HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20

Fixation avec la solution de fixation :
1. Placer le gel dans un portoir (fourni dans le kit accessoires HYDRAGEL K20 SEBIA).
2. Remplir un bac (fourni dans le kit accessoires HYDRAGEL K20 SEBIA) avec 150 mL de solution de fixation.
3. Immerger le gel dans la solution de fixation pendant 15 minutes.
4. Sortir le gel et le sécher sous air chaud à 80 °C dans l’incubateur-sécheur.
IMPORTANT : Le gel doit être parfaitement sec.
HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 - 2005/03
III. COLORATION - DÉCOLORATION
1. Immerger le gel sec et refroidi dans la solution colorante pendant 5 minutes.
2. Décolorer par trois bains successifs minimum de décolorant jusqu’à obtention d’un fond parfaitement clair.
3. Éliminer l’excès de liquide en surface du gel avec un papier ouaté et sécher le gel sous air chaud à 80 °C. Si nécessaire, nettoyer le dos du
gel (support plastique) avec un papier ouaté humide.
IV. LECTURE
Lire au densitomètre / scanner avec un filtre jaune ou à 570 nm : sur les densitomètres HYRYS ou DVSE, positionner la fraction A 2
sur le repère 5 mm
du plateau de lecture de façon à placer le zéro sur le point le plus bas entre la fraction anhydrase carbonique et la fraction A 2
.
NOTE : Afin d’assurer les résultats les plus exacts et cohérents :
- Ajuster la longueur de lecture à 30 mm de façon à inclure le profil électrophorétique entier.
- Positionner les minima de façon à encadrer au plus près la fraction A 2
.
Il est recommandé d’analyser les profils électrophorétiques le plus rapidement possible. Les gels conservés à l’obscurité, dans un endroit sec et à
l’abri de toute source de chaleur peuvent être interprétés qualitativement dans un délai de trois mois.
RÉSULTATS
Contrôle Qualité
Pour chaque série d’analyses, il est recommandé d’inclure un sang de contrôle ou un échantillon de contrôle contenant des hémoglobines A, F, S
et C.
Valeurs
La lecture à 570 nm par densitométrie permet de définir les concentrations relatives (pourcentages) de chaque fraction.
Les valeurs normales (moyennes ± 2 écarts types) pour chaque fraction dans la technique HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, ont été établies à
partir d’une population de 200 adultes (hommes et femmes), en bonne santé :
Hémoglobine A ≥ 96,5 %
Hémoglobine F < 2,0 % (*)
Hémoglobine A 2
≤ 3,5 %
(*) cf Interférences et limites
Il est recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs normales.
Interprétation
1. Anomalies qualitatives : Hémoglobinopathies
La plupart sont des anomalies de structure, dues au remplacement par mutation d'un acide aminé par un autre sur l'une ou l'autre chaîne. Les
conséquences de la mutation varient suivant la position de l'acide aminé muté et de celui qui le remplace, l'intégrité de certaines parties de la molécule
étant plus particulièrement nécessaire à sa viabilité et à son bon fonctionnement.
Plus de 200 variants de l'hémoglobine adulte sont actuellement définis et décrits. Les premières hémoglobines anormales étudiées, et les plus
nombreuses, sont dues à une modification de la charge électrique globale de la molécule, entraînant une détection facile par électrophorèse.
Quatre hémoglobines anormales principales présentent un intérêt particulier, d'un point de vue anthropologique et médical : S, C, E et D.
Le kit HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 est destiné à la détection des hémoglobinopathies et des thalassémies. Dès qu’une anomalie est détectée,
il est conseillé de la confirmer à l’aide de tests complémentaires tels que l’électrophorèse sur gel acide.
Hémoglobine S
La plus fréquente, due à une mutation d’un acide glutamique de la chaîne ß (acide aminé acide) par une valine (acide aminé neutre) : la mobilité est
dans ce cas diminuée. Dans la technique HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, en tampon alcalin, l'hémoglobine S migre en position médiane entre
les fractions A et A 2
.
Hémoglobine C
La mutation est due à un acide glutamique de la chaîne ß, remplacé par une Iysine (acide aminé basique), la mobilité est dans ce cas très réduite.
Dans la technique HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, les hémoglobines C et E se trouvent parfaitement superposées à la fraction A 2
. Quand cette
fraction est supérieure à 15 %, la présence d’hémoglobines C et E peut alors être suspectée.
Hémoglobine E
Un acide glutamique de la chaîne ß est remplacé par une Iysine. Dans la technique HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, cette hémoglobine migre
exactement comme l'hémoglobine C. En tampon acide [technique HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20], elle ne se sépare pas des
hémoglobines A et A 2
, ce qui permet de la différencier de l’hémoglobine C.
Hémoglobine D
Un acide glutamique de la chaîne ß est remplacé par une glutamine. Dans la technique HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, cette hémoglobine migre
exactement comme l'hémoglobine S. En tampon acide [technique HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20], elle ne se sépare pas des
hémoglobines A et A 2
, ce qui permet de la différencier de l’hémoglobine S.
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