HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20

HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 - 2005/03
ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ:
- Για να ετοιµάσετε αιµόλυµα από άτοµα, ελαφρά αναιµικά (περίπου 10 g/dL Hb) ή βαριά αναιµικά (< 7 g/dL Hb), ο όγκος των
συµπυκνωµένων ερυθρών µπορεί να αυξηθεί στα 15 µL και 20 µL αντίστοιχα. Η ένταση της χρώσης θα αυξηθεί έτσι αλλά οι
σχετικές συγκεντρώσεις των επιµέρους κλασµάτων δεν θα αλλάξουν.
- Το αιµόλυµα δεν χρειάζεται διήθηση ή φυγοκέντρηση.
- Το αιµολυτικό διάλυµα της SEBIA δεν επηρεάζει την ασταθή αιµοσφαιρίνη Bart’s.
∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ
I. ΣΤΑ∆ΙΟ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ
1. Τοποθετήστε τον φορέα του εφαρµογέα HYDRAGEL K20 σε επίπεδη επιφάνεια (Εικ. 1) και σηκώστε το τµήµα του φορέα µε τις
αριθµηµένες εγκοπές.
2. Εισαγάγετε 120 µL απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ µέχρι το κατώτερο τρίτο της κλίµακας που είναι τυπωµένη στο φορέα
HYDRAGEL K20.
3. Ανοίξτε τη συσκευασία του HYDRAGEL.
4. Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού.
Αφαιρέστε το χαρτί αµέσως.
ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην αφήνετε το διηθητικό χαρτί σε επαφή µε το gel επί µακρόν για να µην αφυδατωθεί.
5. Τοποθετήστε την πλακέτα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα της
τυπωµένης κλίµακας (Εικ. 2).
6. Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας του νερού (Εικ. 3). Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, ότι
το νερό έχει απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε την τυπωµένη κλίµακα.
7. Κατεβάστε το φορέα στην ενδιάµεση θέση µε το διακόπτη στην υψηλή θέση.
8. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα σε µια επίπεδη επιφάνεια µε τους αριθµούς των βοθρίων στη δεξιά πλευρά (Εικ. 3).
9. Τοποθετήστε 10 µL από τα αιµολυµένα δείγµατα στα βοθρία του εφαρµογέα. Φορτώστε τον εφαρµογέα εντός 2 min.
- Χρησιµοποιήστε τον εφαρµογέα αµέσως.
- Για ύστερη χρήση (ως 8 ώρες), τοποθετήστε τον εφαρµογέα στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον
από το πλαστικό προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών), διατηρήστε όλο τον θάλαµο στο ψυγείο και τοποθετήστε το gel στο
φορέα HYDRAGEL K20 λίγο πριν τη χρήση.
Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες.
10. Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα.
11. Τοποθετήστε τον εφαρµογέα στη θέση No 4 του φορέα.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα πρέπει να είναι στραµµένοι προς τον χειριστή (Εικ. 4)
12. Χαµηλώστε το φορέα του εφαρµογέα µε το διακόπτη έτσι ώστε να έρθει ο εφαρµογέας σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. ΜΗΝ
ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ ΦΟΡΕΙΣ ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ.
13. Μετά από 1 min, γυρίστε το διακόπτη για να σηκώσετε τον εφαρµογέα, αφαιρέστε και πετάξτε τον εφαρµογέα.
14. Τοποθετήστε το gel σε κατάλληλο θάλαµο ηλεκτροφόρησης, σύµφωνα µε την πολικότητά του, µε την κατώτερη πλευρά του gel πρ
Όταν χρησιµοποιείτε το θάλαµο SEBIA K20, τοποθετήστε το HYDRAGEL στη γέφυρα µε την πλευρά του gel προς τα κάτω. Το gel
πρέπει να βυθίζεται περίπου 1 cm στο διάλυµα σε κάθε πλευρά.
Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου K20 για περαιτέρω λεπτοµέρειες.
15. Συνδέστε το θάλαµο µε την παροχή ρεύµατος.
Συνθήκες ηλεκτροφόρησης SEBIA K20 Όγκος ρυθµιστικού διαλύµατος ανά τµήµα 150 mL Ολικός όγκος ρυθµιστικού διαλύµατος 300 mL Χρόνος ηλεκτροφόρησης 15 min Σταθερή τάση 165 V
| Αρχικό ρεύµα (ανά gel) | 7 ± 2 mA |
16. Μετά την ηλεκτροφόρηση, αποσυνδέστε το θάλαµο από το τροφοδοτικό και αφαιρέστε το gel.
II. ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗ
Υποβάλετε τα gel σε µια από τις ακόλουθες επεξεργασίες.
Μονιµοποίηση µε θερµό αέρα (συστήνεται µόνο µε τον Κλίβανο επώασης-στεγνώµατος SEBIA IS 80) :
Στεγνώστε το gel τελείως στον κλίβανο στους 80 °C (για 10 min τουλάχιστον).
Μονιµοποίηση µε διάλυµα µονιµοποίησης :
1. Τοποθετήστε το gel σε στατήρα (παρέχεται µε το Κιτ συµπληρωµατικών εξαρτηµάτων SEBIA HYDRAGEL K20).
2. Γεµίστε µια δεξαµενή (παρέχεται µε το Κιτ συµπληρωµατικών εξαρτηµάτων SEBIA HYDRAGEL K20) µε 150 mL διαλύµατος
µονιµοποίησης.
3. Βυθίστε το gel στο διάλυµα µονιµοποίησης για 15 min.
4. Αφαιρέστε το gel και στεγνώστε το µε θερµό 80 °C ρεύµα αέρα στον Κλίβανο επώασης-στεγνώµατος IS 80.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ : Το gel πρέπει να είναι τελείως στεγνό.
III. ΧΡΩΣΗ - ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΣ
1. Βυθίστε το στεγνό και ψυχρό gel στο διάλυµα χρώσης για 5 min.
2. Αποχρωµατίστε µε τρία διαδοχικά λουτρά σε διάλυµα αποχρωµατισµού µέχρι το background να γίνει τελείως άχρωµο και διαυγές.
3. Σκουπίστε το υπερβάλλον υγρό από την επιφάνεια του gel µε απορροφητικό χαρτί και στεγνώστε το gel µε θερµό αέρα 80 °C. Αν
χρειαστεί, καθαρίστε την πίσω (πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό απορροφητικό χαρτί.
- 53 -