 

l’urine 20 à 100 fois au moyen d’un dispositif approprié. 

IMPORTANT : Certaines urines contiennent une concentration importante de sels. Il s’en suit une déformation du gel au cours de la migration qui 

risque de conduire à une perturbation des profils après électrophorèse. Il convient d’éliminer cet excès de sels par une dialyse. 

En cas d’urines troubles (concentrées ou non), il est recommandé d’éliminer les particules en centrifugeant les échantillons (pendant 10 minutes 

à 3000 rpm) ou par filtration (sur filtre de 0,45 µm) afin d’obtenir une bonne diffusion sur les applicateurs. 

La sensibilité peut-être améliorée en augmentant le temps de dépôt de l’échantillon et le temps d’incubation de l’antisérum (programme de 

migration "BENCE JONES"). La limite de détection pour une protéine monoclonale est alors de l’ordre de 10 à 50 mg/l. Dans cette technique, il 

est recommandé d’utiliser des urines non concentrées. 

NOTE : Une concentration trop importante de l’échantillon peut entraîner des artéfacts tels que l’apparition de fausses bandes d’allure 

"monoclonale". Il est donc important de ne pas concentrer les urines au-delà des recommandations préconisées. 

Cas particulier 

Certaines chaînes légères tendent à se polymériser et à former des agrégats, l’urine présente alors une bande d’allure "monoclonale" sur toutes 

les pistes. Traiter les échantillons comme suit : mélanger 100 µl d’urine et 5 µl de ß-mercaptoéthanol préalablement dilué au 1/10 dans de l’eau 

distillée ou déminéralisée, agiter au vortex, puis suivre la technique. 

- 5 -


Échantillon à éviter 

• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène donne une bande proche du point de dépôt. Cette bande peut fausser l’interprétation du test (confusion 

avec une gammapathie). 

• Ne pas utiliser d’échantillon hémolysé. 

• Ne pas utiliser les échantillons d’urine anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, des dégradations enzymatiques peuvent les altérer. 

TECHNIQUE 

Le système HYDRASYS est un instrument multiparamétrique semi-automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les étapes suivantes : 

application des échantillons, migration électrophorétique, incubation avec les réactifs, séchage, lavage, coloration, décoloration et séchage final. 

Les étapes manuelles sont les suivantes : préparation des échantillons et des gels, dépôt des réactifs et lancement des séquences automatiques. 

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS D’HYDRASYS. 

I. PRÉPARATION DE LA MIGRATION 

1. Mettre HYDRASYS sous tension. 

2. Poser un applicateur pour HYDRAGEL 1 IF ou HYDRAGEL IF 2/4 (2 échantillons), deux applicateurs pour HYDRAGEL IF 2/4 (4 échantillons) 

ou 3 applicateurs pour HYDRAGEL 9 IF, à plat sur la paillasse, numérotations (puits) vers le haut (Fig. 1). 

- Déposer 10 µl d’échantillon, sérum dilué ou urine concentrée, dans chaque puits. Le chargement de chaque applicateur ne doit pas excéder 

2 minutes. 

| PISTES | 

PUITS DE DÉPÔT : ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 ÉCHANTILLON N° 1 OU 3 2 3 4 5 6 7 ÉCHANTILLON N° 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF ÉCHANTILLON N° 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 ÉCHANTILLON N° 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| ÉCHANTILLON N° 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANT : Pour l’analyse sur HYDRAGEL IF 2/4, ne pas utiliser les puits de l’applicateur numérotés 1, 8 et 15 ; il est recommandé de les 

identifier au préalable à l’aide d’un marqueur pour éviter d’y déposer l’échantillon par erreur. 

- Placer l’(es) applicateur(s) dans la chambre humide, dents vers le haut (en manipulant l’(es) applicateur(s) par la protection en plastique). 

Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d’utilisation. 

- Laisser diffuser 5 minutes après le dépôt du dernier échantillon. 

Pour une conservation prolongée (8 heures maximum), placer la chambre humide au réfrigérateur. 

3. Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

ATTENTION : Ne pas fermer le capot de l’appareil si les chariots sont relevés ! 

4. Sélectionner dans le menu le programme de migration "1 IF MS/MD" pour HYDRAGEL 1 IF, "2/4 IF MS/MD" pour HYDRAGEL IF 2/4 ou 

"9 IF MD" pour HYDRAGEL 9 IF. 

5. Sortir les mèches tamponnées de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques. 

Fixer les mèches sur le chariot porte-électrodes à l'aide des languettes perforées. La face de la mèche fixée sur la languette vient en contact 

avec l'électrode (Fig. 2). 

6. Sortir le gel de son emballage. 

- Éliminer rapidement l’excès de liquide en surface, en effleurant le gel avec un papier-filtre fin. 

ATTENTION : Ne surtout pas laisser le papier-filtre en contact prolongé avec le gel pour éviter sa déshydratation. 

- Déposer 120 µl d'eau distillée ou déminéralisée pour HYDRAGEL 1 IF ou 200 µl pour HYDRAGEL IF 2/4 et HYDRAGEL 9 IF, sur le plateau 

de migration dans le tiers inférieur du cadre sérigraphié. 

- Placer le gel (face gel orientée vers le haut) sur le plateau contre la barrette, à l'intérieur du cadre sérigraphié (Fig. 3). 

- Donner une forme concave au gel (Fig. 3) et le dérouler sur le plateau jusqu'au contact de la goutte d'eau qui doit se répartir sur toute la 

largeur du gel. Relever légèrement le gel pour éliminer les bulles d'air éventuellement piégées puis dérouler totalement le gel au contact du 

plateau. La goutte d’eau doit s’étaler sous toute la surface du film. 

7. Abaisser l'ensemble des chariots jusqu'en butée. Dans cette position, les mèches tamponnées ne touchent pas le gel. NE PAS FORCER LA 

DESCENTE DES CHARIOTS. 

8. Sortir l’(es) applicateur(s) de la chambre humide en le(s) manipulant par la protection plastique. 

- Éliminer la protection des dents. 

- Placer l'(es)applicateur(s) sur le porte-applicateurs : 

- HYDRAGEL 1 IF ou HYDRAGEL IF 2/4 (2 échantillons) : position N° 6, 

- HYDRAGEL IF 2/4 (4 échantillons) : positions N° 3 et 9, 

- HYDRAGEL 9 IF : positions N° 2, 6 et 10. 

IMPORTANT : Les numérotations de l'applicateur sont toujours dirigées vers l'opérateur (Fig. 4). 

Pour une parfaite reproductibilité de la zone de dépôt, amener les applicateurs en butée sur le porte-applicateurs, par exemple du côté gauche. 

9. Fermer le capot du module de migration. 

10. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

IMPORTANT : Ne rien placer à proximité immédiate de la grille de ventilation (à droite de l'appareil). 

MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente des chariots porte-électrodes et porte-applicateurs pour amener les mèches tamponnées et l’(es) applicateur(s) au contact du gel. 

• Remontée du chariot porte-applicateurs. 

- 6 -


• Migration à 10 W constants pour HYDRAGEL 1 IF et à 20 W constants pour HYDRAGEL IF 2/4, jusqu’à 42 Vh accumulés (pendant environ 

9 minutes) et à 20 W constants jusqu’à 36 Vh accumulés (pendant environ 7 minutes) pour HYDRAGEL 9 IF, à 20 °C, température contrôlée par 

effet Peltier. 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. 

A l’écran, s’affiche le message : " AS". 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

II. PRÉPARATION DE L’IMMUNOFIXATION 

Les différents éléments du masque dynamique (repère couleurs, barrette antisérums, support barrette, guide et réducteur de course) sont présentés 

sur la figure 5. 

Pendant la migration, préparer le masque dynamique en procédant comme suit : 

1. Poser le guide du masque dynamique à plat sur la paillasse. 

IMPORTANT : L’analyse d’un ou de deux échantillons à l’aide du masque dynamique nécessite l’utilisation du réducteur de course qui doit 

être placé sur le guide du masque dynamique. 

2. Positionner une barrette antisérums sur le support barrette (Fig. 6) : 

- Placer les bossages de la barrette, inclinée à 45°, contre les ressorts du support barrette. 

- En prenant appui contre ces ressorts, faire pivoter la barrette pour la fixer dans les encoches du support barrette. 

ATTENTION : Vérifier que la barrette est fixée correctement sur le support barrette : les ergots situés aux extrémités de la barrette 

doivent être bien enclenchés dans les deux encoches du support barrette. 

3. Placer l’ensemble barrette – support barrette sur le guide du masque dynamique (Fig. 7) (équipé d’un réducteur de course pour l’analyse d’1 

ou de 2 échantillons) puis placer le repère couleurs qui indique les emplacements de dépôt des réactifs, correspondant à la technique, sur le 

support barrette devant les puits de la barrette antisérums (Fig. 8). 

4. Déposer les réactifs, dont la couleur est rappelée dans le tableau ci-dessous, sur la barrette antisérums : 

- Barrette 6 puits pour HYDRAGEL 1 IF : 8 µl par puits, 

- Barrette 15 puits pour HYDRAGEL IF 2/4 : 8 µl par puits pour l’analyse de 2 échantillons, 

12 µl par puits pour l’analyse de 4 échantillons, 

- Barrette 18 puits pour HYDRAGEL 9 IF : 8 µl par puits. 

PISTE DÉSIGNATION COULEUR ELP solution de fixation jaune G antisérum anti-chaînes lourdes gamma rose A antisérum anti-chaînes lourdes alpha bleu foncé M antisérum anti-chaînes lourdes mu jaune vert K antisérum anti-chaînes légères kappa (libres et liées) vert clair 

| L | antisérum anti-chaînes légères lambda (libres et liées) | bleu clair | 

NOTE : Pour éviter les inversions, les réactifs sont colorés et la couleur de la piste à remplir est rappelée sur le repère couleurs de dépôt des 

réactifs. 

IMPORTANT : Pour l’analyse sur HYDRAGEL IF 2/4, ne pas utiliser les puits de la barrette antisérums en positions 1, 8 et 15. 

Lors du prélèvement des réactifs, ne pas piéger de bulles d'air dans l'embout de la pipette. 

Pour déposer les réactifs (Fig. 9) : 

- tenir la pipette inclinée, 

- en appliquant légèrement l’embout sur le bord de l’orifice, déposer la goutte de réactif dans le puits. 

5. Retirer le repère couleurs. 

III. IMMUNOFIXATION 

1. Ouvrir le capot du module de migration. 

2. Retirer l’(es) applicateur(s) et le(s) jeter. 

3. Relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes, retirer les mèches par les languettes et les jeter. 

- Retirer les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

- Nettoyer les électrodes avec un papier ouaté humide. 

- Laisser le gel en place dans le module de migration. 

4. Mettre en place le masque dynamique de dépôt des réactifs en procédant comme suit (Fig. 10) : 

- fixer la tige destinée à l'accrochage du masque dynamique, à l'aide des plots de fixation. (Une fois mise en place, cette tige peut être laissée 

sur l'HYDRASYS) ; 

- placer les encoches du masque dans les repères de la tige en tenant le masque par la poignée ; 

- faire pivoter le masque pour l'appliquer sur le plateau de l’HYDRASYS. 

IMPORTANT : Régler au préalable la position du masque pour obtenir une parfaite correspondance entre les profils électrophorétiques du gel 

et les pistes de révélation du masque. 

5. Caler le support-barrette sur le guide au plus bas, dirigé vers l’opérateur. Tout en maintenant l’ensemble du support-barrette par la poignée 

située à droite, exercer une pression sur le point d’appui central, pour amener la barrette en contact avec le gel. Relacher cette pression, les 

réactifs s’étalent alors sous chacune des pistes (Fig. 11). 

6. Immédiatement, à l’aide de la poignée située à droite, répartir les réactifs en effectuant un aller-retour du masque dynamique au-dessus du 

gel d’un mouvement lent et régulier (environ 5 secondes) (Fig. 12). 

ATTENTION : Pendant cette opération, le masque ne doit être tenu que par la poignée sans toucher au guide. Ne jamais appuyer une 

seconde fois : les réactifs risquent de se mélanger. 

- 7 -


7. Retirer l’ensemble guide – masque dynamique : 

- tenir le guide par la poignée ; 

- faire pivoter le guide autour de la tige et le décrocher ; 

- décrocher la barrette du support barrette et la jeter. 

ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes contenant des antisérums. 

- Un léger excès de réactifs subsiste sur le gel sous la forme d’une goutte au niveau des orifices des puits quand le masque est retiré, sans 

aucun effet sur les résultats. 


9. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

À l'écran, s'affiche le message : "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Incubation à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 5 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. 

À l'écran, s'affiche le message : " PAP.". 

NOTE : Pendant la séquence d'incubation, le capot du module de migration reste verrouillé. 

IV. POMPAGE DU GEL 


2. Appliquer une feuille de papier-filtre épais sur le gel : 

- incliner la feuille de papier-filtre épais d'environ 45° et aligner le bord inférieur de la feuille de papier-filtre sur la barrette de positionnement 

du gel ; 

- faire pivoter la feuille de papier-filtre et l'appliquer sur le gel. 

ATTENTION : Bien appuyer sur toute la surface de la feuille de papier-filtre pour assurer un contact parfait entre le gel et le papier. 


4. Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

POMPAGE DU GEL - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Pompage à 40 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 3 minutes. 

À l'écran, s'affiche le message : "❄POMPAGE]". 

• Un signal sonore (bip) retentit. 

À l'écran, s'affiche le message : "❊ PAP.". 

V. SÉCHAGE DU GEL 


2. Retirer le papier-filtre en laissant le film en place. 


4. Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

SÉCHAGE - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Séchage à 50 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 6 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. Le plateau reste à 50 °C jusqu'à l'ouverture du capot. 

NOTE : Pendant toute la séquence de séchage, le capot du module de migration reste verrouillé. 

VI. PRÉPARATION DES SÉQUENCES DE LAVAGE, COLORATION ET DÉCOLORATION DU GEL 


2. Récupérer le film sec pour les séquences suivantes. 

3. Placer le film sur le porte-film, face gel vers l'opérateur, en procédant comme suit (Fig. 13) : 

- ouvrir le porte-film ; 

- le poser à plat sur la paillasse ; 

- positionner le gel dans les gorges des colonnettes ; 

- refermer le porte-film ; 

- s'assurer que le film soit bien enfoncé dans les gorges des deux colonnettes. 

4. Introduire le porte-film dans le module de traitement / coloration du gel. 

IMPORTANT : Avant de lancer un cycle de coloration, s'assurer que : 

- le flacon de solution de lavage contienne 400 ml de solution de lavage ; 

- le flacon de colorant contienne 300 ml de colorant ; 

- le flacon de décolorant contienne 1 litre de décolorant minimum ; 

- le flacon de vidange soit vide. 

Pour le branchement des canaux réactifs : se référer aux instructions affichées sur l’écran de l’appareil (sélectionner la touche : VISU 

CANAUX). 

IMPORTANT : Ne pas oublier d’obturer les canaux non utilisés. 

5. Sélectionner le programme de coloration "IF ACID VIOLET" ou "IF AMIDO" dans le menu. 

- Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à droite du clavier). 

Pendant toutes les séquences de coloration, décoloration et séchage, le système reste verrouillé. 

Après refroidissement de la cuve, un signal sonore (bip) retentit et le système se débloque (la ventilation se maintient jusqu’à la récupération 

du porte-film). 

- 8 -


NOTES : 

- La température du plateau continue à descendre et atteint 20 °C en 5 minutes environ. À 20 °C, une nouvelle séquence de migration peut être 

lancée. 

- Remettre les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

- Nettoyer le plateau avec un papier ouaté humide. 

VII.FIN DU TRAITEMENT DU GEL 

1. Sortir le porte-film du compartiment ; ouvrir le porte-film et retirer le gel sec. 

2. Si nécessaire, nettoyer le dos du gel (support plastique) avec un papier ouaté humide. 

NOTE : Pour les gels à rangées multiples (2 ou 3), les longueurs de migration peuvent être sensiblement différentes, sans aucune conséquence 

sur les résultats. 

RÉSULTATS 

Interprétation 

1. Sérum 

Absence de bande monoclonale 

• Un sérum normal montre une zone colorée diffuse d’immunoglobulines polyclonales sur toutes les pistes. 

• Une hypergammaglobulinémie est caractérisée par une zone diffuse très fortement colorée, avec absence de bande étroite. 

Présence d’une bande monoclonale 

• Une gammapathie (présence d’une immunoglobuline monoclonale) est caractérisée par une bande étroite détectée avec l’un des anti-chaînes 

lourdes (gamma, alpha ou mu) et avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda). La fraction monoclonale mise en évidence, 

généralement étroite et bien visible, doit être située au même niveau de migration que la bande détectée sur la piste de référence (ELP). 

• L’absence de réaction avec l’un des anti-chaînes lourdes appliqué, mais avec présence d’une chaîne légère peut signifier : 

a) la présence d’une gammapathie à Ig D ou Ig E qu’il conviendra de confirmer avec les anti-chaînes lourdes delta ou epsilon, 

b) la présence d’une chaîne légère libre qu’il conviendra de confirmer avec les antisérums spécifiques anti-chaînes légères libres kappa ou 

lambda. 

• L’absence de réaction avec les anti-chaînes légères mais avec présence d’une chaîne lourde, est rare. Il conviendra de confirmer la présence 

d’une maladie des chaînes lourdes gamma, alpha ou mu. 

Présence de plusieurs bandes monoclonales 

• La même interprétation s’applique en présence de plusieurs bandes monoclonales. Ces cas plus rares correspondent à la prolifération de 

plusieurs clones de cellules B. Une gammapathie biclonale sera détectée par la présence de deux chaînes lourdes (identiques ou différentes) 

et de deux chaînes légères (identiques ou différentes). 

• Des immunoglobulines polymérisées sont caractérisées par la présence de plusieurs bandes sur une même chaîne lourde et une même chaîne 

légère. Il conviendra d’effectuer un traitement réducteur au ß-mercaptoéthanol et de renouveler l’immunofixation pour confirmer la présence 

d’une seule anomalie monoclonale (Voir "Échantillons à analyser"). 

• Un profil oligoclonal est caractérisé par la présence de bandes multiples sur une ou plusieurs chaînes lourdes et sur l’une ou les deux chaînes 

légères. 

Cas particuliers 

• Une bande d’allure monoclonale observée à l’électrophorèse mais non retrouvée sur les pistes immunoprécipitées peut indiquer la présence de 

fibrinogène. 

• Une précipitation sur toutes les pistes, au même niveau, peut indiquer la présence d’une Ig M polymérisée ou d’une cryoglobuline qu’il 

conviendra d’identifier après traitement réducteur (Voir "Échantillons à analyser"). 

2. Urines concentrées 

Le principe d’interprétation est identique à celui décrit pour le sérum. 

Une gammapathie (présence d’une immunoglobuline monoclonale) est caractérisée par une bande étroite détectée avec l’un des anti-chaînes 

lourdes (gamma, alpha ou mu) et avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda). La fraction monoclonale mise en évidence, généralement 

étroite et bien visible, doit être située au même niveau de migration que la bande détectée sur la piste de référence (ELP). 

Une protéine de Bence Jones est caractérisée par : 

• une bande monoclonale révélée par un anti-chaînes légères (libres et liées) kappa ou lambda (pistes K ou L), 

• l’absence de bande monoclonale avec les anti-chaînes lourdes gamma, alpha ou mu (pistes G, A ou M). 

Une protéine de Bence Jones à différents états de polymérisation est caractérisée par : 

• plusieurs bandes révélées par un anti-chaînes légères (libres ou liées) kappa ou lambda (pistes K ou L), 

• l’absence de bande monoclonale avec les anti-chaînes lourdes gamma, alpha ou mu (pistes G, A ou M). 

Il conviendra d’effectuer un traitement réducteur au ß-mercaptoéthanol et de renouveler l’immunofixation en présence d’anti-chaînes légères 

libres (anti-kappa libre ou anti-lambda libre). 

Une paraprotéine sérique passant dans les urines avec absence de protéine de Bence Jones est caractérisée par : 

• une bande monoclonale révélée par les anti-chaînes lourdes gamma, alpha ou mu (pistes G, A ou M), 

• la même bande révélée par un anti-chaînes légères (libres ou liées) kappa ou lambda (pistes K ou L). 

Une paraprotéine sérique passant dans les urines associée à une protéine de Bence Jones est caractérisée par : 

• une bande monoclonale révélée par un anti-chaînes lourdes gamma, alpha ou mu (pistes G, A ou M), 

• deux bandes révélées avec un ou les deux anti-chaînes légères kappa et/ou lambda (libres et liées). 

- 9 -


Interférences et limites 

Voir ÉCHANTILLONS À ANALYSER. 

L'utilisation d'antisérums autres que ceux spécifiques à la technique d'Immunofixation réalisée avec le masque dynamique peut affecter la qualité des 

résultats. 

Compte tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne 

peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales. 

Assistance technique 

Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux. 

Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès 

du Service Technique SEBIA. 

PERFORMANCES 

Reproductibilité intra-essai 

Technique HYDRAGEL 4 IF 

Migration de trois (3) échantillons de sérums pathologiques : Deux sérums à forte gammapathie monoclonale et un sérum présentant deux faibles 

paraprotéines. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 2 lots différents de gels HYDRAGEL IF 2/4 à raison de 4 analyses par gel, 

suivies d’une coloration au violet acide. 


Migration de trois (3) échantillons de sérums pathologiques à forte gammapathie monoclonale présentant chacun une paraprotéine. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 2 lots différents de gels HYDRAGEL 9 IF à raison de 9 analyses par gel, 

suivies d’une coloration au violet acide. 

Tous les échantillons analysés donnent les mêmes résultats pour les 2 lots de gels testés. Les profils obtenus sont caractéristiques pour chacun des 

échantillons testés. 

Dans la technique HYDRAGEL 4 IF, l’immunofixation ne détecte qu’une bande monoclonale pour les deux premiers échantillons et met en évidence les 

deux bandes monoclonales attendues pour le troisième échantillon pathologique. 

Dans la technique HYDRAGEL 9 IF, l’immunofixation ne détecte qu’une bande monoclonale pour chacun des trois échantillons pathologiques. 

Reproductibilité inter-essais 


Migration de quatre (4) échantillons différents de sérums pathologiques : Deux sérums à forte gammapathie monoclonale, un sérum présentant deux 

faibles paraprotéines et un sérum présentant une forte et une faible paraprotéine. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 10 gels HYDRAGEL IF 2/4 de 3 lots différents suivies d’une coloration au 

violet acide. 


Migration de neuf (9) échantillons de sérums pathologiques présentant une ou plusieurs paraprotéines. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 10 gels HYDRAGEL 9 IF de 3 lots différents suivies d’une coloration au 

violet acide. 

Dans les deux techniques, tous les échantillons analysés donnent les mêmes résultats pour les 3 lots de gels testés. Les profils obtenus sont 

caractéristiques des échantillons analysés et l’immunofixation met en évidence les bandes monoclonales attendues pour tous les échantillons. 

Exactitude 

Technique HYDRAGEL 4 IF Violet acide 

Soixante treize (73) échantillons différents de sérums pathologiques, onze (11) sérums normaux et douze (12) urines concentrées, ont été testés en 

parallèle sur gels HYDRAGEL IF 2/4 et sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce. 

Technique HYDRAGEL 4 IF Amidoschwarz 

Vingt huit (28) échantillons différents de sérums pathologiques et quatre (4) sérums normaux ont été testés en parallèle sur gels HYDRAGEL IF 2/4 et 

sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce. 

Technique HYDRAGEL 9 IF Violet acide 

Quatre vingt quinze (95) échantillons différents de sérums pathologiques, quatre (4) sérums normaux et douze (12) urines concentrées, ont été testés 

en parallèle sur gels HYDRAGEL 9 IF et sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce. 

Pour les trois techniques, les résultats obtenus montrent une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse et les mêmes bandes sont mises 

en évidence pour tous les échantillons pathologiques analysés, avec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 100 % par rapport à cette dernière 

technique, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986). 

- 10 -


Sensibilité 

Quatre sérums à gammapathie ont été dilués en série et analysés dans la technique HYDRAGEL 4 IF avec coloration au violet acide et à 

l’amidoschwarz. 

Les résultats sont résumés ci-dessous. 

BANDE MONOCLONALE LIMITE DE DÉTECTION (g/l) ÉCHANTILLON N° TYPE CONC. (g/l) HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF VIOLET ACIDE AMIDOSCHWARZ 1 gamma 10,9 0,12 0,12 kappa 0,12 0,12 2 | gamma 7,8 0,12 / l lambda 0,12 / 3 alpha 5,8 0,12 0,25 lambda 0,12 0,25 4 mu 3,4 0,12 0,12 

| | kappa | | 0,12 | 0,12 | 

Selon la position de la bande monoclonale, le fond polyclonal de la zone des gammaglobulines et le colorant utilisé, le seuil de détection d’une 

paraprotéine peut varier de 0,12 à 0,25 g/l. 

BIBLIOGRAPHIE 

Pour des informations complémentaires sur l'interprétation des profils obtenus par immunofixation, voir : 

(1) Le Carrer Didier, "Électrophorèse des Protéines et Immunofixation : Guide d’interprétation", Laboratoires SEBIA, 1994, Hatier - Paris. 

(2) Keren D. F., "High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation", Butterworth-Heinemann, Woburn, Ma, USA, 2nd 

ed., 1994, 397 pp. 

(3) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. Impact- 

Internat, 1986 ; Sept : 93-97. 

- 11 -


INTENDED USE 

The HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF and 9 IF kits are designed for detection of monoclonal proteins in human serum and urine by immunofixation 

electrophoresis. The kits are used in conjunction with the semi-automated HYDRASYS electrophoresis apparatus. The proteins, separated by 

electrophoresis on alkaline buffered agarose gels, are incubated with individual antisera that are specific against gamma (Ig G), alpha (Ig A) and mu 

(Ig M) heavy chains, and kappa (free and bound) and lambda (free and bound) light chains, respectively. After removing the non-reacted proteins, the 

immunoprecipitates are stained either with acid violet or amidoblack. The electrophoregrams are evaluated visually for the presence of specific reactions 

with the suspect monoclonal proteins. 

Each agarose gel is intended to run : 

- one sample in the HYDRAGEL 1 IF kit, 

- two samples in the HYDRAGEL 2 IF kit, 

- four samples in the HYDRAGEL 4 IF kits, 

- nine samples in the HYDRAGEL 9 IF kits. 

To accommodate diverse user preferences, the HYDRAGEL 4 IF kits are available either with acid violet or with amidoblack. 

For In Vitro Diagnostic Use. 

PRINCIPLE OF THE TEST 

Abnormal bands in serum and urine protein electrophoregrams, primarily those in the beta globulin and gamma globulin zones, are always suspect of 

being monoclonal proteins (M-proteins, paraproteins, monoclonal immunoglobulins) and therefore, an indication of monoclonal gammopathies. To 

identify these abnormal bands, the technique of immunofixation is applied. 

Immunofixation electrophoresis is a simple technique that allows a protein to be anchored after electrophoresis, in situ, by forming an insoluble complex 

with its antibody. It is easy to perform in four steps and is easy to interpret: 

1. Separation of proteins by electrophoresis on agarose gel. 

2. Immunofixation (immunoprecipitation) of the electrophoresed proteins - the appropriate electrophoretic migration tracks are overlaid with individual 

antisera. The antisera diffuse into the gel and precipitate the corresponding antigens when present. The proteins in the reference track are fixed with 

a fixative. 

3. The unprecipitated, soluble proteins are removed from the gel by blotting and washing. Precipitin of the antigen-antibody complex is trapped within 

the gel matrix. 

4. The precipitated proteins are visualized by staining. 

To detect and identify the suspected monoclonal component, the sample is simultaneously electrophoresed in six tracks. After the electrophoresis, one 

track serves as a reference providing a complete electrophoretic pattern of the sample’s proteins. The remaining five tracks allow characterization of the 

monoclonal component from its reaction, or lack of, with antisera against gamma (Ig G), alpha (Ig A) and mu (Ig M) heavy chains, and against free and 

bound kappa and lambda light chains. The immunofixed bands are then compared with the suspect bands in the reference pattern - the corresponding 

band should have the same migration position. 

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF AND 

HYDRAGEL 9 IF KITS 

HYDRAGEL 1 IF KIT PN 4301 HYDRAGEL 2 IF KIT PN 4302 HYDRAGEL 4 IF KITS PN 4304 PN 4308 PN 4381* HYDRAGEL 9 IF KITS PN 4309 PN 4382** Agarose Gels (ready to use) 10 gels 10 gels 10 gels 80 gels Buffered Strips (ready to use) 10 packs, 2 each 10 packs, 2 each 10 packs, 2 each 80 packs, 2 each Staining solution diluent (stock solution) 1 vial, 60 mL Amidoblack Stain (stock solution) 1 vial, 20 mL Acid Violet Stain (stock solution) 1 vial, 75 mL 1 vial, 75 mL 8 vials, 75 mL each Diluent (ready to use) 1 vial, 3.2 mL 1 vial, 32 mL 1 vial, 32 mL 2 vials, 80 mL each 3 vials, 80 mL each Fixative Solution (ready to use) 1 vial, 2.9 mL Mammalian immunoglobulins anti-human 1 vial, 2.0 mL gamma heavy chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human 1 vial, 2.0 mL alpha heavy chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human 1 vial, 2.0 mL mu heavy chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human kappa 1 vial, 2.0 mL (free and bound) light chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human lambda 1 vial, 2.0 mL (free and bound) light chains (ready to use) Applicators (ready to use) 1 pack of 10 2 packs of 10 each 2 packs of 10 each 16 packs of 10 each 3 packs of 10 each 24 packs of 10 each Antisera segments (ready to use) 1 pack of 10 1 pack of 10 1 pack of 10 8 packs of 10 each Filter Papers - Thin 1 pack of 10 1 pack of 10 1 pack of 10 8 packs of 10 each 

| Filter Papers - Thick | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 8 packs of 10 each | 


NOTE : The fixative solution and the antisera are supplied separately from the kits except for MAXI-KITS (See REAGENTS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED). 

FOR OPTIMAL RESULTS. 

All reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions. 

PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY. 

- 12 - 

SEBIA INSTRUCTIONS - English


1. AGAROSE GELS 

Preparation 

Agarose gels are ready to use. Each gel contains: agarose, 0.8 g/dL ; tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.1 ; additives, nonhazardous at concentrations used, 

necessary for optimum performance. 

WARNING: Agarose gels contain 0.31 % barbital and 0.34 % sodium barbital. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! 

Use 

Support medium for protein electrophoresis and immunofixation. 

Storage, stability and signs of deterioration 

Store the gels horizontally in the original protective packaging at room temperature (15 to 30 °C) or refrigerated (2 to 8 °C). They are stable until the 

expiration date indicated on the kit package and the gel package labels. (The arrow on the front of the kit box must be pointing upwards). 

Avoid storage close to a window or to a heat source. Avoid important variation of temperature during storage. 

DO NOT FREEZE. 

Discard when: 

(i) crystals or precipitate form on the gel surface or the gel texture becomes very soft (all these result from freezing the gel), 

(ii) bacterial or mold growth is indicated, 

(iii) abnormal liquid quantity is present in the gel box (as a result of buffer exudation from the gel due to improper storage conditions). 

2. BUFFERED STRIPS 

Preparation 

Buffered sponge strips are ready to use. Each contains: tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.3 ; sodium azide ; additives, nonhazardous at concentrations used, 

necessary for optimum performance. 

WARNING: The buffer in the strips contains 0.92 % barbital, 1.03 % sodium barbital and 0.30 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested 

consult physician immediately ! When disposing, prevent contact with acids, lead or copper, as these are known to form explosive or toxic 

compounds with sodium azide. 

Use 

Buffered strips function as electrophoresis buffer reservoir and ensure contact between the gel and electrodes. 


Store the buffered strips horizontally in the original protective packaging at room temperature or refrigerated. (The arrow on the front of the kit box must 

be pointing upwards). 

They are stable until the expiration date indicated on the kit package or buffered strips package label. 

DO NOT FREEZE. 

Discard buffered strips if the package is opened and the strips dry out. 

3. STAINING SOLUTION DILUENT (with PN 4308) 

Preparation 

The stock staining solution diluent must be used as described in paragraph " AMIDOBLACK STAIN ". 

It contains an acidic solution. 

Use 

For the preparation of the amidoblack staining solution. 


Store the stock staining solution diluent at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining 

solution diluent vial labels. DO NOT FREEZE. 

Do not add any sodium azide. 

4. AMIDOBLACK STAIN (with PN 4308) 

Preparation 

The amidoblack concentrated stain is a visquous solution which may gelify. The integrity of the stock staining solution is not altered by the increase in 

viscosity or solidification. 

In all cases, to obtain a perfect reconstitution of the stain, we advise you to respect the following procedure: 

1. Add 15 mL of stain diluent to the concentrated amidoblack vial. 

2. Close carefully the vial. 

3. Shake very vigorously the vial during approximately 5 seconds. 

4. Pour this solution in the container for staining solution processing. 

5. Repeat this step twice, three times if necessary. 

6. Pour the remaining diluent in the container and complete the volume to 300 mL with distilled or deionized water. 

7. Mix contents of stain cubitainer well for 5 to 10 minutes. 

The staining solution is ready to use. 

NOTE : An incomplete reconstitution of the stain will lead to an under-evaluation of albumin fraction (low percentage or white hole inside the fraction). 

After dilution, the working staining solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; amidoblack, 0.4 g/dL ; ethylene-glycol, 6.7 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels with electrophoretic protein separations. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working staining solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock staining solution 

is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining vial labels. 

Working staining solution is stable for 1 month. 

Do not store the working staining solution close to a heat source. 

- 13 -


5. ACID VIOLET STAIN (with PN 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 and 4382) 

Preparation 

Vial of the stock acid violet stain solution to be diluted up to 300 mL with distilled or deionized water. 

After dilution, the working stain solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; acid violet, 0.2 g/dL ; ethylene-glycol, 3.25 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels after protein electrophoresis and immunofixation. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working stain solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock stain solution is 

stable until the expiration date indicated on the kit package or stain vial labels. Working stain solution is stable for 6 months. 

6. DILUENT 

Preparation 

Diluent is ready to use. It contains: alkaline buffer pH 7.5 ± 0.3 ; bromophenol blue ; additives, nonhazardous at concentrations used, necessary for 

optimum performance. 

Use 

For sample dilution. The bromophenol blue serves as a convenient application and migration marker. 


Store the diluent at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or diluent vial labels. 

Diluent must be free of precipitate. 

7. ANTISERA AND FIXATIVE PACK (with PN 4381 and 4382) 

7.1. ANTISERA 

Preparation 

Ready to use. All antisera are mammalian, anti-human total immunoglobulins. For easy identification of antisera and as an aid in monitoring their 

application, the antisera are colored with distinct nonhazardous dyes that match the color of the vial label. When antiserum exhibits a slight turbidity, 

leave the antiserum vial at room temperature for a minimum of 10 minutes. This should be sufficient to clear the solution ; however, if turbidity remains, 

this should not affect in any way the immunological reaction. In case of insoluble precipitates, it is recommended to centrifuge antisera for 5 minutes at 

3000 rpm. 

Use 

For immunofixation of the electrophoresed proteins. 

Antisera may originate from different animal species. Don’t mix two different antisera vials, even with the same specificity, and ALWAYS change the tip 

of the pipette when changing antiserum vials. 

IMPORTANT: In order to avoid any contamination between reagents, be careful to replace the cap on each corresponding vial after each use. 


Store the antisera refrigerated (2 to 8 °C). They are stable until the expiration date indicated on the kit package or antisera vial labels. 

NOTE: During transportation, the antisera can be kept without refrigeration (15 to 30 °C) for 15 days without any adverse effects on performance. 

7.2. FIXATIVE SOLUTION 

Preparation 

Fixative solution is ready to use. It contains: acidic solution ; additives, nonhazardous at concentrations used, necessary for optimum performance. For 

an easy identification and as an aid in monitoring its application, the fixative is colored with a nonhazardous dye. 

Use 

To fix electrophoretically separated proteins in the reference track (ELP). 

IMPORTANT: In order to avoid any contamination between reagents, be careful to replace the cap on each corresponding vial after each use. 


Store fixative solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or fixative solution vial labels. 

Fixative solution must be free of precipitate. 

8. APPLICATORS 

Use 

Precut, single use applicators for sample application. 

Storage 

Store the applicators in a dry place at room temperature or refrigerated. 

9. ANTISERA SEGMENTS 

Use 

Single use, colored segments for fixative solution and antisera application onto the gel for immunofixation. 

WARNING : Segments with antisera have to be handled with care. 

10. FILTER PAPERS - THIN 

Use 

Single use, thin absorbent paper pads for blotting excessive moisture off the gel surface before sample application. 

Storage 

Store the thin filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

11. FILTER PAPERS - THICK 

Use 

Single use, thick absorbent paper pads for blotting unprecipitated proteins off the gel after immunofixation step. 

Storage 

Store the thick filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

- 14 -


REAGENTS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. ANTISERA AND FIXATIVE SOLUTION PACK (for 4301, 4302, 4304, 4308 and 4309 kits) 

The antisera and fixative solution pack, SEBIA, PN 4315, contains 5 antisera vials and 1 fixative solution vial, 1 mL each. They are specific for the 

immunofixation procedure with the dynamic mask. 

1.1. ANTISERA 

See previous paragraph 7.1. 

1.2. FIXATIVE SOLUTION 

See previous paragraph 7.2. 

2. DESTAINING SOLUTION 

Preparation 

Each vial of stock Destaining Solution (SEBIA, PN 4540, 10 vials 100 mL each) to be diluted up to 100 liters with distilled or deionized water. It is 

convenient to dilute only 5 mL of the stock solution to 5 liters, the volume of the destaining solution container. After dilution, the working destaining 

solution contains: citric acid, 0.05 g/dL. 

Use 

For destaining, that is removal of excess and background stain from the gels. 

For rinsing of the staining compartment after wash step. 

To neutralize the acidity of the destaining solution, pour 15 mL of a 50 % solution of sodium hydroxide into the empty waste container. 


Store the stock destaining solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or destaining 

solution vial labels. Working destaining solution is stable for one week at room temperature in a closed bottle. Do not add any sodium azide. 

Discard working destaining solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

To prevent microbial proliferation in the diluted destaining solution to be stored more than one week, add 5 µL/dL of ProClin 300. 

Working destaining solution added with ProClin is stable in a closed bottle at room temperature or refrigerated until the expiration date indicated on the 

kit package or destaining solution vial labels. 

3. HYDRASYS WASH SOLUTION 

Preparation 

Each vial of the stock HYDRASYS Wash Solution (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 mL each) to be diluted up to 5 liters with distilled or deionized water. 

After dilution, the working wash solution contains: alkaline buffer pH 8.8 ± 0.3 ; sodium azide. 

WARNING: The stock wash solution contains 0.625 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Sodium 

azide may lead to formation of explosive or toxic compounds when in contact with acids, lead or copper. Always flush with a large quantity 

of water when disposing. 

Use 

The HYDRASYS wash solution is designed to wash unprecipitated proteins from gels. It also serves for cleaning of the HYDRASYS staining 

compartment. Use periodically, e.g., if the instrument is used daily, wash the staining compartment weekly. 

See the package insert for directions to use. 


Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. They are stable until the expiration date indicated 

on the wash solution vial label. 

Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

4. FLUIDIL 

Preparation 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 vial, 5 mL) is ready to use. 

Use 

To dilute viscous or turbid samples, e.g., sera containing cryoglobulin or cryogel. 


Store at room temperature. It is stable until the expiration date indicated on the Fluidil vial label. 

Fluidil must be free of precipitate. 

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 or PN 1211. 

2. Micropipettor, either manual or automated, such as HYDRAplus SEBIA, PN 1215, for an alternative way of loading the sample applicators or antisera 

segments. 

3. Wet Storage Chamber, PN 1270, supplied with HYDRASYS. 

4. Container Kit supplied with HYDRASYS. 

5. Template guide Bar SEBIA supplied with HYDRASYS. 

6. Dynamic mask, SEBIA, PN 1255. 

7. Pipettes: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL and 200 µL. 

SAMPLES FOR ANALYSIS 

Sample collection and storage 

Fresh samples are recommended for analysis. Serum and urine must be collected according to established procedures used in clinical laboratory 

testing. Refrigerate samples (2 to 8 °C) as soon as possible after collection for up to one week. For longer storage periods, keep samples frozen (stable 

at least one month). 

Frozen serum samples with sodium azide, 0,02 g/dL, or frozen urine samples with HEPES 0.1 M (pH 6.75) and/or sodium azide, 0,02 g/dL, are stable 

for at least 3 months. 

IMPORTANT: Avoid boric acid and other acids as preservatives for urine. 

Thawed samples may give slight application marks due to protein or lipoprotein denaturation. 

- 15 -


Sample preparation 

1. Sera 

Prepare 1 sample for HYDRAGEL 1 IF, 2 or 4 samples for HYDRAGEL IF 2/4 according to the kit, and 9 samples for HYDRAGEL 9 IF. 

Dilute sera prior to application to prevent prozononing at high level of antigen and mix well. 

| TRACK | SERUM (µL) | DILUENT (µL) | 

| Ig G Immunofixation track | 20 | 100 | 

| ELP reference track and all other immunofixation tracks | 30 | 60 | 

Special cases 

• If total immunoglobulin level is > 2 g/dL (hypergammaglobulinemia), it is recommended to use higher dilutions of the samples (except ELP track) 

to obtain normal immunoglobulins concentration. 

• If total immunoglobulin level is < 0.5 g/dL (hypogammaglobulinemia), it is recommended to use lower dilutions of the samples. 

• The patient’s serum or urine sample may also be tested for Bence Jones proteins ; then, it is recommended to use the " BENCE JONES " 

migration program. 

The sample should be tested with the IF kit and with anti-kappa free light chains (SEBIA, PN 4370) and anti-lambda free light chains (SEBIA, 

PN 4371) or with a HYDRAGEL 1, 2, 4 or 9 BENCE JONES kit (SEBIA, PN 4321, 4322, 4324 or 4329). 

In this case, dilute the serum in saline or in diluent for immunofixation previously diluted 1/4 (1 part diluent, 3 parts distilled or deionized water) 

1/10 for ELP, GAM, K and L tracks (1 part serum, 9 parts diluted diluent or saline) and 1/3 (1 part serum, 2 parts diluted diluent or saline) for Kf 

and Lf tracks. 

If total immunoglobulin level is < 0.5 g/dL, it is recommended to dilute less the serum sample ; for example, 1/5 for ELP, GAM, K and L tracks, 

and 1/2 for Kf and Lf tracks. 

• After refrigeration or freezing, some sera (particularly those containing cryoglobulin or cryogel) may become viscous or develop turbidity. Such 

sera might present application problems due to hindered diffusion through the sample applicator teeth. In such case, add 25 µL Fluidil to 75 µL 

serum and vortex for 15 seconds. Then follow the standard procedure. 

• Some monoclonal proteins can polymerize resulting in a "monoclonal fraction" appearing on all immunofixed tracks. In this case (i) prepare 1 % 

beta-mercaptoethanol (BME, or 2-mercaptoethanol, 2 ME) in Fluidil, (ii) add 25 µL of this reducing solution to 75 µL neat serum, (iii) vortex and 

wait at least 15 minutes minimum (maximum 30 minutes) and then follow the standard procedure. 

• For Ig D and/or Ig E analysis, apply the same dilutions as for kappa and lambda free and bound light chains. 

2. Concentrated urines 

Most urine samples must be concentrated. Apply concentrated urine in all tracks. Concentrate urine (with an appropriate device) to a total protein 

concentration of ≥ 0.5 g/dL or total Ig of approximately 0.1 g/dL. If the urine protein or Ig concentrations are not known, concentrate 20x - 100x. 

IMPORTANT: Some urines have a high salt content. This can cause a gel deformation during migration and consequently, distortion of the 

migration profiles. If such a distortion makes interpretation inaccurate, the urine should be dialyzed to remove the salts. 

Diffusion of urine samples into the applicator tips may be hindered when the urine (neat or concentrated) is turbid. It is recommended to remove 

the particulates by centrifugation (e.g., 10 minutes at 3,000 rpm) or filtration (e.g., 0.45 µm syringe filter). 

Sensitivity in urine testing may be increased by increasing the sample application and antisera incubation time using the "BENCE JONES" 

migration program. Then, the detection limit corresponds to 1 - 5 mg/dL of monoclonal protein. Depending on protein, urine may be run 

unconcentrated or concentrated up to 25 x. 

NOTE: Attempts to increase the test sensitivity by concentrating to a higher degree or indiscriminate concentration of urine samples to a high 

degree must be considered with caution. The use of overly concentrated urine samples often results in formation of false bands. Such samples 

may have to be re-run at lower concentrations. 

Special case 

The light chains in urine tend to polymerize and form aggregates. If this compromises the interpretation of the results, the light chain polymers 

should be de-polymerized: (i) mix 1 volume of BME with 9 volumes of water (e.g., 5 µL BME and 45 µL water), (ii) add 5 µL of the diluted BME to 

100 µL urine, mix well, and apply without any further sample dilution. Proceed with standard immunofixation or "BENCE JONES" programs. 

Samples to avoid 

• Avoid plasma samples. Fibrinogen gives a band in the reference track, close to the application point in the ß zone that might be taken for a monoclonal 

protein. 

• Avoid hemolyzed samples. 

• Avoid aged, improperly stored urine samples where enzymatic degradation of the proteins might occur. 

PROCEDURE 

The HYDRASYS system is a semi-automated multi-parameter instrument. The automated steps include processing of HYDRAGEL agarose gels in the 

following sequence: sample application, electrophoretic migration, incubation with fixative solution and antisera, drying, staining, destaining and final 

drying. The manual steps include handling samples and gels, application of fixative and antisera and setting up the instrument for operation. 

READ CAREFULLY HYDRASYS INSTRUCTION MANUAL. 

I. MIGRATION SET UP 

1. Switch on HYDRASYS instrument. 

2. Place one applicator for HYDRAGEL 1 IF or HYDRAGEL IF 2/4 (2 samples), two applicators for HYDRAGEL IF 2/4 (4 samples) or three 

applicators for HYDRAGEL 9 IF, on a flat surface with the well numbers in the right-side-up position (Fig. 1). 

- Apply 10 µL of properly diluted serum or concentrated urine into the applicator wells as follows. Load each applicator within 2 minutes. 

- 16 -


| MIGRATION / IMMUNOFIXATION TRACK | 

WELLS NO : ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 SAMPLE N° 1 OR 3 2 3 4 5 6 7 SAMPLE N° 2 OR 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF SAMPLE N° 1, 4 OR 7 1 2 3 4 5 6 SAMPLE N° 2, 5 OR 8 7 8 9 10 11 12 

| SAMPLE N° 3, 6 OR 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANT: For HYDRAGEL IF 2/4, the wells no. 1, 8 and 15 are not used in this test ; they may be marked with a felt tip pen to avoid filling 

them with sample by mistake. 

- Place each applicator into the wet storage chamber with the teeth up [handle it by the plastic tooth protection frame]. 

See wet chamber package insert for further details. 

- Let the samples diffuse into the teeth for 5 minutes after the last sample application. For later use (up to 8 hours), keep the entire chamber 

under refrigeration. 

3. Open the lid of the migration module and raise the electrode and applicator carriers. 

WARNING: Never close the lid while the carriers are raised ! 

4. Select "1 IF SM/DM" migration program for HYDRAGEL 1 IF, “2/4 IF SM/DM” for HYDRAGEL IF 2/4 or “9 IF DM” for HYDRAGEL 9 IF, from 

the instrument menu (left side of the keyboard). 

5. Remove buffered strips from the package ; handle them by the plastic ends. Engage the punched ends of the strip's plastic backing to the pins 

on the electrode carrier ; the strip's plastic backing must face the carrier (Fig. 2). 

6. Unpack the HYDRAGEL plate. 

- Roll quickly and uniformly one thin filter paper onto the gel surface to absorb the excess of liquid. Remove the paper immediately. 

WARNING: Do not leave the filter paper for a too long contact with the gel to avoid its dehydration. 

- Pool 120 µL distilled or deionized water for HYDRAGEL 1 IF or 200 µL for HYDRAGEL IF 2/4 and HYDRAGEL 9 IF, on the lower third of 

the frame printed on the temperature control plate of the migration module. 

- Place the gel plate (the gel side up) with its edge against the stop at the bottom of the printed frame (Fig. 3). 

- Bend the gel and ease it down onto the water pool. Ensure that no air bubbles are trapped, water is spread underneath the entire gel plate 

and the gel is lined up with the printed frame (Fig. 3). 

7. Lower both carriers down. In this position the buffered strips do not touch the gel. DO NOT FORCE THE CARRIERS ALL THE WAY DOWN. 

8. Remove each applicator from the wet chamber. Handle it by the protection frame. 

- Snap off the applicator teeth's protection frame. 

- Place the applicator(s) on the carrier : 

- With HYDRAGEL 1 IF or HYDRAGEL IF 2/4 (2 samples), into position No 6, 

- With HYDRAGEL IF 2/4 (4 samples), into position No 3 and 9, 

- With HYDRAGEL 9 IF, into position No 2, 6 and 10. 

IMPORTANT: The numbers printed on the applicator must face the operator (Fig. 4). 

To improve reproducibility of sample application, always position the applicators on the left side of the carrier. 

9. Close the lid of the migration module. 

10. Start the procedure immediately by pressing the green arrow "START" key on the left side of the keyboard. 

IMPORTANT: Make sure that the ventilation air inlet on the right side of the instrument is not blocked. 

MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The two carriers are lowered so that buffered strips and applicator(s) contact the gel surface. 

• Sample applicator carrier rises up. 

• Migration is carried out under 10 W constant for HYDRAGEL 1 IF and under 20 W constant for HYDRAGEL IF 2/4, until 42 Vh accumulated (for 

about 9 minutes) and under 20 W constant until 36 Vh accumulated (for about 7 minutes) for HYDRAGEL 9 IF, at 20 °C controlled by Peltier effect. 

• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• An audible beep signals that the migration module lid unlocks. The following message is displayed on the screen: " AS". 

NOTE: The migration module lid remains locked during all migration steps. 

II. IMMUNOFIXATION SET UP 

The dynamic mask contains a colored reference guide for reagent application, an antisera segment, a segment holder, a dynamic mask guide and a 

length-reducing device (Fig. 5). 

During the migration, assemble the dynamic mask as follows : 

1. Place the dynamic mask guide on a flat surface. 

IMPORTANT : For one and two samples analysis, it is necessary to position a length-reducing device on the dynamic mask guide. 

2. Set up an antisera segment on the segment holder (Fig. 6) : 

- Tilt the antisera segment at a 45° angle and position it against the plastic springs of the segment holder. 

- Pull apart the two elements and pivot the segment to fix it into the notches of the segment holder. 

WARNING : Be sure the segment is correctly positioned on the holder : the pins at ends of the segment must be blocked into the 

notches of the holder. 

3. Set up the holder with the segment on the dynamic mask guide (Fig. 7). Then, put the colored reference guide for reagent application, 

corresponding to the assay being run, on the segment holder in front of the segment wells (Fig. 8). 

- 17 -

4. Apply reagents as follows: 

- 6 wells antisera segment for HYDRAGEL 1 IF : 8 µL per well, 

- 15 wells antisera segment for HYDRAGEL IF 2/4 : 8 µL per well for 2 samples analysis, 

12 µL per well for 4 samples analysis, 

- 18 wells antisera segment for HYDRAGEL 9 IF : 8 µL per well. 

TROUGH REAGENT COLOR ELP fixative solution yellow G anti-gamma heavy chain antiserum pink A anti-alpha heavy chain antiserum dark blue M anti-mu heavy chain antiserum yellow green K anti-kappa light chain (free & bound) antiserum light green 

| L | anti-lambda light chain (free & bound) antiserum | light blue | 


NOTE: Reagents are colored and the colors are shown on the colored reference guide to facilitate correct antisera pipetting. 

IMPORTANT : For HYDRAGEL IF 2/4, do not use wells of antisera segment in position 1, 8 and 15. 

- Aspirate reagents avoiding any air bubbles in the pipette tip. 

- Apply the reagents (Fig. 9) : 

- Hold pipette at an angle and rest its tip lightly at the side of the well. 

- Inject the drop of reagent into the well without touching the bottom of the well. 

5. Remove the colored reference guide. 

III. IMMUNOFIXATION 

1. Open the migration module lid. 

2. Remove the sample applicator(s) and discard. 

3. Raise both carriers, remove the buffered strips by their plastic ends and discard. 

- Remove both carriers. 

- Wipe electrodes with soft wet tissue. 

- Leave the gel in place in the migration module. 

4. Set up the dynamic mask for reagent application as follows (Fig. 10): 

- Position the mask guide on the anchoring clip (the guide may stay in the migration module all the time). 

- Hold the dynamic mask by the tab and position it into the guide with the notches aligned with the marks. 

- Lower the dynamic mask onto the plate of HYDRASYS. 

IMPORTANT : Adjust the dynamic mask position for perfect alignment between electrophoretic profiles and wells of the mask. 

5. Place the segment holder at the lowest point on the mask guide, facing the operator. 

Hold the segment holder by the handle situated on its right and press on the central pressure point such that the antisera segment contacts 

the gel. Release the pressure; then, reagents will spread under each track (Fig. 11). 

6. Immediately, using the segment holder handle, move the segment slowly but steadily up and down the entire length of the gel to apply the 

reagents. Application should take approximately 5 seconds (Fig. 12). 

WARNING : During this step, hold the mask only by the segment holder handle. Avoid touching the guide. Don’t re-press on the 

pressure point as this may result in cross contamination of reagents. 

7. Remove the guide and the dynamic mask. 

- Remove the segment holder using its handle. 

- Remove the antisera segment from the holder and discard. 

WARNING : Segments with antisera have to be handled with care. 

- Residual reagent may remain in the wells after application. This should have no effect on test results. 


9. Start the procedure immediately by pressing the green arrow "START" key on the left side of the keyboard. 

A message "[INCUBATION]" appears on the screen. 

IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Incubation at 20 °C for 5 minutes (controlled by Peltier effect). 

• An audible beep signals that the migration module lid unlocks. 

The following message is displayed on the screen: " PAP.". 

NOTE: The migration module lid remains locked during incubation. 

IV. BLOTTING OF THE GEL 


2. Apply a thick filter paper on the gel: 

line up the filter paper edge with the gel edge (incline it at a 45° angle) and ease it down onto the gel. 

IMPORTANT: Press firmly on the whole surface of the filter paper to ensure perfect adherence on the gel. 


4. Start the procedure by pressing the "START" key (green arrow on the left side of the keyboard). 

BLOTTING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Blotting at 40 °C controlled by Peltier effect, for 3 minutes. 

The following message is displayed on the screen: "[BLOTTING]". 

• An audible signal (beep) rings. 

The following message is displayed on the screen: "❊ PAP.". 

V. DRYING OF THE GEL 


2 Remove the filter paper and leave the gel in place. 

3. Close the lid. 

4. Start the procedure by pressing the "START" key (green arrow on the left side of the keyboard). 

- 18 -


DRYING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Drying at 50 °C controlled by Peltier effect, for 6 minutes. 

• A beep signals that the cover unlocks. The plate temperature remains at 50 °C until the lid is opened. “Migration temp maintained” is displayed on 

the screen. 

NOTE: The migration module lid remains locked during the drying step. 

VI. GEL PROCESSING SET UP 

1. Open the lid. 

2. Remove the dried gel for further processing. 

3. Open the gel holder. Lay it flat and position the dried gel (with gel side facing up) into the grooves of the two rods and close the holder. Make 

sure that the film is correctly positioned inside the holder (Fig. 13). 

4. Place the gel holder into the Gel Processing / Staining Module. 

IMPORTANT: Before starting the gel processing / staining program, check the following: 

- the wash solution container contains at least 400 mL of wash solution ; 

- the staining container is filled with 300 mL of staining solution ; 

- the destaining container contains at least 1 liter of destaining solution ; 

- the waste container is empty. 

For reagent line connection: refer to the information displayed on the screen of the instrument (select key: REAGENT LINES). 

IMPORTANT: Do not forget to block up the unused lines. 

5. Select "IF ACID VIOLET" or "IF AMIDO" staining program from the instrument menu and start the run by pressing the "START" key (green 

arrow on the right side of the keyboard). 

During staining, destaining and drying steps, the compartment remains locked. 

After cooling step, an audible beep signals that the compartment unlocks (the ventilation is maintained until the gel holder is removed). 

NOTES: 

- Temperature of the migration plate keeps decreasing since the lid has been opened until it reaches 20 °C (in less than 5 minutes). Then a new 

migration run may start. 

- Return the sample applicator and electrode carriers back in place. 

- Wipe the temperature control plate with a soft wet tissue. 

VII.GEL PROCESSING COMPLETION 

1. Remove the gel holder from the compartment, open it and remove the dried gel. 

2. If needed, clean the back side (the plastic support side) of the dry film with a damp soft paper. 

NOTE : The lengths of electrophoretic migrations may be slightly different with gels containing 2 or 3 analysis rows, without any adverse effects 

on performance. 

RESULTS 

Interpretation 

1. Serum 

Absence of monoclonal component 

• A normal serum sample shows a light diffused staining of polyclonal immunoglobulins in all tracks. 

• A hypergammaglobulinemia is characterized by a heavily stained, diffused gamma zone and absence of any restricted bands. 

Presence of a monoclonal component 

• The presence of a monoclonal protein (gammopathy) is characterized by a monoclonal band detected with one of the anti-heavy chain antisera 

(gamma, alpha or mu) and either with anti-kappa or anti-lambda light chain antiserum. The detected monoclonal band, typically sharp and 

demarcated in appearance, must be located at the same migration distance as the suspect monoclonal band seen in the reference track (ELP). 

• Absence of reaction with any of the applied anti-heavy chain antisera and reaction with one of the light chain antisera might indicate : 

a) a very rare Ig D or Ig E gammopathy: confirm with anti-delta or anti-epsilon heavy chain antisera, 

b) a light chain gammopathy: confirm with antisera anti-kappa or anti-lambda free light chains. 

• Failure to observe a positive reaction with any of the applied anti-light chain antisera, while an anti-heavy chain antiserum reacts, might indicate 

a very rare heavy chain gammopathy (gamma, alpha or mu). 

Presence of two or more monoclonal components 

In rare cases, several clones of B-cells proliferate as indicated by several monoclonal bands revealed by immunofixation: 

• A biclonal gammopathy is characterized by the presence of two bands of heavy chain (identical or different) and two bands of light chains 

(identical or different). 

• Polymerized immunoglobulins are characterized by several (usually two) bands of the same type of heavy chain and one of the same type of 

the light chain. 

To confirm the presence of a single monoclonal abnormality, it is necessary to depolymerize with beta-mercaptoethanol (BME or 2ME) and 

repeat immunofixation (see "Samples for analysis"). 

• An oligoclonal gammopathy is characterized by the presence of multiple, usually weak bands of one or more types of heavy chains and by one 

or two types of light chains. 

Special cases 

• When a monoclonal type band is observed on serum electrophoresis (ELP track) but fails to be confirmed by immunofixation, fibrinogen 

(plasma sample) should be the prime suspect. 

• When a monoclonal type band is observed on all immunofixation tracks, cryoglobulin or polymerized Ig M should be suspected. Depolymerize 

with a reducing agent and repeat the procedure (see "Samples for analysis"). 

- 19 -


2. Urine 

Interpretation concepts similar to those shown for serum apply to urine immunofixation patterns. 

• An intact monoclonal protein in urine is characterized by a monoclonal band detected with one of the anti-heavy chain antisera (gamma, alpha 

or mu) and with either anti-kappa or anti-lambda light chain (free & bound) antiserum. The detected monoclonal band, typically sharp and 

demarcated in appearance, must be located at the same migration distance as the suspect monoclonal band seen in the reference track (ELP). 

• A monoclonal free light chain, Bence Jones protein (a tubular protein), is characterized by a monoclonal band detected with either anti-kappa 

or anti-lambda light chain (free & bound) antiserum. No positive reaction would be seen in any of the anti-heavy chain antisera (gamma, alpha 

or mu) tracks. 

Interference and Limitations 

See SAMPLES FOR ANALYSIS. 

The use of antisera other than those specific for the immunofixation procedure with the dynamic mask may affect the results. 

Due to the resolution and sensitivity limits of zone electrophoresis, it is possible that some monoclonal components may not be detected with this method. 

Troubleshooting 

Call Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instruction for the preparation and storage of materials, and for the 

procedure were carefully followed. 

Kit reagent Safety Data Sheets and information on waste product elimination are also available from the Technical Service of the supplier. 

PERFORMANCE DATA 

Reproducibility within gel and specificity 

HYDRAGEL 4 IF procedure 

Reproducibility within gel was demonstrated on three different pathological samples : two samples with one high level monoclonal component and one 

sample with two low levels monoclonal components. Each sample was run 4 times on 2 lots of HYDRAGEL IF 2/4 gels using the acid violet staining 

procedure. 


Reproducibility within gel was demonstrated on three different pathological samples each with one high level monoclonal component. Each sample was 

run 9 times on 2 lots of HYDRAGEL 9 IF gels using the acid violet staining procedure. 

All repeats gave identical results within lot and lot-to-lot and as expected for the type of samples tested. 

Reproducibility between gels and specificity 


Reproducibility between gels was demonstrated on four different pathological samples with one or many monoclonal components. 

These samples were run on 10 HYDRAGEL IF 2/4 gels from 3 different lots, using the acid violet staining procedure. 


Reproducibility between gels was demonstrated on nine different pathological samples : two samples with one high level monoclonal component, one 

sample with two low levels monoclonal components, and one sample with one high and one low level monoclonal component. 

These samples were run on 10 HYDRAGEL 9 IF gels from 3 different lots, using the acid violet staining procedure. 

All repeats gave identical results gel to gel and as expected for the type of samples tested. 

Accuracy 

HYDRAGEL 4 IF procedure with acid violet staining 

Seventy three (73) different pathological serum samples, eleven (11) normal sera and twelve (12) concentrated urines were run using the HYDRAGEL 

IF 2/4 gels and another commercially available agarose gel immunofixation system. 

HYDRAGEL 4 IF procedure with amidoblack staining 

Twenty eight (28) different pathological serum samples and four (4) normal sera were run using the HYDRAGEL IF 2/4 gels and another commercially 

available agarose gel immunofixation system. 

HYDRAGEL 9 IF procedure with acid violet staining 

Ninety five (95) different pathological serum samples, four (4) normal sera and twelve (12) concentrated urines were run using the HYDRAGEL 9 IF gels 

and another commercially available agarose gel immunofixation system. 

In all cases, the results obtained by the SEBIA tests and the comparable commercially available procedure were identical. 

Sensitivity 

Serial dilutions were prepared with 4 pathological serum samples all exhibiting monoclonal components and analyzed with HYDRAGEL 4 IF procedure. 

The acid violet and the amidoblack staining procedures were both tested. 

- 20 -

The results are summarized below. 


MONOCLONAL COMPONENT DETECTION LIMIT (mg/dL) SAMPLE No TYPE CONC. (g/dL) HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF ACID VIOLET AMIDOBLACK 1 gamma 1.09 12 12 kappa 12 12 2 | gamma 0.78 12 / l lambda 12 / 3 alpha 0.58 12 25 lambda 12 25 4 mu 0.34 12 12 

| | kappa | | 12 | 12 | 

Depending on the migration position of the monoclonal component, the level of polyclonal background in the gamma zone and the staining procedure, 

the detection limit may vary from 12 to 25 mg/dL. 

BIBLIOGRAPHY 

For additional information on interpretation of immunofixation patterns refer to: 

(1) Le Carrer Didier, "Serum Protein Electrophoresis and Immunofixation, Illustrated Interpretations", SEBIA Laboratories, 1994, Hatier - Paris. 

(2) Keren D.F., "High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation", Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

1994, 397 pp. 

- 21 -


ANWENDUNGSBEREICH 

Die HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF und 9 IF Kits dienen zum Nachweis von monoklonalen Proteinen aus humanem Serum und Urin durch Elektrophorese 

mit Immunfixation. Sie wurden für das halbautomatische Elektrophoresegerät HYDRASYS entwickelt, das die Bearbeitung der Gele übernimmt, bis 

diese für die Auswertung vorliegen. Die Serumproteine werden zunächst elektrophoretisch getrennt und dann mit Antiseren unterschiedlicher Spezifität 

(gegen Ig G-, Ig A- und Ig M-Schwerketten sowie gegen die freien und gebundenen Kappa- und Lambda-Leichtketten) inkubiert, so daß es zur 

Ausbildung entsprechender Immunkomplexe kommt. 

Nach Entfernung von nicht komplexierten Proteinen, werden die Immunkomplexe mit Säureviolett oder Amidoschwarz gefärbt. Die 

Elektrophoretogramme werden visuell ausgewertet, indem untersucht wird, ob spezifische Reaktionen mit atypischen monoklonalen Proteinen stattgefunden 

haben. 

Jedes Agarosegel dient zur Abarbeitung von: 

- einer Probe beim HYDRAGEL 1 IF Kit, 

- zwei Proben beim HYDRAGEL 2 IF Kit, 

- vier Proben beim HYDRAGEL 4 IF Kit, 

- neun Proben beim HYDRAGEL 9 IF Kit. 

Zur Anpassung an unterschiedliche Anwenderwünsche, können die Kits entweder mit Säureviolett oder mit Amidoschwarz erhältlich. 

In-vitro-Diagnostikum. 

TESTPRINZIP 

Bei atypischen Banden im elektrophoretischen Muster von Serum oder Urinproben, vor allem in den Betaglobulin- und Gammaglobulinfraktionen, 

besteht immer der Verdacht, daß es sich um monoklonale Proteine (M-Proteine, Paraproteine, monklonale Immunglobuline) und damit um ein 

Anzeichen für monklonale Gammopathien handeln könnte. Zur Identifikation dieser atypischen Banden wird die Methode der Immunfixation angewandt. 

Die Immunfixationselektrophorese ist eine einfache Methode zur Verankerung eines Proteins in situ nach der Elektrophorese, indem es einen 

unlöslichen Komplex mit seinem Antikörper bildet. Das Verfahren teilt sich in vier Schritte: 

1. Trennung der Proteine durch Elektrophorese auf Agarosegel. 

2. Immunpräzipitation der Proteine nach der Elektrophorese: Die Antiseren werden direkt auf die Geloberfläche und damit auf die entsprechenden 

elektro-phoretischen Migrationsspuren aufgebracht. Die Antiseren diffundie-ren in das Gel, wobei die entsprechenden Antigene ausgefällt werden. 

Die Proteine in der Referenzspur werden mit einer Fixierlösung fixiert. 

3. Die ungebundenen, löslichen Proteine werden vom Gel durch Abblotten und Waschen entfernt. Das Präzipitat des Antigen-Antikörperkomplexes ist 

in der Gelmatrix eingeschlossen. 

4. Das Präzipitat und die fixierten Proteine werden durch Färbung sichtbar gemacht. 

Zum Nachweis und zur Identifikation der vermuteten monoklonalen Komponenten erfolgt die gleichzeitige Elektrophorese der Proben in sechs Spuren. 

Nach der Elektrophorese dient eine Spur (ELP), die das vollständige elektrophoretische Muster, aller in der Probe enthaltenen Proteine aufweist, als 

Referenz. Die übrigen fünf Spuren gestatten die Identifikation der monoklonalen Komponente(n) entweder anhand ihrer Reaktion(en) mit den Antiseren 

gegen die Ig G-, Ig A- und Ig M-Schwerketten und gegen die freien und gebundenen Kappa- und Lambda-Leichtketten oder daran, daß diese 

Reaktion(en) ausbleiben. Die immunfixierten Banden werden anschließend mit den atypischen Banden des Referenzmusters verglichen und 

entsprechende Banden sollten die gleiche Migrationsposition besitzen. 

MITGELIEFERTE REAGENZIEN UND MATERIALIEN IN HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF UND 


HYDRAGEL 1 IF KIT BESTELL-NR. 4301 HYDRAGEL 2 IF KIT BESTELL-NR. 4302 HYDRAGEL 4 IF KITS BESTELL-NR. 4304 BESTELL-NR. 4308 BESTELL-NR. 4381* HYDRAGEL 9 IF KITS BESTELL-NR. 4309 BESTELL-NR. 4382** Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele 10 Gele 10 Gele 80 Gele Pufferstreifen (gebrauchsfertig) 10 Pack, jeweils 2 10 Pack, jeweils 2 10 Pack, jeweils 2 80 Pack, jeweils 2 Verdünnungslösung (konzentriert) 1 Fl., 60 ml Amidoschwarz-Färbelösung (konzentriert) 1 Fl., 20 ml Säureviolett-Färbelösung (Stammlösung) 1Fl., 75 ml 1 Fl., 75 ml 8 Fl., jeweils 75 ml Verdünnungsmittel (gebrauchsfertig) 1 Fl., 3,2 ml 1 Fl., 32 ml 1 Fl., 32 ml 2 Fl., jeweils 80 ml 3 Fl., jeweils 80 ml Fixierlösung (gebrauchsfertig) 1 Fl., 2,9 ml Säugetier-Anti-Human-Gamma-Schwerketten- 1 Fl., 2,0 ml Immunglobuline (gebrauchsfertig) Säugetier-Anti-Human-Alpha-Schwerketten- 1 Fl., 2,0 ml Immunglobuline (gebrauchsfertig) Säugetier-Anti-Human-My-Schwerketten- 1 Fl., 2,0 ml Immunglobuline (gebrauchsfertig) Säugetier-Anti-Human-Kappa-Leichtketten- 1 Fl., 2,0 ml (freie und gebundene) Immunglobuline (gebrauchsfertig) Säugetier-Anti-Human-Lambda-Leichtketten- 1 Fl., 2,0 ml (freie und gebundene) Immunglobuline (gebrauchsfertig) Applikatoren (gebrauchsfertig) 1 Pack zu 10 St. 2 Pack zu 10 St. 2 Pack zu 10 St. 16 Pack zu 10 St. 3 Pack zu 10 St. 24 Pack zu 10 St. Antisera Segmente (gebrauchsfertig) 1 Pack zu 10 St. 1 Pack zu 10 St. 1 Pack zu 10 St . 8 Pack zu 10 St. Filterpapier, dünn 1 Pack zu 10 St. 1 Pack zu 10 St. 1 Pack zu 10 St. 8 Pack zu 10 St. 

| Filterpapier, dick | 1 Pack zu 10 St. | 1 Pack zu 10 St. | 1 Pack zu 10 St. | 8 Pack zu 10 St. | 


- 22 - 

SEBIA ARBEITSANLEITUNG - Deutsch


HINWEIS: Die Fixierlösung und die Antiseren werden mit Ausnahme bei den MAXI-KITS getrennt von den Kits geliefert. (Siehe Benötigte aber nicht 

mitgelieferte Reagenzien). 

FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE 

Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden. 

BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN. 

1. AGAROSEGELE 

Vorbereitung 

Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält: Agarose, 8 g/l ; Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 9,1 ± 0,1 ; Additiva zur Optimierung der Leistung, in 

den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Die Agarosegele enthalten 0,31 % Barbital und 0,34 % Natriumbarbital. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen 

Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! 

Gebrauch 

Hilfsmedium für die Proteinelektrophorese und Immunfixation. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall 

Gele waagerecht in der Originalverpackung bei Raumtemperatur (15 bis 30 °C) oder im Kühlschrank (2 bis 8 °C) aufbewahren. Sie bleiben bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf dem Etikett der Kit- oder Gelverpackung angegeben ist. (Der Pfeil auf der Vorderseite der Kit-Schachtel muß nach oben 

zeigen.) Eine Lagerung in der Nähe eines Fensters oder einer Hitzequelle ist zu vermeiden. Starke Temperaturschwankungen sind zu vermeiden. 

NICHT EINFRIEREN. 

Das Gel ist zu verwerfen bei: 

(i) Kristallen oder Niederschlag auf der Geloberfläche oder sehr weicher Gelstruktur (was darauf hindeutet, daß das Gel gefroren war) ; 

(ii) Bakterien- oder Schimmelpilzbildung ; 

(iii) einer ungewöhnlich stark ausgeprägten Flüssigkeitsansammlung in der Gel-Box (was auf einen Austritt von Puffer aus dem Gel aufgrund 

unsachgemäßer Lagerung hindeutet). 

2. PUFFERSTREIFEN 

Vorbereitung 

Die als Streifen vorliegenden Pufferschwämme sind gebrauchsfertig. Jeder Pufferstreifen enthält: Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 9,1 ± 0,3 ; Natriumazid ; 

Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Der im Streifen enthaltene Puffer enthält 0,92 % Barbital, 1,03 % Natriumbarbital und 0,30 % Natriumazid. Nicht einnehmen! 

Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! Darf bei der Entsorgung nicht mit Säuren, Blei oder Kupfer in Kontakt 

kommen, da sich sonst explosive bzw. toxische Natriumazidverbindungen bilden können. 

Gebrauch 

Die Pufferstreifen fungieren als Elektrophoresepufferreservoir und gewährleisten den Kontakt zwischen dem Gel und den Elektroden. 


Bewahren Sie die Pufferstreifen waagerecht liegend in der Original-Schutzverpackung bei Zimmertemperatur oder gekühlt auf. (Der Pfeil auf der 

Verpackungsschachtel muss nach oben zeigen.) Die Pufferstreifen sind bis zum angegebenen Verfallsdatum auf der Schachtel oder auf dem Etikett der 

Streifen stabil. 

NICHT EINFRIEREN! 

Verwerfen Sie die Pufferstreifen, wenn die Verpackung geöffnet ist und die Streifen ausgetrocknet sind. 

3. VERDÜNNUNGSLÖSUNG (mit Art.-Nr. 4308) 

Vorbereitung 

Die Amidoschwarz-Verdünnungslösung ist wie im Abschnitt “Amidoschwarz-Färbelösung” beschrieben zu verwenden. 

Die Lösung enthält Zitronensäure. 

Gebrauch 

Zum Herstellen der Amidoschwarz-Färbelösung. 


Konzentrierte Verdünnungslösung im Kühlschrank oder bei Raumtemperatur aufbewahren. Die Lösung ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem 

Kit oder auf dem Flaschenetikett) haltbar. NICHT EINFRIEREN! 

Geben Sie kein Natriumazid zu. 

4. AMIDOSCHWARZ FÄRBELÖSUNG (mit Art.-Nr. 4308) 

Vorbereitung 

Das Amidoschwarz Färbekonzentrat ist eine hochviskose Flüssigkeit deren Viskosität sich durch Lagerung verändern kann. Die Qualität des 

Färbekonzentrats wird durch höhere Viskosität nicht beeinträchtigt. 

Bitte beachten Sie die folgende Anleitung zum Herstellen der Färbelösung : 

1. 15 ml der Verdünnungslösung zu dem Amidoschwarz Färbekonzentrat geben. 

2. Die Färbekonzentrat Flasche fest verschließen. 

3. Die Flasche für etwa 5 Sekunden kräftig schütteln. 

4. Den Inhalt der Flasche in den Färbecontainer des HYDRASYS überführen. 

5. Schritt 1 – 4 zwei- bis dreimal wiederholen. 

6. Die restliche Verdünnungslösung in den Färbecontainer überführen und mit destilliertem oder deionisiertem Wasser auf 300 ml Gesamtvolumen 

auffüllen. 

7. Den Inhalt des Färbecontainers 5 – 10 Minuten mischen. 

Im Anschluss daran ist die Färbelösung gebrauchsfertig. 

ACHTUNG: Eine unvollständige Lösung des Amidoschwarz Konzentrats kann zu einer Unterbestimmung der Albuminfraktion und/oder zu 

Auslöscheffekten der Albuminfraktion führen. 

Nach der Verdünnung enthält die Färbelösung: Zitronensäurelösung pH ≈ 2 ; 0,4 g/dl Amidoschwarz ; 6,7% Ethylenglycol ; zusätzliche Additive zur 

Optimierung (ungiftig in den verwendeten Konzentrationen). 

WARNUNG: Nicht verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Agarose Gele nach elektrophoretischer Trennung. 

WICHTIG: Die Färbelösung ist für maximal 10 Färbungen konzipiert. Wechseln Sie deshalb die Färbelösung nach 10 Färbungen aus. 

- 23 -



Amidoschwarz- Konzentrat und verdünnte Färbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank verschlossen aufbewahren um Flüssigkeitsverlust 

durch Verdunstung zu vermeiden. Das Amidoschwarz-Konzentrat ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem Kit oder auf dem Flaschenetikett) 

haltbar. 

Verdünnte Färbelösung ist einen Monat haltbar. 

Die gebrauchsfertige Färbelösung nicht neben einer Wärmequelle aufbewahren. 

5. SÄUREVIOLETT-FÄRBELÖUNG (mit Art.-Nr. 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 und 4382) 

Vorbereitung 

Den Inhalt des Fläschchens konzentrierte Säureviolett-Färbelösung mit destilliertem oder entionisiertem Wasser auf 300 ml auffüllen. 

Nach Verdünnung enthält die gebrauchsfertige Färbelösung: saure Lösung pH ≈ 2 ; Säureviolett, 0,2 g/dl ; Äthylenglykol, 3,25 % ; Zusätze, ungefährlich 

bei den eingesetzten Konzentrationen, nötig für die optimale Durchführung. 

WARNUNG: Nicht Verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Gele nach der elektrophoretischen Trennung der Proteine und nach der Immunfixation. 

WICHTIG: Mit der Färbelösung können lediglich zehn Gele angefärbt werden. Tauschen Sie die Lösung nach zehn Färbeschritten aus. 


Zur Vermeidung von Verdunstungsverlusten sowohl konzentrierte als auch verdünnte Färbelösung in verschlossenen Behältern bei Raumtemperatur 

oder im Kühlschrank aufbewahren. Konzentrierte Färbelösung bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit-Verpackung oder auf dem 

Fläschchenetikett der Färbelösung angegeben ist. Verdünnte Färbelösung bleibt 6 Monate stabil. 

6. VERDÜNNUNGSMITTEL 

Vorbereitung 

Verdünnungsmittel ist gebrauchsfertig. Es enthält: alkalischen Puffer, pH-Wert 7,5 ± 0,3 ; Bromphenolblau ; Additiva zur Optimierung der Leistung, in 

den verwendeten Konzentrationen unschädlich. 

Gebrauch 

Zur Probenverdünnung. Bromphenolblau dient zur Vereinfachung der Probenapplikation und als Marker für die Migration. 


Verdünnungsmittel bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Es bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit-Verpackung oder auf 

dem Fläschchenetikett des Verdünnungsmittels angegeben ist. 

Verdünnungsmittel darf kein Präzipitat aufweisen. 

7. ANTISEREN- UND FIXIERLÖSUNGSPACKUNG (mit Art.-Nr. 4381 und 4382) 

7.1. ANTISEREN 

Vorbereitung 

Gebrauchsfertig. Alle Antiseren sind Säugetier-Anti-Human-Gesamtimmunglobine. Damit die Antiseren schnell und sicher angewendet werden können, 

sind sie mit gesundheitlich unbedenklichen Farbstoffen markiert, die den Farben auf den Fläschchenetikett entspricht. Sollte das Antiserum eine leichte 

Trübung aufweisen, sollte es für mindestens 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert werden. Dies sollte für die Klärung der Lösung ausreichen. Eine 

eventuell noch vorhandene leichte Trübung sollte die immunologische Reaktion nicht beeinflussen. Im Falle von unlöslichen Ausfällungen, wird eine 

fünfminütige Zentrifugation bei 3000 UPM empfohlen. 

Gebrauch 

Zur Immunfixation von Proteinen nach der Elektrophorese. 

Die Antiseren können von unterschiedlichen Tierspezies stammen. Nicht den Inhalt von zwei unterschiedlichen Antiserenfläschen mischen, auch nicht 

bei gleicher Spezifität und IMMER eine neue Pipettenspitze benutzen, wenn das Antiserumfläschchen gewechselt wird. 

ACHTUNG: Um eine Kontamination der Reagenzien zu vermeiden, dürfen die Verschlußkappen der Gefäße nicht vertauscht werden. 


Antiseren im Kühlschrank bei (2 - 8 °C) aufbewahren. Sie sind bis Verfalldatum auf der Kit-Verpackung oder auf dem Fläschchenetikett stabil. 

HINWEIS: Während des Transports können die Antiseren ungekühlt (15 bis 30 °C) für 15 Tage ohne nachteilige Effekte für die Durchführung 

aufbewahrt werden. 

7.2. FIXIERLÖSUNG 

Vorbereitung 

Die Fixierlösung ist gebrauchsfertig. Sie enthält: saure Lösung; Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen 

ungefährlich. Damit die Fixierlösung schnell und sicher angewendet werden kann, ist sie mit einem gesundheitlich unbedenklichen Farbstoff markiert. 

Gebrauch 

Zur Fixierung der elektrophoretisch getrennten Proteine in der Referenzspur (ELP). 

ACHTUNG: Um eine Kontamination der Reagenzien zu vermeiden, dürfen die Verschlußkappen der Gefäße nicht vertauscht werden. 


Fixierlösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfallsdatum auf der Kitpackung oder auf dem 

Fläschchenetikett der Fixierlösung stabil. 

Die Fixierlösung darf kein Präzipitat aufweisen. 

8. APPLIKATOREN 

Gebrauch 

Einmalapplikatoren für den Probenauftrag. 

Lagerung 

Applikatoren vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

9. ANTISERA-SEGMENTE 

Gebrauch 

Farbige Antisera-Segmente, zum Auftragen der Fixierlösung und der Antiseren auf das Gel. 

WARNUNG: Mit Antiserum befüllte Antiseren-Segmente vorsichtig behandeln. 

- 24 -

10. FILTERPAPIER, DÜNN 

Gebrauch 

Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten überschüssiger Flüssigkeit von der Geloberfläche vor dem Probenauftrag. 

Lagerung 

dünnes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

11. FILTERPAPIER, DICK 

Gebrauch 

Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten nicht ausgefällter Proteine nach der Immunfixation. 

Lagerung 

Das dicke Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 


ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE REAGENZIEN (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. ANTISEREN- UND FIXIERLÖSUNGSPACKUNG (für Art.-Nr. 4301, 4302, 4304, 4308 und 4309 Kits) 

Die Antiseren und Fixierlösungspackung, SEBIA, Bestell-nr. 4315, enthält 5 Antiserenfläschchen und 1 Fixierlösungsfläschchen, jeweils mit 1 ml Inhalt. 

Sie sind speziell auf die Immunfixationspozedur mit der dynamischen Maske abgestimmt. 

1.1 ANTISEREN 

Siehe vorheriger Abschnitt 7.1. 

1.2 FIXIERLÖSUNG 

Siehe vorheriger Abschnitt 7.2. 

2. ENTFÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte Entfärbelösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4540, 10 Fläschchen zu je 100 ml) mit destilliertem oder entionisiertem 

Wasser auf 100 Liter auffüllen. Es empfiehlt sich, nur 5 ml konzentrierte Lösung auf 5 Liter, dem Fassungsvermögen des Behälters für die 

Entfärbelösung, aufzufüllen. Verdünnte Entfärbelösung enthält: Zitronensäure, 0,5 g/l. 

Gebrauch 

Zum Entfärben, d.h. Auswaschen von überschüssiger Farbe und zur Entfernung der Gelhintergrundfärbung, sowie zum Spülen der Färbekammer nach 

dem Waschen. 

Zur Neutralisation der sauren Entfärbelösung können 15 ml einer 50 % Natronlauge (NaOH) in den leeren Abfallbehälter gefüllt werden. 


Konzentrierte Entfärbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit-Verpackung 

oder auf dem Fläschchenetikett der Entfärbelösung angegeben ist. Verdünnte Entfärbelösung bleibt bei Raumtemperatur in einem verschlossenen 

Behälter eine Woche stabil. Kein Natriumazid zugeben. 

Verdünnte Entfärbelösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

Um mikrobielles Wachstum in der verdünnten Entfärbelösung zu verhindern, wenn sie länger als 1 Woche aufgehoben wird, sollten 50 µl/l ProClin 300 

zugesetzt werden. 

Die mit ProClin versetzte, gebrauchsfertige Entfärbelösung ist in der verschlossenen Flasche bei Zimmertemperatur oder gekühlt bis zum Verfallsdatum 

stabil, das auf der Verpackung oder auf den Flaschenetiketten angegeben ist. 

3. HYDRASYS WASCHLÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte HYDRASYS Waschlösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4541, 10 Fläschchen zu je 80 ml) mit destilliertem oder 

entionisiertem Wasser auf 5 Liter auffüllen. Verdünnte Waschlösung enthält: alkalischen Puffer, pH-Wert 8,8 ± 0,3 ; Natriumazid. 

WARNHINWEIS: Konzentrierte Waschlösung enthält 0,625 % Natriumazid. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort 

den Arzt aufsuchen! Natriumazid kann bei Kontakt mit Säuren, Blei oder Kupfer zu explosiven bzw. toxischen Verbindungen reagieren. Bei 

der Entsorgung stets mit reichlich Wasser nachspülen. 

Gebrauch 

HYDRASYS Waschlösung dient zum Auswaschen der nicht ausgefällten Proteine aus den Gelen. Sie wird ebenfalls zum Reinigen des HYDRASYS 

Färbemoduls eingesetzt. Die Reinigung in regelmäßigen Abständen durchführen: Wird das Gerät zum Beispiel täglich genutzt, sollte das Färbemodul 

einmal pro Woche gereinigt werden. 

Hinweise zum Gebrauch finden Sie auf der Packungsbeilage. 


Konzentrierte und verdünnte Waschlösung in geschlossenen Behältern bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf dem Fläschchenetikett der Waschlösung angegeben ist. 

Verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

4. FLUIDIL 

Vorbereitung 

Fluidil (SEBIA, Bestell-Nr. 4587, 1 Fläschchen, 5 ml) ist gebrauchsfertig. 

Gebrauch 

Zum Verdünnen zähflüssiger oder trüber Proben, z.B. von Kryoglobulin- oder Kryogel-haltigen Seren. 


Fluidil bei Raumtemperatur aufbewahren. Es bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf Kit-Verpackung oder auf dem Fläschchenetikett angegeben ist. 

Fluidil darf kein Präzipitat aufweisen. 

- 25 -


ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE AUSSTATTUNG (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. HYDRASYS System, SEBIA, Bestell-Nr. 1210 oder Bestell-Nr. 1211. 

2. Für das Beladen der Applikatoren oder Antiseren Auftragsschablonen kann alternativ eine manuelle Mikropipette oder der Pipettierautomat 

HYDRAplus SEBIA, Bestell.-Nr. 1215, verwendet werden. 

3. Feuchte Kammer, Bestell-Nr. 1270, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

4. Behälter-Kit, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

5. Schablonen-Führungsstab SEBIA, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

6. Verstellbare Auftragsschablone, SEBIA, Art.-Nr. 1255. 

7. Pipetten: 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl und 200 µl. 

PROBEN FÜR DIE ANALYSE 

Probensammlung und -lagerung 

Für die Analyse werden frische Proben empfohlen. Die Gewinnung von Serum- und Urinproben nach einem gebräuchlichen Verfahren für klinische 

Labortests durchführen. Die Proben sollten umgehend bei 2 - 8 °C gekühlt und können bis zu einer Woche gelagert werden. Bei längerer Lagerung 

die Proben einfrieren (mindestens 1 Monat stabil). 

Eingefrorene Serumproben versetzt mit Natriumazid 0,02 g/dl, oder eingefrorene Urinproben versetzt mit 0,1 M HEPES (pH 6,75) und / oder 

Natriumazid 0,02 g/dl sind für mindestens 3 Monate stabil. 

WICHTIG: Bei Urinproben keine Borsäure oder andere Säuren als Konservierungsmittel verwenden. 

Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Protein bzw. Lipoprotein-Denaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

Probenvorbereitung 

1. Serumproben 

Eine Probe bei HYDRAGEL 1 IF, 2 oder 4 Proben bei HYDRAGEL IF 2/4 gemäß des Kits und 9 Proben bei HYDRAGEL 9 IF vorbereiten. 

Zur Vermeidung des Prozoneneffekts bei hoher AntigenkonzentratIon die Proben vor der Applikation wie folgt verdünnen: 

| SPUR | SERUM (µl) | VERDÜNNUNGSMITTEL (µl) | 

| Ig G-Immunfixationsspur | 20 | 100 | 

| ELP-Referenzspur und alle anderen Immunfixationsspuren | 30 | 60 | 

Sonderfälle 

• Falls der Gesamtimmunglobulinspiegel über 2 g/dl liegt (Hypergammaglobulinämie), empfiehlt sich ein zusätzliches Verdünnen der Proben (mit 

Ausnahme der ELP-Spur) um normale Immunglobulinkonzentrationen zu erhalten. 

• Falls die Immunglobulin-Konzentration unter 0,5 g/dl (Hypogammaglobulinämie) liegt empfiehlt sich ein geringeres Verdünnen der Proben. 

• Für die Suche nach freien Leichtketten im Serum oder im Urin empfehlen wir das Programm "BENCE JONES" zu benutzen. 

Für die Testdurchführung werden hierzu der Testkit IF zusammen mit den Antiseren “freies anti-kappa“ (SEBIA Art-.Nr. 4370) und "freies antilambda" 

(SEBIA Art.-Nr. 4371) eingesetzt oder einen der Testkits HYDRAGEL 1, 2, 4 oder 9 BENCE JONES Kits (SEBIA Art.-Nr. 4321, 4322, 

4324 oder 4329). 

Im Falle der Suche nach freien Leichtketten verdünnen Sie die Seren vor dem entsprechenden Auftragen in den Bahnen ELP, GAM, K und L 

im Verhältnis 1/10 (1 Teil Serum - 9 Teile Verdünner) wobei Sie entweder physiologische Kochsalzlösung oder den Probenverdünner für die 

Immunfixation als Verdünner benutzen können – letzterer muss allerdings selbst 1/4 vorverdünnt werden (1 Teil Probenverdünner - 3 Teile 

destilliertes Wasser oder deionisiertes Wasser). Eine zweite Verdünnung im Verhältnis 1/3 (1 Teil Serum - 2 Teile vorverdünnter Verdünner oder 

physiologische Kochsalzlösung) ist notwendig für die Bahnen, die mit Antiseren freies anti-kappa und freies anti-lambda beschickt werden. 

Falls die Immunglobulin-Konzentration unter 0,5 g/dl liegt empfiehlt sich für die Suche nach freien Leichtketten ebenfalls geringeres Verdünnen; 

z.B. 1/5 für die Bahnen ELP, GAM, K und L sowie 1/2 für die Bahnen freies-K und freies-L. 

• Nach der Lagerung im Kühl- oder Gefrierschrank können manche Serumproben (insbesondere Kryoprotein haltige Proben) zähflüssig oder trüb 

werden. Derartige Proben lassen sich mitunter schwer auftragen, da sie kaum durch die Zähne des Probenapplikators diffundieren. In solchen 

Fällen zu 75 µl Serum 25 µl Fluidil zugeben und 15 Sekunden im Rotationsmischer mischen. Anschließend mit dem Standardverfahren 

fortfahren. 

• Einige monoklonale Proteine können in polymerisierter Form vorliegen als läge auf allen immunfixierten Spuren eine monoklonale Fraktion vor. 

In diesem Fall (i) eine Fluidil-Lösung herstellen, die 1 % Beta-Mercaptoethanol (BME, oder 2-Mercaptoethanol, 2 ME) enthält, (ii) zu 75 µl 

unverdünntem Serum 25 µl Reduktionslösung geben, im Rotationsmischer mischen und mindestens 15 Minuten (maximal 30 Minuten) 

einwirken lassen. Anschließend mit dem Standardverfahren fortfahren. 

• Für eine Ig D und /oder Ig E Immunfixation sollte die Probe in der gleichen Verdünnung wie für die Spuren Kappa und Lambda (freie und 

gebundene Leichtketten) eingesetzt werden. 

2. Konzentrierte Urinproben 

Die meisten Urinproben müssen (mit einem geeigneten Verfahren) aufkonzentriert werden. In allen Spuren aufkonzentrierten Urin verwenden. Der 

Urin sollte bis zu einem Gesamtproteingehalt von 0,5 g/dl oder einem Gesamtimmunglobulingehalt von annähernd 0,1 g/dl aufkonzentriert werden. 

Wenn die Potein- oder Immunglobulinkonzentationen nicht bekannt sind sollte 20- bis100fach aufkonzentriert werden. 

WICHTIG: Einige Urinproben sind stark salzhaltig. Dadurch kann es während der Migration zu einer Deformation des Gels und damit zu einer 

Verzerrung der Elektrophoresemuster kommen. Dies lässt sich durch Entfernen des Salzanteils mittels Dialyse vermeiden. 

Die Diffusion von Urinproben in die Applikatorspitze kann bei trüben Urinproben (unverdünnt oder aufkonzentriert) erschwert sein. Diese Partikel 

sollten durch Abzentrifugieren (z.B. 10 min bei 3000 upm) oder durch Filtration (z.B. 0,45 µm Spritzenfilter) entfernt werden. 

Bei Urinproben kann die Sensitivität erhöht werden indem man die Auftragsmenge oder die Inkubationszeit der Antiseren durch den Gebrauch des 

"BENCE JONES" Migrationsprogramms erhöht. 

In diesem Fall beträgt die Nachweisgrenze für monoklonales Protein 1 – 5 mg/dl. Hierbei wird die Verwendung von nicht aufkonzentriertem Urin 

oder bis zu 25fach aufkonzentriertem Urin empfohlen. 

HINWEIS: Nicht empfohlen wird der Versuch die Testsensitivität durch weiteres Aufkonzentrieren zu erhöhen. Beim Gebrauch von 

überkonzentrierten Urinproben bilden sich oft falsche Banden. Solche Proben sollten bei niedrigeren Konzentrationen erneut getestet werden. 

- 26 -


Sonderfälle 

Die leichten Ketten tendieren im Urin zur Polymerisation und zur Bildung von Aggregaten. Wenn hierdurch die Interpretation des Ergebnisses 

verschlechtert wird, sollten die leichten Ketten depolymerisiert werden: (i) hierzu 1 Volumenanteil mit 9 Volumenanteilen Wasser (z.B. 5 µl BME 

und 45 µl Wasser) mischen, (ii) zu 100 µl Urin 5 µl von dem verdünnten BME geben, gut mischen, und ohne weitere Verdünnung einsetzen. 

Anschließend mit der Standardimmunfixation oder den "BENCE JONES" Programmen fortfahren. 

Folgende Proben nicht verwenden 

• Plasmaproben vermeiden. Das Fibrinogen ergibt eine Bande in der Nähe der Auftragsstelle, die mit monoklonalem Protein verwechselt werden 

könnte. 

• Keine hämolysierten Proben verwenden. 

• Keine zu alten oder ungeeignet gelagerten Proben verwenden, weil ein enzymatischer Abbau der Proteine auftreten könnte. 

DURCHFÜHRUNG 

Das HYDRASYS System ist ein halbautomatisches Multiparameter-Gerät, das eine automatische Bearbeitung der HYDRAGEL Agarosegele in der 

nachstehenden Reihenfolge durchführt: Probenapplikation, elektrophoretische Migration, Inkubation mit Fixierlösung und Antiseren, Trocknen, Färben, 

Entfärben und Endtrocknen. Zu den manuellen Schritten gehört das Handling der Proben und Gele, der Auftrag der Fixierlösung und der Antiseren sowie 

die Bedienung des Geräts. 

DIE BEDIENUNGSANLEITUNG ZUM HYDRASYS SYSTEM AUFMERKSAM DURCHLESEN. 

I. VORBEREITUNG DER MIGRATION 

1. HYDRASYS einschalten. 

2. Bei Verwendung von HYDRAGEL 1 IF oder HYDRAGEL IF 2/4 (2 Probens) einen Applikator, für HYDRAGEL IF 2/4 (4 Proben) zwei 

Applikatoren oder für HYDRAGEL 9 IF drei Applikatoren, auf eine ebene Unterlage legen, sodass die Nummern (Vertiefungen) nach oben 

zeigen. (Abb. 1). 

- In jede Vertiefung des Applikators 10 µl richtig verdünntes Serum oder aufkonzentrierten Urin wie folgt geben. Das Befüllen eines Applikators 

darf höchstens 2 Minuten betragen. 

| MIGRATIONS-/IMMUNFIXATIONSSPUR | 

NUMMER DER VERTIEFUNG : ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 PROBENNR. 1 ODER 3 2 3 4 5 6 7 PROBENNR. 2 ODER 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF PROBENNR. 1, 4 ODER 7 1 2 3 4 5 6 PROBENNR. 2, 5 ODER 8 7 8 9 10 11 12 

| PROBENNR. 3, 6 ODER 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

HINWEIS: Beim HYDRAGEL IF 2/4 Test, werden die Nummern der Vertiefungen. 1, 8 und 15 nicht verwendet; sie sollten mit einem 

Filzschreiber markiert werden, um ein irrtümliches Befüllen zu vermeiden. 

- Die Applikatoren mit den Zähnen nach oben in die feuchte Kammer legen (nur am Schutzrahmen für die Zähne anfassen). 

Hinweise hierzu finden Sie in der Packungsbeilage zur feuchten Kammer. 

- Die Proben nach dem Auftragen der letzten Probe 5 Minuten lang in die Zähne einziehen lassen. Erfolgt die Anwendung erst (bis zu 

8 Stunden) später, die komplette Kammer in den Kühlschrank stellen. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen, und die Elektroden-/Applikatoren-Halter nach oben klappen. 

WARNHINWEIS: Die Abdeckung bei hochgestelltem Elektroden-/Applikatoren-Halter nicht schliessen! 

4. Im Gerätemenü für HYDRAGEL 1 IF das Programm "1 IF SM/DM", für HYDRAGEL IF 2/4 das Programm "2/4 IF SM/DM" oder für HYDRAGEL 

9 IF das Programm "9 IF DM" wählen (an der Tastatur links). 

5. Die Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus der Packung nehmen. Die Perforation des Plastikfilms in die Stifte des Elektroden-Halters 

einführen. Die Plastikfolie muß dabei zum Applikator-Halter zeigen (siehe Abb. 2). 

6. Das Gel aus der Verpackung nehmen. 

- Ein dünnes Filterpapier vorsichtig und gleichmäßig auf die Oberfläche legen, um überschüssige Feuchtigkeit zu entfernen. Das Filterpapier 

sofort wieder entfernen. 

WARNUNG: Das Filterpapier nicht zu lange mit dem Gel in Kontakt lassen, damit ein Austrocknen des Gels verhindert wird. 

- Beim HYDRAGEL 1 IF 120 µl oder bei HYDRAGEL IF 2/4 und HYDRAGEL 9 IF 200 µl destilliertes oder deionisiertes Wasser in das untere 

Drittel des Rahmens geben, der auf der Peltier-Platte des Migrationsmoduls aufgedruckt ist. 

- Das Gel (mit der Gelseite nach oben) an die untere Kante des aufgedruckten Rahmens anlegen (siehe Abb. 3). 

- Das Gel biegen und auf dem Wasser abrollen. Darauf achten, daß keine Luftblasen eingeschlossen werden, das Wasser unter der gesamten 

Gelplatte verteilt ist und das Gel am aufgedruckten Rahmen anliegt. 

7. Beide Halter nach unten klappen. In dieser Position dürfen die Pufferstreifen keinen Kontakt mit dem Gel haben. DIE HALTER NICHT MIT 

GEWALT BIS GANZ NACH UNTEN DRÜCKEN. 

8. Die Applikatoren aus der feuchten Kammer nehmen. Dabei nur am Schutzrahmen anfassen. 

- Den Schutzrahmen für die Zähne entfernen. 

- Den/die Applikator(en) an den entsprechenden Position(en) auf dem Halter einsetzen: 

- Bei HYDRAGEL 1 IF oder HYDRAGEL IF 2/4 (2 Proben), an Position 6, 

- Bei HYDRAGEL IF 2/4 (4 Proben), an den Positionen 3 und 9, 

- Bei HYDRAGEL 9 IF, an den Positionen 2, 6 und 10. 

WICHTIG: Die auf den Applikatoren aufgedruckten Ziffern müssen immer zum Bediener zeigen (siehe Abb. 4). 

Zur Verbesserung der Reproduzierbarkeit des Probenauftrags immer den Applikator auf die linke Seite des Halters positionieren. 

9. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

10. Die Migration sofort starten. Dazu die grüne Pfeiltaste "START" auf der linken Seite der Tastatur drücken. 

WICHTIG: Darauf achten, daß die Lüftungsschlitze an der rechten Geräteseite nicht verdeckt sind. 

- 27 -


MIGRATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Die beiden Halter werden soweit gesenkt, daß die Pufferstreifen und der/die Applikator(en) in Kontakt mit der Geloberfläche kommen. 

• Der Probenapplikator-Halter wird angehoben. 

• Die Migration erfolgt beim HYDRAGEL 1 IF unter Anlegen eines konstanten Gleichstromes von 10 W und beim HYDRAGEL IF 2/4 unter Anlegen 

eines konstanten Gleichstromes von 20 W bis jeweils 42 Vh erreicht sind (ungefähr 9 Minuten) bei 20 °C, die durch das Peltier-Element aufrecht 

erhalten werden. Beim HYDRAGEL 9 IF erfolgt die Migration unter Anlegen eines Gleichstromes von 20 W bis 36 Vh erreicht sind (nach etwa 

7 Minuten), bei 20 °C, die durch das Peltier-Element aufrecht erhalten werden. 

• Der Elektroden-Halter wird angehoben und unterbricht dabei den Kontakt der Elektroden. 

• Ein akustisches Signal ertönt, und die Abdeckung des Migrationsmoduls wird entriegelt. Am Bildschirm wird folgende Meldung angezeigt: "AS". 

HINWEIS: Während der Migration bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

II. VORBEREITUNG DER IMMUNFIXATION 

Die dynamische Maske enthält eine farbige Markierung für den Reagenzienauftrag, ein Segment für die Antiseren, einen Segmenthalter, eine Führung 

und ein Reduzierelement für IF 2 Gele. (Abb. 5). 

Während der Migration die dynamische Maske wie folgt zusammensetzen: 

1. Die Führung auf eine ebene Oberfläche legen. 

WICHTIG: Bei der 2-Pronenanalyse ist es nötig das Reduzierelement in der Führung zu positionieren. 

2. Ein Antisera-Segment auf dem Segmenthalter anbringen (Abb. 6): 

- Das Antiserensegment im Winkel von 45° neigen und gegen die Plastikfedern des Segmenthalters positionieren. 

- Die beiden Elemente auseinanderziehen und das Segment einschwenken, um es in den beiden Nuten des Halters zu befestigen. 

WARNUNG: Sicherstellen dass das Segment korrekt im Segmenthalter positioniert ist. Die Haltestifte am Ende des Segments 

müssen in den Nuten des Halters festsitzen. 

3. Den Segmenthalter mit dem Antisera-Segment auf der Führung anbringen (Abb. 7). Anschließend die Farbcodierung für den 

Reagenzienauftrag auf den Segmenthalter legen (Abb. 8). 

4. Die Reagenzien wie folgt auftragen: 

- Segment mit 6 Antiseren-Vertiefungen für HYDRAGEL 1 IF: 8 µl pro Vertiefung 

- Segment mit 15 Antiseren-Vertiefungen für HYDRAGEL IF 2/4: bei 2 Probenanalyse 8 µl / Vertiefung 

bei 4 Probenanalyse 12 µl / Vertiefung 

- Segment mit 18 Antiseren-Vertiefungen für HYDRAGEL 9 IF: 8 µl / Vertiefung. 

SPUR REAGENZ FARBE ELP Fixierlösung gelb G Antiserum gegen Gamma-Schwerketten pink A Antiserum gegen Alpha-Schwerketten dunkelblau M Antiserum gegen My-Schwerketten gelbgrün K Antiserum gegen (freie und gebundene) Kappa-Leichtketten hellgrün 

| L | Antiserum gegen (freie und gebundene) Lambda-Leichtketten | hellblau | 

HINWEIS: Reagenzien sind farbig und die Farben sind auf dem Farbcode abgebildet, um ein korrektes Pipettieren der Antiseren zu erleichtern. 

WICHTIG: Nicht die Vertiefungen in Position 1, 8 und 15 auf dem Antiserensegment verwenden. 

Die Reagenzien ohne Luftblasen in die Pipettenspitze aufziehen. 

Die Reagenzien auftragen (siehe Abb. 9): 

- Die Pipette schräg im Winkel und ihre Spitze leicht gegen die Wandung der Vertiefungen halten, ohne den Boden der Vertiefung zu 

berühren. 

- Den Reagenztropfen in die Vertiefung spritzen. 

5. Die Farbcodierung entfernen. 

III. IMMUNFIXATION 

1. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen. 

2. Den/die Probenapplikator(en) entfernen und verwerfen. 

3. Beide Elektroden-/Applikator-Halter aufrichten, und die Pufferstreifen an den Plastikenden entfernen und verwerfen. 

- den Applikatorrahmen entfernen. 

- Die Elektroden mit einem feuchten Tuch vorsichtig abwischen. 

- Das Gel im Migrationsmodul belassen. 

4. Die dynamische Maske zum Reagenzienauftrag wie folgt einsetzen (Abb. 10); 

- Die Metallstange auf die beiden unteren Haltestifte stecken (danach kann die Führung im Migrationsmodul verbleiben). 

- Die dynamische Maske auf die Metallstange schieben (rechte Klemme in die Nut der Stange). 

- Die dynamische Maske auf das Gel absenken. 

WICHTIG: Richten Sie die dynamische Maske mit eingelegtem Antisera-Segment zwischen den Markierungen für die Gelposition aus. 

5. Das Antisera-Segment auf der platzieren, sodass er zum Bediener zeigt. Das Segment am Griff auf der rechten Seite halten und auf kurz auf 

die Mitte des Segment-Halters drücken, sodass das Antisera-Segment mit dem Gel in Kontakt kommt. Beim Lösen des Drucks kommen die 

Reagenzien mit dem Gel in Kontakt (Abb. 11). 

6. Sofort den Segmenthalter am rechten Griff langsam und stetig auf dem Gel einmal auf und ab bewegen um die Reagenzien aufzutragen. Die 

Auftragung sollte etwa 5 Sekunden betragen (Abb. 12). 

WARNUNG: Während dieses Schrittes die Schablone nur am Griff des Segmenthalters halten. Ein Berühren der Führung vermeiden. 

Nicht wiederholt auf den Druckpunk drücken, weil das zu Kreuzkontaminationen der Reagenzien führen kann. 

7. Die dynamische Maske aus dem HYDRASYS entfernen, den Segmenthalter entnehmen. Das benutzte Antisera-Segment verwerfen. Evtl. 

verbleibende Reagentienreste im Antisera-Segment beeinträchtigen das Testergebnis nicht. 

WARNUNG: Mit Antiserum befüllte Antiseren-Segmente vorsichtig behandeln. 


9. Die Inkubation sofort durch drücken der Starttaste mit dem grünen Pfeil auf der linken Seite der Tastatur starten. Auf dem Bildschirm wird 

folgende Meldung angezeigt: "[INKUBATION]". 

- 28 -

IMMUNFIXATION – BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN SCHRITTE 

• Inkubation bei 20 °C für 5 Minuten, kontrolliert durch den Peltier-Element. 

• Ein akustisches Signal ertönt und die Abdeckung wird entriegelt. Folgende Meldung blinkt auf dem Bildschirm: " PAP.". 

HINWEIS: Während des Inkubationsschritts bleibt die Abdeckung verriegelt. 


IV. ABBLOTTEN DES GELS 


2. Ein dickes Filterpapier auf das Gel legen: 

- Den unteren Rand des Filterpapiers am Rand des Gels ausrichten, (es im Winkel von 45° neigen) und es auf das Gel herunterlassen. 

WICHTIG: Die gesamte Oberfläche des Filterpapiers andrücken, sodass ein perfektes Anliegen sichergestellt ist. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmodul schließen. 

4. Das Abblotten durch drücken der Starttaste mit den grünen Pfeilen auf der linken Seite der Tastatur starten. 

ABBLOTTEN – BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN SCHRITTE 

• Abblotten bei 40 °C für 3 Minuten, kontrolliert durch den Peltier-Element. 

Folgende Meldung erscheint auf dem Bildschirm: "[BLOTTEN]". 

• Ein akustisches Signal ertönt. 

Folgende Meldung erscheint auf dem Bildschirm: "❊ PAP.". 

V. TROCKNEN DES GELS 


2 Das Filterpapier entfernen und das Gel im Migrationsmodul belassen. 


4. Das Verfahren starten. Dazu die "START"-Taste (grüne Pfeiltaste auf der linken Seite der Tastatur) drücken. 

TROCKNEN – BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN SCHRITTE 

• Trocknen bei 50 °C für 6 Minuten, kontrolliert durch den Peltier-Effekt. 

• Ein akustisches Signal ertönt und die Abdeckung wird entriegelt. Die Geltemperatur bleibt bei 50 °C bis die Abdeckung geöffnet wird. “Migration 

temp maintained” wird auf dem Bildschirm angezeigt. 

HINWEIS: Während des Trocknens bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

VI. VORBEREITUNG DER GELBEARBEITUNG 

1. Die Abdeckung öffnen. 

2. Das getrocknete Gel zur weiteren Bearbeitung herausnehmen. 

3. Den Gel-Halter öffnen und flach hinlegen. Das Gel (mit der Gelseite nach oben) in die Ausfräsung des Gel-Halters einsetzen, und den Gel- 

Halter schließen. Darauf achten, daß das Gel im Halter korrekt positioniert ist (siehe Abb. 13). 

4. Den Gel-Halter in das Gelbearbeitungs-/Färbemodul einsetzen. 

WICHTIG: Vor dem Start des Gelbearbeitungs-/Färbeprogramms überprüfen, daß: 

- der Waschlösungsbehälter mindestens 400 ml Waschlösung enthält, 

- der Färbelösungsbehälter 300 ml Färbelösung enthält, 

- der Entfärbelösungsbehälter mindestens 1 Liter Entfärbelösung enthält, 

- der Abfallbehälter leer ist, 

- die nicht benötigten Kanäle blockiert sind. 

5. Im Gerätemenü das Färbeprogramm "IF ACID VIOLET" oder "IF AMIDO" wählen, und den Vorgang durch Drücken der "START"-Taste (grüner 

Pfeil auf der rechten Seite der Tastatur) starten. 

Während der Färbe-, Entfärbe- und Trocknungsschritte bleibt das Färbemodul verriegelt. 

Nach einer Abkühlphase des Moduls ertönt ein akustisches Signal, und das Färbemodul entriegelt sich (die Luftkühlung erfolgt solange, bis 

der Gel-Halter entnommen wird). 

HINWEIS: 

- Die Temperatur der Peltier-Platte sinkt nach dem Öffnen (innerhalb von 5 Minuten) auf 20 °C. Danach kann die nächste Migration durchgeführt 

werden. 

- Den Probenapplikator-/Elektroden-Halter wieder einsetzen. 

- Die Peltier-Platte mit einem weichen, feuchten Papiertuch abwischen. 

VII.ABSCHLUSS DER GELBEARBEITUNG 

1. Den Gel-Halter aus dem Färbemodul nehmen, die Bügel nach oben klappen und das getrocknete Gel entnehmen. 

2. Bei Bedarf die Rückseite (den Plastikfilm) der trockenen Folie mit einem weichen, feuchten Papiertuch reinigen. 

HINWEIS: Die Migrationslänge kann bei Gelen mit 2 oder 3 Analysereihen unterschiedlich sein, ohne jegliche Beeinträchtigung der Leistung. 

ERGEBNISSE 

Interpretation 

1. Serumprobe 

Fehlen der monoklonalen Komponente 

• Eine normale Serumprobe weist in allen Spuren eine leicht diffuse Färbung der polyklonalen Immunglobuline auf. 

• Eine Hypergammaglobulinämie ist durch eine stark gefärbte, diffuse Gammafraktion und das Fehlen jeglicher scharf abgegrenzter Banden 

gekennzeichnet. 

- 29 -


Vorhandensein einer monoklonalen Komponente 

• Das Vorhandensein eines monoklonalen Proteins (Gammopathie) ist durch eine monoklonale Bande gekennzeichnet, die mit einem Antiserum 

gegen (Gamma-, Alpha- oder My-) Schwerketten bzw. mit einem Antiserum gegen Kappa- bzw. Lambda-Leichtketten nachgewiesen wird. Die 

festgestellte sich scharf abzeichnende, enge monoklonale Bande muß sich auf der gleichen Migrationshöhe wie die Bande auf der Referenzspur 

(ELP) befinden. 

• Das Fehlen einer Reaktion mit den eingesetzten Schwerketten-Antisera und einer Bandenbildung in einer der beiden Leichtkettenspuren, kann 

hinweisen auf: 

a) eine seltene Ig D oder Ig E Gammopathie, die mit den Anti-delta oder Anti Epsilon Schwerketten-Antiseren bestätigt werden kann, 

b) eine Leichtkettengammopathie zu bestätigen durch Antiseren Anti-Kappafrei oder Anti-Lambdafrei. 

• Das Ausbleiben einer positiven Reaktion mit einem der aufgetragenen Antiseren gegen Leichtketten bei gleichzeitiger Reaktion mit einem 

Antiserum gegen Schwerketten kann auf eine sehr seltene (Gamma-, Alpha- oder My-) Schwerketten-Gammopathie hindeuten. 

Vorhandensein von zwei oder mehr monoklonalen Komponenten 

In seltenen Fällen kommt es zur Proliferation von mehreren Klons der B-Zellen, was sich nach der Immunfixation in mehreren monoklonalen 

Banden äußert: 

• Eine biklonale Gammopathie ist durch das Vorhandensein von zwei Schwerketten-Banden (die identisch oder unterschiedlich sein können) und 

zwei Leichketten-Banden (die ebenfalls identisch oder unterschiedlich sein können) gekennzeichnet. 

• Polymerisierte Immunglobuline sind durch mehrere Banden (normalerweise zwei) desselben Typs von Schwerketten und eine Bande desselben 

Typ von Leichtketten gekennzeichnet. Zur Bestätigung einer einzelnen monoklonalen Anomalie, ist es erforderlich eine Depolymerisation mit 

ß–Mercaptoethanol durchzuführen und die Immunfixation zu wiederholen (siehe "Proben für die Analyse"). 

• Eine oligoklonale Gammopathie ist durch mehrere Banden bei einer oder mehreren Schwerketten oder bei einer oder allen beiden Leichtketten 

gekennzeichnet. 

Sonderfälle 

• Wird bei der Serumelektrophorese eine monoklonale Bande beobachtet (ELP-Spur), die sich aber nicht durch Immunfixation bestätigen läßt, 

kommt dafür in erster Linie Fibrinogen (Plasmaprobe) in Frage. 

• Wird bei allen Immunfixationsspuren eine monoklonale Bande gefunden, deutet dies auf Kryoglobulin oder polymerisiertes Ig M hin. In diesem 

Fall mit einem Reduktionsmittel depolymerisieren, und das Verfahren wiederholen (siehe "Proben für die Analyse"). 

2. KonzentrierteUrinprobe 

Das Interpretationskonzept für Serumproben kann auch für Urinproben angewendet werden. 

• Das Vorhandensein eines monoklonalen Proteins im Urin (Gammopathie) ist durch eine monoklonale Bande gekennzeichnet, die mit einem 

Antiserum gegen (Gamma-, Alpha- oder My-) Schwerketten bzw. mit einem Antiserum gegen Kappa- bzw. Lambda-Leicht-ketten (frei oder 

gebunden) nachgewiesen wird. Die festgestellte sich scharf abzeichnende, enge monoklonale Bande muß sich auf der gleichen Migrationshöhe 

wie die Bande auf der Referenzspur (ELP) befinden. 

• Das Vorhandensein einer freien leichten Kette, Bence Jones, ist durch eine monoklonale Bande gekennzeichnet, die mit einem Antiserum gegen 

Kappa- oder Lambda-Leichtketten nachgewiesen wird. Keine positive Reaktion zeigt sich in den Antiserumspuren der schweren Ketten 

(Gamma-, Alpha oder My). 

Interferenzen und Einschränkungen 

Siehe PROBEN FÜR DIE ANALYSE. 

Die Antisera für die Verwendung mit der dynamischen Maske sind speziell auf diese abgestimmt. Die Verwendung von anderen Antiseren kann Ihre 

Ergebnisse beeinträchtigen. 

Bedingt durch die Auflösungs- und Sensitivitätsgrenzen der Zonenelektrophorese ist es möglich, dass einige monoklonale Komponenten mit dieser 

Methode nicht nachgewiesen werden können. 

Fehlersuche 

Kommt es trotz sachgerechter Lagerung und Vorbereitung der Materialien und Beachtung der Verfahrensbeschreibung zum Versagen des Tests, 

wenden Sie sich bitte an den SEBIA Kundendienst. 

Sicherheitsdatenblätter zu den Kit-Reagenzien sowie Informationen zur Abfallbeseitigung sind bei SEBIA GmbH, Fulda erhältlich. 

LEISTUNGSSPEZIFIKATIONEN 

Reproduzierbarkeit innerhalb eines Laufs und Spezifität 

HYDRAGEL 4 IF Verfahren 

Die Reproduzierbarkeit innerhalb eines Gels wurde mit 3 verschiedenen pathologischen Proben gemessen: zwei Proben mit je einer monoklonalen 

Komponente mit hohen Spiegeln und einer Probe mit zwei monoklonalen Komponenten mit niedrigen Spiegeln. Jede Probe wurde 4 mal mit 2 Chargen 

von HYDRAGEL IF 2/4 mit dem Säureviolettfärbeverfahren analysiert. 


Die Reproduzierbarkeit innerhalb eines Gels wurde mit drei verschiedenen pathologischen Proben jede mit einem hohen Spiegel einer monoklonalen 

Komponente analysiert. Jede Probe wurde 9 mal mit 2 Chargen von HYDRAGEL 9 IF Gelen mit dem Säureviolettfärbeverfahren gemessen. 

Alle Wiederholungen ergaben innerhalb einer Charge und innerhalb verschiedener Chargen identische Ergebnisse und entsprachen dem jeweils 

erwarteten Probentyp. 

Reproduzierbarkeit von Lauf zu Lauf und Spezifität 


Die Reproduzierbarkeit von Lauf zu Lauf wurde mit 4 verschiedenen pathologischen Proben mit einer oder vielen monoklonalen Komponenten 

analysiert. 

Diese Proben wurden auf 10 HYDRAGEL IF 2/4 Gelen mit 3 verschiedenen Chargennummern mit dem Säureviolettfärbeverfahren gemessen. 


Die Reproduzierbarkeit von Lauf zu Lauf wurde mit 9 unterschiedlichen pathologischen Proben analysiert: Zwei Proben mit einer monoklonalen 

Komponente mit hohem Spiegel, eine Probe mit zwei monoklonalen Komponenten mit niedrigem Spiegel und einer Probe mit einer monoklonalen 

Komponente mit hohem und einer monoklonalen Komponente mit niedrigem Spiegel. Diese Proben wurden auf 10 HYDRAGEL 9 IF Gelen von 

3 verschiedenen Chargen mit dem Säureviolett-färbeverfahren analysiert. 

Alle Wiederholungen von Lauf zu Lauf ergaben identische Resultate und entsprachen dem jeweils erwarteten Probentyp. 

- 30 -


Richtigkeit 

HYDRAGEL 4 IF Verfahren mit Säureviolettfärbung 

Dreiundsiebzig (73) verschiedene pathologische Proben, elf (11) normale Seren und zwölf (12) aufkonzentrierte Urine wurden mit HYDRAGEL IF 2/4 

Gelen und einem anderen handelsüblichen Agarosegelimmunfixationssystem analysiert. 

HYDRAGEL 4 IF Verfahren mit Amidoschwarz-Färbung 

Achtundzwanzig (28) verschiedene pathologische Serum Proben and vier (4) normale Serumproben wurden mit HYDRAGEL IF 2/4 Gelen und einem 

anderen handelsüblichen Agarosegelimmunfixations-system analysiert. 

HYDRAGEL 9 IF Verfahren mit Säureviolettffärbung 

Fünfundneunzig (95) verschiedene pathologische Serumproben, vier (4) normale Seren und zwölf (12) aufkonzentrierte Urine wurden mit HYDRAGEL 

9 IF Gelen und einem anderen handelsüblichen Agarosegelimmunfixationssystem analysiert. 

In allen Fällen waren die Ergebnisse, die mit SEBIA Test und mit dem vergleichbaren kommerziell erhältlichen Testverfahren erhalten wurden identisch. 

Empfindlichkeit 

Von 4 pathologischen Serumproben, die alle monoklonale Komponenten aufwiesen wurden serielle Verdünnungen hergestellt und mit dem HYDRAGEL 

4 IF Verfahren analysiert. Beide Färbeverfahren, die Säureviolettfärbung und die Amidoschwarzfärbung wurden eingesetzt. 

Die Ergebnisse sind unten zusammengefasst. 

MONOKLONALE KOMPONENTE NACHWEISGRENZE (mg/dL) PROBEN-Nr. TYPE KONZ. (g/dL) HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF SÄUREVIOLETT AMIDOSCHWARZ 1 gamma 1.09 12 12 kappa 12 12 2 | gamma 0.78 12 / l lambda 12 / 3 alpha 0.58 12 25 lambda 12 25 4 my 0.34 12 12 

| | kappa | | 12 | 12 | 

Die Nachweisgrenze kann in Abhängigkeit von der Migrationsposition der monoklonalen Komponenten, dem Spiegel des polyklonalen Hintergrunds in 

der Gammazone und des Färbeverfahrens zwischen 12 und 25 mg/dl variieren. 

LITERATUR 

Zur Interpretation von Immunfixationsmustern siehe auch: 

(1) Le Carrer Didier, "Serum Protein Electrophoresis and Immunofixation, Illustrated Interpretations" SEBIA Laboratories 1994, Hatier - Paris. 

(2) Keren D., "High Resolution Elektrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation", Butherworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 2nd, 

ed., 1994,397pp. 

- 31 -


GEBRUIKSAANWIJZING 

De HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF en 9 IF kits zijn bedoeld voor het opsporen van monoklonale proteïnen in menselijk serum en menselijke urine door 

middel van immunofixatie-elektroforese. De kits worden gebruikt in combinatie met het halfautomatische HYDRASYS elektroforese-apparaat. De 

proteïnen, gescheiden door middel van elektroforese op alkalisch gebufferde agarose-gels, worden geïncubeerd met afzonderlijke antisera die specifiek 

zijn tegen respectievelijk gamma (Ig G), alfa (Ig A) en mu (Ig M) zware ketens, en kappa (vrije en gebonden) en lambda (vrije en gebonden) lichte 

ketens. 

Na verwijdering van de niet-reagerende proteïnen worden de immunoprecipitaten gekleurd met ofwel zuurviolet, ofwel amidozwart. De 

elektroforegrammen worden visueel geëvalueerd op de aanwezigheid van specifieke reacties met de verdachte monoclonale proteïnen. 

Elke agarosegel is bedoeld voor het testen van: 

- één monster met de HYDRAGEL 1 IF-kit, 

- twee monsters met de HYDRAGEL 2 IF-kit, 

- vier monsters met de HYDRAGEL 4 IF-kits, 

- negen monsters met de HYDRAGEL 9 IF-kits. 

Om aan de wensen van verschillende gebruikers tegemoet te komen, leveren we de HYDRAGEL 4 IF-kits ofwel met zuurviolet of met amidozwart. 

Voor gebruik bij in vitro diagnostiek. 

PRINCIPE VAN DE TEST 

Op afwijkende banden in elektroforegrammen van serum- en urineproteïnen, en dan met name die in de bèta-globuline- en gamma-globuline-zones, 

rust altijd de verdenking dat ze monoclonale proteïnen zijn (M-proteïnen, paraproteïnen, monoclonale immunoglobulinen), en derhalve een indicatie van 

monoclonale gammopathieën. Om deze afwijkende banden te identificeren wordt de techniek van immunofixatie toegepast. 

Immunofixatie-elektroforese is een eenvoudige techniek waarmee een proteïne na elektroforese op zijn plaats verankerd wordt doordat hij een 

onoplosbaar complex vormt met zijn antilichaam. 

Deze techniek is gemakkelijk in vier stappen uit te voeren, en is eenvoudig te interpreteren: 

1. Scheiding van proteïnen door middel van elektroforese op agarose-gel. 

2. Immunofixatie (immunoprecipitatie) van de geëlektroforetiseerde proteïnen - over de juiste elektroforetische migratiesporen wordt een laagje gelegd 

met afzonderlijke antisera. De antisera trekken in de gel en precipiteren de bijbehorende antigenen indien aanwezig. De proteïnen in het 

referentiespoor worden gefixeerd met een fixeermiddel. 

3. De ongeprecipiteerde, oplosbare proteïnen worden van de gel verwijderd door middel van deppen en spoelen. 

Precipitaat van het antigen – antilichaam-complex wordt vastgelegd binnen de matrix van de gel. 

4. Het precipitaat en de gefixeerde proteïnen worden gevisualiseerd door middel van kleuring 

Om de verdachte monoclonale component op te sporen en te identificeren wordt het monster tegelijkertijd geëlektroforetiseerd in zes sporen. Na de 

elektroforese fungeert een van de sporen als referentiespoor. Dit laatste spoor levert een volledig elektroforetisch patroon van de proteïnen in het 

monster. Met de resterende vijf sporen is het mogelijk de monoclonale component te typeren aan de hand van de reactie daarvan, of het gebrek aan 

reactie daarvan, met antisera tegen gamma (Ig G), alfa (Ig A) en mu (Ig M) zware ketens, en tegen vrije en gebonden kappa en lambda lichte ketens. 

De geïmmunofixeerde banden worden vervolgens vergeleken met de verdachte banden in het referentiepatroon - de bijbehorende band moet dezelfde 

migratiepositie hebben. 

REAGENTIA EN MATERIALEN BIJGELEVERD BIJ DE HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF EN 


KIT HYDRAGEL 1 IF PROD. NR 4301 KIT HYDRAGEL 2 IF PROD. NR 4302 KITS HYDRAGEL 4 IF PROD. NR 4304 PROD. NR 4308 PROD. NR 4381* KITS HYDRAGEL 9 IF PROD. NR 4309 PROD. NR 4382** Agarose-gels (klaar voor gebruik) 10 gels 10 gels 10 gels 80 gels Gebufferde strips (geconcentreerde oplossing) 10 pakjes van 2 stuks 10 pakjes van 2 stuks 10 pakjes van 2 stuks 80 pakjes van 2 stuks Verdunner voor de kleuroplossing (geconcentreerde oplossing) 1 flesje van 60 ml Amidozwart kleurstof (geconcentreerde oplossing) 1 flesje van 20 ml Zuurviolet kleurstof (geconcentreerde oplossing) 1 flesje van 75 ml 1 flesje van 75 ml 8 flesjes van 75 ml Verdunningsmiddel (klaar voor gebruik) 1 flesje van 3,2 ml 1 flesje van 32 ml 1 flesje van 32 ml 2 flesjes van 80 ml per stuk 3 flesjes van 80 ml per stuk Fixeeroplossing (klaar voor gebruik) 1 flesje van 2,9 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen 1 flesje van 2,0 ml anti menselijke gamma zware ketens (klaar voor gebruik) Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen 1 flesje van 2,0 ml anti menselijke alfa zware ketens (klaar voor gebruik) Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen 1 flesje van 2,0 ml anti menselijke mu zware ketens (klaar voor gebruik) Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke 1 flesje van 2,0 ml kappa (vrije en gebonden) lichte ketens (klaar voor gebruik) Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke 1 flesje van 2,0 ml lambda (vrije en gebonden) lichte ketens (klaar voor gebruik) Applicators (klaar voor gebruik) 1 pakje van 10 stuks 2 pakjes van 10 stuks 2 pakjes van 10 stuks 16 pakjes van 10 stuks 3 pakjes van 10 stuks 24 pakjes van 10 stuks Antisera-segmenten (klaar voor gebruik) 1 pakje van 10 stuks 1 pakje van 10 stuks 1 pakje van 10 stuks 8 pakjes van 10 velletjes Filterpapier - Dun 1 pakje van 10 velletjes 1 pakje van 10 velletjes 1 pakje van 10 velletjes 8 pakjes van 10 velletjes 

| Filterpapier - Dik | 1 pakje van 10 velletjes | 1 pakje van 10 velletjes | 1 pakje van 10 velletjes | 8 pakjes van 10 velletjes | 


- 32 - 

SEBIA INSTRUCTIEBLAD - Nederlands


OPMERKING: De fixeeroplossing en de antisera worden los van de kits geleverd, behalve bij de MAXI-KITS (zie BENODIGDE MAAR NIET 

BIJGELEVERDE REAGENTIA). 

VOOR OPTIMALE RESULTATEN 

Onderdelen uit dezelfde kit dienen altijd samen te worden gebruikt en in overeenstemming met de instructies op de bijsluiter. 

LEES DE GEBRUIKSAANWIJZING ALTIJD ZORGVULDIG DOOR. 

1. AGAROSE-GELS 

Voorbereiding 

De agarose-gels zijn klaar voor gebruik. Iedere gel bevat: agarose, 8 g/l ; tris-barbital buffer, pH 9,1 ± 0,1 ; in de gebruikte concentraties niet schadelijke 

toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De agarose-gels bevatten 0,31 % barbital en 0,34 % natriumbarbital. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! 

Gebruik 

Draagmedium voor elektroforese en immunofixatie van proteïnen. 

Opslag, stabiliteit en tekenen van verval 

De gels moeten horizontaal worden opgeslagen in de originele beschermende verpakking en kunnen bij kamertemperatuur (15 tot 30 °C) of gekoeld 

(bij 2 tot 8 °C) bewaard worden. De gels zijn stabiel tot de houdbaarheidsdatum die op de kit, of op het verpakkingslabel van de gel, staat aangegeven. 

(De pijl op de voorzijde van de verpakking moet naar boven wijzen.) Vermijd opslag dicht bij een raam of een warmtebron. Vermijd belangrijke 

temperatuurwisselingen tijdens de opslag. NIET INVRIEZEN. 

Verwijder de gel wanneer er: 

(I) 

zich kristallen of neerslag op het oppervlak van de gel vormen, of wanneer de textuur van de oppervlakte van de gel erg zacht wordt (dit geeft aan 

dat de gel bevroren is geweest) ; 

(II) bacteriële of schimmelgroei wordt waargenomen ; 

(III) een abnormale hoeveelheid vloeistof in de geldoos aanwezig is (wijst erop dat afscheiding van buffer uit de gel heeft plaatsgevonden tijdens onjuiste 

opslagomstandigheden). 

2. GEBUFFERDE STRIPS 

Voorbereiding 

Gebufferde sponsstrips zijn gereed voor gebruik. Elke strip bevat: tris-barbital buffer, pH 9,1 ± 0,3 ; natriumazide ; in de gebruikte concentraties niet 

schadelijke toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De gebufferde strips bevatten 0,92 % barbital, 1,03 % natriumbarbital en 0,30 % natriumazide. Niet voor inwendig 

gebruik! Bij abusievelijke inname dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Bij verwijdering contact met zuren, lood of koper 

vermijden aangezien deze explosieve of giftige verbindingen aangaan met natriumazide. 

Gebruik 

Gebufferde sponsstrips fungeren als bufferreservoir bij elektroforese en zorgen voor contact tussen de gel en de elektroden. 


Bewaar de gebufferde strips horizontaal in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur of in de koeling. (De pijl aan de voorkant van 

de kitdoos dient omhoog te wijzen.) 

De strips blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of de etiketten van de verpakking van 

de gebufferde strips. 

NIET INVRIEZEN. 

Gooi de gebufferde strips weg als de verpakking geopend is en de strips uitdrogen. 

3. VERDUNNER VOOR DE KLEUROPLOSSING (bij productnummer 4308) 

Bereiding 

De voorraad verdunner voor de kleuroplossing moet toegepast worden volgens de beschrijving in de paragraaf "AMIDOZWART KLEUROPLOSSING". 

Het bevat een zure oplossing. 

Toepassing 

Bij de preparatie van de amidozwart kleuroplossing. 


De voorraad verdunner voor de kleuroplossing wordt bewaard bij kamertemperatuur of gekoeld. De verdunner is stabiel tot de houdbaarheidsdatum 

zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op de labels van de flesjes met verdunner voor de kleuroplossing. DIT PRODUCT NIET 

INVRIEZEN! 

Geen natriumazide toevoegen. 

4. AMIDOZWART KLEUROPLOSSING (bij productnummer 4308) 

Bereiding 

De geconcentreerde amidozwart kleuringoplossing is een viskeuze oplossing die kan geleren. De integriteit van de basisoplossing wordt niet beïnvloed 

door de toename van de viscositeit of de hardwording. 

In alle gevallen adviseren wij u de hieronder beschreven procedure te volgen om de perfecte kleuring te behouden: 

1. Voeg 15 ml verdunningsmiddel aan het flesje met geconcerteerd amidozwart toe. 

2. Sluit het flesje zorgvuldig. 

3. Schut het flesje nu stevig gedurende ongeveer 5 seconden. 

4. Giet de oplossing in de houder van waaruit de kleuroplossing verwerkt wordt. 

5. Herhaal deze stap tweemaal, zo nodig driemaal. 

6. Giet de resterende verdunner in de houder en vul het volume aan tot 300 ml met gedestilleerd of gedeioniseerd water. 

7. Meng de inhoud van de cubitainer stevig gedurende 5 tot 10 minuten. 

De kleuringoplossing is nu gereed voor gebruik. 

OPMERKING : Een onvolledige oplossing van de kleurstof zal een onvolledige kleuring van de albuminefractie opleveren (een laag percentage of een 

wit gat in de fractie). 

Na verdunning bevat de werkzame verdunde kleuroplossing: zuuroplossing pH ≈ 2 ; amidozwart, 0.4 g/dl ; ethyleenglycol, 6.7 % ; additieven, 

ongevaarlijk bij te toegepaste concentraties die nodig zijn voor optimale werking. 

WAARSCHUWING: Schadelijk bij inname. 

Toepassing 

Bij het kleuren van gels tijdens elektroforetische proteïneseparatie. 

- 33 -


BELANGRIJK : De kleuroplossing is ontwikkeld voor het kleuren van een maximum van 10 gels. Na het kleuren van 10 gels dient u de oplossing te 

vervangen. 


Zowel de standaard als de gebruiksoplossingen dienen bij kamertemperatuur of gekoeld bewaard te worden in gesloten containers om verdamping 

te voorkomen. De standaard kleuroplossing is stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op het 

label van de flesjes met kleuroplossing. 

De gebruiksoplossing is gedurende 1 maand stabiel. 

De verdunde oplossing kleurstof niet in de buurt van een warmtebron bewaren. 

5. ZUURVIOLET KLEURSTOF (bij productnummer 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 en 4382) 

Voorbereiding 

Elk flesje kleurstofconcentraat wordt verdund tot 300 ml met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. Na verdunning bevat de werkzame kleuringoplossing: 

zuuroplossing pH ≈ 2 ; zuurviolet, 2 g/l ; ethyleenglycol, 3.25 % ; additieven, in de gebruikte concentraties niet schadelijke toevoegingen die noodzakelijk 

zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING : Inname is schadelijk. 

Gebruik 

Voor het kleuren van gels na elektroforetische proteïnenscheiding en immunofixatie. 

BELANGRIJK: De kleuringsoplossing is bedoeld voor het kleuren van slechts 10 gels. Vervang de oplossing na 10 kleuringsfases. 


Zowel de concentraat- als de verdunde kleuroplossingen bij kamertemperatuur of gekoeld in afgesloten flessen opslaan om verdamping te voorkomen. 

De concentraat-kleurstofoplossing blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de kit of de labels op de flesjes met kleuroplossing. 

De verdunde kleuroplossing blijft 6 maanden stabiel. 

6. VERDUNNER 

Voorbereiding 

De verdunner is klaar voor gebruik. Het bevat: alkalische buffer, pH 7,5 ± 0,3 ; bromofenol-blauw ; in de gebruikte concentraties niet schadelijke 

toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

Gebruik 

Voor de verdunning van monsters. Het bromofenol-blauw dient voor het gemakkelijk aanbrengen en voor het toetsen van de kwaliteit van de migratie. 


De verdunner bij kamertemperatuur of gekoeld opslaan. De oplossing blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de kit of de labels 

op de flesjes verdunner. 

De verdunner mag niet precipiteren. 

7. PAKKET MET ANTISERA EN FIXEEROPLOSSING (bij productnummer 4381 en 4382) 

7.1. ANTISERA 

Voorbereiding 

Klaar voor gebruik. Alle antisera zijn afkomstig van zoogdieren en zijn totaal anti menselijke immuunglobulinen. Voor eenvoudige identificatie van 

antisera en als hulpmiddel bij het toezien op de applicatie ervan worden de antisera gekleurd met duidelijk te onderscheiden, niet-schadelijke 

kleurstoffen die overeenkomen met de kleur van het etiket op het flesje. Wanneer antiserum een lichte vertroebeling vertoont, kunt u het flesje antiserum 

gedurende ten minste 10 minuten bij kamertemperatuur laten staan. Dit zou voldoende moeten zijn om de oplossing weer helder te krijgen. Blijft de 

vertroebeling evenwel bestaan, dan zal dit desondanks geen enkel effect hebben op de immunologische reactie. In het geval van onoplosbare 

precipitaten geldt de aanbeveling de antisera gedurende 5 minuten te centrifugeren bij 3000 toeren per minuut. 

Gebruik 

Voor immunofixatie van de elektroforetisch behandelde proteïnen. 

Antisera kunnen afkomstig zijn van verschillende diersoorten. De inhoud van twee flesjes antisera mag dan ook NOOIT vermengd worden, zelfs niet 

wanneer ze dezelfde specificiteit hebben, en bij het verwisselen van flesjes antiserum dient ALTIJD het pipetpuntje vervangen te worden. 

BELANGRIJK: Opdat de verschillende reagentia niet met elkaar in contact zouden komen, moet men na gebruik de dop terug op de respectievelijke 

flacon zetten. 


Bewaar de antisera in de koeling (bij een temperatuur van 2 tot 8 °C). Ze blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op 

de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes antisera. 

OPMERKING: Tijdens transport kunnen de antisera gedurende 15 dagen ongekoeld bewaard worden (bij een temperatuur van 15 tot 30 °C) zonder 

nadelige effecten op de prestaties. 

7.2. FIXEEROPLOSSING 

Voorbereiding 

De fixeeroplossing is klaar voor gebruik. Het bevat: een zure oplossing; toevoegingen, niet schadelijk in de gebruikte concentraties maar noodzakelijk 

voor optimale prestaties. Voor eenvoudige identificatie en als hulpmiddel bij het toezien op de applicatie is de fixeeroplossing gekleurd met een nietschadelijke 

kleurstof. 

Gebruik 

Voor het fixeren van elektroforetisch gescheiden proteïnen in het referentiespoor (ELP). 

BELANGRIJK: Opdat de verschillende reagentia niet met elkaar in contact zouden komen, moet men na gebruik de dop terug op de respectievelijke 

flacon zetten. 


Bewaar de fixeeroplossing bij kamertemperatuur of in de koeling. Het blijft stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de 

verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes fixeeroplossing. 

Fixeeroplossing dient vrij te zijn van precipitaat. 

8. APPLICATORS 

Gebruik 

Voorgesneden applicators, voor eenmalig gebruik, voor het aanbrengen van de monsters op de gel. 

Opslag 

Bewaar de applicators op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

- 34 -

9. ANTISERA-SEGMENTEN 

Gebruik 

Gekleurde segmenten voor eenmalig gebruik voor het aanbrengen van fixeeroplossing en antisera op de gel voor immunofixatie. 

WAARSCHUWING: Segmenten met antisera dienen met uiterste zorgvuldigheid behandeld te worden. 


10. FILTERPAPIER - DUN 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het absorberen van overtollige vloeistof van het oppervlak van de gel net voor het aanbrengen van de 

monsters. 

Opslag 

Bewaar de dunne velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

11. FILTERPAPIER - DIK 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het opdeppen van niet-geprecipiteerde proteïnen na de immunofixatiefase. 

Opslag 

Bewaar de dikke velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

BENODIGDE, NIET BIJGELEVERDE REAGENTIA 

1. PAKKET MET ANTISERA EN FIXEEROPLOSSING (voor de kits met de nummers 4301, 4302, 4304, 4308 en 4309) 

Het pakket met antisera en fixeeroplossing, SEBIA, productnummer 4315, bevat 5 flesjes antisera en 1 flesje fixeeroplossing, elk met een inhoud van 

1 ml. Deze zijn specifiek bedoeld voor de immunofixatieprocedure met het dynamisch masker. 

1.1 ANTISERA 

Zie de voorgaande paragraaf 7.1. 

1.2 FIXEEROPLOSSING 

Zie de voorgaande paragraaf 7.2. 

2. ONTKLEURINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Elk flesje ontkleuringsoplossing (SEBIA, prod. nr. 4540, 10 flesjes, 100 ml elk) wordt verdund tot 100 liter met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. Het 

is praktisch om een verdunning van een klein deel van het concentraat aan te maken, bijvoorbeeld 5 ml concentraat te verdunnen tot 5 liter, de inhoud 

van de container voor de ontkleuringsoplossing. Na verdunning bevat de ontkleuringsoplossing: citroenzuur, 0,5 g/l. 

Gebruik 

Voor het ontkleuren van gels, dat wil zeggen het verwijderen van overtollige en achtergrondkleurstof van de gels. 

Voor het spoelen van het kleurcompartiment na de wasstap. 

Giet om de zuurgraad van de vlekkenoplosser te neutraliseren 15 mL van een 50 % Sodium Hydroxyde-oplossing in de lege afvalbak. 


De concentraat-ontkleuringsoplossing blijft, bij kamertemperatuur of gekoeld, stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de kit of de labels 

op de flesjes met ontkleuringsoplossing. De verdunde ontkleuringsoplossing is, in een afgesloten fles en bij kamertemperatuur, gedurende 1 week 

stabiel. Geen natriumazide toevoegen. 

Verwijder de verdunde ontkleuringsoplossing zodra er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting 

met microben. 

Om te voorkomen dat micro-organismen zich kunnen verspreiden in de verdunde ontkleuringsoplossing wanneer deze langer dan een week bewaard 

moet worden, kunt u er 5 µL/dL ProClin 300 aan toevoegen. 

De verdunde, ProClin bevattende ontkleuringsoplossing blijft, indien bewaard in een afgesloten fles bij kamertemperatuur of in de koeling, stabiel tot 

aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes ontkleuringsoplossing. 

3. HYDRASYS SPOELOPLOSSING 

Voorbereiding 

Ieder flesje geconcentreerde HYDRASYS Spoeloplossing (SEBIA, prod. nr. 4541, 10 flesjes, 80 ml elk) wordt verdund tot 5 liter met gedestilleerd of 

gedeïoniseerd water. 

Na verdunning bevat de spoeloplossing: alkalische buffer, pH 8,8 ± 0,3 ; natriumazide. 

WAARSCHUWING: De geconcentreerde spoeloplossing bevat 0,625 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Natriumazide kan explosieve of toxische verbindingen aangaan met zuren, lood en 

koper. na gebruik spoelen met ruime hoeveelheden water. 

Gebruik 

De HYDRASYS spoeloplossing is ontwikkeld voor het afspoelen van niet-geprecipiteerde proteïnen van het geloppervlak na immunofixatie. 

De HYDRASYS spoeloplossing dient tevens voor het regelmatig spoelen van het HYDRASYS Kleuringscompartiment. Gebruik periodiek, d.w.z. als het 

instrument dagelijks wordt gebruikt spoelt u het kleuringscompartiment wekelijks. 

Voor verdere instructies met betrekking tot het gebruik wordt u verwezen naar de bijsluiter in de verpakking. 


De geconcentreerde oplossing en de verdunde oplossing in gesloten containers bewaren bij kamertemperatuur of gekoeld. De oplossingen blijven 

stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de kit of de labels op de flesjes met spoeloplossing. Verwijder de verdunde spoeloplossing 

zodra hij van aspect verandert, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

4. FLUIDIL 

Voorbereiding 

Fluidil (SEBIA, prod. nr. 4587, 1 flesje, 5 ml) is gereed voor gebruik. 

Gebruik 

Voor de verdunning van viskeuze of troebele monsters, bijvoorbeeld sera die cryoglobuline of cryogel bevatten. 


Bewaren bij kamertemperatuur. Blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de labels op de flesjes met Fluidil. 

Het Fluidil moet vrij van neerslag zijn. 

- 35 -


BENODIGDE UITRUSTING EN ACCESSOIRES 

1. HYDRASYS Systeem SEBIA, prod. nr. 1210 of prod. nr. 1211. 

2. Micro-pipet, voor handmatig dan wel automatisch gebruik, zoals bijvoorbeeld de HYDRAplus SEBIA, prod. nr. 1215, als extra keuzemogelijkheid 

voor het vullen van de monsterapplicators of antisera-segmenten. 

3. Vochtige kamer, prod. nr. 1270, geleverd met HYDRASYS. 

4. Container Kit, geleverd met HYDRASYS. 

5. Malgeleidestaaf SEBIA, geleverd met HYDRASYS. 

6. Dynamisch masker, SEBIA, productnummer 1255. 

7. Pipetten: 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl en 200 µl. 

MONSTERS VOOR ANALYSE 

Verzameling en opslag van monsters 

Voor de analyse wordt het gebruik van verse monsters aanbevolen. Serum en urine dienen te worden verzameld overeenkomstig de vastgestelde 

procedures zoals die worden gehanteerd bij klinische laboratoriumproeven. Na het verzamelen dienen de monsters zo snel mogelijk in de koeling 

geplaatst te worden (bij een temperatuur van 2 tot 8 °C), waar ze gedurende maximaal één week bewaard kunnen worden. Voor langduriger 

opslagperiodes kunnen de monsters ingevroren bewaard worden (ingevroren monsters blijven ten minste één maand stabiel). 

Ingevroren serummonsters met natriumazide, 0,02 g/dl, of ingevroren urinemonsters met HEPES 0,1 M (pH 6,75) en/of natriumazide, 0,02 g/dl, blijven 

ten minste 3 maanden stabiel. 

BELANGRIJK: Vermijd boorzuur en andere zuren als conserveermiddel voor urine. 

Ontdooide monsters kunnen lichte applicatiesporen vertonen als gevolg van proteïne- of lipoproteïnedenaturatie. 

Voorbereiding van de monsters 

1. Serummonsters 

Prepareer 1 monster voor HYDRAGEL 1 IF, 2 of 4 monsters voor HYDRAGEL IF 2/4 afhankelijk van de kit, en 9 monsters voor HYDRAGEL 9 IF. 

Om te vermijden dat zich zone-fenomenen voordoen door te hoge antigeenniveaus, moeten de monsters vóór applicatie als volgt verdund worden: 

| SPOOR | SERUM (µl) | VERDUNNINGSMIDDEL (µl) | 

| Ig G Immunofixatiespoor | 20 | 100 | 

| ELP-referentiespoor en alle andere immunofixatiesporen | 30 | 60 | 

Speciale gevallen 

• Als het totale immuunglobulineniveau > 2 g/dl is (hypergammaglobulinemie), wordt aanbevolen hogere verdunningen van de monsters te 

gebruiken (behalve voor het ELP-spoor) om normale immuunglobulineconcentraties te verkrijgen. 

• Als het totale immuunglobulineniveau < 0,5 g/dl is (hypogammaglobulinemie), wordt aanbevolen lagere verdunningen van de monsters te 

gebruiken. 

• Het serum- of urinemonster van de patiënt kan ook worden getest op de aanwezigheid van Bence Jones-proteïnen; in dat geval wordt 

aanbevolen het migratieprogramma "BENCE JONES" te gebruiken. 

Het monster dient getest te worden met de IF-kit en met anti-kappa vrije lichte ketens (SEBIA, productnummer 4370) en anti-lambda vrije lichte 

ketens (SEBIA, productnummer 4371) of met een HYDRAGEL 1, 2, 4 of 9 BENCE JONES-kit (SEBIA, productnummer 4321, 4322, 4324 of 

4329). 

In dit geval kunt u het serum verdunnen in fysiologische zoutoplossing of in verdunningsmiddel voor immunofixatie dat van tevoren is verdund 

in de verhouding 1/4 (1 deel verdunningsmiddel, 3 delen gedestilleerd of gedeïoniseerd water) 1/10 voor ELP, GAM, K en L sporen (1 deel 

serum, 9 delen verdund verdunningsmiddel of fysiologische zoutoplossing) en 1/3 (1 deel serum, 2 delen verdund verdunningsmiddel of 

fysiologische zoutoplossing) voor Kf en Lf sporen. 

Als het totale immuunglobulineniveau < 0,5 g/dl is, wordt aanbevolen het serummonster minder te verdunnen; bijvoorbeeld 1/5 voor ELP, GAM, 

K en L sporen, en 1/2 voor Kf en Lf sporen. 

• Na koelen of invriezen kunnen sommige sera (met name die sera die cryoglobuline of cryogel bevatten) stroperig worden of kan er vertroebeling 

in ontstaan. Zulke sera zouden applicatieproblemen kunnen geven vanwege een bemoeilijkte diffusie door de tandjes van de monsterapplicator. 

In zo’n geval kunt u 25 µl Fluidil toevoegen aan 75 µl serum en dit gedurende 15 seconden mixen in de vortexmixer. Volg daarna de 

standaardprocedure. 

• Sommige monoklonale proteïnen kunnen polymeriseren, waardoor er een "monoklonale fractie" verschijnt op alle geïmmunofixeerde sporen. 

In dit geval kunt u als volgt te werk gaan: (I) prepareer 1% bèta-mercapto-ethanol (BME, of 2-mercapto-ethanol, 2 ME) in Fluidil, (II) voeg 25 µl 

van deze reductie-oplossing toe aan 75 µl puur serum, (III) mix dit in de vortexmixer en wacht ten minste 15 minuten (15 minuten minimum, 

30 minuten maximum), en volg daarna de standaardprocedure. 

• Voor de analyse van Ig D en/of Ig E kunt u dezelfde verdunningen hanteren als voor kappa en lambda vrije en gebonden lichte ketens. 

2. Geconcentreerde urines 

De meeste urinemonsters dienen geconcentreerd te zijn. Breng geconcentreerde urine aan in alle sporen. Concentreer urine (met een daartoe 

bestemd apparaat) tot een totale proteïneconcentratie van ≥ 0,5 g/dl of een totale Ig van ongeveer 0,1 g/dl. Zijn de urineproteïne- of Ig-concentraties 

niet bekend, concentreer dan 20x - 100x. 

BELANGRIJK: Sommige urines hebben een hoog zoutgehalte. Dit kan tijdens de migratie leiden tot gel-deformatie, en bijgevolg tot vertekening 

van de migratieprofielen. Indien door een dergelijke vertekening de interpretatie onnauwkeurig wordt, dient de urine te worden gedialyseerd om 

de zouten te verwijderen. 

Diffusie van de urinemonsters in de applicatorpuntjes kan worden bemoeilijkt wanneer de urine (puur of geconcentreerd) troebel is. Hierbij geldt 

de aanbeveling om de partikeltjes te verwijderen door middel van centrifugatie (b.v. 10 minuten bij 3.000 tpm) of filtratie (b.v. 0,45 µm 

injectiespuitfilter). 

De gevoeligheid bij urineproeven kan worden verhoogd door de monsterapplicatie- en antisera-incubatietijd te verhogen door middel van het 

migratieprogramma "BENCE JONES". De detectielimiet komt dan overeen met 1 - 5 mg/dl monoklonale proteïne. Afhankelijk van de proteïne kan 

urine ongeconcentreerd worden getest of geconcentreerd tot maximaal 25 x. 

OPMERKING: Pogingen om de gevoeligheid van de test te verhogen door te concentreren tot een hogere concentratiegraad of door lukraak 

urinemonsters te concentreren tot een hoge concentratiegraad, dienen met grote omzichtigheid te worden overwogen. Het gebruik van al te zeer 

geconcentreerde urinemonsters leidt vaak tot de formering van valse banden. Dergelijke monsters moeten misschien opnieuw worden getest bij 

lagere concentraties. 

- 36 -


Speciaal geval 

De lichte ketens in urine hebben de neiging te polymeriseren en aggregaten te vormen. Als hierdoor de interpretatie van de resultaten in gevaar 

wordt gebracht, dienen de lichteketenpolymeren te worden gedepolymeriseerd: (I) mix 1 volume BME met 9 volumes water (b.v. 5 µl BME en 

45 µl water), (II) voeg 5 µl van de verdunde BME toe aan 100 µl urine, mix dit goed en gebruik het zonder verdere monsterverdunning. Ga 

vervolgens door met de standaard immunofixatie- of "BENCE JONES"-programma’s. 

Monsters die vermeden dienen te worden 

• Vermijd plasmamonsters. Fibrinogeen geeft een band te zien in het referentiespoor, vlak bij het applicatiepunt in de ß-zone, die zou kunnen worden 

aangezien voor een monoklonale proteïne. 

• Vermijd gehemolyseerde monsters. 

• Vermijd oude, op onzorgvuldige wijze bewaarde urinemonsters waarin zich enzymatische afbraak van de proteïnen zou kunnen voordoen. 

PROCEDURE 

Het HYDRASYS systeem is een multiparameter-instrument. Tot de geautomatiseerde stappen behoort bewerking van HYDRAGEL agarose-gels in de 

volgende volgorde: applicatie van de monsters, elektroforetische migratie, incubatie met de reagentia, drogen, spoelen, kleuren, ontkleuren en een laatste 

droogfase. Tot de handmatige stappen behoren de voorbereiding van de monsters en de gel, en het in werking stellen van de automatische fasen. 

LEES HET HYDRASYS-INSTRUCTIEHANDBOEK NAUWKEURIG. 

I. VOORBEREIDING VAN DE MIGRATIE 

1. Schakel het HYDRASYS instrument in. 

2. Plaats één applicator voor HYDRAGEL 1 IF of HYDRAGEL IF 2/4 (2 monsters), twee applicators voor HYDRAGEL IF 2/4 (4 monsters) of drie 

applicators voor HYDRAGEL 9 IF, op een vlakke ondergrond met de holtenummers met de goede kant naar boven (Fig. 1). 

- Breng 10 µl correct verdund serum of geconcentreerde urine als volgt aan in de applicatorholtes. Vul alle applicators binnen 2 minuten. 

| MIGRATIE / IMMUNOFIXATIESPOOR | 

HOLTEN NRS. ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 MONSTER Nr. 1 OF 3 2 3 4 5 6 7 MONSTER Nr. 2 OF 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF MONSTER Nr. 1, 4 OF 7 1 2 3 4 5 6 MONSTER Nr. 2, 5 OF 8 7 8 9 10 11 12 

| MONSTER Nr. 3, 6 OF 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

OPMERKING: Voor HYDRAGEL IF 2/4 worden de holtes nr. 1, 8 en 15 niet gebruikt bij deze test; ze kunnen met een viltstift gemarkeerd worden 

om te voorkomen dat ze per ongeluk toch gevuld worden met monsterstof. 

- Plaats de applicator(s) in de vochtige kamer, met de strips omhoog. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe van de strips. 

Voor verdere informatie wordt u naar de bijsluiter van de vochtige kamer verwezen. 

- Laat de monsters gedurende 5 minuten, na de applicatie van het laatste monster, in de strips trekken. Voor later gebruik (tot maximaal 8 uur 

later) houdt u de gehele kamer gekoeld. 

3. Open het deksel van de Migratiemodule en til de dragers van de elektroden en de applicators op. 

WAARSCHUWING: Sluit het deksel niet als de dragers nog omhoog staan. 

4. Selecteer het migratieprogramma "1 IF SM/DM" voor HYDRAGEL 1 IF, "2/4 IF SM/DM" voor HYDRAGEL IF 2/4 of "9 IF DM" voor HYDRAGEL 

9 IF, uit het menu van het instrument (linkerzijde van het toetsenpaneel). 

5. Neem de gebufferde strips uit de verpakking ; manipuleer deze aan de plastic uiteinden. Druk de geperforeerde uiteinden van de plastic 

achterzijde van de strips over de pinnen op de elektrodedrager ; de plastic achterzijden van de strips moeten in de richting van de drager 

liggen (Fig. 2). 

6. Pak de HYDRAGEL agarose-gel uit : 

- Rol het dunne filterpapier snel en gelijkmatig uit over het oppervlak van de gel zodat het teveel aan vloeistof geabsorbeerd kan worden. 

Verwijder het filter papier direct. 

WAARSCHUWING : Laat het filterpapier niet te lang in contact met de gel om dehydratatie te voorkomen! 

- Giet 120 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor HYDRAGEL 1 IF of 200 µl voor HYDRAGEL IF 2/4 en HYDRAGEL 9 IF op het 

onderste derde deel van het frame zoals afgedrukt op de temperatuurcontroleplaat van de migratiemodule. 

- Plaats de gelplaat (met de gelzijde omhoog) met de rand tegen de begrenzer aan de onderzijde van het afgedrukte frame (Fig. 3). 

- Buig de gel en breng deze naar beneden op het water (Fig. 3). Zorg ervoor dat er geen luchtbellen worden ingesloten, dat het water zich 

onder de gehele gelplaat verspreidt (Fig. 3), en dat de gel parallel met het afgedrukte frame ligt. 

7. Breng beide dragers omlaag. In deze positie raken de gebufferde strips de gel niet. FORCEER DE DRAGERS NIET HELEMAAL NAAR 

BENEDEN. 

8. Haal de applicator(s) uit de vochtige kamer. Manipuleer ze aan het plastic beschermframe. 

- Plaats de applicator(s) op de drager: 

- bij HYDRAGEL 1 IF of HYDRAGEL IF 2/4 (2 monsters) in positie Nr. 6, 

- bij HYDRAGEL IF 2/4 (4 monsters) in positie Nr. 3 en 9, 

- bij HYDRAGEL 9 IF in positie Nr. 2, 6 en 10. 

BELANGRIJK: De nummers die op de applicator(s) zijn geprint moeten steeds door de bediener gelezen kunnen worden (Fig. 4). 

Voor een betere reproduceerbaarheid van de monsterapplicatie dienen de applicators altijd aan de linkerzijde van de drager gepositioneerd te 

worden. 

9. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

10. Start de procedure ogenblikkelijk door het indrukken van de "START"-knop (groene pijl aan de linkerzijde van het bedieningspaneel). 

BELANGRIJK: Zorg ervoor dat de ventilatieopening aan de rechterzijde van het instrument niet geblokkeerd is. 

- 37 -


MIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE FASEN 

• De beide dragers worden omlaag gebracht zodat de gebufferde strips en applicator(s) in contact komen met de gel. 

• De drager van de monsterapplicator komt omhoog. 

• De migratie wordt uitgevoerd onder 10 W constant voor HYDRAGEL 1 IF en onder 20 W constant voor HYDRAGEL IF 2/4, totdat 42 Vh is bereikt 

(gedurende ongeveer 9 minuten) en onder 20 W constant totdat 36 Vh is bereikt (gedurende ongeveer 7 minuten) voor HYDRAGEL 9 IF, bij 20 °C 

gecontroleerd door het Peltier-effect. 

• De elektrodedrager komt omhoog zodat de elektroden uitgeschakeld worden. 

• Een hoorbaar piepsignaal geeft aan dat het deksel van de module ontsloten wordt. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: " AS". 

OPMERKING: Gedurende alle migratiestappen blijft het deksel van de migratiemodule vergrendeld. 

II. SET-UP VAN DE IMMUNOFIXATIE 

Het dynamisch masker bevat een referentiewijzer in kleur voor het aanbrengen van reagentia, een antiserasegment, een segmenthouder, een geleider 

voor het dynamisch masker en een apparaat om de lengte in te korten (Fig. 5). 

Tijdens de migratie zet u het dynamisch masker als volgt in elkaar: 

1. Plaats de geleider voor het dynamisch masker op een vlakke ondergrond. 

BELANGRIJK: Voor de analyse van een of twee monsters is het noodzakelijk om een apparaat voor het inkorten van de lengte op de geleider 

voor het dynamisch masker te positioneren. 

2. Stel een antiserasegment op op de segmenthouder (Fig. 6): 

- Houd het antiserasegment schuin onder een hoek van 45° en positioneer het tegen de plastic veren van de segmenthouder. 

- Trek de twee elementen uit elkaar en draai het segment om zijn as om het te bevestigen in de inkepingen van de segmenthouder. 

WAARSCHUWING: Wees er zeker van dat het segment correct gepositioneerd is op de houder: de pinnetjes aan de uiteinden van 

het segment dienen in de inkepingen van de houder vast te zitten. 

3. Stel de houder met het segment op op de geleider van het dynamisch masker (Fig. 7). Zet daarna de gekleurde referentiewijzer voor het 

aanbrengen van reagentia, corresponderend met de te analyseren test, op de segmenthouder vóór de segmentholtes (Fig. 8). 

4. Breng de reagentia als volgt aan: 

- Antiserasegment met 6 holtes voor HYDRAGEL 1 IF: 8 µl per holte, 

- Antiserasegment met 15 holtes voor HYDRAGEL IF 2/4: 8 µl per holte voor de analyse van 2 monsters, 

12 µl per holte voor de analyse van 4 monsters, 

- Antiserasegment met 18 holtes voor HYDRAGEL 9 IF: 8 µl per holte. 

GOOT REAGENS KLEUR ELP fixeeroplossing geel G anti-gamma zware ketens antiserum roze A anti-alfa zware ketens antiserum donkerblauw M anti-mu zware ketens antiserum geelgroen K anti-kappa lichte ketens (vrij en gebonden) antiserum lichtgroen 

| L | anti-lambda lichte ketens (vrij en gebonden) antiserum | lichtblauw | 

OPMERKING: De reagentia zijn gekleurd en de kleuren zijn terug te vinden op de gekleurde referentiewijzer om u behulpzaam te zijn bij het 

pipetteren van de correcte antisera. 

BELANGRIJK: Gebruik voor HYDRAGEL IF 2/4 geen antiserasegmentholtes in positie 1, 8 en 15. 

Zuig de reagentia op en vermijd daarbij zorgvuldig dat er luchtbelletjes in het puntje van de pipet komen. 

Breng de reagentia aan (Fig. 9): 

- Houd de pipet schuin en laat het puntje lichtjes rusten op de zijkant van de holte, zonder dat het de bodem van de holte raakt. 

- Injecteer het druppeltje reagens in de holte. 

5. Haal de gekleurde referentiewijzer weer weg. 

III. IMMUNOFIXATIE 

1. Open het deksel van de migratiemodule. 

2. Verwijder de monsterapplicator(s) en gooi deze weg. 

3. Til beide dragers omhoog, verwijder de gebufferde strips aan hun plastic uiteinden en gooi ze weg. 

- Verwijder beide dragers. 

- Veeg de elektroden af met een zachte, vochtige tissue. 

- Laat de gel op zijn plaats staan in de migratiemodule. 

4. Het dynamisch masker dient nu als volgt te worden opgesteld voor het aanbrengen van de reagentia (Fig. 10): 

- Positioneer de maskergeleider op de ankerklem (de geleider mag de hele tijd in de migratiemodule blijven). 

- Houd het dynamisch masker vast aan het lipje en positioneer het in de geleider, waarbij de inkepingen aan dienen te sluiten bij de 

markeringen. 

- Laat het dynamisch masker zakken op de HYDRASYS-plaat. 

BELANGRIJK: Stel de positie van het dynamisch masker zo bij dat er een perfecte aansluiting ontstaat tussen de elektroforetische profielen 

en de holtes van het masker. 

5. Plaats de segmenthouder op het laagste punt op de maskergeleider, met de voorzijde naar de bediener. 

Houd de segmenthouder vast aan de handgreep die zich aan de rechterzijde ervan bevindt, en druk op het centrale drukpunt zodat het 

antiserasegment contact maakt met de gel. Laat het drukpunt los; de reagentia zullen zich nu onder alle sporen verspreiden (Fig. 11). 

6. Beweeg nu meteen, met behulp van de handgreep van de segmenthouder, het segment langzaam en gelijkmatig op en neer over de hele 

lengte van de gel om de reagentia aan te brengen. De applicatie zal zo ongeveer 5 seconden in beslag nemen (Fig. 12). 

WAARSCHUWING: Tijdens deze fase houdt u het masker slechts vast aan de handgreep van de segmenthouder. Vermijd het 

aanraken van de geleider. Druk niet opnieuw op het drukpunt, aangezien dit zou kunnen leiden tot een in elkaar overlopen van 

reagentia. 

- 38 -


7. Verwijder de geleider en het dynamisch masker. 

- Verwijder de segmenthouder aan zijn handgreep. 

- Verwijder het antiserasegment uit de houder en gooi het weg. 

WAARSCHUWING: Segmenten met antisera dienen met uiterste zorgvuldigheid behandeld te worden. 

- Achterblijvende reagentia kunnen na de applicatie in de holtes blijven. Dit heeft geen effect op de testresultaten. 


9. Start de procedure onmiddellijk door op de groene pijl te drukken, de "START"-knop aan de linkerzijde van het toetsenpaneel. Op het scherm 

verschijnt het bericht "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE STAPPEN 

• Incubatie bij 20 °C gedurende 5 minuten (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Een hoorbaar piepsignaal geeft aan dat het deksel van de migratiemodule ontgrendeld wordt. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: 

" PAP.". 

OPMERKING: Tijdens de incubatie blijft het deksel van de migratiemodule vergrendeld. 

IV. AFDEPPEN VAN DE GEL 


2. Breng een dik velletje filterpapier aan op de gel: 

- zorg ervoor dat de rand van het filterpapier gelijk ligt met de rand van de gel (buig het om in een hoek van 45°) en laat het voorzichtig op 

de gel zakken. 

BELANGRIJK: Druk stevig op het hele oppervlak van het filterpapier om ervoor te zorgen dat het zich overal goed aan de gel hecht. 


4. Start de procedure door op de "START"-knop te drukken (groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenpaneel). 

AFDEPPEN - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE STAPPEN 

• Afdeppen bij 40 °C gecontroleerd door het Peltier-effect, gedurende 3 minuten. 

Het volgende bericht verschijnt op het scherm: "[BLOTTING]". 

• Er klinkt een hoorbaar piepsignaal. 

Het volgende bericht verschijnt op het scherm: "❊ PAP.". 

V. DROGEN VAN DE GEL 


2. Verwijder het filterpapier en laat de gel op zijn plaats. 


4. Start de procedure door het indrukken van de "START"-knop (groene pijl aan de linkerzijde van het bedieningspaneel). 

HET DROGEN VAN DE GEL - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE FASEN 

• Bij 50 °C gedurende 6 minuten drogen (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Er klinkt een signaaltoon, en de veiligheidsvergrendeling van het deksel van de migratiemodule wordt ontsloten. De temperatuur van de plaat blijft 

50 °C totdat het deksel wordt geopend. Op het scherm ziet u staan: "Migratietemp. blijft gehandhaafd". 

OPMERKING: Het deksel van de migratiemodule blijft gedurende de gehele droogfase vergrendeld. 

VI. VOORBEREIDING VAN DE GELVERWERKINGSFASEN: SPOELEN, KLEUREN EN ONTKLEUREN 


2. Haal de gedroogde gelfilm eruit voor verdere bewerking. 

3. Open de gelhouder. Leg deze vlak, en plaats de gedroogde gel (met de gelkant naar boven gericht) in de spleten van de beide stangen. Sluit 

de houder. Zorg ervoor dat de film op de juiste wijze in de houder geplaatst is (Fig. 13). 

4. Plaats de gelhouder in de gelverwerkings-/ kleuringsmodule. 

BELANGRIJK: Voordat begonnen kan worden met het gelverwerkings-/ kleuringsprogramma, moet het volgende gecontroleerd worden: 

- de spoelcontainer is gevuld met 400 ml spoeloplossing ; 

- de kleuringscontainer is gevuld met 300 ml kleuringsoplossing ; 

- de ontkleuringscontainer bevat ten minste 1 liter ontkleuringsoplossing ; 

- de afvalcontainer is leeg. 

5. Selecteer het "IF ACID VIOLET" of "IF AMIDO" kleuringsprogramma uit het menu op het instrument. Stel de procedure in werking door het 

indrukken van de "START"-knop (groene pijl op de rechterzijde van het bedieningspaneel). 

Gedurende de kleur-, ontkleuren droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

OPMERKINGEN: 

- De temperatuur van de migratieplaat blijft dalen nadat het deksel geopend werd, tot een temperatuur van 20 °C is bereikt (in ongeveer 5 minuten). 

Dan kan met een nieuwe migratiecyclus begonnen worden. 

- Veeg de temperatuurcontroleplaat schoon met een vochtig doekje. 

- Breng de monsterapplicator en elektrodedragers terug in positie. 

VII. AFRONDING VAN DE GELVERWERKING 

1. Haal de gelhouder uit het compartiment ; open de gelhouder en haal de gedroogde gel eruit. 

2. Indien nodig kunt u de achterzijde van de gel (plastic steun) met een vochtig doekje schoonmaken. 

NOOT: Voor de gels met verschilende rijen (2 of 3) kunnen de migratielengtes aanzienlijk verschillen, zonder de resultaten te beïnvloeden. 

- 39 -


RESULTATEN 

Interpretatie 

1. Serummonster 

Afwezigheid van een monoclonale component 

• Een normaal serummonster geeft een licht gediffundeerde kleuring van polyclonale immunoglobulinen te zien in alle spleten. 

• Een hypergammaglobulinemie wordt gekarakteriseerd door een intens gekleurde, gediffundeerde zone en de afwezigheid van scherp 

begrensde banden. 

Aanwezigheid van een monoclonale component 

• De aanwezigheid van een monoclonale proteïne (gammopathie) wordt gekarakteriseerd door een monoclonale band, gedetecteerd met een van 

de anti-zware ketens anti-sera (gamma, alfa of mu) en ofwel met anti-kappa, of anti-lambda lichte ketens antiserum. De gedetecteerde 

monoclonale band, die typerend scherp begrensd is, moet op dezelfde migratie-afstand gelokaliseerd zijn als de band die in het referentie-spoor 

(ELP) werd waargenomen. 

• Het uitblijven van een reactie bij een van de aangebrachte anti-zwareketen antisera, waarbij wel een reactie optreedt met een van de lichte 

keten antisera, kan duiden op: 

a) een uiterst zeldzame Ig D- of Ig E-gammopathie, bevestigd door anti-delta of anti-epsilon zwareketen antisera, 

b) een lichteketen-gammopathie bevestigd door antisera anti-kappa of anti-lambda vrije lichte ketens. 

• Het niet waarnemen van een positieve reactie met een van de toegevoegde anti-lichte ketens antisera, terwijl een anti-zware ketens antiserum 

wèl reageert, kan een indicatie zijn voor een zeer zeldzame zware keten gammopathie (gamma, alfa of mu). 

Aanwezigheid van twee of meer monoclonale componenten 

In uitzonderlijke gevallen vermeerderen verschillende clonen van B-cellen zich, zoals blijkt uit de verschillende monoclonale banden die door 

immunofixatie worden aangetoond. 

• Een bi-clonale gammopathie wordt gekarakteriseerd door de aanwezigheid van twee banden van zware ketens (identiek of verschillend) en twee 

banden van lichte ketens (identiek of verschillend). 

• Gepolymeriseerde immuunglobulinen kenmerken zich door verscheidene (meestal twee) banden van hetzelfde type zware keten en één van 

hetzelfde type van de lichte keten. 

Om de aanwezigheid van een enkele monoklonale afwijking te kunnen bevestigen is het noodzakelijk om te depolymeriseren met bètamercapto-ethanol 

(BME of 2ME) en de immunofixatie te herhalen (zie "Monsters voor Analyse"). 

• Een oligoklonale gammopathie kenmerkt zich door de aanwezigheid van meerdere, doorgaans zwakke banden van een of meerdere types 

zware ketens en door een of twee types lichte ketens. 

Speciale gevallen 

• Als een monoclonaal type band bij de elektroforese van een serum wordt waargenomen (ELP-spoor) die echter niet door immunofixatie wordt 

bevestigd, dan moet fibrinogeen (plasmamonster) als eerste mogelijke oorzaak worden aangewezen. 

• Als een monoclonaal type band wordt waargenomen in alle immunofixatie-sporen, dan moet cryoglobuline of gepolymeriseerd Ig M als 

mogelijke oorzaak worden aangewezen. Depolymeriseren met een reducerende stof en de procedure herhalen (zie "Monsters voor Analyse"). 

2. Geconcentreerde urinemonster 

De interpretatieconcepten voor serum gelden op gelijke wijze voor die van urine-immunofixatiepatronen. 

• Een intacte monoclonale proteïne in urine wordt getypeerd door een monoclonale band die wordt opgespoord met een van de anti-zware keten 

antisera (gamma, alfa of mu) en met ofwel anti-kappa of anti-lambda lichte keten (vrij & gebonden) antiserum. De gedetecteerde monoclonale 

band, meestal een scherpe, duidelijk te onderscheiden band, moet zich bevinden op dezelfde migratie-afstand als de verdachte band die men 

aantreft in het referentiespoor (ELP). 

• Een vrije lichte keten, Bence Jones, wordt getypeerd door een monoclonaale band die gedetecteerd wordt met ofwel anti-kappa of anti-lambda 

lichte keten antiserum. Er zou dan in geen van de anti-zware keten antisera-sporen (gamma, alfa of mu) een positieve reactie te zien zijn. 

Interferentie en begrenzingen 

Zie MONSTERS TER ANALYSE. 

Het gebruik van andere antisera dan die welke specifiek bedoeld zijn voor de immunofixatieprocedure met het dynamisch masker, kan de resultaten 

nadelig beïnvloeden. 

Vanwege de resolutie- en gevoeligheidslimieten van zone-elektroforese is het mogelijk dat sommige monoklonale componenten met deze methode niet 

worden ontdekt. 

Troubleshooting 

Bel de technische dienst van de leverancier als de test mislukt terwijl u de instructies voor voorbereiding en opslag van materialen, en voor de 

procedure, nauwkeurig hebt gevolgd. 

Veiligheidsdatalijsten voor Kit-reagentia en informatie over de verwijdering van afvalproducten zijn tevens verkrijgbaar bij de technische dienst van de 

leverancier. 

PRESTATIEGEGEVENS 

Reproduceerbaarheid binnen een gel en specificiteit 

HYDRAGEL 4 IF-procedure 

De reproduceerbaarheid binnen een gel werd aangetoond op drie verschillende pathologische monsters: twee monsters met één hoog niveau aan 

monoklonale component en één monster met twee niveaus monoklonale componenten. Ieder monster werd viermaal getest op 2 partijen HYDRAGEL 

IF 2/4-gels met behulp van de zuurviolet kleuringsprocedure. 


De reproduceerbaarheid binnen een gel werd aangetoond op drie verschillende pathologische monsters, elk met één hoog niveau aan monoklonale 

component. Ieder monster werd negenmaal getest op 2 partijen HYDRAGEL 9 IF-gels met behulp van de zuurviolet kleuringsprocedure. 

Alle herhalingen gaven identieke resultaten te zien binnen een partij en tussen verschillende partijen, en overeenkomstig de verwachtingen voor het 

type geanalyseerde monsters. 

- 40 -


Reproduceerbaarheid tussen gels en specificiteit 


De reproduceerbaarheid tussen gels werd aangetoond op vier verschillende pathologische monsters met één of vele monoklonale componenten. 

Deze monsters werden getest op 10 HYDRAGEL IF 2/4-gels uit 3 verschillende partijen, met behulp van de zuurviolet kleuringsprocedure. 


De reproduceerbaarheid tussen gels werd aangetoond op negen verschillende pathologische monsters: twee monsters met één hoog niveau aan 

monoklonale component, één monster met twee lage niveaus aan monoklonale componenten, en één monster met één hoog en één laag niveau aan 

monoklonale component. 

Deze monsters werden getest op 10 HYDRAGEL 9 IF-gels uit 3 verschillende partijen, met behulp van de zuurviolet kleuringsprocedure. 

Alle herhalingen gaven identieke resultaten te zien van gel tot gel en overeenkomstig de verwachtingen voor het type geanalyseerde monsters. 

Nauwkeurigheid 

HYDRAGEL 4 IF-procedure met zuurviolet kleuring 

Drieënzeventig (73) verschillende pathologische serummonsters, elf (11) normale sera en twaalf (12) geconcentreerde urines werden getest met behulp 

van de HYDRAGEL IF 2/4-gels en een ander commercieel verkrijgbaar agarosegel-immunofixatiesysteem. 

HYDRAGEL 4 IF-procedure met amidozwart kleuring 

Achtentwintig (28) verschillende pathologische serummonsters en vier (4) normale sera werden getest met behulp van de HYDRAGEL IF 2/4-gels en 

een ander commercieel verkrijgbaar agarosegel-immunofixatiesysteem. 

HYDRAGEL 9 IF-procedure met zuurviolet kleuring 

Vijfennegentig (95) verschillende pathologische serummonsters, vier (4) normale sera en twaalf (12) geconcentreerde urines werden getest met behulp 

van de HYDRAGEL 9 IF-gels en een ander commercieel verkrijgbaar agarosegel-immunofixatiesysteem. 

In alle gevallen waren de resultaten verkregen met de SEBIA-tests identiek aan de resultaten verkregen met de vergelijkbare commercieel verkrijgbare 

procedure. 

Gevoeligheid 

Seriële verdunningen werden geprepareerd met 4 pathologische serummonsters die allemaal monoklonale componenten vertoonden, en deze werden 

geanalyseerd met de HYDRAGEL 4 IF-procedure. De zuurviolet en de amidozwart kleuringsprocedures werden beide getest. 

De resultaten worden onderstaand weergegeven. 

MONOKLONALE COMPONENT DETECTIELIMIET (mg/dl) MONSTER Nr. TYPE CONC. (g/dl) HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF ZUURVIOLET AMIDOZWART 1 gamma 1,09 12 12 kappa 12 12 2 gamma 0,78 12 / lambda 12 / 3 alpha 0,58 12 25 lambda 12 25 4 mu 0,34 12 12 

| | kappa | | 12 | 12 | 

Afhankelijk van de migratiepositie van de monoklonale component, het niveau van polyklonale achtergrond in de gammazone en de kleuringsprocedure, 

kan de detectielimiet variëren van 12 tot 25 mg/dl. 

BIBLIOGRAFIE 

Voor aanvullende informatie met betrekking tot de interpretatie van immunofixatiepatronen wordt verwezen naar: 

(1) Le Carrer Didier, "Serum Protein Electrophoresis and Immunofixation, Illustrated Interpretations", SEBIA Laboratories, 1994, Hatier - Paris. 

(2) Keren D.F., "High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation", Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

1994, 397 pp. 

- 41 -


UTILIZZO 

I kits HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF e 9 IF sono destinati al rilevamento delle proteine monoclonali nel siero umano e nelle urine mediante 

immunofissazione. I kits sono usati in combinazione con il sistema semi-automatico per elettroforesi HYDRASYS. Le proteine, separate mediante 

elettroforesi su gel di agarosio tamponato in mezzo alcalino, sono incubate con singoli antisieri rispettivamente specifici anti catene pesanti gamma 

(Ig G), alfa (Ig A) e mu (Ig M) ed anti catene leggere kappa e lambda (libere e legate). Dopo la rimozione delle proteine che non hanno reagito, gli 

immunoprecipitati sono colorati con violetto acido o con amidoschwarz. Gli elettroforegrammi sono interpretati visivamente per valutare la presenza di 

reazioni specifiche con le sospette proteine monoclonali. 

Ogni gel di agarosio permette di processare: 

- un campione con il kit HYDRAGEL 1 IF, 

- due campioni con il kit HYDRAGEL 2 IF, 

- quattro campioni con il kit HYDRAGEL 4 IF, 

- nove campioni con il kit HYDRAGEL 9 IF. 

Per soddisfare le esigenze dei diversi utilizzatori, il kit HYDRAGEL 4 IF è disponibile sia con violetto acido sia con amidoschwarz. 

Per uso diagnostico in vitro. 

PRINCIPIO DEL METODO 

Bande anomale nei quadri elettroforetici di siero e urine, in particolare nella zona delle beta-globuline e delle gamma-globuline, sono sempre presunte 

proteine monoclonali (M-proteine, paraproteine o immunoglobuline moclonali) e pertanto un indizio di gammapatie monoclonali. Per identificare tali 

bande anomale si utilizza la tecnica dell’immunofissazione. L’immunofissazione elettroforetica è una semplice tecnica che permette di fissare una 

proteina in situ, formando con gli anticorpi un complesso insolubile. 

La tecnica, semplice da interpretare, è facilmente eseguibile in quattro fasi: 

1. Separazione delle proteine mediante elettroforesi su gel di agarosio. 

2. Immunofissazione (immunoprecipitazione) delle proteine migrate. Sulle appropriate corsie di migrazione sono stratificati singoli antisieri. Gli antisieri 

diffondono nel gel precipitando, quando presenti, i corrispondenti antigeni. Le proteine della pista del riferimento sono fissate con una soluzione 

fissativa. 

3. Le proteine non precipitate, quindi solubili, sono rimosse dal gel mediante assorbimento e lavaggio. Il complesso antigene-anticorpo precipitato è 

intrappolato all’interno della matrice del gel. 

4. Le proteine precipitate e fissate sono evidenziate con la colorazione. 

Per evidenziare ed identificare le sospette componenti monoclonali, il campione è fatto migrare contemporaneamente in sei corsie. Dopo l’elettroforesi, 

una corsia serve da riferimento mostrando il quadro elettroforetico completo delle proteine del campione. Le rimanenti cinque corsie permettono 

l’identificazione della componente monoclonale, mediante presenza o la mancanza di reazione con gli antisieri anti catene pesanti gamma (Ig G), alfa 

(Ig A) e mu (Ig M) ed anti catene leggere kappa e lambda (libere e legate). Le bande immunofissate sono quindi comparate con le bande sospette del 

quadro di riferimento. La banda corrispondente dovrebbe avere la stessa posizione di migrazione. 

REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEI KITS HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF E HYDRAGEL 9 IF 

HYDRAGEL 1 IF KIT PN 4301 HYDRAGEL 2 IF KIT PN 4302 HYDRAGEL 4 IF KITS PN 4304 PN 4308 PN 4381* HYDRAGEL 9 IF KITS PN 4309 PN 4382** Gels di Agarosio (pronti all’uso) 10 gels 10 gels 10 gels 80 gels Strisce tamponate (pronte all’uso) 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 80 confezioni da 2 Diluente per la soluzione colorante (soluzione concentrata) 1 flacone, 60 mL Colorante Amidoschwarz (soluzione concentrata) 1 flacone, 20 mL Colorante Violetto Acido (soluzione concentrata) 1 flacone, 75 mL 1 flacone, 75 mL 8 flaconi, 75 mL Diluente (pronto all’uso) 1 flacone, 3.2 mL 1 flacone, 32 mL 1 flacone, 32 mL 2 flaconi, 80 mL 3 flaconi, 80 mL Soluzione Fissativa (pronta all’uso) 1 flacone, 2.9 mL Immunoglobuline di mammifero anti-catene pesanti 1 flacone, 2.0 mL umane gamma (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti-catene pesanti 1 flacone, 2.0 mL umane alfa (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti-catene pesanti 1 flacone, 2.0 mL umane mu (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti-catene leggere 1 flacone, 2.0 mL umane Kappa (libere e legate) (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti-catene leggere 1 flacone, 2.0 mL umane Lambda (libere e legate) (pronte all’uso) | 

Applicatori (pronti all’uso) 1 confezione da 10 2 confezioni da 10 2 confezioni da 10 16 confezioni da 10| 

3 confezioni da 10 24 confezioni da 10 Barrette Antisieri (pronte all’uso) 1 confezione da 10 1 confezione da 10 1 confezione da 10 8 confezioni da 10 Cartine da filtro sottili 1 confezione da 10 1 confezione da 10 1 confezione da 10 8 confezioni da 10 

| Cartine da filtro spesse | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 8 confezioni da 10 | 


NOTA: La soluzione fissativa e gli antisieri sono forniti separatamente dal kit ad esclusione dei MAXI-KITS (Vedi REAGENTI RICHIESTI MA NON 

FORNITI). 

PER RISULTATI OTTIMALI 

I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit. 

LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO. 

- 42 - 

FOGLIO DI ISTRUZIONI SEBIA - Italiano


1. GELS DI AGAROSIO 

Preparazione 

I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gels di agarosio contiene: agarosio, 8 g/l ; tampone tris-barbital pH 9.1 ± 0.1 ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: I gels di agarosio contengono lo 0.31 % di barbital e lo 0.34 % di barbital sodico. Non ingerire! Se ingerito consultare 

immediatamente un medico ! 

Utilizzo 

Mezzo di supporto per elettroforesi ed immunofissazioni proteiche. 

Conservazione, stabilità e segni di deterioramento 

Conservare i gels orizzontalmente, nella confezione originale protettiva, a temperatura ambiente (15 - 30 °C) o in frigorifero (2 - 8 °C). I gels sono stabili 

fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. (La freccia sulla scatola del kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Evitare la conservazione nelle seguenti condizioni : in prossimità di fenestre ; in prossimità di sorgenti di calore ; in presenza di brusche e/o significative 

variazioni di temperatura. NON CONGELARE. 

Non utilizzare il gel quando: 

(i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe conseguenze del congelamento 

del gel), 

(ii) è presente muffa o flora batterica, 

(iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni di 

conservazione improprie). 

2. STRISCE TAMPONATE 

Preparazione 

Le strisce tamponate sono pronte all’uso. Ogni striscia contiene: tampone tris-barbital pH 9.1 ± 0.3 ; sodio azide ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: Il tampone nelle strisce contiene 0.92 % di barbital, 1.03 % di barbital sodico e 0.30 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerite 

consultare immediatamente un medico! Quando smaltite, evitare il contatto con acidi, piombo o rame poiché possono originare composti 

esplosivi o tossici con la sodio azide. 

Utilizzo 

Le strisce di spugna tamponate funzionano da riserva di tampone per l’elettroforesi ed assicurano il contatto tra il gel e gli elettrodi. 


Conservare le strisce tamponate orizzontalmente nella loro confezione protettiva, a temperatura ambiente o in frigorifero. (La freccia sulla scatola del 

kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Le strisce sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichetta della confezione delle strisce. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare le strisce se la confezione è aperta e le strisce sono asciutte. 

3. DILUENTE PER LA SOLUZIONE COLORANTE (con PN 4308) 

Preparazione 

Il diluente per il colorante deve essere utilizzato come descritto nel paragrafo "COLORANTE AMIDOSCHWARZ". 

Contiene una soluzione acida. 

Utilizzo 

Per la preparazione della soluzione colorante amidoschwarz. 


Conservare il diluente concentrato per il colorante a temperatura ambiente o in frigorifero. E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola 

del kit o sull’etichetta del diluente. NON CONGELARE. 

Non aggiungere sodio azide. 

4. COLORANTE AMIDOSCHWARZ (con PN 4308) 

Preparazione 

Il colorante amidoschwarz concentrato è una soluzione viscosa, che può eventualmente gelificare, senza che la qualità della soluzione finale e del 

suo potere colorante siano minimamente alterati. 

Per ottenere una perfetta ricostituzione del colorante, bisogna rispettare il seguente protocollo. 

1. Aggiungere circa 15 mL di diluente del colorante al flacone di amidoschwarz concentrato. 

2. Chiudere accuratamente il flacone. 

3. Agitare con molto vigore il flacone per almeno 5 secondi. 

4. Versare la soluzione ottenuta nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

5. Ripetere questa operazione due o tre volte se necessario. 

6. Versare il resto del diluente nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

7. Completare a 300 mL con acqua distillata o demineralizzata. 

8. Agitare perfettamente questa soluzione per 5 - 10 minuti. 

Il colorante è pronto all’uso. 

NOTA : Una risospensione incompleta del colorante può causare una cattiva colorazione della frazione albumina (percentaule bassa di albumina o 

svuotamento al centro della frazione). 

Dopo la diluizione, la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; Etilen-glicol, 6,7 % ; componenti, non pericolosi 

alle concentrazioni utilizzate, necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Per la colorazione dei gels dopo la separazione elettroforetica delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinata alla colorazione di solamente 10 gels. Sostituire la soluzione colorante dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare sia la soluzione concentrata del colorante sia quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero, in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione concentrata del colorante è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. 

Il colorante diluito è stabile 1 mese. 

Non conservare la soluzione di colorante diluita in prossimità di una sorgente di calore. 

- 43 -


5. COLORANTE VIOLETTO ACIDO (con PN 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 e 4382) 

Preparazione 

Il flacone di colorante violetto acido in soluzione concentrata, deve essere diluito a 300 ml con acqua distillata o deionizzata. 

Dopo la diluizione, la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; violetto acido, 2 g/l ; Etilen-glicol, 3,25 % ; componenti non pericolosi 

alle concentrazioni utilizzate necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Colorazione dei gels dopo l’elettroforesi e l’immunofissazione delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinato alla colorazione di soli 10 gels. Sostituire la soluzione dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare, sia la soluzione concentrata del colorante che quella diluita, a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione concentrata del colorante è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. Il 

colorante diluito è stabile 6 mesi. 

6. DILUENTE 

Preparazione 

Il diluente è pronto all’uso e contiene: tampone alcalino pH 7.5 ± 0.3 ; blu di bromofenolo ; additivi, non rischiosi alle concentrazioni utilizzate, necessari 

per ottimizzare l’analisi. 

Utilizzo 

Per la diluizione dei campioni. Il blu di bromofenolo ha la funzione di marcatore del punto di applicazione e della migrazione. 


Conservare il diluente a temperatura ambiente o in frigorifero. Il diluente è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sulla 

etichetta del diluente. 

Il diluente deve essere privo di precipitato. 

7. CONFEZIONE ANTISIERI E FISSATIVO (con PN 4381 e 4382) 

7.1 ANTISIERI 

Preparazione 

Pronti all’uso. Tutti gli antisieri sono di mammifero, anti immunoglobuline totali umane. Per una facile identificazione degli antisieri e per un aiuto nel controllo 

della loro corretta applicazione, gli antisieri sono colorati con differenti coloranti atossici. Tali colori sono riportati sulle etichette dei flaconi. Quando l’antisiero 

mostra una lieve torbidità, lasciarne il flacone a temperatura ambiente per un minimo di 10 minuti. Questa azione dovrebbe essere sufficiente a chiarificare 

la soluzione; tuttavia, se la torbidità rimane, questa non dovrebbe avere alcun effetto sulla reazione immunologica. In caso di precipitati insolubili, si 

raccomanda di centrifugare l’antisiero per 5 minuti a 3000 rpm. 

Utilizzo 

Per immunofissare le proteine separate elettroforeticamente. 

Gli antisieri possono avere origine da specie animali differenti. Non miscelare due diversi flaconi di antisiero, anche con la stessa specificità, e sostituire 

SEMPRE il puntale della pipetta quando si cambia il flacone di antisiero. 

IMPORTANTE : Per evitare la contaminazione tra i diversi reagenti, si raccomanda di rimettere ogni tappo sul flacone corrispondente dopo ogni 

utilizzo. 


Conservare gli antisieri in frigorifero (2 - 8 °C). Gli antisieri sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichette dei flaconi. 

NOTA: Durante il trasporto, gli antisieri possono essere mantenuti a temperatura non refrigerata (15 - 30 °C) per 15 giorni senza effetti negativi sulle 

prestazioni. 

7.2. SOLUZIONE FISSATIVA 

Preparazione 

La soluzione fissativa è pronta all’uso. Contiene: soluzione acida; additivi, non rischiosi alle concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. Per 

una facile identificazione e come aiuto nel controllo della sua corretta applicazione, il fissativo è colorato con un colorante atossico. 

Utilizzo 

Per fissare le proteine separate mediante l’elettroforesi nella pista di riferimento (ELP). 

IMPORTANTE : Per evitare la contaminazione tra i diversi reagenti, si raccomanda di rimettere ogni tappo sul flacone corrispondente dopo ogni 

utilizzo. 


Conservare la soluzione fissativa a temperatura ambiente o in frigorifero. Il fissativo è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o 

sull’etichetta del flacone. 

La soluzione fissativa deve essere priva di precipitato. 

8. APPLICATORI 

Utilizzo 

Applicatori monouso, pretagliati, per l’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare gli applicatori in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

9. BARRETTE ANTISIERI 

Utilizzo 

Barrette colorate monouso, per la stratificazione sul gel da immunofissazione della soluzione fissativa e degli antisieri. 

AVVERTENZA : Le barrette con gli antisieri devono essere manipolate con precauzione. 

10. CARTINE DA FILTRO - SOTTILI 

Utilizzo 

Cartine assorbenti sottili, pretagliate, monouso per l’eliminazione dell’eccesso di liquido dalla superficie del gel prima dell’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro sottili in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

- 44 -


11. CARTINE DA FILTRO - SPESSE 

Utilizzo 

Cartine assorbenti spesse, pretagliate, monouso, per l’eliminazione dal gel delle proteine non precipitate dopo la fase di immunofissazione. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro spesse in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

REAGENTI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. CONFEZIONE ANTISIERI E SOLUZIONE FISSATIVA (per kits 4301, 4302, 4304, 4308 e 4309) 

La confezione Antisieri e Soluzione fissativa, SEBIA, PN 4315, contiene 5 flaconi di antisieri e 1 flacone di soluzione fissativa da 1 mL ciascuno. Gli 

antisieri sono specifici per la metodica immunofissativa con maschera dinamica. 

1.1 ANTISIERI 

Vedi precedente paragrafo 7.1. 

1.2 SOLUZIONE FISSATIVA 

Vedi precedente paragrafo 7.2. 

2. SOLUZIONE DECOLORANTE 

Preparazione 

Ogni flacone di soluzione decolorante concentrata (SEBIA, PN 4540, 10 flaconi da 100 ml ciascuno) deve essere diluito a 100 litri con acqua deionizzata 

o distillata. Per convenienza, diluire solo 5 ml di soluzione concentrata a 5 litri, ossia al volume della tanica della soluzione decolorante. 

Dopo la diluizione la soluzione decolorante contiene: acido citrico, 0.5 g/l. 

Utilizzo 

Come decolorante, ossia per rimuovere l’eccesso di colorante e la colorazione di fondo dal gel. 

Per il risciacquo del compartimento di colorazione dopo la fase di lavaggio. 

Per neutralizzare l’acidità della soluzione decolorante versare, nella tanica vuota dei liquidi reflui, 15 mL di una soluzione al 50 % di Idrossido di Sodio. 


Conservare la soluzione decolorante concentrata a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza 

indicata sulla scatola del kit o sulla etichetta del decolorante. La soluzione diluita del decolorante è stabile per una settimana a temperatura ambiente 

in flacone chiuso. Non aggiungere sodio azide. 

Eliminare la soluzione decolorante diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

Per prevenire le proliferazioni microbiche nella soluzione decolorante diluita, da conservare oltre una settimana, aggiungere 5 µL/dL di ProClin 300. 

La soluzione decolorante diluita addizionata con ProClin e conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in bottiglia chiusa, è stabile fino alla data 

di scadenza indicata sulla confezione o sull’etichetta del flacone di decolorante. 

3. SOLUZIONE DI LAVAGGIO HYDRASYS 

Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione di Lavaggio concentrata HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 flaconi da 80 ml ciascuno) deve essere diluito a 5 litri con acqua 

distillata o deionizzata. Dopo la diluizione la soluzione di lavaggio contiene: tampone alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; sodio azide. 

AVVERTENZA: La soluzione di lavaggio concentrata contiene 0.625 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerita consultare immediatamente 

un medico! La sodio azide può portare alla formazione di composti tossici o esplosivi se posta a contatto con acidi, piombo o rame. Quando 

smaltita, fare scorrere un’abbondante quantità di acqua. 

Utilizzo 

La soluzione di lavaggio HYDRASYS ha la funzione di rimuovere le proteine non precipitate dai gels. Serve inoltre per lavare il compartimento di 

colorazione di HYDRASYS. Usare periodicamente ; per esempio, se lo strumento è usato giornalmente lavare il compartimento di colorazione 

settimanalmente. 

Consultare l’inserto nella confezione per la procedura di utilizzo. 


Conservare, sia la soluzione di lavaggio concentrata che quella diluita, a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso. Entrambe le 

soluzioni sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. 

Eliminare la soluzione di lavaggio diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

4. FLUIDIL 

Preparazione 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 flacone da 5 ml) è pronto all’uso. 

Utilizzo 

Per diluire campioni viscosi o torbidi, per esempio, sieri contenenti criogloguline o criogel. 


Conservare a temperatura ambiente. Fluidil è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone. 

Fluidil deve essere privo di precipitato. 

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Dispensatore manuale o in alternativa, per il caricamento degli applicatori dei campioni o delle barrette antisieri, campionatore automatico 

HYDRAplus SEBIA, PN 1215. 

3. Camera umida, PN 1270, fornita con HYDRASYS. 

4. Kit di taniche fornito con HYDRASYS. 

5. Barra per il fissagio della maschera SEBIA fornita con HYDRASYS. 

6. Maschera dinamica, SEBIA, PN 1255. 

7. Pipette: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL e 200 µL. 

- 45 -


CAMPIONI PER L’ANALISI 

Raccolta e conservazione del campione 

Per l’analisi sono raccomandati campioni freschi. I sieri e le urine devono essere prelevati seguendo le procedure convenzionali per i tests clinici di 

laboratorio. Refrigerare i campioni (2 - 8 °C) subito dopo il prelievo e conservare al massimo una settimana. Per periodi di conservazioni più lunghi, 

mantenere i campioni congelati (stabili almeno 1 mese). 

I sieri congelati con aggiunta di sodio azide, 0.2 g/L, o i campioni di urina congelati con HEPES 0.1 M (pH 6.75) e/o sodio azide, 0.2 g/L sono stabili 

almeno 3 mesi. 

IMPORTANTE: Non usare acido borico o altri acidi come conservante per le urine. 

I campioni scongelati possono dar luogo a leggeri segni nel punto di applicazione causati dalla denaturazione delle proteine o delle lipoproteine. 

Preparazione del campione 

1. Sieri 

Preparare 1 campione per HYDRAGEL 1 IF, 2 o 4 campioni per HYDRAGEL IF 2/4 conformemente al kit e 9 campioni per HYDRAGEL 9 IF. 

Per prevenire l’effetto prozona ad alti livelli di antigene, diluire ed agitare i campioni, prima dell’applicazione, come segue: 

| PISTA | SIERO (µl) | DILUENTE (µl) | 

| Pista di immunofissazione Ig G | 20 | 100 | 

| Pista del riferimento ELP e tutte le altre piste di immunofissazione | 30 | 60 | 

Casi particolari 

• Se il livello di immunoglobuline totali è > 2 g/dL (Ipergammaglobulinemia), si raccomanda una maggiore diluizione del campione (esclusa la 

pista ELP) per ottenere una concentrazione normale di immunoglobuline. 

• Se il livello di immunoglobuline totali è < 0.5 g/dL (Ipogammaglobulinemia), si raccomanda una minore diluizione del campione. 

• Il campioni di siero ed urina del paziente possono essere analizzati per la ricerca della proteina di Bence Jones; in questo caso è raccomandato 

l’uso del programma di migrazione "BENCE JONES". 

Il campione può essere analizzato utilizzando il kit IF e l’antisiero anti-catene leggere libere kappa (SEBIA, PN 4370) e l’antisiero anti-catene 

leggere libere lambda (SEBIA, PN 4371) o con il kit HYDRAGEL 1, 2, 4 o 9 BENCE JONES (SEBIA, PN 4321, 4322, 4324 o 4329). 

In questo caso, diluire il siero in soluzione fisiologica o in diluente per immunofissazione precedentemente diluito 1/4 (1 parte di diluente, 3 parti 

di acqua distillata o deionizzata) 1/10 per le piste ELP, GAM, K e L (1 parte di siero, 9 parti di diluente diluito o soluzione fisiologica) e 1/3 (1 parte 

di siero, 2 parti di diluente diluito o soluzione fisiologica) per le piste Kf e Lf. 

Se il livello di immunoglobuline totali è < 0.5 g/dL, si raccomanda una minore diluizione del campione di siero; per esempio, 1/5 per le piste 

ELP, GAM, K e L, e 1/2 per le piste Kf e Lf. 

• Dopo refrigerazione o congelamento, alcuni sieri (particolarmente quelli contenenti crioglobuline o criogel) possono essere viscosi o sviluppare 

torbidità. Tali sieri possono presentare problemi di deposizione dovuti alla ostacolata diffusione nei dentini di applicazione. In tali casi, 

aggiungere 25 µL di Fluidil a 75 µL di campione ed agitare per 15 secondi. Seguire quindi la procedura. 

• Alcune proteine monoclonali possono polimerizzare dando luogo ad una "frazione monoclonale" che si presenta in tutte le piste di 

immunofissazione. In questo caso (i) preparare una soluzione all’1 % di beta-mercaptoetanolo (BME, o 2-mercaptoethanol, 2ME) in Fluidil, 

(ii) aggiungere 25 µL di soluzione riducente a 75 µL di siero non diluito, (iii) agitare ed attendere per almeno 15 minuti (massimo 30 minuti) e 

quindi eseguire la procedura. 

• Per l’analisi di Ig D e/o Ig E, applicare la stessa diluizione utilizzata per le catene leggere kappa e lambda libere e legate. 

2. Urine concentrate 

La maggior parte dei campioni di urina devono essere concentrati. Applicare l’urina concentrata in tutte le piste. Concentrare le urine (con idoneo 

mezzo) fino ad una concentrazione di proteine totali ≥ 0.5 g/dL o di Ig totali di circa 0.1 g/dL. Se le concentrazioni delle proteine urinarie o delle 

Ig non sono note, concentrare 20x - 100x. 

IMPORTANTE: Alcune urine hanno un alto contenuto di sali. Questo puo` produrre una deformazione del gel durante la migrazione e, quindi, una 

distorsione del profilo elettroforetico. Se la distorsione rende inaccurata l’interpretazione, e` necessario eliminare i sali dializzando il campione. 

La diffusione dei campioni di urina nei dentini dell’applicatore può essere ostacolata quando l’urina (intera o concentrata) è torbida. Si raccomanda 

di rimuovere il particolato con la centrifugazione (es., 10 minuti a 3000 rpm) o con la filtrazione (es., filtro da siringa a 0,45 µm). 

La sensibilità nell’esame delle urine può essere incrementata aumentando i tempi di applicazione del campione e di incubazione degli antisieri 

utilizzando il programma di "BENCE JONES". In questo caso il limite di rilevamento corrisponde a 1 - 5 mg/dL di proteina monoclonale. In ragione 

delle proteine, l’urina può essere processata non concentrata o concentrata fino a 25x. 

NOTA: Il tentativo di aumentare la sensibilità del test con un’ulteriore incremento del grado di concentrazione o la concentrazione 

indiscriminatamente alta del campione di urina deve essere considerato con attenzione. L’uso di urine eccessivamente concentrate spesso 

genera formazione di false bande. Tali campioni possono dover essere processati a concentrazioni inferiori. 


Nelle urine le catene leggere tendono a polimerizzarsi e a formare aggregati. Se questo compromette l’interpretazione dei risultati, i polimeri di 

catena leggera devono essere depolimerizzati: (i) miscelare 1 volume di BME in 9 volumi di acqua (es., 5 µL BME e 45 µL di acqua), (ii) aggiungere 

5 µL di BME diluito a 100 µL di urine, miscelare bene, applicare senza ulteriori diluizioni del campione. Procedere con i programmi di 

immunofissazione standard o "BENCE JONES". 

Campioni da evitare 

• Evitare campioni di plasma. Il fibrinogeno dà luogo ad una banda nella pista di riferimento, vicino al punto di applicazione in zona beta, che può 

essere scambiata per una proteina monoclonale. 

• Non utilizzare campioni emolizzati. 

• Evitare campioni di urina vecchi o conservati impropriamente nei quali può intervenire la degradazione enzimatica delle proteine. 

PROCEDURA 

Il sistema HYDRASYS è uno strumento multiparametrico semi-automatico. Le fasi automatiche includono il trattamento dei gels di agarosio HYDRAGEL 

nella seguente sequenza: applicazione del campione, migrazione elettroforetica, incubazione con la soluzione fissativa e con gli antisieri, essiccazione, 

colorazione, decolorazione ed essiccazione finale. Le fasi manuali includono la manipolazione dei campioni, dei gels, l’applicazione del fissativo e degli 

antisieri e la preparazione dello strumento per l’uso. 

LEGGERE ATTENTAMENTE IL MANUALE DI ISTRUZIONE HYDRASYS. 

- 46 -


I. MIGRAZIONE 

1. Accendere lo strumento HYDRASYS. 

2. Posizionare un applicatore per HYDRAGEL 1 IF o HYDRAGEL IF 2/4 (2 campioni), due applicatori per HYDRAGEL IF 2/4 (4 campioni) o tre 

applicatori per HYDRAGEL 9 IF, su una superficie piana con i numeri dei pozzetti rivolti verso l’alto (Fig. 1). 

- Applicare 10 µL di siero opportunamente diluito o di urina concentrata nei pozzetti dell’applicatore come segue. Caricare ciascun applicatore 

entro 2 minuti. 

| PISTA DI MIGRAZIONE/IMMUNOFISSAZIONE | 

POZZETTI Num. ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 CAMPIONE No 1 O 3 2 3 4 5 6 7 CAMPIONE No 2 O 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF CAMPIONE No 1, 4 O 7 1 2 3 4 5 6 CAMPIONE No 2, 5 O 8 7 8 9 10 11 12 

| CAMPIONE No 3, 6 O 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

NOTA: Con HYDRAGEL IF 2/4, i pozzetti num. 1, 8 e 15 non sono utilizzati; possono essere marcati con un pennarello per evitarne il 

riempimento erroneo con il campione. 

- Inserire ciascun applicatore nella camera umida di conservazione, con i dentini rivolti verso l’alto (maneggiare i depositori mediante la cornice 

protettiva in plastica). 

Consultare l’inserto all’interno della confezione della camera umida per ulteriori dettagli. 

- Lasciare che i campioni diffondano nei dentini per 5 minuti dall’applicazione dell’ultimo campione. 

Mantenere la camera così preparata in frigorifero se si intende usare gli applicatori più tardi (fino ad 8 ore). 

3. Aprire lo sportello del modulo di migrazione ed alzare le cornici mobili porta elettrodi e porta applicatori. 

AVVERTENZA: Non chiudere mai lo sportello se le cornici mobili sono alzate. 

4. Dal menu dello strumento (lato sinistro della tastiera), selezionare il programma di migrazione "1 IF MS/MD" per HYDRAGEL 1 IF, 

"2/4 IF MS/MD" per HYDRAGEL IF 2/4 o "9 IF MD" per HYDRAGEL 9 IF. 

5. Estrarre le strisce tamponate dalla confezione ; maneggiarle mediante le estremità in plastica. Agganciare le estremità in plastica forate agli 

spinotti della cornice porta elettrodi ; le estremità in plastica della striscia devono essere rivolte verso la cornice mobile (Fig. 2). 

6. Estrarre il gel dalla confezione. 

- Eliminare rapidamente l’eccesso di liquido in superficie, tamponando il gel con una carta assorbente sottile 

ATTENZIONE : Fate attenzione a non lasciare la carta da filtro troppo a lungo a contatto con il gel per evitarne la disidratazione. 

- Dispensare 120 µL di acqua distillata o deionizata per HYDRAGEL 1 IF o 200 µL per HYDRAGEL IF 2/4 e HYDRAGEL 9 IF, sul terzo inferiore 

del riquadro stampato sulla piastra di controllo temperatura del modulo di migrazione. 

- Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 3) 

- Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia di acqua. Assicurarsi che non siano rimaste intrappolate bolle d’aria. L’acqua deve essere 

uniformemente stratificata al di sotto della lastrina di gel e questa deve essere allineata all’interno del riquadro stampato. 

7. Abbassare entrambe le cornici mobili. In questa posizione le strisce tamponate non toccano il gel. NON FORZARE LE CORNICI MOBILI AD 

ABBASSARSI ULTERIORMENTE. 

8. Estrarre ciascun applicatore dalla camera di umidificazione. Maneggiare gli applicatori mediante la cornice di protezione. 

- Inserire l’applicatore(i) sulla cornice mobile : 

- Con HYDRAGEL 1 IF o HYDRAGEL IF 2/4 (2 campioni), in posizione No 6, 

- Con HYDRAGEL IF 2/4 (4 campioni), in posizione No 3 e 9, 

- Con HYDRAGEL 9 IF in posizione No 2, 6 e 10. 

IMPORTANTE: I numeri stampati sugli applicatori devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 4). 

Per migliorare la riproducibilità dell’applicazione del campione, inserire gli applicatori accostandoli sempre al lato sinistro della cornice mobile. 

9. Chiudere lo sportello del modulo di migrazione. 

10. Avviare la procedura immediatamente premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. 

IMPORTANTE: Assicurarsi che la griglia di ventilazione sul lato destro dello strumento non sia ostruita. 

MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate egli applicatori entrino in contatto con il gel. 

• La cornice mobile porta applicatori si alza. 

• Ha luogo la migrazione in condizioni di potenza costante, 10 W per HYDRAGEL 1 IF e 20 W per HYDRAGEL IF 2/4, fino ad accumulare 42 Vh (per 

circa 9 minuti) e 20 W fino ad accumulare 36 Vh (per circa 7 minuti) per HYDRAGEL 9 IF, a 20 °C controllati mediante effetto Peltier. 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. Sullo schermo compare il messaggio: " AS". 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione. 

II. IMMUNOFISSAZIONE - PREPARAZIONE 

La maschera dinamica è composta da una guida colorata con i colori di riferimento per l’applicazione dei reagenti, da una barretta antisieri, da un 

supporto barretta, da una guida per la maschera dinamica e da un riduttore di corsa (Fig. 5). 

Durante la migrazione, assemblare la maschera dinamica come segue: 

1. Posizionare la guida per la maschera dinamica su una superficie piana. 

IMPORTANTE : Per l’analisi di uno o due campioni, è necessario posizionare il riduttore di corsa sulla guida per la maschera dinamica. 

- 47 -


2. Posizionare una barretta antisieri sul supporto barretta (Fig. 6) : 

- Inclinare la barretta antisieri con un angolo di 45° e appoggiarla contro le molle plastiche del supporto barretta. 

- Allontanare i due elementi e ruotare la barretta per fissarla nelle fessure del supporto barretta. 

AVVERTENZA : Assicurarsi che la barretta sia correttamente inserita nel supporto : gli spinotti all’estremità della barretta devono 

essere bloccati nelle fessure del supporto barretta. 

3. Alloggiare il supporto con il segmento sulla guida della maschera dinamica (Fig. 7). Quindi, posizionare la guida colorata con i colori di 

riferimento per l’applicazione dei reagenti, corrispondente agli esami da eseguire, sul supporto barretta davanti ai pozzetti della barretta 

(Fig. 8). 

4. Applicare i reagenti come segue: 

- Barretta antisieri a 6 pozzetti per HYDRAGEL 1 IF : 8 µL per pozzetto, 

- Barretta antisieri a 15 pozzetti per HYDRAGEL IF 2/4 : 8 µL per pozzetto per l’analisi di 2 campioni, 

12 µL per pozzetto per l’analisi di 4 campioni, 

- Barretta antisieri a 18 pozzetti per HYDRAGEL 9 IF : 8 µL per pozzetto. 

CANALE REAGENTE COLORE ELP soluzione fissativa giallo G antisiero anti-catene pesanti gamma rosa A antisiero anti-catene pesanti alfa blu notte M antisiero anti-catene pesanti mu verde scuro K antisiero anti-catene leggere kappa (libere e legate) verde chiaro 

| L | antisiero anti-catene leggere lambda (libere e legate) | azzurro | 

NOTA: Per facilitare il corretto pipettamento, gli antisieri sono colorati e i colori sono riportati sulla guida colorata con i colori di riferimento. 

IMPORTANTE: Per HYDRAGEL IF 2/4, non usare i pozzetti 1, 8 e 15 della barretta antisieri. 

Aspirare i reagenti evitando di intrappolare bolle d’aria nel puntale della pipetta. 

Applicare i reagenti (Fig. 9) : 

- Mantenere la pipetta inclinata accostando il puntale su una parete del pozzetto, senza toccare il fondo del pozzetto. 

- Iniettare la goccia di reagente nel pozzetto. 

5. Rimuovere la guida colorata con i colori di riferimento. 

III. IMMUNOFISSAZIONE 

1. Aprire lo sportello del modulo di migrazione. 

2. Rimuovere l’applicatore(i) e smaltirlo(i). 

3. Alzare entrambe le cornici mobili, rimuovere le strisce tamponate mediante le estremità in plastica e smaltirle. 

- Estrarre il carrello porta applicatori ed elettrodi. 

- Pulire gli elettrodi con carta soffice inumidita. 

- Lasciare il gel in posizione nel modulo di migrazione. 

4. Posizionare la maschera dinamica per l’applicazione dei reagenti come segue (Fig. 10): 

- Posizionare la barra metallica di fissaggio per la maschera sui due spinotti di ancoraggio inferiori (la barra può essere sempre lasciata nel 

modulo di migrazione). 

- Tenere la maschera dinamica tramite l’aletta superiore ed inserirla nella barra con l’incavo allineato ai segni. 

- Abbassare la maschera dinamica sulla piastra di HYDRASYS. 

IMPORTANTE : Regolare la posizione della maschera dinamica per il perfetto allineamento tra i profili elettroforetici e i pozzetti della maschera. 

5. Posizionare il porta barretta nel punto inferiore della maschera dinamica, verso l’operatore. Tenere il porta barretta con la maniglia esistente 

alla destra e premere sul punto di pressione centrale in modo che la barretta antisieri tocchi il gel. Rilasciare la pressione; quindi, i reagenti 

diffonderanno sotto ciascuna pista (Fig. 11). 

6. Immediatamente, usando la maniglia del porta barretta, muovere la barretta lentamente e con movimento continuo, in avanti ed indietro 

sull’intera lunghezza del gel per applicare i reagenti. L’applicazione dovrebbe richiedere circa 5 secondi (Fig. 12). 

AVVERTENZA : Durante questa fase, tenere la maschera solo con la maniglia del porta barretta. Evitare di toccare la guida. Non 

premere nuovamente il punto di pressione per non provocare una contaminazione tra reagenti. 

7. Rimuovere la guida e la maschera dinamica. 

- Rimuovere il porta barretta utilizzando la sua maniglia. 

- Rimuovere la barretta antisieri dal porta barretta e smaltirla. 

AVVERTENZA : Le barrette con gli antisieri devono essere manipolate con precauzione. 

- Dopo l’applicazione, nei pozzetti possono rimanere residui di reagenti. Questa evenienza non dovrebbe avere effetti sui risultati del test. 


9. Fare partire immediatamente la procedura premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. 

Sullo schermo compare il messaggio "[INCUBAZIONE]". 

IMMUNOFISSAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Incubazione a 20 °C per 5 minuti (temperatura controllata mediante effetto Peltier). 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione si è sbloccato. 

Sullo schermo compare il messaggio: "CARTA". 

NOTA: Durante l’incubazione lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato. 

- 48 -


IV. ASCIUGATURA DEL GEL 


2. Applicare sul gel una carta da filtro spessa: 

- allineare il margine della cartina da filtro al margine del gel (inclinandola di 45°) e abbassarla sul gel. 

IMPORTANTE: Premere decisamente sull’intera superficie della carta da filtro per assicurare una perfetta aderenza sul gel. 


4. Avviare la procedura premendo il tasto "START" (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). 

ASCIUGATURA - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Asciugatura a 40 °C controllati mediante effetto Peltier, per 3 minuti. 

Sullo schermo è mostrato il messaggio "[POMPAGGIO]". 

• Viene emesso un segnale acustico. 

Sullo schermo compare il seguente messaggio: "❊ CARTA". 

V. ESSICAZIONE DEL GEL 


2. Rimuovere la cartina da filtro lasciando il gel in posizione. 

3. Chiudere lo sportello. 

4. Avviare la procedura premendo il tasto "START" (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). 

ESSICCAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Essiccazione a 50 °C controllati mediante effetto Peltier per 6 minuti. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello è sbloccato. La temperatura della piastra rimane a 50 °C finchè lo sportello non viene aperto. Sullo 

schermo compare il messaggio "MANTENIMENTO TEMPERATURA". 

NOTA: Il modulo di migrazione rimane bloccato durante la fase di essiccazione. 

VI. TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Aprire lo sportello. 

2. Estrarre il gel essiccato pronto per i trattamenti successivi. 

3. Aprire il telaio porta gel. Metterlo in posizione piana ed inserire la lastrina (con il gel rivolto verso l’operatore) nelle scanalature delle due guide, 

quindi chiudere il telaio. Assicurarsi che il gel sia correttamente posizionato all’interno del telaio (Fig. 13). 

4. Inserire il telaio porta gel nel Modulo di trattamento/colorazione del gel. 

IMPORTANTE: Prima di avviare il programma di trattamento/colorazione del gel controllare che: 

- la tanica della soluzione di lavaggio contenga almeno 400 ml di soluzione di lavaggio. 

- la tanica del colorante sia riempita con 300 ml di soluzione colorante. 

- la tanica del decolorante contenga almeno 1 litro di soluzione decolorante. 

- la tanica dei liquidi reflui sia vuota. 

Per la connessione dei reagenti: Riferirsi alle informazioni mostrate sul visore dello strumento (premere il tasto: VISUAL CANALI). 

IMPORTANTE: Non dimenticare di chiudere gli ingressi reagenti non utilizzati. 

5. Selezionare il programma di colorazione "IF ACID VIOLET" o "IF AMIDO" dal menù dello strumento ed avviare la procedura premendo il tasto 

"START" (freccia verde sul lato destro dello strumento). 

Durante i cicli di colorazione, decolorazione e asciugatura, il compartimento rimane bloccato. 

Dopo il ciclo di raffreddamento, un segnale acustico indica che il compartimento è sbloccato (la ventilazione è mantenuta fino a quando il 

supporto del gel viene rimosso) 

NOTE: 

- La temperatura della piastra di migrazione decresce a partire dall’apertura del coperchio finchè non raggiunge 20 °C (in meno di 5 minuti). A questo 

punto può essere avviata una nuova migrazione. 

- Rimettere in posizione le cornici mobili porta elettrodi e porta applicatori. 

- Pulire la piastra di migrazione con della carta soffice inumidita. 

VII.COMPLETAMENTO DEL TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Rimuovere il telaio porta gel dal compartimento ; aprirlo e rimuovere il gel essiccato. 

2. Se necessario, pulire il retro della lastrina di gel (la faccia con la plastica di supporto) con una carta soffice inumidita. 

NOTA : Le lunghezze di migrazione dei gels con 2 o 3 righe analitiche possono essere sensibilmente differenti, senza alcuna conseguenza sui 

risultati. 

RISULTATI 

Interpretazione 

1. Siero 

Assenza di componenti monoclonali 

• Un campione di siero normale mostra una leggera colorazione diffusa in ogni pista. 

• L’ipergammaglobulinemia è caratterizzata dalla presenza di una zona diffusa marcatamente colorata e dall’assenza di bande nette. 

Presenza di una componente monoclonale 

• La presenza di una immunoglobulina monoclonale (gammapatia) è caratterizzata da una banda monoclonale rivelata sia con uno degli antisieri 

anti catena pesante (gamma, alfa o mu) che con l’antisiero anti catena leggera (kappa o lambda). La banda monoclonale evidenziata, 

solitamente ben delimitata e netta, deve essere localizzata alla stessa altezza di migrazione della presunta banda monoclonale vista nel profilo 

proteico (ELP). 

- 49 -


• L’assenza di reazione con gli antisieri anti-catena pesante applicati e la reazione con uno degli antisieri anti-catena leggera, può indicare: 

a) gammapatia Ig D o Ig E (molto rara), da confermare con l’uso di antisiero anti-catena pesante delta e epsilon. 

b) presenza di una catena leggera libera da confermare con antisieri anti-catena leggera libera kappa e lambda. 

• La mancanza di reazione con gli antisieri anti catene leggere e la contemporanea presenza di reazione con l’antisiero anti catene pesanti, può 

indicare la rarissima malattia da catena pesante (gamma, alfa o mu). 

Presenza di due o più componenti monoclonali 

In rari casi, alcuni cloni di linfociti B proliferano dando luogo a diverse bande monoclonali evidenziate mediante l’immunofissazione: 

• La gammapatia biclonale è caratterizzata dalla presenza, di due bande relative alla catena pesante (uguali o differenti) e di due bande relative 

alla catena leggera (uguali o differenti). 

• Immunoglobuline polimerizzate sono caretterizzate da diverse (solitamente due) bande dello stesso tipo di catena pesante e leggera. Per 

confermare la presenza di una singola monoclonalità, è necessario depolimerizzare con beta-mercaptoetanolo (BME o 2ME) e ripetere 

l’immunofissazione (vedi "CAMPIONI PER L’ANALISI"). 

• Una gammopatia oligoclonale è caratterizzata dalla presenza di bande multiple, solitamente deboli, di una o più tipi di catene pesanti e di una 

o due tipi di catene leggere. 


• Quando una presunta banda monoclonale è osservata nella elettroforesi del siero (ELP), ma non è confermata dall’immunofissazione, il primo 

sospetto è che si tratti di fibrinogeno (campione di plasma). 

• Quando la presunta banda monoclonale è presente in tutte le corsie dell’immunofissazione si deve sospettare la presenza di crioglobuline o di 

Ig M polimerizzate. Si consiglia di depolimerizzare con un agente riducente e ripetere la procedura (consultare "Campioni per analisi"). 

2. Urina concentrata 

Applicare ai quadri immunofissativi delle urine concetti interpretativi simili a quelli del siero. 

• Nelle urine, una proteina monoclonale intatta è caratterizzata da una banda monoclonale rilevata con uno degli antisieri anti-catena pesante 

(gamma, alfa o mu) e o l’uno o l’altro degli antisieri anti-catene leggere (libere e legate) Kappa o Lambda. La banda monoclonale rilevata, 

tipicamente di aspetto netto e delineato, deve essere localizzata alla stessa distanza di migrazione della sospetta banda monoclonale vista nella 

pista di riferimento (ELP). 

• Una catena leggera libera, Bence Jones, è caratterizzata da una banda monoclonale rilevata con o l’uno o l’altro degli antisieri anti-catene 

leggere (libere e legate) Kappa o Lambda. In nessuna delle piste degli antisieri anti-catena pesante (gamma, alfa o mu) dovrebbe essere 

osservata una reazione positiva. 

Interferenze e limitazioni 

Vedi CAMPIONI PER L’ANALISI. 

L’uso di un antisiero diverso da quello specifico per l’immunofissazione con maschera dinamica, può avere effetti sui risultati. 

Per i limiti di risoluzione e sensibilità dell’elettroforesi zonale, è possibile che con questo metodo alcune componenti monoclonali possano non essere 

rilevate. 

Eliminazione errori 

Contattare il Servizio di Assistenza Tecnica del fornitore quando, nonostante siano state seguite accuratamente le istruzioni per la preparazione e 

conservazione dei materiali e per la procedura di impiego, i risultati del test non rispettino le caratteristiche. 

La scheda di sicurezza del kit reagenti e le informazioni sullo smaltimento dei rifiuti sono disponibili anche presso il fornitore del servizio di Assistenza 

Tecnica. 

DATI SULLE PRESTAZIONI 

Riproducibilità nella serie e specificità 

Metodica HYDRAGEL 4 IF 

La riproducibilità nel gel è stata dimostrata su tre diversi campioni patologici : due campioni con una componente monoclonale di livello alto e un 

campione con due componenti monoclonali di livello basso. Ciascun campione è stato processato 4 volte su gels di 2 lotti di HYDRAGEL IF 2/4, 

utilizzando la procedura di colorazione con violetto acido. 


La riproducibilità nel gel è stata dimostrata su tre diversi campioni patologici ciascuno con una componente monoclonale di livello alto. Ciascun 

campione è stato processato 9 volte su gels di 2 lotti di HYDRAGEL 9 IF, utilizzando la procedura di colorazione con violetto acido. 

Tutte le ripetizioni nel lotto e fra lotti, hanno fornito risultati identici e attesi per il tipo di campione analizzato. 

Riproducibilità tra serie e specificità 


La riproducibilità tra gels è stata dimostrata su quattro diversi campioni patologici con una o più componenti monoclonali. 

I campioni sono stati processati su 10 gels HYDRAGEL IF 2/4 di 3 diversi lotti, utilizzando la procedura di colorazione con violetto acido. 


La riproducibilità tra gels è stata dimostrata su nove diversi campioni patologici : due campioni con una componente monoclonale di livello alto, un 

campione con due componenti monoclonali di livello basso e un campione con due componenti monoclonali, una di livello alto e una di livello basso. 

I campioni sono stati processati su 10 gels HYDRAGEL 9 IF di 3 diversi lotti, utilizzando la procedura di colorazione con violetto acido. 

Tutte le ripetizioni tra gels, hanno fornito risultati identici e attesi per il tipo di campione analizzato. 

Accuratezza 

Metodica HYDRAGEL 4 IF con colorazione violetto acido 

Settantatre (73) diversi campioni di siero patologici, undici (11) sieri normali e dodici (12) urine concentrate sono stati processati utilizzando i gels 

HYDRAGEL IF 2/4 ed un diverso sistema per immunofissazione su gel di agarosio reperibile in commercio. 

- 50 -


Metodica HYDRAGEL 4 IF con colorazione amidoschwarz 

Ventotto (28) diversi campioni di siero patologici e quattro (4) sieri normali sono stati processati utilizzando i gels HYDRAGEL IF 2/4 ed un diverso 

sistema per immunofissazione su gel di agarosio reperibile in commercio. 

Metodica HYDRAGEL 9 IF con colorazione violetto acido 

Novantacinque (95) diversi campioni di siero patologici, quattro (4) sieri normali e dodici (12) urine concentrate sono stati processati utilizzando i gels 

HYDRAGEL 9 IF ed un diverso sistema per immunofissazione su gel di agarosio reperibile in commercio. 

In tutti i casi, i risultati ottenuti dai tests SEBIA e dalla metodica di comparazione disponibile in commercio, sono stati identici. 

Sensibilità 

Sono state preparate diluizioni scalari di quattro campioni di siero patologici tutti con componenti monoclonali, analizzate con la metodica HYDRAGEL 

4 IF. Sono state studiate sia la procedura di colorazione con violetto acido sia quella con amidoschwarz. 

I risultati sono riassunti di seguito. 

COMPONENTE MONOCLONALE LIMITE RILEVAMENTO (mg/dl) CAMPIONE No. TIPO CONC. (g/dl) 

HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF VIOLETTO ACIDO AMIDOSCHWARZ 1 gamma 1.09 12 12 1 kappa 12 12 2 gamma 0.78 12 / 2 lambda 12 / 3 alpha 0.58 12 25 3 lambda 12 25 4 mu 0.34 12 12 

| 4 | kappa | | 12 | 12 | 

In relazione alla posizione di migrazione della componente monoclonale, al livello del fondo policlonale della zona gamma e alla procedura di 

colorazione, il limite di rilevamento può variare tra 12 e 25 mg/dL. 

BIBLIOGRAFIA 

Per ulteriori informazioni sull’interpretazione dei quadri immunofissativi consultare: 

(1) Didier Le Carrer, "Électrophorèse des Protéines et Immunofixation : Guide d’interprétation", Laboratoires SEBIA, 1994, Hatier - Paris. 


ed., 1994, 397 pp. 

- 51 -


ESPECIFICACIONES DE USO 

Los kits HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF y 9 IF permiten la detección de proteínas monoclonales en el suero y la orina humanos, mediante inmunofijación 

en gel de agarosa en el sistema semiautomático HYDRASYS. 

El sistema HYDRASYS permite realizar todas las etapas hasta la obtención del gel listo para la interpretación. Las proteínas son separadas en tampón 

alcalino (pH 9,1) y luego son inmunoprecipitadas con antisueros de diferentes especificidades: anti-cadenas pesadas gamma (Ig G), alfa (Ig A), y mu 

(Ig M) y anti-cadenas ligeras kappa y lambda (libres y ligadas). Después de la inmunofijación, las proteínas precipitadas son coloreadas con una 

solución de violeta ácido o de negro amido. El exceso de colorante es eliminado en medio ácido. 

Cada gel de agarosa está pensado para analizar: 

- 1 muestra en el kit HYDRAGEL 1 IF, 

- 2 muestras en el kit HYDRAGEL 2 IF, 

- 4 muestras en los kits HYDRAGEL 4 IF, 

- 9 muestras en los kits HYDRAGEL 9 IF. 

Los kits HYDRAGEL 4 IF están disponibles con el colorante violeta ácido o con negro amido. 

Para uso diagnóstico In Vitro. 

PRINCIPIO DEL TEST 

Las bandas anormales de las separaciones electroforéticas de proteínas de suero y orina, principalmente aquellas situadas en las fracciones de beta 

globulinas y de gamma globulinas, son siempre sospechosas de ser proteínas monoclonales (proteínas-M, paraproteínas, inmunoglobulinas 

monoclonales) y por lo tanto, son un indicio de gammapatías monoclonales. Para identificar esas bandas anormales se aplica la técnica de la 

inmunofijación. 

La electroforesis seguida de inmunofijación es una técnica sencilla que permite que una proteína sea retenida después de la electroforesis, in situ, 

mediante la formación de un complejo insoluble con su anticuerpo. Es fácil de realizar en cuatro etapas y de fácil interpretación: 

1. Separación de proteínas mediante electroforesis en gel de agarosa. 

2. Inmunofijación (inmunoprecipitación) de las proteínas separadas electroforéticamente – los carriles de migración electroforética apropiados son 

recubiertos con los antisueros individuales. Los antisueros difunden dentro del gel y precipitan los antígenos correspondientes cuando están 

presentes. Las proteínas del carril de referencia son fijadas con una solución fijadora. 

3. Las proteínas solubles no precipitadas se eliminan del gel mediante un blotting y un lavado. La precipitación del complejo antígeno- anticuerpo 

queda ifijado en la matriz del gel. 

4. Los precipitados y las proteÌnas fijadas son visualizados mediante tinción. 

Para identificar de forma precisa la naturaleza de la banda monoclonal, la muestra es analizada en seis carriles. Después de la electroforesis, el carril 

ELP sirve de referencia gracias a que la solución fijadora ha precipitado todas las proteínas presentes; los otros cinco carriles permiten caracterizar la 

o las bandas monoclonales gracias a anticuerpos específicos anti-cadenas pesadas gamma (Ig G), alfa (Ig A) y mu (Ig M) y anti-cadenas ligeras kappa 

y lambda (libres y ligadas). 

Esta técnica sencilla y rápida proporciona una imagen clara y fácilmente interpretable. 

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KITS HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF E 

HYDRAGEL 9 IF 

KIT HYDRAGEL 1 IF PN 4301 KIT HYDRAGEL 2 IF PN 4302 KITS HYDRAGEL 4 IF PN 4304 PN 4308 PN 4381* KITS HYDRAGEL 9 IF PN 4309 PN 4382** Geles de Agarosa (listos para su uso) 10 geles 10 geles 10 geles 80 geles Esponjas tamponades (listas para su uso) 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 80 bolsas de 2 Diluyente del colorante (solución stock) 1 vial de 60 ml Colorante Negro Amido (solución stock) 1 vial de 20 ml Colorante Violeta Ácido (solución stock) 1 vial de 75 ml 1 vial de 75 ml 8 viales de 75 ml Diluyente (listo para su uso) 1 vial de 3,2 ml 1 vial de 32 ml 1 vial de 32 ml 2 viales de 80 ml 3 viales de 80 ml Solución Fijadora (lista para uso) 1 vial de 2,9 ml Inmunoglobulinas totales de mamífero 1 vial de 2,0 ml anti-cadenas pesadas gamma (listo para usar) Inmunoglobulinas totales de mamífero 1 vial de 2,0 ml anti-cadenas pesadas alfa (listo para usar) Inmunoglobulinas totales de mamífero 1 vial de 2,0 ml anti-cadenas pesadas mu (listo para usar) Inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas 1 vial de 2,0 ml ligeras kappa (libres y ligadas) (listo para usar) Inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas 1 vial de 2,0 ml ligeras lambda (libres y ligadas) (listo para usar) Applicadores (listos para su uso) 1 caja de 10 2 cajas de 10 2 cajas de 10 16 cajas de 10 3 cajas de 10 24 cajas de 10 Segmentos para antisueros (listos para usar) 1 caja de 10 1 caja de 10 1 caja de 10 8 cajas de 10 Papeles de Filtro-finos 1 paquete de 10 1 paquete de 10 1 paquete de 10 8 paquetes de 10 

| Papeles de Filtro-gruesos | 1 paquete de 10 | 1 paquete de 10 | 1 paquete de 10 | 8 paquetes de 10 | 

(* ) HYDRAGEL 4 IF MAXI-KIT (**) HYDRAGEL 9 IF MAXI-KIT 

NOTA: La solución fijadora y los antisueros se comercializan por separado excepto en los MAXI-KITS (consulte REACTIVOS NECESARIOS NO 

SUMINISTRADOS). 

PARA OBTENER RESULTADOS ÓPTIMOS 

- 52 - 

INSTRUCCIONES SEBIA - Español


Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y según las instrucciones incluidas. 

LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES. 

1. GELES DE AGAROSA 

Preparación 

Los geles de agarosa están listos para el uso. Cada gel contiene: agarosa, 8 g/l ; tampón tris-barbital pH 9.1 ± 0.1 ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas 

ATENCION: Los geles de Agarosa contienen barbital 0.31 % barbital sódico 0.34 % ¡No ingerir! ¡Si se ingiere accidentalmente consultar 

inmediatamente al médico! 

Uso 

Medio de soporte para la electroforesis de proteinas e inmunofijación. 

Almacenamiento, estabilidad y señales de deterioro 

Almacenar los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente (15 a 30 °C) o refrigerados (2 a 8 °C). Son 

estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit y en sus recipientes protectores. (La flecha situada en la cara frontal de la caja del kit 

debe apuntar hacia arriba). Evitar su almacenamiento cerca de una ventana o de una fuente de calor. Evitar variaciones importantes de temperatura 

durante su almacenamiento. NO CONGELAR. 

Desechar cuando: 

(i) haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelación del gel) ; 

(ii) se observe crecimiento bacteriano o fúngico ; 

(iii) se videncie una cantidad excesiva de líquido en el recipiente del gel (consecuencia de la exudación del tampón debida a un almacenamiento inadecuado). 

2. ESPONJAS TAMPONADAS 

Preparación 

Las esponjas tamponadas están listas para su uso. Contienen: tampón tris-barbital pH 9.1 ± 0.3 ; azida sódica ; aditivos, inocuos a las concentraciones 

usadas, necesarios para un resultado óptimo. 

ATENCIÓN: El tampónde las esponjas contiene barbital 0.92 %, barbital sódico 1.03 % y azida sódica 0.30 %. ¡No ingerir! ¡En caso de 

ingestión accidental, consultar inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se 

conoce su tendencia a formar compuestos explosivos con la azida sódica. 

Uso 

Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio de tampón de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos. 


Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. 

Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora (la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). 

Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora. NO LAS CONGELE. 

Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa está abierta o si las esponjas están secas. 

3. DILUYENTE DEL COLORANTE (Ref. N° 4308) 

Preparación 

El diluyente del colorante concentrado debe ser usado como se ha descrito en el párrafo "COLORANTE NEGRO AMIDO". Contiene una solución 

ácida. 

Uso 

Para la preparación del colorante negro amido. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

El diluyente del colorante concentrado puede conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada 

en el kit o en la etiqueta del vial de diluyente. NO LO CONGELE. 

No le añada azida sódica. 

4. COLORANTE NEGRO AMIDO (Ref. N° 4308) 

Preparación 

El colorante negro amido concentrado es una solución viscosa que puede gelificarse, lo que no afecta de ningún modo a la calidad de la solución 

final y su capacidad de coloración. 

Para obtener una perfecta reconstitución del colorante, siempre hay que prepararlo como se indica a continuación : 

1. Añada unos 15 mL de diluyente del colorante en el vial de negro amido concentrado. 

2. Cierre el vial con cuidado. 

3. Agite el vial intensamente durante un mínimo de 5 segundos. 

4. Vierta la solución obtenida en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

5. Repita esta operación dos veces, o tres veces si es necesario. 

6. Vierta el resto de diluyente en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

7. Complete hasta 300 mL con agua destilada o desionizada. 

8. Agite esta solución de 5 a 10 minutos. 

El colorante está listo para usar. 

NOTA : Una reconstitución incompleta del colorante puede implicar una mala coloración de la fracción albúmina (disminución de su porcentaje o 

aparición de un agujero blanco en el centro de la fracción). 

Después de la dilución, la solución colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; negro amido, 4 g/L ; etilén-glicol, 6,7 % ; aditivos inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Nocivo en caso de ingestión. 

Uso 

Para la coloración de los geles después de la separación electroforética de las proteínas. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para colorear sólo 10 geles. Cambie el colorante después de 10 usos. 


Las soluciones de colorante concentrada y diluida pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera, en contenedores cerrados para evitar 

la evaporación. La solución concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de colorante. 

La solución diluida es estable durante 1 mes. 

No almacene la solución de colorante diluida cerca de una fuente de calor. 

- 53 -


5. COLORANTE VIOLETA ÁCIDO (Ref. N° 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 y 4382) 

Preparación 

El vial de la solución stock de colorante se diluye hasta 300 ml. con agua destilada o desionizada. Después de la dilución, la solución de trabajo del 

colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; violeta ácido, 0.2 g/dL ; etilén-glicol, 3.25 % ; aditivos, inocuos a las concentraciones usadas, necesarios 

para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Es perjudicial si se ingiere. 

Uso 

Para la tinción de los geles con separación electroforética de proteínas y posterior inmunofijación. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para la coloración de 10 geles. Cambie el colorante después de su utilización en 10 coloraciones. 


Almacenar ambas soluciones, stock y de trabajo del colorante, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados para evitar la 

evaporación. La solución stock de colorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. La solución 

de trabajo de colorante es estable 6 meses 

6. DILUYENTE 

Preparación 

El Diluyente de muestras es listo para su uso. Contiene: tampón alcalino pH 7.5 ± 0.3 ; azul de bromofenol ; aditivos, no tóxicos a las conecentraciones 

utilizadas, necesarias para la obtención de resultados óptimos. 

Uso 

Dilución de muestras. El azul de bromofenol actúa como marcador de la aplición y migración posterior. 


Almacenar a temperatura ambiente o refrigerado.Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o la etiqueta del vial. 

El diluyente debe estar exento de precipitados. 

7. CAJA DE ANTISUEROS Y SOLUCIÓN FIJADORA (Ref. N° 4381 y 4382) 

7.1 ANTISUEROS 

Preparación 

Los antisueros están listos para su uso. Contienen inmunoglobulinas totales de mamífero anti-humanas. Cada reactivo tiene un color específico para 

evitar errores al utilizarlos. El color es el mismo que el de las etiquetas de los viales. 

Cuando los antisueros presentan una ligera turbidez o precipitados, generalmente basta con poner los viales a temperatura ambiente unos 10 minutos 

antes de su utilización. Si la turbidez persiste, no perturbará la reacción inmunológica. Si hay un precipitado insoluble, se recomienda centrifugar los 

antisueros durante 5 minutos a 3000 r.p.m. 

Utilización 

Para la inmunoprecipitación de las proteínas separadas mediante electroforesis. 

Los antisueros pueden ser de orígenes animales diferentes. Es por tanto imperativo no mezclar dos viales diferentes de antisueros, incluso si son de 

la misma especificidad, y SIEMPRE hay que cambiar la punta de la pipeta al cambiar de vial. 

IMPORTANTE: Para evitar cualquier contaminación entre los diferentes reactivos, es imperativo poner cada tapón sobre el vial correspondiente 

después de usarlo. 


Los antisueros deben ser conservados en la nevera (entre 2 y 8 °C). Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las 

etiquetas de los viales de antisuero. 

NOTA: Durante el transporte, los antisueros pueden permanecer a temperatura ambiente (entre 15 y 30 °C) durante 15 días sin que esto afecte a la 

calidad del test. 

7.2 SOLUCIÓN FIJADORA 

Preparación 

La solución fijadora está lista para su uso. Contiene: una solución ácida y aditivos, inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un 

funcionamiento óptimo. 

Tiene un color específico para evitar errores al usarlo. 

Utilización 

Para la fijación de las proteínas separadas mediante electroforesis en el carril de referencia (ELP). 

IMPORTANTE: Para evitar cualquier contaminación entre los diferentes reactivos, es imperativo poner cada tapón sobre el vial correspondiente 

después de usarlo. 


La solución fijadora puede conservarse a temperatura ambiente o refrigerada. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta 

del vial de solución fijadora. 

Debe estar exenta de precipitados. 

8. APLICADORES 

Uso 

Aplicadores precortados de un solo uso para la aplicación de la muestra. 

Almacenamiento 

Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados. 

9. SEGMENTOS PARA ANTISUEROS 

Utilización 

Segmentos coloreados, de un solo uso, para la aplicación de la solución fijadora y de los antisueros en la inmunofijación. 

ATENCIÓN: Manipule con cuidado los segmentos que contengan antisueros. 

10. PAPELES DE FILTRO FINOS 

Uso 

Papeles finos absorbentes precortados, de un solo uso, para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicación de la muestra. 

Conservación 

Les papeles de filtro finos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera. 

- 54 -


11. PAPELES DE FILTRO GRUESOS 

Uso 

Papeles de filtro gruesos, de un solo uso, para la eliminación de proteínas no precipitadas del gel, después de haber realizado la inmunofijación. 

Conservación 

Los papeles de filtro gruesos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera. 

REACTIVOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. CAJA DE ANTISUEROS Y SOLUCIÓN FIJADORA PARA IF (para los kits 4301, 4302, 4304, 4308 y 4309) 

La Caja de Antisueros y Solución Fijadora para inmunofijación IF (SEBIA, referencia N° 4315) contiene cinco viales de antisueros y un vial de solución 

fijadora de 1 ml cada uno, específicos de la técnica de inmunofijación realizada con la plantilla dinámica. 

1.1 ANTISUEROS 

Vea el párrafo precedente 7.1. 

1.2 SOLUCIÓN FIJADORA 

Vea el párrafo precedente 7.2. 

2. SOLUCIÓN DECOLORANTE 

Preparación 

Cada vial de Solución Decolorante stock (SEBIA, PN 4540, 10 viales de 100 ml) se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada. Es 

conveniente diluir sólo 5 ml de la solución stock hasta 5 litros, volumen del contenedor de la solución decolorante. Después de la dilución, la solución 

decolorante de trabajo contiene: ácido cítrico, 0.5 g/l. 

Uso 

Para la destinción : eliminación del exceso de tinción y de fondo de los geles. 

Para el lavado del compartimento de coloración. 

Para neutralizar la acidez del decolorante, introduzca dentro del contenedor de desechos vacío 15 ml de sosa al 50 % (solución comercial). 


Almacenar la solución decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada. La solución stock de decolorante es estable hasta la fecha de caducidad 

indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. NO CONGELAR. La solución decolorante de trabajo es estable una semana a temperatura 

ambiente en un contenedor cerrado. No añadir azida sódica. 

Desechar la solución decolorante de trabajo si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación bacteriana. 

Para evitar la proliferación microbiana en la solución decolorante diluida que se vaya a almacenar durante más de una semana, añada 5 µL/dL de ProClin 300. 

El decolorante diluido al que se ha añadido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de 

caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante. 

3. SOLUCION DE LAVADO HYDRASYS 

Preparación 

Cada vial de la Solución stock de lavado HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 ml cada una) se diluye hasta 5 litros con agua destilada o 

desionizada. Después de la dilución, la solución de trabajo de lavado contiene: tampón alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; azida sódica. 

ATENCIÓN: La solución stock de lavado contiene azida sódica 0.625 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, consultar 

inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su tendencia a formar 

compuestos explosivos con la azida sódica. Lavar siempre con gran cantidad de agua. 

Uso 

Sirve patra limpiar el Compartimento de Tinción del HYDRASYS. Usar periódicamente, p. ej., si el instrumento se usa a diario, lavar el compartimento 

de tinción semanalmente. 

Ver la hoja de instrucciones para las indicaciones de uso. 


Almacenar ambas soluciones de lavado, stock y de trabajo, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados. La solución stock de 

lavado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial. 

Desechar la solución de trabajo de lavado si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación bacteriana. 

4. FLUIDIL 

Preparación 

El Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 ml) está listo para su uso. 

Uso 

Para diluir muestras turbias o viscosas, p. ej., sueros que contienen crioglobulinas o criogeles. 


Almacenar a temperatura ambiente. es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial de Fluidil. 

El Fluidil debe mostrar ausencia de precipitados. 

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, referencia N° 1210 ó N° 1211. 

2. Pipeteador, manual automático, como el HYDRAplus SEBIA, referencia N° 1215, para la carga de los aplicadores o de los segmentos para 

antisueros. 

3. Cámara húmeda, referencia N° 1270, suministrada con el sistema HYDRASYS. 

4. Contenedores de reactivo de plástico suministrados con el sistema HYDRASYS. 

5. Guía metálica de la plantilla SEBIA, suministrada con el sistema HYDRASYS. 

6. Plantilla dinámica, SEBIA, referencia N° 1255. 

7. Pipetas de 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl y 200 µl. 

- 55 -


MUESTRAS PARA EL ANALISIS 

Extracción y almacenamiento de las muestras 

Se recomienda analizar muestras frescas. El suero y la orina deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en los 

laboratorios clínicos. Refrigere las muestras (2 a 8 °C) tan pronto como sea posible después de su obtención, durante una semana. Para períodos 

de almacenamiento más prolongados, almacene las muestras congeladas (son estables durante un mes al menos). 

Congelar los sueros con azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. 

La conservación de las orinas congeladas mejora añadiendo a la muestra tampón HEPES 0,1 M (pH 6,75) y / o azida sódica 0,2 g/l. 

IMPORTANTE: No utilice conservantes que contengan ácido bórico. 

Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicación debidas a la desnaturalización de proteínas o lipoproteínas. 

Preparación de las muestras 

1. Sueros 

Diluya 1 muestra para el HYDRAGEL 1 IF, 2 ó 4 muestras para el HYDRAGEL IF 2/4 según el kit y 9 muestras para el HYDRAGEL 9 IF. 

Diluirlos sueros antesde su aplicación para prevenir el efecto prozona, consecuencia de elevados niveles de antígeno, mezclando de forma 

homogénea. 

| CARRIL | SUERO (µl) | DILUYENTE (µl) | 

| Carril inmunológico G | 20 | 100 | 

| Perfil electroforético ELP y los otros carriles inmunológicos | 30 | 60 | 

Casos particulares 

• Si la concentración de inmunoglobulinas es superior a 20 g/l (en caso hipergammaglobulinemia), se recomienda aumentar el factor de dilución 

de las muestras (excepto en el carril ELP) con el fin de obtener una concentración de inmunoglobulinas normal. 

• Si la concentración de inmunoglobulinas es inferior a 5 g/l (en caso de hipogammaglobulinemia), se recomienda disminuir el factor de dilución 

de las muestras. 

• Para realizar una investigación de la presencia de cadenas ligeras libres séricas o urinarias se recomienda usar el programa de migración 

" BENCE JONES ". 

Para ello, el análisis podrá realizarse con el kit IF y con los antisueros ANTI-KAPPA LIBRE (SEBIA, referencia N° 4370) y ANTI-LAMBDA LIBRE 

(SEBIA, referencia N° 4371) o con el kit HYDRAGEL 1, 2, 4 ó 9 BENCE JONES (SEBIA, referencias N° 4321, 4322, 4324 ó 4329). 

En caso de búsqueda de cadenas libres séricas, diluya el suero con salina o con el diluyente para inmunofijación prediluido a 1/4 (1 volumen 

de diluyente + 3 volúmenes de agua destilada o desionizada) a 1/10 para los carriles ELP, GAM, K y L (1 volumen de suero + 9 volúmenes de 

diluyente prediluido o de salina) y a 1/3 (1 volumen de suero + 2 volúmenes de diluyente prediluido o de salina) para los carriles revelados con 

los antisueros anti-kappa libre y anti-lambda libre. 

Si la concentración de inmunoglobulinas es inferior a 5 g/l, se recomienda diluir menos el suero; por ejemplo, a 1/5 para los carriles ELP, GAM, 

K y L y a 1/2 para los carriles Kl y Ll. 

• Después de la conservación en la nevera (entre 2 y 8 °C) o de la congelación, algunos sueros (en particular los que contienen una crioglobulina 

o un criogel) se vuelven viscosos o turbios. Estos sueros presentan dificultades de aplicación cuando se usa el aplicador de HYDRASYS, ya 

que no difunden bien en los dientes del aplicador. Hay que tratar estos sueros con Fluidil antes de aplicarlos: añada 25 µl de Fluidil a 75 µl de 

suero, agite 15 segundos en el vórtex, y luego siga con el procedimiento normal. 

• Algunas paraproteínas están polimerizadas, y el suero presenta entonces una banda de aspecto "monoclonal" en todos los carriles. Prepare 

una solución reductora añadiendo un 1 % de ß-mercaptoetanol (BME) en Fluidil. Trate estos sueros antes de aplicarlos con esta solución: añada 

25 µl de solución reductora a 75 µl de suero puro, agite en el vórtex y deje en reposo durante 15 minutos como mínimo (máximo 30 minutos), 

y luego siga con el procedimiento normal. 

• Para el análisis de las Ig D y/o de las Ig E, aplique las mismas diluciones que para las cadenas ligeras libres y ligadas. 

2. Orinas concentradas 

La mayoría de las muestras de orina deben ser concentradas, mediante un dispositivo apropiado, para conseguir que la concentración proteica 

total sea de unos 5 g/l o una concentración de inmunoglobulinas totales alrededor de 1 g/l. Si no se conoce la concentración proteica urinaria, 

concentre la orina de 20 a 100 veces mediante un dispositivo apropiado. 

IMPORTANTE: Algunas orinas contienen una concentración importante de sales. Éstas producen una deformación del gel durante la migración 

que puede alterar los perfiles después de la electroforesis. Conviene eliminar este exceso de sales mediante diálisis. 

En caso de orinas turbias (concentradas o no), se recomienda eliminar las partículas centrifugando las muestras (durante 10 minutos a 

3000 r.p.m.) o mediante filtración (con un filtro de 0,45 µm) para obtener una buena difusión en los aplicadores. 

La sensibilidad puede mejorarse aumentando el tiempo de aplicación de las muestras y el tiempo de incubación con el antisuero (usando el 

programa de migración "BENCE JONES"). El límite de detección de una proteína monoclonal es entonces entre 10 y 50 mg/l. Si se usa esta 

técnica se recomienda usar orinas no concentradas. 

NOTA: Una concentración demasiado importante de la muestra puede acarrear la aparición de artefactos tales como falsas bandas de aspecto 

"monoclonal". Es por tanto importante no concentrar las orinas por encima de la concentración recomendada. 

Caso particular 

Algunas cadenas ligeras tienden a polimerizarse y a formar agregados, y la orina presenta entonces una banda de aspecto "monoclonal" en todos 

los carriles. Trate las muestras como sigue: mezcle 100 µl de orina con 5 µl de ß-mercaptoetanol previamente diluido a 1/10 con agua destilada o 

desionizada, agite en el vórtex y siga después con el procedimiento habitual. 

Muestras a descartar 

• No utilice plasma. El fibrinógeno da lugar a una banda cerca del punto de aplicación. Esta banda puede falsear la interpretación del resultado (ya 

que puede confundirse con una gammapatía). 

• No use muestras hemolizadas. 

• No use muestras de orina antiguas o mal conservadas, ya que pueden haber sido alteradas por degradaciones enzimáticas. 

PROCEDIMIENTO 

El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautomático multiparamétrico. Las etapas automáticas incluyen el procesamiento de los geles de agarosa 

HYDRAGEL en la siguiente secuencia: aplicación de la muestra, migración electroforética, secado, tinción, destinción y secado final. Las etapas 

manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles, y la puesta en marcha del instrumento para la operación. 

LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS 

- 56 -


I. PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACIÓN 

1. Encender el HYDRASYS. 

2. Coloque un aplicador para el HYDRAGEL 1 IF ó HYDRAGEL IF 2/4 (2 muestras), dos aplicadores para el HYDRAGEL IF 2/4 (4 muestras) ó 

3 aplicadores para el HYDRAGEL 9 IF, en una superficie plana, con los números de los pocillos hacia arriba (Fig. 1). 

- Aplique 10 µl de muestra, suero diluido u orina concentrada, en cada pocillo. La carga de cada aplicador debe hacerse en menos de 

2 minutos. 

| CARRIL MIGRACION / IMMUNOFIJACION | 

POCILLOS DE APLICACIÓN : ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 MUESTRA No 1 Ó 3 2 3 4 5 6 7 MUESTRA No 2 Ó 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF MUESTRA No 1, 4 Ó 7 1 2 3 4 5 6 MUESTRA No 2, 5 Ó 8 7 8 9 10 11 12 

| MUESTRA No 3, 6 Ó 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANTE: En el análisis hecho con HYDRAGEL IF 2/4, no utilice los pocillos 1, 8 y 15; se recomienda identificarlos previamente con un 

rotulador para evitar aplicar muestra en ellos por error. 

- Colocar cada aplicador en la cámara húmeda, con el peine hacia arriba (asirlos por el plástico protector del peine). 

Ver la hoja de instrucciones de la cámara húmeda para más detalles. 

- Deje que las muestras difundan durante 5 minutos después de la aplicación de la última muestra. Para una conservación prolongada 

(8 horas como máximo), coloque la cámara húmeda en la nevera. 

3. Abrir la puerta del Módulo de migración y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador. 

ATENCIÓN: ¡Nunca cerrar la puerta cuando los soportes están elevados! 

4. Seleccione en el menú el programa de migración "1 IF ME/MD" para el HYDRAGEL 1 IF, "2/4 IF ME/MD" para el HYDRAGEL IF 2/4 ó 

"9 IF MD" para el HYDRAGEL 9 IF. 

5. Extraer las esponjas tamponadas de su envoltorio ; asirlas por los extremos de plástico. Engarzar los extremos de plástico agujereados con 

las puntas metálicas del soporte de los electrodos ; los extremos de plástico deben quedar encarados al soporte (Fig. 2). 

6. Abrir el contenedor del HYDRAGEL. 

- Extienda un papel de filtro fino de manera rápida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de líquido. Retire el papel 

inmediatamente. 

ADVERTENCIA: Para evitar que se deshidrate, no deje que el papel de filtro contacte con el gel durante mucho tiempo. 

- Dispense 120 µl de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 1 IF ó 200 µl para el HYDRAGEL IF 2/4 e HYDRAGEL 9 IF, en el 

tercio inferior del cuadro serigrafiado en la placa del módulo de migración. 

- Colocar el gel (la cara de agarosa hacia arriba) con su lado inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado (Fig. 3). 

- Aplicar el gel en la superficie, haciéndolo contactar con el agua (Fig. 3). Asegurarse que no queden burbujas, que el agua esté extendida 

bajo toda la superficie del gel y que éste esté alineado con el marco serigrafiado. 

7. Devolver ambos soportes a su posición original. Las esponjas tamponadas no deben tocar el gel. NO FORZAR LOS SOPORTES HACIA 

ABAJO. 

8. Extraer el(los) aplicador(es) de la cámara húmeda. Asirlo(s) po el plástico protector. 

- Romper el plástico protector precortado del peine. 

- Ponga el/los aplicador/es en el soporte de los aplicadores: 

- HYDRAGEL 1 IF ó HYDRAGEL IF 2/4 (2 muestras) : posición N° 6, 

- HYDRAGEL IF 2/4 (4 muestras) : posiciones N° 3 y 9, 

- HYDRAGEL 9 IF : posiciones N° 2, 6 y 10. 

IMPORTANTE: Los números impresos en el(los) aplicador(es) deben quedar de cara al usuario (Fig. 4). 

Para una perfecta reproducibilidad de la zona de aplicación, desplace los aplicadores hacia uno de los lados del soporte de los aplicadores, 

por ejemplo hacia la izquierda. 

9. Cerrar la puerta del módulo de migración. 

10. Iniciar el procedimiento inmediatamente, presionando la tecla "START" (flecha verde) en el lado izquierdo del teclado. 

IMPORTANTE: Asegurarse que la toma de aire en el lado derecho del instrumento no está bloqueada. 

MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Los dos soportes descienden, con lo cual esponjas tamponadas y aplicador(es) entran en contacto con la superficie del gel. 

• El soporte del aplicador se eleva. 

• Migración a 10 W constantes para el HYDRAGEL 1 IF y a 20 W constantes para el HYDRAGEL IF 2/4, hasta que se hayan acumulado 42 Vh 

(durante unos 9 minutos) y a 20 W constantes hasta que se hayan acumulado 36 Vh (durante unos 7 minutos) para el HYDRAGEL 9 IF, a 20 °C, 

siendo la temperatura controlada por efecto Peltier. 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos. 

• Un pitido audible se produce al finalizar la migración. 

En pantalla aparece el siguiente mensaje: " AS". 

NOTA: El módulo de migración permanece con la puerta cerrada durante los pasos de migración correspondientes. 

- 57 -


II. PREPARACIÓN DE LA INMUNOFIJACIÓN 

Los diferentes elementos de la plantilla dinámica (guía de referencia coloreada, segmento para antisueros, soporte del segmento, guía y reductor de 

superficie) aparecen en la figura 5. 

Durante la migración, prepare la plantilla dinámica de la forma siguiente: 

1. Ponga la guía de la plantilla dinámica en una superficie plana. 

IMPORTANTE: El análisis de una o dos muestras con la plantilla dinámica necesita la utilización del reductor de superficie, que debe 

colocarse en la guía de la plantilla dinámica. 

2. Ponga un segmento para antisueros en el soporte del segmento (Fig. 6): 

- Incline el segmento 45° y colóquelo en las patillas del soporte del segmento. 

- Apoyándose en estos resortes, gire el segmento para fijarlo en las muescas del soporte del segmento. 

ATENCIÓN: Compruebe que el segmento esté fijado correctamente en el soporte del segmento: los salientes situados en los 

extremos del segmento deben estar bien encajados en las dos muescas del soporte del segmento. 

3. Coloque el conjunto segmento – soporte del segmento en la guía de la plantilla dinámica (Fig. 7) (equipada con un reductor de superficie para 

el análisis de 1 ó 2 muestras) y luego ponga la guía de referencia coloreada, que indica los lugares en los que aplicar los reactivos, 

correspondiente a la técnica, sobre el soporte del segmento delante de los pocillos del segmento para antisueros (Fig. 8). 

4. Aplique los reactivos, cuyo color se indica en la tabla inferior, en el segmento para antisueros: 

- Segmento de 6 pocillos para HYDRAGEL 1 IF : 8 µl por pocillo, 

- Segmento de 15 pocillos para HYDRAGEL IF 2/4 : 8 µl por pocillo para el análisis de 2 muestras, 

12 µl por pocillo para el análisis de 4 muestras, 

- Segmento de 18 pocillos para HYDRAGEL 9 IF : 8 µl por pocillo. 

CARRIL REACTIVO COLOR ELP Solución Fijadora Amarillo G antisuero anti-cadenas pesadas gamma Rosa A antisuero anti-cadenas pesadas alfa azul oscuro M antisuero anti-cadenas pesadas mu verde amarillento K antisuero anti-cadenas ligeras kappa (libres y ligadas) verde claro 

| L | antisuero anti-cadenas ligeras lambda (libres y ligadas) | azul claro | 

NOTA: Para evitar errores en la aplicación, los reactivos están coloreados y el color del carril a rellenar aparece en la guía de referencia 

coloreada. 

IMPORTANTE: En el análisis hecho con HYDRAGEL IF 2/4, no utilice los pocillos del segmento de antisueros que están en las posiciones 

1, 8 y 15. 

Aspire los reactivos sin que se formen burbujas de aire en la punta de la pipeta. 

Para aplicar los reactivos (Fig. 9) : 

- sostenga la pipeta inclinada, 

- apoye ligeramente la punta de la pipeta en un lado del pocillo y dispense la gota de reactivo en el pocillo. 

5. Retire la guía de referencia coloreada. 

III. INMUNOFIJACIÓN 

1. Abra la tapa del módulo de migración. 

2. Saque el/los aplicador/es y tírelo/s. 

3. Eleve los soportes de los electrodos y los aplicadores y saque las esponjas tamponadas cogiéndolas por las lengüetas y tírelas. 

- Saque los soportes de los electrodos y los aplicadores. 

- Limpie los electrodos con un pañuelo de papel humedecido. 

- Deje el gel en su lugar en el módulo de migración. 

4. Ponga en su lugar la plantilla dinámica de aplicación de reactivos de la forma siguiente (Fig. 10) : 

- coloque la barra metálica destinada al enganche de la plantilla dinámica con ayuda de los pernos de anclaje. (Una vez colocada, la barra 

metálica puede permanecer en el HYDRASYS) ; 

- coloque las muescas de la plantilla en las señales de la barra cogiendo la plantilla por la lengüeta ; 

- gire la plantilla para colocarla en la placa del HYDRASYS. 

IMPORTANTE : Ajuste previamente la posición de la plantilla para obtener una correspondencia perfecta entre los perfiles electroforéticos 

del gel y los carriles de inmunofijación de la plantilla. 

5. Ponga el soporte del segmento en el punto más bajo de la guía, dirigido hacia el operario. Sostenga el conjunto soporte-segmento por el asa 

situada a la derecha y presione en el punto de apoyo central, de forma que el segmento contacte con el gel. Deje de presionar, y entonces 

los reactivos se extenderán bajo cada carril (Fig. 11). 

6. Inmediatamente, con ayuda del asa situada a la derecha, reparta los reactivos efectuando un movimiento lento y regular de ida y vuelta de 

la plantilla dinámica por encima del gel (la aplicación debe durar unos 5 segundos) (Fig. 12). 

ATENCIÓN: Durante esta operación, la plantilla sólo debe cogerse por el asa sin tocar la guía. No presione nunca por segunda vez: 

los reactivos podrían mezclarse. 

7. Saque la guía y la plantilla dinámica: 

- Coja la guía por el asa ; 

- Gire la guía alrededor de la barra metálica y sáquela ; 

- Saque el segmento del soporte y tírelo. 

ATENCIÓN: Manipule con cuidado los segmentos que contengan antisueros. 

- Queda un ligero exceso de reactivos sobre el gel en forma de gota a la altura de los orificios de los pocillos al quitar la plantilla, sin ningún 

efecto en los resultados. 

8. Cierre la tapa del módulo de migración. 

9. Inicie el procedimiento inmediatamente apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

En la pantalla aparece el mensaje: "[INCUBACIÓN]". 

- 58 -


INMUNOFIJACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Incubación a 20 °C, controlados por efecto Peltier, durante 5 minutos. 

• Suena un pitido y la tapa del módulo de migración se desbloquea. 

En la pantalla aparece el mensaje: " PAP.". 

NOTA: Durante la incubación, la tapa del módulo de migración permanece bloqueada. 

IV. ABSORCIÓN CON PAPEL 

1. Abra la tapa del módulo de migración. 

2. Aplique un papel de filtro grueso sobre el gel: 

- incline el papel de filtro grueso unos 45° y alinee el borde inferior del papel de filtro con el borde inferior del gel ; 

- coloque el papel encima del gel. 

ATENCIÓN: Presione sobre toda la superficie del papel de filtro para asegurar un contacto perfecto entre el gel y el papel. 

3. Cierre la tapa del módulo de migración. 

4. Inicie el procedimiento apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

ABSORCIÓN CON PAPEL – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Absorción a 40 °C, controlados por efecto Peltier, durante 3 minutos. 

En la pantalla aparece el mensaje: "[ABSORCIÓN]". 

• Suena un pitido. 

En la pantalla aparece el mensaje: "❊ PAP.". 

V. SECADO DEL GEL 

1. Abrir la tapa del módulo de migración 

2. Extraer el papel de filtro, dejando el gel en su posición actual. 

3. Cerrar la tapa. 

4. Apretar la tecla "START" (flecha verde situada a la izquierda en el teclado). 

SECADO DEL GEL – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Secado a 50 °C controlado mediante efecto Peltier, durante 6 minutos. 

• Un pitido nos indica que debemos levantar la tapa. El gel permanecerá a 50 °C mientras la tapa permanece cerrada. 

NOTA: El módulo de migración permanece cerrado mientras se produce el proceso de secado. 

VI. PREPARACIÓN DE LAS ETAPAS DE LAVADO, COLORACIÓN Y DECOLORACIÓN DEL GEL 

1. Abrir la tapa. 

2. Extraer el gel (una vez seco) para su procesado posterior. 

3. Abrir el soporte del gel. Colocar el gel seco (con la superficie mirando hacia arriba) en los orificios de las dos varillas y cerrar el soporte. 

Comprobar que el gel está colocado adecuadamente dentro del soporte. (Fig. 13). 

4. Colocar el soporte en el Módulo de Procesado / Coloración. 

IMPORTANTE: Antes de comenzar con el procesado / coloración comprobar lo siguiente: 

- Contenedor de Solución de lavado: contenido mínimo de 400 ml ; 

- Contenedor de Colorante: 300 ml de colorante ; 

- Contenedor de Decolorante: como mínimo 1 litro ; 

- Contenedor de Deshechos vacío ; 

- Los canales no utilizados deberán taparse. 

5. Seleccionar el programa de coloración "IF ACID VIOLET" o "IF AMIDO" e iniciar el proceso apretando la tecla "START" (flecha verde situada 

a la derecha en el teclado). 

Durante todas las secuencias de coloración, decoloración y secado, el sistema permanece bloqueado. 

Después del enfriamiento de la cubeta, una señal sonora (bip) suena y el sistema se desbloquea (la ventilación se mantiene hasta la 

recuperación del porta-films). 

NOTAS: 

- La temperatura de la placa de migración puede descender hasta 20 °C mientras permanezca abierta la tapa (en menos de 5 minutos). En este 

momento podremos iniciar una nueva migración. 

- Volver a colocar el portaaplicadores en su ubicación original. 

- Lavar la placa de migración con un trapo suave ligeramente humedecido. 

VII.FINAL DE LA COLORACIÓN DEL GEL 

1. Saque el soporte del gel del compartimento de coloración; abra el soporte del gel y saque el gel seco. 

2. Si es necesario, limpie el respaldo del gel (el lado de soporte de plástico) con un pañuelo de papel humedecido. 

NOTA: En los geles con varias filas de muestras (2 ó 3), las longitudes de migración pueden ser ligeramente diferentes, sin ninguna repercusión 

en los resultados. 

- 59 -


RESULTADOS 

Interpretacion 

1. Suero 

Ausencia de componentes monoclonales 

• Un suero normal muestra una tinción tenue y difusa de las inmunoglobulinas policlonales en todas las pistas. 

• Una hipergammaglobulinemia se caracteriza por una tinción fuerte y difusa en la zona de las gamma, sin presentar bandas claramente 

definidas. 

Presencia de componentes monoclonales 

• La presencia de una proteina monoclonal(gammapatía) se caracteriza por una banda monoclonal en las pistas gamma, alfa o mu, y en la pista 

kappa o lambda indistintamente.La banda monoclonal detectada, normalmente bien definida y focalizada, deberá estar posicionada a la misma 

altura que la previsible banda monoclonal localizada en la pista de referencia (ELP). 

• Si no hay reacción con uno de los antisueros anti-cadenas pesadas aplicados y hay reacción con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras, 

eso puede significar : 

a) la presencia de una gammapatía de Ig D ó Ig E que habrá que confirmar con los antisueros anti-cadenas pesadas detla o épsilon. 

b) la presencia de una cadena ligera libre que habrá que confirmar con los antisueros específicos anti-cadenas ligeras libres kappa o lambda. 

• La presencia de bandas en alguna de las pistas correspondientes a los antisueros anti cadenas ligeras y a su vez en las pistas 

corresponcdientes a los antisueros cadenas pesadas puede indicarnos una Gammapatía de cadenas pesadas (muy poco frecuente). 

Presencia de dos o más componentes monoclonales 

En algunos casos, la proliferación de varios clones de células B se muestran como varias bandas al realizar una inmunofijación : 

• Una gammapatía biclonal se caracteriza por la presencia de dos bandas en la zona correspondiente al las cadenas pesadas (iguales o 

diferentes) y dos bandas en la correspondiente a las cadenas ligeras (iguales o diferentes). 

• Las inmunoglobulinas polimerizadas se caracterizan por la presencia de varias bandas en la misma cadena pesada y la misma cadena ligera. 

Habrá que realizar un tratamiento reductor con ß-mercaptoetanol a la muestra para después volver a hacer la inmunofijación para confirmar la 

presencia de una sola anomalía monoclonal (Vea "Muestras para el análisis"). 

• Un perfil oligoclonal se caracteriza por la presencia de múltiples bandas en una o varias cadenas pesadas y en una o las dos cadenas ligeras. 

Casos especiales 

• Cuando se observa una banda monoclonal en la electroforesis (pista ELP), mas no se confirma mediante inmunofijación,debe sospecharse la 

presencia de fibrinógeno (plasma como muestra). 

• Cuando se aprecia una única banda en todas las pistas podemos pensar en la presencia de una crioglobulina o una Ig M polimerizada. 

Despolimerizar con un agente reductor y repetir el procedimiento (ver "Muestras para análisis"). 

2. Orinas concentradas 

El principio de interpretación es idéntico al descrito para el suero. 

Una gammapatía (presencia de una inmunoglobulina monoclonal) se caracteriza por una banda estrecha detectada con uno de los anti-cadenas 

pesadas (gamma, alfa o mu) y con uno los anti-cadenas ligeras (kappa o lambda). La fracción monoclonal detectada, generalmente estrecha y bien 

visible, debe estar situada en el mismo nivel de migración que la banda detectada en el carril de referencia (ELP). 

Una proteína de Bence Jones se caracteriza por: 

• una banda monoclonal detectada con un anti-cadenas ligeras (libres y ligadas) kappa o lambda (carriles K o L), 

• la ausencia de banda monoclonal con los anti-cadenas pesadas gamma, alfa o mu (carriles G, A o M). 

Una proteína de Bence Jones que presenta diferentes estados de polimerización se caracteriza por: 

• varias bandas detectadas con un anti-cadenas ligeras (libres y ligadas) kappa o lambda (carriles K o L), 

• la ausencia de banda monoclonal con los anti-cadenas pesadas gamma, alfa o mu (carriles G, A o M). 

Habrá que realizar un tratamiento reductor con ß-mercaptoetanol a la muestra para después volver a hacer la inmunofijación usando antisueros 

anti-cadenas ligeras libres (anti-kappa libre o anti-lambda libre). 

Una paraproteína sérica que pasa a la orina con ausencia de proteína de Bence Jones se caracteriza por: 

• una banda monoclonal detectada con los anti-cadenas pesadas gamma, alfa o mu (carriles G, A o M), 

• la misma banda detectada con un anti-cadenas ligeras (libres y ligadas) kappa o lambda (carriles K o L). 

Una paraproteína sérica que pasa a la orina asociada a una proteína de Bence Jones se caracteriza por: 

• una banda monoclonal detectada con un anti-cadenas pesadas gamma, alfa o mu (carriles G, A o M), 

• dos bandas detectadas con uno o los dos anti-cadenas ligeras kappa y/o lambda (libres y ligadas). 

Interferencias y limitaciones 

Vea MUESTRAS PARA ANILISIS. 

La utilización de antisueros distintos a los específicos para la técnica de inmunofijación realizada con la plantilla dinámica puede afectar a la calidad 

de los resultados 

Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no puede darse 

ninguna garantía respecto a la detección de la totalidad de todos los componente monoclonales. 

Resolución de problemas 

Avisar al Servicio de Atención Técnica del distribuidor cuando el test no funcione, pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la 

preparación y almacenaje de los materiales y para el procedimiento a seguir. 

Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como las informaciones relativas a la eliminación de los desechos, están disponibles 

en el Servicio de Asistencia Técnica de su distribuidor. 

CARACTERISTICAS TECNICAS 

Reproducibilidad intraserial 

Técnica HYDRAGEL 4 IF 

Migración de tres (3) muestras de suero patológicas : Dos sueros con una fuerte gammapatía monoclonal y un suero que presenta dos paraproteínas 

débiles. 

La migración y la inmunofijación de cada muestra se ha realizado con 2 lotes diferentes de geles HYDRAGEL IF 2/4 a razón de 4 análisis por gel, 

seguidos de una coloración con violeta ácido. 

- 60 -



Migración de tres (3) muestras de suero patológicas con una fuerte gammapatía monoclonal, presentando cada muestra una paraproteína. 

La migración y la inmunofijación de cada muestra se ha realizado con 2 lotes diferentes de geles HYDRAGEL 9 IF a razón de 9 análisis por gel, 

seguidos de una coloración con violeta ácido. 

Todas las muestras analizadas proporcionan los mismos resultados para los 2 lotes de geles probados. Los perfiles obtenidos son característicos de 

cada una de las muestras analizadas. 

En la técnica HYDRAGEL 4 IF, la inmunofijación sólo detecta una banda monoclonal en las dos primeras muestras, y detecta las dos bandas 

monoclonales esperadas en la tercera muestra patológica. 

En la técnica HYDRAGEL 9 IF, la inmunofijación sólo detecta una banda monoclonal en cada una de las tres muestras patológicas. 

Reproducibilidad interserial 


Migración de cuatro (4) muestras diferentes de sueros patológicos : Dos sueros con una fuerte gammapatía monoclonal, un suero que presenta dos 

paraproteínas débiles y un suero que presenta una paraproteína fuerte y otra débil. 

La migración y la inmunofijación de cada muestra han sido realizadas en 10 geles de HYDRAGEL IF 2/4 de 3 lotes diferentes, seguidas de una 

coloración con violeta ácido. 


Migración de nueve (9) muestras de suero patológicas que presentan una o varias paraproteínas. 

La migración y la inmunofijación de cada muestras han sido realizadas en 10 geles de HYDRAGEL 9 IF de 3 lotes diferentes, seguidas por una 

coloración con violeta ácido. 

En las dos técnicas, todas las muestras analizadas proporcionan los mismos resultados para los 3 lotes de geles probados. Los perfiles obtenidos son 

característicos de las muestras analizadas y la inmunofijación pone en evidencia las bandas monoclonales esperadas en todas las muestras. 

Exactitud 

Técnica HYDRAGEL 4 IF Violeta ácido 

Setenta y tres (73) muestras diferentes de sueros patológicos, once (11) sueros normales y doce (12) orinas concentradas han sido analizados en 

paralelo en geles HYDRAGEL IF 2/4 y con otro sistema comercial de geles de agarosa. 

Técnica HYDRAGEL 4 IF Negro amido 

Veintiocho (28) muestras diferentes de sueros patológicos y cuatro (4) sueros normales han sido analizados en paralelo en geles HYDRAGEL IF 2/4 y 

con otro sistema comercial de geles de agarosa. 

Técnica HYDRAGEL 9 IF Violeta ácido 

Noventa y cinco (95) muestras diferentes de sueros patológicos, cuatro (4) sueros normales y doce (12) orinas concentradas, han sido analizados en 

paralelo en geles HYDRAGEL 9 IF y con otro sistema comercial de geles de agarosa. 

En las tres técnicas, los resultados obtenidos muestran una correlación perfecta entre los dos sistemas de análisis, y se han detectado las mismas 

bandas en todas las muestras patológicas analizadas, con una sensibilidad del 100 % y una especificidad del 100 % respecto a esta última técnica, 

calculadas según el método recomendado (Wendling, 1986). 

Sensibilidad 

Cuatro sueros con una gammapatía han sido diluidos serialmente y analizados con la técnica HYDRAGEL 4 IF, con coloración con violeta ácido y con 

negro amido. 

Los resultados se resumen a continuación. 

BANDA MONOCLONAL LÍMITE DE DETECCIÓN (g/l) MUESTRA No. TIPO CONC. (g/l) HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF VIOLETA ÁCIDO NEGRO AMIDO 1 gamma 10,9 0,12 0,12 kappa 0,12 0,12 2 | gamma 7,8 0,12 / l lambda 0,12 / 3 alfa 5,8 0,12 0,25 lambda 0,12 0,25 4 mu 3,4 0,12 0,12 

| | kappa | | 0,12 | 0,12 | 

Según la posición de la banda monoclonal, el fondo policlonal de la fracción de las gammaglobulinas y el colorante usado, el límite de detección de 

una paraproteína puede variar de 0,12 a 0,25 g/L. 

BIBLIOGRAFIA 

Para información adicional o interpretación de resultados consultar: 

(1) Le Carrer Didier, "Électrophorèse des Protéines et Immunofixation : Guide d’interprétation", Laboratoires SEBIA, 1994, Hatier - Paris. 


ed., 1994, 397 pp. 

- 61 -


UTILIZAÇÃO 

Os kits HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF e 9 IF destinam-se à detecção de proteínas monoclonais no soro ou urina humanos, por imunofixação no sistema 

semi-automático HYDRASYS. 

O sistema HYDRASYS permite realizar todas as sequências até à obtenção do gel para interpretação. As proteínas são separadas por electroforese 

em meio alcalino (pH 9,1) e depois imunoprecipitadas com antisoros de especificidades diferentes: anti-cadeias pesadas gama (Ig G), alfa (Ig A) e mu 

(Ig M), e anti-cadeias leves kapa e lambda (livres e ligadas). 

Após imunofixação, as proteínas imunoprecipitadas são coradas com negro de amido ou violeta ácido. O excesso de corante é eliminado em meio 

ácido. 

Cada gel de agarose poderá analisar: 

• 1 amostra no kit HYDRAGEL 1 IF, 

• 2 amostras no kit HYDRAGEL 2 IF, 

• 4 amostras no kit HYDRAGEL 4 IF, 

• 9 amostras no kit HYDRAGEL 9 IF. 

Para satisfazer as preferências dos diferentes utilizadores, o kit HYDRAGEL 4 IF está disponível com os corantes violeta ácido ou negro de amido. 

Para diagnóstico in vitro. Registado no INFARMED. 

PRINCÍPIO DO TESTE 

As imunoglobulinas monoclonais, marcadores das gamapatias, são detectadas por electroforese das proteínas. Elas apresentam-se sob a forma de 

bandas anormais situadas essencialmente nas zonas das beta ou gama globulinas. A imunofixação efectuada com a ajuda de antisoros 

monoespecíficos permite a identificação das bandas monoclonais despistadas por electroforese. 

A técnica é feita em quatro etapas: 

1. Separação das proteínas por electroforese em gel de agarose. 

2. Fixação e imunoprecipitação das proteínas separadas por electroforese: aplicação do fixador e dos antisoros directamente sobre o gel, ao nível das 

pistas de migração. Estes últimos difundem-se no gel, o fixador precipita todas as proteínas e os anticorpos precipitam os antigénios correspondentes. 

3. As proteínas solúveis, não precipitadas, são removidas do gel por lavagem e absorção com papel de filtro. As proteínas precipitadas ficam retidas 

no interior da matriz do gel. 

4. Coloração das proteínas e comparação da posição das bandas imunoprecipitadas com as bandas anómalas observadas após electroforese das 

proteínas. 

Para identificar de forma precisa a natureza das bandas monoclonais, as amostras são testadas simultaneamente em seis pistas. Depois da 

electroforese, a pista ELP serve como referência, mostrando o perfil electroforético das proteínas da amostra. As restantes cinco pistas permitem a 

caracterização da(s) bandas(s) monoclonal(is) graças aos anticorpos específicos anti-cadeias pesadas gama (Ig G), alfa (Ig A) e mu (Ig M), e anticadeias 

leves kapa e lambda (livres e ligadas). Esta técnica simples e rápida dá uma imagem clara e muito fácil de interpretar. 

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS NOS KITS HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF E 


KIT HYDRAGEL 1 IF REF. N° 4301 KIT HYDRAGEL 2 IF REF. N° 4302 KITS HYDRAGEL 4 IF REF. N° 4304 REF. N° 4308 REF. N° 4381* KITS HYDRAGEL 9 IF REF. N° 4309 REF. N° 4382** Geles de agarose (prontos a usar) 10 geles 10 geles 10 geles 80 geles Tiras de tampão (prontas a usar) 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 80 pacotes de 2 Diluente da solução corante (solução concentrada) 1 frasco, 60 ml Corante negro de amido (solução concentrada) 1 frasco, 20 ml Corante violeta ácido (solução concentrada) 1 frasco, 75 ml 1 frasco, 75 ml 8 frascos, 75 ml Diluente (pronto a usar) 1 frasco, 3,2 ml 1 frasco, 32 ml 1 frasco, 32 ml 2 frascos, 80 ml 3 frascos, 80 ml Fixador (pronto a usar) 1 frasco, 2,9 ml Imunoglobulinas totais de mamífero 1 frasco, 2,0 ml anti-cadeias pesadas gama (prontas a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero 1 frasco, 2,0 ml anti-cadeias pesadas alfa (prontas a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero 1 frasco, 2,0 ml anti-cadeias pesadas um (prontas a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, anti-cadeias 1 frasco, 2,0 ml leves kapa (livres e ligadas) (prontas a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, anti-cadeias 1 frasco, 2,0 ml leves lambda (livres e ligadas) (prontas a usar) Aplicadores (prontos a usar) 1 caixa de 10 2 caixas de 10 2 caixas de 10 16 caixas de 10 3 caixas de 10 24 caixas de 10 Segmentos de antisoro 1 pacote de 10 1 pacote de 10 1 pacote de 10 8 pacotes de 10 Papéis de filtro finos 1 pacote de 10 1 pacote de 10 1 pacote de 10 8 pacotes de 10 

| Papéis de filtro espessos | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 8 pacotes de 10 | 

(*) HYDRAGEL 4 IF MAXI-KIT 

(**) HYDRAGEL 9 IF MAXI-KIT 

- 62 - 

INSTRUÇÕES DE USO SEBIA - Português


NOTA: O Fixador e os Antisoros são fornecidos separadamente, excepto para o MAXI-KIT (ver REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNE- 

CIDOS). 

PARA UMA OPTIMIZAÇÃO DE RESULTADOS: 

Todos os reagentes do mesmo kit devem ser utilizados em conjunto e de acordo com as instruções de utilização. 

POR FAVOR, LEIA ATENTAMENTE AS INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO. 

1. GELES DE AGAROSE 

Preparação 

Os geles de agarose estão prontos a usar. Cada gel contém: agarose, 8 g/l; tampão tris-barbital pH 9,1 ± 0,1; aditivos, não perigosos nas concentrações 

usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Os geles de agarose contêm 0,31 % de barbital e 0,34 % de barbital sódico. Não ingerir! Se ingerido, consultar imediatamente um 

médico! 

Utilização 

Suporte para electroforese e imunofixação das proteínas. 

Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração 

Armazenar os geles horizontalmente, nas embalagens protectoras de origem, à temperatura ambiente (15 - 30 ºC) ou no frigorífico (2 - 8 ºC) (a seta 

existente na parte da frente da caixa do kit deve ficar voltada para cima). Os geles são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos 

rótulos das embalagens dos geles. Evitar variações da temperatura durante o armazenamento (ex: não armazenar perto de uma janela ou de uma 

fonte de calor). NÃO CONGELAR! 

Deitar fora o gel quando: 

(i) houver cristais ou precipitados na superfície do gel ou quando a textura do mesmo fôr muito macia (isto sucede se o gel for congelado); 

(ii) há desenvolvimento de bactérias ou fungos; 

(iii) estiver presente uma quantidade anormal de líquido na embalagem do gel (resultante da exsudação do gel devido a condições de armazenamento 

inadequadas). 

2. TIRAS DE TAMPÃO 

Preparação 

As tiras de esponja com tampão estão prontas a usar. Cada uma contém : tampão tris-barbital pH 9,1 ± 0,3 ; azida de sódio ; aditivos, não perigosos 

nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: As tiras contêm 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sódico e 0,30 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar 

imediatamente um médico! Quando deitar fora as tiras evitar o seu contacto com ácidos, chumbo ou cobre já que estes elementos formam 

compostos explosivos ou tóxicos com a azida de sódio. 

Utilização 

As tiras de tampão funcionam como reservatório de tampão da electroforese e asseguram o contacto entre o gel e os eléctrodos. 


As tiras de tampão podem ser conservadas à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). 

As tiras de tampão devem ser conservadas horizontalmente dentro da embalagem protectora (a seta na parte da frente da caixa deve permanecer 

apontada para cima). 

As tiras são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou na embalagem protectora das tiras. NÃO CONGELAR. 

3. DILUENTE DA SOLUÇÃO CORANTE (ref. n° 4308) 

Preparação 

O diluente da solução corante deverá ser utilizado como está descrito no parágrafo " SOLUÇÃO CORANTE NEGRO DE AMIDO ". 

Contém uma solução ácida. 

Utilização 

Para a preparação das soluções de corante negro de amido. 


Armazenar o diluente à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. NÃO 

CONGELAR. 

Não adicionar azida de sódio. 

4. CORANTE NEGRO DE AMIDO (ref. n° 4308) 

Preparação 

O corante negro de amido concentrado, é uma solução viscosa que pode eventualmente gelificar, o que não afecta nada a qualidade da solução final 

e o seu poder de coloração. 

Em qualquer caso, para obter uma perfeita reconstituição do corante, é necessário que seja respeitado o procedimento seguinte: 

1. Adicionar cerca de 15 ml do diluente do corante ao frasco do negro de amido concentrado. 

2. Fechar cuidadosamente o frasco. 

3. Agitar muito vigorosamente o frasco durante pelo menos 5 segundos. 

4. Transferir esta solução para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

5. Repetir esta etapa duas vezes ou se necessário 3 vezes. 

6. Transferir o diluente restante para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

7. Completar o volume para 300 ml com água destilada ou desmineralizada. 

8. Agitar muito bem esta solução durante 5 a 10 minutos. 

A solução corante está pronta a utilizar. 

NOTA : Uma reconstituição incompleta do corante pode provocar uma má coloração da fracção de albumina (baixa da percentagem ou lacuna dentro 

da fracção). 

Após diluição, a solução de corante contém: solução ácida pH ≈ 2 ; negro de amido, 4 g/l ; etilenoglicol, 6,7% ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Nocivo em caso de ingestão. 

Utilização 

Para corar geles depois da electroforese das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar a solução de corante concentrada e a solução diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico em frascos fechados para evitar a 

evaporação. 

- 63 -


A solução concentrada é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos. 

A solução diluída de corante é estável por um mês. 

Não guardar a solução de trabalho do corante próximo de uma fonte de calor. 

5. CORANTE VIOLETA ÁCIDO (ref. n° 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 e 4382) 

Preparação 

A solução de corante concentrada deve ser diluída até ao volume de 300 ml com água destilada ou desionizada. Após diluição, a solução de corante 

contém: solução ácida pH ≈ 2 ; violeta ácido 2 g/l ; etilenoglicol, 3,25 % ; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para 

optimizar o ensaio. 

AVISO: Nocivo em caso de ingestão. 

Utilização 

Para corar os geles após a electroforese e imunofixação das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar tanto a solução concentrada como a diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico em frascos fechados para evitar a evaporação. A 

solução concentrada é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. A solução diluída é estável durante 6 meses. 

6. DILUENTE 

Preparação 

O diluente é fornecido pronto a usar. Contém tampão alcalino pH 7,5 ± 0,3 ; azul de bromofenol; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, 

necessários para optimizar o ensaio. 

Utilização 

Para diluição das amostras. O azul de bromofenol permite verificar a qualidade da aplicação das amostras e da migração. 


Armazenar o diluente à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. O 

diluente deve apresentar-se livre de precipitados. 

7. FIXADOR E ANTISOROS (ref. nº 4381 e 4382) 

7.1. ANTISOROS 

Preparação 

Prontos a usar. Todos os antisoros são imunoglobulinas totais de mamífero anti-humanas. Cada um tem uma cor específica para evitar todos os erros 

de utilização. Os rótulos dos frascos têm a mesma cor que as soluções. 

Se o antisoro apresentar uma certa turvação, deixe o frasco em repouso à temperatura ambiente durante, pelo menos, 10 minutos antes da sua 

utilização. No entanto e caso a turvação persista, a reacção imunológica não será afectada. Em caso de formação de precipitado insolúvel, é 

recomendada a centrifugação do antisoro durante 5 minutos à rotação de 3000 rpm. 

Utilização 

Para imunoprecipitação das proteínas previamente separadas por electroforese. 

O antisoro pode ser originário de variadas espécies animais. Não misture o conteúdo de dois frascos diferentes de antisoros, mesmo que com a mesma 

especificidade. Actualize SEMPRE a etiqueta da pipeta quando mudar de frasco. 

IMPORTANTE: Para evitar qualquer contaminação entre os diferentes reagentes, é imperativo voltar a colocar a tampa do frasco correspondente, 

após utilização. 


Armazenar os antisoros no frigorífico (2 - 8 °C). São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos de antisoro. 

NOTA: Durante o transporte, os antisoros podem ser mantidos à temperatura ambiente (15 - 30 ºC) durante 15 dias sem que isso afecte a qualidade 

do teste. 

7.2. FIXADOR 

Preparação 

O fixador vem pronto a usar. Contém: solução ácida; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. Tem uma 

cor específica para evitar todos os erros de utilização. A cor é igual à do rótulo do frasco. 

Utilização 

Para fixar as proteínas separadas por electroforese na pista de referência (ELP). 

IMPORTANTE: Para evitar qualquer contaminação entre os diferentes reagentes, é imperativo voltar a colocar a tampa do frasco correspondente, 

após utilização. 


Armazenar o fixador à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. 

O fixador deve estar livre de precipitados. 

8. APLICADORES 

Utilização 

Aplicadores pré-cortados, de utilização única, para aplicação das amostras. 

Armazenamento 

Armazenar os aplicadores em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

9. SEGMENTO DE ANTISORO 

Utilização 

Segmentos coloridos, de utilização única, para a aplicação do fixador e dos antisoros na imunofixação. 

ATENÇÃO: Manipular os suportes contendo antisoros com precaução. 

10. PAPÉIS DE FILTRO FINOS 

Utilização 

Pré-cortados, de utilização única, destinam-se a absorver o excesso de humidade da superfície do gel antes da aplicação da amostra. 

Armazenamento 

Armazenar os papéis de filtro finos em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

- 64 -

11. PAPÉIS DE FILTRO ESPESSO 

Utilização 

De utilização única, destinam-se a absorver as proteínas não precipitadas da superfície do gel depois da fase da imunofixação. 

Armazenamento 

Armazenar os papéis de filtro espessos em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 


REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. KIT COM ANTISOROS E FIXADOR (para os kits com ref. 4301, 4302, 4304 e 4309) 

O kit de antisoros e fixador para imunofixação (SEBIA, ref. nº 4315) contém 5 frascos de antisoros e um de solução fixadora, com 1 ml cada, 

especificos para a realização do procedimento de imunofixação com a Máscara Dinâmica. 

1.1 ANTISOROS 

Ver secção 7.1. 

1.2 FIXADOR 

Ver secção 7.2. 

2. SOLUÇÃO DESCORANTE 

Preparação 

Cada frasco de solução descorante concentrada (SEBIA, ref. nº 4540, 10 frascos de 100 ml cada) deve ser diluída a 1/1000 com água destilada ou 

desionizada e permite obter 100 litros de solução total. É conveniente diluir apenas 5 ml da solução concentrada de cada vez, para o volume final de 

5 litros (a capacidade do recipiente onde se vai colocar a solução descorante). Após diluição, a solução descorante contem: ácido cítrico, 0,5 g/l. 

Utilização 

Na descoloração, isto é, remoção do excesso de corante do gel. No enxaguamento da câmara de coloração, após lavagem. Para neutralizar a acidez 

do descorante, adicionar ao frasco de despejo 15 ml de soda a 50%. 


Armazenar a solução descorante concentrada à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos dos frascos da solução descorante. A solução descorante diluída é estável por uma semana à temperatura ambiente, quando conservada 

em frasco fechado. Deitar fora a solução diluída se o seu aspecto se alterar ou se ficar turva devido a contaminação microbiana. Não adicionar azida 

de sódio. No caso de conservação mais prolongada, (superior a uma semana), adicionar à solução diluída 50 µl/l de ProClin 300 para evitar a 

proliferação microbiana. 

A solução descorante diluída contendo ProClin é estável à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). É estável até ao 

fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco do descolorante. 

3. SOLUÇÃO DE LAVAGEM HYDRASYS 

Preparação 

Cada frasco de solução de lavagem concentrada HYDRASYS (SEBIA, ref. nº 4541, 10 frascos de 80 ml cada) deve ser diluído para a obtenção do 

volume final de 5 litros com água destilada ou desionizada. Após diluição, a solução de lavagem contém: tampão alcalino pH 8,8 ± 0,3; azida de sódio. 

AVISO: A solução de lavagem contém 0,625 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! Quando em 

contacto com ácidos, chumbo ou cobre a azida de sódio pode levar à formação de compostos explosivos ou tóxicos. Quando deitar fora 

lavar abundantemente com grandes quantidades de água. 

Utilização 

Para a lavagem do gel após imunofixação de modo a eliminar as proteínas residuais não precipitadas. 

Para a lavagem da câmara de coloração do HYDRASYS. Utilizar periodicamente. Por exemplo, se o aparelho for utilizado diariamente, fazer a lavagem 

da câmara de coloração uma vez por semana. 

Ver as instruções de utilização incluídas na embalagem. 


Armazenar a solução concentrada e a solução diluída em recipientes fechados à temperatura ambiente ou no frigorífico. A solução concentrada é 

estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco da solução de lavagem. 

Deitar fora a solução de lavagem diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

4. FLUIDIL 

Preparação 

O Fluidil (SEBIA, ref. nº 4587, 5 ml) vem pronto a ser usado. 

Utilização 

Destina-se a diluir amostras viscosas ou turvas, por exemplo, soro contendo uma crioglobulina ou um criogel. 


Armazenar à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco de Fluidil. O Fluidil não deve conter 

quaisquer precipitados. 

EQUIPAMENTO E ACESSÓRIOS NECESSÁRIOS 

1. Sistema HYDRASYS, ref. nº 1210 ou ref. nº 1211. 

2. HYDRAplus SEBIA, ref. nº 1215, micropipetador, manual ou automático, como alternativa na pipetagem das amostras para os aplicadores respectivos 

ou dos segmentos de antisoro. 

3. Câmara húmida, ref. n° 1270, fornecida com o HYDRASYS. 

4. Frascos de plástico fornecidos com o HYDRASYS. 

5. Barra metálica para a fixação da máscara SEBIA, fornecida com o sistema HYDRASYS. 

6. Máscara Dinâmica, SEBIA, ref. nº 1255. 

7. Pipetas: 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl e 200 µl. 

- 65 -


AMOSTRAS 

Colheita e conservação das amostras 

É recomendada a utilização de amostras frescas. Os soros e as urinas devem ser colhidos de acordo com os métodos utilizados nos laboratórios de 

análises clínicas. As amostras devem ser refrigeradas (2 - 8 ºC) o mais depressa possível após colheita, até uma semana. Para conservações 

prolongadas, congelar as amostras. As amostras congeladas são estáveis durante pelo menos um mês. O congelamento das urinas com azida de 

sódio a 0,2 g/l e HEPES 0,1 M (pH 6,75) e amostras de soro com azida de sódio a 0,2 g/l aumenta a estabilidade do armazenamento. 

IMPORTANTE: Não usar ácido bórico como conservante. 

As amostras descongeladas podem levar ao aparecimento de ligeiras bandas no ponto de aplicação, devido à desnaturação das proteínas ou 

lipoproteínas. 

Preparação das amostras 

1. Soro 

Diluir 1 amostra para HYDRAGEL 1 IF, 2 ou 4 amostras para o HYDRAGEL IF 2/4 e 9 amostras para o HYDRAGEL 9 IF. 

Para evitar fenómenos de zona por excesso de antigénio, diluir o soro antes da aplicação, conforme a tabela seguinte: 

| PISTA | SORO (µl) | DILUENTE (µl) | 

| Pista imunológica G | 20 | 100 | 

| Pista de referência ELP e todas as outras pistas imunológicas | 30 | 60 | 

Casos especiais 

• Para uma quantidade de imunoglobulinas totais > 20 g/l (caso de hipergamaglobulinémia), é recomendado duplicar o volume de diluente 

(excepto para a pista ELP) a fim de obter um valor normal de concentração de imunoglobulinas. 

• Para uma quantidade de imunoglobulinas totais < 5 g/l (caso de hipogamaglobulinémia), é recomendado reduzir a metade o volume de 

diluente. 

• Para a análise de cadeias leves livres no soro ou na urina, é recomendado utilizar o programa “BENCE JONES”. 

A amostras deverá ser testada com o kit IF com os antisoros anti-kapa livre (SEBIA, ref. nº 4370) e anti-lambda livre (SEBIA, ref. nº 4371) 

com o kit HYDRAGEL 1, 2, 4 ou 9 BENCE JONES (SEBIA, ref. nº 4321, 4322, 4324, 4329). 

Neste caso, de análise às cadeias séricas livres, diluir o soro em soro fisiológico ou em diluente para imunofixação pré-diluído a 1/4 (1 volume 

de diluente + 3 volumes de água destilada ou desmineralisada) e a 1/10 para as pistas ELP, GAM, K e L (1 volume de soro + 9 volumes de 

diluente pré-diluído ou soro fisiológico) e a 1/3 (1 volume de soro + 2 volumes de diluente pré-diluído ou soro fisiológico) para as pistas 

relevantes com os antisoros anti-kapa e anti-lambda livres. 

Se o valor total de imunoglobulinas é < 5 g/l, é recomendado que sejam utilizadas diluições mais baixas da amostra de antisoro em soro 

fisiológico; por exemplo, diluir 1/5 de soro para as pistas ELP, GAM, K e L e 1/2 para as pistas Kf e Lf. 

• Após conservação a 2 - 8 ºC ou congelamento, alguns soros (especialmente os que contêm uma crioglobulina ou um criogel) podem tornarse 

viscosos ou turvos. Estes soros podem apresentar problemas na aplicação porque difundem com muita dificuldade pelos dentes do 

aplicador de amostras. Neste caso, adicionar 25 µl de Fluidil a 75 µl de soro e agitar no vortex durante 15 segundos. Depois, seguir o método 

normal. 

• Certas paraproteínas são polimerizadas, o que resulta no aparecimento de uma "banda monoclonal" em todas as pistas. Neste caso preparar 

uma solução de ß-mercaptoetanol (BME) a 1% em Fluidil (esta solução redutora é estável por uma semana num microtubo hermeticamente 

fechado e à temperatura ambiente). Adicionar 25 µl de solução redutora a 75 µl de soro puro, agitar no vortex e aguardar pelo menos 

15 minutos (máximo de 30 minutos) e depois seguir o método normal. 

• Para a análise das IgD e/ou Ig E, aplique as mesma diluições realizadas para as cadeias leves livres e ligadas. 

2. Urinas concentradas 

A maioria das amostras de urina devem ser concentradas (com um dispositivo apropriado) até uma concentração de proteínas totais ≥ 5 g/l ou um 

total de Ig de aproximadamente 1 g/l. Se as concentrações de proteínas ou Ig na urina não são conhecidas, esta deve ser concentrada 20 a 

100 vezes (com um dispositivo apropriado). 

IMPORTANTE: Algumas urinas contêm um elevado teor em sais. Isso pode provocar uma deformação do gel durante a migração e, 

consequentemente, uma distorção do perfil electroforético. Para evitar este problema é necessário eliminar os sais por meio de diálise. 

Em caso de urinas de concentração a mais ou a menos, é recomendado eliminar as partículas por centrifugação (10 minutos a 3000 rpm) ou por 

filtração (em filtro de 0,45 µm) a fim de obter uma boa difusão no aplicador. 

A sensibilidade no ensaio da urina pode ser aumentada através do prolongamento do tempo de incubação da aplicação das amostras e antisoro, 

utilizando o programa de migração "BENCE JONES". Assim, o limite de detecção corresponde a 10 - 50 mg/l de proteína monoclonal. Recomenda-se 

neste caso o ensaio de urina não concentrada ou urina concentrada 10 - 25 vezes. 

NOTA: Não se recomenda a tentativa de aumentar a sensibilidade do teste através do aumento do grau de concentração. A utilização de urinas 

muito concentradas leva frequentemente à formação de bandas falsas e outros artefactos. Estas amostras têm de ser ensaiadas novamente em 

concentrações mais baixas. 


Certas cadeias leves presentes na urina tendem a polimerizar e formar agregados, levando ao aparecimento de uma banda “monoclonal” em todas 

as pistas. Os polímeros de cadeias leves devem ser despolimerizadas: misturar 100 µl de urina e 5 µl de ß-mercaptoetanol pré-diluído a 1/10 em 

água destilada ou desmineralisada, agitar no vortex e seguir a técnica. 

Amostras a evitar 

• Não utilizar amostras de plasma. O fibrinogénio leva ao aparecimento de uma banda perto do ponto de aplicação que pode ser confundida com 

uma gamapatia monoclonal e aumentar a percentagem da zona correspondente. 

• Não utilizar amostras hemolisadas. 

• Não utilizar amostras de urina armazenadas há muito tempo ou conservadas em más condições, uma vez que pode ocorrer a degradação 

enzimática das proteínas. 

TÉCNICA 

O sistema HYDRASYS é um aparelho semi-automático multi-paramétrico. Os passos automáticos incluem o tratamento dos geles de agarose 

HYDRAGEL segundo as etapas seguintes: aplicação da amostra, migração electroforética, incubação com os reagentes, secagem, lavagem, 

coloração, descoloração e secagem final. Os passos manuais são os seguintes: preparação das amostras e dos geles, aplicação dos reagentes e 

lançamento das sequências automáticas. 

LER ATENTAMENTE O MANUAL DE INSTRUÇÕES DO HYDRASYS. 

- 66 -


I. PREPARAÇÃO DA MIGRAÇÃO 

1. Ligar o aparelho HYDRASYS. 

2. Colocar um aplicador no caso de utilizar o gel HYDRAGEL 1 IF ou HYDRAGEL 2/4 IF (2 amostras), ou 2 aplicadores para o gel HYDRAGEL 

IF 2/4 (4 amostras) ou 3 aplicadores para o gel HYDRAGEL 9 IF, numa superfície plana, com os números dos poços voltados para cima 

(Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de soro puro ou urina concentrada em cada poço. A pipetagem das amostras em cada aplicador não deve ultrapassar o tempo 

de dois minutos. 

| PISTA DE MIGRAÇÃO / IMUNOFIXAÇÃO | 

N° DO POÇO ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 AMOSTRAS N° 1 OU 3 2 3 4 5 6 7 AMOSTRAS N° 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF AMOSTRAS N° 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 AMOSTRAS N° 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| AMOSTRAS N° 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

NOTA: Na análise com HYDRAGEL IF 2/4, não se utilizam os poços nº 1, 8 e 15; pode-se marcar estas pistas com uma caneta, de modo a 

evitar a colocação de amostras por enganos. 

- Colocar o(s) aplicador(es) na câmara húmida com os dentes voltados para cima (segure-o(s) pela protecção de plástico). Deixar as 

amostras difundir durante cinco minutos após a aplicação da última amostra. Para uma conservação prolongada (8 horas no máximo), 

colocar a câmara húmida no frigorífico. 

Ver as instruções de utilização da câmara húmida para mais detalhes. 

3. Abrir a tampa da câmara de migração e levantar os suportes do aplicador e dos eléctrodos. 

AVISO: Nunca fechar a tampa quando os suportes estão levantados! 

4. Seleccionar o programa de migração "1 IF MP/MD" para HYDRAGEL 1 IF, "2/4 IF MP/MD" para HYDRAGEL IF 2/4 ou "9 IF MD" para 

HYDRAGEL 9 IF no menu apresentado pelo aparelho (lado esquerdo do teclado). 

5. Retirar as tiras de tampão da embalagem; colocar as tiras de tampão sobre os eléctrodos fixando as extremidades de plástico perfuradas aos 

pinos do suporte dos eléctrodos. A face das tiras de tampão onde estão fixadas as partes de plástico fica em contacto com os eléctrodos. 

(Fig. 2). 

6. Desempacotar a placa HYDRAGEL. 

- Eliminar rapidamente o excesso de líquido da superfície do gel com a ajuda de um papel de filtro fino. 

ATENÇÃO: Não deixar o papel de filtro em contacto com o gel por tempo prolongado, para evitar a sua desidratação. 

- Aplicar 120 µl de água destilada ou desmineralisada para o HYDRAGEL 1 IF ou 200 µl de água destilada ou desionizada para o 

HYDRAGEL IF 2/4 e HYDRAGEL 9 IF no terço inferior do quadro impresso na placa de migração. 

- Colocar o gel virado para cima, contra a parte inferior do quadro impresso na placa de migração (Fig. 3). 

- Dar uma forma côncava ao gel (Fig. 3) e baixá-lo lentamente até contacto com a gota de água. A gota deve repartir-se por toda a largura 

do gel. Ajustar ligeiramente o gel de modo a eliminar as bolhas de ar que se tenham formado. Baixar o gel até ficar na horizontal. 

7. Baixar os dois suportes. Nesta posição as tiras de tampão não tocam no gel. NÃO FORÇAR A DESCIDA DOS SUPORTES MANUALMENTE. 

8. Retirar o(s) aplicador(es) da câmara húmida. Segurá-lo(s) pela estrutura de protecção plástica. 

- Quebrar e retirar a protecção dos dentes. 

- Colocar o aplicador no suporte de aplicadores: 

- HYDRAGEL 1 IF ou HYDRAGEL IF 2/4 (2 amostras), na posição nº 6, 

- HYDRAGEL IF 2/4 (4 amostras), na posição nº 3 ou 9, 

- HYDRAGEL 9 IF, na posição nº 2, 6 ou 10. 

IMPORTANTE: Os números impressos nos aplicadores devem ficar virados para o operador (Fig. 4). 

Para aumentar a reprodutibilidade da aplicação das amostras, recomenda-se que posicione sempre o aplicador do lado esquerdo do suporte. 

9. Fechar a tampa da câmara de migração. 

10. Dar início imediatamente ao processo apoiando em "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

IMPORTANTE: Assegure-se de que a grelha de ventilação não está bloqueada (à direita do aparelho). 

MIGRAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Descida dos suportes do aplicador e dos eléctrodos de forma a que as tiras de tampão e o(s) aplicador(es) contactem com a superfície do gel. 

• Subida do aplicador de amostras. 

• A migração é feita à potência constante de 10 W para HYDRAGEL 1 IF e à potência constante de 20 W para HYDRAGEL IF 2/4, a 20 ºC, controlada 

por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 42 Vh, durante cerca de 9 minutos. Para o HYDRAGEL 9 IF a migração deve ser feita à potência 

constante de 20 W até que tenham sido atingidos 36 Vh, durante cerca de 7 minutos, a 20 ºC, controlada por efeito de Peltier. 

• Os eléctrodos são desligados com a subida do suporte. 

• A audição de um sinal sonoro indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. A seguinte mensagem aparece no ecrã: " AS". 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante todos os passos da migração. 

II. PREPARAÇÃO DA IMUNOFIXAÇÃO 

Os diferentes elementos que compõem a máscara dinâmica (sinalizador de cores para aplicação dos reagentes, segmento para colocação de 

antisoros, suporte de segmentos, guia da máscara dinâmica e peça reductora) são apresentados na figura 5. 

- 67 -


Durante a migração, prepare a máscara dinâmica da seguinte forma: 

1. Coloque a máscara dinâmica numa superfície plana; 

IMPORTANTE: Para a análise de uma ou duas amostras, é necessário posicionar o reductor de comprimento na guia da máscara dinâmica. 

2. Coloque um segmento de antisoros no suporte do mesmo (Fig. 6). 

- Incline o segmento dos antisoros num ângulo de 45º e posicione-o contra os encaixes de plástico do suporte. 

- Fazendo pressão sobre os encaixes, faça girar o segmento por forma a fixá-lo na ranhura do segmento de suporte. 

ATENÇÃO: Certifique-se que o segmento é correctamente posicionado no suporte: as extremidades do segmento deverão estar 

bloqueadas na ranhura do suporte. 

3. Posicione o segmento dos antisoros e respectivo suporte sobre a guia da máscara dinâmica (Fig. 7) (equipada de uma peça redutora para 

as análises de 1 ou 2 amostras). De seguida, coloque o sinalizador de cores para aplicação dos reagentes (correspondente ao ensaio que 

irá decorrer), no suporte de segmentos em frente aos poços do segmento dos antisoros (Fig. 8). 

4. Disponha os reagentes da seguinte forma: 

- Segmento de antisoros de 6 poços para HYDRAGEL 1 IF : 8 µl por poço, 

- Segmento de antisoros de 15 poços para HYDRAGEL IF 2/4 : 8 µl por poço para análise de 2 amostras, 

12 µl por poço para análise de 4 amostras, 

- Segmento de antisoros de 18 poços para HYDRAGEL 9 IF : 8 µl por poço. 

PISTA REAGENTE COR ELP Fixador amarelo G Antisoro anti-cadeias pesadas gama rosa A Antisoro anti-cadeias pesadas alfa azul escuro M Antisoro anti-cadeias pesadas mu verde amarelado K Antisoro anti-cadeias leves (livres e ligadas) kapa verde claro 

| L | Antisoro anti-cadeias leves (livres e ligadas) lambda | azul claro | 

NOTA: Para evitar enganos na pipetação dos antisoros, os reagentes são corados e as cores podem ser encontradas no sinalizador de cores 

de referência. 

IMPORTANTE: Para o HYDRAGEL IF 2/4, não utilize os poços nas posições 1, 8 e 15. 

Pipetar os reagentes, evitando introduzir bolhas de ar na ponta da pipeta. 

Para aplicar os reagentes (Fig. 9): 

- Segurar a pipeta inclinada, 

- Pipetar os antisoros nos poços respectivos. 

5. Retire o sinalizador de cores de referência. 

III. IMUNOFIXAÇÃO 

1. Abrir a tampa da câmara de migração. 

2. Retirar o(s) aplicador(es) e deitá-lo(s) fora. 

3. Levantar os dois suportes (dos aplicadores e dos eléctrodos), retirar as tiras de tampão pegando-lhes pelas suas extremidades de plástico e 

deitá-las fora. 

- Retirar os dois suportes. 

- Limpar os eléctrodos com um pano macio e húmido. 

- Deixar o gel no seu lugar na câmara de migração. 

4. Colocar em posição a máscara dinâmica de aplicação dos reagentes da seguinte forma (Fig. 10): 

- Colocar a barra metálica, para ligação da máscara de incubação, nos pinos de fixação (a barra metálica pode permanecer 

permanentemente no HYDRASYS). 

- Segurar a máscara pela pega e colocá-la sobre a barra metálica (encaixando as extremidades nas reentrâncias da mesma). 

- Baixar a máscara sobre o gel. 

IMPORTANTE: Regular a posição da máscara, de modo a obter uma correspondência perfeita entre os perfis electroforéticos do gel e as 

pistas de revelação da máscara. 

5. Posicionar o segmento de suporte ao mais baixo nível na guia da máscara, dirigido para o operador. 

Segure o segmento de suporte pela pega situada na sua direita e pressione no ponto central, de forma a que o segmento de antisoro contacte 

com a superficie do gel. 

Alivie a pressão; em seguida, os reagentes espelhar-se-ão debaixo de cada pista (Fig. 11). 

6. Imediatamente após, empurrar lentamente o suporte, executando um movimento lento e regular de ida e volta, em toda a extensão do gel 

para aplicar os reagentes. A duração da aplicação deverá ser de aproximadamente 5 segundos (Fig. 12). 

AVISO: Durante este passo, segure a máscara apenas pela pega do segmento de suporte. Evite tocar na guia. Não volte a pressionar 

no ponto de pressão, uma vez que poderá existir o risco de contaminação dos reagentes. 

7. Remova a guia e a máscara dinâmica. 

- Remova o segmento de suporte utilizando a pega. 

- Remova o segmento de antisoro do suporte e deite fora. 

ATENÇÃO: Manipular os suportes contendo antisoros com precaução. 

- Um ligeiro excesso de reagente subsiste no gel sobre a forma de uma gota ao nível dos orifícios dos poços quando a máscara é retirada. 

Este facto não afectará os resultados. 


9. Dar início imediatamente ao processo premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). Aparece a mensagem 

"[INCUBAÇÃO]" no ecrã. 

IMUNOFIXAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Incubação a 20 ºC durante 5 minutos (controlada pelo efeito Peltier). 

• A audição de um sinal sonoro indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. A seguinte mensagem aparece no ecrã: " PAP.". 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a incubação. 

- 68 -


IV. ABSORÇÃO DO GEL 


2. Aplicar uma folha de papel de filtro espesso sobre o gel : 

- Inclinar o papel de filtro a 45º, alinhar a sua margem com a margem do gel. 

- Aplicá-lo sobre o gel. 

ATENÇÃO: Exercer pressão uniforme, para assegurar um contacto perfeito com o gel. 


4. Dar início à absorção, premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

ABSORÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Secagem por absorção a 40 ºC, controlada pelo efeito de Peltier, durante 3 minutos. A mensagem "[BOMBAGEM]" aparecerá no ecrã. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a seguinte mensagem aparece no ecrã: "❊ PAP.". 

V. SECAGEM DO GEL 


2. Retirar o papel de filtro e deixar o gel no seu lugar. 

3. Fechar a tampa. 

4. Dar início ao processo premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

SECAGEM DO GEL - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Secagem a 50 ºC controlada pelo efeito de Peltier, durante 6 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a tampa da câmara de migração é desbloqueada. A temperatura da placa permanece a 50º C até a tampa ser aberta. 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a fase de secagem. 

VI. PREPARAÇÃO DAS SEQUÊNCIAS DE TRATAMENTO DOS GELES 

1. Abrir a tampa. 

2. Remover a película seca de gel para tratamento posterior. 

3. Abrir o suporte do gel. Colocar o gel seco (com o lado do gel virado para cima), nas ranhuras das duas barras e fechar o suporte. Certifiquese 

de que o filme está correctamente posicionado no interior do suporte (Fig. 13). 

4. Colocar o suporte do gel na câmara de coloração 

IMPORTANTE: Antes de dar início ao programa de tratamento/coloração do gel, verificar o seguinte: 

- se o frasco da solução de lavagem está cheio com pelo menos 400 ml de solução de lavagem; 

- se o frasco do corante está cheio com 300 ml de solução corante; 

- se o frasco de descorante contem pelo menos 1 litro de solução descorante; 

- se o frasco de despejo está vazio. 

Para seleccionar os canais de entrada dos reagentes: consultar a informação indicada no ecran do aparelho (premir a tecla: "VER CANAIS"). 

IMPORTANTE: Não esquecer de tapar os canais não utilizados. 

5. Seleccionar o programa de coloração "IF ACID VIOLET" ou "IF AMIDO" no menu do aparelho. Iniciar a operação premindo a tecla "START" 

(flecha verde no lado direito do teclado). 

Durante as sequências de coloração, descoloração e secagem a câmara permanece fechada. 

Após arrefecimento da câmara um sinal sonoro indica que a tampa da câmara se desbloqueia (a ventilação mantém-se até à recuperação 

do suporte do gel). 

NOTAS: 

- A temperatura da placa de migração continua a decrescer quando a tampa está aberta até chegar aos 20 ºC (em menos de 5 minutos). 

Depois pode ser dado início a um novo processo de migração. 

- Repôr o aplicador de amostras e os suportes do eléctrodo no seu lugar. 

- Limpar a placa de controlo de temperatura com um pano macio e húmido. 

VII.FINALIZAÇÃO DO TRATAMENTO DO GEL 

1. Retirar o suporte da câmara, abrir e remover o gel seco. 

2. Se necessário, limpar a parte de trás (suporte plástico) do gel seco com um papel macio e húmido. 

NOTA : Para os geles com linhas de migração múltiplas (2 ou 3), as extensões da migração podem ser sensivelmente diferentes, sem qualquer 

consequência negativa nos resultados. 

RESULTADOS 

Interpretação 

1. Soro 

Ausência de banda monoclonal 

• Uma amostra de soro normal apresenta uma zona corada difusa de imunoglobulinas policlonais em todas as pistas. 

• Uma hipergamaglobulinémia é caracterizada por uma zona difusa fortemente corada, sem apresentar bandas estreitas. 

Presença de uma banda monoclonal 

• A presença de uma imunoglobulina monoclonal (gamapatia) é caracterizada por uma banda estreita detectada com um dos antisoros anticadeias 

pesadas (gama, alfa ou mu) e com um dos antisoros anti-cadeias leves, kapa ou lambda. A banda monoclonal detectada, geralmente 

estreita e bem visível, deve estar localizada ao mesmo nível de migração que a banda presente na pista de referência (ELP). 

• A ausência de reacção com qualquer dos antisoros anti-cadeias pesadas e reacção com um dos antisoros anti-cadeias leves pode indicar: 

a) a presença de uma cadeia leve livre, que deve ser confirmada com o antisoro anti-cadeias leves livres (kapa livre e lambda livre). 

b) a presença de uma gamapatia a Ig D ou Ig E muito rara, que deve ser confirmada com o antisoro anti-cadeias pesadas delta e epsilon. 

• Quando não se observa reacção com qualquer dos antisoros anti-cadeias leves, mas existe uma cadeia pesada, pode indicar uma gamapatia 

de cadeias pesadas (gama, alfa ou mu), muito rara. 

- 69 -


Presença de duas ou mais bandas monoclonais 

• Em casos raros, proliferam vários clones de células B, conforme é verificado pela presença de várias bandas monoclonais reveladas na 

imunofixação: Uma gamapatia biclonal caracteriza-se pela presença de duas cadeias pesadas (idênticas ou diferentes) e duas cadeias leves 

(idênticas ou diferentes). 

• As imunoglobulinas polimerizadas caracterizam-se pela presença de várias bandas sobre uma mesma cadeia pesada e uma mesma cadeia 

leve. Para confirmar a presença de uma anomalia monoclonal, é necessário despolimerizar a amostra com ß-mercaptoetanol e repetir a 

imunofixação (ver "Amostras"). 

• Uma gamapatia oligoclonal caracteriza-se pela presença de múltiplas bandas de um ou mais tipos de cadeias pesadas e por um ou dois tipos 

de cadeias leves. 


• Quando uma fracção do tipo monoclonal é observada na electroforese do soro (faixa ELP) mas não é confirmada por imunofixação, deve-se 

suspeitar, antes do mais, da presença de fibrinogénio (amostra de plasma). 

• Quando uma fracção do tipo monoclonal é observada em todas as pistas da imunofixação e ao mesmo nível, deve-se suspeitar da presença 

de uma crioglobulina ou de uma Ig M polimerizada. Despolimerizar com um agente redutor e repetir a técnica (ver "Amostras"). 

2. Urina concentrada 

Utilizam-se conceitos similares aos do soro na interpretação dos padrões de imunofixação da urina: 

Uma proteína monoclonal intacta na urina é caracterizada por : 

• Uma banda monoclonal detectada com um dos antisoros anti-cadeias pesadas (gama, alfa ou mu) e/ou com antisoros anti-cadeias leves kapa 

ou lambda (livres ou ligadas). 

• A banda monoclonal detectada, de aparência afiada e demarcada, deve estar localizada na mesma distância de migração que a banda suspeita 

de ser monoclonal da pista de referência (ELP) 

A cadeia leve livre Bence Jones é caracterizada por : 

• Uma banda monoclonal detectada por qualquer dos antisoros anti-cadeia livre kapa ou lambda. 

• Neste caso não se deve detectar reacções positivas nas pistas dos antisoros anti-cadeias pesadas (gama, alfa ou mu). Para se confirmar que 

a cadeia leve é uma cadeia leve livre, a amostra deve ser testada com o kit HYDRAGEL 1, 2, 4 BENCE JONES (SEBIA, ref. n° 4321, 4322 e 

4324). 

Uma paraproteína sérica que passa para a urina, com ausência da proteína Bence Jones, é caracterizada por : 

• Uma banda monoclonal revelada pelas cadeias pesadas gama, alfa e um (pistas G, A e M) 

• A mesma banda revelada pelo soro anti-cadeias leves (livres ou ligadas) kapa ou lambda (pistas K ou L). 

Uma paraproteína sérica que passa para a urina, associada a uma proteína Bence Jones é caracterizada por : 

• Uma banda monoclonal revelada pelo soro anti-cadeias pesadas gama, alfa e um (pistas G, A ou M), 

• Duas bandas reveladas com um ou dois soros anti cadeias leves kapa e/ou lambda (livres ou ligadas). 

Interferências e limitações 

Ver AMOSTRAS. 

O uso de outros antisoros que não os específicos à técnica de imunofixação realizada com a máscara dinâmica pode afectar a qualidade dos 

resultados. 

Em virtude dos limites de resolução e sensibilidade inerentes da electroforese de zona, é possível que alguns componentes monoclonais não possam 

ser detectados por este método. 

Assistência técnica 

Em caso de maus resultados contactar os serviços técnicos do fornecedor ainda que tenham sido seguidas, escrupulosamente, as instruções para 

a preparação e armazenamento dos reagentes, assim como as instruções de utilização da técnica. 

As folhas de informação de segurança do kit e informação sobre eliminação de desperdícios do produto poderão ser também disponibilizados pelos 

serviços técnicos do fornecedor. 

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO 

Reprodutibilidade intra-ensaio 


Reproductibilidade intra-ensaio do gel foi demonstrada em 3 amostras de soros patológicos: 2 soros com uma alta gamapatia (uma paraproteína) e um 

soro com com duas paraproteínas. 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 2 lotes de geles diferentes HYDRAGEL IF 2/4 realizando-se 4 ensaios por gel. 

Utilizou-se o violeta ácido como corante. 


Reproductibilidade intra-ensaio do gel foi demonstrada em 3 amostras de soros patológicos com uma alta gamapatia (uma paraproteína). 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 2 lotes de geles diferentes HYDRAGEL 9 IF realizando-se 9 ensaios por gel. Utilizouse 

o violeta ácido como corante. 

Todas as amostras ensaiadas deram resultados idênticos para os 2 lotes, mostrando perfis típicos para cada tipo de amostra testada. 

Na técnica HYDRAGEL IF 2/4 a imunofixação detectou a banda monoclonal nas 2 primeiras amostras patológicas e revelou as duas fracções 

monoclonais esperadas na terceira amostra. 

Na técnica HYDRAGEL 9 IF a imunofixação detectou uma banda monoclonal nas 3 amostras patológicas. 

Reproductibilidade inter-ensaio 


Sujeitaram-se 4 amostras diferentes de soros patológicos a migração: 2 soros com forte gamapatia monoclonal, um soro apresentava duas 

paraproteínas e outro uma paraproteina forte e outra fraca. 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 10 geles HYDRAGEL IF 2/4 de 3 lotes diferentes. Utilizou-se o violeta ácido como 

corante. 

Técnica do HYDRAGEL 9 IF 

Sujeitaram-se 9 amostras diferentes de soros patológicos a migração, contendo uma ou mais paraproteínas. 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 10 geles HYDRAGEL 9 IF de 3 lotes diferentes. Utilizou-se o violeta ácido como 

corante. 

- 70 -


Nas duas técnicas, todas as amostras ensaiadas originaram os mesmos resultados para os três lotes testados. Os perfis obtidos são típicos das 

amostras testadas, ou seja, a imunofixação detectou cada banda monoclonal para cada uma das amostras, de modo reproductível e sem falsos 

positivos. 

Exactidão 

Técnica HYDRAGEL 4 IF, corante violeta ácido 

Setenta e três (73) amostras de soros patológicos diferentes, onze (11) soros normais e doze (12) urinas concentradas, foram analisadas em paralelo 

com os geles HYDRAGEL IF 2/4 e outro sistema de imunofixação em geles de agarose disponível comercialmente. 

Técnica HYDRAGEL 4 IF, corante negro de amido 

Vinte e oito (28) amostras de soros patológicos diferentes e quatro (4) soros normais foram analisadas em paralelo com os geles HYDRAGEL IF 2/4 

e outro sistema de imunofixação em geles de agarose disponível comercialmente. 

Técnica HYDRAGEL 9 IF, corante violeta ácido 

Noventa e cinco (95) amostras de soros patológicos diferentes, quatro (4) soros normais e doze (12) urinas concentradas foram analisadas em paralelo 

com os geles HYDRAGEL 9 IF e outro sistema de imunofixação em geles de agarose disponível comercialmente. 

Todas as amostras ensaiadas originaram os mesmos resultados para os vários sistemas testados. Os perfis obtidos foram os esperados das amostras 

testadas, ou seja, a imunofixação detectou cada banda monoclonal para cada uma das amostras, de modo reproductível e sem falsos positivos. 

Sensibilidade 

4 amostras de soro com gamapatias foram diluídas em série e analisadas com HYDRAGEL 4 IF. Utilizou-se como corante tanto o violeta ácido como 

o negro de amido. 

Os resultados são indicados no quadro abaixo: 

BANDA MONOCLONAL LIMITE DE DETECÇÃO (g/L) HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF N° AMOSTRA TIPO CONCENTRAÇÃO (g/L) VIOLETA ÁCIDO NEGRO DE AMIDO 1 gama 10,9 0,12 0,12 kapa 0,12 0,12 2 gama 7,8 0,12 / lambda 0,12 / 3 alfa 5,8 0,12 0,25 lambda 0,12 0,25 4 mu 3,4 0,12 0,12 

| | kapa | | 0,12 | 0,12 | 

Dependendo da posição da migração das bandas monoclonais, do nível policlonal das amostras e da técnica de coloração, assim os limites de 

detecção de uma paraproteína podem variar entre 0,12 a 0,25 g/l. 

BIBLIOGRAFIA 

Para información adicional o interpretación de resultados consultar: 

(1) Le Carrer Didier, «Électrophorèse des Protéines et Immunofixation : Guide d’interprétation», Laboratoires SEBIA, 1994, Hatier - Paris. 

(2) Keren D. F., «High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation», Butterworth-Heinemann, Woburn, Ma, USA, 2nd 

ed., 1994, 397 pp. 

- 71 -


ANVÄNDNINGSOMRÅDE 

HYDRAGEL 1 IF, 2 IF, 4 IF och 9 IF kit är designade för detektion av monoklonala proteiner i humant serum och urin genom immunofixeringselektrofores. 

Kiten används tillsammans med det halv-automatiska HYDRASYS instrumentet. Proteinerna, separeras med elektrofores på basiskt 

buffrade agarosgeler, inkuberas med individuella antisera vilka är specifika mot gamma (Ig G), alfa (Ig A) och mu (Ig M) heavy chains, respektive kappa 

(fria och bundna) och lambda (fria och bundna) light chains. Efter avlägsnande av proteiner som ej har reagerat, färgas immunoprecipitaten antingen 

med acidviolett eller amidosvart färg. De elektroforetiska separationerna utvärderas visuellt för närvaro av specifika reaktioner med misstänkt 

monoklonala proteiner. 

Varje agaros-gel är avsedd för: 

- Ett prov per platta HYDRAGEL 1 IF kit, 

- Två prov per platta HYDRAGEL 2 IF kit, 

- Fyra prov per platta HYDRAGEL 4 IF kit, 

- Nio prov per platta HYDRAGEL 9 IF kit, 

För att tillgodose olika användarönskemål, är HYDRAGEL 4 IF kiten tillgängliga antingen med acidviolett eller med amidosvart. 

Endast för "in vitro" diagnostik. 

TESTPRINCIPER 

Abnormala band hos elektrofores mönstren hos serum- och urinproteiner, primärt dem i beta- och gamma- zonerna, misstänks alltid vara monoklonala, 

(M-proteiner, paraproteiner, monoklonala immunoglobuliner) och därmed en indikation på monoklonala gammopatier. För identifiering av dessa 

abnormala band används immunofixeringstekniken. 

Immunofixerings-elektrofores är en enkel teknik som tillåter proteinerna att fixeras in situ (på plats) efter elektrofores, genom formation av ett olösligt 

komplex med sin antikropp. 

Den utförs enkelt i fyra steg och är lätt att tolka: 

1. Separation av proteiner genom elektrofores på agarosgel. 

2. Immunofixering (immunoprecipitering) av de proteiner som genomgått elektrofores- de lämpliga migreringsspåren täcks med individuella antisera. 

Antiserat diffunderar in i gelen och binder med de specifika antigenerna om de är närvarande. Proteinerna i referensspåret fixeras med ett fixativ. 

3. Oprecipiterade lösliga proteiner avlägsnas från gelen genom blottning och tvättning. Precipitat av antigen-antikropp komplex fångas i gelmatrisen. 

4. De precipiterade proteinerna visualiseras genom infärgning. 

För att detektera och identifiera den misstänkta monoklonala komponenten, genomgår provet samtidig elektrofores i sex spår. Efter elektrofores 

används ett av spåren som en referens vilken ger ett komplett elektroforetiskt mönster av proteinerna i provet. De övriga fem spåren tillåter 

karaktärisering av den monoklonala komponenten från dess reaktion, eller frånvaro av reaktion, med antisera mot gamma (Ig G), alfa (Ig A) och mu 

(Ig M) heavy chains, och mot fria och bundna kappa och lambda light chains. De immunofixerade banden jämförs sedan med de misstänka banden i 

referensspåret, det motsvarande bandet bör ha samma migreringsposition. 

MEDFÖLJANDE REAGENSER OCH MATERIAL I : HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF OCH 

HYDRAGEL 9 IF KITEN 

HYDRAGEL 1 IF KIT PN 4301 HYDRAGEL 2 IF KIT PN 4302 HYDRAGEL 4 IF KIT PN 4304 PN 4308 PN 4381* HYDRAGEL 9 IF KIT PN 4309 PN 4382** Agarosgeler (färdiga att använda) 10 geler 10 geler 10 geler 80 geler Buffrade Strips (färdig att använda) 10 förp. 2 i varje 10 förp. 2 i varje 10 förp. 2 i varje 80 förp. 2 i varje Färgspädningslösning (stamlösning) 1 rör, 60 ml Amidosvart färg (stamklösning) 1 rör, 20 ml Acidviolett färg (stamlösning) 1 rör, 75 mL 1 rör, 75 mL 8 rör, 75 mL varje Spädningsvätska (färdig att använda) 1 rör, 3.2 mL 1 rör, 32 mL 1 rör, 32 mL 2 rör, 80 mL varje 3 rör, 80 mL varje Fixativ lösning (färdig att använda) 1 rör, 2.9 mL Däggdjurs- immunoglobuliner anti-human 1 rör, 2,0 mL gamma heavy chains (färdig att använda) Däggdjurs- immunoglobuliner anti-human 1 rör, 2,0 mL alfa heavy chains (färdig att använda) Däggdjurs- immunoglobuliner anti-human 1 rör, 2,0 mL mu heavy chains (färdig att använda) Däggdjurs- immunoglobuliner anti-human kappa 1 rör, 2,0 mL (fria och bundna) light chains (färdig att använda) Däggdjurs- immunoglobuliner anti-human lambda 1 rör, 2,0 mL (fria och bundna) light chains (färdig att använda) Applikatorer (färdig att använda) 1 förp. med 10 2 förp. med 10 2 förp. med 10 16 förp. med 10 3 caixas de 10 24 förp. med 10 Antiserasegment (färdig att använda) 1 förp. med 10 1 förp. med 10 1 förp. med 10 8 förp. med 10 Filterpapper - tunna 1 förp. med 10 1 förp. med 10 1 förp. med 10 8 förp. med 10 

| Filterpapper - tjocka | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 8 förp. med 10 | 



- 72 - 

SEBIA INSTRUKTIONER - Svenska


NOTERA : Fixativ lösning och antisera levereras separat utom för MAXI-KITS (Se: EJ LEVERERADE MEN NÖDVÄNDIGA REAGENSER). 

FÖR OPTIMALA RESULTAT 

Alla reagenser från samma kit måste användas ihop och enligt de instruktioner som finns angivna på insticksbladet. 

LÄS NOGGRANNT FÖRPACKNINGENS INSTICKSBLAD. 

1. AGAROSGELER 

Förberedelse 

Agarosgeler är färdiga för användning. Varje gel innehåller: agaros, 0.8 g/dL ; tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.1 ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Agaros geler innehåller 0.31 % barbital och 0.34 % natriumbarbital. Färtär inte ! Om så sker, kontakta läkare omedelbart. 

Användning 

Hjälpmedium för proteinelektrofores och immunofixering. 

Lagring, stabilitet och tecken på förändring 

Förvara gelerna upprätt, i originalförpackningen och vid rumstemperatur (15 till 30 °C) eller i kylskåp (2 till 8 °C). (Pilen på förpackningens framsida 

måste peka uppåt). 

Undvik temperaturförändringar under förvaringen (t.ex., förvara inte gelen nära fönster eller värmekälla). Gelerna är stabila fram till angivet 

utgångsdatum på förpackningen. 

FRYS INTE GELEN. 

Släng gelen om: 

(i) kristaller eller fällning bildas på gelytan eller gelkonsistensen blivit väldigt mjuk (inträffar när gelen varit fryst), 

(ii) bakteriell tillväxt eller mögeltillväxt påvisas, 

(iii) onormal mängd vätska är närvarande i påsföpackningen (som ett resultat av buffertutsöndring från gelen på grund av felaktiga lagringsförhållanden). 

2. BUFFRADE STRIPS 

Förberedelse 

Buffrade strips är färdiga att använda. Varje innehåller: tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.3 ; natriumazid ; tillsatser, ofarliga vid använda koncentrationer, 

men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Bufferten i stripsen innehåller 0.92 % barbital, 1.03 % natriumbarbital och 0.30 % natriumazid. Förtär inte, svälj inte ! Mycket 

giftigt ! Kontakta läkare omedelbart ! Vid avyttring, undvik kontakt med syra, bly eller koppar, då dessa kan bilda explosiva eller giftiga 

föreningar med natriumazid. 

Användning 

Buffrade strips fungerar som en elektroforetisk buffertreservoar och upprätthåller kontakt mellan gel och elektroder. 


Förvara stripsen vid rumstemperatur eller i kyla. De är stabila fram till ngivet utgångsdatum på förpackningen. FRYS INTE. 

Kasta ! om förpackningen är öppen eller om stripsen är uttorkade. 

3. FÄRGSPÄDNINGSLÖSNING (med PN 4308) 

Förberedelse 

Diluent till stamfärglösning måste användas som beskrivs i paragraf " AMIDOSVART FÄRGNING ". 

Den innehåller sur lösning. 

Användning 

För preparering av Amidosvart färglösning. 


Förvara spädningslösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller flaskans etikett. 

FRYS INTE. 

Tillsätt inte Natriumacid. 

4. AMIDOSVART FÄRG (med PN 4308) 

Förberedelse 

Amidosvart koncentratet är visköst och kan bli trögflytande. Egenskaperna hos stamlösningen påverkas ej av ökad viskositet eller löslighet. 

För att uppnå en perfekt rekonstituering av färgen, vänligen respektera nedansående procedur: 

1. Tillsätt 15 ml färgdiluent till vialen amidosvartkoncentrat. 

2. Stäng vialen omsorgsfullt. 

3. Skaka vialen kraftigt i c:a 5 sekunder. 

4. Häll lösningen i behållaren för färgprocessning. 

5. Repetera dessa steg 2 eller 3 gånger om nödvändigt. 

6. Överför återstående diluent till behållaren och fyll upp till 300 ml med destillerat eller avjoniserat vatten. 

7. Blanda innehållet i behållaren noga 5 till 10 minuter. Färglösningen är nu redo att användas. 

NOTERA: En icke komplett reconstituerad färglösning kan leda till en undervärdering av albuminfraktionen (lågt procenttal eller vita hål i fraktionen). 

Efter spädning innehåller arbetsfärglösningen : sur lösning pH ≈ 2 ; amidosvart, 0.4 g/dL ; etylen-glykol, 6.7 % ; tillsatser, ofarliga vid använda 


VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För infärgning av geler vid elektroforetisk proteinseparering. 

VIKTIGT : Färglösning är avsedd för färgning av 10 geler. Byt färg efter 10 färgningssteg. 


Lagra både stam- och bruks- lösningar vid rumstemperatur eller i kylskåp i väl tillslutna behållare för att förhindra avdunstning. Stamfärglösningen är 

hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskans etikett. Brukslösning är hållbar i 1 månad. 

Förvara inte arbetsfärglösningen i närheten av en värmekälla. 

- 73 -


5. ACIDVIOLETT FÄRG (med PN 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 och 4382) 

Förberedelse 

Flaskan med stamfärglösningen skall spädas upp till 300 mL med destillerat eller avjoniserat vatten. 

Efter spädning innehåller den färdiga färgningslösningen: sur lösning pH ≈ 2 ; acidviolett, 0.2 g/dL ; etylen-glykol, 3.25 % ; tillsatser, ofarliga vid använda 


VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För infärgning av geler vid elektroforetisk proteinseparering och immunofixering. 

VIKTIGT : Färglösning är avsedd för färgning av 10 geler. Byt färg efter 10 färgningssteg. 


Lagra både stam- och bruks-lösningar vid rumstemperatur eller i kylskåp i stängda behållare för att förhindra avdunstning. Stamfärglösningen är stabil 

fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskornas etiketter. Färdigspädd färglösning är hållbar i 1 år. 

6. SPÄDNINGSVÄTSKA 

Förberedelse 

Spädningsvätska är färdig för användning. Den innehåller: alkalisk buffert pH 7.5 ± 0.3 ; bromfenolblått ; tillsatser, ofarliga vid använda koncentrationer, 

men nödvändiga för optimala prestanda. 

Användning 

För spädning av prov. Bromfenolblått fungerar som en lämplig applicerings- och migreringsmarkör. 


Förvara spädningsvätskan vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på spädningsflaskornas etiketter. 

Spädningsvätskan måste vara fri från fällning. 

7. ANTISERA OCH FIXATIV FÖRPACKNING (med PN 4381 och 4382) 

7.1. ANTISERA 

Förberedelse 

Färdig att använda. Alla antisera är totala immunoglobuliner av ickehumant däggdjursursprung. Antisera är färgat med distinkta ofarliga färger som 

matchar färgen på flaskans etikett, dels för lätt identifikation av antisera och dels som en hjälp för att övervaka dess användning. Om antiserumet visar 

en lätt grumlighet lämna flaskan i rumstemperatur i minst 10 minuter. Detta bör vara tillräckligt för att lösningen ska klarna, men om grumligheten kvarstår 

ska detta inte på något sätt påverka den immunologiska reaktionen. Vid uppkomst av olösliga fällningar rekommenderas att centrifugera antisera vid 

3000 rpm i 5 minuter. 

Användning 

Används för immunofixering av proteiner efter elektrofores. 

Antisera kan härröra från olika djurarter. Blanda aldrig två olika antiseraflaskor även om de har samma specificitet, och byt ALLTID pipettspets vid byte 

mellan antiserumflaskor. 

VIKTIGT: För att undvika kontaminering mellan reagens, var noggrann med att sätta tillbaka skruvlocket på motsvarande flaska efter varje användning. 


Lagra antisera i kylskåp (2 to 8 °C). De är stabila fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på antiseraflaskornas etiketter. 

NOTERA: Under transport kan antisera förvaras utan kylning (15 to 30 °C) i 15 dagar utan några negativa effekter på prestandan. 

7.2. FIXATIV LÖSNING 

Förberedelse 

Fixativ lösning är färdig att använda. Den innehåller: sur lösning samt tillsatser ofarliga vid använda koncentrationer men nödvändig för optimal 

prestanda. Fixativet är färgat med en ofarlig färg, dels för lätt identifikation och dels som hjälp för att övervaka dess användning. 

Användning 

Används för fixering av elektroforetiskt separerade proteiner i referensspåret (ELP). 

VIKTIGT: För att undvika kontaminering mellan reagens, var noggrann med att sätta tillbaka skruvlocket på motsvarande flaska efter varje användning. 


Lagra fixativ lösning vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpckningen eller på flaskornas etiketter. 

Fixativ lösning måste vara fri från fällning. 

8. APPLIKATORER 

Användning 

Tillskurna applikatorer för engångsbruk. För provapplikationer. 

Förvaring 

Förvara applikatorerna på en torr plats, rumstempererat eller i kylskåp. 

9. ANTISERASEGMENT 

Användning 

Engångsanvändning, färgade segment för fixativ lösning och applikation av antisera på gel för immunofixering. 

VIKTIGT : Segment med antisera måste behandlas varsamt. 

10. TUNNA FILTERPAPPER 

Användning 

Tunnt tillskurna och absorberande pappersbitar för engångsbruk. Används för borttagning av fukt på gelytan innan provapplicering. 

Förvaring 

Förvara filterpappren på ett torrt ställe i rumstemperatur eller i kylskåp. 

- 74 -


11. TJOCKA FILTERPAPPER 

Användning 

För engångsbruk, tjocka absorberande pappersbitar för avlägsnande av ej precipiterade proteiner från gelen efter immunofixeringssteget. 

Förvaring 

Förvaras på en torr plats, rumstempererat eller i kylskåp. 

EJ LEVERERADE MEN NÖDVÄNDIGA REAGENSER 

1. ANTISERA OCH FIXATIV LÖSNING - FÖRPACKNINGAR (för 4301, 4302, 4304, 4308 och 4309 kit) 

Förpackning med antisera och fixativ lösning, SEBIA, PN 4315, innehåller 5 flaskor med antisera och 1 flaska med fixativ lösning; om 1 mL i varje. De 

är specifika för immunofixering med dynamisk mask. 

1.1 ANTISERA 

Se tidigare paragraf 7.1. 

1.2 FIXATIV LÖSNING 

Se tidigare paragraf 7.2. 

2. AVFÄRGNINGSLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska med stamlösning av (SEBIA, PN 4540, 10 flaskor 100 mL i varje) skall spädas upp till 100 liter med destillerat eller avjoniserat vatten. Det 

är lämpligt att endast späda 5 mL av stamlösningen till 5 liter, vilket är volymen hos behållaren för avfärgningslösning. Efter spädning innehåller den 

färdiga avfärgningslösningen: citronsyra, 0.05 g/dL. 

Användning 

För avfärgning, vilket innebär avlägsnande av överflöds- samt bakgrunds-färg från gelerna samt för avsköljning av färgfacket efter rengöring med 

tvättlösningen. 

För att neutralisera den sura avfärgningslösningen, häll 15 mL av en 50 % Natriumhydroxidlösning, in i den tomma avfallsbehållaren. 


Lagra stamlösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är stabil till angivet utgångsdatum på avfärgningslösningens förpackning eller på 

flasketiketterna. Den färdigspädda avfärgningsslösningen är hållbar i en vecka under förutsättning att den förvaras i en stängd flaska vid 

rumstemperatur. Tillsätt ej natriumacid. 

Kassera bruksavfärgningslösningen om den förändras i utseende t.ex., blir grumlig p.g.a. mikrobiell kontaminering. 

För att förhindra mikrobiell tillväxt i den spädda avfärgningslösningen (vid lagring mer än 1 vecka) tillsätt 5 µl/dL av ProClin 300. 

3. HYDRASYS TVÄTTLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska av stamlösning (SEBIA PN 4541, 10 flaskor, 80 mL i varje) skall spädas upp till 5 liter med destillerat eller avjoniserat vatten. Efter spädning 

innehåller den färdiga tvättlösningen: alkalisk buffer pH 8.8. ± 0.3 ; natriumazid. 

VARNING: Stamtvättlösning innehåller 0,625 % natriumazid. Farlig vid förtäring, kontakta läkare omedelbart. Natriumazid kan leda till 

bildning av explosiva eller giftiga ämnen vid kontakt med syror, bly eller koppar. Spola alltid med en stor mängd vatten efter det att 

lösningen hällts ut. 

Användning 

HYDRASYS tvättlösning är avsedd för att tvätta bort oprecipiterade proteiner från gelerna. 

Se förpackningens insticksblad. 


Förvara stamlösningen och brukstvättlösningen i stängda behållare vid rumstemperatur eller i kylskåp. Lösningarna är hållbara fram till angivet 

utgångsdatum på flaskornas etiketter. Lösningen används för rengöring av HYDRASYS färgfack. Använd regelbundet. Om instrumentet används 

dagligen, tvätta färgfacket varje vecka. 

Släng brukstvättlösningen om den förändras i utseende, t.ex. blir grumlig vid mikrobiell kontaminering. 

4. FLUIDIL 

Förberedelse 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 mL) är färdig för användning. 

Användning 

För spädning av viskösa eller grumliga prov, t.ex., serum som innehåller kryoglobulin eller kryogel. 


Förvara vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är stabil till angivet utgångsdatum på Fluidil flaskans etikett. 

Fluidil måste vara fri från fällning. 

UTRUSTNING OCH NÖDVÄNDIGA TILLBEHÖR MEN INTE MEDLEVERERADE 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 eller PN 1211. 

2. Mikropipett, manuell eller automatisk, som t.ex. HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ett alternativ för att ladda provapplikatorerna automatiskt. 

3. Fuktkammare, PN 1270, levererad med HYDRASYS systemet. 

4. Behållar-sats levererad med HYDRASYS. 

5. Färgkodsguide SEBIA levererad med HYDRASYS. 

6. Dynamisk mask, SEBIA, PN 1255. 

7. Pipetter: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL och 200 µL. 

- 75 -


PROV FÖR ANALYS 

Provinsamling och lagring 

Färska prov rekommenderas för analys. Serum och urin måste insamlas enligt etablerade rutiner som används vid kliniska laboratorier. Placera proven 

i kylskåp (2 till 8 °C) så fort som möjligt efter insamling och upp till en vecka. För längre förvaringsstider, frys proven. De är stabila i minst en månad. 

Serumprov som är infrusna med natriumazid, 0,02 g/dL, eller infrusna urinprov med HEPES 0.1 M (pH 6.75) och/eller natriumazid, 0,02 g/dL, är stabila 

i minst 3 månader. 

VIKTIGT: Undvik borsyra och andra syror som konserveringsmedel för urin. 

Tinade prover kan ge lätta appliceringsmärken på grund av protein- eller lipoproteindenaturering. 

Provförberedelse 

1. Sera 

Preparera 1 prov för HYDRAGEL 1 IF, 2 eller 4 prov för HYDRAGEL IF 2/4 enligt satsen, och 9 prov för HYDRAGEL 9 IF. 

Späd sera innan applicering för att undvika antigenaxess vid höga nivåer av antigen, och blanda väl. 

| SPÅR | SERUM (µl) | SPÄDNINGSVÄTSKA (µl) | 

| Ig G Immunofixeringsspår | 20 | 100 | 

| ELP referensspåret och alla andra immunofixeringsspår | 30 | 60 | 

Speciella fall 

• Om totalnivån av immunoglobuliner är > 2 g/dL (hypergammaglobulinemia), rekommenderas att använda högre spädningar för proven (utom 

ELP spår) för att uppnå normala immunoglobulin koncentrationer. 

• Om totalnivån av immunoglobuliner är < 0.5 g/dL (hypogammaglobulinemia), rekommenderas att använda lägre spädning för proven. 

• Patientens serum eller urinprov kan även testas för Bence Jones proteiner ; det rekommenderas då att använda "BENCE JONES " program för 

migrering. 

Provet bör testas med IF-kitet och med anti-kappa fria light chains (SEBIA, PN 4370) och anti-lambda fria light chains (SEBIA, PN 4371) eller 

med HYDRAGEL 1, 2, 4 kit eller 9 BENCE JONES (SEBIA, PN 4321, 4322, 4324 eller 4329) kit. 

I detta fall, späd serum i saltlösning eller i spädningsvätska för immunofixering tidigare spädd 1/4 (1 del spädningsvätska, 3 delar destillerat eller 

avjoniserat vatten) 1/10 för ELP, GAM, K och L spåren (1 del serum, 9 delar utspädd spädningsvätska eller saltlösning) och 1/3 (1 del serum, 

2 delar utspädd spädningsvätska eller saltlösning) för Kf och Lf spåren. 

Om totalnivån av immunoglobuliner är < 0.5 g/dL, rekommenderas att använda en lägre spädning av provet ; t.ex. 1/5 för ELP, GAM, K och L 

spåren, och 1/2 för Kf och Lf spåren. 

• Efter kylning eller infrysning kan vissa serumprover, (särskilt de som innehåller kryoglobulin eller kryogel) bli viskösa eller grumliga. Sådana sera 

kan ge appliceringsproblem på grund av utebliven eller minskad diffusion genom tänderna i provappikatorn. I detta fall, tillsätt 25 µL Fluidil till 

75 µL serum och vortexa i 15 sekunder. Följ därefter normala rutiner. 

• Vissa monoklonala proteiner kan polymerisera vilket leder till en "monoklonal fraktion" som kan ses på alla immunofixerade spåren. I detta fall 

(i) förbered 1 % beta-merkaptoetanol (BME, eller 2-merkaptoetanol, 2 ME) i Fluidil, (ii) tillsätt 25 µL av denna reducerande lösning till 75 µL 

ospätt serum, (iii) vortexa och vänta i minst 15 minuter (maximum 30 minuter) följ därefter normalt tillvägagångssätt. 

• För Ig D och/eller Ig E analys, använd samma spädningar som för kappa och lambda fria och bundna chains. 

2. Koncentrerad urin 

De flesta urinprov måste koncentreras. Använd koncentrerade urinprov i alla spår. Koncentrera urin (på lämpligt sätt) till en total proteinkoncentration 

på 0.5 g/dL eller total Ig på ungefär 0.1 g/dL. Om protein- eller Ig koncentrationerna hos urinprovet inte är kända, koncentrera 20 - 100- gånger. 

VIKTIGT: En del urinprover innehåller hög saltkoncentration. Detta kan ge upphov till geldeformering under migrering och som en konsekvens en 

förvrängning av migrationsprofilerna. Om en sådan förvanskning gör tolkningen felaktig, måste urinprovet dialyseras för bortagande av salter. 

Diffundering av urinprover in i applikatortänderna kan hindras om urinen (okoncentrerad eller koncentrerad) är grumlig. Det rekommenderas att 

avlägsna partiklar med centrifugering (t.ex. 10 minuter vid 3,000 rpm) eller filtrering (t.ex., 0.45 µm filter för sterilfiltrering). 

Känsligheten hos urinprov kan ökas genom att öka applicerings- och inkuberings-tid av prov och antisera med "BENCE JONES" migreringsprogram. 

Därefter motsvarar detektionsgränsen 1 - 5 mg/dL av monoklonalt protein. Beroende på protein kan urin köras okoncentrerat eller koncentrerat upp 

till 25 x. 

NOTERA: Försök att öka testkänsligheten genom att koncentrera mer. Att okritiskt koncentrera urinprover till en för hög nivå måste övervägas med 

försiktighet. Användning av för högt koncentrerade urinprov resulterar ofta i formering av falska band. Sådana prov måste köras om, vid lägre 

koncentrationer. 

Specialfall 

Light chains i urin tenderar att polymerizera och bilda aggregat. Om detta påverkar tolkningen av resultaten, bör light chain polymererna de-polymeriseras: 

(i) blanda1 volymdel BME med 9 volymdelar vatten (t.ex. 5 µL BME och 45 µL vatten), (ii) tillsätt 5 µL av spätt BME till 100 µL urin, blanda 

ordentligt, och använd utan ytterligare provspädning. Fortsätt med standard immunofixering eller "BENCE JONES" programmen. 

Undvik följande prov 

• Använd inte plasmaprov. Fibrinogen ger ett band i referensspåret, nära applikationspunkten i beta- zonen som kan tas för ett monoklonalt protein. 

• Använd inte hemolyserande prov. 

• Undvik gamla, felaktigt lagrade urinprover där enzymatisk nedbrytning av proteiner kan förekomma. 

TILLVÄGAGÅNGSSÄTT 

HYDRASYS systemet är ett halvautomatiskt multi-parameter instrument. De automatiska stegen inkluderar bearbetning av HYDRAGEL agarosgeler i 

följande ordning: provapplicering, elektroforetisk migrering, torkning, färgning, avfärgning och slutlig torkning. De manuella stegen inkluderar hantering 

av prov och geler, applicering av fixativ och antisera samt att förbereda instrumentet för arbete. 

LÄS NOGGRANNT HYDRASYS BRUKSANVISNING. 

I. FÖRBEREDELSE FÖR MIGRATION 

1. Starta HYDRASYS instrumentet. 

2. Placera en applikator för HYDRAGEL 1 IF eller HYDRAGEL IF 2/4 (2 prov), två applikatorer för HYDRAGEL IF 2/4 (4 prov) eller tre applikatorer 

för HYDRAGEL 9 IF, på en slät yta med brunnarnas nummer på höger-sida-upp position (Fig.1) 

- Applicera 10 µL spätt serum eller koncentrerat urinprov i applikatorbrunnarna enligt följande. Ladda varje applikator inom 2 minuter. 

- 76 -


| MIGRERING / IMMUNOFIXERING SPÅR | 

BRUNNAR Nr ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 PROV Nr 1 eller 3 2 3 4 5 6 7 PROV Nr 2 eller 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF PROV Nr 1, 4 eller 7 1 2 3 4 5 6 PROV Nr 2, 5 eller 8 7 8 9 10 11 12 

| PROV Nr 3, 6 eller 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

VIKTIGT: Gällande för HYDRAGEL IF 2/4, brunnarna nr. 1, 8 och 15 används inte i detta test; de kan markeras med en filtpenna för att undvika 

att fylla dem med prov av misstag. 

- Placera varje applikator i fuktkammaren med tänderna uppåt [hantera den med hjälp av tändernas plastskyddsram]. 

Se förpackningsbilagan för fuktkammaren för ytterligare detaljer. 

- Låt proverna diffundera in i tänderna i 5 minuter efter sista provappliceringen. För senare användning (upp till 8 timmar), förvara 

fuktkammaren i kylskåp. 

3. Öppna luckan till Migrationsmodulen, och lyft upp elektrod- och applikatorhållarna. 

VARNING: Stäng aldrig luckan när hållarna är i höjt läge! 

4. Välj "1 IF SM/DM" migration program för HYDRAGEL 1 IF, “2/4 IF SM/DM” för HYDRAGEL IF 2/4 eller “9 IF DM” för HYDRAGEL 9 IF, på 

instrumentmenyn. (tangentbordets vänstra sida). 

5. Ta ur de buffrade stripsen ur förpackningen; ta dem i plaständarna. Fäst de hålstansade ändarna på pinnarna hos elektrodbäraren ; stripsens 

plaststöd måste vara vända mot elektrodhållaren (Fig. 2). 

6. Ta ut HYDRAGEL plattan. 

- Torka snabbt och svepande av gelytan med ett tunt filterpapper för bortagning av överflödig vätska. Ta bort pappret omedelbart. 

VARNING: För att undvika uttorkning: låt inte filterpappret vara i kontakt med gelen under längre tid. 

- Pipettera 120 µl destillerat eller avjoniserat vatten för HYDRAGEL 1 IF eller 200 µL för HYDRAGEL IF 2/4 och HYDRAGEL 9 IF, 30 på den 

nedre tredjedelen från främre upphöjda kanten på den inritade ramen på migreringsplattan i migrationsmodulen. 

- Placera gelplattan (gelsidan uppåt) med dess nederkant mot stoppet innanför den inritade ramen (Fig. 3). 

- Böj gelen och släpp den försiktigt ned i vattendroppen (Fig. 3). Förvissa dig om att inga luftbubblor finns kvar, att vattnet fördelar sig jämt 

under hela gelplattan och att gelen är i linje med den upphöjda kanten på ramen. 

7. Sänk / tryck ned båda hållarna. I detta läge berör inte de buffrade stripsen gelen. TRYCK INTE HÅLLARNA HELA VÄGEN NED. 

8. Avlägsna varje applikator från fuktkammaren. Håll den i den skyddsramen. 

- Avlägsna applikatorns tandskyddsram. 

- Placera applikatorerna i hållaren (-arna) 

- Med HYDRAGEL 1 IF eller HYDRAGEL IF 2/4 (2 prov), i position Nr 6, 

- Med HYDRAGEL IF 2/4 (4 prov), i position Nr 3 och 9, 

- Med HYDRAGEL 9 IF, i position Nr 2, 6 och 10. 

VIKTIGT: De tryckta numren på applikatorn (-erna) måste vara vända mot operatören (Fig. 4). 

För att öka reproducerbarheten hos provappliceringen, positionera alltid applikatorerna till hållarens vänstra sida. 

9. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

10. Starta proceduren omedelbart genom att trycka ned den gröna pilen "START" på den vänstra sidan av tangentbordet. 

VIKTIGT: Förvissa dig om att ventilationsintaget på instrumentets högra sida inte är blockerat. 

MIGRERING - BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• De två hållarna sänker sig så att de buffrade stripsen och applikatorerna får kontakt med gelytan. 

• Provapplikatorhållaren höjer sig. 

• Migration utförs vid 10 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL 1 IF och vid 20 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL IF 2/4, tills 42 Vh har 

ackumulerats (under ca. 9 minuter) och vid 20 W konstant strömstyrka tills 36 Vh har ackumulerats (under ca. 7 minuter) för HYDRAGEL 9 IF, vid 

20 °C kontrollerat av Peltiereffekten. 

• Elektrodhållaren höjer sig för att koppla ur elektroderna. 

• En ljudsignal hörs och luckan till migrationsmodulen öppnas. På skärmen visas följande meddelande: " AS"/ reagensapplikation. 

NOTERA: Locket till migrationsmodulen förblir stängt under alla migrationsstegen. 

II. IMMUNOFIXERING 

Den dynamiska masken innehåller en färgkodsguide för reagensapplikation, ett antiserasegment, en segmenthållare, segmentram till dynamisk mask 

samt en längdreducerande ram (Fig. 5). 

Under migration, förbered den dynamiska masken enligt enligt följande: 

1. Placera segmentramen till den dynamiska masken på en slät yta. 

VIKTIGT : För analys av en eller två prover, är det nödvändigt att placera den längdreducerande ramen på den dynamiska maskens 

segmentram. 

2. Placera ett antiserasegment i segmenthållaren (Fig. 6): 

- Luta antiserasegmentet i en 45° vinkel och placera det mot plastfjädrarna i segmenthållaren. 

- Dra isär de två delarna och sväng ned segmentet för att fixera det i skåran på segmenthållaren. 

VARNING: Förvissa dig om att segmentet är korrekt placerat i hållaren : pinnarna i ändan av segmentet måste låsas i skåran på 

hållaren. 

3. Placera hållaren med segmentet på ramen till den dynamiska masken (Fig. 7). Sätt sedan färgkodsguiden för vald reagensapplicering, på 

segmenthållaren framför segmentbrunnarna (Fig. 8). 

- 77 -

4. Applicera reagenserna enligt följande: 

- 6 brunnars antiserasegment för HYDRAGEL 1 IF : 8 µL per brunn, 

- 15 brunnars antiserasegment för HYDRAGEL IF 2/4 : 8 µL per brunn för 2 provanalyser, 

12 µL per brunn för 4 provanalyser, 

- 18 brunnars antiserasegment för HYDRAGEL 9 IF : 8 µL per brunn. 

SPÅR REAGENS FÄRG ELP fixativ lösning gul G anti-gamma heavy chain antiserum rosa A anti-alfa heavy chain antiserum mörkblå M anti-mu heavy chain antiserum gul grön K anti-kappa light chain (fria och bundna) antiserum ljusgrön 

| L | anti-lambda light chain (fria och bundna) antiserum | ljusblå | 


NOTERA: Reagenserna är färgade och färgerna visas på färgkodsguiden för att underlätta pipettering av rätt antisera på rätt plats. 

VIKTIGT: För HYDRAGEL IF 2/4, används inte antiserasegmentets brunnar i position 1, 8 och 15. 

- Sug upp reagenserna, undvik luftbubblor i pipettspetsen. 

- Applicera reagenserna (Fig. 9) : 

- Håll pipetten i en sådan vinkel att spetsen vilar lätt mot brunnens insida men utan att vidröra botten. 

- Injicera reagenset i brunnen. 

5. Avlägsna färgkodsguiden. 

III. IMMUNOFIXERING 

1. Öppna luckan till migrationsmodulen. 

2. Avlägsna provapplikatorn (applikatorerna) och kasta. 

3. Lyft bägge hållarna, ta bort de buffrade stripsen genom att hålla i plaständarna och kasta. 

- Avlägsna bägge hållarna. 

- Torka elektroderna med en mjuk fuktad servett. 

- Lämna gelen på sin plats i migrationsmodulen. 

4. Förbered den dynamiska masken för reagensapplicering, enligt följande (Fig. 10): 

- Placera segmentramen på den förankrande metallstången (ramen kan stanna i migrationsmodulen hela tiden). 

- Håll den dynamiska masken i den bakre fliken och placera den på metallstången med skårorna i linje med markeringarna. 

- Sänk ner den dynamiska masken på HYDRASYS-plattan. 

VIKTIGT : Justera positionen hos den dynamiska masken för perfekt placering i linje mellan de elektroforetiska profilerna och maskens 

brunnar. 

5. Placera segmenthållaren på den lägsta punkten på maskramen, vänd mot operatören. 

Håll segmenthållaren i handtaget placerat på dess högra sida och tryck på den centrala tryckpunkten så att antiserasegmentet får kontakt med 

gelen. Tryck; därefter kommer reagenserna att sprida sig under varje spår (Fig. 11). 

6. Omedelbart, genom att använda segmenthållar-handtaget, för segmentet sakta upp och ned längs hela gelen för att applicera reagenserna. 

Applikation bör ta ca. 5 sekunder (Fig. 12). 

VIKTIGT : Under detta steg, håll masken i segmenthållar-handtaget. Vidrör inte ramen. Tryck inte en andra gång på tryckpunkten då 

detta kan resultera i korskontaminering av reagenser. 

7. Ta bort guiden och den dynamiska masken. 

- Ta bort segmenthållaren med dess handtag. 

- Ta bort antiserasegment från hållaren och kasta. 

- Reagens kan finnas kvar i brunnarna efter applicering. Detta har ingen inverkan på testresultatet. 

VIKTIGT : Segment med antisera måste behandlas varsamt. 

8. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

9. Starta processen genom att trycka på den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. Ett meddelande "[INCUBATION]"/inkubering 

visas på skärmen. 

IMMUNOFIXERING - BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Inkubera vid 20 °C under 5 minuter (kontrollerat av Peltiereffekten). 

• En signal hörs och luckan till migrationsmodulen öppnas. Följande meddelande visas på skärmen: " PAP.". 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under inkubation. 

IV. BLOTTNING AV GEL 


2. Applicera ett tjockt filterpapper på gelen: 

Rikta in filterpapprets kant mot gelsidan (luta i ca. 45° vinkel) och släpp ned mot gelen. 

VIKTIGT: Tryck med stadig hand hela filterpapprets yta mot gelen för att uppnå perfekt kontakt. 

3. Stäng luckan till migrartionsmodulen. 

4. Starta processen genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

BLOTTNING - BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Blottning at 40 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 3 minuter. Följande meddelande visas på skärmen: "[BLOTTING]". 

• En ljudsignal hörs (bip). Följande meddelande visas på skärmen: "❊ PAP." (avlägsna papper). 

- 78 -


V. TORKNING AV GELEN 


2 Ta bort filterpappret och låt gelen vara kvar på sin plats. 

3. Stäng luckan. 

4. Starta proceduren genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

TORKNING - BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Torka vid 50 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 6 minuter. 

• En signal hörs och locket öppnas. Plattans temperatur förblir vid 50 °C tills luckan öppnas. På skärmen visas “Migration temp 

maintained”/migrationstemperatur upprätthålls. 

NOTERA: Migrationmodulens lucka förblir stängd under torkningssteget. 

VI. GELBEARBETNING 

1. Öppna luckan. 

2. Avlägsna den torkade gelen för vidare bearbetning. 

3. Öppna gelhållaren. Lägg ned den torkade gelen i rätt läge (med gelsidan vänd uppåt) i fördjupningarana i de två listerna i gelhållaren och 

stäng. Förvissa dig om att filmen är korrekt placerad inuti hållaren (Fig. 13). 

4. Placera gelhållaren i modulen för Gelbearbetning / Infärgning. 

VIKTIGT: Innan du startar gelbearbetning / infärgningsprogram, kontrollera följande: 

- att behållaren med tvättlösning innehåller minst 400 mL tvättlösning ; 

- att behållaren med färgningslösning är fylld med 300 mL färgningslösning ; 

- att behållaren med avfärgningslösning innehåller minst 1 liter avfärgningslösning ; 

- att avfallsbehållaren är tom. 

För reagenslinjeförbindelse : hänvisas till visad information på instrumentets skärm (välj tangenten : REAGENT LINES). 

VIKTIGT: Glöm inte att spärra oanvända linjer. 

5. Välj "IF ACID VIOLET"/acidviolett eller "IF AMIDO" infärgningsprogram på instrumentmenyn och starta körningen genom att trycka på 

tangenten "START" (grön pil på instrumentets högra sida). 

Under infärgning, avfärgning- och torkningsstegen, förblir luckan till facket stängd. 

Efter kylningssteget, hörs en signal och luckan till facket öppnas (ventilation upprätthålls tills gelhållaren avlägsnas). 

NOTERA: 

- När luckan öppnas fortsätter migrationplattans temperatur att sjunka tills den når 20 °C (inte mer än 5 minuter). Därefter kan en ny migrationskörning 

startas. 

- Placera åter provapplikatorn och elektrodhållarna i sina platser. 

- Torka temperaturkontrollplattan med en mjuk fuktad servett. 

VII.SLUTFÖRANDE AV GELBEARBETNING 

1. Avlägsna gelhållaren från facket, öppna den och av ta bort den torkade gelen. 

2. Om nödvändigt, rengör den torra filmens baksida (stödsidan av plast) med ett fuktat mjukt papper. 

ANMÄRKNING : Längden hos de elektroforetiska migreringarna kan vara något olika för geler innehållande 2 eller 3 analysspår, utan några 

ofördelaktiga effekter på utförandet. 

RESULTAT 

Tolkning 

1. Serum 

Frånvaro av monoklonala komponenter 

• Ett normalt serumprov visar en lätt diffus infärgning av polyklonala immunoglobuliner i alla spåren. 

• Hypergammaglobulinemia karaktäriseras av en starkt färgad, diffus gammazon och frånvaro av några begränsade band. 

Förekomst av monoklonala komponenter 

• Förekomsten av ett monoklonalt protein (gammopati) karaktäriseras av ett monoklonalt band detekterat med en av anti-heavy chain antisera 

(gamma, alpha eller mu) och antingen med anti-kappa eller anti-lambda light chain antiserum. Det detekterade monoklonala bandet, typiskt 

skarpt och avgränsat i utseende, måste lokaliseras vid samma migreringsavstånd som det misstänkta monoklonala bandet som ses i 

referensspåret (ELP). 

• Frånvaro av reaktion med något av de applicerade anti-heavy chain antisera och reaktion med ett av light chain antisera kan indikera: 

a) en mycket sällsynt Ig D eller Ig E gammopati: bekräfta med anti-delta eller anti-epsilon heavy chain antisera, 

b) en light chain gammopati: bekräfta med antisera anti-kappa eller anti-lambda fria light chains. 

• Går det ej att observera en positiv reaktion med någon av de applicerade anti-light chain antisera, medan ett anti-heavy chain antiserum 

reagerar, kan indikera en mycket sällsynt heavy chain gammopati (gamma, alpha eller mu). 

Förekomst av två eller flera monoklonala komponenter 

I sällsynta fall, växer flera kloner av B-celler till sig snabbt, som indikeras av flera monoklonala band som uppenbarar sig vid immunofixering: 

• En biklonal gammopati karaktäriseras av närvaron av två band av heavy chain (identiska eller olika) och två band av light chains (identisk eller 

avvikande). 

• Polymeriserade immunoglobuliner karaktäriseras av flera (vanligtvis två) band av samma typ av heavy chain och en av samma typ av light chain. 

För att bekräfta närvaron av en enskild monoklonal abnormalitet, är det nödvändigt att depolymerisera med beta-merkaptoetanol (BME eller 

2ME) och upprepa immunofixeringen (se "Prov för analys"). 

• En oligoklonal gammopati karaktäriseras av närvaron av multipla, vanligtvis svaga band av en eller flera typer av heavy chains och genom en 

eller två typer av light chains. 

- 79 -


Speciella fall 

• När ett monoklonalt typ av band observeras vid serumelektrofores (ELP spår) men ej kan bekräftas genom immunofixering, bör fibrinogen 

(plasmaprov) vara huvudmisstänkt. 

• När ett monoklonalt typ av band observeras på alla immunofixeringsspår, bör kryoglobulin eller polymeriserat Ig M misstänkas. Depolymerisera 

med en reducerande ämne och repetera proceduren (se "Prov för analys"). 

2. Urin 

Tolkningsbegrepp liknande de som visas för serum gäller för immunofixeringsmönster för urin. 

• Ett intakt monoklonalt protein i urin karaktäriseras av ett monoklonalt band som detekteras med en av anti-heavy chain antisera (gamma, alpha 

eller mu) och med antingen anti-kappa eller anti-lambda light chain (fria och bundna) antiserum. Det detekterade monoklonala bandet, typiskt 

skarpt och avgränsat i utseende, måste lokaliseras vid samma migreringsavstånd som det misstänkta monoklonala bandet som ses i 

referensspåret (ELP). 

• En monoklonal fri light chain, Bence Jones protein (ett tubulärt protein), karaktäriseras av ett monoklonalt band som detekteras med antingen 

anti-kappa eller anti-lambda light chain (fria och bundna) antiserum. Ingen positiv reaktion hade påvisats i någon av anti-heavy chain antisera 

(gamma, alpha eller mu) spåren. 

Interferens och begränsningar 

Se PROV FÖR ANALYS. 

Användning av andra antisera än de som är specifika för immunofixering med den dynamiska masken kan påverka resultaten. 

På grund av upplösnings- och sensitivitetsbegränsningar hos zonelektrofores, är det möjligt att vissa monoklonala komponenter inte blir upptäckta med 

denna metod. 

Felsökning 

Ring leverantörens tekniska support om testet misslyckas trots att givna instruktioner följts för materialförvaring och förberedelse av test. 

Varuinformationsblad för reagenserna i kiten och information för avfallshantering finns tillgängliga hos leverantörens tekniska serviceavdelning. 

PRESTANDADATA 

Reproducerbarhet inom serie och specificitet 


Reproducerbarhet inom serie demonstrerades hos tre olika patologiska prov: två prov med en hög nivå av monoklonala komponenter och ett prov med 

två låga nivåer av monoklonala komponenter. Varje prov kördes 4 gånger på 2 loter med HYDRAGEL IF 2/4 geler med användning av acidviolett 

infärgningsprocedur. 


Reproducerbarhet inom serie demonstrerades hos tre olika patologiska prov, varje med en hög nivå av alla monoklonala komponenter. Varje prov kördes 

9 gånger på 2 satser HYDRAGEL 9 IF geler med användning av acidviolett infärgningsprocedur. 

Alla repetitioner gav identiska resultat inom- och mellan- loter, som förväntat för den typen av prov som testades. 

Reproducerbarhet utom serie och specificitet 


Reproducerbarhet utom serie demonstrerades hos fyra olika patologiska prov med en eller flera monoklonala komponenter. 

Dessa prov var körda på 10 HYDRAGEL IF 2/4 geler från 3 olika loter, med användning av acidviolett infärgningsprocedur. 


Reproducerbarhet utom serie demonstrerades på nio olika patologiska prov: två prover med en högnivå-monoklonal komponent, ett prov med två 

lågnivå-monoklonala komponenter, och ett prov med en hög och en lågnivå-monoklonala komponent. 

Dessa prov kördes på 10 HYDRAGEL 9 IF geler från 3 olika loter, med användning av acidviolett infärgningsprocedur. 

Alla upprepningar gav identiska resultat inom och utom serie, och som var förväntat för den typ av prov som testades. 

Tillförlitlighet 

HYDRAGEL 4 IF procedur med metylviolett infärgning 

Sjuttio tre (73) olika patologiska serumprov, elva (11) normala sera och tolv (12) koncentrerade urinprover kördes med hjälp av HYDRAGEL IF 2/4 geler 

samtidigt med andra kommersiellt tillgängliga agarosgeler för immunofixering. 

HYDRAGEL 4 IF procedur med amidosvart infärgning 

Tjugoåtta (28) olika patologiska serumprov och fyra (4) normala sera kördes med hjälp av HYDRAGEL IF 2/4 geler samtidigt med andra kommersiellt 

tillgängliga agarosgeler för immunofixering. 

HYDRAGEL 9 IF procedur med acidviolett infärgning 

Nittiofem (95) olika patologiska serumprov, fyra (4) normala sera och tolv (12) koncentrerade urinprov kördes med hjälp av HYDRAGEL 9 IF geler 

samtidigt med andra kommersiellt tillgängliga agarosgeler för immunofixering. 

I alla ovannämnda fall, var erhållna resultat för SEBIAS tester fullt identiska med andra kommersiellt tillgängliga system. 

Sensitivitet 

Seriella spädningar förbereddes med fyra patologiska serumprov, alla uppvisade monoklonala komponenter och de analyserades med HYDRAGEL 4 IF. 

Både infärgning med acidviolett och amidosvart testades. 

Resultaten sammanfattas nedan. 

- 80 -


MONOKLONALA KOMPONENTER DETEKTERINGSGRÄNS (mg/dL) HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF PROVNUMMER TYP KONC. (g/dL) ACIDVIOLETT AMIDOSVART 1 gamma 1.09 12 12 kappa 12 12 2 gamma 0.78 12 / lambda 12 / 3 alpha 0.58 12 25 lambda 12 25 4 mu 0.34 12 12 

| | kappa | | 12 | 12 | 

Beroende på migreringspositionen hos den monoklonala komponenten och nivån av polyklonal bakgrund i gammazonen samt infärgningsproceduren, 

kan detektionsgränsen variera från 12 till 25 mg/dL. 

BIBLIOGRAFI 

För övrig information gällande tolkning av immunofixeringsmönster se : 



ed., 1994, 397 pp. 

- 81 -


ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

Τα κιτ HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF και HYDRAGEL 9 IF είναι σχεδιασµένα για την ανίχνευση µονοκλωνικών πρωτεϊνών 

σε ανθρώπινα ούρα ή ορό, µε ηλεκτροφορητική ανοσοκαθήλωση. Τα κιτ χρησιµοποιούνται µε την ηµι-αυτοµατοποιηµένη συσκευή 

ηλεκτροφόρησης HYDRASYS. Οι πρωτεΐνες διαχωριζόµενες µε ηλεκτροφόρηση σε αλκαλική γέλη αγαρόζης, επωάζονται µε µεµονωµένους 

αντιορούς ειδικούς έναντι γάµµα (Ig G), άλφα (Ig A) και µι (Ig M) βαρέων αλυσίδων καθώς και κάππα (ελεύθερων και συνδεδεµένων) και 

λάµδα (ελεύθερων και συνδεδεµένων) ελαφρών αλυσίδων, αντίστοιχα. Αφού αποµακρυνθούν οι µη συγκολληθείσες πρωτεΐνες, τα 

ανοσοκαθιζήµατα υφίστανται χρώση είτε µε όξινη ιώδη χρωστική είτε µε amidoblack. Τα ηλεκτροφορήµατα αξιολογούνται οπτικά για την 

παρουσία ειδικών αντιδράσεων µε τις µονοκλωνικές πρωτεΐνες. 

Κάθε gel αγαρόζης προορίζεται για την ανάλυση : 

- Ενός δείγµατος στο κιτ HYDRAGEL 1 IF, 

- ∆ύο δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 2 IF, 

- Τεσσάρων δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 4 IF, 

- Εννέα δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 9 IF. 

Για την εξυπηρέτηση διαφορετικών προτιµήσεων των χρηστών, τα κιτ HYDRAGEL 4 IF διατίθενται είτε µε όξινη ιώδη χρωστική είτε µε 

χρωστική amidoblack. 

Για In Vitro διαγνωστική χρήση. 

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

Οι µη φυσιολογικές ζώνες στα ηλεκτροφορήµατα, ιδιαίτερα εκείνες που αντιστοιχούν σε β- και γ-σφαιρίνες, είναι πάντα ύποπτες ως πιθανές 

µονοκλωνικές πρωτεΐνες (Μ-πρωτεΐνες, παραπρωτεΐνες, µονοκλωνικές ανοσοσφαιρίνες) και εποµένως ως ένδειξη µονοκλωνικής 

γαµµαπάθειας. Για την ταυτοποίηση αυτών των µη φυσιολογικών ζωνών, εφαρµόζεται η τεχνική της ανοσοκαθήλωσης. Η ηλεκτροφόρηση 

µε ανοσοκαθήλωση επιτρέπει τη σταθεροποίηση in situ των πρωτεϊνών µετά την ηλεκτροφόρηση, καθώς σχηµατίζονται µη διαλυτά 

συµπλέγµατα των πρωτεϊνών µε τους αντίστοιχους αντιορούς. Η διαδικασία πραγµατοποιείται εύκολα σε τέσσερα βήµατα και τα 

αποτελέσµατα ερµηνεύονται ευχερώς: 

1. ∆ιαχωρισµός πρωτεϊνών µε ηλεκτροφόρηση σε γέλη αγαρόζης. 

2. Ανοσοκαθήλωση (ανοσοκαθίζηση) των ηλεκτροφορηµένων πρωτεϊνών – τα ηλεκτροφορητικά ίχνη καλύπτονται µε κάθε µεµονωµένο 

αντιορό. Οι αντιοροί διαχέονται στο gel και προκαλούν καθίζηση των αντίστοιχων αντιγόνων όταν αυτά είναι παρόντα. Οι πρωτεΐνες στο 

ίχνος αναφοράς µονιµοποιούνται µε µονιµοποιητικό διάλυµα. 

3. Οι µη κατακρηµνισθείσες διαλυτές πρωτεΐνες αποµακρύνονται από το gel µε στύπωµα και έκπλυνση. Το ίζηµα του συµπλέγµατος 

αντιγόνου – αντισώµατος παγιδεύεται στο στρώµα του gel. 

4. Οι κατακρηµνισθείσες πρωτεΐνες γίνονται ορατές µε χρώση. 

Για την ανίχνευση και ταυτοποίηση του ύποπτου µονοκλωνικού κλάσµατος, το δείγµα ηλεκτροφορείται ταυτόχρονα σε έξι ίχνη. Μετά την 

ηλεκτροφόρηση, ένα ίχνος χρησιµεύει ως ίχνος αναφοράς παρέχοντας το ηλεκτροφορητικό προφίλ των πρωτεϊνών του δείγµατος. Τα 

υπόλοιπα πέντε ίχνη επιτρέπουν χαρακτηρισµό του µονοκλωνικού κλάσµατος µε βάση την αντίδρασή του ή απουσία αυτής, µε τους 

αντιορούς έναντι γάµµα (Ig G), άλφα (Ig A) και µι (Ig M) βαρέων αλυσίδων καθώς και κάππα (ελεύθερων και συνδεδεµένων) και λάµδα 

(ελεύθερων και συνδεδεµένων) ελαφρών αλυσίδων. Οι ζώνες µετά την ανοσοκαθήλωση συγκρίνονται στη συνέχεια µε τις ύποπτες ζώνες 

του ίχνους αναφοράς – η αντίστοιχη ζώνη πρέπει να έχει την ίδια θέση. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ HYDRAGEL 1 IF, HYDRAGEL 2 IF, HYDRAGEL 4 IF ΚΑΙ 


HYDRAGEL 1 IF KIT PN 4301 HYDRAGEL 2 IF KIT PN 4302 HYDRAGEL 4 IF KIT PN 4304 PN 4308 PN 4381* HYDRAGEL 9 IF KIT PN 4309 PN 4382** Gel αγαρόζης (έτοιµα προς χρήση) 10 gel 10 gel 10 gel 80 gel Ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος (έτοιµες προς χρ.) 10 συσκ., 2 έκαστη 10 συσκ., 2 έκαστη 10 συσκ., 2 έκαστη 80 συσκ., 2 έκαστη Μέσο αραίωσης διαλύµατος χρώσης (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 60 mL Χρωστική Amidoblack (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 20 mL Όξινη ιώδης χρωστική (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 75 mL 1 φιαλίδιο, 75 mL 8 φιαλίδια, 75 mLέκαστο ∆ιάλυµα αραίωσης (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 3.2 mL 1 φιαλίδιο, 32 mL 1 φιαλίδιο, 32 mL 2 φιαλίδια, 80 mLέκαστο 3 φιαλίδια, 80 mLέκαστο Μονιµοποιητικό διάλυµα (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 2.9 mL Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά 1 φιαλίδιο, 2.0 mL έναντι γάµµα αλυσίδων (έτοιµο προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά 1 φιαλίδιο, 2.0 mL έναντι άλφα αλυσίδων (έτοιµο προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά 1 φιαλίδιο, 2.0 mL έναντι µι αλυσίδων (έτοιµο προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι κάππα 1 φιαλίδιο, 2.0 mL (ελεύθερων και συνδεδεµένων) ελαφρών αλυσίδων (έτοιµο προς χρήση) Αντιανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά λάµδα 1 φιαλίδιο, 2.0 mL (ελεύθερων και συνδεδεµένων) ελαφρών αλυσίδων (έτοιµο προς χρήση) Εφαρµογείς (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 2 συσκ. των 10 2 συσκ. των 10 16 συσκ. των 10 3 συσκ. των 10 24 συσκ. των 10 Εφαρµογείς αντιορών (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 1 συσκ. των 10 1 συσκ. των 10 8 συσκ. των 10 ∆ιηθητικά χαρτιά – Λεπτά 1 συσκ. των 10 1 συσκ. των 10 1 συσκ. των 10 8 συσκ. των 10 

| ∆ιηθητικά χαρτιά – Αδρά | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 8 συσκ. των 10 | 



- 82 - 

Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά


ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Το µονιµοποιητικό διάλυµα και οι αντιοροί παρέχονται χωριστά από τα κιτ µε εξαίρεση τα MAXI-KIT (Βλέπε ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ 

ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ). 

ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιµοποιούνται πάντα µαζί και σύµφωνα µε τις οδηγίες χρήσης. 

ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ. 

1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ 

Προετοιµασία 

Τα gel αγαρόζης είναι έτοιµα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει: αγαρόζη, 0.8 g/dL, ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.1 ± 0.1, πρόσθετα, 

µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Τα gel αγαρόζης περιέχουν 0.31 % βαρβιτάλη και 0.34 % νατριούχο βαρβιτάλη. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, 

συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! 

Χρήση 

Μέσο για ηλεκτροφόρηση και ανοσοκαθήλωση πρωτεϊνών. 

Φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης 

Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου (15 έως 30°C) ή στη συντήρηση (2 έως 8 °C). (Το βέλος 

στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή 

θερµότητας. Αποφύγετε τις µεγάλες διακυµάνσεις θερµοκρασίας κατά τη φύλαξη. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τα gel όταν: 

(i) σχηµατιστούν κρύσταλλοι ή ίζηµα στην επιφάνεια του gel ή αν η υφή του gel γίνει πολύ µαλακή (όλα αυτά προκύπτουν αν το gel 

καταψυχθεί), 

(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή µούχλα, 

(iii)υπάρχει µεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα στο κουτί του gel (αποτέλεσµα της εξίδρωσης του ρυθµιστικού διαλύµατος από το 

gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης). 

2. ΤΑΙΝΙΕΣ ΜΕ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Σπογγώδεις ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα έτοιµες προς χρήση. Καθεµιά περιέχει: ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.1 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το ρυθµιστικό διάλυµα στις ταινίες περιέχει 0.92 % βαρβιτάλη, 1.03 % νατριούχο βαρβιτάλη και 0.30 % αζίδιο του 

νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! Όταν το πετάτε αποφύγετε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή 

χαλκό, καθώς µπορεί να σχηµατιστούν εκρηκτικές ή τοξικές ενώσεις µε το αζίδιο του νατρίου. 

Χρήση 

Οι ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα λειτουργούν ως δεξαµενή ρυθµιστικού διαλύµατος για την ηλεκτροφόρηση και εξασφαλίζουν επαφή 

µεταξύ του gel και των ηλεκτροδίων. 


Φυλάσσετε τις ταινίες σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένουν σταθερές µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και της συσκευασίας των ταινιών. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τις ταινίες αν η συσκευασία τους έχει ανοιχθεί και οι ταινίες έχουν στεγνώσει. 

3. ΜΕΣΟ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΧΡΩΣΗΣ (µε τα PN 4308) 


Το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής πρέπει να χρησιµοποιείται όπως περιγράφεται στην παράγραφο “ΧΡΩΣΤΙΚΗ 

AMIDOBLACK“. 

Περιέχει όξινο διάλυµα. 

Χρήση 

Για την παρασκευή του διαλύµατος χρωστικής amidoblack. 


Φυλάσσετε το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής σε θερµοκρασία δωµατίου ή στοψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου. 

4. ΧΡΩΣΤΙΚΗ AMIDOBLACK (µε τα PN 4308) 


Η πυκνή χρωστική amidoblack είναι ένα ιξώδες διάλυµα το οποίο ενδέχεται να µετατραπεί σε γέλη. Η καταλληλότητα του πυκνού 

διαλύµατος χρωστικής δεν επηρεάζεται από την αύξηση της γλοιότητάς του ή τη στερεοποίησή του. 

Σε όλες τις περιπτώσεις, για να επιτύχετε τέλεια ανασύσταση της χρωστικής, σας συνιστούµε να ακολουθήσετε την εξής διαδικασία : 

1. Προσθέστε 15 mL του µέσου αραίωσης χρωστικής στο φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος. 

2. Κλείστε προσεκτικά το φιαλίδιο. 

3. Ανακινήστε έντονα το φιαλίδιο για περίπου 5 δευτερόλεπτα. 

4. Αδειάστε αυτό το διάλυµα στο δοχείο που προορίζεται για την επεξεργασία του διαλύµατος χρωστικής. 

5. Επαναλάβετε αυτό το βήµα δύο φορές, ή τρεις αν χρειάζεται. 

6. Αδειάστε το υπόλοιπο µέσο αραίωσης στο δοχείο και συµπληρώστε µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ έως όγκου 300 mL. 

7. Ανακινήστε καλά τα περιεχόµενα του δοχείου για 5 - 10 λεπτά. 

Το διάλυµα χρωστικής είναι έτοιµο προς χρήση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η ατελής ανασύσταση της χρωστικής θα οδηγήσει σε υποεκτίµηση του κλάσµατος της αλβουµίνης. 

Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ~ 2, amidoblack, 0.4 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 6.7 %, 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για τη χρώση των gel µετά από ηλεκτροφορητικό διαχωρισµό πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυµα χρωστικής είναι σχεδιασµένο για χρώση µόνο 10 gel. Αλλάξτε το διάλυµα µετά από 10 διαδικασίες χρώσης. 

- 83 -



Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα χρωστικής είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας 

του κιτ και των φιαλιδίων. 

Το διάλυµα εργασίας είναι σταθερό για 1 µήνα. 

Μην αποθηκεύετε το διάλυµα χρώσης κοντά σε πηγή θερµότητας. 

5. ΟΞΙΝΗ ΙΩ∆ΗΣ ΧΡΩΣΤΙΚΗ (µε τα PN 4301, 4302, 4304, 4309, 4381 και 4382) 


Φιαλίδιο µε πυκνή όξινη ιώδη χρωστική προς αραίωση στα 300 mL µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. 

Μετά την αραίωση, το αραιωµένο διάλυµα της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ≈ 2, ιώδη χρωστική, 0.2 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 3.25 %, 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για τη χρώση των gel µετά από ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών και ανοσοκαθήλωση. 


Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των 

φιαλιδίων της χρωστικής. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για 6 µήνες. 

6. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΡΑΙΩΣΗΣ 


Έτοιµο προς χρήση. Περιέχει: αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα pH 7.5 ± 0.3, κυανό βρωµοφαινόλης, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις 

χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

Χρήση 

Για την αραίωση των δειγµάτων. Το κυανό βρωµοφαινόλης χρησιµεύει ως δείκτης. 


Φυλάσσετε το διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις 

ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων του διαλύµατος αραίωσης. 

Πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

7. ΑΝΤΙΟΡΟΙ ΚΑΙ ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ (µε τα PN 4381 και 4382) 

7.1. ΑΝΤΙΟΡΟΙ 


Έτοιµοι προς χρήση. Όλοι οι αντιοροί είναι προερχόµενες από θηλαστικά πλήρεις αντι-ανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες. Για την εύκολη 

αναγνώριση των αντιορών και την παρακολούθηση της χρήσης τους, οι αντιοροί είναι χρωµατισµένοι µε ευδιάκριτες µη επιβλαβείς 

χρωστικές οι οποίες ταιριάζουν µε το χρώµα της ετικέττας του φιαλιδίου. Όταν ο αντιορός παρουσιάζει ελαφρά θολερότητα, αφήστε το 

φιαλίδιο του αντιορού σε θερµοκρασία δωµατίου για τουλάχιστον 10 min. Με τον τρόπο αυτό θα πρέπει το διάλυµα να ξαναγίνει διαυγές. 

Ωστόσο, αν η θολερότητα παραµένει, δεν θα επηρεάσει την ανοσολογική αντίδραση. Σε περίπτωση σχηµατισµού αδιάλυτου ιζήµατος, 

συνιστάται να φυγοκεντρηθεί ο αντιορός για 5 min στις 3000 rpm. 

Χρήση 

Για ανοσοκαθήλωση ηλεκτροφορηµένων πρωτεϊνών. 

Οι αντιοροί µπορεί να προέρχονται από διαφορετικά είδη ζώων. Μην αναµιγνύετε δύο αντιορούς από διαφορετικά φιαλίδια, ακόµη και µε 

την ίδια ειδικότητα, και αλλάζετε ΠΑΝΤΑ το ρύγχος της πιπέττας όταν αλλάζετε φιαλίδια αντιορού. 

ΠΡΟΣΟΧΗ: Προς αποφυγή οποιασδήποτε ανάµιξης των αντιδραστηρίων, τοποθετήστε προσεκτικά το καπάκι στο αντίστοιχο φιαλίδιο µετά 

από κάθε χρήση. 


Φυλάσσετε τους αντιορούς στη συντήρηση του ψυγείου (2 έως 8 °C). Παραµένουν σταθεροί µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων αντιορού. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κατά τη µεταφορά, οι αντιοροί µπορούν να διατηρούνται εκτός ψυγείου (στους 15 ως 30 °C) για 15 ηµέρες χωρίς δυσµενή 

επίδραση στην απόδοσή τους. 

7.2. ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Έτοιµο προς χρήση. Περιέχει: όξινο διάλυµα, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη 

απόδοση. Για την εύκολη αναγνώρισή του και την παρακολούθηση της χρήσης του, το µονιµοποιητικό διάλυµα είναι χρωµατισµένο µε µη 

επιβλαβή χρωστική. 

Χρήση 

Για τη µονιµοποίηση των ηλεκτροφορητικά διαχωρισµένων πρωτεϊνών του ίχνους αναφοράς (ELP). 

ΠΡΟΣΟΧΗ: Προς αποφυγή οποιασδήποτε ανάµιξης των αντιδραστηρίων, τοποθετήστε προσεκτικά το καπάκι στο αντίστοιχο φιαλίδιο µετά 

από κάθε χρήση. 


Φυλάσσετε το µονιµοποιητικό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένει σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ ή των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

Το διάλυµα πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

8. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ 

Χρήση 

Έτοιµοι, εφαρµογείς µιας χρήσης για τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσετε τους εφαρµογείς σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

- 84 -


9. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ ΑΝΤΙΟΡΩΝ 

Χρήση 

Μιας χρήσης, έγχρωµοι εφαρµογείς για την εφαρµογή του µονιµοποιητικού διαλύµατος και των αντιορών στο gel για την ανοσοκαθήλωση. 

ΠΡΟΣΟΧΗ : Οι εφαρµογείς αντιορών πρέπει να χρησιµοποιούνται µε προσοχή. 

10. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΛΕΠΤΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα της υγρασίας από την επιφάνεια του gel πριν την τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

11. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - Α∆ΡΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης αδρά απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα των µη κατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από την επιφάνεια του gel µετά την 

ανοσοκαθήλωση. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 

1. ΑΝΤΙΟΡΟΙ ΚΑΙ ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ (για τα κιτ 4301, 4302, 4304, 4308 και 4309) 

Το πακέτο αντιορών και µονιµοποιητικού διαλύµατος, SEBIA, PN 4315, περιέχει 5 φιαλίδια αντιορών και 1 φιαλίδιο µονιµοποιητικού 

διαλύµατος, 1 mL έκαστο. Είναι ειδικοί για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε δυναµική κάλυψη. 

1.1. ΑΝΤΙΟΡΟΙ 

Βλ. παρ. 7.1. 

1.2. ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 

Βλ. παρ. 7.2. 

2. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ 


Κάθε φιαλίδιο ∆ιαλύµατος Αποχρωµατισµού (SEBIA, PN 4540, 10 φιαλίδια, 100 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 100 λίτρα απεσταγµένου 

ύδατος. Είναι ευχερές να αραιώνονται µόνο 5 mL του διαλύµατος σε 5 λίτρα, τον όγκο του περιέκτη του διαλύµατος αποχρωµατισµού. Μετά 

την αραίωση το διάλυµα αποχρωµατισµού περιέχει: κιτρικό οξύ 0.05 g/dL. 

Χρήση 

Για αποχρωµατισµό, δηλαδή αφαίρεση της περίσσειας χρωστικής από τη γέλη. 

Για καθαρισµό του τµήµατος χρώσης. 

Για την εξουδετέρωση της οξύτητας του διαλύµατος αποχρωµατισµού, προσθέστε 15 mL διαλύµατος 50 % υδροξειδίου του νατρίου, στο 

κενό δοχείο αχρήστων. 


Φυλάσσετε το διάλυµα προ της αραίωσης σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για µια εβδοµάδα σε θερµοκρασία δωµατίου σε κλειστό δοχείο. Μην προσθέτετε 

αζίδιο του νατρίου. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

Για να αποτρέψετε πολλαπλασιασµό µικροβίων στο αραιωµένο διάλυµα αποχρωµατισµού αν πρόκειται να το φυλάξετε για περισσότερο από 

µια εβδοµάδα, προσθέστε 5 µL/dL ProClin 300. 

Το διάλυµα εργασίας στο οποίο έχει προστεθεί ProClin είναι σταθερό σε κλειστό δοχείο σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

3. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΕΚΠΛΥΝΣΗΣ HYDRASYS 


Κάθε φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος έκπλυνσης HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 φιαλίδια, 80 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 5 λίτρα, 

µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Μετά την αραίωση το διάλυµα εργασίας περιέχει: αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα pH 8.8 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το πυκνό διάλυµα περιέχει 0.625 % αζίδιο του νατρίου. Μην το πίνετε! Αν το πιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό! Το 

αζίδιο του νατρίου µπορεί να οδηγήσει σε σχηµατισµό εκρηκτικών ή τοξικών ουσιών όταν έρχεται σε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή χαλκό. 

Πάντοτε ξεπλένετε µε άφθονο νερό όταν το πετάτε. 

Χρήση 

Το διάλυµα έκπλυνσης χρησιµεύει για την αποµάκρυνση των µη κακατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από τα gel. Χρησιµεύει επίσης για 

καθαρισµό του θαλάµου χρώσης του HYDRASYS. Χρησιµοποιείτε το περιοδικά, π.χ. αν το όργανο λειτουργεί καθηµερινά, πλένετε το 

θάλαµο χρώσης κάθε εβδοµάδα. 

∆είτε το φύλλο οδηγιών για οδηγίες χρήσης. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

- 85 -


4. FLUIDIL 


Το Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 φιαλίδιο, 5 mL) είναι έτοιµο προς χρήση. 

Χρήση 

Για τη διάλυση ιξωδών ή θολών δειγµάτων, π.χ. οροί µε κρυοσφαιρίνες. 


Φυλάσσεται σε θερµοκρασία δωµατίου. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στην ετικέτα του φιαλιδίου του 

Fluidil. 

Το Fluidil πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 ή PN 1211. 

2. Σύστηµα µικροπιπεττών, χειροκίνητο ή αυτόµατο, όπως το HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ως εναλλακτικός τρόπος φόρτωσης των 

εφαρµογέων δειγµάτων. 

3. Θάλαµος Υγρής Φύλαξης, PN 1270, παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

4. Κιτ περιεκτών παρεχόµενο µε το HYDRASYS. 

5. Οδηγός µήτρας SEBIA παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

6. ∆υναµική καλυπτρίδα, SEBIA, PN 1255. 

7. Πιπέττες: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL και 200 µL. 

∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ 

Λήψη και διατήρηση δειγµάτων 

Η ανάλυση συνιστάται να γίνεται γενικά σε φρέσκα δείγµατα. Ο ορός και τα ούρα πρέπει να συλλέγονται σύµφωνα µε τις καθιερωµένες 

διαδικασίες κλινικής εργαστηριακής πρακτικής. ∆ιατηρήστε τα δείγµατα στο ψυγείο στους 2 ως 8 °C για έως µια εβδοµάδα. Για µακρότερη 

διατήρηση, διατηρήστε τα κατεψυγµένα (σταθερά για τουλάχιστον ένα µήνα). 

Κατεψυγµένα δείγµατα ορού µε αζίδιο του νατρίου, 0.02 g/dL, ή κατεψυγµένα δείγµατα ούρων µε HEPES 0.1 M (pH 6.75) και/ή αζίδιο του 

νατρίου, 0.02 g/dL, είναι σταθερά για τουλάχιστον τρεις µήνες. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αποφύγετε το βορικό οξύ ως συντηρητικό. 

Τα αποψυγµένα δείγµατα πιθανόν να παρουσιάζουν κάποιο βαθµό µετουσίωσης των πρωτεϊνών ή λιποπρωτεϊνών. 

Προετοιµασία των δειγµάτων 

1. Οροί 

Προετοιµάστε 1 δείγµα για το HYDRAGEL 1 IF, 2 ή 4 δείγµατα για το HYDRAGEL IF 2/4 ανάλογα µε το κιτ και 9 δείγµατα για το HYDRA- 

GEL 9 IF. 

| ΙΧΝΟΣ | Ορός (µL) | ∆ιάλυµα αραίωσης (µL) | 

| Ig G ανοσοκαθήλωση | 20 | 100 | 

| Ίχνος αναφοράς ELP και όλα τα άλλα ίχνη | 30 | 60 | 

Ειδικές περιπτώσεις 

Αν το επίπεδο ολικής ανοσοσφαιρίνης είναι > 2 g/dL, συνιστάται να χρησιµοποιούνται µεγαλύτερες αραιώσεις των δειγµάτων (εκτός για 

το ίχνος ELP) 

• Αν το επίπεδο ολικής ανοσοσφαιρίνης είναι < 0.5 g/dL, συνιστάται να χρησιµοποιούνται µικρότερες αραιώσεις των δειγµάτων 

• Το δείγµα του ασθενούς µπορεί επίσης να αναλυθεί για πρωτεΐνες Bence Jones. Στην περίπτωση αυτή συνιστάται να χρησιµοποιείται το 

κιτ “ BENCE JONES “ . 

• Το δείγµα θα πρέπει να αναλύεται µε το κιτ IF και µε τον αντιορό αντι-κάππα ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες (SEBIA, PN 4370) και αντιλάµδα 

ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες (SEBIA, PN 4371) ή µε τα κιτ HYDRAGEL 1, 2, 4 ή 9 BENCE JONES (SEBIA, PN 4321, 4322, 4324 or 

4329). 

Στην περίπτωση αυτή, αραιώστε τον ορό µε φυσιολογικό ορό ή µε διάλυµα αραίωσης προηγουµένως αραιωµένο 1/4 (1 µέρος διάλυµα 

αραίωσης, 3 µέρη απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ) 1/10 για τα ίχνη ELP, GAM, K και L (1 µέρος ορός, 9 µέρη αραιωµένο διάλυµα για 

αραίωση ή φυσιολογικός ορός) και 1/3 (1 µέρος ορός, 2 µέρη αραιωµένο διάλυµα για αραίωση ή φυσιολογικός ορός) για τα ίχνη Kf και Lf. 

Αν η ολική ανοσοσφαιρίνη είναι < 0.5 g/dL, συνιστάται να αραιώνεται λιγότερο το δείγµα ορού. Π.χ. 1/5 για τα ίχνη ELP, GAM, K και L και 

1/2 για τα ίχνη Kf και Lf. 

• Μετά από ψύξη ή κατάψυξη, µερικοί οροί (ιδιαίτερα εκείνοι που περιέχουν κρυοσφαιρίνες) µπορεί να γίνουν ιξώδεις ή να αναπτύξουν 

θολερότητα. Τέτοιοι οροί µπορεί να παρουσιάσουν προβλήµατα εφαρµογής λόγω παρακώλυσης της διάχυσης στα δόντια του εφαρµογέα 

δείγµατος. Σε αυτήν την περίπτωση, προσθέστε 25 µL Fluidil σε 75 µL ορού και περιδινήστε για 15 sec. Στη συνέχεια ακολουθήστε την 

τυπική διαδικασία. 

• Μερικές µονοκλωνικές πρωτεΐνες µπορεί να πολυµεριστούν δίνοντας ένα «µονοκλωνικό κλάσµα» το οποίο εµφανίζεται σε όλα τα ίχνη 

µετά από ανοσοκαθήλωση. Στην περίπτωση αυτή (i) ετοιµάστε 1 % βήτα-µερκαπτοαιθανόλη (BME ή 2- µερκαπτοαιθανόλη, 2 ME) σε 

Fluidil, (ii) προσθέστε 25 µL αυτού του µέσου σε 75 µL ορού, (iii) περιδινήστε (vortex) και περιµένετε τουλάχιστον 15 min (max. 30 min) 

και στη συνέχεια ακολουθήστε την τυπική διαδικασία. 

• Για ανάλυση Ig D και/ή Ig E, εφαρµόστε τις ίδιες αραιώσεις µε εκείνες για τις ελεύθερες και συνδεδεµένες κάππα και λάµδα ελαφρές 

αλυσίδες. 

2. Συµπυκνωµένα ούρα 

Τα περισσότερα δείγµατα ούρων πρέπει να είναι συµπυκνωµένα. Εφαρµόστε συµπυκνωµένα ούρα σε όλα τα βοθρία. Συµπυκνώστε τα 

ούρα (µε κατάλληλη συσκευή) σε συνολική συγκέντρωση πρωτεΐνης ≥ 0.5 g/dL ή συνολική Ig περίπου 0.1 g/dL. Αν οι συγκεντρώσεις της 

πρωτεΐνης ή της Ig δεν είναι γνωστές, συµπυκνώστε 20x - 100x. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μερικές φορές τα ούρα περιέχουν υψηλές συγκεντρώσεις αλάτων. Αυτό µπορεί να προκαλέσει παραµόρφωση του gel 

κατά την ηλεκτροφόρηση και συνεπώς αλλοίωση των προφίλ ηλεκτροφόρησης. Αν η αλλοίωση αυτή καθιστά την ερµηνεία των 

αποτελεσµάτων ανακριβή, τα ούρα πρέπει να απαλλαγούν από τα άλατα. 

- 86 -


Η διάχυση των δειγµάτων ούρων στις υποδοχές του εφαρµογέα µπορεί να παρακωλύεται όταν τα ούρα είναι θολά. Συνιστάται η 

αποµάκρυνση των σωµατιδίων µε φυγοκέντρηση (π.χ. 10 min στις 3,000 rpm) ή διήθηση (π.χ. ηθµός 0.45 µm). 

Η ευαισθησία της ανάλυσης ούρων µπορεί να αυξηθεί αυξάνοντας το χρόνο εφαρµογής των δειγµάτων και επώασης µε τους αντιορούς 

χρησιµοποιώντας το πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης «BENCE JONES». Τότε, το όριο ανίχνευσης αντιστοιχεί σε 1 - 5 mg/dL µονοκλωνικής 

πρωτεΐνης. Ανάλογα µε την πρωτεΐνη, τα δείγµατα ούρων µπορούν να τρέξουν µη συµπυκνωµένα ή συµπυκνωµένα ως 25 x. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Προσπάθεια να αυξηθεί η ευαισθησία της δοκιµασίας µε µεγαλύτερη συµπύκνωση αδιακρίτως των δειγµάτων ούρων πρέπει 

να αντιµετωπίζεται µε προσοχή. Η χρησιµοποίηση υπερβολικά συµπυκνωµένων ούρων οδηγεί συχνά σε σχηµατισµό ψευδών ζωνών. 

Αυτά τα δείγµατα µπορεί να χρειαστεί να ξανατρέξουν µε µικρότερη συµπύκνωση. 

Ειδική περίπτωση 

Οι ελαφρές αλυσίδες στα ούρα τείνουν να πολυµερίζονται και να σχηµατίζουν συσσωµατώµατα. Αν αυτό παρακωλύει την ερµηνεία των 

αποτελεσµάτων, τα πολυµερή ελαφρών αλυσίδων πρέπει να από-πολυµεριστούν: (i) αναµίξτε 1 όγκο BME µε 9 όγκους νερό (π.χ., 5 µL 

BME και 45 µL νερό), (ii) προσθέστε 5 µL της αραιωµένης BME σε 100 µL ούρων, αναµίξτε καλά και εφαρµόστε χωρίς άλλη αραίωση. 

Συνεχίστε µε το τυπικό πρόγραµµα ανοσοκαθήλωσης «BENCE JONES». 

∆είγµατα προς αποφυγή 

• Αποφύγετε δείγµατα πλάσµατος. Το ινωδογόνο δίνει µια ζώνη στο ίχνος αναφοράς κοντά στο σηµείο εφαρµογής η οποία θα µπορούσε 

να εκληφθεί ως µονοκλωνική ανοσοσφαιρίνη. 

• Αποφύγετε αιµολυµένα δείγµατα. 

• Αποφύγετε παλαιά, πληµµελώς διατηρηµένα δείγµατα ούρων, στα οποία µπορεί να έχει συµβεί ενζυµατική διάσπαση των πρωτεϊνών. 

∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ 

Το σύστηµα HYDRASYS είναι ένα ηµι-αυτοµατοποιηµένο πολυπαραµετρικό όργανο. Τα αυτοµατοποιηµένα στάδια λειτουργίας 

περιλαµβάνουν την επεξεργασία των gel αγαρόζης HYDRAGEL µε την ακόλουθη σειρά: εφαρµογή δειγµάτων, ηλεκτροφόρηση, στέγνωµα, 

χρώση, αποχρωµατισµός και τελικό στέγνωµα. Τα χειροκίνητα στάδια περιλαµβάνουν το χειρισµό των δειγµάτων και των gel καθώς και την 

προετοιµασία του οργάνου για λειτουργία. ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙ∆ΙΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ ΤΟΥ HYDRASYS. 

I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 

1. Θέστε το HYDRASYS σε λειτουργία. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα για το HYDRAGEL 1 IF ή το HYDRAGEL IF 2/4 (2 δείγµατα),δύο εφαρµογείς για το HYDRAGEL IF 2/4 

(4 δείγµατα) ή τρεις εφαρµογείς για το HYDRAGEL 9 IF, σε µια επίπεδη επιφάνεια µε τους αριθµούς των βοθρίων στη δεξιά πλευρά 

(Εικ. 1). 

- Τοποθετήστε 10 µL από τα δείγµατα στα βοθρία του εφαρµογέα ως εξής. Φορτώστε κάθε εφαρµογέα εντός 2 min. 

| ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ / ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ ΙΧΝΟΣ | 

ΒΟΘΡΙΟ No ELP G A M K L | 

HYDRAGEL 1 IF | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL IF 2/4 ∆ΕΙΓΜΑ No 1 Η’ 3 2 3 4 5 6 7 ∆ΕΙΓΜΑ No 2 Η’ 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 IF ∆ΕΙΓΜΑ No 1, 4 Η’ 7 1 2 3 4 5 6 ∆ΕΙΓΜΑ No 2, 5 Η’ 8 7 8 9 10 11 12 

| ∆ΕΙΓΜΑ No 3, 6 Η’ 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Στο HYDRAGEL IF 2/4, τα βοθρία no. 1, 8 και 15 δεν χρησιµοποιούνται. Μπορούν να σηµαδευτούν µε έναν µαρκαδόρο 

για να αποφευχθεί λανθασµένη τοποθέτηση δείγµατος σε αυτά. 

- Τοποθετήστε τον/τους εφαρµογέα(-είς) στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον/τους από το 

πλαστικό προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών). 

- Αφήστε τα δείγµατα να διαχυθούν στα δόντια για 5 min µετά την τοποθέτηση του τελευταίου δείγµατος. 

Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες. 

3. Ανοίξτε το καπάκι της Μονάδας Ηλεκτροφόρησης και σηκώστε τους φορείς των ηλεκτροδίων και του εφαρµογέα. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Ποτέ µην κλείνετε το καπάκι ενώ οι φορείς είναι σηκωµένοι! 

4. Επιλέξτε το πρόγραµµα «1 IF SM/DM» για το HYDRAGEL 1 IF, “2/4 IF SM/DM” για το HYDRAGEL IF 2/4 ή “9 IF DM” για το HYDRAGEL 

9 IF, από το µενού του οργάνου (αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου). 

5. Αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από τη συσκευασία τους. Κρατήστε τις από την πλαστική άκρη τους. Προσαρµόστε 

τη σηµαδεµένη άκρη των ταινιών στις ακίδες του φορέα ηλεκτροδίων, το πλαστικό κάλυµµα της ταινίας πρέπει να είναι στραµµένο 

προς το φορέα (Εικ. 2). 

6. Ανοίξτε τη συσκευασία του HYDRAGEL. 

- Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού. 

Αφαιρέστε το χαρτί αµέσως. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην αφήνετε το διηθητικό χαρτί σε επαφή µε το gel επί µακρόν για να µην αφυδατωθεί. 

- Εισαγάγετε 120 µL απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ για το HYDRAGEL 1 IF ή 200 µL για το HYDRAGEL IF 2/4 και το HYDRAGEL 

9 IF, µέχρι το κατώτερο τρίτο της κλίµακας που είναι τυπωµένη στην Πλακέτα Ελέγχου Θερµοκρασίας της µονάδας 

ηλεκτροφόρησης. 

- Τοποθετήστε την πλάκα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα της 

τυπωµένης κλίµακας (Εικ. 3). 

- Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας του νερού. (Εικ. 3). Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, 

ότι το νερό έχει απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε την τυπωµένη κλίµακα. 

7. Κατεβάστε και τους δύο φορείς. Σε αυτήν τη θέση, οι ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος δεν αγγίζουν το gel. ΜΗΝ ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ 

ΦΟΡΕΙΣ ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ. 

- 87 -


8. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα από τον υγρό θάλαµο. Κρατήστε τον από το προστατευτικό κάλυµµα. 

- Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα. 

- Τοποθετήστε τον/τους εφαρµογέα(-είς) στο φορέα : 

- Με το HYDRAGEL 1 IF ή το HYDRAGEL IF 2/4 (2 δείγµατα), στη θέση No 6, 

- Με το HYDRAGEL IF 2/4 (4 δείγµατα), στις θέσεις No 3 και 9, 

- Με το HYDRAGEL 9 IF, στις θέσεις No 2, 6 και 10. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα πρέπει να είναι στραµµένοι προς τον χειριστή (Εικ. 4). 

Για τη βελτίωση της επαναληψιµότητας της εφαρµογής των δειγµάτων, τοποθετείτε πάντα τους εφαρµογείς στην αριστερή πλευρά 

του φορέα. 

9. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

10. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Βεβαιωθείτε ότι η είσοδος αερισµού στη δεξιά πλευρά του οργάνου είναι ελεύθερη. 

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι δύο φορείς χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα και ο εφαρµογέας να είναι σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. 

• Ο φορέας του εφαρµογέα σηκώνεται. 

• Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται υπό συνεχές ρεύµα 10 W για το HYDRAGEL 1 IF και 20 W για το HYDRAGEL IF 2/4, µέχρι να 

συµπληρωθούν 42 Vh (για περίπου 9 min) και υπό 20 W µέχρι να συµπληρωθούν 36 Vh (για περίπου 7 min) για το HYDRAGEL 9 IF, στους 

20 °C . 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Το ακόλουθο µήνυµα παρουσιάζεται στην οθόνη : 

« AS». 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

II. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗΣ 

Η δυναµική καλυπτρίδα περιέχει έναν έγχρωµο οδηγό αναφοράς για την εφαρµογή των αντιδραστηρίων, έναν εφαρµογέα αντιορών, µια 

βάση εφαρµογέα αντιορών, έναν οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας και µια συσκευή µείωσης του µήκους (Εικ. 5). 

Κατά την ηλεκτροφόρηση, συναρµολογήστε τη δυναµική καλυπτρίδα ως εξής : 

1. Τοποθετήστε τον οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας σε επίπεδη επιφάνεια. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Για ανάλυση ενός ή δύο δειγµάτων, είναι απαραίτητο να τοποθετηθεί στον οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας µια 

συσκευή µείωσης του µήκους. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα αντιορών στη βάση εφαρµογέων (Εικ. 6) : 

- Κλίνετε τον εφαρµογέα αντιορών κατά 45° και τοποθετήστε τον σε επαφή µε τα πλαστικά ελατήρια της βάσης εφαρµογέων. 

- Αποµακρύνετε τα δύο αντικείµενα και περιστρέψτε τον εφαρµογέα για να τον σταθεροποιήσετε στις εγκοπές της βάσης. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ : Βεβαιωθείτε ότι ο εφαρµογέας είναι σωστά τοποθετηµένος στη βάση : οι ακίδες στα άκρα του εφαρµογέα 

πρέπει να είναι σταθεροποιηµένες στις εγκοπές της βάσης. 

3. Τοποθετήστε τη βάση µε τον εφαρµογέα στον οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας (Εικ. 7). Στη συνέχεια, τοποθετήστε τον έγχρωµο 

οδηγό αναφοράς για την εφαρµογή των αντιδραστηρίων, που αντιστοιχεί στην ανάλυση που πραγµατοποιείτε, στη βάση του 

εφαρµογέα µπροστά από τα βοθρία του εφαρµογέα αντιδραστηρίων (Εικ. 8). 

4. Εφαρµόστε τα αντιδραστήρια ως εξής: 

- Εφαρµογέας αντιορών µε 6 βοθρία για το HYDRAGEL 1 IF : 8 µL ανά βοθρίο, 

- Εφαρµογέας αντιορών µε 15 βοθρία για το HYDRAGEL IF 2/4 : 8 µL ανά βοθρίο για ανάλυση 2 δειγµάτων, 

12 µL ανά βοθρίο για ανάλυση 4 δειγµάτων, 

- Εφαρµογέας αντιορών µε 18 βοθρία για το HYDRAGEL 9 IF : 8 µL ανά βοθρίο. 

ΙΧΝΟΣ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΟ ΧΡΩΜΑ ELP µονιµοποιητικό διάλυµα κίτρινο G αντιορός αντι-γάµµα βαρείες αλυσίδες ιώδες A αντιορός αντι-άλφα βαρείες αλυσίδες πράσινο M αντιορός αντι-µι βαρείες αλυσίδες µπλε K αντιορός αντι-κάππα ελαφρές αλυσίδες (ελεύθερες και συνδεδεµένες) πορτοκαλί 

| L | αντιορός αντι-λάµδα ελαφρές αλυσίδες (ελεύθερες και συνδεδεµένες) | κόκκινο | 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα αντιδραστήρια είναι έγχρωµα και τα χρώµατα παρουσιάζονται στον έγχρωµο οδηγό αναφοράς για τη διευκόλυνση 

του πιπετταρίσµατος των αντιορών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Για το HYDRAGEL IF 2/4, µην χρησιµοποιείτε τα βοθρία 1, 8 και 15 του εφαρµογέα αντιορών. 

- Αναρροφάτε τα αντιδραστήρια αποφεύγοντας φυσαλίδες αέρα στο ρύγχος της πιπέττας. 

- Εφαρµόζετε τα αντιδραστήρια (Εικ. 9) : 

- Κρατάτε την πιπέττα υπό γωνία και αγγίζετε το ρύγχος της ελαφρά στο πλάγιο του βοθρίου, χωρίς να αγγίζετε τον πυθµένα του 

βοθρίου. 

- Εγχύστε τη σταγόνα του αντιδραστηρίου στο βοθρίο. 

5. Αφαιρέστε τον έγχρωµο οδηγό αναφοράς. 

III. ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ 

1. Ανοίξτε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

2. Αφαιρέστε τους εφαρµογείς δειγµάτων και πετάξτε τους. 

3. Σηκώστε και τους δύο φορείς, αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος κρατώντας τις από την πλαστική άκρη τους και 

πετάξτε τις. 

- Αφαιρέστε και τους δύο φορείς. 

- Σκουπίστε τα ηλεκτρόδια µε µαλακό υγρό πανάκι. 

- Αφήστε το gel στη θέση του στη µονάδα ηλεκτροφόρησης. 

- 88 -


4. Ετοιµάστε τη δυναµική καλυπτρίδα για εφαρµογή των αντιδραστηρίων ως εξής (Εικ. 10): 

- Τοποθετήστε τον οδηγό της καλυπτρίδας στο clip συγκράτησης (ο οδηγός µπορεί να παραµένει στη µονάδα ηλεκτροφόρησης 

µόνιµα). 

- Κρατώντας τη δυναµική καλυπτρίδα από την άκρη της τοποθετήστε την στον οδηγό µε τις εγκοπές ευθυγραµµισµένες µε τα 

σηµάδια. 

- Χαµηλώστε τη δυναµική καλυπτρίδα επάνω στην πλάκα του HYDRASYS. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Προσαρµόστε τη θέση της δυναµικής καλυπτρίδας ώστε να είναι τέλεια ευθυγραµµισµένη µε τα ηλεκτροφορητικά 

ίχνη. 

5. Τοποθετήστε τη βάση των εφαρµογέων στο κατώτερο σηµείο του οδηγού της καλυπτρίδας, στραµµένη προς το χειριστή. 

Κρατήστε τη βάση των εφαρµογέων από τη λαβή στα δεξιά της και πιέστε το κεντρικό σηµείο πίεσης ώστε ο εφαρµογέας αντιορών 

να ακουµπήσει στο gel. ∆ιακόψτε την πίεση. Τα αντιδραστήρια θα απλωθούν σε κάθε ηλεκτροφορητικό ίχνος (Εικ. 11). 

6. Αµέσως, χρησιµοποιώντας τη λαβή της βάσης του εφαρµογέα αντιδραστηρίων, µετακινήστε τον εφαρµογέα αργά αλλά σταθερά 

πάνω – κάτω σε όλο το µήκος του gel για να εφαρµόσετε τα αντιδραστήρια. Αυτό θα πρέπει να διαρκέσει περίπου 5 sec (Εικ. 12). 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ : Κατά τη διάρκεια αυτού του βήµατος, κρατήστε την καλυπτρίδα µόνο από τη λαβή της βάσης του εφαρµογέα 

αντιδραστηρίων. Αποφύγετε να αγγίζετε τον οδηγό. Μην ξαναπιέζετε το σηµείο πίεσης καθώς αυτό µπορεί να οδηγήσει σε 

ανάµιξη των αντιδραστηρίων. 

7. Αφαιρέστε τον οδηγό και τη δυναµική καλυπτρίδα. 

- Αφαιρέστε τη βάση του εφαρµογέα αντιδραστηρίων κρατώντας την από τη λαβή της. 

- Αφαιρέστε τον εφαρµογέα αντιδραστηρίων από τη βάση του και πετάξτε τον. 

- Κάποια υπολειπόµενη ποσότητα αντιδραστηρίων µπορεί να παραµείνει στα βοθρία µετά την εφαρµογή. Αυτό δεν θα επηρεάσει 

τα αποτελέσµατα. 

8. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης . 

9. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πατώντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. Η 

λέξη «[INCUBATION]» εµφανίζεται στην οθόνη. 

ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Επώαση στους 20 °C για 5 min (ελεγχόµενη µε το φαινόµενο Peltier). 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας ηλεκτροφόρησης. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται 

στην οθόνη: « PAP.». 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια της επώασης. 

IV. ΣΤΥΠΩΜΑ ΤΟΥ GEL 


2. Τοποθετήστε ένα αδρό διηθητικό χαρτί στο gel: 

ευθυγραµµίστε την άκρη του διηθητικού χαρτιού µε την άκρη του gel (δώστε του κλίση 45°) και πιέστε το στο gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πιέστε δυνατά σε όλη την επιφάνεια του gel ώστε να εξασφαλιστεί καλή προσκόλληση. 

3. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης . 

4. Αρχίστε τη διαδικασία πιέζοντας το «START» . 

ΣΤΥΠΩΜΑ - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Στύπωµα στους 40 °C ελεγχόµενο µε το φαινόµενο Peltier, για 3 min. 

Το ακόλουθο µήνυµα παρουσιάζεται στην οθόνη: «[BLOTTING]». 

• Ακούγεται ένα ηχητικό σήµα. 

Το ακόλουθο µήνυµα παρουσιάζεται στην οθόνη: «❊ PAP.». 

V. ΣΤΕΓΝΩΜΑ ΤΟΥ GEL 


2. Αφαιρέστε το διηθητικό χαρτί και αφήστε το gel στη θέση του. 

3. Κλείστε το καπάκι. 

4. Αρχίστε τη διαδικασία πιέζοντας το «START». 

ΣΤΕΓΝΩΜΑ - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Στέγνωµα στους 50 °C ελεγχόµενο µε το φαινόµενο Peltier, για 6 min. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας ηλεκτροφόρησης. Η θερµοκρασία της πλάκας 

παραµένει στους 50 °C µέχρι να ανοιχθεί το καπάκι. Το µήνυµα “Migration temp maintained” εµφανίζεται στην οθόνη. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια του στεγνώµατος. 

VI. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΟΥ GEL 

1. Ανοίξτε το καπάκι. 

2. Αφαιρέστε το στεγνωµένο gel για περαιτέρω επεξεργασία. 

3. Ανοίξτε τον στατήρα των gel. Τοποθετήστε το στεγνό gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) στις αύλακες και κλείστε τον 

στατήρα. Βεβαιωθείτε ότι το film είναι σωστά τοποθετηµένο µέσα στον στατήρα (Εικ. 13). 

4. Τοποθετήστε τον στατήρα στη Μονάδα Επεξεργασίας / Χρώσης των gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν την έναρξη της επεξεργασίας / χρώσης των gel, ελέγξτε τα ακόλουθα: 

- ο περιέκτης διαλύµατος έκπλυνσης περιέχει τουλάχιστον 400 mL διαλύµατος έκπλυνσης, 

- ο περιέκτης χρώσης είναι γεµάτος µε 300 mL χρωστικού διαλύµατος, 

- ο περιέκτης διαλύµατος αποχρωµατισµού περιέχει τουλάχιστον 1 λίτρο διαλύµατος αποχρωµατισµού, 

- ο περιέκτης αχρήστων είναι κενός. 

Για τη σύνδεση των γραµµών των αντιδραστηρίων: ανατρέξτε στις πληροφορίες που εµφανίζονται στην οθόνη του οργάνου 

(επιλέξτε: REAGENT LINES). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μην ξεχνάτε να αποφράσσετε τις µη χρησιµοποιούµενες γραµµές. 

- 89 -


5. Επιλέξτε το πρόγραµµα χρώσης «IF ACID VIOLET» ή «IF AMIDO» από το µενού του οργάνου και αρχίστε τη διαδικασία πατώντας 

το πλήκτρο «START» (πράσινο βέλος στη δεξιά πλευρά του πληκτρολογίου). 

Κατά τα στάδια χρώσης, αποχρωµατισµού και στεγνώµατος, η µονάδα παραµένει κλειδωµένη. 

Μετά το στάδιο ψύξης, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας (ο αερισµός διατηρείται µέχρι την αφαίρεση του 

στατήρα των gel). 

ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ: 

- Η θερµοκρασία της πλάκας της µονάδας ηλεκτροφόρησης µειώνεται από τη στιγµή που ανοίγει το καπάκι µέχρι να φτάσει τους 20 °C 

(σε λιγότερο από 5 min). Τότε µπορεί να αρχίσει νέα ηλεκτροφόρηση. 

- Επαναφέρετε το φορέα δειγµάτων και τους φορείς ηλεκτροδίων στη θέση τους. 

- Σκουπίστε την πλάκα ελέγχου της θερµοκρασίας µε µαλακό υγρό πανάκι. 

VII.ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΟΥ GEL 

1. Αφαιρέστε τον στατήρα των gel από τη µονάδα, ανοίξτε τον και αφαιρέστε το στεγνό gel. 

2. Αν χρειαστεί, καθαρίστε την πίσω (πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό χαρτί. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα µήκη των ηλεκτροφορηµάτων ενδέχεται να είναι ελαφρώς διαφορετικά στα gel µε 2 ή 3 σειρές ανάλυσης, χωρίς 

δυσµενή επίδραση στην απόδοση. 

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Ερµηνεία 

1. Ορός 

Απουσία µονοκλωνικού κλάσµατος 

• Ένα φυσιολογικό δείγµα ορού παρουσιάζει µια ελαφριά διάχυτη χρώση των πολυκλωνικών ανοσοσφαιρινών σε όλα τα ίχνη. 

• Η υπεργαµµασφαιριναιµία χαρακτηρίζεται από έντονα χρωµατισµένη διάχυτη ζώνη γάµµα και απουσία περιορισµένων ζωνών. 

Παρουσία µονοκλωνικού κλάσµατος 

• Η παρουσία µονοκλωνικής πρωτεΐνης (γαµµαπάθεια) χαρακτηρίζεται από µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε κάποιον από τους 

αντιορούς έναντι βαρέων αλυσίδων (γάµµα, άλφα ή µι) και είτε από τον αντι-κάππα είτε τον αντι-λάµδα αντιορό. Η ανιχνευόµενη 

µονοκλωνική ζώνη, τυπικά στενή και καλώς διαχωριζόµενη στην εµφάνιση, πρέπει να βρίσκεται στην ίδια απόσταση κίνησης µε την 

ύποπτη µονοκλωνική ζώνη που φαίνεται στο ίχνος αναφοράς (ELP). 

• Απουσία αντίδρασης µε κάποιον από τους αντιορούς έναντι βαρέων αλυσίδων και αντίδραση µε κάποιον από τους αντιορούς έναντι 

ελαφρών αλυσίδων θα µπορούσε να σηµαίνει : 

a) µια πολύ σπάνια Ig D ή Ig E γαµµαπάθεια gammopathy: επιβεβαιώστε µε αντι-δέλτα ή αντι-έψιλον αντιορούς, 

b) γαµµαπάθεια ελαφρών αλύσων: επιβεβαιώστε µε αντιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

• Απουσία αντίδρασης µε κάποιον από τους αντιορούς έναντι ελαφρών αλύσων, ενώ παρατηρείται αντίδραση µε αντιορό έναντι 

βαρέων αλυσίδων, µπορεί να σηµαίνει µια πολύ σπάνια γαµµαπάθεια βαρέων αλύσων (γάµµα, άλφα ή µι). 

Παρουσία δύο ή περισσότερων µονοκλωνικών κλασµάτων 

Σε σπάνιες περιπτώσεις, πολλοί κλώνοι B-κυττάρων πολλαπλασιάζονται όπως φαίνεται από πολλαπλές µονοκλωνικές ζώνες που 

αποκαλύπτονται µε την ανοσοκαθήλωση: 

• Μια δικλωνική γαµµαπάθεια χαρακτηρίζεται από παρουσία δύο ζωνών βαρέων αλυσίδων (ίδιων ή διαφορετικών) και δύο ζωνών 

ελαφρών αλυσίδων (ίδιων ή διαφορετικών). 

• Οι πολυµερισµένες ανοσοσφαιρίνες χαρακτηρίζονται από πολλαπλές (συνήθως δύο) ζώνες του ίδιου τύπου βαριάς αλύσου και µιας 

ζώνης του ίδιου τύπου ελαφράς αλύσου. 

Για να επιβεβαιωθεί η παρουσία µιας µονοκλωνικής ανωµαλίας, είναι απαραίτητος ο αποπολυµερισµός µε β-µερκαπτοαιθανόλη (BME 

ή 2ME) και επανάληψη της ανοσοκαθήλωσης (Βλ. «∆είγµατα προς ανάλυση»). 

• Μια ολιγοκλωνική γαµµαπάθεια χαρακτηρίζεται από την παρουσία πολλαπλών, συνήθως αδύναµων ζωνών ενός ή περισσοτέρων 

τύπων βαρέων αλύσων και ενός ή δύο τύπων ελαφρών αλύσων. 

Ειδικές περιπτώσεις 

• Όταν παρατηρείται µονοκλωνική ζώνη στην ηλεκτροφόρηση του ορού (ίχνος ELP) αλλά δεν επιβεβαιώνεται µε την 

ανοσοκαθήλωση, το ινοδωγόνο (δείγµα πλάσµατος) είναι ο πρώτος ύποπτος. 

• Όταν παρατηρείται µονοκλωνική ζώνη σε όλα τα ίχνη, θα πρέπει να υποψιαστείτε κρυοσφαιρίνη ή πολυµερισµένη Ig M. 

Αποπολυµερίστε και επαναλάβετε (Βλ. «∆είγµατα προς ανάλυση»). 

2. Ούρα 

Η ερµηνεία γίνεται όπως στον ορό. 

• Μια ακέραιη µονοκλωνική πρωτεΐνη στα ούρα χαρακτηρίζεται από µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε κάποιον από τους 

αντιορούς έναντι βαρέων αλύσων (γάµµα, άλφα ή µι) και µε κάποιον από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων 

ελαφρών αλύσων. Η ανιχνευόµενη µονοκλωνική ζώνη, τυπικά στενή και καλώς διαχωριζόµενη στην εµφάνιση, πρέπει να βρίσκεται 

στην ίδια απόσταση κίνησης µε την ύποπτη µονοκλωνική ζώνη που φαίνεται στο ίχνος αναφοράς (ELP). 

• Μια µονοκλωνική ελεύθερη ελαφριά αλυσία, η πρωτεΐνη Bence Jones (µια σωληναριακή πρωτεΐνη) χαρακτηρίζεται από µια 

µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε έναν από τους αντιορούς έναντι των ελαφρών συνδεδεµένων και ελεύθερων αλυσίδων αντικάππα 

ή αντι-λάµδα. Καµία θετική αντίδραση δεν πρέπει να παρατηρείται µε κάποιον από τους αντιορούς έναντι των βαρέων αλύσων 

(γάµµα, άλφα ή µι). 

Παρεµβολές και Περιορισµοί 

Βλέπε ∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ. 

Η χρήση άλλων αντιορών από τους ειδικούς για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε δυναµική κάλυψη µπορεί να επηρεάσει τα 

αποτελέσµατα. 

Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης, είναι πιθανό κάποια µονοκλωνικά στοιχεία να µην 

ανιχνεύονται µε αυτήν τη µέθοδο. 

- 90 -


Αντιµετώπιση προβληµάτων 

Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιµασίας και φύλαξης των υλικών 

και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά. 

Τα Φύλλα ∆εδοµένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται επίσης από την 

Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή. 

∆Ε∆ΟΜΕΝΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 

Αναπαραγωγιµότητα στο ίδιο gel και ειδικότητα 


Αναπαραγωγιµότητα στο ίδιο gel καταδείχθηκε σε τρία διαφορετικά παθολογικά δείγµατα : δύο δείγµατα µε ένα υψηλού επιπέδου 

µονοκλωνικό κλάσµα και ένα δείγµα µε δύο χαµηλού επιπέδου µονοκλωνικά κλάσµατα. 

Κάθε δείγµα έτρεξε 4 φορές σε 2 παρτίδες gel HYDRAGEL IF 2/4 µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε όξινη ιώδη χρωστική. 


Αναπαραγωγιµότητα στο ίδιο gel καταδείχθηκε σε τρία διαφορετικά παθολογικά δείγµατα καθένα µε ένα υψηλού επιπέδου µονοκλωνικό 

κλάσµα. 

Κάθε δείγµα έτρεξε 9 φορές σε 2 παρτίδες gel HYDRAGEL 9 IF µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε όξινη ιώδη χρωστική. 

Όλες οι επαναλήψεις απέδωσαν όµοια αποτελέσµατα µέσα στην ίδια παρτίδα και µεταξύ των παρτίδων και αναµενόµενα για τα δείγµατα 

που αναλύθηκαν. 

Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel και ειδικότητα 


Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel καταδείχθηκε σε τέσσερα διαφορετικά παθολογικά δείγµατα µε ένα ή πολλά µονοκλωνικά κλάσµατα. 

Τα δείγµατα αυτά έτρεξαν σε 10 HYDRAGEL IF 2/4 gel από 3 διαφορετικές παρτίδες, µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε όξινη ιώδη 

χρωστική. 


Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel καταδείχθηκε σε εννέα διαφορετικά παθολογικά δείγµατα: δύο δείγµατα µε ένα υψηλού επιπέδου 

µονοκλωνικό κλάσµα, ένα δείγµα µε δύο χαµηλού επιπέδου µονοκλωνικά κλάσµατα και ένα δείγµα µε ένα υψηλού επιπέδου και ένα 

χαµηλού επιπέδου µονοκλωνικό κλάσµα. 

Τα δείγµατα αυτά έτρεξαν σε 10 HYDRAGEL 9 IF gel από 3 διαφορετικές παρτίδες, µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε όξινη ιώδη 

χρωστική. 

Όλες οι επαναλήψεις απέδωσαν όµοια αποτελέσµατα από gel σε gel και αναµενόµενα για τα δείγµατα που αναλύθηκαν. 

Ακρίβεια 

HYDRAGEL 4 IF µε χρώση όξινης ιώδους χρωστικής 

Εβδοµήντα τρία (73) διαφορετικά παθολογικά δείγµατα ορού, έντεκα (11) φυσιολογικά δείγµατα ορού και δώδεκα (12) δείγµατα 

συµπυκνωµένων ούρων αναλύθηκαν µε gel HYDRAGEL IF 2/4 και µε άλλο παρόµοιο, εµπορικά διαθέσιµο σύστηµα ανοσοκαθήλωσης σε gel 

αγαρόζης. 

HYDRAGEL 4 IF µε χρώση amidoblack 

Είκοσι οκτώ (28) διαφορετικά παθολογικά δείγµατα ορού και τέσσερα (4) φυσιολογικά δείγµατα ορού αναλύθηκαν µε gel HYDRAGEL IF 2/4 

και µε άλλο παρόµοιο, εµπορικά διαθέσιµο σύστηµα ανοσοκαθήλωσης σε gel αγαρόζης. 

HYDRAGEL 9 IF µε χρώση όξινης ιώδους χρωστικής 

Ενενήντα πέντε (95) διαφορετικά παθολογικά δείγµατα ορού, τέσσερα (4) φυσιολογικά δείγµατα ορού και δώδεκα (12) δείγµατα 

συµπυκνωµένων ούρων αναλύθηκαν µε gel HYDRAGEL 9 IF και µε άλλο παρόµοιο, εµπορικά διαθέσιµο σύστηµα ανοσοκαθήλωσης σε gel 

αγαρόζης. 

Σε όλες τις περιπτώσεις, τα αποτελέσµατα των δύο διαδικασιών ανοσοκαθήλωσης ήταν σε πλήρη συµφωνία µεταξύ τους. 

Ευαισθησία 

Σειριακές αραιώσεις 4 παθολογικών δειγµάτων ορού µε µονοκλωνικά κλάσµατα αναλύθηκαν µε το HYDRAGEL 4 IF. ∆οκιµάστηκαν τόσο η 

χρώση µε όξινη ιώδη χρωστική όσο και η χρώση µε amidoblack. 

Τα αποτελέσµατα συνοψίζονται παρακάτω. 

Μονοκλωνικό κλάσµα Όριο ανίχνευσης (mg/dL) ∆είγµα Νο Τύπος Συγκ. (g/dL) 

HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF Όξινη ιώδης Amidoblack 1 γάµµα 1.09 12 12 κάππα 12 12 2 γάµµα 0.78 12 / λάµδα 12 / 3 άλφα 0.58 12 25 λάµδα 12 25 4 µι 0.34 12 12 

| | κάππα | | 12 | 12 | 

Ανάλογα µε τη θέση κίνησης του µονοκλωνικού κλάσµατος στην ηλεκτροφόρηση, το επίπεδο του πολυκλωνικού υποβάθρου στη ζώνη 

γάµµα και τη διαδικασία χρώσης, το όριο ανίχνευσης µπορεί να κυµαίνεται από 12 ως 25 mg/dL. 

- 91 -


ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 



ed., 1994, 397 pp. 

- 92 -


For en dansk version af dette pakningsvedlæg, henvend Dem til den danske distributør af produkter fra SEBIA : 

ILS ApS Gydevang 22A DK-3450 Allerød 

Tlf : +45 48 14 18 50 

Fax : +45 48 14 18 60 

e-mail : ils@ilsdk.dk 

- 93 - 

SEBIA INSTRUKTION - Dansk


SCHÉMAS / FIGURES 

Figure 1 Figure 2 

1 2 3 4 567 8 9 10 11 121314 15 


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

- 94 -



Figure 5 

Repère couleurs 

Colored Reference Guide 

ELP G A M K L ELP 


G A M K L ELP G A M K L 

Barrette antisérums 

Antisera Segment 

Bossage (Boss) 

Ergot (Pin) 

Support barrette 

Segment Holder 

Poignée (Flap) 

Encoche (notch) 

Puits (wells) 

Point d'appui central 

(Central Pressure Point) 

Ressorts (Springs) 

Réducteur de course 

Length Reducing Device 

Guide du masque dynamique 

Dynamic Mask Guide 

Poignée (Flap) 

- 95 -

7 

4 

8 

1 

5 

9 

2 

6 

7 

4 

1 

8 

5 

2 

9 

6 




1 

1 

2 









GEL 9 IF 

A M K L ELP G A M K L ELP G A M K L 

DRAGEL 9 IF 

G A M K L ELP G A M K L ELP G A M K L 

- 96 -

7 

4 

8 

5 

9 



Figure 12 

DRAGEL 9 IF 

G A M K L ELP G A M K L ELP G A M K L 

ELP G A M K L ELP G A M K L 

ELP G A M K L 

Figure 13 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

- 97 -

Benelux s.a. / n.v. 

Rue de la Fusée, 62 

Raketstraat, 62 

1130 Bruxelles / Brussel 

BELGIQUE / BELGIË 

GmbH 

Michael Henkel Straße 4-6 

36043 Fulda 

DEUTSCHLAND 

Hispania S.A. 

C/Sicilia, 394 

08025 Barcelona 

ESPAÑA 

Parc Technologique Léonard de Vinci 

Rue Léonard de Vinci 

CP 8010 Lisses 

91008 EVRY CEDEX - FRANCE 

ISO 13485 

Italia s.r.l. 

Via Antonio Meucci, 15/a 

Località Ponte a Ema 

50012 Bagno a Ripoli, Firenze 

ITALIA 

Inc. 

400-1705 Corporate Drive 

Norcross, Georgia 30093 

U.S.A.

HYDRAGEL 2 IF HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 4 IF HYDRAGEL 9 IF

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?