HYDRAGEL 9 BENCE JONES - Sebia Electrophoresis

HYDRAGEL 1 BENCE JONES 

Ref. 4321 


Ref. 4322 


Ref. 4324 


Ref. 4329 

Ref. 4383* 

Masque dynamique / Dynamic mask 

2005/03

HYDRAGEL 1, 2, 4 & 9 BENCE JONES - 2005/03 

UTILISATION 

Les kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES et HYDRAGEL 9 BENCE JONES permettent 

la détection et l’identification des protéines de Bence Jones, ou chaînes légères libres monoclonales (kappa ou lambda) dans l’urine et le sérum 

humains par immunofixation sur gel d’agarose dans le système semi-automatique HYDRASYS. 

Le système HYDRASYS permet de réaliser toutes les séquences jusqu’à l’obtention du gel prêt pour l’interprétation. Les protéines sont séparées en 

tampon alcalin (pH 9,1) puis immuno-précipitées par les antisérums des différentes spécificités : antisérum trivalent anti-chaînes lourdes [gamma, 

alpha et mu (Ig G, A et M)], anti-chaînes légères kappa et lambda (libres et liées) et anti-chaînes légères libres kappa et lambda. Après immunofixation, 

les protéines précipitées sont colorées par une solution de violet acide. L’excès de colorant est éliminé en milieu acide. 

Chaque gel d’agarose est prévu pour l’analyse de : 

- 1 échantillon pour le kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- 2 échantillons pour le kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- 4 échantillons pour le kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- 9 échantillons pour les kits HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

À usage in vitro exclusivement. 

PRINCIPE DU TEST 

Les immunoglobulines monoclonales, marqueurs d’une gammapathie, sont détectées lors de l’électrophorèse des protéines. Elles se présentent sous 

forme de bandes anormales situées essentiellement dans les zones bêta et gamma globulines. L’immunofixation effectuée à l’aide d’anticorps permet 

l’identification des bandes monoclonales dépistées par électrophorèse. 

Elle se réalise en quatre étapes : 

1. Séparation électrophorétique des protéines en gel d’agarose. 

2. Fixation et immunoprécipitation des protéines séparées par électrophorèse : application du fixateur et des antisérums sur le gel, au niveau des 

pistes de migration. Le fixateur et les antisérums diffusent dans le gel. Le fixateur précipite toutes les protéines et les anticorps précipitent les 

antigènes correspondants. 

3. Élimination des protéines non précipitées par pompage et lavage. Les protéines précipitées restent piégées dans le gel. 

4. Coloration des protéines et comparaison de la position des bandes immunoprécipitées avec celle des bandes anormales observées après 

électrophorèse des protéines. 

Pour identifier de façon précise la nature de la bande monoclonale, l’échantillon est testé sur six pistes. Après électrophorèse, la piste ELP sert de 

référence grâce à la précipitation par le fixateur de toutes les protéines présentes ; les cinq autres pistes permettent de caractériser la ou les bandes 

monoclonales grâce à l’antisérum trivalent (anti-chaînes lourdes gamma, alpha et mu) et les antisérums anti-chaînes légères kappa et lambda (libres 

et liées) et anti-chaînes légères libres kappa et lambda. 

Cette technique simple et rapide donne une image claire et très facilement interprétable. 

RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES ET HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES RÉF. N° 4321 KIT HYDRAGEL 2 BENCE JONES RÉF. N° 4322 KIT HYDRAGEL 4 BENCE JONES RÉF. N° 4324 KITS HYDRAGEL 9 BENCE JONES RÉF. N° 4329 RÉF. N° 4383* Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels 10 gels 80 gels Mèches tamponnées (prêtes à l'emploi) 10 sachets de 2 10 sachets de 2 80 sachets de 2 Colorant violet acide (solution concentrée) 1 fl. de 75 ml 1 fl. de 75 ml 8 fl. de 75 ml Fixateur (prêt à l’emploi) 1 fl. de 2,9 ml Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes lourdes gamma, alpha, mu (trivalent) (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes légères kappa (libres et liées) (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes légères lambda (libres et liées) (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes légères libres kappa (prêtes à l’emploi) Immunoglobulines totales de mammifère 1 fl. de 2,0 ml anti-chaînes légères libres lambda (prêtes à l’emploi) Applicateurs (prêts à l’emploi) 1 boîte de 10 2 boîtes de 10 24 boîtes de 10 3 boîtes de 10 Barrettes antisérums (prêtes à l’emploi) 1 boîte de 10 1 boîte de 10 8 boîtes de 10 Papiers-filtres fins 1 sachet de 10 1 sachet de 10 8 sachets de 10 

| Papiers-filtres épais | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 8 sachet de 10 | 

* HYDRAGEL 9 BENCE JONES MAXI-KIT 

NOTE : Le fixateur et les antisérums sont commercialisés séparément sauf pour le MAXI-KIT (voir RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS). 

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS 

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. 

LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. 

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NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français

1. GELS D’AGAROSE 


Préparation 

Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 8 g/l ; tampon tris-barbital, pH 9,1 ± 0,1 ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les gels contiennent 0,31 % de barbital et 0,34 % de barbital sodé. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! 

Utilisation 

Support pour l’électrophorèse et l’immunofixation des protéines. 

Conservation, stabilité et signes de détérioration 

Les gels peuvent être conservés à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date 

d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet du gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur 

le devant du kit doit être pointée vers le haut). Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. Éviter toute variation 

brutale de température. 

NE PAS CONGELER. 

Éliminer le gel dans les cas suivants : 

(I) apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ; 

(II) apparition de bactéries ou de moisissures ; 

(III) présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation). 

2. MÈCHES TAMPONNÉES 

Préparation 

Les mèches en éponge tamponnées sont prêtes à l’emploi. Chaque mèche tamponnée contient : tampon tris-barbital, pH 9,1 ± 0,3 ; azoture de 

sodium ; composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les mèches tamponnées contiennent 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sodé et 0,30 % d’azoture de sodium. Ne pas avaler ! 

En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! L’azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas 

de contact avec des acides, du plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des mèches, éviter tout contact avec ces produits. 

Utilisation 

Les mèches en éponge tamponnées jouent un rôle de réservoir de tampon pour l’électrophorèse et assurent le contact entre le gel et les électrodes. 


Les mèches tamponnées peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Elles doivent être conservées horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet des mèches tamponnées. NE PAS CONGELER. 

Éliminer les mèches tamponnées si le sachet est ouvert ou si les mèches sont sèches. 

3. COLORANT VIOLET ACIDE 

Préparation 

Le flacon de violet acide concentré doit être complété à 300 ml avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; violet acide, 2 g/l ; éthylène-glycol, 3,25 % ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique et immunofixation des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. La solution diluée 

est stable pendant 6 mois. 

4. COFFRET D’ANTISÉRUMS ET DE FIXATEUR (Réf. N° 4383) 

4.1. ANTISÉRUMS 

Préparation 

Les antisérums sont prêts à l’emploi. Ils contiennent des immunoglobulines totales de mammifère anti-humaines. Chaque réactif a une couleur 

spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. La couleur est rappelée sur les étiquettes des flacons. 

Lorsque les antisérums présentent un léger trouble ou précipité, il suffit généralement de mettre les flacons à température ambiante environ 

10 minutes avant leur utilisation. Si le trouble persiste, il ne perturbe en rien la réaction immunologique. Dans le cas de précipité insoluble, il est 

recommandé de centrifuger les antisérums pendant 5 minutes à 3000 rpm. 

Utilisation 

Pour l’immunoprécipitation des protéines séparées par électrophorèse. 

Les antisérums peuvent être d’origines animales différentes. Il est donc impératif de ne pas mélanger deux flacons différents d’antisérums, y compris 

de la même spécificité, et de TOUJOURS changer l’embout de la pipette lors d’un changement de flacon. 

IMPORTANT : Pour éviter toute contamination entre les différents réactifs, il est impératif de remettre chaque bouchon sur le flacon correspondant 

après toute utilisation. 


Les antisérums doivent être conservés au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur les 

étiquettes des flacons d’antisérum. 

NOTE : Durant le transport, les antisérums peuvent rester à température ambiante (entre 15 et 30 °C) pendant 15 jours sans que cela n’affecte la 

qualité du test. 

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4.2. FIXATEUR 

Préparation 

Le fixateur est prêt à l’emploi. Il contient : une solution acide et des composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des 

performances optimales. 

Il a une couleur spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. 

Utilisation 

Pour la fixation des protéines séparées par électrophorèse sur la piste référence (ELP). 

IMPORTANT : Pour éviter toute contamination entre les différents réactifs, il est impératif de remettre chaque bouchon sur le flacon correspondant 

après toute utilisation. 


Le fixateur peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette 

du flacon de fixateur. 

Il ne doit pas y avoir de précipité. 

5. APPLICATEURS 

Utilisation 

Applicateurs prédécoupés, à usage unique pour le dépôt des échantillons. 

Conservation 

Les applicateurs doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

6. BARRETTES ANTISÉRUMS 

Utilisation 

Barrettes colorées, à usage unique, pour le dépôt du fixateur et des antisérums pour l’immunofixation. 

ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes contenant des antisérums. 

7. PAPIERS-FILTRES FINS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption de l’excès de liquide à la surface du gel avant l’application des échantillons. 

Conservation 

Les papiers-filtres fins doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

8. PAPIERS-FILTRES ÉPAIS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption des protéines non précipitées du gel après l’étape d’immunofixation. 

Conservation 

Les papiers-filtres épais doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS 

1. COFFRET D’ANTISÉRUMS ET DE FIXATEUR (pour les kits 4321, 4322, 4324 et 4329) 

Le coffret Antisérums et Fixateur GAM, K, L (anti-chaînes lourdes gamma, alpha et mu, anti-chaînes légères kappa, libres et liées, et anti-chaînes 

légères lambda, libres et liées) pour immunofixation (SEBIA, référence N° 4335) contient trois flacons d’antisérums et un flacon de fixateur de 1 ml 

chacun, spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec le masque dynamique. 

1.1. ANTISÉRUMS 

Voir paragraphe précédent 4.1. 

1.2. FIXATEUR 


2. COFFRET D’ANTISÉRUMS ANTI-CHAÎNES LÉGÈRES LIBRES (pour les kits 4321, 4322, 4324 et 4329) 

Le coffret Antisérums, chaînes légères libres K et L pour immunofixation (SEBIA, référence N° 4336), contient deux flacons d’antisérums de 1 ml 

chacun, spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec le masque dynamique. 


3. DÉCOLORANT 

Préparation 

Chaque flacon de décolorant concentré (SEBIA, référence N° 4540 : 10 flacons de 100 ml chacun) doit être dilué au 1/1 000 avec de l’eau distillée 

ou déminéralisée, il permet d'obtenir 100 litres de solution décolorante. 

Prélever par quantité de 5 ml et compléter à 5 litres avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution décolorante contient : acide citrique, 0,5 g/l. 

Utilisation 

Pour la décoloration, c’est-à-dire l’élimination de l’excès de colorant après coloration du gel. 

Pour le rinçage de la cuve de coloration après lavage. 

Pour neutraliser l’acidité du décolorant, mettre dans le flacon de vidange vide, 15 ml de soude à 50 % (solution du commerce). 


Le décolorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou 

sur l’étiquette du flacon de décolorant. NE PAS CONGELER. Le décolorant dilué est stable pendant 1 semaine à température ambiante, en flacon 

fermé. 

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Éliminer le décolorant dilué s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

En cas de conservation prolongée (au delà d’une semaine) de la solution diluée, ajouter 50 µl/l de ProClin 300 pour prévenir toute prolifération microbienne. 

Le décolorant dilué contenant du ProClin est stable en flacon fermé à température ambiante ou au réfrigérateur jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le 

kit ou sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

4. SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS 

Préparation 

Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentrée (SEBIA, référence N° 4541 : 10 flacons de 80 ml chacun) doit être complété à 5 litres 

avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution de lavage contient : tampon alcalin, pH 8,8 ± 0,3 ; azoture de sodium. 

ATTENTION : La solution de lavage concentrée contient 0,625 % d'azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! L'azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides, du 

plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des solutions, laver abondamment avec une grande quantité d’eau. 

Utilisation 

Pour le lavage du gel après immunofixation afin d’éliminer les protéines résiduelles non précipitées. 

Pour le lavage périodique de la cuve de coloration de l’HYDRASYS : par exemple pour une utilisation journalière effectuer un lavage hebdomadaire 

de la cuve de coloration. 

Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d’utilisation. 


Les solutions de lavage concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur dans un flacon fermé. Elles sont 

stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. 

Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

5. EAU PHYSIOLOGIQUE 

Préparation 

Solution de NaCl 0,15 M (9 g/l) dans l’eau distillée ou déminéralisée. 

Utilisation 

Pour la dilution si nécessaire des échantillons. 


La solution d’eau physiologique peut être conservée à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Éliminer la solution après 3 mois ou s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. Pour une 

conservation prolongée, ajouter 1 g/l d’azoture de sodium. 

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES 

1. Système HYDRASYS SEBIA, référence N° 1210 ou N° 1211. 

2. Micropipetteur, manuel ou automatique, tel que HYDRAplus SEBIA, référence N° 1215, pour le chargement des applicateurs ou des barrettes 

antisérums. 

3. Chambre humide, référence N° 1270, fournie avec le système HYDRASYS. 

4. Bidons plastiques fournis avec le système HYDRASYS. 

5. Barre métallique du masque SEBIA, fournie avec le système HYDRASYS. 

6. Masque dynamique, SEBIA, référence N° 1255. 

7. Pipettes de 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl et 200 µl. 

ÉCHANTILLONS À ANALYSER 

Prélèvement et conservation des échantillons 

• L’analyse se fait sur urines fraîches. Elles peuvent être conservées moins d’une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations 

prolongées, congeler les urines ; les urines congelées sont stables au minimum 1 mois. La conservation des urines congelées est améliorée par 

addition à l’échantillon de tampon HEPES 0,1 M (pH 6,75) et / ou d’azoture de sodium 0,2 g/l. Les urines décongelées peuvent donner, au point de 

dépôt, une trace due à la dénaturation de protéines. 

IMPORTANT : Ne pas utiliser de conservateur contenant de l’acide borique. 

• Si l’analyse se fait sur sérums, ils doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire d’analyses cliniques. Les échantillons 

peuvent être conservés moins d’une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations prolongées, congeler les échantillons ; les 

échantillons congelés sont stables au minimum 1 mois. Les échantillons décongelés peuvent donner, au point de dépôt, une trace dûe à la 

dénaturation de protéines ou de lipoprotéines. 

Préparation des échantillons 

Urines 

L’analyse est réalisée sur des urines non concentrées. Dans ces conditions, la limite de détection d’une protéine de Bence Jones est de l’ordre de 10 

à 50 mg/l. Si l’on recherche une meilleure sensibilité, il conviendra de concentrer les urines en conséquence (20 à 100 fois). 

NOTE : En cas d’urines troubles (concentrées ou non), il est recommandé d’éliminer les particules en centrifugeant les échantillons (pendant 

10 minutes à 3000 rpm) ou par filtration (sur filtre de 0,45 µm) afin d’obtenir une bonne diffusion sur les applicateurs. 

Sérums 

Pour faire la recherche simultanée de protéines de Bence Jones dans l’urine et le sérum correspondant, diluer le sérum dans de l’eau physiologique 

ou dans le diluant pour immunofixation prédilué au 1/4 (1 volume de diluant + 3 volumes d’eau distillée ou déminéralisée) au 1/10 pour les pistes ELP, 

GAM, K et L (1 volume de sérum + 9 volumes de diluant prédilué ou d’eau physiologique) et au 1/3 (1 volume de sérum + 2 volumes de diluant prédilué 

ou d’eau physiologique) pour les pistes Kl et Ll. 

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NOTE : Si le taux d’immunoglobulines est inférieur à 5 g/l, il est recommandé de moins diluer le sérum dans de l’eau physiologique ou dans le diluant 

pour immunofixation, prédilué au 1/4. 

Par exemple, diluer le sérum au 1/5 pour les pistes ELP, GAM, K et L (1 volume de sérum + 4 volumes de diluant prédilué ou d’eau physiologique) et 

au 1/2 (1 volume de sérum + 1 volume de diluant prédilué ou d’eau physiologique) pour les pistes Kl et Ll. 

Pour l’analyse des Ig D et/ou des Ig E, appliquer les mêmes dilutions que pour les chaînes légères libres et liées. 

IMPORTANT : 

• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène donne une bande proche du point de dépôt. Cette bande peut fausser l’interprétation du test (confusion 

avec une gammapathie). 

• Certaines urines contiennent une concentration importante de sels. Il s’ensuit une déformation du gel au cours de la migration qui risque de conduire 

à une perturbation des profils après immunofixation. Il convient d’éliminer cet excès de sels par une dialyse. 

• Des urines dégradées (protéolysées) peuvent donner une réaction positive avec les anti-chaînes légères libres. Une protéinurie avec paraprotéine 

sérique passant dans les urines peut donner dans ce cas une bande monoclonale avec le trivalent, une bande monoclonale avec un anti-chaînes 

légères libres et liées et une bande avec un anti-chaînes légères libres. 

• La sensibilité de détection de protéines de Bence Jones à l’aide d’antisérums anti-chaînes légères libres est affectée par leur polymérisation, 

masquant les épitopes concernés. 

Quand la présence de protéines de Bence Jones est suspectée, traiter les échantillons comme suit : mélanger 100 µl d’urine et 5 µl de 

β-mercaptoéthanol préalablement dilué au 1/10 dans de l’eau physiologique. 

TECHNIQUE 

Le système HYDRASYS est un instrument multiparamétrique semi-automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les étapes suivantes : 

application des échantillons, migration électrophorétique, incubation avec les réactifs, séchage, lavage, coloration, décoloration et séchage final. 

Les étapes manuelles sont les suivantes : préparation des échantillons et des gels, dépôt des réactifs et lancement des séquences automatiques. 

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS D’HYDRASYS. 

I. PRÉPARATION DE LA MIGRATION 

1. Mettre HYDRASYS sous tension. 

2. Poser un applicateur pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 échantillons), deux applicateurs pour 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 échantillons) ou 3 applicateurs pour HYDRAGEL 9 BENCE JONES, à plat sur la paillasse, numérotations 

(puits) vers le haut (Fig. 1). 

- Déposer 10 µl d’échantillon dans chaque puits. Le chargement de chaque applicateur ne doit pas excéder 2 minutes. 

| PISTES | 

PUITS DE DÉPÔT : ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ÉCHANTILLON N° 1 OU 3 2 3 4 5 6 7 ÉCHANTILLON N° 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES ÉCHANTILLON N° 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 ÉCHANTILLON N° 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| ÉCHANTILLON N° 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANT : Pour l’analyse sur HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, ne pas utiliser les puits de l’applicateur numérotés 1, 8 et 15 ; il est 

recommandé de les identifier au préalable à l’aide d’un marqueur pour éviter d’y déposer l’échantillon par erreur. 

- Placer l’(es) applicateur(s) dans la chambre humide, dents vers le haut (en manipulant l’(es) applicateur(s) par la protection en plastique). 

- Laisser diffuser 5 minutes après le dépôt du dernier échantillon. 

Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d’utilisation. 

3. Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

ATTENTION : Ne pas fermer le capot de l’appareil si les chariots sont relevés ! 

4. Sélectionner dans le menu le programme de migration "1 BJ MS/MD" pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES, " 2/4 BJ-UP MS/MD " pour 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ou "9 BJ MD" pour HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

5. Sortir les mèches tamponnées de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques. 

Fixer les mèches sur le chariot porte-électrodes à l'aide des languettes perforées. La face de la mèche fixée sur la languette vient en contact 

avec l'électrode (Fig. 2). 

6. Sortir le gel de son emballage. 

- Éliminer rapidement l’excès de liquide en surface, en effleurant le gel avec un papier-filtre fin. 

ATTENTION : Ne surtout pas laisser le papier-filtre en contact prolongé avec le gel pour éviter sa déshydratation. 

- Déposer 120 µl d'eau distillée ou déminéralisée pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou 200 µl pour HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 et 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, sur le plateau de migration dans le tiers inférieur du cadre sérigraphié. 

- Placer le gel (face gel orientée vers le haut) sur le plateau contre la barrette, à l'intérieur du cadre sérigraphié (Fig. 3). 

- Donner une forme concave au gel (Fig. 3) et le dérouler sur le plateau jusqu'au contact de la goutte d'eau qui doit se répartir sur toute la 

largeur du gel. Relever légèrement le gel pour éliminer les bulles d'air éventuellement piégées puis dérouler totalement le gel au contact du 

plateau. La goutte d’eau doit s’étaler sous toute la surface du film. 

7. Abaisser l'ensemble des chariots jusqu'en butée. Dans cette position, les mèches tamponnées ne touchent pas le gel. NE PAS FORCER LA 

DESCENTE DES CHARIOTS. 

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8. Sortir l’(es) applicateur(s) de la chambre humide en le(s) manipulant par la protection plastique. 

- Éliminer la protection des dents. 

- Placer l'(es)applicateur(s) sur le porte-applicateurs : 

- HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 échantillons) : position N° 6, 

- HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 échantillons) : positions N° 3 et 9, 

- HYDRAGEL 9 BENCE JONES : positions N° 2, 6 et 10. 

IMPORTANT : Les numérotations de l'applicateur sont toujours dirigées vers l'opérateur (Fig. 4). 

Pour une parfaite reproductibilité de la zone de dépôt, amener les applicateurs en butée sur le porte-applicateurs, par exemple du côté gauche. 

9. Fermer le capot du module de migration 

10. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

IMPORTANT : Ne rien placer à proximité immédiate de la grille de ventilation (à droite de l'appareil). 

MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente des chariots porte-électrodes et porte-applicateurs pour amener les mèches tamponnées et l’(es) applicateur(s) au contact du gel. 

• Remontée du chariot porte-applicateurs. 

• Migration à 10 W constants pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES et à 20 W constants pour HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, jusqu’à 42 Vh 

accumulés (pendant environ 9 minutes) et à 20 W constants jusqu’à 36 Vh accumulés (pendant environ 7 minutes) pour HYDRAGEL 9 BENCE 

JONES, à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier. 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. 

À l’écran, s’affiche le message : " AS". 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

II. PRÉPARATION DE L’IMMUNOFIXATION 

Les différents éléments du masque dynamique (repère couleurs, barrette antisérums, support barrette, guide et réducteur de course) sont présentés 

sur la figure 5. 

Pendant la migration, préparer le masque dynamique en procédant comme suit : 

1. Poser le guide du masque dynamique à plat sur la paillasse. 

IMPORTANT : L’analyse d’un ou de deux échantillons à l’aide du masque dynamique nécessite l’utilisation du réducteur de course qui doit 

être placé sur le guide du masque dynamique. 

2. Positionner une barrette antisérums sur le support barrette (Fig. 6) : 

- Placer les bossages de la barrette, inclinée à 45°, contre les ressorts du support barrette. 

- En prenant appui contre ces ressorts, faire pivoter la barrette pour la fixer dans les encoches du support barrette. 

ATTENTION : Vérifier que la barrette est fixée correctement sur le support barrette : les ergots situés aux extrémités de la barrette 

doivent être bien enclenchés dans les deux encoches du support barrette. 

3. Placer l’ensemble barrette – support barrette sur le guide du masque dynamique (Fig. 7) (équipé d’un réducteur de course pour l’analyse d’1 

ou de 2 échantillons) puis placer le repère couleurs qui indique les emplacements de dépôt des réactifs, correspondant à la technique, sur le 

support barrette devant les puits de la barrette antisérums (Fig. 8). 

4. Déposer les réactifs, dont la couleur est rappelée dans le tableau ci-dessous, sur la barrette antisérums : 

- Barrette 6 puits pour HYDRAGEL 1 BENCE JONES : 8 µl par puits, 

- Barrette 15 puits pour HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 : 8 µl par puits pour l’analyse de 2 échantillons, 

12 µl par puits pour l’analyse de 4 échantillons, 

- Barrette 18 puits pour HYDRAGEL 9 BENCE JONES : 8 µl par puits. 

PISTE DÉSIGNATION COULEUR ELP solution de fixation jaune GAM antisérum trivalent violet K antisérum anti-chaînes légères kappa (libres et liées) vert clair L antisérum anti-chaînes légères lambda (libres et liées) bleu clair Kl antisérum anti-chaînes légères libres kappa orange 

| Ll | antisérum anti-chaînes légères libres lambda | rouge | 

NOTE : Pour éviter les inversions, les réactifs sont colorés et la couleur de la piste à remplir est rappelée sur le repère couleurs de dépôt des 

réactifs. 

IMPORTANT : Pour l’analyse sur HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, ne pas utiliser les puits de la barrette antisérums en position 1, 8 et 15. 

Lors du prélèvement des réactifs, ne pas piéger de bulles d'air dans l'embout de la pipette. 

Pour déposer les réactifs (Fig. 9) : 

- tenir la pipette inclinée, 

- en appliquant légèrement l’embout sur le bord de l’orifice, déposer la goutte de réactif dans le puits. 

5. Retirer le repère couleurs. 

III. IMMUNOFIXATION 

1. Ouvrir le capot du module de migration. 

2. Retirer l’(es) applicateur(s) et le(s) jeter. 

3. Relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes, retirer les mèches par les languettes et les jeter. 

- Retirer les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

- Nettoyer les électrodes avec un papier ouaté humide. 

- Laisser le gel en place dans le module de migration. 

- 6 -


4. Mettre en place le masque dynamique de dépôt des réactifs en procédant comme suit (Fig. 10) : 

- fixer la tige destinée à l'accrochage du masque dynamique, à l'aide des plots de fixation. (Une fois mise en place, cette tige peut être laissée 

sur l'HYDRASYS) ; 

- placer les encoches du masque dans les repères de la tige en tenant le masque par la poignée ; 

- faire pivoter le masque pour l'appliquer sur le plateau de l’HYDRASYS. 

IMPORTANT : Régler au préalable la position du masque pour obtenir une parfaite correspondance entre les profils électrophorétiques du gel 

et les pistes de révélation du masque. 

5. Caler le support-barrette sur le guide au plus bas, dirigé vers l’opérateur. Tout en maintenant l’ensemble du support-barrette par la poignée 

située à droite, exercer une pression sur le point d’appui central, pour amener la barrette en contact avec le gel. Relacher cette pression, les 

réactifs s’étalent alors sous chacune des pistes (Fig. 11). 

6. Immédiatement, à l’aide de la poignée située à droite, répartir les réactifs en effectuant un aller-retour du masque dynamique au-dessus du 

gel d’un mouvement lent et régulier (environ 5 secondes) (Fig. 12). 

ATTENTION : Pendant cette opération, le masque ne doit être tenu que par la poignée sans toucher au guide. Ne jamais appuyer une 

seconde fois : les réactifs risquent de se mélanger. 

7. Retirer l’ensemble guide – masque dynamique : 

- tenir le guide par la poignée ; 

- faire pivoter le guide autour de la tige et le décrocher ; 

- décrocher la barrette du support barrette et la jeter. 

ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes contenant des antisérums. 

- Un léger excès de réactifs subsiste sur le gel sous la forme d’une goutte au niveau des orifices des puits quand le masque est retiré, sans 

aucun effet sur les résultats. 

8. Fermer le capot du module de migration. 

9. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

À l'écran, s'affiche le message : "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Incubation à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 10 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. 

À l'écran, s'affiche le message : " PAP.". 

NOTE : Pendant la séquence d'incubation, le capot du module de migration reste verrouillé. 

IV. POMPAGE DU GEL 


2. Appliquer une feuille de papier-filtre épais sur le gel : 

- incliner la feuille de papier-filtre épais d'environ 45° et aligner le bord inférieur de la feuille de papier-filtre sur la barrette de positionnement 

du gel ; 

- faire pivoter la feuille de papier-filtre et l'appliquer sur le gel. 

IMPORTANT : Bien appuyer sur toute la surface de la feuille de papier-filtre pour assurer un contact parfait entre le gel et le papier. 


4. Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

POMPAGE DU GEL - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Pompage à 40 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 3 minutes. 

À l'écran, s'affiche le message : "[POMPAGE]". 

• Un signal sonore (bip) retentit. 

À l'écran, s'affiche le message : "❊ PAP.". 

V. SÉCHAGE DU GEL 

1. Ouvrir le capot. 

2. Retirer le papier-filtre en laissant le film en place. 


4. Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

SÉCHAGE DU GEL - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Séchage à 50 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 6 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. Le plateau reste à 50 °C jusqu'à l'ouverture du capot. 

NOTE : Pendant toute la séquence de séchage, le capot du module de migration reste verrouillé. 

VI. PRÉPARATION DES SÉQUENCES DE LAVAGE, COLORATION ET DÉCOLORATION DU GEL 


2. Récupérer le film sec pour les séquences suivantes. 

3. Placer le film sur le porte-film, face gel vers l'opérateur, en procédant comme suit (Fig. 13) : 

- ouvrir le porte-film ; 

- le poser à plat sur la paillasse ; 

- positionner le gel dans les gorges des colonnettes ; 

- refermer le porte-film ; 

- s'assurer que le film soit bien enfoncé dans les gorges des deux colonnettes. 

4. Introduire le porte-film dans le module de traitement / coloration du gel. 

IMPORTANT : Avant de lancer un cycle de coloration, s'assurer que : 

- le flacon de solution de lavage contienne 400 ml de solution de lavage ; 

- le flacon de colorant contienne 300 ml de colorant ; 

- 7 -


- le flacon de décolorant contienne 1 litre de décolorant minimum ; 

- le flacon de vidange soit vide. 

Pour le branchement des canaux réactifs : se référer aux instructions affichées sur l’écran de l’appareil (sélectionner la touche : VISU 

CANAUX). 

IMPORTANT : Ne pas oublier d’obturer les canaux non utilisés. 

5. Sélectionner le programme de coloration "IF ACID VIOLET" dans le menu. 

Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à droite du clavier). 

Pendant toutes les séquences de coloration, décoloration et séchage, le système reste verrouillé. 

Après refroidissement de la cuve, un signal sonore (bip) retentit et le système se débloque (la ventilation se maintient jusqu’à la récupération 

du porte-film). 

NOTES : 

- La température du plateau continue à descendre et atteint 20 °C en 5 minutes environ. À 20 °C, une nouvelle séquence de migration peut être 

lancée. 

- Remettre les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

- Nettoyer le plateau avec un papier ouaté humide. 

VII. FIN DU TRAITEMENT DU GEL 

1. Sortir le porte-film du compartiment ; ouvrir le porte-film et retirer le gel sec. 

2. Si nécessaire, nettoyer le dos du gel (support plastique) avec un papier ouaté humide. 

NOTE : Pour les gels à rangées multiples (2 ou 3), les longueurs de migration peuvent être sensiblement différentes, sans aucune conséquence 

sur les résultats. 

RÉSULTATS 

Interprétation 

La présence d’une protéine de Bence Jones est caractérisée par une bande monoclonale révélée par : 

- un anti-chaînes légères (libres et liées) kappa ou lambda (pistes K ou L), 

- un anti-chaînes libres kappa ou lambda (pistes Kl ou Ll), 

et l’absence de bande monoclonale avec l’antisérum trivalent (piste GAM). 

Une paraprotéine sérique passant dans les urines avec absence de protéine de Bence Jones est caractérisée par : 

- une bande monoclonale révélée avec le trivalent, 

- la même bande, révélée avec un anti-chaînes légères kappa ou lambda (libres et liées), et non détectée avec l’antisérum anti-chaînes 

légères libres correspondant. 

Une paraprotéine sérique associée à une paraprotéine de Bence Jones est caractérisée par : 

- une bande monoclonale révélée avec le trivalent, 

- deux bandes révélées avec un ou les deux anti-chaînes légères kappa et/ou lambda (libres et liées), 

- une bande révélée avec un anti-chaînes légères libres kappa ou lambda (cette bande ne correspondant généralement pas à la position de 

la fraction révélée avec le trivalent). 

Une protéine de Bence Jones à différents états de polymérisation est caractérisée par : 

- l’absence de révélation par le trivalent, 

- plusieurs bandes révélées par un anti-chaînes légères kappa ou lambda (libres et liées), 

- les mêmes bandes révélées par l’anti-chaînes légères libres correspondant. 

Interférences et limites 

L’utilisation d’antisérums autres que ceux spécifiques à la technique d’immunofixation réalisée avec le masque dynamique peut affecter la qualité des 

résultats. 

Compte tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne 

peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales. 

Assistance technique 

Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux. 

Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès 

du Service Technique SEBIA. 

PERFORMANCES 

Reproductibilité intra-essai 

Technique HYDRAGEL 4 BENCE JONES 

Migration de trois (3) échantillons pathologiques : Deux urines à protéines de Bence Jones (chaînes légères libres kappa et lambda) et un sérum 

présentant une chaîne légère libre lambda. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 2 lots différents de gels HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 à raison de 

4 analyses par gel, suivies d’une coloration au violet acide. 


Migration de trois (3) échantillons pathologiques : Deux urines à protéines de Bence Jones (chaînes légères libres kappa et lambda) et un sérum 

présentant une chaîne légère libre lambda. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 2 lots différents de gels HYDRAGEL 9 BENCE JONES à raison de 

9 analyses par gel, suivies d’une coloration au violet acide. 

- 8 -


Tous les échantillons analysés donnent les mêmes résultats pour les 2 lots de gels testés. Les profils obtenus sont caractéristiques pour chacun des 

échantillons testés. 

Dans les techniques HYDRAGEL 4 BENCE JONES et HYDRAGEL 9 BENCE JONES, l’immunofixation ne détecte qu’une bande monoclonale 

correspondant à une protéine de Bence Jones, de façon reproductible pour chacun des trois échantillons pathologiques. 

Reproductibilité inter-essais 


Migration de quatre (4) échantillons pathologiques différents, trois urines et un sérum, à protéines de Bence Jones, chaînes légères libres kappa ou 

lambda. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 10 gels HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 de 3 lots différents, suivies d’une 

coloration au violet acide. 


Migration de neuf (9) échantillons pathologiques différents, six urines et trois sérums à protéines de Bence Jones, chaînes légères libres kappa ou 

lambda. 

La migration et l’immunofixation de chaque échantillon ont été réalisées sur 10 gels HYDRAGEL 9 BENCE JONES de 3 lots différents, suivies d’une 

coloration au violet acide. 

Dans les deux techniques, tous les échantillons analysés donnent les mêmes résultats pour les 3 lots de gels testés. Les profils obtenus sont 

caractéristiques des échantillons analysés et l’immunofixation met en évidence les bandes monoclonales attendues de façon reproductible pour tous 

les échantillons. 

Exactitude 

Vingt échantillons différents de sérums pathologiques à protéines de Bence Jones et trente six urines, dont cinq urines normales, ont été testés en 

parallèle dans la technique HYDRAGEL 4 BENCE JONES et sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce. 

Pour les deux techniques, les résultats obtenus montrent une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse et les mêmes bandes sont mises 

en évidence pour tous les échantillons pathologiques analysés, avec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 100 % par rapport à cette dernière 

technique, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986). 

Sensibilité 

Deux urines à protéines de Bence Jones ont été diluées en série et analysées dans la technique HYDRAGEL 4 BENCE JONES à l’aide des 

antisérums anti-kappa et anti-lambda et anti-kappa libre et anti-lambda libre. 

La limite de détection minimum des chaînes légères libres kappa et lambda obtenue est de l’ordre de 3 mg/l avec les antisérums anti-kappa et antilambda 

et de l’ordre de 12 mg/l avec les antisérums anti-chaînes légères libres correspondants. 

Cependant, il est à noter que selon la structure et la nature de la chaîne légère libre, cette sensibilité peut varier tout en restant dans une limite 

inférieure ou égale à 50 mg/l (pour une détection par l’antisérum anti-kappa libre ou anti-lambda libre). 

BIBLIOGRAPHIE 

(1) Didier Le Carrer, "Électrophorèse des Protéines et Immunofixation : Guide d’interprétation", Laboratoires SEBIA, 1994, 120 pp, Ed. Hatier - Paris. 

(2) DF Keren, "High Resolution Electrophoresis and Immunofixation, Techniques and Interpretation", Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

1994, 397 pp. 

(3) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. 

Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. 

- 9 -


INTENDED USE 

The HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES and HYDRAGEL 9 BENCE JONES kits are 

designed for qualitative detection and identification of Bence Jones proteins, monoclonal free light chains kappa or lambda, in human urine or serum, 

by immunofixation electrophoresis. The detection of Bence Jones proteins serves as a qualitative aid in the identification of monoclonal gammopathies. 

Each agarose gel is intended to run : 

- one sample in the HYDRAGEL 1 BENCE JONES kit, 

- two samples in the HYDRAGEL 2 BENCE JONES kit, 

- four samples in the HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit, 

- nine samples in the HYDRAGEL 9 BENCE JONES kits. 

For In Vitro Diagnostic Use. 

PRINCIPLE OF THE TEST 

Abnormal bands in electrophoretic patterns, primarily those in the beta-globulins and gamma-globulins zones, are always suspect of being monoclonal 

proteins and therefore an indication of gammopathies. To identify these abnormal bands, the technique of immunofixation is applied. 

Immunofixation electrophoresis allows the proteins to be anchored in situ after electrophoresis, by forming insoluble complexes with corresponding 

antisera. 

The Bence Jones protein test is performed in conjunction with the semi-automated HYDRASYS system to carry out all the steps needed to obtain gels 

ready for interpretation : 

1. The sample is simultaneously electrophoresed in six tracks on alkaline buffered agarose gel. 

2. After the electrophoresis, one track (ELP) is fixed to serve as a reference showing electrophoretic pattern of the sample’s proteins. The remaining 

five tracks are immunofixed with respective antisera : trivalent anti-heavy chains (gamma, alpha and mu), anti kappa free and bound light chains, 

anti lambda free and bound light chains, anti kappa free light chain and anti lambda free light chain. 

3. The unprecipitated, soluble proteins are removed from the gel by blotting and washing. Precipitin of the antigen-antibody complex is trapped within 

the gel matrix. 

4. The precipitated proteins are visualized by staining with acid violet. The excess of stain is removed with an acidic solution. 

5. The immunoprecipitated bands are then compared with corresponding abnormal bands seen in the electrophoretic pattern of the sample and 

identified from the reaction, or lack of, with individual antisera. 

This simple and fast technique gives a clear and easily interpretable picture. 

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES AND HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT PN 4321 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT PN 4322 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT PN 4324 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS PN 4329 PN 4383* Agarose Gels (ready to use) 10 gels 10 gels 80 gels Buffered Strips (ready to use) 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each 80 packs of 2 each Acid Violet Stain (stock solution) 1 vial, 75 mL 1 vial, 75 mL 8 vials, 75 mL each Fixative Solution (ready to use) 1 vial, 2.9 mL Mammalian immunoglobulins anti-human gamma, alpha, 1 vial, 2.0 mL mu heavy chains (trivalent) (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human kappa free 1 vial, 2.0 mL and bound light chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human lambda free 1 vial, 2.0 mL and bound light chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human kappa free 1 vial, 2.0 mL light chains (ready to use) Mammalian immunoglobulins anti-human lambda free 1 vial, 2.0 mL light chains (ready to use) Applicators (ready to use) 1 pack of 10 2 packs of 10 each 24 packs of 10 each 3 packs of 10 each Antisera segments (ready to use) 1 pack of 10 1 pack of 10 8 packs of 10 each Filter Papers - Thin 1 pack of 10 1 pack of 10 8 packs of 10 each 

| Filter Papers - Thick | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 8 packs of 10 each | 

(*) HYDRAGEL 9 BENCE JONES MAXI-KIT 

NOTE : The fixative solution and the antisera are supplied separately from the kits except for MAXI-KIT (See REAGENTS REQUIRED BUT NOT 

SUPPLIED). 

FOR OPTIMAL RESULTS 

All reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions. 

PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY. 

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SEBIA INSTRUCTIONS - English

1. AGAROSE GELS 


Preparation 

Agarose gels are ready to use. Each gel contains: agarose, 0.8 g/dL, tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.1 ; additives, nonhazardous at concentrations used, 

necessary for optimum performance. 

WARNING: Agarose gels contain 0.31 % barbital and 0.34 % sodium barbital. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! 

Use 

Support medium for protein electrophoresis and immunofixation. 

Storage, stability and signs of deterioration 

Store the gels horizontally in the original protective packaging at room temperature (15 to 30 °C) or refrigerated (2 to 8 °C). (The arrow on the front of 

the kit box must be pointing upwards). They are stable until the expiration date indicated on the kit package and the gel package labels. 

Avoid storage close to a window or to a heat source. Avoid important variation of temperature during storage. 

DO NOT FREEZE. 

Discard when: 

(i) crystals or precipitate form on the gel surface or the gel texture becomes very soft (all these result from freezing the gel), 

(ii) bacterial or mold growth is indicated, 

(iii) abnormal quantity of liquid is present in the gel box (as a result of buffer exudation from the gel due to improper storage conditions). 

2. BUFFERED STRIPS 

Preparation 

Buffered sponge strips are ready to use. Each contains: tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.3 ; sodium azide ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: The buffer in the strips contains 0.92 % barbital, 1.03 % sodium barbital and 0.30 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested 

consult physician immediately ! When disposing, prevent contact with acids, lead or copper, as these are known to form explosive or toxic 

compounds with sodium azide. 

Use 

Buffered strips function as electrophoresis buffer reservoir and ensure contact between the gel and electrodes. 


Store the buffered strips horizontally in the original protective packaging at room temperature or refrigerated. (The arrow on the front of the kit box 

must be pointing upwards). 

They are stable until the expiration date indicated on the kit package or buffered strips package label. 

DO NOT FREEZE. 

Discard buffered strips if the package is opened and the strips dry out. 

3. ACID VIOLET STAIN 

Preparation 

Vial of the stock acid violet stain to be diluted up to 300 mL with distilled or deionized water. 

After dilution, the working stain solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; acid violet, 0.2 g/dL ; ethylene-glycol, 3.25 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels after protein electrophoresis and immunofixation. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working stain solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock stain solution is 

stable until the expiration date indicated on the kit package or stain vial labels. Working stain solution is stable for 6 months. 

4. ANTISERA AND FIXATIVE PACK (with PN 4383) 

4.1. ANTISERA 

Preparation 

Ready to use. All antisera are mammalian, anti-human total immunoglobulins. For easy identification of antisera and as an aid in monitoring their 

application, the antisera are colored with distinct nonhazardous dyes that match the color of the vial label. When antiserum exhibits a slight turbidity, 

leave the antiserum vial at room temperature for a minimum of 10 minutes. This should be sufficient to clear the solution ; however, if turbidity remains, 

this should not affect in any way the immunological reaction. In case of insoluble precipitates, it is recommended to centrifuge antisera for 5 minutes 

at 3000 rpm. 

Use 

For immunofixation of the electrophoresed proteins. 

Antisera may originate from different animal species. Don’t mix two different antisera vials, even with the same specificity, and ALWAYS change the 

tip of the pipette when changing antiserum vials. 

IMPORTANT: In order to avoid any contamination between reagents, be careful to replace the cap on each corresponding vial after each use. 


Store the antisera refrigerated (2 to 8 °C). They are stable until the expiration date indicated on the kit package or antisera vial labels. 

NOTE: During transportation, the antisera can be kept without refrigeration (15 to 30 °C) for 15 days without any adverse effects on performance. 

4.2. FIXATIVE SOLUTION 

Preparation 

Fixative solution is ready to use. It contains: acidic solution ; additives, nonhazardous at concentrations used, necessary for optimum performance. 

For an easy identification and as an aid in monitoring its application, the fixative is colored with a nonhazardous dye. 

- 11 -


Use 

To fix electrophoretically separated proteins in the reference track (ELP). 

IMPORTANT: In order to avoid any contamination between reagents, be careful to replace the cap on each corresponding vial after each use. 


Store fixative solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or fixative solution vial 

labels. 

Fixative solution must be free of precipitate. 

5. APPLICATORS 

Use 

Precut, single use applicators for sample application. 

Storage 

Store the applicators in a dry place at room temperature or refrigerated. 

6. ANTISERA SEGMENTS 

Use 

Single use, colored segments for fixative solution and antisera application onto the gel for immunofixation. 

WARNING : Segments with antisera have to be handled with care. 

7. FILTER PAPERS-THIN 

Use 

Single use, thin absorbent paper pads for blotting excessive moisture off the gel surface before sample application. 

Storage 

Store the thin filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

8. FILTER PAPERS-THICK 

Use 

Single use, thick absorbent paper pads for blotting unprecipitated proteins off the gel after immunofixation step. 

Storage 

Store the thick filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

REAGENTS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. ANTISERA AND FIXATIVE SOLUTION PACK (for 4321, 4322, 4324 and 4329 kits) 

The antisera and fixative solution pack, GAM, K, L (anti-gamma, alpha, mu heavy chains, anti-kappa free and bound light chains and anti-lambda free 

and bound light chains), SEBIA, PN 4335, contains 3 antisera vials and 1 fixative solution vial, 1 mL each. They are specific for the immunofixation 

procedure with the dynamic mask. 

1.1. ANTISERA 

See previous paragraph 4.1. 

1.2. FIXATIVE SOLUTION 


2. ANTISERA PACK FOR FREE LIGHT CHAINS (for 4321, 4322, 4324 and 4329 kits) 

The antisera pack, anti-kappa free light chains and anti-lambda free light chains, SEBIA, PN 4336, contains 2 antisera vials, 1 mL each. They are 

specific for the immunofixation procedure with the dynamic mask. 


3. DESTAINING SOLUTION 

Preparation 

Each vial of stock Destaining Solution (SEBIA, PN 4540, 10 vials, 100 mL each) to be diluted up to 100 liters with distilled or deionized water. It is 

convenient to dilute only 5 mL of the stock solution to 5 liters, the volume of the destaining solution container. After dilution, the working destaining 

solution contains: citric acid, 0.5 g/L. 

Use 

For destaining, that is removal of excess and background stain from the gels. 

For rinsing of the staining compartment after wash step. 

To neutralize the acidity of the destaining solution, pour 15 mL of a 50 % solution of sodium hydroxide into the empty waste container. 


Store the stock destaining solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or destaining 

solution vial labels. DO NOT FREEZE. Working destaining solution is stable for one week at room temperature in a closed bottle. Do not add any 

sodium azide. 

Discard working destaining solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

To prevent microbial proliferation in the diluted destaining solution to be stored more than one week, add 5 µL/dL of ProClin 300. 

Working destaining solution added with ProClin is stable in a closed bottle at room temperature or refrigerated until the expiration date indicated on the 

kit package or destaining solution vial labels. 

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4. HYDRASYS WASH SOLUTION 

Preparation 

Each vial of the stock HYDRASYS Wash Solution (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 mL each) to be diluted up to 5 liters with distilled or deionized water. 

After dilution, the working wash solution contains: alkaline buffer pH 8.8 ± 0.3 ; sodium azide. 

WARNING: The stock wash solution contains 0.625 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Sodium 

azide may lead to formation of explosive or toxic compounds when in contact with acids, lead or copper. Always flush with a large quantity 

of water when disposing. 

Use 

The HYDRASYS wash solution is designed to wash unprecipitated proteins from gels. It also serves for cleaning of the HYDRASYS's Staining 

Compartment. Use periodically, e.g., if the instrument is used daily, wash the staining compartment weekly. 

See the package insert for directions to use. 


Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. They are stable until the expiration date indicated 

on the wash solution vial label. 

Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

5. SALINE 

Preparation 

Make 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl solution in distilled or deionized water. 

Use 

To dilute samples if necessary. 


Store at room temperature or refrigerated. Discard after 3 months or if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

For longer storage periods, add sodium azide, 0.1 g/dL. 

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 or PN 1211. 

2. Micropipettor, either manual or automated, such as HYDRAplus SEBIA, PN 1215, for an alternative way of loading the sample applicators or 

antisera segments. 

3. Wet Storage Chamber, PN 1270, supplied with HYDRASYS. 

4. Container Kit supplied with HYDRASYS. 

5. Template guide Bar SEBIA supplied with HYDRASYS. 

6. Dynamic mask, SEBIA, PN 1255. 

7. Pipettes: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL and 200 µL. 

SAMPLES FOR ANALYSIS 

Sample collection and storage 

• The analysis is generally carried out on fresh urine. 

If needed, store urines at 2 to 8 °C for up to one week. For longer storage periods, keep urines frozen. Freezing with HEPES 0.1 M (pH 6.75) 

and/or sodium azide, 0.02 g/dL improves the storage stability. Frozen urines are stable for at least one month. Thawed samples can give slight 

application marks due to protein denaturation. 

IMPORTANT: Avoid boric acid as preservative. 

• If analyzing sera, they must be collected according to established procedures used in clinical laboratory testing. If needed, store sera at 2 to 8 °C 

for up to one week. For longer storage periods, freeze the samples. Frozen sera are stable at least for one month. Thawed samples may give slight 

application marks due to protein or lipoprotein denaturation. 

Sample preparation 

Urines 

Analysis is performed on unconcentrated urine. The detection level of Bence Jones protein is generally within 1 - 5 mg/dL. Concentrate urine if required 

by the procedures established in the laboratory or if a higher sensitivity is needed. A 20 - 100 fold concentration is generally sufficient. 

NOTE : Diffusion of urine samples into the applicator tips may be hindered when the urine (neat or concentrated) is turbid. It is recommended to 

remove the particulates by centrifugation (e.g., 10 minutes at 3,000 rpm) or filtration (e.g., 0.45 µm syringe filter). 

Sera 

In addition to urine, the patient’s serum may also be tested for Bence Jones protein. 

Dilute the serum in saline or in diluent for immunofixation previously diluted 1/4 (1 part diluent, 3 parts distilled or deionized water): 1/10 for ELP, GAM, 

K and L tracks (1 part serum, 9 parts diluted diluent or saline) and 1/3 (1 part serum, 2 parts diluted diluent or saline) for Kf and Lf tracks. 

NOTE : If total immunoglobulin level is < 0.5 g/dL, it is recommended to use lower dilutions of the serum sample in saline or in the diluent for 

immunofixation previously diluted 1/4. For example, dilute 1/5 the serum for ELP, GAM, K and L tracks (1 part serum, 4 parts diluted diluent or saline) 

and 1/2 (1 part serum, 1 part diluted diluent or saline) for Kf and Lf tracks. 

For Ig D and/or Ig E analysis, apply the same dilutions as for kappa and lambda free and bound light chains. 

WARNINGS: 

• Avoid plasma samples. Fibrinogen gives a band in the reference track close to the application point which might be taken for a monoclonal 

immunoglobulin. 

• Some urines contain high concentration of salts. This may cause gel deformation during migration and consequently, distortion of the migration 

profiles. If such distortion makes intrepretation inaccurate, the urine should be dialyzed to eliminate the salts. 

- 13 -


• Due to bacterial contamination, the immunoglobulin (paraprotein) present in urine may undergo a proteolysis. This would lead to a positive reaction 

with anti free light chain antiserum. In such case, a serum paraprotein eliminated in urine may show a monoclonal band with the trivalent antiserum, 

and with one of the anti free and bound antisera and with the corresponding anti free light chain antiserum. 

• Polymerization of Bence Jones proteins generally lowers the sensitivity of detection with the anti free light chains antisera as the polymerization may 

block the epitopes that normally react with anti free light chain antisera. When no detection is achieved and Bence Jones proteins are suspected, 

depolymerize prior to electrophoresis: mix 100 µL urine with 5 µL beta-mercaptoethanol diluted 1:10 with saline and apply. 

PROCEDURE 

The HYDRASYS system is a semi-automated multi-parameter instrument. The automated steps include processing of HYDRAGEL agarose gels in 

the following sequence: sample application, electrophoretic migration, incubation with fixative solution and antisera, drying, staining, destaining and 

final drying. The manual steps include handling samples and gels, application of fixative and antisera and setting up the instrument for operation. 

READ CAREFULLY HYDRASYS INSTRUCTION MANUAL. 

I. MIGRATION SET UP 

1. Switch on HYDRASYS instrument. 

2. Place one applicator for HYDRAGEL 1 BENCE JONES or HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 samples), two applicators for HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 samples) or three applicators for HYDRAGEL 9 BENCE JONES, on a flat surface with the well numbers in the rightside-up 

position (Fig. 1). 

- Apply 10 µL samples into the applicator wells as follows. Load each applicator within 2 minutes. 

| MIGRATION / IMMUNOFIXATION TRACK | 

WELLS NO : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 SAMPLE N° 1 OR 3 2 3 4 5 6 7 SAMPLE N° 2 OR 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES SAMPLE N° 1, 4 OR 7 1 2 3 4 5 6 SAMPLE N° 2, 5 OR 8 7 8 9 10 11 12 

| SAMPLE N° 3, 6 OR 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

NOTE: For HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, the wells no. 1, 8 and 15 are not used in this test ; they may be marked with a felt tip pen to 

avoid filling them with sample by mistake. 

- Place the applicator(s) into the wet storage chamber with the teeth up [handle it (them) by the plastic tooth protection frame]. 

- Let the samples diffuse into the teeth for 5 minutes after the last sample application. 

See wet chamber package insert for further details. 

3. Open the lid of the Migration Module and raise the electrode and applicator carriers. 

WARNING: Never close the lid while the carriers are raised ! 

4. Select "1 BJ SM/DM" migration program for HYDRAGEL 1 BENCE JONES, "2/4 BJ-UP SM/DM" for HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 or 

"9 BJ DM" for HYDRAGEL 9 BENCE JONES, from the instrument menu (left side of the keyboard). 

5. Remove buffered strips from the package ; handle them by the plastic ends. Engage the punched ends of the strip's plastic backing to the pins 

on the electrode carrier ; the strip's plastic backing must face the carrier (Fig. 2). 

6. Unpack the HYDRAGEL plate. 

- Roll quickly and uniformly one thin filter paper onto the gel surface to absorb the excess of liquid. Remove the paper immediately. 

WARNING: Do not leave the filter paper for a too long contact with the gel to avoid its dehydration. 

- Pool 120 µL distilled or deionized water for HYDRAGEL 1 BENCE JONES or 200 µL for HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 and HYDRAGEL 

9 BENCE JONES, on the lower third of the frame printed on the temperature control plate of the migration module. 

- Place the gel plate (the gel side up) with its edge against the stop at the bottom of the printed frame (Fig. 3). 

- Bend the gel and ease it down onto the water pool (Fig. 3). Ensure that no air bubbles are trapped, water is spread underneath the entire 

gel plate and the gel is lined up with the printed frame. 

7. Lower both carriers down. In this position the buffered strips do not touch the gel. DO NOT FORCE THE CARRIERS ALL THE WAY DOWN. 

8. Remove the applicator(s) from the wet chamber. Handle it (them) by the protection frame. 

- Snap off the applicator teeth's protection frame. 

- Place the applicator(s) on the carrier : 

- With HYDRAGEL 1 BENCE JONES or HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 samples), into position No 6, 

- With HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 samples), into position No 3 and 9, 

- With HYDRAGEL 9 BENCE JONES, into position No 2, 6 and 10. 

IMPORTANT: The numbers printed on the applicator(s) must face the operator (Fig. 4). 

To improve reproducibility of sample application, always position the applicators on the left side of the carrier. 

9. Make sure the carriers are lowered. Close the lid of the migration module. 

10. Start the procedure immediately by pressing the green arrow "START" key on the left side of the keyboard. 

IMPORTANT: Make sure that the ventilation air inlet on the right side of the instrument is not blocked. 

- 14 -


MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The two carriers are lowered so that buffered strips and applicator(s) contact the gel surface. 

• Sample applicator carrier rises up. 

• Migration is carried out under 10 W constant for HYDRAGEL 1 BENCE JONES and under 20 W constant for HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, until 

42 Vh accumulated (for about 9 minutes) and under 20 W constant until 36 Vh accumulated (for about 7 minutes) for HYDRAGEL 9 BENCE JONES, 

at 20 °C controlled by Peltier effect. 

• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• An audible beep signals that the migration module lid unlocks. The following message is displayed on the screen : "AS". 

NOTE: The migration module lid remains locked during all migration steps. 

II. IMMUNOFIXATION SET UP 

The dynamic mask contains a colored reference guide for reagent application, an antisera segment, a segment holder, a dynamic mask guide and a 

length-reducing device (Fig. 5). 

During the migration, assemble the dynamic mask as follows : 

1. Place the dynamic mask guide on a flat surface. 

IMPORTANT : For one and two samples analysis, it is necessary to position a length-reducing device on the dynamic mask guide. 

2. Set up an antisera segment on the segment holder (Fig. 6) : 

- Tilt the antisera segment at a 45° angle and position it against the plastic springs of the segment holder. 

- Pull apart the two elements and pivot the segment to fix it into the notches of the segment holder. 

WARNING : Be sure the segment is correctly positioned on the holder : the pins at ends of the segment must be blocked into the 

notches of the holder. 

3. Set up the holder with the segment on the dynamic mask guide (Fig. 7). Then, put the colored reference guide for reagent application, 

corresponding to the assay being run, on the segment holder in front of the segment wells (Fig. 8). 

4. Apply reagents as follows: 

- 6 wells antisera segment for HYDRAGEL 1 BENCE JONES : 8 µL per well, 

- 15 wells antisera segment for HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 : 8 µL per well for 2 samples analysis, 

12 µL per well for 4 samples analysis, 

- 18 wells antisera segment for HYDRAGEL 9 BENCE JONES : 8 µL per well. 

TROUGH REAGENT COLOR ELP fixative solution yellow GAM trivalent antiserum violet K anti-kappa light chain (free & bound) antiserum green L anti-lambda light chain (free & bound) antiserum blue Kf anti-kappa free light chain antiserum orange 

| Lf | anti-lambda free light chain antiserum | red | 

NOTE: Reagents are colored and the colors are shown on the colored reference guide to facilitate correct antisera pipetting. 

IMPORTANT: For HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, do not use wells of antisera segment in position 1, 8 and 15. 

- Aspirate reagents avoiding any air bubbles in the pipette tip. 

- Apply the reagents (Fig. 9) : 

- Hold pipette at an angle and rest its tip lightly at the side of the well, without touching the bottom of the well. 

- Inject the drop of reagent into the well. 

5. Remove the colored reference guide. 

III. IMMUNOFIXATION 

1. Open the migration module lid. 

2. Remove the sample applicator(s) and discard. 

3. Raise both carriers, remove the buffered strips by their plastic ends and discard. 

- Remove both carriers. 

- Wipe electrodes with soft wet tissue. 

- Leave the gel in place in the migration module. 

4. Set up the dynamic mask for reagent application as follows (Fig. 10): 

- Position the mask guide on the anchoring clip (the guide may stay in the migration module all the time). 

- Hold the dynamic mask by the tab and position it into the guide with the notches aligned with the marks. 

- Lower the dynamic mask onto the plate of HYDRASYS. 

IMPORTANT : Adjust the dynamic mask position for perfect alignment between electrophoretic profiles and wells of the mask. 

5. Place the segment holder at the lowest point on the mask guide, facing the operator. 

Hold the segment holder by the handle situated on its right and press on the central pressure point such that the antisera segment contacts 

the gel. Release the pressure ; then, reagents will spread under each track (Fig. 11). 

6. Immediately, using the segment holder handle, move the segment slowly but steadily up and down the entire length of the gel to apply the 

reagents. Application should take approximately 5 seconds (Fig. 12). 

WARNING : During this step, hold the mask only by the segment holder handle. Avoid touching the guide. Don’t re-press on the 

pressure point as this may result in cross contamination of reagents. 

7. Remove the guide and the dynamic mask. 

- Remove the segment holder using its handle. 

- Remove the antisera segment from the holder and discard. 

WARNING : Segments with antisera have to be handled with care. 

- Residual reagent may remain in the wells after application. This should have no effect on test results. 

- 15 -

8. Close the lid of the migration module. 

9. Start the procedure immediately by pressing the green arrow "START" key on the left side of the keyboard. 

A message "[INCUBATION]" appears on the screen. 


IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Incubation at 20 °C for 10 minutes (controlled by Peltier effect). 

• An audible beep signals that the migration module lid unlocks. The following message is displayed on the screen: " PAP.". 

NOTE: The migration module lid remains locked during incubation. 

IV. BLOTTING OF THE GEL 


2. Apply a thick filter paper on the gel: 

line up the filter paper edge with the gel edge (incline it at a 45° angle) and ease it down onto the gel. 

IMPORTANT: Press firmly on the whole surface of the filter paper to ensure perfect adherence on the gel. 

3. Close the lid of the migration module. 

4. Start the procedure by pressing the "START" key (green arrow on the left side of the keyboard). 

BLOTTING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Blotting at 40 °C controlled by Peltier effect, for 3 minutes. The following message is displayed on the screen: "[BLOTTING]". 

• An audible signal (beep) rings. The following message is displayed on the screen: "❊ PAP.". 

V. DRYING OF THE GEL 


2. Remove the filter paper and leave the gel in place. 

3. Close the lid. 

4. Start the procedure by pressing the "START" key (green arrow on the left side of the keyboard). 

DRYING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Drying at 50 °C controlled by Peltier effect, for 6 minutes. 

• A beep signals that the cover unlocks. The plate temperature remains at 50 °C until the lid is opened. "Migration temp maintained" is displayed on 

the screen. 

NOTE: The migration module lid remains locked during the drying step. 

VI. GEL PROCESSING SET UP 

1. Open the lid. 

2. Remove the dried gel film for further processing. 

3. Open the gel holder. Lay it flat and position the dried gel (with gel side facing up) into the grooves of the two rods and close the holder. Make 

sure that the film is correctly positioned inside the holder (Fig. 13). 

4. Place the gel holder into the Gel Processing / Staining Module. 

IMPORTANT: Before starting the gel processing / staining program, check the following: 

- the wash solution container contains at least 400 mL of wash solution ; 

- the staining container is filled with 300 mL of staining solution ; 

- the destaining container contains at least 1 liter of destaining solution ; 

- the waste container is empty. 

For reagent line connection: refer to the information displayed on the screen of the instrument (select key: REAGENT LINES). 

IMPORTANT: Do not forget to block up the unused lines. 

5. Select "IF ACID VIOLET" staining program from the instrument menu and start the run by pressing the "START" key (green arrow on the right 

side of the keyboard). 

During staining, destaining and drying steps, the compartment remains locked. 

After cooling step, an audible beep signals that the compartment unlocks (the ventilation is maintained until the gel holder is removed). 

NOTES: 

- Temperature of the migration plate keeps decreasing since the lid has been opened until it reaches 20 °C (in less than 5 minutes). Then a new 

migration run may start. 

- Return the sample applicator and electrode carriers back in place. 

- Wipe the temperature control plate with a soft wet tissue. 

VII.GEL PROCESSING COMPLETION 

1. Remove the gel holder from the compartment, open it and remove the dried gel. 

2. If needed, clean the back side (the plastic support side) of the dry film with a damp soft paper. 

NOTE : The lengths of electrophoretic migrations may be slightly different with gels containing 2 or 3 analysis rows, without any adverse effects 

on performance. 

- 16 -


RESULTS 

Interpretation 

Presence of a Bence Jones protein in urine is characterized by: 

- a monoclonal band detected with one of the anti-free and bound light chains kappa or lambda antisera, (K or L tracks), 

- the same monoclonal band detected with the corresponding anti free light chain antiserum (Kf ou Lf tracks). 

- no reaction with the trivalent antiserum (GAM track), 

Serum paraprotein eliminated in urine without Bence Jones protein is characterized by: 

- one monoclonal band detected with the trivalent antiserum, 

- the same band detected with one of the anti free and bound light chain antisera, and 

- no reaction with the corresponding anti free light chain antiserum. 

Serum paraprotein eliminated in urine associated with a Bence Jones protein is characterized by: 

- one monoclonal band detected with the trivalent antiserum, 

- the same band detected with one of the anti free and bound light chain antisera, 

- one monoclonal band detected with one of the anti free and bound light chain antisera. This band generally does not migrate at the same 

level as the one detected with the trivalent antiserum, 

- the same band detected with one of the anti free light chain antisera. 

In rare cases, the two bands migrate together (then, the staining in the light chain track is stronger than that in the GAM track). 

Polymerized forms of Bence Jones protein are characterized by: 

- lack of reaction with the trivalent antiserum, 

- several bands revealed with one of the anti free and bound light chain antisera, 

- the same bands may also be detected with the corresponding free light chain antiserum. 

Limitations 

The use of antisera other than those specific for the immunofixation procedure with the dynamic mask may affect the results. 

Due to the resolution and sensitivity limits of zone electrophoresis, it is possible that some monoclonal components may not be detected with this 

method. 

Troubleshooting 

Call Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instructions for the preparation and storage of materials, and for the 

procedure were carefully followed. 

Kit reagent Safety Data Sheets and information on waste product elimination are also available from the Technical Service of the supplier. 

PERFORMANCE DATA 

Reproducibility within gel and specificity 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES procedure 

Reproducibility within gel was demonstrated on three different pathological samples : two urine samples with Bence Jones proteins (kappa and lambda 

free light chains) and one serum sample with kappa free light chain. 

Each sample was run 4 times on 2 lots of HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 gels using the acid violet staining procedure. 


Reproducibility within gel was demonstrated on three different pathological samples : two urine samples with Bence Jones proteins (kappa and lambda 

free light chains) and one serum sample with kappa free light chain. 

Each sample was run 9 times on 2 lots of HYDRAGEL 9 BENCE JONES gels using the acid violet staining procedure. 

All repeats gave identical results within lot and lot-to-lot and as expected for the type of samples tested. 

The Bence Jones proteins were correctly identified in each sample and on all gels, there were no false positives and no differences were observed 

among the repetitions. 

Reproducibility between gels and specificity 


Reproducibility between gels was demonstrated on four different pathological samples, 3 urines and one serum with Bence Jones proteins, kappa or 

lambda free light chains. 

These samples were run on 10 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 gels from 3 different lots, using the acid violet staining procedure. 


Reproducibility between gels was demonstrated on nine different pathological urine and serum samples, with Bence Jones proteins, kappa or lambda 

free light chains. 

These samples were run on 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES gels from 3 different lots, using the acid violet staining procedure. 

All repeats gave identical results gel to gel and as expected for the type of samples tested. 

Accuracy 

Twenty serum samples and thirty six urine samples with Bence Jones proteins, with five normal samples, were analyzed using the HYDRAGEL 

4 BENCE JONES kit and a similar, commercially available immunofixation procedure. 

The results of the two immunofixation procedures were in perfect agreement with each other. 

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Sensitivity 

Serial dilutions were prepared with 2 pathological urine samples both exhibiting Bence Jones proteins and analyzed with HYDRAGEL 

4 BENCE JONES procedure with antisera anti-kappa and anti-lambda free and bound light chains and with antisera anti-kappa and anti-lambda free 

light chains. 

The minimal detection limit for Bence Jones proteins was about 3 mg/L with antisera anti-free and bound light chains and about 12 mg/L with antisera 

anti-free light chains. 

Due to the structure and the type of the free light chain, the detection limit determined with anti-kappa or anti-lambda free light chain antisera may vary, 

but is generally below 5 mg/dL. 

BIBLIOGRAPHY 

(1) Didier Le Carrer, "Serum Protein Electrophoresis and Immunofixation, Illustrated Interpretations", SEBIA Laboratories, 1994, 120 pp, Ed. Hatier - Paris. 

(2) D. F. Keren, "High Resolution Electrophoresis and Immunofixation, Techniques and Interpretation", Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

1994, 397 pp. 

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ANWENDUNGSBEREICH 

Die HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES und HYDRAGEL 9 BENCE JONES Kits dienen 

zum Nachweis von Bence-Jones-Proteinen oder freien (Kappa- oder Lambda-) Leichtketten in Humanurin bzw. -serum durch Immunfixationselektrophorese 

auf Agarosegelen in alkalischem Puffer (pH-Wert 9,1). Sie wurden für das halbautomatische Elektrophoresegerät HYDRASYS 

entwickelt, das die Bearbeitung der Gele übernimmt, bis diese für die Auswertung vorliegen. Die in der Probe enthaltenen Proteine werden zunächst 

elektrophoretisch getrennt und dann mit Antiseren folgender Spezifität immunfixiert: (1) einem trivalenten Antiserum gegen Gamma- (Ig G), Alpha- 

(Ig A) und My-Schwerketten (Ig M), (2) Antiserum gegen freie und gebundene Kappa-Leichtketten, (3) Antiserum gegen freie und gebundene Lambda- 

Leichtketten, (4) Antiserum gegen freie Kappa-Leichtketten und (5) Antiserum gegen freie Lambda-Leichtketten. Nach der Immunfixation werden die 

ausgefällten Proteine mit Säureviolett gefärbt. Überschüssige Farbe wird durch eine saure Lösung entfernt. 

Jedes Agarosegel dient zur Abarbeitung von: 

- Einer Probe im HYDRAGEL 1 BENCE JONES Kit, 

- zwei Proben im HYDRAGEL 2 BENCE JONES Kit, 

- vier Proben im HYDRAGEL 4 BENCE JONES Kit, 

- neun Proben im HYDRAGEL 9 BENCE JONES Kit. 

In-vitro-Diagnostikum. 

TESTPRINZIP 

Bei atypischen Banden im elektrophoretischen Muster, vor allem in den Betaglobulin- und Gammaglobulinfraktionen, besteht immer der Verdacht, daß 

es sich um monoklonale Proteine und damit um ein Anzeichen für Gammopathien handeln könnte. Zur Identifikation dieser atypischen Banden wird 

die Methode der Immunfixation angewandt. 

Die Immunfixationselektrophorese erlaubt die Bindung der Proteine in situ nach der Elektrophorese, indem sie unlösliche Komplexe mit den 

entsprechenden Antiseren bilden. 

Das Verfahren teilt sich in vier Schritte: 

1. Trennung der Proteine durch Elektrophorese auf Agarosegel. 

2. Fixierung und Immunpräzipitation der Proteine nach der Elektrophorese: Fixierlösung und Antiseren werden direkt auf die Geloberfläche und damit 

auf die entsprechenden elektrophoretischen Migrationsspuren aufgebracht. Die Fixierlösung und Antiseren diffundieren in das Gel, wobei alle 

Proteine bzw. die entsprechenden Antigene ausgefällt werden. 

3. Die ungebundenen, löslichen Proteine werden vom Gel durch Abblotten und Waschen entfernt. Das Präzipitat des Antigen-Antikörper-Komplexes 

ist in der Gelmatrix eingeschlossen. 

4. Die ausgefällten Proteine werden durch Färbung sichtbar gemacht. Die Immunpräzipitationsbanden werden anschließend mit den entsprechenden 

atypischen Banden im elektrophoretischen Muster der Probe verglichen. 

Zum Nachweis und zur Identifikation der vermuteten monoklonalen Banden erfolgt die gleichzeitige Elektrophorese der Probe in sechs Spuren. Nach 

der Elektrophorese dient die ELP-Spur, die das elektrophoretische Muster der in der Probe enthaltenen Proteine aufweist, als Referenz. Die übrigen 

fünf Spuren gestatten die Identifikation der monoklonalen Komponente(n) entweder durch ihre Reaktion(en) mit dem trivalenten Antiserum gegen 

(Gamma, Alpha- und My-) Schwerketten sowie mit den einzelnen Antiseren gegen freie und gebundene Kappa- und Lamda-Leichtketten und gegen 

freie Kappa- und Lamda-Leichtketten oder dadurch, daß diese Reaktionen ausbleiben. 

Mit dieser einfachen und schnellen Technik werden eindeutige und leicht interpretierbare Ergebnisse erzielt. 

MITGELIEFERTE REAGENZIEN UND MATERIALIEN IN HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES UND HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT BESTELL. NR. 4321 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT BESTELL. NR. 4322 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT BESTELL. NR. 4324 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS BESTELL. NR. 4329 BESTELL. NR. 4383* Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele 10 Gele 80 Gele Pufferstreifen (gebrauchsfertig) 10 Pack, jeweils 2 10 Pack, jeweils 2 80 Pack, jeweils 2 Säureviolett-Färbelösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 75 ml 1 Fläschchen, 75 ml 8 Fläschchen, Jeweils 75 ml Fixierlösung (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 2,9 ml Säugetier-Immunglobuline gegen Human-Gamma-, Alpha-, 1 Fläschchen, 2,0 ml My-Schwerketten (trivalent) (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie und gebundene 1 Fläschchen, 2,0 ml Human-Kappa-Leichtketten (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie und gebundene 1 Fläschchen, 2,0 ml Human-Lambda-Leichtketten (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie Human-Kappa- 1 Fläschchen, 2,0 ml Leichtketten (gebrauchsfertig) Säugetier-Immunglobuline gegen freie Human-Lambda- 1 Fläschchen, 2,0 ml Leichtketten (gebrauchsfertig) Applikatoren (gebrauchsfertig) 1 Pack zu 10 2 Pack zu 10 Stück 24 Pack zu je 10 Stück 3 Pack zu 10 Stück Antiserensegmente 1 Pack zu 10 1 Pack zu 10 8 Pack zu je 10 Stück Filterpapier, dünn 1 Pack zu 10 1 Pack zu 10 8 Pack zu je 10 Stück 

| Filterpapier, dick | 1 Pack zu 10 | 1 Pack zu 10 | 8 Pack zu je 10 Stück | 


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SEBIA ARBEITSANLEITUNG - Deutsch


HINWEIS: Die Fixierlösung und die Antiseren werden mit Ausnahme bei den MAXI-KITS getrennt von den Kits geliefert. (SIEHE BENÖTIGTE ABER 

NICHT MITGELIEFERTE REAGENZIEN). 

FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE 

Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden. 

BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN. 

1. AGAROSEGELE 

Vorbereitung 

Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält: Agarose, 8 g/l ; Tris-Barbital-Puffer (pH-Wert 9,1 ± 0,1) ; Additiva zur Optimierung der Leistung, 

in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Die Agarosegele enthalten 0,31 % Barbital und 0,34 % Natriumbarbital. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen 

Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! 

Gebrauch 

Hilfsmedium für die Proteinelektrophorese und Immunfixation. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall 

Gele waagerecht in der Originalverpackung bei Raumtemperatur (15 bis 30 °C) oder im Kühlschrank (2 bis 8 °C) aufbewahren. Sie bleiben bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf der Kit- oder Gelverpackung angegeben ist. (Der Pfeil auf der Vorderseite der Kit-Schachtel muß nach oben zeigen.) Eine 

Lagerung in der Nähe eines Fensters oder einer Hitzequelle ist zu vermeiden. Starke Temperaturschwankungen sind zu vermeiden. 

NICHT EINFRIEREN. 

Das Gel ist zu verwerfen bei: 

(i) Kristallen oder Niederschlag auf der Geloberfläche oder sehr weicher Gelstruktur (was darauf hindeutet, daß das Gel gefroren war) ; 

(ii) Bakterien- oder Schimmelpilzbildung ; 

(iii) einer ungewöhnlich stark ausgeprägten Flüssigkeitsansammlung in der Gel-Box (was auf einen Austritt von Puffer aus dem Gel aufgrund 

unsachgemäßer Lagerung hindeutet). 

2. PUFFERSTREIFEN 

Vorbereitung 

Die als Streifen vorliegenden Pufferschwämme sind gebrauchsfertig. Jeder Pufferstreifen enthält: Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 9,1 ± 0,3, Natriumazid ; 

Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Der im Streifen enthaltene Puffer enthält 0,92 % Barbital, 1,03 % Natriumbarbital und 0,30 % Natriumazid. Nicht einnehmen! 

Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! Darf bei der Entsorgung nicht mit Säuren, Blei oder Kupfer in Kontakt 

kommen, da sich sonst explosive bzw. toxische Natriumazidverbindungen bilden können. 

Gebrauch 

Die Pufferstreifen fungieren als Elektrophoresepufferreservoir und gewährleisten den Kontakt zwischen dem Gel und den Elektroden. 


Bewahren Sie die Pufferstreifen waagerecht liegend in der Original-Schutzverpackung bei Zimmertemperatur oder gekühlt auf. (Der Pfeil auf der 

Verpackungsschachtel muss nach oben zeigen.) Die Pufferstreifen sind bis zum angegebenen Verfallsdatum auf der Schachtel oder auf dem Etikett 

der Streifen stabil. 

NICHT EINFRIEREN! 

Verwerfen Sie die Pufferstreifen, wenn die Verpackung geöffnet ist und die Streifen ausgetrocknet sind. 

3. SÄUREVIOLETT-FÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt des Fläschchens konzentrierte Säureviolett-Färbelösung mit destilliertem oder entionisiertem Wasser auf 300 ml auffüllen. 

Nach Verdünnung enthält die gebrauchsfertige Färbelösung: saure Lösung pH ≈ 2 ; Säureviolett, 0,2 g/dl ; Äthylenglykol, 3,25 % ; Zusätze, 

ungefährlich bei den eingesetzten Konzentrationen, nötig für die optimale Durchführung. 

WARNUNG: Nicht Verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Gele nach der elektrophoretischen Trennung der Proteine und nach der Immunfixation. 

WICHTIG: Mit der Färbelösung können lediglich zehn Gele angefärbt werden. Tauschen Sie die Lösung nach zehn Färbeschritten aus. 


Zur Vermeidung von Verdunstungsverlusten sowohl konzentrierte als auch verdünnte Färbelösung in verschlossenen Behältern bei Raumtemperatur 

oder im Kühlschrank aufbewahren. Konzentrierte Färbelösung bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit-Verpackung oder auf dem 

Fläschchenetikett der Färbelösung angegeben ist. Verdünnte Färbelösung bleibt 6 Monate stabil. 

4. ANTISEREN UND FIXIERLÖSUNGSPACKUNG (mit Art.-Nr. 4383) 

4.1. ANTISEREN 

Vorbereitung 

Gebrauchsfertig. Alle Antiseren sind Säugetier-Anti-Human-Gesamtimmunglobine. Damit die Antiseren schnell und sicher angewendet werden 

können, sind sie mit gesundheitlich unbedenklichen Farbstoffen markiert, die den Farben auf den Fläschchenetikett entspricht. Sollte das Antiserum 

eine leichte Trübung aufweisen, sollte es für mindestens 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert werden. Dies sollte für die Klärung der Lösung 

ausreichen. Eine eventuell noch vorhandene leichte Trübung sollte die immunologische Reaktion nicht beeinflussen. Im Falle von unlöslichen 

Ausfällungen, wird eine fünfminütige Zentrifugation bei 3000 UPM empfohlen. 

Gebrauch 

Zur Immunfixation von Proteinen nach der Elektrophorese. 

Die Antiseren können von unterschiedlichen Tierspezies stammen. Nicht den Inhalt von zwei unterschiedlichen Antiserenfläschen mischen, auch nicht 

bei gleicher Spezifität und IMMER eine neue Pipettenspitze benutzen, wenn das Antiserumfläschchen gewechselt wird. 

ACHTUNG: Um eine Kontamination der Reagenzien zu vermeiden, dürfen die Verschlußkappen der Gefäße nicht vertauscht werden. 

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Antiseren im Kühlschrank bei (2 - 8 °C) aufbewahren. Sie sind bis Verfalldatum auf der Kit-Verpackung oder auf dem Fläschchenetikett stabil. 

HINWEIS: Während des Transports können die Antiseren ungekühlt (15 bis 30 °C) für 15 Tage ohne nachteilige Effekte für die Durchführung 

aufbewahrt werden. 

4.2. FIXIERLÖSUNG 

Vorbereitung 

Die Fixierlösung ist gebrauchsfertig. Sie enthält: saure Lösung ; Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen 

ungefährlich. Damit die Fixierlösung schnell und sicher angewendet werden kann, ist sie mit einem gesundheitlich unbedenklichen Farbstoff markiert. 

Gebrauch 

Zur Fixierung der elektrophoretisch getrennten Proteine in der Referenzspur (ELP). 

ACHTUNG: Um eine Kontamination der Reagenzien zu vermeiden, dürfen die Verschlußkappen der Gefäße nicht vertauscht werden. 


Fixierlösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfallsdatum auf der Kitpackung oder auf dem 

Fläschchenetikett der Fixierlösung stabil. 

Die Fixierlösung darf kein Präzipitat aufweisen. 

5. APPLIKATOREN 

Gebrauch 

Einmalapplikatoren für den Probenauftrag. 

Lagerung 

Applikatoren vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

6. ANTISERA-SEGMENTE 

Gebrauch 

Farbige Antisera-Segmente, zum Auftragen der Fixierlösung und der Antiseren auf das Gel. 

WARNUNG: Mit Antiserum befüllte Antiseren-Segmente vorsichtig behandeln. 

7. FILTERPAPIER, DÜNN 

Gebrauch 

dünnes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten überschüssiger Flüssigkeit von der Gel-oberfläche vor dem Probenauftrag. 

Lagerung 

dünnes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

8. FILTERPAPIER, DICK 

Gebrauch 

dickes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten nicht ausgefällter Proteine nach der Immunfixation. 

Lagerung 

dickes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE REAGENZIEN (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. ANTISEREN- UND FIXIERLÖSUNGSPACKUNG (für Art.-Nr. 4321, 4322, 4324 und 4329 Kits) 

Die Antiseren- und Fixierlösungspackung, GAM, K, L (gegen Gamma-, Alpha-, my-Schwerketten, Antiseren gegen freie und gebundene Kappa- und 

Lambda-Leichtketten), SEBIA, Art.-Nr. 4335, enthält 3 Antiserenfläschchen und 1 Fixierlösungsfläschchen, je 1 ml. Sie sind speziell auf die 

Immunfixationspozedur mit der dynamischen Maske abgestimmt. 

1.1 ANTISEREN 

Siehe vorheriger Abschnitt 4.1. 

1.2 FIXIERLÖSUNG 

Siehe vorheriger Abschnitt 4.2. 

2. ANTISERENPACKUNG FÜR FREIE LEICHTKETTEN (für Art.-Nr. 4321, 4322, 4324 und 4329 Kits) 

Die Antiserenpackung, Antiseren gegen freie Kappa/Lambda-Leichtketten, SEBIA, Art.-Nr. 4336, enthält 2 Antiserenfläschchen, je 1 ml. Sie sind 

speziell auf die Immunfixationspozedur mit der dynamischen Maske abgestimmt. Siehe vorheriger Abschnitt 4.1. 

3. ENTFÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte Entfärbelösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4540, 10 Fläschchen zu je 100 ml) mit destilliertem oder entionisiertem 

Wasser auf 100 Liter auffüllen. Es empfiehlt sich, nur 5 ml konzentrierte Lösung auf 5 Liter, dem Fassungsvermögen des Behälters für die 

Entfärbelösung, aufzufüllen. Verdünnte Entfärbelösung enthält: Zitronensäure, 0,5 g/l. 

Gebrauch 

Zum Entfärben, d.h. Auswaschen von überschüssiger Farbe und zur Entfernung der Gelhintergrundfärbung. 

Zum Spülen der Färbekammer nach dem Waschen. 

Zur Neutralisation der sauren Entfärbelösung können 15 ml einer 50 % Natronlauge (NaOH) in den leeren Abfallbehälter gefüllt werden. 


Konzentrierte Entfärbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit- 

Verpackung oder auf dem Fläschchenetikett der Entfärbelösung angegeben ist. NICHT EINFRIEREN. Verdünnte Entfärbelösung bleibt bei 

Raumtemperatur in einem verschlossenen Behälter eine Woche stabil. Kein Natriumazid zugeben. 

Verdünnte Entfärbelösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

Um mikrobielles Wachstum in der verdünnten Entfärbelösung zu verhindern, wenn sie länger als 1 Woche aufgehoben wird, sollten 50 µl/l ProClin 300 

zugesetzt werden. 

Die mit ProClin versetzte, gebrauchsfertige Entfärbelösung ist in der verschlossenen Flasche bei Zimmertemperatur oder gekühlt bis zum Verfallsdatum 

stabil, das auf der Verpackung oder auf den Flaschenetiketten angegeben ist. 

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4. HYDRASYS WASCHLÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte HYDRASYS Waschlösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4541, 10 Fläschchen zu je 80 ml) mit destilliertem oder 

entionisiertem Wasser auf 5 Liter auffüllen. Verdünnte Waschlösung enthält: alkalischen Puffer, pH-Wert 8,8 ± 0,3 ; Natriumazid. 

WARNHINWEIS: Konzentrierte Waschlösung enthält 0,625 % Natriumazid. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort 

den Arzt aufsuchen! Natriumazid kann bei Kontakt mit Säuren, Blei oder Kupfer zu explosiven bzw. toxischen Verbindungen reagieren. Bei 

der Entsorgung stets mit reichlich Wasser nachspülen. 

Gebrauch 

HYDRASYS Waschlösung dient zum Auswaschen der nicht ausgefällten Proteine aus den Gelen. Sie wird ebenfalls zum Reinigen des HYDRASYS 

Färbemoduls eingesetzt. Die Reinigung in regelmäßigen Abständen durchführen: Wird das Gerät zum Beispiel täglich genutzt, sollte das Färbemodul 

einmal pro Woche gereinigt werden. 

Hinweise zum Gebrauch finden Sie auf der Packungsbeilage. 


Konzentrierte und verdünnte Waschlösung in geschlossenen Behältern bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf dem Fläschchenetikett der Waschlösung angegeben ist. 

Verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

5. PHYSIOLOGISCHE KOCHSALZLÖSUNG 

Vorbereitung 

Mit destilliertem oder entionisiertem Wasser eine 0,15 M (9 g/l) -NaCl-Lösung herstellen. 

Gebrauch 

Zum Verdünnen von Proben, sofern erforderlich. 


Bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Die Lösung muß nach 3 Monaten verworfen werden oder wenn sich ihr Aussehen verändert 

hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. Bei längerer Lagerung Natriumazid zugeben, 1 g/l. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE AUSSTATTUNG (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. HYDRASYS System SEBIA, Art.-Nr. 1210 oder Art.-Nr. 1211. 

2. Für das Beladen der Applikatoren oder der Antisera-Segmente kann alternativ eine manuelle Mikropipette oder der Pipettierautomat HYDRAplus 

SEBIA, Art.-Nr. 1215, verwendet werden. 

3. Feuchte Kammer, Art.-Nr. 1270, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

4. Behälter-Kit, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

5. Metallstange SEBIA, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

6. Dynamische Maske, SEBIA, Art.-Nr. 1255. 

7. Pipetten: 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl und 200 µl. 

PROBEN FÜR DIE ANALYSE 

Probensammlung und -lagerung 

• Die Analyse wird in der Regel an frischen Urinproben durchgeführt. 

Falls erforderlich können Urinproben bei 2 bis 8 °C bis zu einer Woche gelagert werden. Für eine längere Lagerung müssen die Urinproben 

eingefroren werden. Die Lagerstabilität erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit HEPES 0,1 M (pH-Wert 6,75) und /oder mit Natriumazid, 

0,02 g/dl versetzt werden. Durch Einfrieren bleiben die Proben mindestens einen Monat stabil. Nach dem Auftauen können die Proben aufgrund der 

Proteindenaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

WICHTIG: Keine Borsäure als Konservierungsmittel verwenden. 

• Für die Analyse von Seren die Proben nach einem gebräuchlichen Verfahren für klinische Labortests gewinnen. Bei Bedarf können Seren bis zu 

eine Woche bei 2 bis 8 °C gelagert werden. Bei längerer Lagerung die Proben einfrieren. Durch Einfrieren bleiben die Serumproben mindestens 

einen Monat stabil. Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Protein- bzw. Lipoproteindenaturierung leichte Trennspuren an der 

Auftragsstelle hinterlassen. 

Probenvorbereitung 

Urin 

Die Analyse erfolgt an nichtkonzentrierten Proben. Die Nachweisgrenze für Bence-Jones-Protein beträgt 50 mg/l. Wird eine höhere Empfindlichkeit 

benötigt, die Proben entsprechend konzentrieren. 

ZU BEACHTEN: Die Diffusion der Urinproben in die Applikatorspitzen kann behindert sein, wenn der Urin (nativ oder konzentriert) trüb ist. Es wird 

empfohlen, die Partikel durch Zentrifugation (z.B. 10 Minuten bei 3.000 Upm) oder Filtration (z.B. 0,45 µm Filter) zu entfernen. 

Serum 

Zusätzlich zum Urin wird empfohlen, ebenfalls das Patientenserum auf Bence Jones Protein zu testen. 

Das Serum wird mit physiologischer Kochsalzlösung oder in vorab 1/4 verdünntem Diluent für Immunfixation (1 Teil Diluent + 3 Teile destilliertes oder 

deionisiertes Wasser) verdünnt: 1/10 für die Spuren ELP, GAM, K und L (1 Teil Serum + 9 Teile verdünntes Diluent oder physiologische 

Kochsalzlösung) sowie 1/3 für die Spuren Kf und Lf. 

HINWEIS : Wenn der Gesamtimmunglobulingehalt kleiner als 0,5 g/dl ist, empfehlen wir das Serum mit Saline oder mit der zuvor 1/5 verdünnten 

Immunfixations-Verdünnungslösung niedriger zu vedünnen: z.B. 1/5 für die Spuren ELP, GAM, K und L (1 Teil Serum 4 Teile verdünntes Diluent oder 

physiologische Kochsalzlösung) und 1/2 (1 Teil Serum 1 Teil verdünnter Diluent oder physiologische Kochsalzlösung) für die Spuren Kappa frei und 

Lambda frei. 

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WICHTIG 

• Plasmaproben vermeiden. Das Fibrinogen ergibt eine Bande in der Nähe der Auftragsstelle, die mit monoklonalem Immunglobulin verwechselt 

werden könnte. 

• Urinproben enthalten mitunter hohe Salzkonzentrationen, was während der Migration zur Deformation des Gels und folglich zu verzerrten 

Migrationsmustern führen kann. Ist die Interpretation aufgrund derartiger Erscheinungen erschwert, sollte der Urin zur Entfernung der Salze 

dialysiert werden. 

• Proteolytische Urinproben können zu einer positiven Reaktion mit den Antiseren gegen freie Leichtketten führen. In diesem Fall kann ein über den 

Urin ausgeschiedenes Serumparaprotein sowohl beim trivalentem Antiserum als auch bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene 

Leichtketten sowie beim Antiserum gegen die entsprechende freie Leichtkette eine monoklonale Bande hinterlassen. 

• Eine Polymerisation der Bence Jones Proteine verringert im Allgemeinen die Sensitivität im Nachweis mit Antiserum gegen freie Leichtketten, da 

durch die Polymerisation die Epitope, die mit den Antiseren gegen freie Leichtketten reagieren, blockiert werden können. Wenn Bence Jones 

Proteine vermutet werden, deren Nachweis jedoch negativ war, sollte der Urin vor der Elektrophorese depolymerisiert werden: 100 µl Urin werden 

mit 5 µl einer ß-Mercaptoethanol-Verdünnung (1:10 Verdünnung mit physiologischer Kochsalzlösung) versetzt und aufgetragen. 

DURCHFÜHRUNG 

Das HYDRASYS System ist ein halbautomatisches Multiparameter-Gerät, das eine automatische Bearbeitung der HYDRAGEL Agarosegele in der 

nachstehenden Reihenfolge durchführt: Probenapplikation, elektrophoretische Migration, Inkubation mit Fixierlösung und Antiseren, Trocknen, Färben, 

Entfärben und Endtrocknen. Zu den manuellen Schritten gehört die Handhabung der Proben und Gele, der Auftrag der Fixierlösung und der Antiseren 

sowie die Bedienung des Geräts. 

DIE BEDIENUNGSANLEITUNG ZUM HYDRASYS SYSTEM AUFMERKSAM DURCHLESEN. 

I. VORBEREITUNG DER MIGRATION 

1. HYDRASYS einschalten. 

2. Bei Verwendung von HYDRAGEL 1 BENCE JONES oder HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 Proben) einen Applikator, für HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 Proben) zwei Applikatoren oder für HYDRAGEL 9 BENCE JONES drei Applikatoren, auf eine ebene Unterlage legen, 

dass die Nummern (Vertiefungen) nach oben zeigen (Abb. 1). 

- In jede Vertiefung des Applikators 10 µl Probe wie folgt geben. Das Füllen eines Applikators darf höchstens 2 Minuten betragen. 

| MIGRATIONS/IMMUNFIXATIONSSPUR | 

NUMMER DER VERTIEFUNG : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 PROBENNR. 1 ODER 3 2 3 4 5 6 7 PROBENNR. 2 ODER 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES PROBENNR. 1, 4 ODER 7 1 2 3 4 5 6 PROBENNR. 2, 5 ODER 8 7 8 9 10 11 12 

| PROBENNR. 3, 6 ODER 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

HINWEIS: Beim HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, werden die Nummern der Vertiefungen 1, 8 und 15 nicht verwendet ; sie sollten mit einem 

Filzschreiber markiert werden, um ein irrtümliches Befüllen zu vermeiden. 

- Den/die Applikator(en) mit den Zähnen nach oben in die feuchte Kammer legen (nur am Schutzrahmen für die Zähne anfassen). 

Hinweise hierzu finden Sie in der Packungsbeilage zur feuchten Kammer. 

- Die Proben nach dem Auftragen der letzten Probe 5 Minuten lang in die Zähne einziehen lassen. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen, und die Elektroden-/Applikatoren-Halter nach oben klappen. 

WARNHINWEIS: Die Abdeckung bei hochgestelltem Elektroden-/Applikatoren-Halter nicht schliessen! 

4. Im Gerätemenü für HYDRAGEL 1 BENCE JONES das Programm "1 BJ SM/DM", für HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 das Programm "2/4 BJ- 

UP SM/DM" oder für HYDRAGEL 9 BENCE JONES das Programm "9 BJ DM " aufrufen (an der Tastatur links). 

5. Die Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus der Packung nehmen. Die Perforation des Plastikfilms in die Stifte des Elektroden-Halters 

einführen. Die Plastikfolie muß dabei zum Applikator-Halter zeigen (siehe Abb. 2). 

6. Das Gel aus der Verpackung nehmen. 

- Ein dünnes Filterpapier vorsichtig und gleichmäßig auf die Oberfläche legen um überschüssige Feuchtigkeit zu entfernen. Das Filterpapier 

sofort wieder entfernen. 

WARNUNG: Das Filterpapier nicht zu lange auf dem Gel lassen, um ein Austrocknen des Gels zu verhindern. 

- 120 µl destilliertes oder deionisiertes Wasser beim HYDRAGEL 1 BENCE JONES oder 200 µl destilliertes oder deionisiertes Wasser beim 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 und beim HYDRAGEL 9 BENCE JONES, in das untere Drittel des Rahmens geben, der auf der Peltier- 

Platte des Migrationsmoduls aufgedruckt ist. 

- Das Gel (mit der Gelseite nach oben) an die untere Kante des aufgedruckten Rahmens anlegen (siehe Abb. 3). 

- Das Gel biegen und auf dem Wasser abrollen (siehe Abb. 3). Darauf achten, daß keine Luftblasen eingeschlossen werden, das Wasser 

unter der gesamten Gelplatte verteilt ist und das Gel am aufgedruckten Rahmen anliegt. 

7. Beide Halter nach unten klappen. In dieser Position dürfen die Pufferstreifen keinen Kontakt mit dem Gel haben. DIE HALTER NICHT MIT 

GEWALT BIS GANZ NACH UNTEN DRÜCKEN. 

8. Den/die Applikator(en) aus der feuchten Kammer nehmen. Dabei nur am Schutzrahmen anfassen. 

- Den Schutzrahmen für die Zähne entfernen. 

- Den/die Applikator(en) auf dem Halter einsetzen: 

- Bei HYDRAGEL 1 BENCE JONES oder HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 Proben), in Position Nr. 6, 

- Bei HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 Proben), in Position Nr. 3 und 9, 

- Bei HYDRAGEL 9 BENCE JONES, in Position Nr. 2, 6 und 10. 

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WICHTIG: Die auf dem/den Applikator(en) aufgedruckten Ziffern müssen immer zum Bediener zeigen (siehe Abb. 4). 

Zur Verbesserung der Reproduzierbarkeit des Probenauftrags immer den Applikator auf die linke Seite des Halters positionieren. 

9. Darauf achten, daß die Halter nach unten geklappt sind. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

10. Die Migration sofort starten. Dazu die grüne Pfeiltaste "START" auf der linken Seite der Tastatur drücken. 

WICHTIG: Darauf achten, daß die Lüftungsschlitze an der rechten Geräteseite nicht verdeckt sind. 

MIGRATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Die beiden Halter werden soweit gesenkt, daß die Pufferstreifen und der/die Applikator(en) in Kontakt mit der Geloberfläche kommen. 

• Der Probenapplikator-Halter wird angehoben. 

• Die Migration erfolgt beim HYDRAGEL 1 BENCE JONES unter Anlegen eines konstanten Gleichstromes von 10 W und beim HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4 unter Anlegen eines konstanten Gleichstromes von 20 W bis jeweils 42 Vh erreicht sind (ungefähr 9 Minuten) bei 20 °C, die durch das 

Peltier-Element aufrecht erhalten werden. Beim HYDRAGEL 9 BENCE JONES erfolgt die Migration unter Anlegen eines Gleichstromes von 20 W 

bis 36 Vh erreicht sind (nach etwa 7 Minuten), bei 20 °C, die durch das Peltier-Element aufrecht erhalten werden. 

• Der Elektroden-Halter wird angehoben und unterbricht dabei den Kontakt der Elektroden. 

• Ein akustisches Signal ertönt, und die Abdeckung des Migrationsmoduls wird entriegelt. Am Bildschirm wird folgende Meldung angezeigt: " AS". 

HINWEIS: Während der Migration bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

II. VORBEREITUNG DER IMMUNFIXATION 

Die dynamische Maske enthält eine farbige Markierung für den Reagenzienauftrag, ein Segment für die Antiseren, einen Segmenthalter, eine Führung 

und ein Reduzierelement für BENCE JONES 2 Gele (Abb. 5). 

Während der Migration die dynamische Maske wie folgt zusammensetzen: 

1. Die Führung auf eine ebene Oberfläche legen. 

WICHTIG: Bei der 2-Pronenanalyse ist es nötig das Reduzierelement in der Führung zu positionieren. 

2. Ein Antisera-Segment auf dem Segmenthalter anbringen (Abb. 6): 

- Das Antiserensegment im Winkel von 45° neigen und gegen die Plastikfedern des Segmenthalters positionieren. 

- Die beiden Elemente auseinanderziehen und das Segment einschwenken, um es in den beiden Nuten des Halters zu befestigen. 

WARNUNG: Sicherstellen dass das Segment korrekt im Segmenthalter positioniert ist. Die Haltestifte am Ende des Segments 

müssen in den Nuten des Halters festsitzen. 

3. Den Segmenthalter mit dem Antisera-Segment auf der Führung anbringen (Abb. 7). Anschließend die Farbcodierung für den 

Reagenzienauftrag auf den Segmenthalter legen (Abb. 8). 

4. Die Reagenzien wie folgt auftragen: 

- Segment mit 6 Antiseren-Vertiefungen für HYDRAGEL 1 BENCE JONES: 8 µl pro Vertiefung, 

- Segment mit 15 Antiseren-Vertiefungen für HYDRAGEL BENCE JONES 2/4: bei 2 Probenanalyse 8 µl / Vertiefung, 

bei 4 Probenanalyse 12 µl / Vertiefung, 

- Segment mit 18 Antiseren-Vertiefungen für HYDRAGEL 9 BENCE JONES: 8 µl pro Vertiefung. 

SPUR REAGENZ FARBE ELP Fixierlösung gelb GAM trivalentes Antiserum violett K Antiserum gegen (freie und gebundene) Kappa-Leichtketten grün L Antiserum gegen (freie und gebundene) Lambda-Leichtketten blau Kf Antiserum gegen freie Kappa-Leichtketten orange 

| Lf | Antiserum gegen freie Lambda-Leichtketten | rot | 

HINWEIS: Reagenzien sind farbig und die Farben sind auf dem Farbcode abgebildet, um ein korrektes Pipettieren der Antiseren zu erleichtern. 

WICHTIG: Nicht die Vertiefungen in Position 1, 8 und 15 auf dem Antiserensegment verwenden für HYDRAGEL BENCE JONES 2/4. 

- Die Reagenzien ohne Luftblasen in die Pipettenspitze aufziehen. 

- Die Reagenzien auftragen (siehe Abb. 9): 

- Die Pipette schräg im Winkel und ihre Spitze leicht gegen die Wandung der Vertiefungen halten, ohne den Boden der Vertiefung zu 

berühren. 

- Den Reagenztropfen in die Vertiefung spritzen. 

5. Die Farbcodierung entfernen. 

III. IMMUNFIXATION 

1. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen. 

2. Den/die Probenapplikator(en) entfernen und verwerfen. 

3. Beide Elektroden-/Applikator-Halter aufrichten, und die Pufferstreifen an den Plastikenden entfernen und verwerfen. 

- Den Applikatorrahmen entfernen. 

- Die Elektroden mit einem feuchten Tuch vorsichtig abwischen. 

- Das Gel im Migrationsmodul belassen. 

4. Die dynamische Maske zum Reagenzienauftrag wie folgt einsetzen (Abb. 10) ; 

- Die Metallstange auf die beiden unteren Haltestifte stecken (danach kann die Führung im Migrationsmodul verbleiben). 

- Die dynamische Maske auf die Metallstange schieben (rechte Klemme in die Nut der Stange). 

- Die dynamische Maske auf das Gel absenken. 

WICHTIG: Richten Sie die dynamische Maske mit eingelegtem Antisera-Segment zwischen den Markierungen für die Gelposition aus. 

5. Das Antisera-Segment auf der platzieren, sodass er zum Bediener zeigt. 

Das Segment am Griff auf der rechten Seite halten und auf kurz auf die Mitte des Segment-Halters drücken, sodass das Antisera-Segment 

mit dem Gel in Kontakt kommt. Beim Lösen des Drucks kommen die Reagenzien mit dem Gel in Kontakt (Abb. 11). 

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6. Sofort den Segmenthalter am rechten Griff langsam und stetig auf dem Gel einmal auf und ab bewegen um die Reagenzien aufzutragen. Die 

Auftragung sollte etwa 5 Sekunden betragen (Abb. 12). 

WARNUNG: Während dieses Schrittes die Schablone nur am Griff des Segmenthalters halten. Ein Berühren der Führung vermeiden. 

Nicht wiederholt auf den Druckpunk drücken, weil das zu Kreuzkontaminationen der Reagenzien führen kann. 

7. Die dynamische Maske aus dem HYDRASYS entfernen, den Segmenthalter entnehmen. 

Das benutzte Antisera-Segment verwerfen. Evtl. verbleibende Reagentienreste im Antisera-Segment beeinträchtigen das Testergebnis nicht. 

WARNUNG: Mit Antiserum befüllte Antiseren-Segmente vorsichtig behandeln. 

8. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

9. Die Inkubation sofort durch drücken der Starttaste mit dem grünen Pfeil auf der linken Seite der Tastatur starten. Auf dem Bildschirm wird 

folgende Meldung angezeigt: "[INKUBATION]". 

IMMUNFIXATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Inkubation bei 20 °C für 5 Minuten, kontrolliert durch den Peltier-Element. 

• Ein akustisches Signal ertönt und die Abdeckung wird entriegelt. Folgende Meldung blinkt auf dem Bildschirm: " PAP.". 

HINWEIS: Während des Inkubationsschritts bleibt die Abdeckung verriegelt. 

IV. ABBLOTTEN DES GELS 


2. Ein dickes Filterpapier auf das Gel legen: 

Den unteren Rand des Filterpapiers am Rand des Gels ausrichten, (es im Winkel von 45° neigen) und es auf das Gel herunterlassen. 

WICHTIG: Die gesamte Oberfläche des Filterpapiers andrücken, sodass ein perfektes Anliegen sichergestellt ist. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmodul schließen. 

4. Das Abblotten durch drücken der Starttaste mit den grünen Pfeilen auf der linken Seite der Tastatur starten. 

ABBLOTTEN – BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN SCHRITTE 

• Abblotten bei 40 °C für 3 Minuten, kontrolliert durch den Peltier-Element. 

Folgende Meldung erscheint auf dem Bildschirm: "[BLOTTEN]". 

• Ein akustisches Signal ertönt. 

Folgende Meldung erscheint auf dem Bildschirm: "❊ PAP.". 

V. TROCKNEN DES GELS 


2. Das Filterpapier herausnehmen. Das Gel im Migrationsmodul belassen. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

4. Das Verfahren starten. Dazu die "START"-Taste (grüne Pfeiltaste auf der linken Seite der Tastatur) drücken. 

TROCKNEN - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Das Trocknen erfolgt 6 Minuten lang bei 50 °C (durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten). 

• Ein akustisches Signal ertönt, und die Abdeckung des Migrationsmoduls wird entriegelt. Bis zum Öffnen der Abdeckung wird die Temperatur auf 

50 °C gehalten. "Migration temp maintained" wird auf dem Bildschirm angezeigt. 

HINWEIS: Während des Trocknens bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

VI. VORBEREITUNG DER GELBEARBEITUNG 

1. Die Abdeckung öffnen. 

2. Das getrocknete Gel zur weiteren Bearbeitung herausnehmen. 

3. Den Gel-Halter öffnen und flach hinlegen. Das Gel (mit der Gelseite nach oben) in die Ausfräsung des Gel-Halters einsetzen, und den Gel- 

Halter schließen. Darauf achten, daß das Gel im Halter korrekt positioniert ist (siehe Abb. 13). 

4. Den Gel-Halter in das Gelbearbeitungs-/Färbemodul einsetzen. 

WICHTIG: Vor dem Start des Gelbearbeitungs-/Färbeprogramms überprüfen, daß: 

- der Waschlösungsbehälter mindestens 400 ml Waschlösung enthält ; 

- der Färbelösungsbehälter 300 ml Färbelösung enthält ; 

- der Entfärbelösungsbehälter mindestens 1 liter Entfärbelösung enthält ; 

- der Abfallbehälter leer ist. 

Hinweise zum Anschluß an die Reagenzkanäle werden am Monitor des Gerätes angezeigt (drücken Sie dazu die Taste KANAELE). 

WICHTIG: Nicht vergessen, die nicht benötigten Kanäle zu blockieren. 

5. Im Gerätemenü das Färbeprogramm "IF ACID VIOLET" wählen, und den Vorgang durch Drücken der "START"-Taste (grüner Pfeil auf der 

rechten Seite der Tastatur) starten. 

Gedurende de kleur-, onkleur- en droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

HINWEIS: 

- Die Temperatur der Peltier-Platte sinkt nach dem Öffnen (innerhalb von 5 Minuten) auf 20 °C. Danach kann die nächste Migration durchgeführt 

werden. 

- Den Probenapplikator-/Elektroden-Halter wieder einsetzen. 

- Die Peltier-Platte mit einem weichen, feuchten Papiertuch abwischen. 

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VII.ABSCHLUSS DER GELBEARBEITUNG 

1. Den Gel-Halter aus dem Färbemodul nehmen, die Bügel nach oben klappen und das getrocknete Gel entnehmen. 

2. Bei Bedarf die Rückseite (den Plastikfilm) der trockenen Folie mit einem weichen, feuchten Papiertuch reinigen. 

HINWEIS: Die Migrationslänge kann bei Gelen mit 2 oder 3 Analysereihen unterschiedlich sein, ohne jegliche Beeinträchtigung der Leistung. 

ERGEBNISSE 

Interpretation 

Das Vorhandensein von Bence-Jones-Protein in Urin ist gekennzeichnet durch: 

- eine monoklonale Bande bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Kappa- oder Lambda-Leichtketten (K- oder L-Spur), 

- eine monoklonale Bande bei einem der Antiseren gegen freie Kappa- oder Lambda-Leichtketten (KF- oder LF-Spur) und 

- das Ausbleiben der Reaktion mit dem trivalenten Antiserum (GAM-Spur). 

Ausscheidung von Serumparaproteinen im Urin ohne Bence-Jones-Protein ist gekennzeichnet durch: 

- eine monoklonale Bande beim trivalenten Antiserum, 

- die gleiche Bande bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten und 

- das Ausbleiben der Reaktion mit dem Antiserum gegen die entsprechende freie Leichtkette. 

Über den Urin ausgeschiedenes Serumparaprotein assoziiert mit Bence-Jones-Protein ist gekennzeichnet durch: 

- eine monoklonale Bande beim trivalenten Antiserum, 

- zwei Banden bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten (oder mitunter durch eine Bande bei einem der Antiseren 

gegen freie und gebundene Leichtketten sowie eine Bande bei den anderen Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten), 

- eine Bande bei einem der Antiseren gegen freie Leichtketten. Diese Bande wandert in der Regel nicht bis zur gleichen Höhe wie die Bande 

beim trivalenten Antiserum. 

Bence-Jones-Protein in verschiedenen Polymerisationsformen ist gekennzeichnet durch: 

- das Ausbleiben der Reaktion mit dem trivalenten Antiserum, 

- mehrere Banden bei einem der Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten, 

- die gleichen Banden beim Antiserum gegen die entsprechenden freien Leichtketten 

Interferenzen und Einschränkungen 

Die Antisera für die Verwendung mit der dynamischen Maske sind speziell auf diese abgestimmt. Die Verwendung von anderen Antiseren kann Ihre 

Ergebnisse beeinträchtigen. 

Bedingt durch die Auflösungs- und Sensitivitätsgrenzen der Zonenelektrophorese ist es möglich, dass einige monoklonale Komponenten mit dieser 

Methode nicht nachgewiesen werden können. 

Fehlersuche 

Kommt es trotz sachgerechter Lagerung und Vorbereitung der Materialien und Beachtung der Verfahrensbeschreibung zum Versagen des Tests, 

wenden Sie sich bitte an den SEBIA Kundendienst. 

Sicherheitsdatenblätter zu den Kit-Reagenzien sowie Informationen zur Abfallbeseitigung sind bei SEBIA GmbH, Fulda erhältlich. 

LEISTUNGSSPEZIFIKATIONEN 

Reproduzierbarkeit innerhalb eines Laufs und Spezifität 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES Verfahren 

Die Reproduzierbarkeit innerhalb eines Gels wurde mit 3 verschiedenen pathologischen Proben gemessen: zwei Urinproben mit Bence Jones 

Proteinen (freie Kappa- und Lambda- Leichtketten) und eine Serumprobe mit freier Kappa-Leichtkette. 

Jede Probe wurde 4 mal mit 2 Chargen von HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 Gelen mit dem Säureviolettfärbeverfahren analysiert. 


Die Reproduzierbarkeit innerhalb eines Gels wurde mit drei verschiedenen pathologischen Proben gemessen: zwei Urinproben mit Bence Jones 

Proteinen (freie Kappa- und Lambda- Leichtketten) und eine Serumprobe mit freier Kappa-Leichtkette. 

Jede Probe wurde 9 mal mit 2 Chargen von HYDRAGEL 9 BENCE JONES Gelen, mit dem Säureviolettfärbeverfahren gemessen. 

Alle Wiederholungen ergaben innerhalb einer Charge und innerhalb verschiedener Chargen identische Ergebnisse und entsprachen dem jeweils 

erwarteten Probentyp. 

Die Bence Jones Proteine wurden korrekt bei jeder Probe und auf allen Gelen identifiziert. Es gab keine falsch positiven und keine Unterschiede 

zwischen den Wiederholungen. 

Reproduzierbarkeit von Lauf zu Lauf und Spezifität 


Die Reproduzierbarkeit von Lauf zu Lauf wurde mit 4 verschiedenen pathologischen Proben untersucht: 3 Urinproben und eine Serumprobe mit Bence 

Jones Proteinen, freien Kappa- und Lambda-Leichtketten. 

Diese Proben wurden auf 10 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 Gelen von 3 verschiedenen Chargen mit dem Säureviolettfärbeverfahren analysiert. 


Reproduzierbarkeit von Gel zu Gel wurde mit 9 verschiedenen pathologischen Urin- und Serumproben mit Bence Jones Proteinen, freien Kappa- und 

Lambda-Leichtketten untersucht. 

Diese Proben wurden auf 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES von 3 verschiedenen Chargen mit dem Säureviolettfärbeverfahren analysiert. 

Alle Wiederholungen von Lauf zu Lauf ergaben identische Resultate und entsprachen dem jeweils erwarteten Probentyp. 

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Richtigkeit 

Zwanzig Serumproben und sechsunddreißig Urinproben mit Bence Jones Proteinen wurden zusammen mit fünf normalen Proben mit dem 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES Kit und einem vergleichbaren kommerziell erhältlichen Immunfixationsverfahren untersucht. 

Die Ergebnisse stimmten untereinander exakt überein. 

Sensitivität 

Von zwei pathologischen Urinproben, die beide Bence Jones Proteine aufwiesen wurden serielle Verdünnungen hergestellt und mit dem HYDRAGEL 

4 BENCE JONES Verfahren mit Antiseren gegen freie und gebundene Kappa- und Lambda-Leichtketten und mit Antiseren gegen freie Kappa- und 

Lambda-Leichtketten untersucht. 

Die niedrigste Nachweisgrenze für Bence Jones Proteine lag bei den Antiseren gegen freie und gebundene Leichtketten bei 3 mg/l und bei den 

Antiseren gegen freie Leichtketten bei 12 mg/l. 

Die Nachweisgrenze mit Antiseren gegen freie Kappa- und Lambda-Leichtketten kann variieren, aber sie liegt generell unter 5 mg/dl. 

LITERATUR 



1994, 397 pp. 

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GEBRUIKSAANWIJZING 

De HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES en de HYDRAGEL 9 BENCE JONES kits zijn 

ontwikkeld voor de detectie van Bence Jones proteïnen, of vrije lichte ketens (kappa of lambda) in menselijke urine of menselijk serum, door middel 

van immunofixatie en elektroforese op een alkalisch gebufferde (pH 9,1) agarose-gel. Zij worden samen met het semi-geautomatiseerde HYDRASYSsysteem 

gebruikt om alle stappen uit te voeren die nodig zijn om gels gereed te maken voor interpretatie. De proteïnen van het monster ondergaan 

elektroforese en immunofixatie door antisera met de volgende specificiteiten: (1) een trivalent antiserum: anti-gamma (Ig G), anti-alfa (Ig A) en 

anti-mu (Ig M) zware ketens, (2) anti-kappa, vrije en gebonden lichte ketens, (3) anti-lambda vrije en gebonden lichte ketens, (4) anti-kappa, vrije lichte 

ketens, en (5) anti-lambda, vrije lichte ketens. Na immunofixatie worden de geprecipiteerde proteïnen met zuurviolet gekleurd. De overtollige kleurstof 

wordt met een zure oplossing verwijderd. 

Iedere agarosegel is bedoeld voor het testen van: 

- één monster met de HYDRAGEL 1 BENCE JONES-kit, 

- twee monsters met de HYDRAGEL 2 BENCE JONES-kit, 

- vier monsters met de HYDRAGEL 4 BENCE JONES-kit, 

- negen monsters met de HYDRAGEL 9 BENCE JONES-kits. 

Voor gebruik bij in vitro diagnostiek. 

PRINCIPE VAN DE TEST 

Abnormale banden in elektroforetische patronen, vooral die in de bèta-globulinen- en gamma-globulinenzones, kunnen altijd monoclonaal zijn en 

zodoende een indicatie leveren voor gammopathieën. Om deze abnormale banden te kunnen identificeren wordt de techniek van de immunofixatie 

toegepast. 

Immunofixatie-elektroforese is een techniek waarbij een proteïne na elektroforese in situ wordt gebonden door de vorming van een onoplosbaar 

complex met corresponderende antisera. 

Het wordt in vier fasen uitgevoerd: 

1. Separatie van proteïnen door elektroforese op agarose-gel. 

2. Fixatie en immunoprecipitatie van de proteïnen na elektroforese: de fixeeroplossing en de antisera worden direct op het geloppervlak aangebracht 

op de juiste elektroforetische-migratiesporen. De fixeeroplossing en de antisera trekken in de gel terwijl zij respectievelijk al de proteïnen en de 

corresponderende antigenen precipiteren. 

3. De niet geprecipiteerde, oplosbare proteïnen worden door middel van deppen en spoelen van de gel verwijderd. De geprecipiteerde proteïnen 

blijven vastzitten in de gel. 

4. De geprecipiteerde proteïnen worden door middel van kleuring zichtbaar gemaakt. De immuno-geprecipiteerde banden worden vervolgens 

vergeleken met de corresponderende abnormale banden die werden waargenomen in het elektroforetisch patroon van het serummonster. 

Om detectie en identificatie van de verdachte monoclonale componenten mogelijk te maken ondergaan de monsters simultaan in zes tracks 

elektroforese. Na de elektroforese dient één track (ELP) als referentie, en deze geeft het elektroforetisch patroon van de monsterproteïnen te zien. 

De overige vijf tracks tonen de monoclonale component(en) uit hun reactie(s), of het ontbreken daarvan, met het trivalente antiserum anti-zware ketens 

(gamma, alfa en mu), en antisera tegen kappa en lambda (vrije en gebonden) lichte ketens en kappa en lambda vrije lichte ketens. 

Deze eenvoudige en snelle methode levert een helder en gemakkelijk te interpreteren beeld op. 

REAGENTIA EN MATERIALEN BIJGELEVERD BIJ DE HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES EN HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT PROD. NR. 4321 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT PROD. NR. 4322 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT PROD. NR. 4324 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KITS PROD. NR. 4329 PROD. NR. 4383* Agarose-gels (klaar voor gebruik) 10 gels 10 gels 80 gels Bufferstrips (klaar voor gebruik) 10 pakjes van 2 stuks 10 pakjes van 2 stuks 80 pakjes van 2 stuks Zuurviolet kleurstof (voorraadoplossing) 1 flesje van 75 ml 1 flesje van 75 ml 8 flesjes van 75 ml Fixeeropossing (klaar voor gebruik) 1 flesje van 2,9 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke gamma, alfa, mu zware ketens (trivalent, driewaardig) (klaar voor gebruik) 1 flesje van 2,0 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke kappa vrije en gebonden lichte ketens (klaar voor gebruik) 1 flesje van 2,0 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke lambda vrije en gebonden lichte ketens (klaar voor gebruik) 1 flesje van 2,0 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke kappa vrije lichte ketens (klaar voor gebruik) 1 flesje van 2,0 ml Van zoogdieren afkomstige immuunglobulinen anti menselijke lambda vrije lichte ketens (klaar voor gebruik) | | | 1 flesje van 2,0 ml Applicators (klaar voor gebruik) |1 pakje van 10 stuks |2 pakjes van 10 stuks| 24 pakjes van 10 stuks |3 pakjes van 10 stuks| Antisera-segmenten (klaar voor gebruik) 1 pakje van 10 stuks 1 pakje van 10 stuks 8 pakjes van 10 stuks Filterpapier - Dun 

| 1 pakje van 10 velletjes 1 pakje van 10 velletjes 8 pakje van 10 velletjes Filterpapier - Dik | 1 pakje van 10 velletjes | 1 pakje van 10 velletjes | 8 pakje van 10 velletjes | 


OPMERKING: De fixeeroplossing en de antisera worden los van de kits geleverd, behalve bij de MAXI-KITS (zie BENODIGDE MAAR NIET 

BIJGELEVERDE REAGENTIA). 

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SEBIA INSTRUCTIEBLAD - Nederlands


VOOR OPTIMALE RESULTATEN 

Onderdelen uit dezelfde kit dienen altijd samen te worden gebruikt en in overeenstemming met de instructies op de bijsluiter. 

LEES DE GEBRUIKSAANWIJZING ALTIJD ZORGVULDIG DOOR. 

1. AGAROSE-GELS 

Voorbereiding 

De Agarose-gels zijn klaar voor gebruik. Iedere gel bevat: agarose, 8 g/l ; tris-barbital buffer, pH 9,1 ± 0,1 ; in de gebruikte concentraties niet schadelijke 

toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De Agarose-gels bevatten 0,31 % barbital en 0,34 % natriumbarbital. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! 

Gebruik 

Draagmedium voor elektroforese en immunofixatie van proteïnen. 

Opslag, stabiliteit en tekenen van verval 

De gels moeten horizontaal worden opgeslagen in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur (15 tot 30 °C) of gekoeld (2 tot 8 °C) 

bewaard worden. De gels zijn stabiel tot de houdbaarheidsdatum die op de verpakking, of op het verpakkingslabel van de gel, staat aangegeven. (De 

pijl op de voorzijde van de verpakking moet naar boven wijzen.) Vermijd opslag dicht bij een raam of een warmtebron. Vermijd belangrijke 

temperatuurwisselingen tijdens de opslag. NIET INVRIEZEN. 

Verwijder de gel wanneer : 

(I) zich kristallen of neerslag op het oppervlak van de gel vormen, of wanneer de textuur van de oppervlakte van de gel erg zacht wordt (dit geeft 

aan dat de gel bevroren is geweest) ; 

(II) er bacteriële of schimmelgroei wordt waargenomen ; 

(III) er een abnormale hoeveelheid vloeistof in de gelbox aanwezig is (wijst er op dat afscheiding van buffer uit de gel heeft plaatsgevonden tijdens 

onjuiste opslagomstandigheden). 

2. GEBUFFERDE STRIPS 

Voorbereiding 

De gebufferde strips zijn gebruiksklaar. Elke strip bevat: tris-barbital buffer, pH 9,1 ± 0,3 ; natriumazide, in de gebruikte concentraties niet schadelijke 


WAARSCHUWING: De bufferstrips bevatten 0,92 % barbital, 1,03 % natriumbarbital en 0,30 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij 

abusievelijke inname dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Vermijd contact met zuren, lood of koper aangezien deze stoffen 

explosieve of toxische verbindingen met natriumazide aangaan. Na gebruik altijd met ruim water spoelen. 

Gebruik 

Gebufferde strips fungeren als elektroforese bufferreservoir en verzekeren contact tussen gel en elektrodes. 


Bewaar de gebufferde strips horizontaal in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur of in de koeling. (De pijl aan de voorkant van 

de kitdoos dient omhoog te wijzen.) 

De strips blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of de etiketten van de verpakking van 

de gebufferde strips. 

NIET INVRIEZEN. 

Gooi de gebufferde strips weg als de verpakking geopend is en de strips uitdrogen. 

3. ZUURVIOLET KLEURSTOF 

Voorbereiding 

Elk flesje kleurstofconcentraat wordt verdund tot 300 ml met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. Na verdunning bevat de werkzame 

kleuringoplossing: zuuroplossing pH ≈ 2 ; zuurviolet, 2 g/l ; ethyleenglycol, 3.25 % ; additieven, in de gebruikte concentraties niet schadelijke 


WAARSCHUWING : Inname is schadelijk. 

Gebruik 

Voor het kleuren van gels na elektroforetische proteïnenscheiding en immunofixatie. 

BELANGRIJK: De kleuringsoplossing is bedoeld voor het kleuren van slechts 10 gels. Vervang de oplossing na 10 kleuringsfases. 


Zowel de concentraat- als de verdunde kleuroplossingen bij kamertemperatuur of gekoeld in afgesloten flessen opslaan om verdamping te voorkomen. 

De concentraat-kleurstofoplossing blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de verpakking of de labels op de flesjes met 

kleuroplossing. De verdunde kleuroplossing blijft gedurende 6 maanden stabiel. 

4. PAKKET MET ANTISERA EN FIXEEROPLOSSING (bij productnummer 4383) 

4.1 ANTISERA 

Voorbereiding 

Klaar voor gebruik. Alle antisera zijn afkomstig van zoogdieren en zijn totaal anti menselijke immuunglobulinen. Voor eenvoudige identificatie van 

antisera en als hulpmiddel bij het toezien op de applicatie ervan worden de antisera gekleurd met duidelijk te onderscheiden, niet-schadelijke 

kleurstoffen die overeenkomen met de kleur van het etiket op het flesje. Wanneer antiserum een lichte vertroebeling vertoont, kunt u het flesje 

antiserum gedurende ten minste 10 minuten bij kamertemperatuur laten staan. Dit zou voldoende moeten zijn om de oplossing weer helder te krijgen. 

Blijft de vertroebeling evenwel bestaan, dan zal dit desondanks geen enkel effect hebben op de immunologische reactie. In het geval van onoplosbare 

precipitaten geldt de aanbeveling de antisera gedurende 5 minuten te centrifugeren bij 3000 toeren per minuut. 

Gebruik 

Voor immunofixatie van de elektroforetisch behandelde proteïnen. 

Antisera kunnen afkomstig zijn van verschillende diersoorten. De inhoud van twee flesjes antisera mag dan ook NOOIT vermengd worden, zelfs niet 

wanneer ze dezelfde specificiteit hebben, en bij het verwisselen van flesjes antiserum dient ALTIJD het pipetpuntje vervangen te worden. 

BELANGRIJK: Opdat de verschillende reagentia niet met elkaar in contact zouden komen, moet men na gebruik de dop terug op de respectievelijke 

flacon zetten. 

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Bewaar de antisera in de koeling (bij een temperatuur van 2 tot 8 °C). Ze blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op 

de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes antisera. 

OPMERKING: Tijdens transport kunnen de antisera gedurende 15 dagen ongekoeld bewaard worden (bij een temperatuur van 15 tot 30 °C) zonder 

nadelige effecten op de prestaties. 

4.2. FIXEEROPLOSSING 

Voorbereiding 

De fixeeroplossing is klaar voor gebruik. Het bevat: een zure oplossing ; toevoegingen, niet schadelijk in de gebruikte concentraties maar noodzakelijk 

voor optimale prestaties. Voor eenvoudige identificatie en als hulpmiddel bij het toezien op de applicatie is de fixeeroplossing gekleurd met een nietschadelijke 

kleurstof. 

Gebruik 

Voor het fixeren van elektroforetisch gescheiden proteïnen in het referentiespoor (ELP). 

BELANGRIJK: Opdat de verschillende reagentia niet met elkaar in contact zouden komen, moet men na gebruik de dop terug op de respectievelijke 

flacon zetten. 


Bewaar de fixeeroplossing bij kamertemperatuur of in de koeling. Het blijft stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de 

verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes fixeeroplossing. 

Fixeeroplossing dient vrij te zijn van precipitaat. 

5. APPLICATORS 

Gebruik 

Voorgesneden applicators, voor eenmalig gebruik, voor het aanbrengen van de monsters op de gel. 

Opslag 

Bewaar de applicators op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

6. ANTISERA-SEGMENTEN 

Gebruik 

Gekleurde segmenten voor eenmalig gebruik voor het aanbrengen van fixeeroplossing en antisera op de gel voor immunofixatie. 

WAARSCHUWING: Segmenten met antisera dienen met uiterste zorgvuldigheid behandeld te worden. 

7. FILTERPAPIER - DUN 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het absorberen van overtollige vloeistof van het oppervlak van de gel na elektroforese, het 

verwijderen van overtollig reagens na incubatie en het opdeppen van niet-geprecipiteerde proteïnen na de immunofixatiefase. 

Opslag 

Bewaar de dunne velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

8. FILTERPAPIER - DIK 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het opdeppen van niet-geprecipiteerde proteïnen na de immunofixatiefase. 

Opslag 

Bewaar de dikke velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

BENODIGDE, NIET BIJGELEVERDE REAGENTIA 

1. PAKKET MET ANTISERA EN FIXEEROPLOSSING (voor de kits met de nummers 4321, 4322, 4324 en 4329) 

Het pakket met antisera en fixeeroplossing, GAM, K, L (anti-gamma, alfa, mu zware ketens, anti-kappa vrije en gebonden lichte ketens en anti-lambda 

vrije en gebonden lichte ketens), SEBIA, productnummer 4335, bevat 3 flesjes antisera en 1 flesje fixeeroplossing, elk met een inhoud van 1 ml. Deze 

zijn specifiek bedoeld voor de immunofixatieprocedure met het dynamisch masker. 

1.1 ANTISERA 

Zie de voorgaande paragraaf 4.1. 

1.2 FIXEEROPLOSSING 


2. ANTISERAPAKKET VOOR VRIJE LICHTE KETENS (voor de kits met de nummers 4321, 4322, 4324 en 4329) 

Het pakket antisera, anti-kappa vrije lichte ketens en anti-lambda vrije lichte ketens, SEBIA, productnummer 4336, bevat 2 flesjes antisera, elk met 

een inhoud van 1 ml. Deze zijn specifiek bedoeld voor de immunofixatieprocedure met het dynamisch masker. 


3. ONTKLEURINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Elk flesje ontkleuringsconcentraat (SEBIA, prod. nr. 4540, 10 flesjes, 100 ml elk) wordt verdund tot 100 liter met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Het is praktisch om een verdunning van een klein deel van het concentraat aan te maken, bijvoorbeeld 5 ml concentraat te verdunnen tot 5 liter. Na 

verdunning bevat de ontkleuringsoplossing: citroenzuur, 0,5 g/l. 

Gebruik 

Voor het ontkleuren van gels, d.w.z. het verwijderen van overtollige en achtergrondkleur uit de gels. 

Voor het spoelen van het kleurcompartiment na de wasstap. 

Giet om de zuurgraad van de vlekkenoplosser te neutraliseren 15 mL van een 50 % Sodium Hydroxyde-oplossing in de lege afvalbak. 

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De concentraat-ontkleuringsoplossing is stabiel bij kamertemperatuur of gekoeld tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de verpakking of 

de labels op de flesjes met ontkleuringsoplossing. NIET INVRIEZEN. De verdunde ontkleuringsoplossing is, in een afgesloten fles en bij 

kamertemperatuur, gedurende 1 week stabiel. Voeg geen natriumazide toe. 

Verwijder de verdunde ontkleuringsoplossing zodra er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting 

met microben. 

Om te voorkomen dat micro-organismen zich kunnen verspreiden in de verdunde ontkleuringsoplossing wanneer deze langer dan een week bewaard 

moet worden, kunt u er 5 µL/dL ProClin 300 aan toevoegen. 

De verdunde, ProClin bevattende ontkleuringsoplossing blijft, indien bewaard in een afgesloten fles bij kamertemperatuur of in de koeling, stabiel tot 

aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes ontkleuringsoplossing. 

4. HYDRASYS WASOPLOSSING 

Voorbereiding 

Ieder flesje geconcentreerde HYDRASYS Spoeloplossing (SEBIA, prod. nr. 4541, 10 flesjes, 80 ml elk) wordt verdund tot 5 liter met gedestilleerd of 

gedeïoniseerd water. 

Na verdunning bevat de spoeloplossing: alkalische buffer, pH 8,8 ± 0,3 ; natriumazide. 

WAARSCHUWING: De geconcentreerde spoeloplossing bevat 0,625 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Natriumazide kan explosieve of giftige verbindingen aangaan met zuren, lood of 

koper. Na gebruik altijd spoelen met ruime hoeveelheden water. 

Gebruik 

Voor het spoelen van het hydrasys kleuringscompartiment. Gebruik deze oplossing periodiek, d.w.z. als het instrument dagelijks gebruikt wordt, spoel 

het kleuringscompartiment dan wekelijks. 

Voor verdere instructies met betrekking tot het gebruik wordt u verwezen naar de bijsluiter in de verpakking. 


De geconcentreerde oplossing en de verdunde oplossing in gesloten flessen bewaren bij kamertemperatuur of gekoeld. De oplossingen blijven stabiel 

tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de flesjes met spoeloplossing. Ruim de spoeloplossing op zodra hij van uiterlÿk verandert, 

bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

5. FYSIOLOGISCHE ZOUTOPLOSSING 

Voorbereiding 

Maak een 0,15 M (9 g/l) NaCl oplossing met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Gebruik 

Voor het spoelen van rode bloedcellen. 


Bij kamertemperatuur of gekoeld opslaan. Na 3 maanden verwijderen, of wanneer er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld troebeling als 

gevolg van besmetting met microben. Voor langere opslagperiodes moet natriumazide worden toegevoegd, 1 g/l. 

BENODIGDE MAAR NIET BIJGELEVERDE APPARATUUR EN ACCESSOIRES 

1. HYDRASYS-systeem SEBIA, productnummer 1210 of productnummer 1211. 

2. Micropipetteerapparaat, handmatig of automatisch, zoals bijvoorbeeld HYDRAplus SEBIA, productnummer 1215, voor een alternatieve manier om 

de monsterapplicators of antiserasegmenten te vullen. 

3. Natte opslagkamer, productnummer 1270, bijgeleverd bij HYDRASYS. 

4. Reservoir-kit, bijgeleverd bij HYDRASYS. 

5. Malgeleidestang, SEBIA, bijgeleverd bij HYDRASYS. 

6. Dynamisch masker, SEBIA, productnummer 1255. 

7. Pipetten: 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl en 200 µl. 

MONSTERS VOOR ANALYSE 

Verzameling en opslag van monsters 

• De analyse wordt over het algemeen op verse urine uitgevoerd. Indien nodig kunnen urines tot maximaal één week bewaard worden bij een 

temperatuur van 2 tot 8 °C. Voor langere opslagperiodes kunt u urinemonsters in ingevroren toestand bewaren. Invriezen met HEPES 0,1 M 

(pH 6,75) en/of natriumazide, 0,02 g/dl zorgt voor verbetering van de opslagstabiliteit. Ingevroren urines blijven ten minste één maand stabiel. 

Ontdooide monsters kunnen lichte applicatiesporen vertonen als gevolg van proteïnedenaturatie. 

BELANGRIJK: Vermijd boorzuur als houdbaarheidsmiddel. 

• Bij de analyse van sera moeten deze volgens erkende procedures zoals toegepast in klinische laboratoria worden verzameld. De monsters kunnen 

gekoeld (bij 2 tot 8 °C) een week bewaard worden. Voor langere opslagperiodes kunnen de monsters ingevroren worden. Ingevroren sera blijven 

gedurende ten minste een maand stabiel. Ontdooide monsters kunnen, bij het punt van applicatie, geringe sporen te zien geven als gevolg van 

denaturatie van proteïnen of lipoproteïnen. 

Voorbereiding van het monster 

Urines 

De analyse wordt op niet-geconcentreerde urines uitgevoerd. Het detectieniveau van Bence Jones proteïne is 50 mg/l. Om een grotere gevoeligheid 

te bereiken moeten de monsters naar behoefte geconcentreerd worden. 

LET OP: Bij troebele urinemonsters (al dan niet geconcentreerd) wordt aanbevolen de hiervoor verantwoordelijke deeltjes te elimineren door middel 

van centrifugatie van de monsters (gedurende 10 minuten bij 3000 toeren per minuut) dan wel door middel van filtratie (op een filter van 0,45 µm) 

teneinde een goede verspreiding te realiseren op de applicators. 

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Sera 

Behalve de urine dient ook het serum van de patiënt te worden getest op Bence Jones-proteïnen. 

Verdun het serum in een fysiologische zoutoplossing of in een oplosmiddel voor immunofixatie dat van tevoren is verdund in de verhouding 1/4 (1 deel 

oplosmiddel, 3 delen gedestilleerd of gedeïoniseerd water), 1/10 voor ELP, GAM, K en L sporen (1 deel serum, 9 delen verdund oplosmiddel of 

fysiologische zoutoplossing) en 1/3 (1 deel serum, 2 delen verdund oplosmiddel of fysiologische zoutoplossing) voor Kf en Lf sporen. 

OPMERKING : Als het totale immuunglobulineniveau < 0,5 g/dl is, wordt aanbevolen lagere verdunningen te gebruiken van het serummonster in 

fysiologische zoutoplossing of in verdunningsmiddel voor immunofixatie dat van tevoren is verdund in de verhouding 1/4. Verdun bijvoorbeeld het 

serum in de verhouding 1/5 voor ELP, GAM, K en L sporen (1 deel serum, 4 delen verdund verdunningsmiddel of fysiologische zoutoplossing) en 1/2 

(1 deel serum, 1 deel verdund verdunningsmiddel of fysiologische zoutoplossing) voor Kf en Lf sporen. 

Voor een analyse van Ig D en/of Ig E hanteert u dezelfde verdunningen als voor kappa en lambda vrije en gebonden lichte ketens. 

BELANGRIJK 

• Vermijd plasmamonsters. Fibrinogeen levert een band op die dicht bij het punt van applicatie ligt en voor een monoclonale immunoglobuline 

gehouden kan worden. 

• Sommige urinemonsters bevatten hoge concentraties zout. Dit kan aanleiding geven tot deformatie van de gel en zo tot vervorming van de 

migratieprofielen. Als een dergelijke vervorming interpretatie onnauwkeurig maakt, dan moet de urine gedialyseerd worden om de zouten te 

verwijderen. 

• Geproteolyseerde urines kunnen aanleiding geven tot een positieve reactie met de anti-vrije lichte keten antisera. In dit geval kan een serum 

paraproteïne dat na eliminatie in urine komt een monoclonale band laten zien met het trivalent antiserum en met een van de vrije en gebonden 

antisera en met het corresponderende vrije lichte keten antiserum. 

• Polymerisatie van Bence Jones proteïnen verlaagt over het algemeen de gevoeligheid van de detectie met de anti vrije lichte ketens antisera, want 

de polymerisatie kan de epitopen blokkeren die normaal reageren met anti vrije lichte keten antisera. Wanneer er geen detectie wordt bereikt en 

het vermoeden bestaat dat er sprake is van Bence Jones proteïnen, voer dan voorafgaand aan de elektroforese een depolymerisatie uit, op de 

volgende manier: meng 100 µl urine met 5 µl ß-mercapto-ethanol in een verdunning van 1:10 met fysiologische zoutoplossing, en breng dit aan. 

PROCEDURE 

Het HYDRASYS systeem is een semi-automatisch multiparameter-instrument. Tot de geautomatiseerde stappen behoort bewerking van HYDRAGEL 

agarose-gels in de volgende volgorde: applicatie van de monsters, elektroforetische migratie, incubatie met fixeeropossing en antisera, drogen, 

kleuren, ontkleuren en de laatste droogfase. Tot de handmatige stappen behoren de voorbereiding van monsters en gel, de applicatie van fixeermiddel 

en antisera, en het in werking stellen van het instrument. 

LEES HET HYDRASYS-INSTRUCTIEHANDBOEK NAUWKEURIG. 

I. MIGRATIE 

1. Schakel het HYDRASYS instrument in. 

2. Plaats één applicator voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES of HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 monsters), twee applicators voor HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 monsters) of drie applicators voor HYDRAGEL 9 BENCE JONES op een vlakke ondergrond met de holtenummers met 

de goede kant naar boven (Fig. 1). 

- Breng 10 µl monsterstof als volgt aan in de applicatorholtes. Vul alle applicators binnen 2 minuten. 

| MIGRATIE / IMMUNOFIXATIESPOOR | 

HOLTE Nr. : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 MONSTER Nr. 1 OF 3 2 3 4 5 6 7 MONSTER Nr. 2 OF 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES MONSTER Nr. 1, 4 OF 7 1 2 3 4 5 6 MONSTER Nr. 2, 5 OF 8 7 8 9 10 11 12 

| MONSTER Nr. 3, 6 OF 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

OPMERKING: Voor HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 worden de holtes nr. 1, 8 en 15 niet gebruikt in deze test ; ze kunnen met een viltstift 

gemarkeerd worden om te voorkomen dat ze per ongeluk toch gevuld worden met monsterstof. 

- Plaats de applicator in de natte opslagkamer, met de strips omhoog. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe van de strips. 

- Laat de monsters gedurende 5 minuten, na de applicatie van het laatste monster, in de strips trekken. 

Zie voor verdere gebruiksinstructies de bijsluiter bij de natte opslagkamer. 

3. Open het deksel van de migratiemodule en til de dragers van de elektroden en de applicators op. 

WAARSCHUWING: Sluit het deksel niet als de dragers nog omhoog staan. 

4. Selecteer het migratieprogramma "1 BJ SM/DM" voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES, "2/4 BJ-UP SM/DM" voor HYDRAGEL BENCE JONES 

2/4 of "9 BJ DM" voor HYDRAGEL 9 BENCE JONES uit het menu van het instrument (linkerzijde van het toetsenpaneel). 

5. Verwijder de gebufferde strips van het pakket: manipuleer deze aan de plastic uiteinden. Plaats de geponsde uiteinden van de plastic 

achterzijde van de strips op de pinnen van de elektrodendrager: de plastic achterzijde van de strip in de richting van de drager (Fig. 2). 

6. Pak de HYDRAGEL agarose-gel uit. 

- Rol een dun filter voorzichtig en gelijkmatig over het oppervlak om zo het teveel aan vloeistof te absorberen. Verwijder het filterpapier direct. 

WAARSCHUWING : Laat het filtreerpapier niet te lang in contact met de gel om dehydratatie van de gel te vermijden. 

- Giet 120 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES of 200 µl voor HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 en 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES op het onderste derde deel van het frame zoals afgedrukt op de temperatuurcontroleplaat van de 

migratiemodule. 

- Plaats de gelplaat (met de gelzijde omhoog) met de rand tegen de begrenzer aan de onderzijde van het afgedrukte frame (Fig. 3). 

- Buig de gel en breng deze naar beneden in het water (Fig. 3). Zorg ervoor dat er geen luchtbellen worden ingesloten, dat het water zich 

onder de gehele gelplaat verspreidt (Fig. 3), en dat de gel parallel met het afgedrukte frame ligt. 

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7. Breng beide dragers omlaag. In deze positie raken de gebufferde strips de gel niet. Forceer de dragers niet helemaal naar beneden. 

8. Haal de applicator uit de natte kamer. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe. 

- Klik het beschermframe los van de strips van de applicator(s). 

- Plaats de applicator(s) op de drager: 

- bij HYDRAGEL 1 BENCE JONES of HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 monsters), in positie Nr. 6, 

- bij HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 monsters), in positie Nr. 3 en 9, 

- bij HYDRAGEL 9 BENCE JONES, in positie Nr. 2, 6 en 10. 

BELANGRIJK: De nummers die op de applicator zijn geprint moeten steeds door de bediener gelezen kunnen worden (Fig. 4). 

Voor een betere reproduceerbaarheid van de monsterapplicatie dienen de applicators altijd aan de linkerzijde van de drager gepositioneerd 

te worden. 

9. Zorg ervoor dat de dragers omlaag zijn. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

10. Start de procedure ogenblikkelijk door het indrukken van de "START"-knop (groene pijl aan de linkerzijde van het bedieningspaneel). 

BELANGRIJK: Zorg ervoor dat de ventilatieopening aan de rechterzijde van het instrument niet geblokkeerd is. 

MIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE FASEN 

• De beide dragers worden omlaag gebracht zodat de gebufferde strips en applicator in contact komen met de gel. 

• De drager van de monsterapplicator komt omhoog. 

• De migratie wordt uitgevoerd onder 10 W constant voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES en onder 20 W constant voor HYDRAGEL BENCE JONES 

2/4, totdat 42 Vh is bereikt (gedurende ongeveer 9 minuten) en onder 20 W constant totdat 36 Vh is bereikt (gedurende ongeveer 7 minuten) voor 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, bij 20 °C gecontroleerd door het Peltier-effect. 

• De elektrodedrager komt omhoog zodat de elektroden uitgeschakeld worden. 

• Er klinkt een hoorbaar piepsignaal dat aangeeft dat het deksel van de module ontsloten wordt. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: 

" AS". 

OPMERKING: Gedurende alle migratiestappen blijft het deksel van de migratiemodule vergrendeld. 

II. SET-UP VAN DE IMMUNOFIXATIE 

Het dynamisch masker bevat een referentiewijzer in kleur voor het aanbrengen van reagentia, een antiserasegment, een segmenthouder, een geleider 

voor het dynamisch masker en een apparaat om de lengte in te korten (Fig. 5). 

Tijdens de migratie zet u het dynamisch masker als volgt in elkaar: 

1. Plaats de geleider voor het dynamisch masker op een vlakke ondergrond. 

BELANGRIJK: Voor de analyse van een en twee monsters is het noodzakelijk om een apparaat voor het inkorten van de lengte op de geleider 

voor het dynamisch masker te positioneren. 

2. Stel een antiserasegment op op de segmenthouder (Fig. 6): 

- Houd het antiserasegment schuin onder een hoek van 45° en positioneer het tegen de plastic veren van de segmenthouder. 

- Trek de twee elementen uit elkaar en draai het segment om zijn as om het te bevestigen in de inkepingen van de segmenthouder. 

WAARSCHUWING: Wees er zeker van dat het segment correct gepositioneerd is op de houder: de pinnetjes aan de uiteinden van 

het segment dienen in de inkepingen van de houder vast te zitten. 

3. Stel de houder met het segment op op de geleider van het dynamisch masker (Fig. 7). Zet daarna de gekleurde referentiewijzer voor het 

aanbrengen van reagentia, corresponderend met de te analyseren test, op de segmenthouder vóór de segmentholtes (Fig. 8). 

4. Breng de reagentia als volgt aan: 

- Antiserasegment met 6 holtes voor HYDRAGEL 1 BENCE JONES: 8 µl per holte, 

- Antiserasegment met 15 holtes voor HYDRAGEL BENCE JONES 2/4: 8 µl per holte voor de analyse van 2 monsters, 

12 µl per holte voor de analyse van 4 monsters, 

- Antiserasegment met 18 holtes voor HYDRAGEL 9 BENCE JONES: 8 µl per holte. 

GOOT REAGENS KLEUR ELP Fixeeroplossing geel GAM Trivalent antiserum violet K Anti-kappa lichte ketens (vrij & gebonden) antiserum groen L Anti-lambda lichte ketens (vrij & gebonden) antiserum blauw Kf Anti-kappa vrije lichte ketens antiserum oranje 

| Lf | Anti-lambda vrije lichte ketens antiserum | rood | 

OPMERKING: De reagentia zijn gekleurd en de kleuren zijn terug te vinden op de gekleurde referentiewijzer om u behulpzaam te zijn bij het 

pipetteren van de correcte antisera. 

BELANGRIJK: Gebruik voor HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 geen antiserasegmentholtes in positie 1, 8 en 15. 

Zuig de reagentia op en vermijd daarbij zorgvuldig dat er luchtbelletjes in het puntje van de pipet komen. 

Breng de reagentia aan (Fig. 9): 

- Houd de pipet schuin en laat het puntje lichtjes rusten op de zijkant van de holte, zonder dat het de bodem van de holte raakt. 

- Injecteer het druppeltje reagens in de holte. 

5. Haal de gekleurde referentiewijzer weer weg. 

III. IMMUNOFIXATIE 

1. Open het deksel van de migratiemodule. 

2. Verwijder de monsterapplicator(s) en gooi deze weg. 

3. Til beide dragers omhoog, verwijder de gebufferde strips aan hun plastic uiteinden en gooi ze weg. 

- Verwijder beide dragers. 

- Veeg de elektroden af met een zachte, vochtige tissue. 

- Laat de gel op zijn plaats staan in de migratiemodule. 

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4. Het dynamisch masker dient nu als volgt te worden opgesteld voor het aanbrengen van de reagentia (Fig. 10): 

- Positioneer de maskergeleider op de ankerklem (de geleider mag de hele tijd in de migratiemodule blijven). 

- Houd het dynamisch masker vast aan het lipje en positioneer het in de geleider, waarbij de inkepingen aan dienen te sluiten bij de 

markeringen. 

- Laat het dynamisch masker zakken op de HYDRASYS-plaat. 

BELANGRIJK: Stel de positie van het dynamisch masker zo bij dat er een perfecte aansluiting ontstaat tussen de elektroforetische profielen 

en de holtes van het masker. 

5. Plaats de segmenthouder op het laagste punt op de maskergeleider, met de voorzijde naar de bediener. Houd de segmenthouder vast aan 

de handgreep die zich aan de rechterzijde ervan bevindt, en druk op het centrale drukpunt zodat het antiserasegment contact maakt met de 

gel. Laat het drukpunt los ; de reagentia zullen zich nu onder alle sporen verspreiden (Fig. 11). 

6. Beweeg nu meteen, met behulp van de handgreep van de segmenthouder, het segment langzaam en gelijkmatig op en neer over de hele 

lengte van de gel om de reagentia aan te brengen. De applicatie zal zo ongeveer 5 seconden in beslag nemen (Fig. 12). 

WAARSCHUWING: Tijdens deze fase houdt u het masker slechts vast aan de handgreep van de segmenthouder. Vermijd het 

aanraken van de geleider. Druk niet opnieuw op het drukpunt, aangezien dit zou kunnen leiden tot een in elkaar overlopen van 

reagentia. 

7. Verwijder de geleider en het dynamisch masker. 

- Verwijder de segmenthouder aan zijn handgreep. 

- Verwijder het antiserasegment uit de houder en gooi het weg. 

WAARSCHUWING: Segmenten met antisera dienen met uiterste zorgvuldigheid behandeld te worden. 

- Achterblijvende reagentia kunnen na de applicatie in de holtes blijven. Dit heeft geen effect op de testresultaten. 

8. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

9. Start de procedure onmiddellijk door op de groene pijl te drukken, de "START"-knop aan de linkerzijde van het toetsenpaneel. Op het scherm 

verschijnt het bericht "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE STAPPEN 

• Incubatie bij 20 °C gedurende 10 minuten (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Een hoorbaar piepsignaal geeft aan dat het deksel van de migratiemodule ontgrendeld wordt. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: 

" PAP.". 

OPMERKING: Tijdens de incubatie blijft het deksel van de migratiemodule vergrendeld. 

IV. AFDEPPEN VAN DE GEL 


2. Breng een dik velletje filterpapier aan op de gel: 

- zorg ervoor dat de rand van het filterpapier gelijk ligt met de rand van de gel (buig het om in een hoek van 45°) en laat het voorzichtig op 

de gel zakken. 

BELANGRIJK: Druk stevig op het hele oppervlak van het filterpapier om ervoor te zorgen dat het zich overal goed aan de gel hecht. 

3. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

4. Start de procedure door op de "START"-knop te drukken (groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenpaneel). 

AFDEPPEN - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE STAPPEN 

• Afdeppen bij 40 °C gecontroleerd door het Peltier-effect, gedurende 3 minuten. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: "[BLOTTING]". 

• Er klinkt een hoorbaar piepsignaal. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: "❊PAP.". 

V. DROGEN VAN DE GEL 


2. Verwijder het filterpapier en laat de gel op zijn plaats. 

3. Sluit het deksel. 

4. Start de procedure door het indrukken van de "START"-knop met groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord. 

HET DROGEN VAN DE GEL - BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE STAPPEN 

• Bij 50 °C gedurende 6 minuten drogen (gecontroleerd door het Peltier-effect). 

• Een hoorbare toon klinkt. De temperatuur van de plaat blijft 50 °C totdat het deksel wordt geopend. Op het scherm ziet u staan: "MIGRATIETEMP. 

BLIJFT GEHANDHAAFD" 

OPMERKING: Het deksel van de migratiemodule blijft gedurende de gehele droogfase gesloten. 

VI. GELVERWERKING SET-UP 

1. Open het deksel. 

2. Neem de gedroogde gelfilm eruit voor verdere verwerking. 

3. Open de gelhouder. Leg deze plat en plaats de gedroogde gel (met de gelkant naar boven gericht) in de spleten van de beide stangen en sluit 

de houder. Zorg ervoor dat de film op de juiste wijze in de houder geplaatst is (Fig. 13). 

4. Plaats de gelhouder in de gel processing / staining module. 

BELANGRIJK: Alvorens te beginnen met het gelverwerkings-/ kleuringsprogramma moet het volgende gecontroleerd worden: 

- De spoelcontainer is gevuld met 400 ml spoeloplossing. 

- De kleuringscontainer is gevuld met 300 ml kleuringsoplossing. 

- De ontkleuringscontainer bevat ten minste 1 liter ontkleuringsoplossing. 

- De afvalcontainer is leeg. 

Voor de verbinding van de reagenslijnen: zie de informatie op het scherm van het apparaat (keuzetoets: REAGENT LINES). 

BELANGRIJK: Vergeet niet de niet-gebruikte lijnen te blokkeren. 

5. Selecteer het "IF ACID VIOLET" kleuringsprogramma uit het menu op het instrument. Begin de procedure met het indrukken van de "START"- 

knop (groene pijl op de rechterzijde van het toetsenbord). 

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Gedurende de kleur-, onkleur- en droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

OPMERKINGEN: 

- De temperatuur van de migratieplaat blijft dalen nadat het deksel geopend werd, tot een temperatuur van 20 °C is bereikt (in minder dan 5 minuten). 

Dan kan een nieuwe migratiecyclus begonnen worden. 

- Breng de monsterapplicator en elektrodedragers terug in positie. 

- Veeg de temperatuurcontroleplaat schoon met een zacht vochtig doekje. 

VII. AFRONDING VAN DE GELVERWERKING 

1. Verwijder de gelhouder uit het compartiment ; open de clips en verwijder de gedroogde gel. 

2. Indien nodig wordt de achterzijde (de zijde van de plastic steun) van de droge film met een vochtig doekje schooongemaakt. 

NOOT: Voor de gels met verschilende rijen (2 of 3) kunnen de migratielengtes aanzienlijk verschillen, zonder de resultaten te beïnvloeden. 

RESULTATEN 

Interpretatie 

De aanwezigheid van een Bence Jones proteïne wordt gekarakteriseerd door: 

- een monoclonale band gedetecteerd met een van de anti-vrije en gebonden lichte ketens kappa of lambda antisera, (K of L tracks) ; 

- een van de anti-vrije lichte ketens kappa of lambda antisera, (Kl of Ll tracks), en de afwezigheid van reactie met het trivalente antiserum 

(gam-track) ; 

- geen reactie met het trivalente antiserum (gam-track). 

Serum paraproteïne geëlimineerd in urine zonder Bence Jones proteïne wordt gekarakteriseerd door: 

- een monoclonale band aangetoond met het trivalent antiserum ; 

- dezelfde band aangetoond met een van de vrije en gebonden lichte keten antisera, en de afwezigheid van reactie met het corresponderende 

vrije lichte keten antiserum. 

Serum paraproteïne geassocieerd met een Bence Jones proteïne wordt gekarakteriseerd door: 

- een monoclonale band aangetoond met het trivalent antiserum ; 

- twee banden aangetoond met een van de vrije en gebonden lichte keten antisera (of soms een band gedetecteerd met een van de vrije en 

gebonden lichte ketens antisera en een band gedetecteerd met de andere vrije en gebonden lichte ketens antisera). 

- een band aangetoond met een van de vrije lichte keten antisera. Deze band migreert in het algemeen niet op hetzelfde niveau als de band 

die wordt aangetoond met trivalent antiserum. 

Bence Jones proteïne in verschillende vormen van polymerisatie wordt gekarakteriseerd door: 

- de afwezigheid van een reactie met het trivalent antiserum ; 

- verschillende banden aangetoond met een van de vrije en gebonden lichte keten antisera ; 

- dezelfde banden aangetoond met het corresponderende vrije lichte keten antiserum. 

Interferentie en begrenzingen 

Het gebruik van andere antisera dan die welke specifiek bedoeld zijn voor de immunofixatieprocedure met het dynamisch masker, kan de resultaten 

nadelig beïnvloeden. 

Met het oog op de resolutie- en gevoeligheidsbeperkingen van zone-elektroforese is het mogelijk dat niet alle monoclonale componenten met deze 

methode volledig worden gedetecteerd. 

Troubleshooting 

Bel de technische dienst van de leverancier als de test mislukt terwijl u de instructies voor voorbereiding en opslag van materialen, en voor de 

procedure, nauwkeurig hebt gevolgd. 

Veiligheidsdatalijsten voor Kit-reagentia en informatie over de verwijdering van afvalproducten zijn tevens verkrijgbaar bij de technische dienst van de 

leverancier. 

PRESTATIEGEGEVENS 

Reproduceerbaarheid binnen een gel en specificiteit 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES-procedure 

De reproduceerbaarheid binnen een gel werd aangetoond op drie verschillende pathologische monsters: twee urinemonsters met Bence Jonesproteïnen 

(kappa en lambda vrije lichte ketens) en één serummonster met kappa vrije lichte keten. 

Ieder monster werd viermaal getest op 2 partijen HYDRAGEL BENCE JONES 2/4-gels met behulp van de zuurviolet kleuringsprocedure. 


De reproduceerbaarheid binnen een gel werd aangetoond op drie verschillende pathologische monsters: twee urinemonsters met Bence Jonesproteïnen 

(kappa en lambda vrije lichte ketens) en één serummonster met kappa vrije lichte keten. 

Ieder monster werd negenmaal getest op 2 partijen HYDRAGEL 9 BENCE JONES-gels met behulp van de zuurviolet kleuringsprocedure. 

Alle herhalingen gaven identieke resultaten te zien binnen een partij en tussen verschillende partijen, en overeenkomstig de verwachtingen voor het 

type geanalyseerde monsters. 

De Bence Jones-proteïnen werden correct geïdentificeerd in ieder monster en op alle gels, er waren geen valse positieven en er werden geen 

verschillen geconstateerd tussen de herhalingen. 

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Reproduceerbaarheid tussen gels en specificiteit 


De reproduceerbaarheid tussen gels werd aangetoond op vier verschillende pathologische monsters, 3 urines en één serum met Bence Jonesproteïnen, 

kappa of lambda vrije lichte ketens. 

Deze monsters werden getest op 10 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4-gels uit 3 verschillende partijen, met behulp van de zuurviolet 

kleuringsprocedure. 


De reproduceerbaarheid tussen gels werd aangetoond op negen verschillende pathologische urine- en serummonsters, met Bence Jones-proteïnen, 

kappa of lambda vrije lichte ketens. 

Deze monsters werden getest op 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES-gels uit 3 verschillende partijen, met behulp van de zuurviolet kleuringsprocedure. 

Alle herhalingen gaven identieke resultaten te zien van gel tot gel en overeenkomstig de verwachtingen voor het type geanalyseerde monsters. 

Nauwkeurigheid 

Twintig serummonsters en zesendertig urinemonsters met Bence Jones-proteïnen, met vijf normale monsters, werden geanalyseerd met behulp van 

de HYDRAGEL 4 BENCE JONES-kit en een vergelijkbare op de commerciële markt verkrijgbare immunofixatieprocedure. 

De resultaten van de twee immunofixatieprocedures kwamen exact met elkaar overeen. 

Gevoeligheid 

Seriële verdunningen werden geprepareerd met 2 pathologische urinemonsters die beide Bence Jones-proteïnen vertoonden, en deze werden 

geanalyseerd met de HYDRAGEL 4 BENCE JONES-procedure met antisera anti-kappa en anti-lambda vrije en gebonden lichte ketens en met 

antisera anti-kappa en anti-lambda vrije lichte ketens. 

De minimale detectielimiet voor Bence Jones-proteïnen was ongeveer 3 mg/l bij antisera anti vrije en gebonden lichte ketens en ongeveer 12 mg/l bij 

antisera anti vrije lichte ketens. 

Door de structuur en het type van de vrije lichte keten kan de detectielimiet die wordt bepaald met anti-kappa of anti-lambda vrije lichte keten antisera 

variëren, maar hij ligt over het algemeen onder de 5 mg/dl. 

BIBLIOGRAFIE 



1994, 397 pp. 

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UTILIZZO 

I kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 2 BENCE JONES, 4 BENCE JONES e HYDRAGEL 9 BENCE JONES sono stati progettati per l’identificazione 

delle proteine di Bence Jones, o catene leggere libere (kappa o lambda), nelle urine umane e nel siero, mediante elettroforesi ed immunofissazione 

su gel d'agarosio tamponato in mezzo alcalino (pH 9.1). I kits sono usati in combinazione con il sistema semi-automatico HYDRASYS, per eseguire 

tutte le fasi necessarie all’ottenimento di gels pronti per l’interpretazione. 

Le proteine dei campioni sono fatte migrare ed immunofissate mediante antisieri con le seguenti specificità: (1) Antisiero Trivalente: anti catene pesanti 

gamma (Ig G), alfa (Ig A) e mu (Ig M), (2) antisiero anti catene leggere, libere e legate, kappa, (3) antisiero anti catene leggere, libere e legate, lambda, 

(4) antisiero anti catene leggere libere, kappa e (5) antisiero anti catene leggere libere lambda. Dopo l’immunofissazione, le proteine precipitate sono 

colorate con violetto acido. L’eccesso di colorante è rimosso con una soluzione acida. 

Ogni gel di agarosio permette di processare: 

- un campione con il kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- due campioni con il kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- quattro campioni con il kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- nove campioni con il kit HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Per uso diagnostico in vitro. 

PRINCIPIO DEL METODO 

Bande anomale nel quadro elettroforetico, in particolare nella zona delle beta-globuline e delle gamma-globuline, sono presunte essere proteine 

monoclonali e pertanto un indice di gammapatia. Per identificare tali bande anomale si utilizza la tecnica dell’immunofissazione. 

L’immunofissazione elettroforetica permette di fissare una proteina in situ dopo l’elettroforesi, formando complessi insolubili con i corrispondenti 

antisieri. 

Tale tecnica consta di quattro fasi: 

1. Separazione delle proteine mediante elettroforesi su gel di agarosio. 

2. Fissazione ed immunoprecipitazione delle proteine migrate: soluzione fissativa ed antisieri sono stratificati direttamente sulla superficie del gel 

nelle appropriate corsie di migrazione. Soluzione fissativa ed antisieri diffondono nel gel precipitando, rispettivamente, le proteine ed i 

corrispondenti antigeni. 

3. Le proteine non precipitate e quindi solubili sono rimosse dal gel mediante asciugatura e lavaggio. Il complesso antigene-anticorpo precipitato è 

intrappolato all’interno della matrice del gel. 

4. Le proteine precipitate sono evidenziate con la colorazione. Le bande immunoprecipitate sono poi comparate con le corrispondenti bande anomale 

presenti nel quadro elettroforetico di riferimento. 

Per evidenziare ed identificare le presunte componenti monoclonali, il campione è fatto migrare contemporaneamente in sei corsie. Dopo l’elettroforesi 

la corsia ELP serve da riferimento, mostrando il quadro elettroforetico di tutte le proteine del campione. Le rimanenti cinque corsie permettono la 

identificazione della componente(i) monoclonale(i) mediante la reazione(i) o la mancanza di reazione(i) con l’antisiero trivalente anti catene pesanti 

(gamma, alfa e mu), gli antisieri singoli anti catene leggere, libere e legate, kappa e lambda e gli antisieri singoli anti catene leggere libere kappa e 

lambda. 

Questa semplice e rapida tecnica fornisce un quadro chiaro e facilmente interpretabile. 

REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEI KITS HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES I HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES PN 4321 KIT HYDRAGEL 2 BENCE JONES PN 4322 KIT HYDRAGEL 4 BENCE JONES PN 4324 KIT HYDRAGEL 9 BENCE JONES PN 4329 PN 4383* Gels di Agarosio (pronti all’uso) 10 gels 10 gels 80 gels Strisce tamponate (pronte all’uso) 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 80 confezioni da 2 Colorante Violetto Acido (soluzione concentrata) 1 flacone, 75 ml 1 flacone, 75 ml 8 flaconi, 75 ml Soluzione Fissativa (pronta all’uso) 1 flacone, 2.9 ml Immunoglobuline di mammifero anti catene pesanti 1 flacone, 2.0 ml umane gamma, alfa e mu (trivalente) (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 2.0 ml umane, libere e legate, kappa (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 2.0 ml umane, libere e legate, lambda (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 2.0 ml umane libere kappa (pronte all’uso) Immunoglobuline di mammifero anti catene leggere 1 flacone, 2.0 ml umane libere lambda (pronte all’uso) Applicatori (pronti all’uso) 1 confezione da 10 2 confezioni da 10 24 confezioni da 10 3 confezioni da 10 Barrette Antisieri (pronte all’uso) 1 confezione da 10 1 confezione da 10 8 confezioni da 10 Cartine da filtro sottili 1 confezione da 10 1 confezioni da 10 8 confezioni da 10 

| Cartine da filtro spesse | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 8 confezioni da 10 | 


NOTA: La soluzione fissativa e gli antisieri sono forniti separatamente dal kit ad esclusione dei MAXI-KITS (Vedi REAGENTI RICHIESTI MA NON 

FORNITI). 

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FOGLIO DI ISTRUZIONI SEBIA - Italiano

PER RISULTATI OTTIMALI 

I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit. 

LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO. 


1. GELS DI AGAROSIO 

Preparazione 

I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gels di agarosio contiene: agarosio, 8 g/l ; tampone tris-barbital pH 9.1 ± 0.1 ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: I gels di agarosio contengono 0.31 % di barbital e 0.34 % di barbital sodico. Non ingerire! Se ingerito consultare 

immediatamente un medico ! 

Utilizzo 

Mezzo di supporto per elettroforesi ed immunofissazione delle proteine. 

Conservazione, stabilità e segni di deterioramento 

Conservare i gels orizzontalmente, nella confezione originale protettiva, a temperatura ambiente (15 - 30 °C) o in frigorifero (2 - 8 °C). I gels sono 

stabili fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. (La freccia sulla scatola del kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Evitare la conservazione nelle seguenti condizioni : in prossimità di fenestre ; in prossimità di sorgenti di calore ; in presenza di brusche e/o significative 

variazioni di temperatura. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare il gel quando: 

(i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe conseguenze del 

congelamento del gel), 

(ii) è presente muffa o flora batterica, 

(iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni 

di conservazione improprie). 

2. STRISCE TAMPONATE 

Preparazione 

Le strisce tamponate sono pronte all’uso. Ogni striscia contiene: tampone tris-barbital pH 9.1 ± 0.3 ; sodio azide ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: Il tampone nelle strisce contiene 0.92 % di barbital, 1.03 % di barbital sodico e 0.30 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerite 

consultare immediatamente un medico! Quando smaltite, evitare il contatto con acidi, piombo o rame poiché possono originare composti 

esplosivi o tossici con la sodio azide. 

Utilizzo 

Le strisce di spugna tamponate funzionano da riserva di tampone per l’elettroforesi ed assicurano il contatto tra il gel e gli elettrodi. 


Conservare le strisce tamponate orizzontalmente nella loro confezione protettiva, a temperatura ambiente o in frigorifero. (La freccia sulla scatola del 

kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Le strisce sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichetta della confezione delle strisce. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare le strisce se la confezione è aperta e le strisce sono asciutte. 

3. COLORANTE VIOLETTO ACIDO 

Preparazione 

Il flacone di colorante violetto acido in soluzione concentrata deve essere diluito a 300 ml con acqua distillata o deionizzata. 

Dopo la diluizione, la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; violetto acido, 2 g/l ; Etilen-glicol, 3,25 % ; componenti non pericolosi 

alle concentrazioni utilizzate necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Colorazione dei gels dopo l’elettroforesi e l’immunofissazione delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinato alla colorazione di soli 10 gels. Sostituire la soluzione dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare sia la soluzione concentrata del colorante che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione del colorante concentrata è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. Il 

colorante diluito è stabile 6 mesi. 

4. CONFEZIONE ANTISIERI E FISSATIVO (con PN 4383) 

4.1 ANTISIERI 

Preparazione 

Pronti all’uso. Tutti gli antisieri sono di mammifero, anti immunoglobuline totali umane. Per una facile identificazione degli antisieri e per un aiuto nel 

controllo della loro corretta applicazione, gli antisieri sono colorati con differenti coloranti atossici. Tali colori sono riportati sulle etichette dei flaconi. 

Quando l’antisiero mostra una lieve torbidità, lasciarne il flacone a temperatura ambiente per un minimo di 10 minuti. Questa azione dovrebbe essere 

sufficiente a chiarificare la soluzione ; tuttavia, se la torbidità rimane, questa non dovrebbe avere alcun effetto sulla reazione immunologica. In caso 

di precipitati insolubili, si raccomanda di centrifugare l’antisiero per 5 minuti a 3000 rpm. 

Utilizzo 

Per immunofissare le proteine separate elettroforeticamente. 

Gli antisieri possono avere origine da specie animali differenti. Non miscelare due diversi flaconi di antisiero, anche con la stessa specificità, e 

sostituire SEMPRE il puntale della pipetta quando si cambia il flacone di antisiero. 

IMPORTANTE : Per evitare la contaminazione tra i diversi reagenti, si raccomanda di rimettere ogni tappo sul flacone corrispondente dopo ogni 

utilizzo. 

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Conservare gli antisieri in frigorifero (2 - 8 °C). Gli antisieri sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichette dei 

flaconi. 

NOTA: Durante il trasporto, gli antisieri possono essere mantenuti a temperatura non refrigerata (15 - 30 °C) per 15 giorni senza effetti negativi sulle 

prestazioni. 

4.2. SOLUZIONE FISSATIVA 

Preparazione 

La soluzione fissativa è pronta all’uso. Contiene: soluzione acida ; additivi, non rischiosi alle concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

Per una facile identificazione e come aiuto nel controllo della sua corretta applicazione, il fissativo è colorato con un colorante atossico. 

Utilizzo 

Per fissare le proteine separate mediante l’elettroforesi nella pista di riferimento (ELP). 

IMPORTANTE : Per evitare la contaminazione tra i diversi reagenti, si raccomanda di rimettere ogni tappo sul flacone corrispondente dopo ogni 

utilizzo. 


Conservare la soluzione fissativa a temperatura ambiente o in frigorifero. Il fissativo è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del 

kit o sull’etichetta del flacone. 

La soluzione fissativa deve essere priva di precipitato. 

5. APPLICATORI 

Utilizzo 

Applicatori monouso, pretagliati, per l’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare gli applicatori lontano dall’umidità a temperatura ambiente o in frigorifero. 

6. BARRETTE ANTISIERI 

Utilizzo 

Barrette colorate monouso, per la stratificazione sul gel da immunofissazione della soluzione fissativa e degli antisieri. 

AVVERTENZA : Le barrette con gli antisieri devono essere manipolate con precauzione. 

7. CARTINE DA FILTRO - SOTTILI 

Utilizzo 

Cartine assorbenti monouso per l’eliminazione dell’eccesso di liquido dalla superficie del gel prima dell’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro sottili in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

8. CARTINE DA FILTRO - SPESSE 

Utilizzo 

Cartine assorbenti pretagliate, monouso, per l’eliminazione dal gel delle proteine non precipitate dopo la fase di immunofissazione. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro spesse in luogo secco a temperatura ambiente o refrigerata. 

REAGENTI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. CONFEZIONE ANTISIERI E SOLUZIONE FISSATIVA (per kits 4321, 4322, 4324, e 4329) 

La confezione antisieri e soluzione fissativa, GAM, K, L (anti catene pesanti gamma alfa e mu, anti catene leggere libere e legate kappa e anti catene 

leggere libere e legate lambda), SEBIA, Rif. 4335, contiene 3 flaconi di antisieri e 1 flacone di soluzione fissativa da 1 ml ciascuno. Gli antisieri sono 

specifici per la metodica immunofissativa con maschera dinamica. 

1.1 ANTISIERI 

Vedi precedente paragrafo 4.1. 

1.2 SOLUZIONE FISSATIVA 

Vedi precedente paragrafo 4.2. 

2. CONFEZIONE ANTISIERI PER CATENE LEGGERE LIBERE (per kits 4321, 4322, 4324 e 4329) 

La confezione antisieri, catene leggere libere anti-kappa e catene leggere libere anti-lambda, SEBIA, Rif. 4336, contiene 2 flaconi di antisiero da 1 ml 

ciascuno. Gli antisieri sono specifici per la metodica immunofissativa con maschera dinamica. 

Vedi paragrafo 4.1. 

3. SOLUZIONE DECOLORANTE 

Preparazione 

Ogni flacone di soluzione decolorante concentrata (SEBIA, PN 4540, 10 flaconi da 100 ml ciascuno) deve essere diluito a 100 litri con acqua 

deionizzata o distillata. Per convenienza diluire solo 5 ml di soluzione concentrata a 5 litri, ossia al volume della tanica della soluzione decolorante. 

Dopo la diluizione la soluzione decolorante contiene: acido citrico, 0.5 g/l. 

Utilizzo 

Come decolorante, ossia per rimuovere l’eccesso di colorante e la colorazione di fondo dal gel. 

Per il risciacquo del compartimento di colorazione dopo la fase di lavaggio. 

Per neutralizzare l’acidità della soluzione decolorante versare, nella tanica vuota dei liquidi reflui, 15 mL di una soluzione al 50 % di Idrossido di Sodio. 

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Conservare la soluzione decolorante concentrata a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza 

indicata sulla scatola del kit o sulla etichetta del decolorante. La soluzione diluita del decolorante è stabile per una settimana a temperatura ambiente 

in flacone chiuso. Non aggiungere sodio azide. 

Eliminare la soluzione decolorante diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

Per prevenire le proliferazioni microbiche nella soluzione decolorante diluita, da conservare oltre una settimana, aggiungere 5 µL/dL di ProClin 300. 

La soluzione decolorante diluita addizionata con ProClin e conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in bottiglia chiusa, è stabile fino alla data 

di scadenza indicata sulla confezione o sull’etichetta del flacone di decolorante. 

4. SOLUZIONE DI LAVAGGIO HYDRASYS 

Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione di Lavaggio HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 flaconi da 80 ml ciascuno) deve essere diluito a 5 litri con acqua distillata o 

deionizzata. Dopo la diluizione la soluzione di lavaggio contiene: tampone alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; sodio azide. 

AVVERTENZA: La soluzione di lavaggio concentrata contiene 0.625 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerita consultare immediatamente 

un medico! La sodio azide può portare alla formazione di composti tossici o esplosivi se posta a contatto con acidi, piombo o rame. Quando 

smaltita, fare scorrere un’abbondante quantità’ di acqua. 

Utilizzo 

La soluzione di lavaggio HYDRASYS ha la funzione di rimuovere le proteine non precipitate dai gels. Serve inoltre per lavare il compartimento di 

colorazione di HYDRASYS. Usare periodicamente ; per esempio, se lo strumento è usato giornalmente lavare il compartimento di colorazione 

settimanalmente. 

Consultare l’inserto nella confezione per la procedura di utilizzo. 


Conservare sia la soluzione di lavaggio concentrata che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso. Entrambe le 

soluzioni sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. 

Eliminare la soluzione di lavaggio diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

5. SOLUZIONE FISIOLOGICA 

Preparazione 

Preparare una soluzione 0.15 M (9 g/l) di NaCl in acqua distillata o deionizzata. 

Utilizzo 

Per diluire i campioni se necessario. 


Conservare a temperatura ambiente o in frigorifero. Eliminare comunque dopo 3 mesi oppure se muta di aspetto (diviene torbida a causa di 

contaminazione batterica). Per una conservazione più lunga aggiungere sodio azide, 1 g/l. 

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Dispensatore manuale o in alternativa, per il caricamento degli applicatori dei campioni o delle barrette antisieri, campionatore automatico 

HYDRAplus SEBIA, PN 1215. 

3. Camera umida, PN 1270, fornita con HYDRASYS. 

4. Kit di taniche fornito con HYDRASYS. 

5. Barra per il fissagio della maschera SEBIA fornita con HYDRASYS. 

6. Maschera dinamica, SEBIA, PN 1255. 

7. Pipette: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL e 200 µL. 

CAMPIONI PER L’ANALISI 

Raccolta e conservazione del campione 

• Le analisi sono generalmente eseguite su urine fresche. 

Se necessario, refrigerare i campioni (2 - 8 °C) e conservare al massimo una settimana. Per periodi di conservazioni più lunghi, mantenere i 

campioni congelati. Il congelamento con HEPES 0.1 M (pH 6.75) e/o sodio azide, 0.02 g/dL migliora la stabilità di conservazione. Le urine congelate 

sono stabili fino ad un mese. I campioni scongelati possono dar luogo a leggeri segni nel punto di applicazione causati dalla denaturazione delle 

proteine. 

IMPORTANTE: Evitare l’acido borico come conservante. 

• Se si analizza del siero questo deve essere prelevato secondo le procedure usate per i tests clinici. Se necessario conservare i sieri a 2 - 8 °C per 

una settimana. Per periodi di conservazione più lunghi congelare i campioni. I campioni congelati sono stabili per almeno 1 mese. Campioni 

scongelati possono dare luogo a leggeri segni di applicazione a causa della denaturazione delle proteine o delle lipoproteine. 

Preparazione del campione 

Urine 

L’analisi è eseguita su urine non concentrate. Il limite di sensibilità per la proteina di Bence Jones è 50 mg/l. Per una maggiore sensibilità concentrare 

i campioni. 

NOTA: La diffusione nei dentini degli applicatori di campioni di urina (intera o concentrata) torbidi, può essere ostacolata. Si raccomanda di rimuovere 

il particolato centrifugando i campioni (es., 10 minuti a 3000 rpm) o per filtrazione (es., filtri da siringa 0.45 µm). 

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Sieri 

Per ricercare contemporaneamente la proteina di Bence Jones nell’urina e nel corrispondente siero, diluire il siero, utilizzando soluzione fisiologica o 

diluente per immunofissazione prediluito 1/4 (1 volume di diluente + 3 volumi di acqua distillata o deionizzata), 1/10 per le piste ELP, GAM, K e L 

(1 volume di siero + 9 volumi di diluente prediluito o di soluzione fisiologica) e 1/3 per le piste Kl e Ll (1 volume di siero + 2 volumi di diluente prediluito 

o di soluzione fisiologica). 

NOTA: Se il livello di immunoglobuline totali è minore di 0,5 g/dL, si raccomanda una minore diluizione del siero con soluzione fisiologica o con 

diluente per immunofissazione prediluito 1/4. 

Per esempio, diluire il siero 1/5 per le piste ELP, GAM, K e L (1 volume di siero + 4 volumi di diluente prediluito o di soluzione fisiologica) e 1/2 per le 

piste Kl e Ll (1 volume di siero e 2 volumi di diluente prediluito o soluzione fisiologica). 

Per l’analisi delle Ig D e/o Ig E, applicare la stessa diluizione preparata per le catene leggere libere e legate. 

IMPORTANTE 

• Evitare campioni di plasma. Il fibrinogeno dà luogo ad una banda, vicino al punto di applicazione, che può essere scambiata per una 

immunoglobulina monoclonale. 

• Alcune urine presentano un alta concentrazione di sali. Questi possono causare una deformazione durante la migrazione con conseguente distorsione 

dei profili di migrazione. Se la distorsione rende inaccurata l’interpretazione, tali urine devono essere dializzate per eliminare i sali. 

• Urine proteolizzate possono portare ad una reazione positiva con gli antisieri anti catena leggere libere. In questo caso, una paraproteina del siero 

eliminata con le urine può mostrare una banda monoclonale con l’antisiero trivalente, con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate e 

con il corrispondente antisiero anti catene leggere libere. 

• La polimerizzazione delle proteine di Bence Jones generalmente diminuisce la sensibilità di rivelazione con gli antisieri anti catene libere leggere 

poiché può causare il blocco degli epitopi che normalmente reagiscono con gli antisieri anti catene libere leggere. Quando non si ottiene rivelazione 

ma è sospettata la presenza di proteine di Bence Jones, prima di processare elettroforeticamente provvedere a depolimerizzare: miscelare 100 µl 

di urina con 5 µl di ß-mercaptoetanolo diluito 1:10 in fisiologica e quindi applicare. 

PROCEDURA 

Il sistema HYDRASYS è uno strumento semi-automatico multiparametrico. Le fasi automatiche includono il trattamento dei gels di agarosio 

HYDRAGEL nella seguente sequenza: applicazione del campione, migrazione elettroforetica, incubazione con la soluzione fissativa e con gli antisieri, 

essiccazione, colorazione, decolorazione ed essiccazione finale. Le fasi manuali includono la manipolazione dei campioni, dei gels, l’applicazione del 

fissativo e degli antisieri e la preparazione dello strumento per l’uso. 

LEGGERE ATTENTAMENTE IL MANUALE DI ISTRUZIONE HYDRASYS. 

I. MIGRAZIONE 

1. Accendere lo strumento HYDRASYS. 

2. Posizionare un applicatore per HYDRAGEL 1 BENCE JONES o HYDRAGEL 2/4 BENCE JONES (2 campioni), due applicatori per 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 campioni) o tre applicatori per HYDRAGEL 9 BENCE JONES, su una superficie piana con i numeri dei 

pozzetti rivolti verso l’alto (Fig. 1). 

- Applicare 10 µL di campione nei pozzetti dell’applicatore come segue. Caricare ciascun applicatore entro 2 minuti. 

| PISTE DI MIGRAZIONE/IMMUNOFISSAZIONE | 

POZZETTO No. ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 CAMPIONE No 1 O 3 2 3 4 5 6 7 CAMPIONE No 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES CAMPIONE No 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 CAMPIONE No 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| CAMPIONE No 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANTE: Per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, i pozzetti num. 1, 8 e 15 non sono utilizzati ; possono essere marcati con un pennarello 

per evitarne il riempimento erroneo con il campione. 

- Inserire l’applicatore(i) nella camera umida di conservazione con i dentini rivolti verso l’alto (maneggiare gli applicatori mediante la cornice 

protettiva in plastica). 

Consultare l’inserto all’interno della confezione della camera umida per ulteriori dettagli. 

- Lasciare che i campioni diffondano nei dentini per 5 minuti dall’applicazione dell’ultimo campione. 

3. Aprire lo sportello del modulo di migrazione ed alzare le cornici mobili porta elettrodi e porta-applicatori. 

AVVERTENZA: Non chiudere mai lo sportello se le cornici mobili sono alzate. 

4. Dal menu dello strumento (lato sinistro della tastiera), selezionare il programma di migrazione "1 BJ MS/MD" per HYDRAGEL 1 BENCE 

JONES, "2/4 BJ-UP MS/MD" per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 o "9 BJ MD" per HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

5. Estrarre le strisce tamponate dalla confezione ; maneggiarle mediante le estremità in plastica. Agganciare le estremità in plastica forate agli 

spinotti della cornice porta elettrodi ; le estremità in plastica della striscia devono essere rivolte verso la cornice mobile (Fig. 2). 

6. Estrarre il gel dalla confezione. 

- Eliminare rapidamente l’eccesso di liquido dalla superficie del gel, facendo aderire sul gel una cartina da filtro sottile. 

AVVERTENZA: Non lasciare assolutamente la cartine da filtro in contatto prolungato con il gel in modo da evitare la sua disidratazione. 

- Dispensare 120 µL di acqua distillata o deionizata per HYDRAGEL 1 BENCE JONES o 200 µL per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 e 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, sul terzo inferiore del riquadro stampato sulla piastra di controllo temperatura del modulo di migrazione. 

- Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 3). 

- Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia di acqua. Assicurarsi che non siano rimaste intrappolate bolle d’aria. L’acqua deve essere 

uniformemente stratificata al di sotto della lastrina di gel e questa deve essere allineata all’interno del riquadro stampato. 

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7. Abbassare entrambe le cornici mobili. In questa posizione le strisce tamponate non toccano il gel. NON FORZARE LE CORNICI MOBILI AD 

ABBASSARSI ULTERIORMENTE. 

8. Estrarre l’applicatore(i) dalla camera di umidificazione. Maneggiare gli applicatori mediante la cornice di protezione. 

- Staccare la cornice di protezione dei dentini dell’applicatore. 

- Inserire l’applicatore(i) sulla cornice mobile : 

- Con HYDRAGEL 1 BENCE JONES o HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 campioni), in posizione No 6, 

- Con HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 campioni), in posizione No 3 e 9, 

- Con HYDRAGEL 9 BENCE JONES in posizione No 2, 6 e 10. 

IMPORTANTE: I numeri stampati sugli applicatori devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 4). 

Per migliorare la riproducibilità dell’applicazione del campione, inserire gli applicatori accostandoli sempre al lato sinistro della cornice mobile. 

9. Chiudere lo sportello del modulo di migrazione. 

10. Avviare la procedura immediatamente premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. 

IMPORTANTE: Assicurarsi che la griglia di ventilazione sul lato destro dello strumento non sia ostruita. 

MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate e gli applicatori entrino in contatto con il gel. 

• La cornice mobile porta applicatori si alza. 

• Ha luogo la migrazione in condizioni di potenza costante, 10 W per HYDRAGEL 1 BENCE JONES e 20 W per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, fino 

ad accumulare 42 Vh (per circa 9 minuti) e 20 W fino ad accumulare 36 Vh (per circa 7 minuti) per HYDRAGEL 9 BENCE JONES, a 20 °C controllati 

mediante effetto Peltier. 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. Sullo schermo compare il messaggio: " AS". 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione. 

II. IMMUNOFISSAZIONE - PREPARAZIONE 

La maschera dinamica è composta da una guida colorata con i colori di riferimento per l’applicazione dei reagenti, da una barretta antisieri, da un 

supporto barretta, da una guida per la maschera dinamica e da un riduttore di corsa (Fig. 5). 

Durante la migrazione, assemblare la maschera dinamica come segue: 

1. Posizionare la guida per la maschera dinamica su una superficie piana. 

IMPORTANTE : Per l’analisi di uno o due campioni, è necessario posizionare il riduttore di corsa sulla guida per la maschera dinamica. 

2. Posizionare una barretta antisieri sul supporto barretta (Fig. 6) : 

- Inclinare la barretta antisieri con un angolo di 45° e appoggiarla contro le molle plastiche del supporto barretta. 

- Allontanare i due elementi e ruotare la barretta per fissarla nelle fessure del supporto barretta. 

AVVERTENZA : Assicurarsi che la barretta sia correttamente inserita nel supporto : gli spinotti all’estremità della barretta devono 

essere bloccati nelle fessure del supporto barretta. 

3. Alloggiare il supporto con il segmento sulla guida della maschera dinamica (Fig. 7). Quindi, posizionare la guida colorata con i colori di 

riferimento per l’applicazione dei reagenti, corrispondente agli esami da eseguire, sul supporto barretta davanti ai pozzetti della barretta 

(Fig. 8). 

4. Applicare i reagenti come segue: 

- Barretta antisieri a 6 pozzetti per HYDRAGEL 1 BENCE JONES : 8 µL per pozzetto, 

- Barretta antisieri a 15 pozzetti per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 : 8 µL per pozzetto per l’analisi di 2 campioni, 

12 µL per pozzetto per l’analisi di 4 campioni, 

- Barretta antisieri a 18 pozzetti per HYDRAGEL 9 BENCE JONES : 8 µL per pozzetto. 

CANALE REAGENTE COLORE ELP soluzione fissativa giallo GAM antisiero trivalente violetto K antisiero anti-catene leggere (libere e legate) kappa verde L antisiero anti-catene leggere (libere e legate) lambda blu KI antisiero anti-catene leggere libere kappa arancio 

| LI | antisiero anti-catene leggere libere lambda | rosso | 

NOTA: Per facilitare il corretto pipettamento, gli antisieri sono colorati e i colori sono riportati sulla guida colorata con i colori di riferimento. 

IMPORTANTE: Per HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, non usare i pozzetti 1, 8 e 15 della barretta antisieri. 

Aspirare i reagenti evitando di intrappolare bolle d’aria nel puntale della pipetta. 

Applicare i reagenti (Fig. 9) : 

- Mantenere la pipetta inclinata accostando il puntale su una parete del pozzetto, senza toccare il fondo del pozzetto. 

- Iniettare la goccia di reagente nel pozzetto. 

5. Rimuovere la guida colorata con i colori di riferimento. 

III. IMMUNOFISSAZIONE 

1. Aprire lo sportello del modulo di migrazione. 

2. Rimuovere l’applicatore(i) e smaltirlo(i). 

3. Alzare entrambe le cornici mobili, rimuovere le strisce tamponate mediante le estremità in plastica e smaltirle. 

- Estrarre il carrello porta applicatori ed elettrodi. 

- Pulire gli elettrodi con carta soffice inumidita. 

- Lasciare il gel in posizione nel modulo di migrazione. 

4. Posizionare la maschera dinamica per l’applicazione dei reagenti come segue (Fig. 10): 

- Posizionare la barra metallica di fissaggio per la maschera sui due spinotti di ancoraggio inferiori (la barra può essere sempre lasciata nel 

modulo di migrazione). 

- 42 -


- Tenere la maschera dinamica tramite l’aletta superiore ed inserirla nella barra con l’incavo allineato ai segni. 

- Abbassare la maschera dinamica sulla piastra di HYDRASYS. 

IMPORTANTE : Regolare la posizione della maschera dinamica per il perfetto allineamento tra i profili elettroforetici e i pozzetti della 

maschera. 

5. Posizionare il porta barretta nel punto inferiore della maschera dinamica, verso l’operatore. Tenere il porta barretta con la maniglia esistente 

alla destra e premere sul punto di pressione centrale in modo che la barretta antisieri tocchi il gel. Rilasciare la pressione ; quindi, i reagenti 

diffonderanno sotto ciascuna pista (Fig. 11). 

6. Immediatamente, usando la maniglia del porta barretta, muovere la barretta lentamente e con movimento continuo, in avanti ed indietro 

sull’intera lunghezza del gel per applicare i reagenti. L’applicazione dovrebbe richiedere circa 5 secondi (Fig. 12). 

AVVERTENZA : Durante questa fase, tenere la maschera solo con la maniglia del porta barretta. Evitare di toccare la guida. Non 

premere nuovamente il punto di pressione per non provocare una contaminazione tra reagenti. 

7. Rimuovere la guida e la maschera dinamica. 

- Rimuovere il porta barretta utilizzando la sua maniglia. 

- Rimuovere la barretta antisieri dal porta barretta e smaltirla. 

AVVERTENZA : Le barrette con gli antisieri devono essere manipolate con precauzione. 

- Dopo l’applicazione, nei pozzetti possono rimanere residui di reagenti. Questa evenienza non dovrebbe avere effetti sui risultati del test. 


9. Fare partire immediatamente la procedura premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. Sullo schermo compare il 

messaggio "[INCUBAZIONE]". 

IMMUNOFISSAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Incubazione a 20 °C per 10 minuti (temperatura controllata mediante effetto Peltier). 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione si è sbloccato. Sullo schermo compare il messaggio: " CARTA". 

NOTA: Durante l’incubazione lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato. 

IV. ASCIUGATURA DEL GEL 


2. Applicare sul gel una carta da filtro spessa: 

- allineare il margine della cartina da filtro al margine del gel (inclinandola di 45°) e abbassarla sul gel. 

IMPORTANTE: Premere decisamente sull’intera superficie della carta da filtro per assicurare una perfetta aderenza sul gel. 


4. Avviare la procedura premendo il tasto "START" (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). 

ASCIUGATURA - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Asciugatura a 40 °C controllati mediante effetto Peltier, per 3 minuti. 

Sullo schermo è mostrato il messaggio "[POMPAGGIO]". 

• Viene emesso un segnale acustico. 

Sullo schermo compare il seguente messaggio: "❊ CARTA". 

V. ESSICCAZIONE DEL GEL 


2. Rimuovere la cartina da filtro lasciando il gel in posizione. 

3. Chiudere lo sportello. 

4. Avviare la procedura premendo il tasto "START" (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). 

ESSICCAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Essiccazione a 50 °C controllati mediante effetto Peltier per 6 minuti. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello è sbloccato. La temperatura della piastra rimane a 50 °C finchè lo sportello non viene aperto. Sullo 

schermo compare il messaggio "MANTENIMENTO TEMPERATURA". 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante la fase di essiccazione. 

VI. TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Aprire lo sportello. 

2. Estrarre il gel essiccato, pronto per i trattamenti successivi. 

3. Aprire il telaio porta gel. Metterlo in posizione piana ed inserire la lastrina (con il gel rivolto verso l’operatore) nelle scanalature delle due guide, 

quindi chiudere il telaio. Assicurarsi che il gel sia correttamente posizionato all’interno del telaio (Fig. 13). 

4. Inserire il telaio porta gel nel Modulo di trattamento/colorazione. 

IMPORTANTE: Prima di avviare il programma di trattamento/colorazione del gel controllare che: 

- la tanica della soluzione di lavaggio contenga almeno 400 ml di soluzione di lavaggio ; 

- la tanica del colorante sia riempita con 300 ml di soluzione colorante ; 

- la tanica del decolorante contenga almeno 1 litro di soluzione decolorante ; 

- la tanica dei liquidi reflui sia vuota. 

Per la connessione dei reagenti: riferirsi alle informazioni mostrate sul visore dello strumento (premere il tasto: VISUAL CANALI). 

IMPORTANTE: Non dimenticare di chiudere gli ingressi reagenti non utilizzati. 

5. Selezionare il programma di colorazione "IF ACID VIOLET" dal menù dello strumento ed avviare la procedura premendo il tasto "START" 

(freccia verde sul lato destro dello strumento). 

Durante i cicli di colorazione, decolorazione e asciugatura, il compartimento rimane bloccato. 

Dopo il ciclo di raffreddamento, un segnale acustico indica che il compartimento è sbloccato (la ventilazione è mantenuta fino a quando il 

supporto del gel viene rimosso) 

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NOTE: 

- La temperatura della piastra di migrazione decresce a partire dall’apertura dello sportello finchè non raggiunge 20 °C (in meno di 5 minuti). A questo 

punto può essere avviata una nuova migrazione. 

- Rimettere in posizione il carrello mobile porta elettrodi e porta applicatori. 

- Pulire la piastra di migrazione con della carta soffice inumidita. 

VII. COMPLETAMENTO DEL TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Rimuovere il telaio porta gel dal compartimento ; aprirlo e rimuovere il gel essiccato. 

2. Se necessario pulire il retro della lastrina di gel (la faccia con la plastica di supporto) con una carta soffice inumidita. 

NOTA : Le lunghezze di migrazione dei gels con 2 o 3 righe analitiche possono essere sensibilmente differenti, senza alcuna conseguenza sui 

risultati. 

RISULTATI 

Interpretazione 

La presenza della proteina di Bence Jones nell’urina è caratterizzata da: 

- una banda monoclonale evidenziata con uno degli antisieri anti catena leggera libera e legata kappa o lambda, (piste K o L), 

- la stessa banda monoclonale evidenziata con uno degli antisieri anti catena leggera libera kappa o lambda (piste KI o LI), 

- assenza di reazione con l’antisiero trivalente (pista GAM). 

Paraproteina del siero eliminata con le urine senza proteina di Bence Jones è caratterizzata da: 

- una banda monoclonale evidenziata con l’antisiero trivalente, 

- la stessa banda evidenziata con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate, e 

- assenza di reazione con il corrispondente antisiero anti catene leggere libere. 

Paraproteina del siero eliminata con le urine associata a proteina di Bence Jones è caratterizzata da: 

- una banda monoclonale evidenziata con l’antisiero trivalente, 

- due bande rilevate con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate (o occasionalmente una banda rilevata con uno degli antisieri 

anti catena leggera libera e legata ed una banda rilevata con l’altro antisiero anti catena leggera libera e legata), 

- una banda rilevata con uno degli antisieri anti catena leggera libera. Questa banda generalmente non migra nella stessa posizione di quella 

messa in evidenza con l’antisiero trivalente. 

Proteina di Bence Jones in differenti gradi di polimerizzazione è caratterizzata da: 

- mancanza di reazione con l’antisiero trivalente, 

- varie bande rivelate con uno degli antisieri anti catene leggere libere e legate, 

- le stesse bande rivelate con il corrispondente antisiero anti catena leggera libera. 

Interferenze e limitazioni 

L’uso di un antisiero diverso da quello specifico per l’immunofissazione con maschera dinamica, può avere effetti sui risultati. 

Per i limiti di risoluzione e sensibilità dell’elettroforesi zonale, è possibile che alcune componenti monoclonali possano non essere rilevate con questo 

metodo. 

Eliminazione errori 

Contattare il Servizio di Assistenza Tecnica del fornitore quando, nonostante siano state seguite accuratamente le istruzioni per la preparazione e 

conservazione dei materiali e per la procedura di impiego, i risultati del test non rispettino le caratteristiche. 

La scheda di sicurezza del kit reagenti e le informazioni sullo smaltimento dei rifiuti sono disponibili anche presso il fornitore del servizio di Assistenza 

Tecnica. 

DATI SULLE PRESTAZIONI 

Riproducibilità nella serie e specificità 

Metodica HYDRAGEL 4 BENCE JONES 

La riproducibilità nel gel è stata dimostrata su tre diversi campioni patologici : due campioni di urina con proteina di Bence Jones (catene leggere libere 

kappa e lambda) e un campione di siero con catena leggera libera kappa. Ciascun campione è stato processato 4 volte su gels di 2 lotti di HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4, utilizzando la procedura di colorazione con violetto acido. 


La riproducibilità nel gel è stata dimostrata su tre diversi campioni patologici : due campioni di urina con proteine di Bence Jones (catene leggere libere 

kappa e lambda) e un campione di siero con catene leggere libere kappa. 

Ciascun campione è stato processato 9 volte su gels di 2 lotti di HYDRAGEL 9 BENCE JONES, utilizzando la procedura di colorazione con violetto 

acido. 

Tutte le ripetizioni nel lotto e fra lotti, hanno fornito risultati identici e attesi per il tipo di campione analizzato. 

Le proteine di Bence Jones sono state correttamente identificate in ciascun campione e su tutti i gels, non si sono manifestati falsi positivi e non sono 

state osservate differenze tra le ripetizioni. 

Riproducibilità tra serie e specificità 


La riproducibilità tra gels è stata dimostrata su quattro diversi campioni patologici, 3 urine ed un siero con proteine di Bence Jones, catene leggere 

libere kappa o lambda. 

I campioni sono stati processati su 10 gels HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 di 3 diversi lotti, utilizzando la procedura di colorazione con violetto acido. 

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La riproducibilità tra gels è stata dimostrata su nove diversi campioni patologici di urina e siero, con proteine di Bence Jones, catene leggere libere 

kappa o lambda. 

I campioni sono stati processati su 10 gels HYDRAGEL 9 BENCE JONES di 3 diversi lotti, utilizzando la procedura di colorazione con violetto acido. 

Tutte le ripetizioni tra gels, hanno fornito risultati identici e attesi per il tipo di campione analizzato. 

Accuratezza 

Ventuno campioni di siero e trentasei campioni di urina con proteine di Bence Jones, con cinque campioni normali, sono stati analizzati utilizzando il 

kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES ed una metodica immunofissativa similare, reperibile in commercio. 

I risultati delle due metodiche immunofissative sono stati perfettamente concordanti tra di loro. 

Sensibilità 

Sono state preparate diluizioni scalari di 2 urine patologiche con proteine di Bence Jones e analizzate con la metodica HYDRAGEL 4 BENCE JONES 

utilizzando antisieri anti-catene leggere libere e legate sia kappa sia lambda e antisieri anti-catene leggere libere sia kappa sia lambda. 

Il limite di rilevamento minimo per le proteine di Bence Jones è stato di circa 3 mg/L con gli antisieri anti-catene leggere libere e legate e di circa 

12 mg/L con gli antisieri anti-catene leggere libere. 

A causa della struttura e del tipo di catena leggera libera, il limite di rilevamento determinato con gli antisieri anti-catena leggera libera kappa o lambda 

può variare, ma generalmente è inferiore a 5 mg/dL 

BIBLIOGRAFIA 



1994, 397 pp. 

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ESPECIFICACIONES DE USO 

Los kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 2 BENCE JONES, 4 BENCE JONES y HYDRAGEL 9 BENCE JONES están diseñados para la detección de 

proteínas Bence Jones, ó cadenas ligeras libres (kappa o lambda) en orina o suero humano, respectivamente, mediante inmunofijación en geles de 

agarosa tamponados alcalinamente (pH 9.1). Son utilizados junto con el sistema semiautomático HYDRASYS, realizándose así todo el conjunto de 

pasos necesarios para la obtención de geles listos para su posterior interpretación. 

Las proteínas de la muestra son sometidas a electroforesis e inmunofijación con antisueros que presentan las siguientes especificidades: (1) un 

antisuero trivalente : anti-gamma (Ig G), anti-alfa (Ig A) and anti-mu (Ig M) cadenas pesadas, (2) anti-kappa, libre o no, cadenas ligeras, (3) antilambda, 

libre o no, cadenas ligeras, (4) anti-kappa cadenas ligeras libres, y (5) anti-lambda cadenas, ligeras libres. Después de la inmunofijación, las 

proteínas precipitadas se tiñen con violeta ácido. El exceso de colorante es eliminado con una solución ácida 

Cada gel de agarosa está pensado para analizar: 

- 1 muestra en el kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- 2 muestras en el kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- 4 muestras en el kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- 9 muestras en el kit HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Para uso diagnostico In Vitro. 

PRINCIPIO DEL ENSAYO 

La presencia de bandas anormales en los patrones electroforéticos, principalmente en las fracciones correspondientes a beta-globulinas y gammaglobulinas, 

son siempre sospechosas de ser proteínas monoclonales, y por tanto, son un indicador de gammapatías. Para identificar estas bandas 

anormales se realiza una inmunofijación. 

La inmunofijación permite fijar las proteínas in situ después de la electroforesis, mediante la formación de complejos insolubles en combinación con 

el antisuero correspondiente. 

Se realiza en cuatro etapas : 

1. Separación de las proteínas mediante electroforesis en gel de agarosa. 

2. Fijación e inmunoprecipitación de las proteínas sometidas a electroforesis: La solución fijadora y los antisueros son añadidos directamente sobre 

la superficie del gel en sus pistas de migración electroforética correspondientes. La solución fijadora y los antisueros difunden en el gel 

precipitando todas las proteínas y los correspondientes antígenos, respectivamente. 

3. Las proteínas no precipitadas (solubles) son eliminadas del gel mediante secado (blotting) y posterior lavado. Los complejos antígeno-anticuerpo 

quedan atrapados en la matriz del gel. 

4. Las proteínas precipitadas se visualizan mediante coloración. Las bandas inmunoprecipitadas son entonces comparadas con las bandas 

anormales correspondientes presentes en el patrón electroforético de la muestra. 

Para identificar de forma precisa la naturaleza de la banda monoclonal, la muestra es analizada en seis carriles. Después de la electroforesis, el carril 

ELP sirve de referencia gracias a que el fijador ha precipitado todas las proteínas presentes ; los otros cinco carriles permiten caracterizar la/s banda/s 

monoclonal/es gracias al antisuero trivalente (anti-cadenas pesadas gamma, alfa y mu) y a los antisueros anti-cadenas ligeras kappa y lambda (libres 

y ligadas) y anti-cadenas ligeras libres kappa y lambda. 

Esta técnica rápida y simple proporciona una imagen clara y fácilmente interpretable. 

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN EL KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES E HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES REF. 4321 KIT HYDRAGEL 2 BENCE JONES REF. 4322 KIT HYDRAGEL 4 BENCE JONES REF. 4324 KITS HYDRAGEL 9 BENCE JONES REF. 4329 REF. 4383* Geles de Agarosa (listos para usar) 10 geles 10 geles 80 geles Esponjas tamponadas (listas para usar) 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 80 bolsas de 2 Colorante Violeta Acido (solución stock) 1 vial de 75 ml 1 vial de 75 ml 8 viales de 75 ml Solución Fijadora (lista para usar) 1 vial de 2.9 ml Inmunoglobulinas de Mamífero anti-cadenas pesadas humanas gamma, alfa, mu (trivalente) (listo para usar) 1 vial de 2.0 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas kappa libres o no (listo para usar) 1 vial de 2.0 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas Lambda libres o no (listo para usar) 1 vial de 2.0 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas Kappa libres (listo para usar) 1 vial de 2.0 ml Inmunoglobulinas de mamífero anti-cadenas ligeras humanas Lambda libres (listo para usar) 1 vial de 2.0 ml Aplicadores (listos para usar) 1 caja de 10 2 cajas de 10 24 cajas de 10 3 cajas de 10 Segmentos para antisueros (listos para usar) 1 caja de 10 1 caja de 10 8 cajas de 10 Papeles de Filtro - finos 1 paquete de 10 1 paquete de 10 8 paquetes de 10 

| Papeles de Filtro - gruesos | 1 paquete de 10 | 1 paquete de 10 | 8 paquetes de 10 | 

(*) MAXI-KIT HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

NOTA: La solución fijadora y los antisueros se comercializan por separado excepto en el MAXI-KIT (consulte REACTIVOS NECESARIOS NO 

SUMINISTRADOS). 

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INSTRUCCIONES SEBIA - Español

PARA OBTENER RESULTADOS ÓPTIMOS 

Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y según las instrucciones incluidas. 

LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES. 


1. GELES DE AGAROSA 

Preparación 

Los geles de agarosa están listos para el uso. Cada gel contiene: agarosa, 8 g/l ; tampón tris-barbital pH 9.1 ± 0.1 ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCION: Los geles de agarosa contienen barbital 0.31 % y barbital sódico 0.34 % ¡No ingerir! ¡Si se ingiere accidentalmente consultar 

inmediatamente al médico! 

Uso 

Medio de soporte para la electroforesis de proteínas e inmunofijación. 

Almacenamiento, estabilidad y señales de deterioro 

Almacenar los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente (15 a 30 °C) o refrigerados (2 a 8 °C). Son 

estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit y en sus recipientes protectores. (La flecha situada en la cara frontal de la caja del 

kit debe apuntar hacia arriba). Evitar su almacenamiento cerca de una ventana o de una fuente de calor. Evitar variaciones importantes de 

temperatura durante su almacenamiento. NO CONGELAR. 

Desechar cuando: 

(i) haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelación del gel) ; 

(ii) se observe crecimiento bacteriano o fúngico ; 

(iii) se evidencie una cantidad excesiva de líquido en el recipiente del gel (consecuencia de la exudación del tampón debida a un almacenamiento 

inadecuado). 

2. ESPONJAS TAMPONADAS 

Preparación 

Las esponjas tamponadas están listas para su uso. Contienen: tampón tris-barbital pH 9.1 ± 0.3 ; azida sódica ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: El tampón de las esponjas contiene barbital 0.92 %, barbital sódico 1.03 % y azida sódica 0.30 %. ¡No ingerir! ¡En caso de 

ingestión accidental, consultar inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se 

conoce su tendencia a formar compuestos explosivos con la azida sódica. 

Uso 

Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio del tampón de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos. 


Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. 

Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora (la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). 

Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora. NO LAS CONGELE. 

Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa está abierta o si las esponjas están secas. 

3. COLORANTE VIOLETA ACIDO 

Preparación 

El vial de la solución stock de colorante se diluye hasta 300 ml con agua destilada o desionizada. Después de la dilución, la solución de trabajo del 

colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; violeta ácido, 0.2 g/dL ; etilén-glicol, 3.25 % ; aditivos, inocuos a las concentraciones usadas, necesarios 

para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Es perjudicial si se ingiere. 

Uso 

Para la tinción de geles con separación electroforética de proteínas y posterior inmunofijación. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para la coloración de 10 geles. Cambie el colorante después de su utilización en 10 coloraciones. 


Almacenar ambas soluciones, stock y de trabajo del colorante, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados para evitar la 

evaporación. La solución stock del colorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. La solución 

de trabajo es estable 6 meses. 

4. CAJA DE ANTISUEROS Y SOLUCIÓN FIJADORA (Ref. N° 4383) 

4.1 ANTISUEROS 

Preparación 

Los antisueros están listos para su uso. Contienen inmunoglobulinas totales de mamífero anti-humanas. Cada reactivo tiene un color específico para 

evitar errores al utilizarlos. El color es el mismo que el de las etiquetas de los viales. 

Cuando los antisueros presentan una ligera turbidez o precipitados, generalmente basta con poner los viales a temperatura ambiente unos 10 minutos 

antes de su utilización. Si la turbidez persiste, no perturba nada la reacción inmunológica. Si hay un precipitado insoluble, se recomienda centrifugar 

los antisueros durante 5 minutos a 3000 r.p.m. 

Utilización 

Para la inmunoprecipitación de las proteínas separadas mediante electroforesis. 

Los antisueros pueden ser de orígenes animales diferentes. Es por tanto imperativo no mezclar dos viales diferentes de antisueros, incluso si son de 

la misma especificidad, y SIEMPRE hay que cambiar la punta de la pipeta al cambiar de vial. 

IMPORTANTE: Para evitar cualquier contaminación entre los diferentes reactivos, es imperativo poner cada tapón sobre el vial correspondiente 

después de usarlo. 

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Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

Los antisueros deben ser conservados en la nevera (entre 2 y 8 °C). Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las 

etiquetas de los viales de antisuero. 

NOTA: Durante el transporte, los antisueros pueden permanecer a temperatura ambiente (entre 15 y 30 °C) durante 15 días sin que esto afecte a la 

calidad del test. 

4.2 SOLUCIÓN FIJADORA 

Preparación 

La solución fijadora está lista para su uso. Contiene: una solución ácida y aditivos, inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un 

funcionamiento óptimo. 

Tiene un color específico para evitar errores al usarlo. 

Utilización 

Para la fijación de las proteínas separadas mediante electroforesis en el carril de referencia (ELP). 

IMPORTANTE: Para evitar cualquier contaminación entre los diferentes reactivos, es imperativo poner cada tapón sobre el vial correspondiente 

después de usarlo. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

La solución fijadora puede conservarse a temperatura ambiente o refrigerada. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la 

etiqueta del vial de solución fijadora. 

Debe estar exenta de precipitados. 

5. APLICADORES 

Uso 

Aplicadores precortados de un solo uso para la aplicación de la muestra. 

Almacenamiento 

Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados. 

6. SEGMENTOS PARA ANTISUEROS 

Utilización 

Segmentos coloreados, de un solo uso, para la aplicación de la solución fijadora y de los antisueros en la inmunofijación. 

ATENCIÓN: Manipule con cuidado los segmentos que contengan antisueros. 

7. PAPELES DE FILTRO FINOS 

Uso 

Papeles finos absorbentes precortados, de un solo uso, para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicación de la muestra. 

Conservación 

Les papeles de filtro finos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera. 

8. PAPELES DE FILTRO GRUESOS 

Uso 

Papeles de filtro gruesos, de un solo uso, para la eliminación de proteínas no precipitadas del gel, después de haber realizado la inmunofijación. 

Conservación 

Los papeles de filtro gruesos deben conservarse en un lugar seco a temperatura ambiente o en la nevera. 

REACTIVOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. CAJA DE ANTISUEROS Y SOLUCIÓN FIJADORA (para los kits 4321, 4322, 4324 y 4329) 

La caja de Antisueros y Solución Fijadora GAM, K, L (anti-cadenas pesadas gamma, alfa y mu, anti-cadenas ligeras kappa, libres y ligadas, y anticadenas 

ligeras lambda, libres y ligadas) para inmunofijación (SEBIA, referencia N° 4335) contiene tres viales de antisueros y un vial de solución 

fijadora de 1 ml cada uno, específicos de la técnica de inmunofijación realizada con la plantilla dinámica. 

1.1 ANTISUEROS 

Vea el párrafo precedente 4.1. 

1.2 SOLUCIÓN FIJADORA 


2. CAJA DE ANTISUEROS ANTI-CADENAS LIGERAS LIBRES (para los kits 4321, 4322, 4324 y 4329) 

La caja de Antisueros anti-cadenas ligeras libres K y L para inmunofijación (SEBIA, referencia N° 4336) contiene dos viales de antisueros de 1 ml 

cada uno, específicos de la técnica de inmunofijación realizada con la plantilla dinámica. 


3. SOLUCIÓN DECOLORANTE 

Preparación 

Cada vial de Solución Decolorante stock (SEBIA, PN 4540, 10 viales de 100 ml) se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada. Es 

conveniente diluir sólo 5 ml de la solución stock hasta 5 litros, volumen del contenedor de la solución decolorante. Después de la dilución, la solución 

decolorante de trabajo contiene: ácido cítrico, 0.5 g/l. 

Uso 

Para decolorar, ésto es, la eliminación del exceso de tinción y la coloración de fondo de los geles. 

Para el lavado del compartimento de coloración. 

Para neutralizar la acidez del decolorante, introduzca dentro del contenedor de desechos vacío 15 ml de sosa al 50 % (solución comercial). 

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Almacenar la solución decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada. La solución stock de decolorante es estable hasta la fecha de 

caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. NO CONGELAR. La solución decolorante de trabajo es estable una semana a 

temperatura ambiente en un contenedor cerrado. No añadir azida sódica. 

Desechar la solución decolorante de trabajo si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

Para evitar la proliferación microbiana en la solución decolorante diluida que se vaya a almacenar durante más de una semana, añada 5 µL/dL de 

ProClin 300. 

El decolorante diluido al que se ha añadido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de 

caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante. 

4. SOLUCIÓN DE LAVADO HYDRASYS 

Preparación 

Cada vial de la Solución de Lavado stock HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 viales, 80 ml cada uno) se diluye hasta 5 litros con agua destilada o 

desionizada. Después de la dilución, la solución de trabajo de lavado contiene: tampón alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; azida sódica. 

ATENCIÓN: La solución stock de lavado contiene azida sódica 0.625 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, consultar 

inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su tendencia a formar 

compuestos explosivos con la azida sódica. Lavar siempre con gran cantidad de agua. 

Uso 

La solución de lavado HYDRASYS está diseñada para lavar las proteínas no precipitadas de los geles. Sirve para limpiar el Compartimento de Tinción 

del HYDRASYS. Usar periódicamente, p. ej., si el instrumento se usa a diario, lavar el compartimento de tinción semanalmente. 

Ver la hoja de instrucciones para las indicaciones de uso. 


Almacenar ambas soluciones de lavado, stock y de trabajo, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados. La solución stock de 

lavado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial. 

Desechar la solución de trabajo de lavado si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

5. SALINA 

Preparación 

Preparar una solución de NaCl 0.15 M (9 g/l) en agua destilada o desionizada. 

Uso 

Para diluir las muestras si es necesario. 


Almacenar a temperatura ambiente o refrigerada. Desechar después de 3 meses o si cambia de apariencia, por ejemplo, se vuelve turbia debido a 

contaminación microbiana. Para períodos de almacenaje más prolongados, añadir azida sódica, 1 g/l. 

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 ó PN 1211. 

2. Pipeteador, manual o automático, como el HYDRAplus SEBIA, referencia N° 1215, para la carga de los aplicadores o de los segmentos para 

antisueros. 

3. Cámara húmeda, PN 1270, suministrada con HYDRASYS. 

4. Kit de Contenedores suministrado con HYDRASYS. 

5. Barra de Guia de la Plantilla SEBIA, suministrada con HYDRASYS. 

6. Plantilla dinámica, SEBIA, referencia N° 1255. 

7. Pipetas: 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl y 200 µl. 

MUESTRAS PARA ANALISIS 

Extracción y almacenamiento de las muestras 

• El análisis debe hacerse con orinas frescas. Las orinas pueden ser conservadas en la nevera (entre 2 y 8 °C) menos de una semana. Para 

conservaciones prolongadas, congele las orinas ; las orinas congeladas son estables 1 mes como mínimo. La conservación de las orinas 

congeladas mejora si se añade a la muestra tampón HEPES 0,1 M (pH 6,75) y / o azida sódica 0,2 g/l. Las orinas descongeladas pueden dejar 

una marca en el punto de aplicación, debida a la desnaturalización de proteínas. 

IMPORTANTE: No utilice conservantes que contengan ácido bórico. 

• Si se analiza sueros, deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos usados en el análisis de laboratorio clínico. Si es necesario, 

conservar el suero entre 2 y 8 °C hasta 1 semana. Para períodos de conservación más largos, congelar las muestras. Los sueros congelados son 

estables durante un mes por lo menos. Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicación debidas a la desnaturalización 

de proteínas o lipoproteínas. 

Preparación de las muestras 

Orinas 

El análisis se realiza con orinas no concentradas. En estas condiciones, el límite de detección de una proteína de Bence Jones está entre 10 y 50 mg/l. 

Si se desea una mayor sensibilidad conviene concentrar las orinas (de 20 a 100 veces). 

NOTA : En caso de orinas turbias (concentradas o no), se recomienda eliminar las partículas, centrifugando las muestras (durante 10 minutos a 

3000 rpm) o por filtración (en un filtro de 0,45 µm) para obtener una buena difusión en los aplicadores. 

- 49 -


Sueros 

Para investigar la presencia de las proteínas de Bence Jones en la orina y el suero simultáneamente, diluya el suero con salina o con diluyente para 

inmunofijación prediluido a 1/4 (1 volumen de diluyente + 3 volúmenes de agua destilada o desmineralizada) a 1/10 para los carriles ELP, GAM, K y 

L (1 volumen de suero + 9 volúmenes de diluyente prediluido o de salina) y a 1/3 (1 volumen de suero + 2 volúmenes de diluyente prediluido o de 

salina) para los carriles Kl y Ll. 

NOTA : Si la concentración de inmunoglobulinas es inferior a 5 g/l, se recomienda diluir menos el suero con la salina o con el diluyente para 

inmunofijación prediluido a 1/4. 

Por ejemplo, diluya el suero a 1/5 para los carriles ELP, GAM, K y L (1 volumen de suero + 4 volúmenes de diluyente prediluido o de salina) y a 1/2 

(1 volumen de suero + 1 volumen de diluyente prediluido o de salina) para los carriles Kl y Ll. 

Para análisis de Ig D y/o de Ig E, aplicar las mismas diluciones que para las cadenas ligeras libres y ligadas. 

IMPORTANTE : 

• Evitar las muestras de plasma. El fibrinógeno da lugar a una banda cerca del punto de aplicación que puede ser confundida con una 

inmunoglobulina monoclonal. 

• Algunas orinas contienen una concentración importante de sales, que produce una deformación del gel durante la migración que puede alterar los 

perfiles después de la inmunofijación. Conviene eliminar este exceso de sales mediante diálisis. 

• Las orinas que presenten proteolisis pueden dar lugar a reacciones positivas con el antisuero anti-cadenas ligeras libres. En tal caso, una 

paraproteína sérica eliminada en la orina puede mostrar una banda monoclonal con el antisuero trivalente y con uno de los antisueros anti-cadenas 

ligeras libres y unidas, y con el correspondiente antisuero anti cadenas ligeras libres. 

• La polimerización de las proteínas de Bence Jones generalmente disminuye la sensibilidad de detección con el antisuero anti-cadenas ligeras libres 

ya que la polimerización puede bloquear los epÌtopos que normalmente reaccionan con el antisuero anti-cadenas ligeras libres. Cuando no se ha 

detectado nada y se sospecha la presencia de proteÌnas de Bence Jones, despolimerizar antes de la electroforesis: mezclar 100 µl de orina con 

5 µl ß-mercaptoetanol diluido 1:10 con salino y aplicar. 

PROCEDIMIENTO 

El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautomático multiparamétrico. Las etapas automáticas incluyen el procesado de los geles de agarosa 

HYDRAGEL en la siguiente secuencia: aplicación de la muestra, migración electroforética, incubación con solución fijadora y antisueros, secado, 

tinción, destinción y secado final. Las etapas manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles, aplicación de la solución fijadora y antisueros, 

y la puesta en marcha del instrumento para la operación. 

LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS 

I. PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACIÓN 

1. Encender el HYDRASYS. 

2. Coloque un aplicador para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES ó HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 muestras), dos aplicadores para el 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 muestras) ó 3 aplicadores para el HYDRAGEL 9 BENCE JONES, en una superficie plana, con los 

números de los pocillos hacia arriba (Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de la muestra en cada pocillo. Cargar cada aplicador en el plazo de 2 minutos. 

| PISTA MIGRACIÓN / IMMUNOFIJACIÓN | 

POCILLOS DE APLICACIÓN ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 MUESTRA N° 1 Ó 3 2 3 4 5 6 7 MUESTRA N° 2 Ó 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES MUESTRA N° 1, 4 Ó 7 1 2 3 4 5 6 MUESTRA N° 2, 5 Ó 8 7 8 9 10 11 12 

| MUESTRA N° 3, 6 Ó 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANTE: En el análisis hecho con HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, no utilice los pocillos 1, 8 y 15 ; se recomienda identificarlos 

previamente con un rotulador para evitar aplicar muestra en ellos por error. 

- Colocar el(los) aplicador(es) en la cámara húmeda, con el peine hacia arriba (asirlos por el plástico protector del peine). 

Ver la hoja de instrucciones de la cámara húmeda para más detalles. 

- Dejar difundir las muestras durante 5 minutos después de la última aplicación. 

3. Abrir la puerta del Módulo de migración y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador. 

ATENCIÓN: ¡Nunca cerrar la puerta cuando los soportes están elevados! 

4. Seleccione en el menú el programa de migración "1 BJ ME/MD" para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES, " 2/4 BJ-UP ME/MD " para el 

HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ó "9 BJ MD" para el HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

5. Extraer las esponjas tamponadas de su envoltorio ; asirlas por los extremos de plástico. Engarzar los extremos de plástico agujereados con 

las puntas metálicas del soporte de los electrodos ; los extremos de plástico deben quedar encarados al soporte (Fig. 2). 

6. Abrir el contenedor del HYDRAGEL. 

- Extienda un papel de filtro fino de manera rápida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de líquido. Retire el papel 

inmediatamente. 

ADVERTENCIA: No deje que el papel de filtro contacte demasiado rato con el gel para evitar que se deshidrate. 

- Dispense 120 µl de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES ó 200 µl para el HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 

y HYDRAGEL 9 BENCE JONES, en el tercio inferior del cuadro serigrafiado en la placa del módulo de migración. 

- Colocar el gel (la cara de agarosa hacia arriba) con su lado inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado (Fig. 3). 

- Aplicar el gel en la superficie, haciéndolo contactar con el agua (Fig. 3). Asegurarse que no queden burbujas, que el agua esté extendida 

bajo toda la superficie del gel y que éste esté alineado con el marco serigrafiado. 

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7. Devolver ambos soportes a su posición original. En esta posición, las esponjas tamponadas no tocan el gel. NO FORZAR LOS SOPORTES 

HACIA ABAJO. 

8. Extraer el(los) aplicador(es) de la cámara húmeda. Asirlo(s) por el plástico protector. 

- Romper el plástico protector precortado del peine. 

- Ponga el/los aplicador/es en el soporte de los aplicadores: 

- HYDRAGEL 1 BENCE JONES ó HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 muestras): posición N° 6, 

- HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 muestras): posiciones N° 3 y 9, 

- HYDRAGEL 9 BENCE JONES: posiciones N° 2, 6 y 10. 

IMPORTANTE: Los números impresos en el(los) aplicador(es) deben quedar de cara al usuario (Fig. 4). 

Para una perfecta reproducibilidad de la zona de aplicación, desplace los aplicadores hacia uno de los lados del soporte de los aplicadores, 

por ejemplo hacia la izquierda. 

9. Asegurarse de devolver los soportes a su posición original. Cerrar la puerta del módulo de migración. 

10. Iniciar el procedimiento inmediatamente presionando la tecla "START" (flecha verde)en el lado izquierdo del teclado. 

IMPORTANTE: Asegurarse que la toma de aire en el lado derecho del instrumento no está bloqueada. 

MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Los dos soportes descienden, con lo cual esponjas tamponadas y aplicador(es) entran en contacto con la superficie del gel. 

• El soporte del aplicador se eleva. 

• Migración a 10 W constantes para el HYDRAGEL 1 BENCE JONES y a 20 W constantes para el HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, hasta que se 

hayan acumulado 42 Vh (durante unos 9 minutos) y a 20 W constantes hasta que se hayan acumulado 36 Vh (durante unos 7 minutos) para el 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, a 20 °C, siendo la temperatura controlada por efecto Peltier. 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos. 

• Un pitido audible se produce al finalizar la migración. En pantalla aparece el siguiente mensaje: " AS". 

NOTA: El módulo de migración permanece con la puerta cerrada durante todas las etapas de la migración. 

II. PREPARACIÓN DE LA INMUNOFIJACIÓN 

Los diferentes elementos de la plantilla dinámica (guía de referencia coloreada, segmento para antisueros, soporte del segmento, guía y reductor de 

superficie) aparecen en la figura 5. 

Durante la migración, prepare la plantilla dinámica de la forma siguiente: 

1. Ponga la guía de la plantilla dinámica en una superficie plana. 

IMPORTANTE: El análisis de una o dos muestras con la plantilla dinámica necesita la utilización del reductor de superficie, que debe 

colocarse en la guía de la plantilla dinámica. 

2. Ponga un segmento para antisueros en el soporte del segmento (Fig. 6): 

- Incline el segmento 45° y colóquelo en las patillas del soporte del segmento. 

- Apoyándose en estos resortes, gire el segmento para fijarlo en las muescas del soporte del segmento. 

ATENCIÓN: Compruebe que el segmento esté fijado correctamente en el soporte del segmento: los salientes situados en los 

extremos del segmento deben estar bien encajados en las dos muescas del soporte del segmento. 

3. Coloque el conjunto segmento – soporte del segmento en la guía de la plantilla dinámica (Fig. 7) (equipada con un reductor de superficie para 

el análisis de 1 ó 2 muestras) y luego ponga la guía de referencia coloreada, que indica los lugares en los que aplicar los reactivos, 

correspondiente a la técnica, sobre el soporte del segmento delante de los pocillos del segmento para antisueros (Fig. 8). 

4. Aplique los reactivos, cuyo color se indica en la tabla inferior, en el segmento para antisueros: 

- Segmento de 6 pocillos para HYDRAGEL 1 BENCE JONES : 8 µl por pocillo, 

- Segmento de 15 pocillos para HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 : 8 µl por pocillo para el análisis de 2 muestras, 

12 µl por pocillo para el análisis de 4 muestras, 

- Segmento de 18 pocillos para HYDRAGEL 9 BENCE JONES : 8 µl por pocillo. 

CARRIL REACTIVO COLOR ELP solución fijadora amarillo GAM antisuero trivalente violeta K antisuero anti-cadenas ligeras kappa (libres y ligadas) verde claro L antisuero anti-cadenas ligeras lambda (libres y ligadas) azul claro Kl antisuero anti-cadenas ligeras libres kappa naranja 

| Ll | antisuero anti-cadenas ligeras libres lambda | rojo | 

NOTA : Para evitar errores en la aplicación, los reactivos están coloreados y el color del carril a rellenar aparece en la guía de referencia 

coloreada. 

IMPORTANTE: En el análisis hecho con HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, no utilice los pocillos del segmento de antisueros que están en las 

posiciones 1, 8 y 15. 

Aspire los reactivos sin que se formen burbujas de aire en la punta de la pipeta. 

Para aplicar los reactivos (Fig. 9): 

- sostenga la pipeta inclinada, 

- apoye ligeramente la punta de la pipeta en un lado del pocillo y dispense la gota de reactivo en el mismo. 

5. Retire la guía de referencia coloreada. 

III. INMUNOFIJACIÓN 

1. Abra la tapa del módulo de migración. 

2. Saque el/los aplicador/es y tírelo/s. 

3. Eleve los soportes de los electrodos y los aplicadores y saque las esponjas tamponadas cogiéndolas por las lengüetas y tírelas. 

- Saque los soportes de los electrodos y los aplicadores. 

- Limpie los electrodos con un pañuelo de papel humedecido. 

- Deje el gel en su lugar en el módulo de migración. 

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4. Ponga en su lugar la plantilla dinámica de aplicación de reactivos de la forma siguiente (Fig. 10) : 

- coloque la barra metálica destinada al enganche de la plantilla dinámica con ayuda de los pernos de anclaje. (Una vez colocada, la barra 

metálica puede permanecer en el HYDRASYS) ; 

- coloque las muescas de la plantilla en las señales de la barra cogiendo la plantilla por la lengüeta ; 

- gire la plantilla para colocarla en la placa del HYDRASYS. 

IMPORTANTE: Ajuste previamente la posición de la plantilla para obtener una correspondencia perfecta entre los perfiles electroforéticos del 

gel y los carriles de inmunofijación de la plantilla. 

5. Ponga el soporte del segmento en el punto más bajo de la guía, dirigido hacia el operario. Sostenga el conjunto soporte-segmento por el asa 

situada a la derecha y presione en el punto de apoyo central, de forma que el segmento contacte con el gel. Deje de presionar, y entonces 

los reactivos se extenderán bajo cada carril (Fig. 11). 

6. Inmediatamente, con ayuda del asa situada a la derecha, reparta los reactivos efectuando un movimiento lento y regular de ida y vuelta de 

la plantilla dinámica por encima del gel (la aplicación debe durar unos 5 segundos) (Fig. 12). 

ATENCIÓN: Durante esta operación, la plantilla sólo debe cogerse por el asa sin tocar la guía. No presione nunca por segunda vez: 

los reactivos podrían mezclarse. 

7. Saque la guía y la plantilla dinámica: 

- Coja la guía por el asa ; 

- Gire la guía alrededor de la barra metálica y sáquela ; 

- Saque el segmento del soporte y tírelo. 

ATENCIÓN: Manipule con cuidado los segmentos que contengan antisueros. 

- Queda un ligero exceso de reactivos sobre el gel en forma de gota a la altura de los orificios de los pocillos al quitar la plantilla, sin ningún 

efecto en los resultados. 

8. Cierre la tapa del módulo de migración. 

9. Inicie el procedimiento inmediatamente apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

En la pantalla aparece el mensaje: "[INCUBACIÓN]". 

INMUNOFIJACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Incubación a 20 °C, controlados por efecto Peltier, durante 10 minutos. 

• Suena un pitido y la tapa del módulo de migración se desbloquea. 

En la pantalla aparece el mensaje: " PAP.". 

NOTA: Durante la incubación, la tapa del módulo de migración permanece bloqueada. 

IV. ABSORCIÓN CON PAPEL 

1. Abra la tapa del módulo de migración. 

2. Aplique un papel de filtro grueso sobre el gel: 

- incline el papel de filtro grueso unos 45° y alinee el borde inferior del papel de filtro con el borde inferior del gel ; 

- coloque el papel encima del gel. 

IMPORTANTE: Presione sobre toda la superficie del papel de filtro para asegurar un contacto perfecto entre el gel y el papel. 

3. Cierre la tapa del módulo de migración. 

4. Inicie el procedimiento apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

ABSORCIÓN CON PAPEL – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Absorción a 40 °C, controlados por efecto Peltier, durante 3 minutos. 

En la pantalla aparece el mensaje: "[ABSORCIÓN]". 

• Suena un pitido. 

En la pantalla aparece el mensaje: "❊PAP.". 

V. SECADO DEL GEL 

1. Abrir la tapa del módulo de migración. 

2. Extraer el papel de filtro, dejando el gel en su posición actual. 

3. Cerrar la tapa. 

4. Iniciar el procedimiento presionando la tecla "START" (flecha verde situada a la izquierda en el teclado). 

SECADO DEL GEL – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Secado a 50 °C controlado mediante efecto Peltier, durante 6 minutos. 

• Un pitido nos indica que la tapa se desbloquea. El gel permanecerá a 50 °C mientras la tapa permanezca cerrada. 

NOTA: El módulo de migración permanece cerrado mientras se produce el proceso de secado. 

VI. PREPARACIÓN DE LAS ETAPAS DE LAVADO, COLORACIÓN Y DECOLORACIÓN DEL GEL 

1. Abrir la tapa. 

2. Extraer el gel secado para su procesado posterior. 

3. Abrir el soporte del gel. Colocarlo en una superficie plana y posicionar el gel secado (con la parte de agarosa hacia arriba) en los orificios de 

las dos varillas y cerrar el soporte. Comprobar que el gel está colocado adecuadamente dentro del soporte. (Fig. 13). 

4. Colocar el soporte del gel en el Módulo de Procesado / Tinción. 

IMPORTANTE: Antes de comenzar con el programa de procesado / tinción, comprobar lo siguiente: 

- el contenedor de solución de lavado contiene por lo menos 400 ml de solución de lavado ; 

- el contenedor de colorante se ha llenado con 300 ml de solución de tinción ; 

- el contenedor de decolorante contiene por lo menos 1 litro de solución decolorante ; 

- el contenedor de deshechos está vacío. 

Para la conexión de los reactivos: consultar la información que aparece en la pantalla del instrumento (seleccionar la tecla : VER CANALES). 

IMPORTANTE: No olvidar bloquear los canales no utilizados 

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5. Seleccionar el programa de tinción "IF ACID VIOLET" en el menú del instrumento e iniciar el proceso apretando la tecla "START" (flecha verde 

situada a la derecha en el teclado). 

Durante todas las secuencias de coloración, decoloración y secado, el sistema permanece bloqueado. 

Después del enfriamiento de la cubeta, una señal sonora (bip) suena y el sistema se desbloquea (la ventilación se mantiene hasta la 

recuperación del porta-films). 

NOTAS: 

- La temperatura de la placa de migración va descendiendo desde que se ha abierto la tapa hasta que alcanza 20 °C (en menos de 5 minutos). En 

este momento podremos iniciar una nueva migración. 

- Volver a colocar el portaaplicadores en su ubicación original. 

- Limpiar la placa de control de temperatura con un pañuelo de papel suave ligeramente humedecido. 

VII. FINALIZACION DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Retirar el soporte del gel del compartimento, abrirlo y extraer el gel ya seco. 

2. Si procede, limpiar el reverso del gel (soporte plástico) con un papel suave y húmedo. 

NOTA: En los geles con varias filas de muestras (2 ó 3), las longitudes de migración pueden ser ligeramente diferentes, sin ninguna repercusión 

en los resultados. 

RESULTADOS 

Interpretación 

La presencia de la proteína de Bence Jones en la orinase caracteriza por: 

- una banda monoclonal detectada con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras kappa o lambda libres o unidas (pistas K o L ), 

- una banda monoclonal detectada con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras kappa o lambda libres (pistas Kl o Ll), 

- ausencia de reacción con el antisuero trivalente (pista GAM). 

La paraproteína sérica eliminada en la orina sin la proteína de Bence Jones se caracteriza por: 

- una banda monoclonal detectada con el antisuero trivalente, 

- la misma banda detectada con uno delos antisueros anti-cadenas ligeras libres y unidas y 

- ausencia de reacción con el antisuero anti-cadenas ligeras libres correspondiente. 

La paraproteína sérica eliminada en la orina asociada con la proteína de Bence Jones se caracteriza por : 

- una banda monoclonal detectada con el antisuero trivalente, 

- dos bandas detectadas con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras libres o unidas (u ocasionalmente una banda detectada con uno de 

los antisueros anti-cadenas ligeras libres y unidas y una banda detectada con el otro antisuero anti-cadenas ligeras libres y unidas), 

- una banda revelada con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras libres. Esta banda generalmente no migra al mismo nivel que la 

detectada con el antisuero trivalente. 

La proteína de Bence Jones en diferentes formas de polimerización se caracteriza por: 

- falta de reacción con el antisuero trivalente, 

- varias bandas reveladas con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras libres y unidas, 

- las mismas bandas detectadas con los correspondientes antisueros anti-cadenas ligeras libres. 

Interferencias y limitaciones 

La utilización de antisueros distintos a los específicos para la técnica de inmunofijación realizada con la plantilla dinámica puede afectar a la calidad 

de los resultados. 

Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no puede darse 

ninguna garantía respecto a la detección de la totalidad de todos los componente monoclonales. 

Resolución de problemas 

Avisar al Servicio de Atención Técnica del distribuidor cuando el test no funcione, pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la 

preparación y almacenaje de los materiales y para el procedimiento a seguir. 

Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como las informaciones relativas a la eliminación de los desechos, están disponibles 

en el Servicio de Asistencia Técnica de su distribuidor. 

CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS 

Reproducibilidad intraserial 

Técnica HYDRAGEL 4 BENCE JONES 

Migración de tres (3) muestras patológicas: dos orinas con proteínas de Bence Jones (cadenas ligeras libres kappa y lambda) y un suero que presenta 

una cadena ligera libre lambda. 

La migración y la inmunofijación de cada muestra se ha realizado con 2 lotes diferentes de geles HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 a razón de 

4 análisis por gel, seguidos de una coloración con violeta ácido. 


Migración de tres (3) muestras patológicas: dos orinas con proteínas de Bence Jones (cadenas ligeras libres kappa y lambda) y un suero que presenta 

una cadena ligera libre lambda. 

La migración y la inmunofijación de cada muestra han sido realizadas con 2 lotes diferentes de geles HYDRAGEL 9 BENCE JONES a razón de 

9 análisis por gel, seguidas de una coloración con violeta ácido. 

Todas las muestras analizadas proporcionan los mismos resultados para los 2 lotes de geles probados. Los perfiles obtenidos son característicos de 

cada una de las muestras analizadas. 

En las técnicas HYDRAGEL 4 BENCE JONES e HYDRAGEL 9 BENCE JONES, la inmunofijación sólo detecta una banda monoclonal 

correspondiente a una proteína de Bence Jones, de forma reproducible en cada una de las tres muestras patológicas. 

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Reproducibilidad interserial 


Migración de cuatro (4) muestras patológicas diferentes, tres orinas y un suero con proteínas de Bence Jones, cadenas ligeras libres kappa o lambda. 

La migración y la inmunofijación de cada muestra han sido realizadas en 10 geles de HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 de 3 lotes diferentes, seguidas 

de una coloración con violeta ácido. 


Migración de nueve (9) muestras patológicas diferentes, seis orinas y tres sueros con proteínas de Bence Jones, cadenas ligeras libres kappa o 

lambda. 

La migración y la inmunofijación de cada muestra han sido realizadas en 10 geles de HYDRAGEL 9 BENCE JONES de 3 lotes diferentes, seguidas 

por una coloración con violeta ácido. 

En las dos técnicas, todas las muestras analizadas proporcionan los mismos resultados para los 3 lotes de geles probados. Los perfiles obtenidos 

son característicos de las muestras analizadas y la inmunofijación pone en evidencia las bandas monoclonales esperadas de forma reproducible en 

todas las muestras. 

Exactitud 

Veinte muestras diferentes de sueros patológicos con proteínas de Bence Jones y treinta y seis orinas, de las que cinco eran normales, han sido 

analizadas en paralelo con la técnica HYDRAGEL 4 BENCE JONES y con otro sistema comercial de geles de agarosa. 

En las dos técnicas, los resultados obtenidos muestran una correlación perfecta entre los dos sistemas de análisis, y se han detectado las mismas 

bandas en todas las muestras patológicas analizadas, con una sensibilidad del 100 % y una especificidad del 100 % respecto a esta última técnica, 

calculadas según el método recomendado (Wendling, 1986). 

Sensibilidad 

Dos orinas con proteínas de Bence Jones han sido diluidas serialmente y analizadas con la técnica HYDRAGEL 4 BENCE JONES usando los 

antisueros anti-kappa y anti-lambda y anti-kappa libre y anti-lambda libre. 

El límite de detección mínimo de las cadenas ligeras libres kappa y lambda obtenido es del orden de 3 mg/l con los antisueros anti-kappa y antilambda, 

y del orden de 12 mg/l con los antisueros anti-cadenas ligeras libres correspondientes. 

Sin embargo, hay que tener en cuanta que, según la estructura y la naturaleza de la cadena ligera libre, esta sensibilidad puede variar manteniéndose 

en un límite inferior o igual a 50 mg/l (para la detección con los antisueros anti-kappa libre o anti-lambda libre). 

BIBLIOGRAFIA 



1994, 397 pp. 

(3) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. 

Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. 

- 54 -


UTILIZAÇÃO 

Os kits HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES e HYDRAGEL 9 BENCE JONES destinam-se 

à detecção qualitativa e identificação das proteínas Bence Jones, ou cadeias leves livres monoclonais (kapa ou lambda) na urina ou soro humanos 

por imunofixação, no aparelho semi-automático HYDRASYS. 

O sistema HYDRASYS permite realizar todas as sequências, até à obtenção do gel para interpretação. As proteínas são separadas por electroforese 

em tampão alcalino (pH 9,1) e depois imunoprecipitadas com antisoros de especificidades diferentes: antisoro trivalente anti-cadeias pesadas gama 

(Ig G), alfa (Ig A) e mu (Ig M), anti-cadeias leves kapa e lambda (livres e ligadas), anti-cadeias leves livres kapa e lambda. Após imunofixação, as 

proteínas precipitadas são coradas com violeta ácido. O excesso de corante é eliminado em meio ácido. 

Cada gel de agarose poderá analisar: 

- 1 amostra no kit HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- 2 amostras no kit HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- 4 amostras no kit HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- 9 amostras no kit HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Para diagnóstico in vitro. Registado no INFARMED. 

PRINCÍPIO DO TESTE 

As imunoglobulinas monoclonais, marcadores das gamapatias, são detectadas através da electroforese das proteínas. Elas apresentam-se sob a 

forma de bandas anómalas situadas essencialmente nas zonas das beta e gama globulinas. A imunofixação efectuada com a ajuda de anticorpos 

permite a identificação das bandas monoclonais despistadas por electroforese. 

A técnica é feita em quatro etapas: 

1. Separação das proteínas por electroforese em gel de agarose. 

2. Fixação e imunoprecipitação das proteínas despistadas por electroforese: aplicação do fixador e dos antisoros directamente sobre o gel, ao nível 

das pistas de migração. Estes últimos difundem-se no gel. O fixador precipita todas as proteínas e os anticorpos precipitam os antigénios 

correspondentes. 

3. As proteínas solúveis, não precipitadas, são removidas do gel por lavagem e absorção com papel de filtro. As proteínas precipitadas ficam retidas 

no interior da matriz do gel. 

4. Coloração das proteínas e comparação da posição das bandas imunoprecipitadas com as bandas anómalas observadas no perfil electroforético 

da amostra. 

Para identificar de forma precisa a natureza das bandas monoclonais, as amostras são testadas simultaneamente em seis pistas. Depois da 

electroforese, a pista ELP serve como referência, mostrando o perfil electroforético das proteínas da amostra. As restantes cinco pistas permitem a 

caracterização da(s) bandas(s) monoclonal(is) graças a um antisoro trivalente anti-cadeias pesadas (gama, alfa e mu), e antisoros anti-cadeias leves 

kapa e lambda (livres e ligadas) e antisoros anti-cadeias leves livres kapa e lambda. 

Esta técnica simples e rápida proporciona uma imagem clara e fácil de interpretar. 

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS NO KIT HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES E HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES REF. N° 4321 HYDRAGEL 2 BENCE JONES REF. N° 4322 HYDRAGEL 4 BENCE JONES REF. N° 4324 HYDRAGEL 9 BENCE JONES REF. N° 4329 REF. N° 4383* Geles de agarose (prontos a usar) 10 geles 10 geles 80 geles Tiras de tampão (prontas a usar) 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 80 pacotes de 2 Corante violeta ácido (solução concentrada) 1 frasco, 75 ml 1 frasco, 75 ml 8 frascos, 75 ml Fixador (pronto a usar) 1 frasco, 2,9 ml Imunoglobulinas totais de mamífero anti-cadeias pesadas gama, 1 frasco, 2,0 ml alfa e mu (trivalente) (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 2,0 ml anti-cadeias leves kapa (livres e ligadas) (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 2,0 ml anti-cadeias leves lambda (livres e ligadas) (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 2,0 ml anti-cadeias leves livres, kapa (pronto a usar) Imunoglobulinas totais de mamífero, 1 frasco, 2,0 ml anti-cadeias leves livres, lambda (pronto a usar) Aplicadores (prontos a usar) 1 caixa de 10 2 caixas de 10 24 caixas de 10 3 caixas de 10 Segmentos de antisoro 1 pacote de 10 1 pacote de 10 8 pacotes de 10 Papéis de filtro finos 1 pacote de 10 1 pacote de 10 8 pacotes de 10 

| Papéis de filtro espessos | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 8 pacotes de 10 | 

* HYDRAGEL 9 BENCE JONES MAXI-KIT 

NOTA: O Fixador e os Antisoros são fornecidos separadamente, excepto para o MAXI-KIT (ver REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO 

FORNECIDOS). 

PARA UMA OPTIMIZAÇÃO DE RESULTADOS: 

Todos os reagentes do mesmo kit devem ser utilizados em conjunto e de acordo com as instruções de utilização. 

POR FAVOR, LEIA ATENTAMENTE AS INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO. 

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INSTRUÇÕES DE USO SEBIA - Português


1. GELES DE AGAROSE 

Preparação 

Os geles de agarose estão prontos a usar. Cada gel contém: agarose, 8 g/l ; tampão tris-barbital pH 9,1 ± 0,1 ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Os geles de agarose contêm 0,31 % de barbital e 0,34 % de barbital sódico. Não ingerir! Se ingerido, consultar imediatamente um 

médico! 

Utilização 

Suporte para electroforese e imunofixação das proteínas. 

Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração 

Armazenar os geles horizontalmente, nas embalagens protectoras de origem, à temperatura ambiente (15 - 30 ºC) ou no frigorífico (2 - 8 ºC) (a seta 

existente na parte da frente da caixa do kit deve ficar voltada para cima). Os geles são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos das embalagens dos geles. Evitar variações da temperatura durante o armazenamento (ex: não armazenar perto de uma janela ou de 

uma fonte de calor). 

NÃO CONGELAR! 

Deitar fora o gel quando: 

(i) houver cristais ou precipitados na superfície do gel ou quando a textura do mesmo for muito macia (isto sucede se o gel for congelado) ; 

(ii) há desenvolvimento de bactérias ou fungos ; 

(iii) estiver presente uma quantidade anormal de líquido na embalagem do gel (resultante da exsudação do gel devido a condições de 

armazenamento inadequadas). 

2. TIRAS DE TAMPÃO 

Preparação 

As tiras de esponja de tampão estão prontas a usar. Cada uma contém: tampão tris-barbital pH 9,1 ± 0,3 ; azida de sódio ; aditivos, não perigosos 

nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: As tiras contêm 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sódico e 0,30 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar 

imediatamente um médico! Quando deitar fora as tiras evitar o seu contacto com ácidos, chumbo ou cobre, já que estes elementos formam 

compostos explosivos ou tóxicos com a azida de sódio. 

Utilização 

As tiras de tampão funcionam como reservatório de tampão da electroforese e asseguram o contacto entre o gel e os eléctrodos. 


As tiras de tampão podem ser conservadas à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). 

As tiras de tampão devem ser conservadas horizontalmente dentro da embalagem protectora (a seta na parte da frente da caixa deve permanecer 

apontada para cima). 

As tiras são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou na embalagem protectora das tiras. NÃO CONGELAR. 

3. CORANTE VIOLETA ÁCIDO 

Preparação 

O frasco de corante concentrado deve ser diluído até ao volume de 300 ml com água destilada ou desionizada. 

Após diluição, a solução corante contém: solução ácida pH ≈ 2 ; violeta ácido 2 g/l ; etileno-glicol, 3,25 % ; aditivos, não perigosos nas concentrações 

usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Nocivo em caso de ingestão. 

Utilização 

Para corar os geles após a separação electroforética e imunofixação das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar o corante concentrado e a solução diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico, em recipientes fechados para evitar a evaporação. 

As soluções de corante são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos do frasco. A solução de corante diluída é estável 

durante 6 meses. 

4. KIT COM FIXADOR E ANTISOROS (Ref. n° 4383) 

4.1 ANTISOROS 

Preparação 

Prontos a usar. Todos os antisoros são imunoglobulinas totais de mamífero anti-humanas. Cada um tem uma cor específica para evitar erros de 

utilização os rótulos dos frascos têm a mesma cor que as soluções e a pista da máscara de aplicação dos reagentes correspondente. 

Se o antisoro apresentar uma certa turvação, deixe o frasco em repouso à temperatura ambiente durante, pelo menos, 10 minutos antes da sua 

utilização. No entanto e caso a turvação persista, a reacção imunológica não será afectada. Em caso de formação de precipitado insolúvel, é 

recomendada a centrifugação do antisoro durante 5 minutos à rotação de 3000 rpm. 

Utilização 

Para imunoprecipitação das proteínas previamente separadas por electroforese. 

O antisoro pode ser originário de variadas espécies animais. Não misture o conteúdo de dois frascos diferentes de antisoros, mesmo que com a 

mesma especificidade. Actualize SEMPRE a etiqueta da pipeta quando mudar de frasco. 

IMPORTANTE: Para evitar qualquer contaminação entre os diferentes reagentes, é imperativo voltar a colocar a tampa do frasco correspondente, 

após utilização. 


Armazenar os antisoros no frigorífico (2 - 8 ºC). São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos de antisoro. 

NOTA: Durante o transporte, os antisoros podem ser mantidos à temperatura ambiente (15 - 30 ºC) durante 15 dias, sem que isso afecte a qualidade 

do teste. 

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4.2 FIXADOR 

Preparação 

O fixador vem pronto a usar. Contém: solução ácida ; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

O fixador tem uma cor específica, de modo a evitar erros durante a utilização. A cor é a mesma da etiqueta do frasco e da pista da máscara de 

aplicação dos reagentes. 

Utilização 

Para fixar as proteínas separadas por electroforese na pista de referência (ELP). 

IMPORTANTE: Para evitar qualquer contaminação entre os diferentes reagentes, é imperativo voltar a colocar a tampa do frasco correspondente, 

após utilização. 


Armazenar o fixador à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. 

O fixador deve estar livre de precipitados. 

5. APLICADORES 

Utilização 

Aplicadores pré-cortados, de utilização única, para aplicação das amostras. 

Armazenamento 

Armazenar os aplicadores em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

6. SEGMENTO DOS ANTISOROS 

Utilização 

Segmentos coloridos, de utilização única, para a aplicação do fixador e dos antisoros na imunofixação. 

ATENÇÃO: Manipular os suportes contendo antisoros com precaução. 

7. PAPÉIS DE FILTRO FINOS 

Utilização 

Pré-cortados, de utilização única, destinam-se a absorver o excesso de humidade da superfície do gel antes da aplicação da amostra. 

Armanezamento 

Armazenar os papéis de filtro finos em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

8. PAPÉIS DE FILTRO ESPESSOS 

Utilização 

De utilização única, destinam-se a absorver as proteínas não precipitadas da superfície do gel após a fase de imunofixação. 

Armanezamento 

Armazenar os papéis de filtro espessos em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. KIT COM ANTISOROS E FIXADOR (para os kits com ref. 4321, 4322, 4324 e 4329) 

O kit de antisoros e fixador GAM, K, L (antisoros de cadeias pesadas (gama, alfa e mu), e antisoros anti-cadeias leves kapa, livres e ligadas e 

antisoros anti-cadeias leves lambda, livres e ligadas) para imunofixação (SEBIA ref. nº 4335) contém três frascos de antisoros e um de solução 

fixadora, com 1ml cada. São especificos para a realização do procedimento de imunofixação com a Máscara Dinâmica. 

1.1 ANTISOROS 

Ver secção 4.1. 

1.2 FIXADOR 


2. KIT COM ANTISOROS ANTI-CADEIAS LEVES LIVRES (para os kits com ref. 4321, 4322, 4324, 4329) 

O kit de antisoros anti-cadeias leves livres K e L para imunofixação (SEBIA ref. n° 4336) contém dois frascos de antisoros, com 1ml cada. São 

especificos para a realização do procedimemto de imunofixação com a Máscara Dinâmica. 


3. SOLUÇÃO DESCORANTE 

Preparação 

Cada frasco de solução descorante concentrada (SEBIA, ref. nº 4540, 10 frascos de 100 ml cada) deve ser diluída a 1/1000 com água destilada ou 

desionizada e permite obter 100 litros de solução total. É conveniente diluir apenas 5 ml da solução concentrada de cada vez, para o volume final de 

5 litros. Após diluição, a solução descorante contém: ácido cítrico, 0,5 g/l. 

Utilização 

Na descoloração, isto é, remoção do excesso de corante do gel. 

No enxaguamento da câmara de coloração, após lavagem. 

Para neutralizar a acidez da solução descorante, adicionar ao frasco de despejo 15 ml de soda a 50 % (solução disponível no mercado). 


Armazenar a solução descorante concentrada à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos dos frascos da solução descorante. NÃO CONGELAR. A solução descorante diluída é estável por uma semana à temperatura ambiente, 

quando conservada em recipiente fechado. 

Deitar fora a solução diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

Não adicionar azida de sódio. 

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Em caso de conservação mais prolongada da solução diluída (superior a uma semana), adicionar 50 µl/l de ProClin 300 para evitar qualquer 

proliferação microbiana. 

A solução descorante diluída contendo ProClin é estável à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). É estável até ao 

fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco do descolorante. 

4. SOLUÇÃO DE LAVAGEM HYDRASYS 

Preparação 

Cada frasco de solução de lavagem concentrada HYDRASYS (SEBIA, ref. nº 4541, 10 frascos de 80 ml cada) deve ser diluído para a obtenção do 

volume final de 5 litros com água destilada ou desionizada. 

Após diluição, a solução de lavagem contém: tampão alcalino pH 8,8 ± 0,3 ; azida de sódio. 

AVISO: A solução de lavagem contém 0,625 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! Quando em 

contacto com ácidos, chumbo ou cobre, a azida de sódio pode levar à formação de compostos explosivos ou tóxicos. Quando deitar fora 

lavar abundantemente com grandes quantidades de água. 

Utilização 

Para a lavagem do gel após imunofixação de modo a eliminar as proteínas residuais não precipitadas. 

Para a lavagem da câmara de coloração do HYDRASYS. Utilizar periodicamente. Por exemplo, se o aparelho for utilizado diariamente, fazer a 

lavagem da câmara de coloração uma vez por semana. 

Ver as instruções de utilização incluídas na embalagem. 


Armazenar a solução concentrada e a solução diluída em recipientes fechados à temperatura ambiente ou no frigorífico. A solução concentrada é 

estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco da solução de lavagem. 

Deitar fora a solução de lavagem diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

5. SORO FISIOLÓGICO 

Preparação 

Preparar uma solução a 0,15 M (9 g/l) de NaCl em água destilada ou desionizada. 

Utilização 

Para diluir as amostras, se necessário. 


Armazenar à temperatura ambiente ou no frigorífico. Deitar fora após 3 meses ou se notar alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva 

devido a contaminação microbiana. 

Para períodos de armazenamento mais prolongados, adicionar azida de sódio (1 g/l). 

EQUIPAMENTO E ACESSÓRIOS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, ref. n° 1210 ou ref. n° 1211. 

2. HYDRAplus SEBIA, ref. n° 1215, micropipetador, manual ou automático, como alternativa na pipetagem das amostras para os aplicadores 

respectivos ou dos segmentos de antisoro. 

3. Câmara húmida fornecida com o sistema HYDRASYS, ref. n° 1270. 

4. Frascos de plástico fornecidos com o HYDRASYS. 

5. Barra metálica para a fixação da máscara SEBIA, fornecida com o sistema HYDRASYS. 

6. Máscara Dinânica, SEBIA, ref. n° 1255. 

7. Pipetas: 8 µl, 10 µl, 12 µl, 20 µl, 100 µl e 200 µl. 

AMOSTRAS 

Colheita e conservação de amostras 

• A análise é geralmente efectuada em amostras de urina frescas. Se necessário, armazenar as urinas entre 2 - 8 ºC até uma semana. Para 

conservações prolongadas, congelar as amostras ; as amostras congeladas são estáveis durante pelo menos um mês. O congelamento com 

tampão HEPES 0,1 M (pH 6,75) e azida de sódio, 0,2 g/l aumenta a estabilidade do armazenamento. As amostras descongeladas podem levar ao 

aparecimento de ligeiras bandas no ponto de aplicação, devido à desnaturação das proteínas. 

IMPORTANTE: Evitar o ácido bórico como conservante. 

• Se proceder à análise de soro, este deve ser colhido de acordo com os métodos utilizados nos laboratórios de análises clínicas. Os soros podem 

ser conservados uma semana no frigorífico (2 - 8 ºC). Para conservações prolongadas, congelar as amostras. As amostras congeladas são estáveis 

durante pelo menos um mês. As amostras descongeladas podem levar ao aparecimento de ligeiras bandas no ponto de aplicação, devido à 

desnaturação das proteínas ou lipoproteínas. 

Preparação das amostras 

Urinas 

A análise é efectuada em urinas não concentradas. O limite de detecção da proteína Bence Jones é de 10 a 50 mg/l. Para uma maior sensibilidade 

proceder à concentração das amostras conforme necessário (20 a 100 vezes). 

NOTA : Em caso de urinas de concentração a mais ou a menos, é recomendado eliminar as partículas por centrifugação (10 minutos a 3000 rpm) ou 

por filtração (em filtro de 0,45 µm) a fim de obter uma boa difusão no aplicador. 

Soro 

Se pretender também analisar o soro correspondente à urina testada quanto a proteínas Bence Jones, é aconselhável diluí-lo com soro fisiológico: 

1/10 (1 parte de soro para 9 partes de soro fisiológico) para as pistas ELP, GAM, K e L ; 1/3 (1 parte de soro para 2 partes de soro fisiológico) para 

as pistas Kf e Lf. 

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NOTA: Se o valor total de imunoglobulinas é < 5 g/l, é recomendado que sejam utilizadas diluições mais baixas da amostra de antisoro em soro 

fisiológico ou em diluente para imunofixação pré-diluído na proporção de 1/4. 

Por exemplo, diluir 1/5 de soro para as pistas ELP, GAM, K e L (1 parte de soro para 4 partes de soro fisiológico) e 1/2 (1 parte de soro e 1 parte de 

de soro fisiológico) para as pistas Kf e Lf. 

Para a análise das IgD e/ou Ig E, aplique as mesma diluições realizadas para as cadeias leves livres e ligadas. 

IMPORTANTE: 

• Não utilizar amostras de plasma. O fibrinogénio leva ao aparecimento de uma fracção perto do ponto de aplicação que pode ser confundida com 

uma gamapatia monoclonal. 

• Algumas urinas contêm uma elevada concentração de sais. Este facto pode ocasionar uma deformação dos geles durante a migração e, 

consequentemente, distorção dos perfis de migração. Essa distorção torna imprecisa a interpretação ; a urina deverá ser dialisada para eliminação 

dos sais. 

• As urinas degradadas (proteolisadas) podem originar uma reacção positiva com as anti-cadeias leves livres. Uma proteinúria com paraproteína 

sérica que passa para a urina pode originar neste caso uma banda monoclonal com o soro trivalente, uma banda monoclonal com o anti-cadeias 

leves livres e ligadas e uma banda com o anti-cadeais leves livres. 

• O limite de detecção das proteínas Bence Jones com o auxílio dos antisoros anti-cadeias leves livres é afectado pela sua polimerização, que 

mascara os epitopos envolvidos. 

• Quando se suspeita da presença de proteínas Bence Jones, deve-se tratar as amostras do seguinte modo: misturar 100 µl de urina e 5 µl de 

ß-mercaptoetanol previamente diluído a 1/10 em soro fisiológico. 

TÉCNICA 

O sistema HYDRASYS é um aparelho semi-automático multi-paramétrico. Os passos automáticos incluem o processamento dos geles de agarose 

HYDRAGEL segundo as etapas seguintes: aplicação da amostra, migração electroforética, incubação com fixador e antisoro, secagem, lavagem, 

aplicação de corante, remoção de corante e secagem final. Os passos manuais são os seguintes: preparação das amostras e dos geles, aplicação 

dos antisoros e lançamento das sequências automáticas. 

LER ATENTAMENTE O MANUAL DE INSTRUÇÕES DO HYDRASYS. 

I. PREPARAÇÃO DA MIGRAÇÃO 

1. Ligar o aparelho HYDRASYS. 

2. Colocar um aplicador para HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 amostras), 2 aplicadores para o HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 amostras) ou 3 aplicadores para o HYDRAGEL 9 BENCE JONES, numa superfície plana com os números dos poços 

voltados para cima (Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de amostra em cada poço. A pipetagem das amostras em cada aplicador não deve ultrapassar o tempo de dois minutos. 

| PISTA DE IMUNOFIXAÇÃO | 

NÚMERO DO POÇO : ELP GAM K L Kl Ll | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 AMOSTRA N° 1 OU 3 2 3 4 5 6 7 AMOSTRA N° 2 OU 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES AMOSTRA N° 1, 4 OU 7 1 2 3 4 5 6 AMOSTRA N° 2, 5 OU 8 7 8 9 10 11 12 

| AMOSTRA N° 3, 6 OU 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

IMPORTANTE: Na análise com HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, não se utilizam os poços nº 1, 8 e 15 ; pode-se marcar estas pistas com 

uma caneta, de modo a evitar a colocação de amostras por enganos. 

- Colocar o aplicador na câmara húmida com os dentes voltados para cima (segure-o pela protecção de plástico). 

- Deixar as amostras difundirem-se pelos dentes durante cinco minutos após a aplicação da última amostra. 

Ver as instruções de utilização da câmara húmida para mais detalhes. 

3. Abrir a tampa da câmara de migração e levantar os suportes do aplicador e dos eléctrodos. 

AVISO: Nunca fechar a tampa quando os suportes estão levantados! 

4. Seleccionar o programa de migração "1 BJ MP/MD" no menú apresentado pelo aparelho para o HYDRAGEL 1 BENCE JONES, seleccionar 

"2/4 BJ-UP MP/MD" para HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ou "9 BJ MD" para HYDRAGEL 9 BENCE JONES, (lado esquerdo do teclado). 

5. Retirar as tiras de tampão da embalagem ; colocar as tiras de tampão sobre os eléctrodos fixando as extremidades de plástico perfuradas 

aos pinos do suporte dos eléctrodos. A face das tiras de tampão onde estão fixadas as partes de plástico fica em contacto com os eléctrodos 

(Fig. 2). 

6. Desempacotar a placa HYDRAGEL. 

- Eliminar rapidamente o excesso de líquido da superfície do gel com a ajuda de um papel de filtro fino. 

ATENÇÃO: Não deixar o papel de filtro em contacto com o gel por tempo prolongado, para evitar a sua desidratação. 

- Aplicar 120 µl de água destilada ou desionizada para o HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou 200 µl para o HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 

e HYDRAGEL 9 BENCE JONES, no terço inferior do quadro impresso na placa de migração. 

- Colocar o gel virado para cima, contra a parte inferior do quadro impresso na placa de migração (Fig. 3). 

- Dar uma forma côncava ao gel (Fig. 3) e baixá-lo lentamente até contacto com a gota de água. A gota deve repartir-se por toda a largura 

do gel. Ajustar ligeiramente o gel de modo a eliminar as bolhas de ar que se tenham formado. Baixar o gel até ficar na horizontal. 

7. Baixar os dois suportes. Nesta posição as tiras de tampão não tocam no gel. NÃO FORÇAR A DESCIDA DOS SUPORTES MANUALMENTE. 

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8. Retirar o aplicador da câmara húmida. Segurá-lo pela estrutura de protecção plástica. 

- Quebrar e retirar a protecção dos dentes. 

- Colocar o aplicador no suporte de aplicadores: 

- HYDRAGEL 1 BENCE JONES ou HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 amostras), na posição n° 6 ; 

- HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 amostras), na posição n° 3 ou 9 ; 

- HYDRAGEL 9 BENCE JONES, na posição n° 2, 6 e 10. 

IMPORTANTE: Os números impressos nos aplicadores devem ficar virados para o operador (Fig. 4). 

Para aumentar a reprodutibilidade da aplicação das amostras, recomenda-se que posicione sempre o aplicador do lado esquerdo do suporte. 

9. Fechar a tampa da câmara de migração. 

10. Dar início imediatamente ao processo apoiando em "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

IMPORTANTE: Assegure-se de que a grelha de ventilação não está bloqueada (à direita do aparelho). 

MIGRAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Descida dos suportes do aplicador e dos eléctrodos de forma a que as tiras de tampão e o aplicador contactem com a superfície do gel. 

• Subida do aplicador de amostras. 

• A migração é feita à potência constante de 10 W para o HYDRAGEL 1 BENCE JONES e à potência constante de 20 W para o HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4, a 20 °C, controlada por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 42 Vh, durante cerca de 9 minutos. Para o HYDRAGEL 

9 BENCE JONES a migração deve ser feita à potência constante de 20 W, a 20 °C, controlada por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 

36 Vh, durante cerca de 7 minutos. 

• Os eléctrodos são desligados com a subida do suporte. 

• A audição de um sinal sonoro indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. A seguinte mensagem aparece no ecrã: " AS". 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante todos os passos da migração. 

II. PREPARAÇÃO DA IMUNOFIXAÇÃO 

Os diferentes elementos que compõem a máscara dinâmica (sinalizador de cores para aplicação dos reagentes, segmento para colocação de 

antisoros, suporte de segmentos, guia da máscara dinâmica e peça reductora) são apresentados na figura 5. 

Durante a migração, prepare a máscara dinâmica da seguinte forma: 

1. Coloque a máscara dinâmica numa superfície plana. 

IMPORTANTE : Para a análise de uma ou duas amostras, é necessário posicionar o reductor de comprimento na guia da máscara dinâmica. 

2. Coloque um segmento de antisoros no suporte do mesmo (Fig. 6) : 

- Incline o segmento dos antisoros num ângulo de 45º e posicione-o contra os encaixes de plástico do suporte. 

- Fazendo pressão sobre os encaixes, faça girar o segmento por forma a fixá-lo na ranhura do segmento do suporte. 

ATTENTION : Certifique-se que o segmento é correctamente posicionado no suporte: as extremidades do segmento deverão estar 

bem encaixadas na ranhura do suporte. 

3. Posicione o segmento dos antisoros e respectivo suporte sobre a guia da máscara dinâmica (Fig. 7) (equipada de uma peça redutora para 

as análises de 1 ou 2 amostras). De seguida, coloque o sinalizador de cores para aplicação dos reagentes (correspondente ao ensaio que 

irá decorrer), no suporte de segmentos em frente aos poços do segmento dos antisoros (Fig. 8). 

4. Disponha os reagentes da seguinte forma: : 

- Segmento de antisoros de 6 poços para HYDRAGEL 1 BENCE JONES : 8 µl por poço, 

- Segmento de antisoros de 15 poços para HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 : 8 µl por poço para análise de 2 amostras, 

12 µl por poço para análise de 4 amostras, 

- Segmento de antisoros de 18 poços para HYDRAGEL 9 BENCE JONES : 8 µl por poço. 

PISTA REAGENTE COR ELP Fixador amarelo GAM Soro trivalente violeta K Antisoro anti-cadeias leves kapa (livres e ligadas) verde claro L Antisoro anti-cadeias leves lambda (livres e ligadas) azul claro Kl Antisoro anti-cadeias leves livres kapa laranja 

| Ll | Antisoro anti-cadeias leves livres lambda | vermelho | 

NOTA: Para evitar enganos na pipetação dos antisoros, os reagentes são corados com as mesmas cores do sinalizador de cores de referência. 

IMPORTANTE: Para o HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, não utilize os poços nas posições 1, 8 e 15. 

Pipetar os reagentes, evitando introduzir bolhas de ar na ponta da pipeta. 

Para aplicar os reagentes (Fig. 9): 

- Segurar a pipeta inclinada, 

- Pipetar os antisoros nos poços respectivos. 

5. Retire o sinalizador de cores de referência. 

III. IMUNOFIXAÇÃO 

1. Abrir a tampa da câmara de migração. 

2. Retirar o aplicador e deitá-lo fora. 

3. Levantar os dois suportes (dos aplicadores e dos eléctrodos), retirar as tiras de tampão pegando-lhes pelas suas extremidades de plástico e 

deitá-las fora. 

- Retirar os dois suportes. 

- Limpar os eléctrodos com um pano macio e húmido. 

- Deixar o gel no seu lugar na câmara de migração. 

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4. Colocar em posição a máscara dinâmica de aplicação dos reagentes da seguinte forma (Fig. 10): 

- Colocar a barra metálica para a ligação da máscara de incubação nos pinos de fixação (a barra metálica pode permanecer 

permanentemente no HYDRASYS). 

- Segurar a máscara pela pega e colocá-la sobre a barra metálica (encaixando as extremidades nas reentrâncias da mesma). 

- Baixar a máscara sobre o gel. 

IMPORTANTE: Regular a posição da máscara, de modo a obter uma correspondência perfeita entre os perfis electroforéticos do gel e as 

pistas de revelação da máscara. 

5. Posicionar o segmento de suporte ao mais baixo nível na guia da máscara, dirigido para o operador. Segure o segmento de suporte pela 

pega situada na sua direita e pressione no ponto central, de forma a que o segmento de antisoro contacte com a superficie do gel. Alivie a 

pressão ; em seguida, os reagentes espelhar-se-ão debaixo de cada pista (Fig. 11). 

6. Imediatamente após, empurrar lentamente o suporte, executando um movimento lento e regular de ida e volta, em toda a extensão do gel 

para aplicar os reagentes. A duração da aplicação deverá ser de aproximadamente 5 segundos (Fig. 12). 

AVISO: Durante este passo, segure a máscara apenas pela pega do segmento de suporte. Evite tocar na guia. Não volte a pressionar 

no ponto de pressão, uma vez que poderá existir o risco de mistura dos reagentes. 

7. Remova a guia e a máscara dinâmica. 

- Remova o segmento de suporte utilizando a pega. 

- Remova o segmento de antisoro do suporte e deite fora. 

ATENÇÃO: Manipular os suportes contendo antisoros com precaução. 

- Um ligeiro excesso de reagente subsiste no gel sobre a forma de uma gota ao nível dos orifícios dos poços quando a máscara é retirada. 

Este facto não afectará os resultados. 


9. Dar início imediatamente ao processo premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). Aparece a mensagem 

"[INCUBAÇÃO]" no ecrã. 

IMUNOFIXAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Incubação a 20 ºC durante 10 minutos (controlada pelo efeito de Peltier). 

• A audição de um sinal sonoro indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. Aparece a mensagem: " PAP." no ecrã. 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a incubação. 

IV. ABSORÇÃO DO GEL 


2. Aplicar uma folha de papel de filtro espesso sobre o gel: 

- Inclinar o papel de filtro a 45º, alinhar a sua margem com a margem do gel. 

- Aplicá-lo sobre o gel. 

IMPORTANTE: Exercer pressão uniforme, para assegurar um contacto perfeito com o gel. 


4. Dar início à absorção, premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

ABSORÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Secagem por absorção a 40 °C, controlada pelo efeito de Peltier, durante 3 minutos. 

A mensagem "[BOMBAGEM]" aparecerá no ecrã. 

• Ouve-se um sinal sonoro. 

A mensagem aparece no ecrã: "❊ PAP.". 

V. SECAGEM DO GEL 


2. Retirar o papel de filtro e deixar o gel no seu lugar. 

3. Fechar a tampa. 

4. Dar início ao processo premindo a tecla "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

SECAGEM DO GEL - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Secagem a 50 ºC, controlada pelo efeito de Peltier, durante 6 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a tampa da câmara de migração é desbloqueada. A temperatura da placa permanece a 50 °C até a tampa ser aberta. 

A seguinte mensagem aparece no ecrã: "TEMP. DE MIGRAÇÃO MANTIDA". 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a fase de secagem. 

VI. PREPARAÇÃO DAS SEQUÊNCIAS DE TRATAMENTO DO GEL 

1. Abrir a tampa. 

2. Retirar o gel para tratamento posterior. 

3. Colocar o gel no suporte da câmara de coloração (gel virado para cima) da seguinte maneira (Fig. 13): 

- Abrir o suporte. 

- Colocá-lo na bancada. 

- Encaixar o gel nas ranhuras existentes. 

- Fechar o suporte. 

- Verificar se o gel está bem encaixado. 

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4. Colocar o suporte do gel na câmara de coloração. 

IMPORTANTE: Antes de dar início ao programa de coloração do gel, verificar o seguinte: 

- se o frasco da solução de lavagem está cheio com pelo menos 400 ml de solução de lavagem ; 

- se o frasco do corante está cheio com 300 ml de solução corante ; 

- se o frasco de descorante contem pelo menos 1 litro de solução descorante ; 

- se o frasco de despejo está vazio. 

Para seleccionar os canais de entrada dos reagentes: consultar a informação indicada no ecrã do aparelho (premir a tecla: "VER CANAIS"). 

IMPORTANTE: Não esquecer de tapar os canais não utilizados. 

5. Seleccionar o programa de coloração "IF ACID VIOLET" no menu do aparelho e dar início à operação premindo a tecla "START" (flecha verde 

no lado direito do teclado). 

Durante as sequências de coloração, descoloração e secagem a câmara permanece fechada. 

Após arrefecimento da câmara um sinal sonoro indica que a tampa da câmara se desbloqueia (a ventilação mantém-se até à recuperação 

do suporte do gel). 

NOTAS: 

- A temperatura da placa de migração continua a decrescer quando a tampa está aberta, até chegar aos 20 ºC (em menos de 5 minutos). 

Depois pode ser dado início a um novo processo de migração. 

- Repor o aplicador de amostras e os suportes do eléctrodo no seu lugar. 

- Limpar a placa de controlo de temperatura com um pano macio e húmido. 

VII.FINALIZAÇÃO DO PROCESSAMENTO DOS GELES 

1. Retirar o suporte da câmara, abrir e remover o gel seco. 

2. Se necessário, limpar a parte de trás (suporte plástico) do gel seco com um papel macio e húmido. 

NOTA : Para os geles com linhas de migração múltiplas (2 ou 3), as extensões da migração podem ser sensivelmente diferentes, sem qualquer 

consequência negativa nos resultados. 

RESULTADOS 

Interpretação 

A presença de uma proteína de BENCE JONES é caracterizada pela presença de: 

- Uma banda monoclonal detectada com um dos antisoros anti-cadeias leves (livres e ligadas) kapa ou lambda (pistas K ou L). 

- Uma banda monoclonal, que migrou ao mesmo nível da anterior, detectada com um dos antisoros anti-cadeias leves livres kapa ou lambda 

(pistas Kf ou Lf). 

- Ausência de banda na pista do antisoro trivalente (pista GAM). 

A presença de uma paraproteína do soro eliminada na urina não estando presente uma proteína de BENCE JONES é caracterizada por: 

- Banda monoclonal detectada com o antisoro trivalente. 

- Banda monoclonal que migrou ao mesmo nível da anterior detectada com um dos antisoros anti-cadeias leves (livre e ligada). 

- Ausência de banda na pista do antisoro anti-cadeia leve livre correspondente. 

A presença de uma paraproteína do soro eliminada na urina associada à proteína de BENCE JONES é caracterizada pela presença de: 

- Uma banda monoclonal detectada com o antisoro trivalente. 

- Duas bandas detectadas com um dos antisoros anti-cadeias leves (livre e ligada) ou, ocasionalmente, uma banda detectada com um dos 

antisoros anti-cadeias leves (livre e ligada) e outra banda detectada com outro dos antisoros anti-cadeias leves (livre e ligada). 

- Uma banda detectada por um dos antisoros anti-cadeia leve livre. Esta banda geralmente não migra ao mesmo nível da fracção detectada 

com o antisoro trivalente. 

A presença de uma proteína de BENCE JONES em diferentes estados de polimerização é caracterizada pela: 

- Ausência de reacção com o antisoro trivalente. 

- Presença de várias bandas reveladas com um dos antisoros anti-cadeias leves livre e ligada. 

- Presença de bandas, que migram ao mesmo nível, detectadas com o antisoro anti-cadeia leve livre correspondente. 

Interferências e limitações 

O uso de outros antisoros que não os específicos à técnica de imunofixação realizada com a máscara dinâmica pode afectar a qualidade dos 

resultados. 

Em virtude dos limites de resolução e sensibilidade inerentes da electroforese de zona, é possível que alguns componentes monoclonais não possam 

ser detectados por este método. 

Assistência técnica 

Em caso de maus resultados contactar os serviços técnicos do fornecedor ainda que tenham sido seguidas, escrupulosamente, as instruções para 

a preparação e armazenamento dos reagentes, assim como as instruções de utilização da técnica. 

As folhas de informação de segurança do kit e informação sobre eliminação de desperdícios do produto poderão ser também disponibilizados pelos 

serviços técnicos do fornecedor. 

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO 

Reprodutibilidade intra-ensaio 


Reproductibilidade intra-ensaio do gel foi demonstrada em 3 amostras patológicas: analisaram-se 2 urinas com proteína Bence Jones (cadeias leves 

livres lambda ou kapa) e 1 amostra de soro com cadeias leves livres lambda. 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 2 lotes de geles diferentes HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 realizando-se 4 ensaios 

por gel. Utilizou-se o violeta ácido como corante. 

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Reproductibilidade intra-ensaio do gel foi demonstrada em 3 amostras patológicas: analisaram-se 2 urinas com proteína Bence Jones (cadeias leves 

livres lambda ou kapa) e 1 amostra de soro com cadeias leves livres lambda. 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 2 lotes de geles diferentes HYDRAGEL 9 BENCE JONES realizando-se 9 ensaios 

por gel. Utilizou-se o violeta ácido como corante. 

Todas as amostras analisadas deram resultados idênticos nos dois lotes de geles testados. Com efeito, os perfis obtidos são típicos para cada 

amostra analisada. 

Nas técnicas de HYDRAGEL 4 BENCE JONES e HYDRAGEL 9 BENCE JONES a imunofixação colocou em evidência as bandas monoclonais 

corespondentes à proteína de Bence Jones de cada amostra, de modo reproductível e sem falsos positivos. 

Reprodutibilidade inter-ensaio 


Reproductibilidade entre geles foi demonstrada em 4 amostras patológicas: analisando-se 3 urinas e 1 soro com proteínas Bence Jones (cadeias 

leves livres lambda ou kapa). 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 10 geles HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 de 3 lotes diferentes. Utilizou-se o violeta 

ácido como corante. 


Reproductibilidade entre geles foi demonstrada em 9 amostras patológicas: analisaram-se 6 urinas e 3 soros com proteína Bence Jones (cadeias 

leves livres lambda ou kapa). 

A migração e imunofixação de cada amostra foram realizadas em 10 geles HYDRAGEL 9 BENCE JONES de 3 lotes diferentes. Utilizou-se o violeta 

ácido como corante. 

Nas duas técnicas, todos as amostras analisadas obtiveram resultados idênticos para os 3 lotes testados. Com efeito, os perfis obtidos são típicos 

para cada amostra analisada e a imunofixação colocou em evidência as bandas monoclonais corespondentes à proteína de Bence Jones de cada 

amostra, de modo reproductível e sem falsos positivos. 

Exactidão – detecção e identificação de proteínas de Bence Jones 

Analisaram-se vinte amostras de soro e trinta e seis amostras de urina patológicas, com proteínas Bence Jones, e 5 amostras normais, comparando 

a técnica HYDRAGEL 4 BENCE JONES com outro sistema de geles de agarose disponível comercialmente. 

Os resultados obtidos são idênticos nos dois sistemas de imunofixação e estão de acordo com o diagnóstico clínico. 

Sensibilidade 

Foram preparadas várias diluições de 2 amostras de urinas patológicas ambas com proteínas de Bence Jones, e ambas analisadas pela técnica 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES com o antisoro de anti-cadeias leves livres kapa e lambda. 

O limite mínimo de detecção das cadeias leves livres kapa e lambda obtido é da ordem do 3 mg/l com os antisoros anti-cadeias kapa e lambda e da 

ordem dos 12 mg/l com antisoros anti-cadeias leves e livres correspondentes. 

Em virtude da estrutura e da natureza da cadeia leve e livre, a sensibilidade de detecção pode variar dentro de um limite igual ou inferior a 50 mg/l 

(para uma detecção de antisoro anti-cadeia livre kapa e lambda). 

BIBLIOGRAFIA 



1994, 397 pp. 

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ANVÄNDNINGSOMRÅDE 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES och HYDRAGEL 9 BENCE JONES kiten är designade 

för kvalitativ detektion och identifiering av Bence Jones proteiner, monoklonala fria light chains kappa och lambda, i humant urin och serum, genom 

immunofixerings-elektrofores. Detektion av Bence Jones proteiner fungerar som en kvalitativ hjälp vid identifieringen av monoklonala gammopatier. 

Varje agarosgel är avsedd för: 

- Ett prov: HYDRAGEL 1 BENCE JONES kit, 

- Två prov: HYDRAGEL 2 BENCE JONES kit, 

- Fyra prov: HYDRAGEL 4 BENCE JONES kit, 

- Nio prov: HYDRAGEL 9 BENCE JONES kit, 

Endast för "in Vitro" diagnostik. 

TESTPRINCIPER 

Abnormala band hos elektroforetiska mönster, primärt dem hos beta- och gamma-globulin zonerna, misstänks alltid vara monoklonala proteiner och 

därmed en indikation på gammopatier. För identifiering av dessa abnormala band används immunofixeringstekniken. 

Immunofixerings-elektrofores tillåter proteinerna att fästa in situ (på plats) efter elektrofores, genom formation av olösliga komplex med motsvarande 

antisera. 

Bence Jones proteintest utförs i anslutning till det semi-automatiserade HYDRASYS systemet för att genomföra alla steg som är nödvändiga för att 

få geler färdiga för tolkning : 

1. Provet genomgår samtidig elektrofores i sex spår på en basiskt buffrad agarosgel. 

2. Efter elektrofores fixeras ett spår (ELP) som en referens som visar det elektroforetiska mönstret hos provets proteiner. De återstående fem spåren 

immunofixeras med respektive antisera : trivalent anti-heavy chains (gamma, alfa och mu), anti-kappa fria och bundna light chains, anti-lambda 

fria och bundna light chains, anti-kappa fri light chain och anti-lambda fri light chain. 

3. De ofällda, lösliga proteinerna avlägsnas från gelen genom tvättning. 

4. Fällning av antigen-antikropp complex fångas i gelmatrisen. 

5. De fällda proteinerna visualiseras med infärgning av metylviolett. Överflödsfärg avlägsnas med en sur lösning. 

6. De immunoprecipiterade banden jämförs sedan med motsvarande abnormala band som ses i det elektroforetiska mönstret hos provet och 

identifieras från reaktionen, eller frånvaro av reaktion, med individuella antisera. 

Denna enkla och snabba teknik, ger en klar och fullt tolkningsbar bild. 

REAGENSER OCH MATERIAL SOM MEDFÖLJER SATSERNA HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES OCH HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES -kit PN 4321 HYDRAGEL 2 BENCE JONES -kit PN 4322 HYDRAGEL 4 BENCE JONES -kit PN 4324 HYDRAGEL 9 BENCE JONES -kit PN 4329 PN 4383* Agaros-geler (färdiga att använda) 10 geler 10 geler 80 geler Buffrade Strips (färdiga att använda) 10 förp. 2 i varje 10 förp. 2 i varje 80 förp. 2 i varje Acidviolett Färg (stamlösning) 1 rör, 75 mL 1 rör, 75 mL 8 rör, 75 mL varje Fixativ lösning (färdig att använda) 1 rör, 2.9 mL Immunoglobuliner av ickehumant däggdjursursprung, 1 rör, 2.0 mL gamma, alfa, mu heavy chains (trivalent) (färdig att använda) Ickehumana däggdjursimmunoglobiner med kappa fria/bundna 1 rör, 2.0 mL light chains (färdig att använda) Ickehumana däggdjursimmunoglobiner med lambda fria/bundna 1 rör, 2.0 mL light chains (färdig att använda) Ickehumana däggdjursimmunoglobiner med kappa fria 1 rör, 2.0 mL light chains (färdig att använda) Ickehumana däggdjursimmunoglobiner med lambda fria 1 rör, 2.0 mL light chains (färdig att använda) Applikatorer (färdiga att använda) 1 förp. med 10 2 förp.10 i varje 24 förp.10 i varje 3 förp.10 i varje Antisera segment (färdig att använda) 1 förp. med 10 1 förp. med 10 8 förp. med 10 i varje Filterpapper-tunna 1 förp. med 10 1 förp. med 10 

| 8 förp. med 10 i varje Filterpapper-tjocka | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 8 förp. med 10 i varje | 


NOTERA : Fixativ lösning och antisera levereras separat, med undantag för MAXI-KIT (Se: EJ LEVERERADE MEN NÖDVÄNDIGA REAGENSER). 

FÖR OPTIMALA RESULTAT 

Reagenser från samma kit måste användas ihop och enligt de instruktioner som finns angivna på förpackningens insticksblad. 

LÄS NOGGRANNT INSTRUKTIONERNA PÅ FÖRPACKNINGENS INSTICKSBLAD. 

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SEBIA INSTRUKTIONER - Svenska


1. AGAROSGELER 

Preparering 

Agarosgelerna är färdiga att använda. Varje gel innehåller agaros, 0.8 g/dL, tris-barbital buffer pH 9.1 ± 0.1 ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer, men nödvändiga för maximala prestanda. 

VARNING: Agarosgeler innehåller 0.31 % barbital och 0.34 % natriumbarbital. Förtär inte ! Vid förtäring, kontakta läkare omedelbart ! 

Användning 

Hjälpmedel för proteinelektrofores och immunofixering. 

Lagring, stabilitet och tecken på förändring 

Förvara gelerna upprätt, i originalförpackningen och vid rumstemperatur (15 till 30 °C) eller i kylskåp (2 till 8 °C). (Pilen på förpackningens framsida 

måste peka uppåt). 

Undvik temperaturförändringar under förvaringen (t.ex., förvara inte gelen nära fönster eller värmekälla). Gelerna är stabila fram till angivet 

utgångsdatum på förpackningen. 

FRYS INTE GELEN. 

Släng gelen om: 

(i) kristaller eller fällning bildas på gelytan eller gelkonsistensen blir väldigt mjuk (inträffar när gelen varit fryst), 

(ii) bakteriell tillväxt eller mögeltillväxt påvisas, 

(iii) onormal mängd vätska är närvarande i påsförpackningen (som ett resultat av buffertutsöndring från gelen på grund av felaktiga 

lagringsförhållanden). 

2. BUFFRADE STRIPS 

Förberedelse 

Buffrade strips är färdiga att använda. Varje innehåller: tri-barbital buffert pH 9.1 ± 0.3 ; natriumacid ; tillsatser, ofarliga vid använda koncentrationer, 

men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Bufferten i stripsen innehåller 0.92 % barbital, 1.03 % natriumbarbital och 0.30 % natriumazid. Förtär inte, svälj inte ! Kontakta 

läkare omedelbart !! Vid avyttring, undvik kontakt med syra, bly eller koppar, då dessa kan bilda explosiva eller giftiga föreningar med 

natriumazid. 

Användning 

Buffrade strips fungerar som en elektroforetisk buffertreservoar och säkerställer kontakt mellan gelen och elektroderna. 


Förvara stripsen vid rumstemperatur eller i kyla. De är stabila fram till angivet utgångsdatum på förpackningen. Förvaras ej i kylskåp. 

Kasta !! om förpackningen är öppen eller om stripsen är uttorkade FRYS INTE. 

3. ACIDVIOLETT FÄRG 

Förberedelse 

Flaskan med stamfärglösningen skall spädas upp till 300 mL, med destillerat eller avjoniserat vatten. 

Efter spädning innehåller den färdiga färglösningen : sur lösning pH ≈ 2 ; metylviolett, 0.2 g/dL ; etylen-glykol, 3.25 % ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För infärgning av geler vid elektroforetisk proteinseparering och immunofixation. 

VIKTIGT : Färglösning är avsedd för färgning av 10 geler. Byt färg efter 10 färgningssteg. 


Lagra både stam- och bruks lösningar vid rumstemperatur eller i kylskåp i stängda behållare för att förhindra avdunstning. Stamfärglösningen är stabil 

fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskornas etiketter. Färdigspädd färglösning är hållbar i 6 månader. 

4. ANTISERA OCH FIXATIV FÖRPACKNING (med PN 4383) 

4.1. ANTISERA 

Förberedelse 

Färdig att använda. Alla antisera är totala immunoglobuliner av ickehumant däggdjursursprung. Antisera är färgat med distinkta ofarliga färger som 

matchar färgen på flaskans etikett, dels för lätt identifikation av antisera och dels som en hjälp för att övervaka dess användning. 

Om antiserumet visar en lätt grumlighet lämna antiserumflaskan i rumstemperatur i minst 10 minuter. Detta bör vara tillräckligt för att lösningen ska 

klarna, men om grumligheten kvarstår ska detta inte på något sätt påverka den immunologiska reaktionen. Vid uppkomst av olösliga fällningar 

rekommenderas att centrifugera antisera vid 3000 rpm i 5 minuter. 

Användning 

Används för immunofixering av proteiner efter elektrofores. 

Antisera kan härröra från olika djurarter. Blanda inte två olika antiseraflaskor även om de har samma specificitet, och byt ALLTID pipettspets vid byte 

mellan antiserumflaskor. 

VIKTIGT: För att undvika kontaminering mellan reagens, var noggrann med att sätta tillbaka skruvlocket på motsvarande flaska efter varje användning. 


Lagra antisera i kylskåp (2 to 8 °C). De är stabila fram till angivet utgångsdatum angivet på förpackning eller antiseraflaskornas etiketter. 

NOTERA: Under transport kan antisera förvaras utan kylning (15 to 30 °C) i 15 dagar utan några negativa effekter på prestandan. 

4.2. FIXATIV LÖSNING 

Förberedelse 

Fixativ lösning är färdig att använda. Den innehåller: sur lösning samt tillsatser ofarliga vid de använda koncentrationerna men nödvändiga för optimal 

prestanda. Fixativet är färgat med en ofarlig färg, dels för lätt identifikation och dels som en hjälp för att övervaka dess användning. 

Användning 

Används för fixering av elektroforetiskt separerade proteiner i referensspåret (ELP). 

VIKTIGT: För att undvika kontaminering mellan reagens, var noggrann med att sätta tillbaka skruvlocket på motsvarande flaska efter varje användning. 

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Lagra fixativ lösning vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är stabil fram till angivet utgångsdatum på förpackning eller fixativ lösningsflaskornas 

etiketter. 

Fixativ lösning måste vara fri från fällning. 

5. APPLIKATORER 

Användning 

Tillskurna, applikatorer för engångsbruk för provapplicering. 

Förvaring 

Förvara applikatorerna på en torr plats, i rumstemperatur eller i kyla. 

6. ANTISERA SEGMENT 

Användning 

Färgade engångssegment för applicering av fixeringslösning och antisera på gelen för immunofixering. 

VIKTIGT : Segment med antisera måste behandlas varsamt. 

7. FILTERPAPPER-TUNNA 

Användning 

Tunnt tillskurna och absorberande pappersbitar för engångsbruk. Används för bortagning av fukt på gelytan innan provapplicering. 

Förvaring 

Förvara de tunna filterpappren på ett torrt ställe i rumstemperatur eller i kylskåp. 

8. FILTERPAPPER-TJOCKA 

Användning 

Tjockt absorberande papper för att blotta oprecipiterade proteiner från gelen efter immunofixeringssteget. 

Förvaring 

Förvara de tjocka filterpappren på ett torrt ställe vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

EJ LEVERERADE MEN NÖDVÄNDIGA REAGENSER 

1. ANTISERA OCH FIXATIV LÖSNING -FÖRPACKNING (för 4321, 4322, 4324 och 4329 kiten) 

Antisera och fixativ lösningsförpackningar, GAM, K, L (anti-gamma, alfa, mu heavy chains, anti-kappa fria och bundna light chains och anti-lambda 

fria och bundna light chains), SEBIA, PN 4335, innehåller 3 flaskor med antisera och en flaska med fixativ lösning, om 1 ml vardera. De är specifika 

för immunofixation med dynamisk mask. 

1.1 ANTISERA 

Hänvisning till paragraf 4.1. 

1.2 FIXATIV LÖSNING 

Hänvisning till paragraf 4.2. 

2. FÖRPACKNING MED ANTISERA FÖR FRIA LIGHT CHAINS (för 4321, 4322, 4324 och 4329 kit) 

Förpackningen med antisera, anti-kappa fria light chains och anti-lambda fria light chains, SEBIA, PN 4336, innehåller 2 antisera flaskor, om 1 ml i 

vardera. De är specifika för immunofixation med dynamisk mask. 

Se tidigare paragraf 4.1. 

3. AVFÄRGNINGSLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska med stamlösning av (SEBIA, PN 4540, 10 flaskor 100 mL i varje) skall spädas upp till 100 liter med destillerat eller avjoniserat vatten. Det 

är lämpligt att endast späda 5 mL av stamlösningen till 5 liter, vilket är volymen hos behållaren för avfärgningslösning. Efter spädning innehåller 

brukslösningen: citronsyra, 0.05 g/dL. 

Användning 

För avfärgning, vilket innebär borttagning av överskotts färg samt bakgrundsfärg från gelerna samt för avsköljning av färgfacket efter rengöring med 

tvättlösningen. 

För att neutralisera den sura avfärgningslösningen, häll 15 mL av en 50 % natriumhydroxidlösning, i den tomma avfallsbehållaren. 


Förvara stamlösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är stabil till angivet utgångsdatum på avfärgningslösningens förpackning eller på 

flasketiketterna. Den färdigspädda avfärgningsslösningen är hållbari en vecka under förutsättning att den förvaras i en stängd flaska vid 

rumstemperatur. Tillsätt ej natriumazid. 

Kasta den färdigspädda avfärgningslösningen om den förändras i utseende t.ex., blir grumlig p.g.a. mikrobiell kontaminering 

För att förhindra mikrobiell tillväxt i brukslösningen (vid lagring mer än 1 vecka) tillsätt 5 µl/dL av ProClin 300. 

Bruksavfärgningslösning tillsatt med ProClin är hållbar i stängd flaska, till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på avfärgninglösningens 

flasketiketter, förvarad vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

4. HYDRASYS TVÄTTLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska av stamtvättlösning (SEBIA PN 4541, 10 flaskor, 80 mL i varje) skall spädas upp till 5 liter med destillerat eller avjoniserat vatten. Efter 

spädning innehåller den färdiga tvättlösningen: alkalisk buffert pH 8.8. ± 0.3 ; natriumazid. 

VARNING: Stamlösningen innehåller 0,625 % natriumazid. Farlig vid förtäring, kontakta läkare omedelbart. Natriumazid kan leda till bildning 

av explosiva eller giftiga ämnen vid kontakt med syror, bly eller koppar. Spola alltid med en stor mängd vatten efter det att lösningen hällts 

ut. 

Användning 

HYDRASYS tvättlösning är avsedd för att tvätta bort oprecipiterade proteiner från geler. 

Se förpackningens insticksblad för instruktioner. 

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Lagra stamlösningen och den färdiga tvättlösningen i stängda behållare vid rumstemperatur eller i kylskåp. Lösningarna är hållbara fram till angivet 

utgångsdatum på tvättlösningflaskornas etiketter. Lösningen används för rengöring av HYDRASYS färgfack. Använd regelbundet. Om instrumentet 

används dagligen, tvätta färgfacket varje vecka. 

Släng brukstvättlösningen om den förändras i utseende, t.ex. blir grumlig vid mikrobiell kontaminering. 

5. SALTLÖSNING 

Förberedelse 

Tillverka 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl lösning i destillerat eller avjoniserat vatten. 

Användning 

För provspädning vid behov. 


Förvara vid rumstemperatur eller i kylskåp. Avyttra efter 3 månader om lösningen ändrar utseende, t.ex., bli grumlig på grund av mikrobiell 

kontaminering. För längre hållbarhet, tillsätt natriumazid, 0.1 g/dL. 

UTRUSTNING OCH NÖDVÄNDIGA TILLBEHÖR MEN INTE MEDLEVERERADE 


2. Mikropipett, manuell eller automatisk, som t.ex. HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ett alternativt sätt att ladda provapplikatorerna eller 

antiserasegmenten. 

3. Fuktkammare, PN 1270, levererad med HYDRASYS. 

4. Behållarsats levererad med HYDRASYS. 

5. Färgkodsguide SEBIA levererad med HYDRASYS. 

6. Dynamisk mask, SEBIA, PN 1255. 

7. Pipetter: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL och 200 µL. 

PROV FÖR ANALYS 

Provinsamlng och lagring 

• Analys genomförs vanligtvis på färskt urin. 

Om nödvändigt, förvara urinproven vid 2 till 8 °C upp till en vecka. För längre förvaringstider frys proven. Infrysning med HEPES 0.1 M (pH 6.75) 

och/eller natriumazid, 0.02 g/dL ökar lagringsstabiliteten. Infrusna urinprover är stabila under minst en månad. Tinade prover kan ge lätta 

appliceringsmärken på grund av proteindenaturering. 

VIKTIGT: Använd inte borsyra som konserveringsmedel. 

• Vid analys av serum, måste de utföras enligt etablerade rutiner som används vid kliniska laboratorier. Vid behov, lagra serum vid 2 till 8 °C upp till 

en vecka. För längre förvaringstider, frys in proven. Frusna serumprov är stabila i minst en månad. Tinade prover kan ge lätta appliceringsmärken 

på grund av protein- eller lipoproteindenaturering. 

Förberedelse av prov 

Urinprov 

Analys genomförs på okoncentrerat urin. Detektionsnivån hos Bence Jones proteiner ligger generellt inom 1 - 5 mg/dl. Analys utförs på koncentrerat 

urin om laboratoriets rutiner så kräver, eller om man önskar högre sensivitet. En 20-100 faldig koncentration är vanligtvis tillräckligt. 

NOTERA : Diffusion av urinprover in i applikatortänderna kan förhindras när urinen (okoncentrerad eller koncentrerad) är grumlig. Det rekommenderas 

att avlägsna partiklar med centrifugering (t.ex. 10 minuter vid 3,000 rpm) eller filtrering (t.ex., 0.45 µm filter för sterilfiltrering). 

Sera 

Förutom urin kan även patientens serum testas för Bence Jones proteiner. 

Späd serum i saltlösning eller spädningslösning för immunofixering, tidigare spädd 1/ 4 (1 del spädningslösning, 3 delar destillerat eller avjoniserat 

vatten): 1/10 för ELP, GAM, K och L spåren (1 del serum, 9 delar spädd spädningslösning eller saltlösning) och 1/3 (1 del serum, 2 delar spädd 

spädningslösning eller saltlösning) för Kf och Lf spåren. 

NOTERA: Om den totala nivån av immunoglobuliner är < 0.5 g/dL, rekommenderas att använda lägre spädningar av serumproverna i saltlösning eller 

spädningslösning för immunofixering spädd enligt : 1 del spädningslösning, 3 delar destillerat eller avjoniserat vatten. T.ex., späd serumet 1/5 för ELP, 

GAM, K och L spåren (1 del serum, 4 delar spädd spädningslösning eller saltlösning) och 1/2 (1 del serum, 1 del spädd spädningslösning eller 

saltlösning) för Kf och Lf spåren. 

För Ig D och/eller Ig E analys, använd samma spädningar som för kappa and lambda fria och bundna light chains. 

VARNING 

• Undvik plasmaprov. Fibrinogen ger ett band i närheten av appliceringspunkten som kan tas för monoklonalt immunoglobulin. 

• En del urinprover innehåller hög saltkoncentration. Detta kan ge upphov till geldeformering under migrering och som en konsekvens, störning av 

migrationsprofilerna. Om en sådan störning gör tolkningen felaktig, måste urinprovet dialyseras för att avlägsna salterna. 

• På grund av bakteriell kontaminering kan immunoglobulin (paraprotein) närvarande i urinet genomgå en proteolys. Detta leder till en positiv reaktion 

med anti-fri light chain antiserum. I detta fall, kan ett serumparaprotein som är eliminerat i urinen, visa ett monoklonalt band med det trivalenta 

antiserumet, och med en av de anti-fri light chain och bundna antisera samt med motsvarande anti-fri light chain antiserum. 

• Polymerisering av Bence Jones proteiner sänker generellt detektionskänsligheten hos anti-fri light chains antisera då polymeriseringen kan blockera 

epitoper som normalt reagerar med anti-fri light chain antisera. Då misstanke om Bence Jones protein finns, men ingen detektion uppnås, 

depolymerisera innan elektrofores : blanda 100 µL urin med 5 µL beta-merkaptoetanol spätt 1:10 med saltlösning och använd. 

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TILLVÄGAGÅNGSSÄTT 

HYDRASYS systemet är ett halvautomatiskt multi-parameter instrument. De automatiska stegen inkluderar bearbetning av HYDRAGEL agarosgeler 

i följande ordning: provapplicering, elektroforetisk migrering, torkning, färgning, avfärgning och slutlig torkning. De manuella stegen inkluderar 

hantering av prov och geler samt att förbereda instrumentet för arbete. 

LÄS NOGA HYDRASYS INSTRUKTIONS MANUALER. 

I. MIGRERING 

1. Starta HYDRASYS instrumentet. 

2. Placera en applikator för HYDRAGEL 1 BENCE JONES eller HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 prov), två applikatorer för HYDRAGEL 

BENCE JONES 2/4 (4 prov) eller tre applikatorer för HYDRAGEL 9 BENCE JONES, på en slät yta med brunnarnas nummer på höger sida 

vända uppåt (Fig. 1). 

- Applicera 10 µL prov till applikatorbrunnarna enligt följande. Ladda varje applikator inom 2 minuter. 

| MIGRATION / IMMUNOFIXATION SPÅR | 

BRUNN Nr. : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 PROV No 1 ELLER 3 2 3 4 5 6 7 PROV No 2 ELLER 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES PROV No 1, 4 ELLER 7 1 2 3 4 5 6 PROV No 2, 5 ELLER 8 7 8 9 10 11 12 

| PROV No 3, 6 ELLER 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

VIKTIGT : Gällande för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, används inte brunnarna 1, 8 och 15 i detta test ; de kan markeras med en filtpenna 

för att undvika att fylla dem av misstag. 

- Placera applikatorn (applikatorerna) in i fuktkammaren med tänderna vända uppåt [hantera den (dem) med hjälp av applikatorns 

plastskyddsram]. 

- Låt proverna diffundera in i tänderna under 5 minuter efter sist gjorda provapplikation. 

Se fuktkammar-förpackningens insticksblad för ytterligare information. 

3. Öppna locket till migrationsmodulen, lyft elektrod- och applikatorhållarna uppåt. 

VARNING: Stäng aldrig luckan när hållarna befinner sig i höjt läge ! 

4. Välj "1 BJ SM/DM" migration program för HYDRAGEL 1 BENCE JONES, "2/4 BJ-UP SM/DM" för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 eller 

"9 BJ DM " för HYDRAGEL 9 BENCE JONES, på instrumentmenyn. (tangentbordets vänstra sida). 

5. Ta ur de buffrade stripsen ur förpackningen ; ta dem i plaständarna. Sätt de hålstansade ändarna hos stripsens plaststöd till pinnarna hos 

elektrodbäraren ; stripsens plaststöd måste vara vända mot elektrodbäraren (Fig. 2). 

6. Ta ut HYDRAGEL plattan. 

- Rulla snabbt och jämt med ett tunt filterpapper på gelytan för bortagning av överflödig vätska. Ta bort pappret omedelbart. 

VARNING: För att undvika uttorkning : låt inte filterpappret vara i kontakt med gelen under längre tid. 

- Pipettera 120 µL destillerat eller avjoniserat vatten för HYDRAGEL 1 BENCE JONES eller 200 µL för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 och 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, på den lägre tredjedelen av ramen tryckt på temperaturkontrollplattan hos migrationsmodulen. 

- Placera gelplattan (gelsidan uppåt) med dess kant mot stoppet i botten på den tryckta ramen (Fig. 3). 

- Böj gelen och släpp den försiktigt ned i vattenpoolen (Fig. 3). Förvissa dig om att inga luftbubblor finns kvar, att vattnet fördelar sig under 

hela gelplattan och att gelen är i linje med den tryckta ramen. 

7. Sänk / tryck ned bägge hållarna. I detta läge berör inte de buffrade stripsen gelen. TRYCK INTE HÅLLARNA HELA VÄGEN NED. 

8. Avlägsna applikatorn (-erna) från fukttkammaren. Håll den (dem) i den skyddande ramen. 

- Avlägsna applikatorns tandskyddsram. 

- Placera applikatorn (applikatorerna) på hållaren: 

- Med HYDRAGEL 1 BENCE JONES eller HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 prov), i position No 6, 

- Med HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 prov), i position No 3 och 9, 

- Med HYDRAGEL 9 BENCE JONES, i position No 2, 6 och 10. 

VIKTIGT: Det tryckta numret på applikatorn (applikatorerna) måste vara vänt mot operatören. (Fig. 4). 

För att öka reproducerbarheten hos provappliceringen, positionera alltid applikatorerna på hållarens vänstra sida. 

9. Förvissa dig om att hållaren befinner sig i nedsänkt läge. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

10. Starta proceduren omedelbart genom att trycka på den gröna piltangenten "START" på tangentbordets vänstra sida. 

VIKTIGT: Förvissa dig om att ventilationsintaget på instrumentets högra sida inte är blockerat. 

MIGRATION - BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• De två hållarna sänker sig så att de buffrade stripsen och applikatorn (applikatorerna) får kontakt med gelytan. 

• Provapplikatorns hållare höjer sig. 

• Migration sker under 10 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL 1 BENCE JONES och under 20 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4, tills 42 Vh ackumulerats (under ca. 9 minuter) och under 20 W konstant strömstyrka tills 36 Vh ackumulerats (under ca. 7 minuter) 

gällande för HYDRAGEL 9 BENCE JONES, vid 20 °C kontrollerat av Peltier effekten. 

• Elektrodhållaren höjer sig för koppla ur elektroderna. 

• En ljudsignal hörs och migrationmodulens lucka öppnas. Följande meddelande visas på skärmen " AS". (reagensapplikation) 

NOTERA: Migrationmodulens lock förblir i stängt läge under alla migrationssteg. 

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II. IMMUNOFIXERING 

Den dynamiska masken innehåller en färgkodsguide för reagensapplikation, ett antiserasegment, en segmenthållare, segmentram till dynamisk mask 

samt en längdreducerande ram (Fig. 5). 

Under migration, förbered den dynamiska masken enligt enligt följande: 

1. Placera segmentramen till den dynamiska masken på en slät yta. 

VIKTIGT : För analys av en eller två prover, är det nödvändigt att placera den längdreducerande ramen på den dynamiska maskens 

segmentram. 

2. Placera ett antiserasegment i segmenthållaren (Fig. 6): 

- Luta antiserasegmentet i en 45° vinkel och placera det mot plastfjädrarna i segmenthållaren. 

- Dra isär de två delarna och sväng ned segmentet för att fixera det i skåran på segmenthållaren. 

VIKTIGT : Förvissa dig om att segmentet är korrekt placerat i hållaren : pinnarna i ändan av segmentet måste låsas i skåran på 

hållaren. 

3. Placera hållaren med segmentet på ramen till den dynamiska masken (Fig. 7). Sätt sedan färgkodsguiden för vald reagensapplicering, på 

segmenthållaren framför segmentbrunnarna (Fig. 8). 

4. Applicera reagenser enligt nedan: 

- 6 brunnar antiserasegment för HYDRAGEL 1 BENCE JONES : 8 µL per brunn, 

- 15 brunnar antiserasegment för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 : 8 µL per brunn för 2 provanalyser, 

12 µL per brunn för 4 provanalyser, 

- 18 brunnar antiserasegment för HYDRAGEL 9 BENCE JONES : 8 µL per brunn. 

SPÅR REAGENS FÄRG ELP fixativ lösning gul GAM trivalent antiserum violett K anti-kappa light chain (fria och bundna) antiserum grön L anti-lambda light chain (fria och bundna) antiserum blå Kf anti-kappa fri light chain antiserum brandgul 

| Lf | anti-lambda fri light chain antiserum | röd | 

NOTERA: Reagenserna är färgade och färgerna visas på den färgade referensguiden för att underlätta pipettering av korrekta antisera. 

VIKTIGT: Gällande för HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, använd inte brunnar av antiserasegment i positionerna 1, 8 och 15. 

- Sug upp reagenserna undvik luftbubblor vid pipettspetsen. 

- Applicera reagenserna (Fig. 9) : 

- Håll pipetten vinklad och luta dess spets lätt mot sidan av brunnen utan att röra brunnens botten. 

- Spruta försiktigt ut reagenset i brunnen. 

5. Avlägsna den färgade referensguiden. 

III. IMMUNOFIXERING 

1. Öppna luckan till migrationsmodulen. 

2. Avlägsna provapplikatorn (applikatorerna) och kassera. 

3. Lyft båda hållarna, avlägsna de buffrade stripsen genom att hålla i plaständarna, kassera. 

- Ta bort bägge hållarna. 

- Torka av elektroderna med en mjuk fuktig servett. 

- Lämna gelen i migrationsmodulen. 

4. Sätt upp den dynamiska masken för reagensapplikation enligt nedan (Fig. 10): 

- Placera maskguiden på den förankrande klämman (guiden kan vara kvar i migrationsmodulen hela tiden). 

- Håll den dynamiska masken i fliken och placera den i guiden med skårorna i linje med markeringarna. 

- Sänk den dynamiska masken ned på HYDRASYS-plattan. 

VIKTIGT : Justera positionen hos den dynamiska masken för perfekt placering i linje mellan de elektroforetiska profilerna och maskens 

brunnar. 

5. Placera segmenthållaren på den lägsta punkten på maskguiden, vänd mot operatören. Håll segmenthållaren i handtaget placerat på dess 

högra sida och tryck på den centrala tryckpunkten så att antiserasegmentet får kontakt med gelen. Lätta på trycket ; därefter kommer 

reagenserna att sprida sig under varje spår (Fig. 11). 

6. Omedelbart, genom att använda segmenthållar-handtaget, för segmentet sakta men säkert, upp och ned längs hela gelen för att applicera 

reagenserna. Applikation bör ta c:a.5 sekunder (Fig. 12). 

VIKTIGT : Under detta steg, håll masken endast i segmenthållar-handtaget. Vidrör inte guiden. Tryck inte en andra gång på 

tryckpunkten då detta kan resultera i krosskontaminering av reagenser. 

7. Ta bort guiden och den dynamiska masken. 

- Ta bort segmenthållaren med dess handtag. 

- Ta bort antiserasegmentet från hållaren och kasta. 

VIKTIGT : Segment med antisera måste behandlas varsamt. 

- Kvarvarande reagens kan finnas kvar i brunnarna efter applicering. Detta har ingen inverkan på testresultatet. 

8. Stäng migrationsmodulens lucka. 

9. Starta proceduren direkt genom att trycka på den gröna piltangenten "START" på tangentbordets vänstra sida. Följande meddelande visas på 

skärmen "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATION – BESKRIVNING AV AUTOMATISERADE STEG 

• Inkubera vid 20 °C under 10 minuter (kontrollerat av Peltiereffekten). 

• En ljudsignal hörs och migrationsmodulens lucka öppnas. Följande meddelande visas på skärmen: " PAP.". 

NOTERA: Migrationsmodulens lucka förblir stängd under inkuberingstiden. 

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IV. BLOTTNING AV GELEN 

1. Öppna migrationsmodulens lock. 

2. Applicera ett tjockt filterpapper på gelen: 

passa in filterpapprets kant med gelkanten (vinkla den i 45° vinkel) och för den försiktigt ned på gelen. 

VIKTIGT: Tryck på filterpapprets hela yta för perfekt kontakt med gelen. 

3. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

4. Starta proceduren genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

BLOTTING - BESKRIVNING AV AUTOMATISERADE STEG 

• Blottning vid 40 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 3 minuter. 

Följande meddelande visas på skärmen "[BLOTTING]". 

• En ljudsignal hörs (bip). 

Följande meddelande visas på skärmen "❊ PAP." (avlägsna pappret). 

V. TORKNING AV GELEN 

1. Öppna luckan till migrationsmodulen. 

2. Avlägsna filterpappret och lämna gelen kvar på sin plats. 

3. Stäng luckan. 

4. Starta genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentboordets vänstra sida). 

TORKNING - BESKRIVNING AV AUTOMATISERADE STEG 

• Torka vid 50 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 6 minuter. 

• En signal hörs och luckan öppnas. Plattans temperatur håller sig kring 50 °C tills luckan öppnas. 

"Migration temp maintained"/(migrationstemperatur upprätthålls) visas på skärmen. 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under hela torkningssteget. 


VI. GELBEARBETNING 

1. Öppna luckan. 

2. Avlägsna den torkade gelfilmen för vidare bearbetning. 

3. Öppna gelhållaren. Lägg ned den torkade gelen i rätt läge (med gelsidan vänd uppåt) ) i fördjupningarna i de två listerna och stäng hållaren. 

Förvissa dig om att filmen är korrekt placerad inuti hållaren (Fig. 13). 

4. Placera gelhållaren i gelbearbetning- / färgningsmodulen. 

VIKTIGT: Innan start av gelbearbetning- / färgningsprogrammet, kontrollera följande : 

- att tvättlösningsbehållaren minst innehåller 400 mL tvättlösning, 

- att behållaren för färgning är fylld med 300 mL färgningslösning, 

- att avfärgningsbehållaren innehåller minst 1 liter avfärgningslösning, 

- att avfallsbehållaren är tom. 

För reagenslinjeförbindelse : hänvisas till visad information på instrumentets skärm (välj tangenten : REAGENT LINES) 

VIKTIGT: Glöm inte att spärra oanvända linjer. 

5. Välj "IF ACID VIOLET"/acidviolett staining program/färgningsprogram på instrumentets meny och starta körningen genom att trycka på 

tangenten "START" (grön pil på tangentbordets högra sida). 

Under stegen färgning, avfärgning och torkning förblir färgningsmodulen stängd. 

Efter nedkylningssteget hörs en ljudsignal och facket öppnas (ventilation fungerar tills gelhållaren avlägsnas). 

NOTERA: 

- När locket har öppnats sjunker temperaturen tills den når 20 °C ( under 5 minuter). Därefter kan en ny migrationskörning startas. 

- Sätt tillbaka provapplikatorn och elektrodhållarna på sina respektive platser. 

- Torka av temperaturkontrollplattan med en mjuk fuktad servett. 

VII.SLUTFÖRANDE AV GELBEARBETNING 

1. Avlägsna gelhållaren från facket, öppna den och ta bort den torkade gelen. 

2. Om nödvändigt, rengör den torra filmens baksida (stödsidan av plast) med ett fuktat mjukt papper. 

ANMÄRKNING : Längden hos de elektroforetiska migreringarna kan vara något olika för geler innehållande 2 eller 3 analysspår, utan några 

ofördelaktiga effekter på utförandet. 

RESULTAT 

Tolkning 

Närvaro av ett Bence Jones protein i urinen karaktäriseras av : 

- ett monoklonalt band detekterat med en av de anti fria och bundna light chains kappa eller lambda antisera, (K eller L spår), 

- samma monoklonala band detekteras med motsvarande anti fri light chain antiserum (KF eller LF spår). 

- ingen reaktion med trivalent antiserum (GAM track), 

Serum paraprotein eliminerat i urinen utan Bence Jones protein karaktäriseras av: 

- ett monoklonalt band detekterat med trivalent antiserum, 

- samma band detekterat med en av anti fria och bundna light chain antisera, och 

- ingen reaktion med motsvarande anti fri light chain antiserum. 

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Serum paraprotein eliminerat i urinen associerat med ett Bence Jones protein karaktäriseras av: 

- ett monoklonalt band detekterat med trivalent antiserum, 

- samma band detekterat med en av anti fria och bundna light chain antisera, 

- ett monoklonalt band detekterat med en av de anti fria och bundna light chain antisera. Detta band migrerar generellt inte på samma nivå 

som det som detekteras med trivalent antiserum, 

- samma band detekterat med en av anti fri light chain antisera. 

I sällsynta fall kan de två banden migrera tillsammans (då är färgningen i light chain spåret starkare än det i GAM spåret). 

Polymeriserade varianter av Bence Jones protein karaktäriseras av: 

- ingen reaktion med trivalent antiserum, 

- flera band visas med en av anti fria och bundna light chain antisera, 

- samma band kan också detekteras med motsvarande fria light chain antiserum. 

Begränsningar 

Användning av andra antisera än de som är specifika för immunofixation med dynamisk mask kan påverka resultaten. 

På grund av upplösnings- och sensitivitetsbegränsningar hos zonelektrofores, är det möjligt att vissa monoklonala komponenter inte blir upptäckta 

med denna metod. 

Felsökning 

Ring leverantörens tekniska support om testet misslyckas trots att givna instruktioner följts för materialförvaring och förberedlese av test. 

Varuinformationsblad för reagenserna i kiten och information om avfallshantering finns tilgängliga hos leverantörens tekniska serviceavdelning. 

PRESTANDADATA 

Reproducerbarhet inom serie och specificitet 


Reproducerbarhet inom serie demonstrerades på tre patologiska prov: två urinprov med Bence Jones proteiner (kappa och lambda fria light chains) 

och ett serumprov med kappa fria light chain. 

Varje prov kördes 4 gånger på 2 loter av HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 geler med metylviolett infärgningsprocedur. 


Reproducerbarhet inom serie demonstrerades på tre patologiska prov: två urinprov med Bence Jones proteiner (kappa och lambda fria light chains) 

och ett serumprov med kappa fria light chain. 

Varje prov kördes 9 gånger på 2 loter av HYDRAGEL 9 BENCE JONES geler med metylviolett infärgningsprocedur. 

Alla replikat gav identiska resultat inom- och mellan- serier, som förväntat för den typen av prover som testades. 

Bence Jones proteinerna identifierades korrekt i varje prov och på alla geler, där fanns inga falskt positiva resultat och inga skillnader observerades 

mellan körningarna. 

Reproducerbarhet mellan serie och specificitet 


Reproducerbarhet mellan serier demonstrerades på fyra patologiska prov: tre urinprov och ett serumprov med Bence Jones proteiner, kappa eller 

lambda fria light chains. 

Dessa prover kördes på 10 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 geler från 3 loter, med acidviolett infärgningsprocedur. 


Reproducerbarhet mellan serier demonstrerades på nio patologiska urin- och serumprover, med Bence Jones proteiner, kappa eller lambda fria light 

chains. 

Dessa prover kördes på 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES geler från 3 loter, med acidviolett infärgningsprocedur. 

Alla replikat gav identiska resultat gel för gel, och som förväntat för den typen av prover som testades. 

Tillförlitlighet 

Tjugo serumprov och trettiosex urinprov med Bence Jones proteiner och fem normala prov, analyserades med användning av HYDRAGEL 4 BENCE 

JONES kitet samt en liknande kommersiellt tillgänglig immunofixeringskit. 

Resultaten för de två immunofixeringskiten befanns vara i total överensstämmelse med varandra. 

Sensitivitet 

Seriella spädningar preparerades för 2 patologiska urinprover som båda uppvisade Bence Jones proteiner och analyserades med HYDRAGEL 

4 BENCE JONES kitet med antisera anti-kappa och anti-lambda fria och bundna light chains och med antisera anti-kappa och anti-lambda fria light 

chains. 

Den minsta detektionsgränsen för Bence Jones proteiner var omkring 3 mg/L med antisera anti- fria och bundna light chains och omkring 12 mg/L 

med antisera anti- fria light chains. 

På grund av strukturen och typen av fria light chain, kan detektionsgränsen som bestäms med anti-kappa eller anti-lambda fri light chain antisera 

variera, men är generellt under 5 mg/dL. 

BIBLIOGRAFI 



1994, 397 pp. 

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ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

Τα κιτ HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, HYDRAGEL 4 BENCE JONES και HYDRAGEL 9 BENCE JONES είναι 

σχεδιασµένα για την ποιοτική ανίχνευση και ταυτοποίηση πρωτεϊνών Bence Jones, µονοκλωνικών ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων κάππα 

ή λάµδα, σε ανθρώπινα ούρα ή ορό, µε ηλεκτροφορητική ανοσοκαθήλωση. Η ανίχνευση πρωτεϊνών Bence Jones χρησιµεύει ως µέσο 

ποιοτικής εκτίµησης κατά την ταυτοποίηση µονοκλωνικών γαµµαπαθειών. 

Κάθε gel αγαρόζης προορίζεται για την ανάλυση : 

- Ενός δείγµατος στο κιτ HYDRAGEL 1 BENCE JONES, 

- ∆ύο δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

- Τεσσάρων δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 4 BENCE JONES, 

- Εννέα δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 9 BENCE JONES. 

Για In Vitro διαγνωστική χρήση. 

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

Οι µη φυσιολογικές ζώνες στα ηλεκτροφορήµατα, ιδιαίτερα εκείνες που αντιστοιχούν σε β- και γ-σφαιρίνες, είναι πάντα ύποπτες ως 

πιθανές µονοκλωνικές πρωτεΐνες και εποµένως ως ένδειξη γαµµαπάθειας. Για την ταυτοποίηση αυτών των µη φυσιολογικών ζωνών, 

εφαρµόζεται η τεχνική της ανοσοκαθήλωσης. Η ηλεκτροφόρηση µε ανοσοκαθήλωση επιτρέπει τη σταθεροποίηση in situ των πρωτεϊνών 

µετά την ηλεκτροφόρηση, καθώς σχηµατίζονται µη διαλυτά συµπλέγµατα των πρωτεϊνών µε τους αντίστοιχους αντιορούς. 

Η δοκιµασία για τις πρωτεΐνες Bence Jones πραγµατοποιείται µε το ηµι-αυτοµατοποιηµένο σύστηµα HYDRASYS και περιλαµβάνει όλα τα 

απαραίτητα βήµατα για τη λήψη gel έτοιµων για ερµηνεία : 

1. Το δείγµα ηλεκτροφορείται ταυτόχρονα σε έξι ίχνη σε αλκαλική γέλη αγαρόζης. 

2. Μετά την ηλεκτροφόρηση, το ένα ίχνος µονιµοποιείται (ELP) για να χρησιµοποιείται ως ενδεικτικό της ηλεκτροφορητικής σύνθεσης 

των πρωτεϊνών του δείγµατος. Τα υπόλοιπα πέντε ίχνη υφίστανται ανοσοκαθήλωση µε αντίστοιχους αντιορούς : τριδύναµος έναντι 

βαρέων αλύσων (γάµµα, άλφα και µι), έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλύσων κάππα, έναντι ελεύθερων και 

συνδεδεµένων ελαφρών αλύσων λάµδα, έναντι ελεύθερων ελαφρών αλύσων κάππα και έναντι ελεύθερων ελαφρών αλύσων λάµδα. 

3. Οι µη κατακρηµνισθείσες διαλυτές πρωτεΐνες αποµακρύνονται από το gel µε στύπωµα και έκπλυνση. Το ίζηµα του συµπλέγµατος 

αντιγόνου – αντισώµατος παγιδεύεται στο στρώµα του gel. 

4. Οι κατακρηµνισθείσες πρωτεΐνες γίνονται ορατές µε χρώση µε όξινο ιώδες. Η περίσσεια της χρωστικής αποµακρύνεται µε όξινο 

διάλυµα. 

5. Οι ζώνες ανοσοκαθίζησης συγκρίνονται στη συνέχεια µε τις αντίστοιχες µη φυσιολογικές ζώνες του ηλεκτροφορήµατος του δείγµατος 

και ταυτοποιούνται από την αντίδραση ή την απουσία αντίδρασης µε κάθε αντιορό. 

Η απλή και ταχεία αυτή τεχνική αποδίδει µια σαφή και εύκολα ερµηνεύσιµη εικόνα. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ HYDRAGEL 1 BENCE JONES, HYDRAGEL 2 BENCE JONES, 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES ΚΑΙ HYDRAGEL 9 BENCE JONES 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES KIT PN 4321 HYDRAGEL 2 BENCE JONES KIT PN 4322 HYDRAGEL 4 BENCE JONES KIT PN 4324 HYDRAGEL 9 BENCE JONES KIT PN 4329 PN 4383* Gel αγαρόζης (έτοιµα προς χρήση) 10 gel 10 gel 80 gel Ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα (έτοιµες προς χρήση) 10 συσκευασίες των 2 10 συσκευασίες των 2 80 συσκευασίες των 2 Ιώδης χρωστική (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 75 mL 1 φιαλίδιο, 75 mL 8 φιαλίδια, 75 mL έκαστο Μονιµοποιητικό διάλυµα (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 2.9 mL Ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι ανθρώπειων γάµµα, 1 φιαλίδιο, 2.0 mL άλφα και µι αλυσίδων (τριδύναµος αντιορός) (έτοιµος προς χρήση) Ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι ανθρώπειων ελεύθερων και 1 φιαλίδιο, 2.0 mL συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων κάππα (αντιορός έτοιµος προς χρήση) Ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι ανθρώπειων ελεύθερων και 1 φιαλίδιο, 2.0 mL συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων λάµδα (αντιορός έτοιµος προς χρήση) Ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι ανθρώπειων ελεύθερων 1 φιαλίδιο, 2.0 mL ελαφρών αλυσίδων κάππα (αντιορός έτοιµος προς χρήση) Ανοσοσφαιρίνες από θηλαστικά έναντι ανθρώπειων ελεύθερων 1 φιαλίδιο, 2.0 mL ελαφρών αλυσίδων λάµδα (αντιορός έτοιµος προς χρήση) Εφαρµογείς (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκευασία των 10 2 συσκευασίες των 10 24 συσκευασίες των 10 3 συσκευασίες των 10 Εφαρµογείς αντιορών (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκευασία των 10 1 συσκευασία των 10 8 συσκευασίες των 10 ∆ιηθητικά χαρτιά – Λεπτά 

| 1 συσκευασία των 10 1 συσκευασία των 10 8 συσκευασίες των 10 ∆ιηθητικά χαρτιά – Αδρά | 1 συσκευασία των 10 | 1 συσκευασία των 10 | 8 συσκευασίες των 10 | 


ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Το µονιµοποιητικό διάλυµα και οι αντιοροί παρέχονται χωριστά από τα κιτ µε εξαίρεση το MAXI-KIT (Βλέπε ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ 

ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ). 

ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιµοποιούνται πάντα µαζί και σύµφωνα µε τις οδηγίες χρήσης. 

ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ. 

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Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά


1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ 

Προετοιµασία 

Τα gel αγαρόζης είναι έτοιµα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει: αγαρόζη, 0.8 g/dL, ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.1 ± 0.1, πρόσθετα, 

µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Τα gel αγαρόζης περιέχουν 0.31 % βαρβιτάλη και 0.34 % νατριούχο βαρβιτάλη. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, 

συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! 

Χρήση 

Μέσο για ηλεκτροφόρηση και ανοσοκαθήλωση πρωτεϊνών. 

Φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης 

Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου (15 έως 30 °C) ή στη συντήρηση (2 έως 8 °C). (Το βέλος 

στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή 

θερµότητας. Αποφύγετε τις µεγάλες διακυµάνσεις θερµοκρασίας κατά τη φύλαξη. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τα gel όταν: 

(i) σχηµατιστούν κρύσταλλοι ή ίζηµα στην επιφάνεια του gel ή αν η υφή του gel γίνει πολύ µαλακή (όλα αυτά προκύπτουν αν το gel 

καταψυχθεί), 

(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή µούχλα, 

(iii) υπάρχει µεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα στο κουτί του gel (αποτέλεσµα της εξίδρωσης του ρυθµιστικού διαλύµατος από το 

gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης). 

2. ΤΑΙΝΙΕΣ ΜΕ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Σπογγώδεις ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα έτοιµες προς χρήση. Καθεµιά περιέχει: ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.1 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το ρυθµιστικό διάλυµα στις ταινίες περιέχει 0.92 % βαρβιτάλη, 1.03 % νατριούχο βαρβιτάλη και 0.30 % αζίδιο του 

νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! Όταν το πετάτε αποφύγετε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή 

χαλκό, καθώς µπορεί να σχηµατιστούν εκρηκτικές ή τοξικές ενώσεις µε το αζίδιο του νατρίου. 

Χρήση 

Οι ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα λειτουργούν ως δεξαµενή ρυθµιστικού διαλύµατος για την ηλεκτροφόρηση και εξασφαλίζουν επαφή 

µεταξύ του gel και των ηλεκτροδίων. 


Φυλάσσετε τις ταινίες σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένουν σταθερές µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και της συσκευασίας των ταινιών. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τις ταινίες αν η συσκευασία τους έχει ανοιχθεί και οι ταινίες έχουν στεγνώσει. 

3. ΟΞΙΝΗ ΙΩ∆ΗΣ ΧΡΩΣΤΙΚΗ 


Φιαλίδιο µε πυκνή όξινη ιώδη χρωστική προς αραίωση στα 300 mL µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. 

Μετά την αραίωση, το αραιωµένο διάλυµα της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ≈ 2, ιώδη χρωστική, 0.2 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 

3.25 %, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για τη χρώση των gel µετά από ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών και ανοσοκαθήλωση. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυµα χρωστικής είναι σχεδιασµένο για χρώση µόνο 10 gel. Αλλάξτε το διάλυµα µετά από 10 διαδικασίες χρώσης. 


Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και 

των φιαλιδίων της χρωστικής. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για 6 µήνες. 

4. ΑΝΤΙΟΡΟΙ ΚΑΙ ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ (µε το PN 4383) 

4.1 ΑΝΤΙΟΡΟΙ 


Έτοιµοι προς χρήση. Όλοι οι αντιοροί είναι προερχόµενες από θηλαστικά πλήρεις αντι-ανθρώπειες ανοσοσφαιρίνες. Για την εύκολη 

αναγνώριση των αντιορών και την παρακολούθηση της χρήσης τους, οι αντιοροί είναι χρωµατισµένοι µε ευδιάκριτες µη επιβλαβείς 

χρωστικές οι οποίες ταιριάζουν µε το χρώµα της ετικέττας του φιαλιδίου. Όταν ο αντιορός παρουσιάζει ελαφρά θολερότητα, αφήστε το 

φιαλίδιο του αντιορού σε θερµοκρασία δωµατίου για τουλάχιστον 10 min. Με τον τρόπο αυτό θα πρέπει το διάλυµα να ξαναγίνει διαυγές. 

Ωστόσο, αν η θολερότητα παραµένει, δεν θα επηρεάσει την ανοσολογική αντίδραση. Σε περίπτωση σχηµατισµού αδιάλυτου ιζήµατος, 

συνιστάται να φυγοκεντρηθεί ο αντιορός για 5 min στις 3000 rpm. 

Χρήση 

Για ανοσοκαθήλωση ηλεκτροφορηµένων πρωτεϊνών. 

Οι αντιοροί µπορεί να προέρχονται από διαφορετικά είδη ζώων. Μην αναµιγνύετε δύο αντιορούς από διαφορετικά φιαλίδια, ακόµη και µε 

την ίδια ειδικότητα, και αλλάζετε ΠΑΝΤΑ το ρύγχος της πιπέττας όταν αλλάζετε φιαλίδια αντιορού. 

ΠΡΟΣΟΧΗ: Προς αποφυγή οποιασδήποτε ανάµιξης των αντιδραστηρίων, τοποθετήστε προσεκτικά το καπάκι στο αντίστοιχο φιαλίδιο µετά 

από κάθε χρήση. 


Φυλάσσετε τους αντιορούς στη συντήρηση του ψυγείου (2 έως 8 °C). Παραµένουν σταθεροί µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων αντιορού. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κατά τη µεταφορά, οι αντιοροί µπορούν να διατηρούνται εκτός ψυγείου (στους 15 ως 30 °C) για 15 ηµέρες χωρίς δυσµενή 

επίδραση στην απόδοσή τους. 

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4.2. ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Έτοιµο προς χρήση. Περιέχει: όξινο διάλυµα, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη 

απόδοση. Για την εύκολη αναγνώρισή του και την παρακολούθηση της χρήσης του, το µονιµοποιητικό διάλυµα είναι χρωµατισµένο µε µη 

επιβλαβή χρωστική. 

Χρήση 

Για τη µονιµοποίηση των ηλεκτροφορητικά διαχωρισµένων πρωτεϊνών του ίχνους αναφοράς (ELP). 

ΠΡΟΣΟΧΗ: Προς αποφυγή οποιασδήποτε ανάµιξης των αντιδραστηρίων, τοποθετήστε προσεκτικά το καπάκι στο αντίστοιχο φιαλίδιο µετά 

από κάθε χρήση. 


Φυλάσσετε το µονιµοποιητικό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένει σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ ή των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

Το διάλυµα πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

5. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ 

Χρήση 

Έτοιµοι, εφαρµογείς µιας χρήσης για τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσετε τους εφαρµογείς σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

6. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ ΑΝΤΙΟΡΩΝ 

Χρήση 

Μιας χρήσης, έγχρωµοι εφαρµογείς για την εφαρµογή του µονιµοποιητικού διαλύµατος και των αντιορών στο gel για την ανοσοκαθήλωση. 

ΠΡΟΣΟΧΗ : Οι εφαρµογείς αντιορών πρέπει να χρησιµοποιούνται µε προσοχή. 

7. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΛΕΠΤΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα της υγρασίας από την επιφάνεια του gel πριν την τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

8. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - Α∆ΡΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης αδρά απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα των µη κατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από την επιφάνεια του gel µετά την 

ανοσοκαθήλωση. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 

1. ΑΝΤΙΟΡΟΙ ΚΑΙ ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ (για τα κιτ 4321, 4322, 4324 και 4329) 

Το πακέτο αντιορών και µονιµοποιητικού διαλύµατος, GAM, K, L (αντι-γάµµα, άλφα, µι βαριές αλυσίδες, αντι-κάππα και λάµδα ελεύθερες 

και συνδεδεµένες ελαφρές αλυσίδες), SEBIA, PN 4335, περιέχει 3 φιαλίδια αντιορών και 1 φιαλίδιο µονιµοποιητικού διαλύµατος, 1 mL 

έκαστο. Είναι ειδικά για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε δυναµική κάλυψη. 

1.1 ΑΝΤΙΟΡΟΙ 

Βλ. παρ. 4.1. 

1.2 ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 

Βλ. παρ. 4.2. 

2. ΠΑΚΕΤΟ ΑΝΤΙΟΡΩΝ ΓΙΑ ΕΛΕΥΘΕΡΕΣ ΕΛΑΦΡΕΣ ΑΛΥΣΙ∆ΕΣ (για τα κιτ 4321, 4322, 4324 και 4329) 

Το πακέτο αντιορών, αντι-κάππα και λάµδα ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων, SEBIA, PN 4336, περιέχει 2 φιαλίδια µε αντιορούς, 1 mL έκαστο. 

Είναι ειδικοί για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε δυναµική κάλυψη. 

Βλ. παρ. 4.1. 

3. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ 


Κάθε φιαλίδιο ∆ιαλύµατος Αποχρωµατισµού (SEBIA, PN 4540, 10 φιαλίδια, 100 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 100 λίτρα απεσταγµένου 

ύδατος. Είναι ευχερές να αραιώνονται µόνο 5 mL του διαλύµατος σε 5 λίτρα, τον όγκο του περιέκτη του διαλύµατος αποχρωµατισµού. 

Μετά την αραίωση το διάλυµα αποχρωµατισµού περιέχει: κιτρικό οξύ 0.05 g/dL. 

Χρήση 

Για αποχρωµατισµό, δηλαδή αφαίρεση της περίσσειας χρωστικής από τη γέλη. 

Για καθαρισµό του τµήµατος χρώσης. 

Για την εξουδετέρωση της οξύτητας του διαλύµατος αποχρωµατισµού, προσθέστε 15 mL διαλύµατος 50 % υδροξειδίου του νατρίου, στο 

κενό δοχείο αχρήστων. 


Φυλάσσετε το διάλυµα προ της αραίωσης σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για µια εβδοµάδα σε θερµοκρασία δωµατίου σε κλειστό δοχείο. Μην προσθέτετε 

αζίδιο του νατρίου. 

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Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

Για να αποτρέψετε πολλαπλασιασµό µικροβίων στο αραιωµένο διάλυµα αποχρωµατισµού αν πρόκειται να το φυλάξετε για περισσότερο 

από µια εβδοµάδα, προσθέστε 5 µL/dL ProClin 300. 

Το διάλυµα εργασίας στο οποίο έχει προστεθεί ProClin είναι σταθερό σε κλειστό δοχείο σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

4. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΕΚΠΛΥΝΣΗΣ HYDRASYS 


Κάθε φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος έκπλυνσης HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 φιαλίδια, 80 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 5 λίτρα, 

µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Μετά την αραίωση το διάλυµα εργασίας περιέχει: αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα pH 8.8 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το πυκνό διάλυµα περιέχει 0.625 % αζίδιο του νατρίου. Μην το πίνετε! Αν το πιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό! Το 

αζίδιο του νατρίου µπορεί να οδηγήσει σε σχηµατισµό εκρηκτικών ή τοξικών ουσιών όταν έρχεται σε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή χαλκό. 

Πάντοτε ξεπλένετε µε άφθονο νερό όταν το πετάτε. 

Χρήση 

Το διάλυµα έκπλυνσης χρησιµεύει για την αποµάκρυνση των µη κακατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από τα gel. Χρησιµεύει επίσης για 

καθαρισµό του θαλάµου χρώσης του HYDRASYS. Χρησιµοποιείτε το περιοδικά, π.χ. αν το όργανο λειτουργεί καθηµερινά, πλένετε το 

θάλαµο χρώσης κάθε εβδοµάδα. 

∆είτε το φύλλο οδηγιών για οδηγίες χρήσης. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η 

οποία σηµειώνεται στις ετικέττες των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

5. ΧΛΩΡΙΟΝΑΤΡΙΟΥΧΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Προετοιµάστε διάλυµα 0.15 M (0.9 g/dL) NaCl σε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. 

Χρήση 

Για την αραίωση δειγµάτων αν χρειαστεί. 


Φυλάσσεται σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Πετάξτε το διάλυµα µετά 3 µήνες ή αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω 

µικροβιακής επιµόλυνσης. Για µεγαλύτερη περίοδο διατήρησης προσθέστε αζίδιο του νατρίου, 0.1 g/dL. 

ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 


2. Σύστηµα µικροπιπεττών, χειροκίνητο ή αυτόµατο, όπως το HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ως εναλλακτικός τρόπος φόρτωσης των 

εφαρµογέων δειγµάτων ή των εφαρµογέων αντιρορών. 

3. Θάλαµος Υγρής Φύλαξης, PN 1270, παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

4. Κιτ περιεκτών παρεχόµενο µε το HYDRASYS. 

5. Ράβδος οδηγός µήτρας SEBIA παρεχόµενη µε το HYDRASYS. 

6. ∆υναµική καλυπτρίδα, SEBIA, PN 1255. 

7. Πιπέττες: 8 µL, 10 µL, 12 µL, 20 µL, 100 µL and 200 µL. 

∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΓΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗ 

Λήψη και διατήρηση δειγµάτων 

• Η ανάλυση γίνεται γενικά σε φρέσκα δείγµατα ούρων. Αν χρειάζεται, διατηρήστε τα δείγµατα ούρων στους 2 ως 8 °C για έως µια 

εβδοµάδα. Για µακρότερη διατήρηση, διατηρήστε τα κατεψυγµένα. Κατάψυξη µε HEPES 0.1 M (pH 6.75) και/ ή αζίδιο του νατρίου, 

0.02 g/dL βελτιώνει τη σταθερότητα κατά τη φύλαξη. Τα κατεψυγµένα ούρα είναι σταθερά για τουλάχιστον ένα µήνα. Τα αποψυγµένα 

δείγµατα πιθανόν να παρουσιάζουν κάποιο βαθµό µετουσίωσης των πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αποφύγετε το βορικό οξύ ως συντηρητικό. 

• Αν αναλύετε ορούς, πρέπει να λαµβάνονται σύµφωνα µε τις καθιερωµένες διαδικασίες. Αν χρειάζεται, διατηρήστε τα δείγµατα ορού 

στους 2 ως 8 °C για έως µια εβδοµάδα. Για µακρότερη διατήρηση, διατηρήστε τα κατεψυγµένα. Τα κατεψυγµένα δείγµατα είναι σταθερά 

για τουλάχιστον ένα µήνα. Τα αποψυγµένα δείγµατα πιθανόν να παρουσιάζουν κάποιο βαθµό µετουσίωσης των πρωτεϊνών ή 

λιποπρωτεϊνών. 

Προετοιµασία των δειγµάτων 

Ούρα 

Η ανάλυση γίνεται σε µη συµπυκνωµένα ούρα. Το επίπεδο ανίχνευσης της πρωτεΐνης Bence Jones βρίσκεται γενικά µεταξύ 1 και 5 mg/dL. 

Συµπυκνώστε τα ούρα αν απαιτείται από τις καθιερωµένες πρακτικές στο εργαστήριο ή αν απαιτείται µεγαλύτερη ευαισθησία. 20 – 100 

πλάσια συγκέντρωση είναι γενικά επαρκής. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Η διάχυση των δειγµάτων ούρων στις υποδοχές του εφαρµογέα µπορεί να παρακωλύεται όταν τα ούρα είναι θολά. Συνιστάται 

η αποµάκρυνση των σωµατιδίων µε φυγοκέντρηση (π.χ. 10 min στις 3,000 rpm) ή διήθηση (π.χ. ηθµός 0.45 Βm). 

Οροί 

Εκτός από τα ούρα µπορεί και ορός να αναλυθεί για πρωτεΐνη Bence Jones. 

Αραιώστε το ορό µε φυσιολογικό ορό ή διαλύτη για ανοσοκαθήλωση ο οποίος έχει προηγουµένως αραιωθεί 1/4 (1 µέρος διαλύτη µε 3 µέρη 

απεσταγµένου ή απιονισµένου ύδατος): 1/10 για τα ίχνη ELP, GAM, K και L (1 µέρος ορού, 9 µέρη αραιωµένου διαλύτη ή φυσιολογικού 

ορού) και 1/3 (1 µέρος ορού, 2 µέρη αραιωµένου διαλύτη ή φυσιολογικού ορού) για τα ίχνη Kf και Lf. 

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ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Αν το επίπεδο ολικής ανοσοσφαιρίνης είναι < 0.5 g/dL, συνιστάται να χρησιµοποιούνται µικρότερες αραιώσεις του δείγµατος 

ορού : για παράδειγµα, αραιώστε 1/5 τον ορό για τα ίχνη ELP, GAM, K και L (1 µέρος ορού, 4 µέρη αραιωµένου διαλύτη ή φυσιολογικού 

ορού) και (1 µέρος ορού, 1 µέρος αραιωµένου διαλύτη ή φυσιολογικού ορού) για τα ίχνη Kf και Lf. 

Για ανάλυση των Ig D και/ή Ig E, εφαρµόστε τις ίδιες αραιώσεις µε εκείνες για τα ίχνη Κ και L. 

Προειδοποιήσεις: 

• Αποφύγετε δείγµατα πλάσµατος. Το ινωδογόνο δίνει µια ζώνη στο ίχνος αναφοράς κοντά στο σηµείο εφαρµογής η οποία θα µπορούσε 

να εκληφθεί ως µονοκλωνική ανοσοσφαιρίνη. 

• Μερικές φορές τα ούρα περιέχουν υψηλές συγκεντρώσεις αλάτων. Αυτό µπορεί να προκαλέσει παραµόρφωση του gel κατά την 

ηλεκτροφόρηση και συνεπώς αλλοίωση των προφίλ ηλεκτροφόρησης. Αν η αλλοίωση αυτή καθιστά την ερµηνεία των αποτελεσµάτων 

ανακριβή, τα ούρα πρέπει να απαλλαγούν από τα άλατα. 

• Λόγω βακτηριακής επιµόλυνσης, η ανοσοσφαιρίνη (παραπρωτεΐνη) µπορεί να υποστεί πρωτεόλυση. Αυτό θα οδηγούσε σε θετική 

αντίδραση µε τον ορό έναντι των ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. Σε αυτήν την περίπτωση, µια παραπρωτεΐνη του ορού η οποία 

αποβάλλεται στα ούρα µπορεί να δώσει µια µονοκλωνική ζώνη µε τον τριδύναµο αντιορό και µε έναν από τους αντιορούς έναντι 

ελαφρών συνδεδεµένων και ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων και µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

• Ο πολυµερισµός των πρωτεϊνών Bence Jones γενικά µειώνει την ευαισθησία ανίχνευσης µε τους ατιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών 

αλυσίδων, καθώς ο πολυµερισµός µπορεί να αποκλείσει τους επιτόπους οι οποίοι κανονικά αντιδρούν µε αυτούς τους αντιορούς. Όταν 

δεν επιτυγχάνεται ανίχνευση και υπάρχει υποψία πρωτεϊνών Bence Jones, αποπολυµερίστε πριν την ηλεκτροφόρηση: αναµίξτε 100 µL 

ούρων µε 5 µL βήτα-µερκαπτοαιθανόλη αραιωµένη 1:10 µε φυσιολογικό ορό. 

∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ 

Το σύστηµα HYDRASYS είναι ένα ηµι-αυτοµατοποιηµένο πολυπαραµετρικό όργανο. Τα αυτοµατοποιηµένα στάδια λειτουργίας 

περιλαµβάνουν την επεξεργασία των gel αγαρόζης HYDRAGEL µε την ακόλουθη σειρά: εφαρµογή δειγµάτων, ηλεκτροφόρηση, στέγνωµα, 

χρώση, αποχρωµατισµός και τελικό στέγνωµα. Τα χειροκίνητα στάδια περιλαµβάνουν το χειρισµό των δειγµάτων και των gel καθώς και την 

προετοιµασία του οργάνου για λειτουργία. ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙ∆ΙΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ ΤΟΥ HYDRASYS. 

I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 

1. Θέστε το HYDRASYS σε λειτουργία. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES ή το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 δείγµατα),δύο εφαρµογείς 

για το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 δείγµατα) ή τρεις εφαρµογείς για το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, σε µια επίπεδη επιφάνεια 

µε τους αριθµούς των βοθρίων στη δεξιά πλευρά (Εικ. 1). 

- Τοποθετήστε 10 µL από τα δείγµατα στα βοθρία του εφαρµογέα ως εξής. Φορτώστε κάθε εφαρµογέα εντός 2 min. 

| ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ / ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ | 

ΒΟΘΡΙΟ No : ELP GAM K L Kf Lf | 

HYDRAGEL 1 BENCE JONES | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 ∆ΕΙΓΜΑ No 1 Η’ 3 2 3 4 5 6 7 ∆ΕΙΓΜΑ No 2 Η’ 4 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 HYDRAGEL 9 BENCE JONES ∆ΕΙΓΜΑ No 1, 4 Η’ 7 1 2 3 4 5 6 ∆ΕΙΓΜΑ No 2, 5 Η’ 8 7 8 9 10 11 12 

| ∆ΕΙΓΜΑ No 3, 6 Η’ 9 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Στο HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, τα βοθρία no. 1, 8 και 15 δεν χρησιµοποιούνται. Μπορούν να σηµαδευτούν µε έναν 

µαρκαδόρο για να αποφευχθεί λανθασµένη τοποθέτηση δείγµατος σε αυτά. 

- Τοποθετήστε τον/τους εφαρµογέα(-είς) στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον/τους από το 

πλαστικό προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών). 

- Αφήστε τα δείγµατα να διαχυθούν στα δόντια για 5 min µετά την τοποθέτηση του τελευταίου δείγµατος. 

Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες. 

3. Ανοίξτε το καπάκι της Μονάδας Ηλεκτροφόρησης και σηκώστε τους φορείς των ηλεκτροδίων και του εφαρµογέα. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Ποτέ µην κλείνετε το καπάκι ενώ οι φορείς είναι σηκωµένοι! 

4. Επιλέξτε το πρόγραµµα "1 BJ SM/DM" για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES, "2/4 BJ-UP SM/DM" για το HYDRAGEL BENCE JONES 

2/4 ή "9 BJ DM " για το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, από το µενού του οργάνου (αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου). 

5. Αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από τη συσκευασία τους. Κρατήστε τις από την πλαστική άκρη τους. Προσαρµόστε 

τη σηµαδεµένη άκρη των ταινιών στις ακίδες του φορέα ηλεκτροδίων, το πλαστικό κάλυµµα της ταινίας πρέπει να είναι στραµµένο 

προς το φορέα (Εικ. 2). 

6. Ανοίξτε τη συσκευασία του HYDRAGEL. 

- Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτίστην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού. 

Αφαιρέστε το χαρτί αµέσως. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην αφήνετε το διηθητικό χαρτί σε επαφή µε το gel επί µακρόν για να µην αφυδατωθεί. 

- Εισαγάγετε 120 µL απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES ή 200 µL για το HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4 και το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, µέχρι το κατώτερο τρίτο της κλίµακας που είναι τυπωµένη στην Πλακέτα Ελέγχου 

Θερµοκρασίας της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

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- Τοποθετήστε την πλάκα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα της 

τυπωµένης κλίµακας (Εικ. 3). 

- Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας του νερού. (Εικ. 3). Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, 

ότι το νερό έχει απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε την τυπωµένη κλίµακα. 

7. Κατεβάστε και τους δύο φορείς. Σε αυτήν τη θέση, οι ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος δεν αγγίζουν το gel. ΜΗΝ ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ 

ΦΟΡΕΙΣ ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ. 

8. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα από τον υγρό θάλαµο. Κρατήστε τον από το προστατευτικό κάλυµµα. 

- Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα. 

- Τοποθετήστε τον/τους εφαρµογέα(-είς) στο φορέα : 

- Με το HYDRAGEL 1 BENCE JONES ή το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (2 δείγµατα), στη θέση No 6, 

- Με το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 (4 δείγµατα), στις θέσεις No 3 και 9, 

- Με το HYDRAGEL 9 BENCE JONES, στις θέσεις No 2, 6 και 10. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα πρέπει να είναι στραµµένοι προς τον χειριστή (Εικ. 4). 

9. Βεβαιωθείτε ότι οι φορείς είναι κατεβασµένοι. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

10. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος "START" στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Βεβαιωθείτε ότι η είσοδος αερισµού στη δεξιά πλευρά του οργάνου είναι ελεύθερη. 

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι δύο φορείς χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα και ο εφαρµογέας να είναι σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. 

• Ο φορέας του εφαρµογέα σηκώνεται. 

• Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται υπό συνεχές ρεύµα 10 W για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES και 20 W για το HYDRAGEL BENCE 

JONES 2/4, µέχρι να συµπληρωθούν 42 Vh (για περίπου 9 min) και υπό 20 W µέχρι να συµπληρωθούν 36 Vh (για περίπου 7 min) για το 

HYDRAGEL 9 BENCE JONES, στους 20 °C . 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Το ακόλουθο µήνυµα παρουσιάζεται στην οθόνη : 

" AS". 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

II. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗΣ 

Η δυναµική καλυπτρίδα περιέχει έναν έγχρωµο οδηγό αναφοράς για την εφαρµογή των αντιδραστηρίων, έναν εφαρµογέα αντιορών, µια 

βάση εφαρµογέα αντιορών, έναν οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας και µια συσκευή µείωσης του µήκους (Εικ. 5). 

Κατά την ηλεκτροφόρηση, συναρµολογήστε τη δυναµική καλυπτρίδα ως εξής : 

1. Τοποθετήστε τον οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας σε επίπεδη επιφάνεια. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Για ανάλυση ενός ή δύο δειγµάτων, είναι απαραίτητο να τοποθετηθεί στον οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας µια 

συσκευή µείωσης του µήκους. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα αντιορών στη βάση εφαρµογέων (Εικ. 6) : 

- Κλίνετε τον εφαρµογέα αντιορών κατά 45° και τοποθετήστε τον σε επαφή µε τα πλαστικά ελατήρια της βάσης εφαρµογέων. 

- Αποµακρύνετε τα δύο αντικείµενα και περιστρέψτε τον εφαρµογέα για να τον σταθεροποιήσετε στις εγκοπές της βάσης. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ : Βεβαιωθείτε ότι ο εφαρµογέας είναι σωστά τοποθετηµένος στη βάση : οι ακίδες στα άκρα του εφαρµογέα 

πρέπει να είναι σταθεροποιηµένες στις εγκοπές της βάσης. 

3. Τοποθετήστε τη βάση µε τον εφαρµογέα στον οδηγό της δυναµικής καλυπτρίδας (Εικ. 7). Στη συνέχεια, τοποθετήστε τον έγχρωµο 

οδηγό αναφοράς για την εφαρµογή των αντιδραστηρίων, που αντιστοιχεί στην ανάλυση που πραγµατοποιείτε, στη βάση του 

εφαρµογέα µπροστά από τα βοθρία του εφαρµογέα αντιδραστηρίων (Εικ. 8). 

4. Εφαρµόστε τα αντιδραστήρια ως εξής: 

- Εφαρµογέας αντιορών µε 6 βοθρία για το HYDRAGEL 1 BENCE JONES : 8 µL ανά βοθρίο, 

- Εφαρµογέας αντιορών µε 15 βοθρία για το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 : 8 µL ανά βοθρίο για ανάλυση 2 δειγµάτων, 

12 µL ανά βοθρίο για ανάλυση 4 δειγµάτων, 

- Εφαρµογέας αντιορών µε 18 βοθρία για το HYDRAGEL 9 BENCE JONES : 8 µL ανά βοθρίο. 

ΙΧΝΟΣ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΟ ΧΡΩΜΑ ELP µονιµοποιητικό διάλυµα κίτρινο GAM τριδύναµος αντιορός ιώδες K αντιορός αντι-κάππα ελαφρές αλυσίδες (ελεύθερες και συνδεδεµένες) πράσινο L αντιορός αντι-λάµδα ελαφρές αλυσίδες (ελεύθερες και συνδεδεµένες) µπλε Kf αντιορός αντι-κάππα ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες πορτοκαλί 

| Lf | αντιορός αντι-λάµδα ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες | κόκκινο | 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Τα αντιδραστήρια είναι έγχρωµα και τα χρώµατα παρουσιάζονται στον έγχρωµο οδηγό αναφοράς για τη διευκόλυνση του 

πιπετταρίσµατος των αντιορών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Για το HYDRAGEL BENCE JONES 2/4, µην χρησιµοποιείτε τα βοθρία 1, 8 και 15 του εφαρµογέα αντιορών. 

- Αναρροφάτε τα αντιδραστήρια αποφεύγοντας φυσαλίδες αέρα στο ρύγχος της πιπέττας. 

- Εφαρµόζετε τα αντιδραστήρια (Εικ. 9) : 

- Κρατάτε την πιπέττα υπό γωνία και αγγίζετε το ρύγχος της ελαφρά στο πλάγιο του βοθρίου, χωρίς να αγγίζετε τον πυθµένα 

του βοθρίου. 

- Εγχύστε τη σταγόνα του αντιδραστηρίου στο βοθρίο. 

5. Αφαιρέστε τον έγχρωµο οδηγό αναφοράς. 

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III. ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ 

1. Ανοίξτε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

2. Αφαιρέστε τους εφαρµογείς δειγµάτων και πετάξτε τους. 

3. Σηκώστε και τους δύο φορείς, αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος κρατώντας τις από την πλαστική άκρη τους και 

πετάξτε τις. 

- Αφαιρέστε και τους δύο φορείς. 

- Σκουπίστε τα ηλεκτρόδια µε µαλακό υγρό πανάκι. 

- Αφήστε το gel στη θέση του στη µονάδα ηλεκτροφόρησης. 

4. Ετοιµάστε τη δυναµική καλυπτρίδα για εφαρµογή των αντιδραστηρίων ως εξής (Εικ. 10): 

- Τοποθετήστε τον οδηγό της καλυπτρίδας στο clip συγκράτησης (ο οδηγός µπορεί να παραµένει στη µονάδα ηλεκτροφόρησης 

µόνιµα). 

- Κρατώντας τη δυναµική καλυπτρίδα από την άκρη της τοποθετήστε την στον οδηγό µε τις εγκοπές ευθυγραµµισµένες µε τα 

σηµάδια. 

- Χαµηλώστε τη δυναµική καλυπτρίδα επάνω στην πλάκα του HYDRASYS. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Προσαρµόστε τη θέση της δυναµικής καλυπτρίδας ώστε να είναι τέλεια ευθυγραµµισµένη µε τα ηλεκτροφορητικά 

ίχνη. 

5. Τοποθετήστε τη βάση των εφαρµογέων στο κατώτερο σηµείο του οδηγού της καλυπτρίδας, στραµµένη προς το χειριστή. Κρατήστε 

τη βάση των εφαρµογέων από τη λαβή στα δεξιά του και πιέστε το κεντρικό σηµείο πίεσης ώστε ο εφαρµογέας αντιορών να 

ακουµπήσει στο gel. ∆ιακόψτε την πίεση. Τα αντιδραστήρια θα απλωθούν σε κάθε ηλεκτροφορητικό ίχνος (Εικ. 11). 

6. Αµέσως, χρησιµοποιώντας τη λαβή της βάσης του εφαρµογέα αντιδραστηρίων, µετακινήστε τον εφαρµογέα αργά αλλά σταθερά 

πάνω – κάτω σε όλο το µήκος του gel για να εφαρµόσετε τα αντιδραστήρια. Αυτό θα πρέπει να διαρκέσει περίπου 5 sec (Εικ. 12). 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ : Κατά τη διάρκεια αυτού του βήµατος, κρατήστε την καλυπτρίδα µόνο από τη λαβή της βάσης του εφαρµογέα 

αντιδραστηρίων. Αποφύγετε να αγγίζετε τον οδηγό. Μην ξαναπιέζετε το σηµείο πίεσης καθώς αυτό µπορεί να οδηγήσει σε 

ανάµιξη των αντιδραστηρίων. 

7. Αφαιρέστε τον οδηγό και τη δυναµική καλυπτρίδα. 

- Αφαιρέστε τη βάση του εφαρµογέα αντιδραστηρίων κρατώντας την από τη λαβή της. 

- Αφαιρέστε τον εφαρµογέα αντιδραστηρίων από τη βάση του και πετάξτε τον. 

ΠΡΟΣΟΧΗ : Οι εφαρµογείς των αντιορών πρέπει να µεταχειρίζονται µε προσοχή. 

- Κάποια υπολειπόµενη ποσότητα αντιδραστηρίων µπορεί να παραµείνει στα βοθρία µετά την εφαρµογή. Αυτό δεν θα επηρεάσει 

τα αποτελέσµατα. 

8. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

9. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πατώντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος "START" στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. Η 

λέξη "[INCUBATION]" εµφανίζεται στην οθόνη. 

ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Επώαση στους 20 °C για 10 min (ελεγχόµενη µε το φαινόµενο Peltier). 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας ηλεκτροφόρησης. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται 

στην οθόνη: " PAP.". 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια της επώασης. 

IV ΣΤΥΠΩΜΑ ΤΟΥ GEL 


2. Τοποθετήστε ένα αδρό διηθητικό χαρτί στο gel: 

- ευθυγραµµίστε την άκρη του διηθητικού χαρτιού µε την άκρη του gel (δώστε του κλίση 45°) και πιέστε το στο gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πιέστε δυνατά σε όλη την επιφάνεια του gel ώστε να εξασφαλιστεί καλή προσκόλληση. 

3. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης . 

4. Αρχίστε τη διαδικασία πιέζοντας το "START". 

ΣΤΥΠΩΜΑ - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Στύπωµα στους 40 °C ελεγχόµενο µε το φαινόµενο Peltier, για 3 min. Το ακόλουθο µήνυµα παρουσιάζεται στην οθόνη: "[BLOTTING]". 

• Ακούγεται ένα ηχητικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα παρουσιάζεται στην οθόνη: "❊ PAP.". 

V. ΣΤΕΓΝΩΜΑ ΤΟΥ GEL 


2. Αφαιρέστε το διηθητικό χαρτί και αφήστε το gel στη θέση του. 

3. Κλείστε το καπάκι. 

4. Αρχίστε τη διαδικασία πιέζοντας το "START". 

ΣΤΕΓΝΩΜΑ - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Στέγνωµα στους 50 °C ελεγχόµενο µε το φαινόµενο Peltier, για 6 min. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας ηλεκτροφόρησης. Η θερµοκρασία της πλάκας 

παραµένει στους 50 °C µέχρι να ανοιχθεί το καπάκι. Το µήνυµα "Migration temp maintained" εµφανίζεται στην οθόνη. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια Του στεγνώµατος. 

VI. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΟΥ GEL 

1. Ανοίξτε το καπάκι. 

2. Αφαιρέστε το στεγνωµένο gel για περαιτέρω επεξεργασία. 

3. Ανοίξτε τον στατήρα των gel. Τοποθετήστε το στεγνό gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) στις αύλακες και κλείστε τον 

στατήρα. Βεβαιωθείτε ότι το film είναι σωστά τοποθετηµένο µέσα στον στατήρα (Εικ. 13). 

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4. Τοποθετήστε τον στατήρα στη Μονάδα Επεξεργασίας / Χρώσης των gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν την έναρξη της επεξεργασίας / χρώσης των gel, ελέγξτε τα ακόλουθα: 

- ο περιέκτης διαλύµατος έκπλυνσης περιέχει τουλάχιστον 400 mL διαλύµατος έκπλυνσης, 

- ο περιέκτης χρώσης είναι γεµάτος µε 300 mL χρωστικού διαλύµατος, 

- ο περιέκτης διαλύµατος αποχρωµατισµού περιέχει τουλάχιστον 1 λίτρο διαλύµατος αποχρωµατισµού, 

- ο περιέκτης αχρήστων είναι κενός. 

Για τη σύνδεση των γραµµών των αντιδραστηρίων: ανατρέξτε στις πληροφορίες που εµφανίζονται στην οθόνη του οργάνου 

(επιλέξτε: REAGENT LINES). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μην ξεχνάτε να αποφράσσετε τις µη χρησιµοποιούµενες γραµµές. 

5. Επιλέξτε το πρόγραµµα χρώσης "IF ACID VIOLET" από το µενού του οργάνου και αρχίστε τη διαδικασία πατώντας το πλήκτρο 

"START" (πράσινο βέλος στη δεξιά πλευρά του πληκτρολογίου). 

Κατά τα στάδια χρώσης, αποχρωµατισµού και στεγνώµατος, η µονάδα παραµένει κλειδωµένη. 

Μετά το στάδιο ψύξης, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας (ο αερισµός διατηρείται µέχρι την αφαίρεση του 

στατήρα των gel). 

ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ: 

- Η θερµοκρασία της πλάκας της µονάδας ηλεκτροφόρησης µειώνεται από τη στιγµή που ανοίγει το καπάκι µέχρι να φτάσει τους 

20 °C (σε λιγότερο από 5 min). Τότε µπορεί να αρχίσει νέα ηλεκτροφόρηση. 

- Επαναφέρετε το φορέα δειγµάτων και τους φορείς ηλεκτροδίων στη θέση τους. 

- Σκουπίστε την πλάκα ελέγχου της θερµοκρασίας µε µαλακό υγρό πανάκι. 

VII.ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΟΥ GEL 

1. Αφαιρέστε τον στατήρα των gel από τη µονάδα, ανοίξτε τον και αφαιρέστε το στεγνό gel. 

2. Αν χρειαστεί, καθαρίστε την πίσω (πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό χαρτί. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα µήκη των ηλεκτροφορηµάτων ενδέχεται να είναι ελαφρώς διαφορετικά στα gel µε 2 ή 3 σειρές ανάλυσης, χωρίς 

δυσµενή επίδραση στην απόδοση. 

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Ερµηνεία 

Η παρουσία πρωτεΐνης Bence Jones στα ούρα χαρακτηρίζεται από: 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων 

κάππα ή λάµδα (ίχνη K ή L), 

- η ίδια µονοκλωνική ζώνη ανιχνεύεται µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων (ίχνη KF ή LF), 

- καµία αντίδραση µε τον τριδύναµο αντιορό (ίχνος GAM), 

Παραπρωτεΐνη στον ορό αποβαλλόµενη στα ούρα χωρίς πρωτεΐνη Bence Jones χαρακτηρίζεται από: 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- η ίδια ζώνη ανιχνεύεται µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων και 

- καµία αντίδραση µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Παραπρωτεΐνη στον ορό αποβαλλόµενη στα ούρα σχετιζόµενη µε πρωτεΐνη Bence Jones χαρακτηρίζεται από: 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- η ίδια ζώνη ανιχνεύεται µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων, 

- µια µονοκλωνική ζώνη ανιχνευόµενη µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων. Η 

ζώνη αυτή γενικά δεν κινείται στο ίδιο επίπεδο µε εκείνη που ανιχνεύεται µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- η ίδια ζώνη ανιχνεύεται µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Σε σπάνιες περιπτώσεις, οι δύο ζώνες κινούνται µαζί (τότε, η χρώση στο ίχνος των ελαφρών αλυσίδων είναι εντονότερη από ό,τι 

στο ίχνος GAM). 

Πολυµερισµένες µορφές πρωτεΐνης Bence Jones χαρακτηρίζονται από: 

- καµία αντίδραση µε τον τριδύναµο αντιορό, 

- πολλές ζώνες ανιχνευόµενες µε έναν από τους αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων, 

- οι ίδιες ζώνες µπορεί επίσης να ανιχνεύονται µε τον αντίστοιχο αντιορό έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Περιορισµοί 

Η χρήση άλλων αντιορών από τους ειδικούς για τη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης µε δυναµική κάλυψη µπορεί να επηρεάσει τα 

αποτελέσµατα. 

Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης, είναι πιθανό κάποια µονοκλωνικά στοιχεία να µην 

ανιχνεύονται µε αυτήν τη µέθοδο. 

Αντιµετώπιση προβληµάτων 

Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιµασίας και φύλαξης των 

υλικών και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά. 

Τα Φύλλα ∆εδοµένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται επίσης από την 

Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή. 

- 79 -


∆Ε∆ΟΜΕΝΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 

Αναπαραγωγιµότητα εντός των gel και ειδικότητα 


Αναπαραγωγιµότητα στο ίδιο gel καταδείχθηκε σε τρία διαφορετικά παθολογικά δείγµατα : δύο δείγµατα ούρων µε πρωτεΐνες Bence Jones 

(κάππα και λάµδα ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες) και ένα δείγµα ορού µε ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες κάππα. 

Κάθε δείγµα έτρεξε 4 φορές σε 2 παρτίδες gel HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε όξινη ιώδη χρωστική. 


Αναπαραγωγιµότητα στο ίδιο gel καταδείχθηκε σε τρία διαφορετικά παθολογικά δείγµατα : δύο δείγµατα ούρων µε πρωτεΐνες Bence Jones 

(κάππα και λάµδα ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες) και ένα δείγµα ορού µε ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες κάππα. 

Κάθε δείγµα έτρεξε 9 φορές σε 2 παρτίδες gel HYDRAGEL 9 BENCE JONES µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε όξινη ιώδη χρωστική. 

Όλες οι επαναλήψεις απέδωσαν όµοια αποτελέσµατα µέσα στην ίδια παρτίδα και µεταξύ των παρτίδων και αναµενόµενα για τα δείγµατα 

που αναλύθηκαν. 

Οι πρωτεΐνες Bence Jones ταυτοποιήθηκαν σωστά για κάθε δείγµα σε όλα τα gel και δεν υπήρξαν ψευδώς θετικά αποτελέσµατα, ούτε 

διαφορές µεταξύ των επαναλήψεων. 

Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel και ειδικότητα 


Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel καταδείχθηκε σε τέσσερα διαφορετικά παθολογικά δείγµατα, 3 δείγµατα ούρων και ένα δείγµα ορού 

µε πρωτεΐνες Bence Jones, ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες κάππα ή λάµδα. 

Τα δείγµατα αυτά έτρεξαν σε 10 HYDRAGEL BENCE JONES 2/4 gel από 3 διαφορετικές παρτίδες, µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε 

όξινη ιώδη χρωστική. 


Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των gel καταδείχθηκε σε εννέα διαφορετικά παθολογικά δείγµατα ούρων και ορού, µε πρωτεΐνες Bence 

Jones, ελεύθερες ελαφρές αλυσίδες κάππα ή λάµδα. 

Τα δείγµατα αυτά έτρεξαν σε 10 HYDRAGEL 9 BENCE JONES gel από 3 διαφορετικές παρτίδες, µε χρήση της διαδικασίας χρώσης µε όξινη 

ιώδη χρωστική. 

Όλες οι επαναλήψεις απέδωσαν όµοια αποτελέσµατα από gel σε gel και αναµενόµενα για τα δείγµατα που αναλύθηκαν. 

Ακρίβεια 

Είκοσι δείγµατα ορού και τριάντα έξι δείγµατα ούρων µε πρωτεΐνες Bence Jones, µε πέντε φυσιολογικά δείγµατα, αναλύθηκαν µε το κιτ 

HYDRAGEL 4 BENCE JONES και παρόµοια, εµπορικά διαθέσιµη διαδικασία ανοσοκαθήλωσης. 

Τα αποτελέσµατα των δύο διαδικασιών ανοσοκαθήλωσης ήταν σε πλήρη συµφωνία µεταξύ τους. 

Ευαισθησία 

Σειριακές αραιώσεις 2 παθολογικών δειγµάτων ούρων µε πρωτεΐνες Bence Jones αναλύθηκαν µε τη διαδικασία HYDRAGEL 4 BENCE 

JONES µε αντι-κάππα και αντι-λάµδα αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων ελαφρών αλυσίδων και µε αντι-κάππα και αντιλάµδα 

αντιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Το ελάχιστο όριο ανίχνευσης για τις πρωτεΐνες Bence Jones ήταν περίπου 3 mg/L µε αντιορούς έναντι ελεύθερων και συνδεδεµένων 

ελαφρών αλυσίδων και περίπου 12 mg/L µε αντιορούς έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων. 

Ανάλογα µε τη δοµή και το είδος της ελεύθερης ελαφράς αλυσίδας, το όριο ανίχνευσης µε τους αντι-κάππα ή αντι-λάµδα αντιορούς 

έναντι ελεύθερων ελαφρών αλυσίδων µπορεί να ποικίλλει, αλλά είναι γενικά µικρότερο των 5 mg/dL. 

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 



1994, 397 pp. 

- 80 -


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e-mail : ils@ilsdk.dk 

- 81 - 

SEBIA INSTRUKTION - Dansk


SCHÉMAS / FIGURES 

Figure 1 Figure 2 

1 2 3 4 567 8 9 10 11 121314 15 


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

- 82 -



Figure 5 

Repère couleurs 

Colored Reference Guide 

ELP G A M K L ELP 

HYDRAGEL 9 IF 

G A M K L ELP G A M K L 

Barrette antisérums 

Antisera Segment 

Bossage (Boss) 

Ergot (Pin) 

Support barrette 

Segment Holder 

Poignée (Flap) 

Encoche (notch) 

Puits (wells) 

Point d'appui central 

(Central Pressure Point) 

Ressorts (Springs) 

Réducteur de course 

Length Reducing Device 

Guide du masque dynamique 

Dynamic Mask Guide 

Poignée (Flap) 

- 83 -

7 

4 

8 

1 

5 

9 

2 

6 

7 

4 

1 

8 

5 

2 

9 

6 




1 

1 

2 









GEL 9 IF 

A M K L ELP G A M K L ELP G A M K L 

DRAGEL 9 IF 

G A M K L ELP G A M K L ELP G A M K L 

- 84 -

7 

4 

8 

5 

9 



Figure 12 

DRAGEL 9 IF 

G A M K L ELP G A M K L ELP G A M K L 

ELP G A M K L ELP G A M K L 

ELP G A M K L 

Figure 13 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

- 85 -

Benelux s.a. / n.v. 

Rue de la Fusée, 62 

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