HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20

HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 - 2005/03
IV. SCANSIONE
Effettuare la scansione usando un densitometro / scanner con filtro giallo o a 570 nm.
Quando si utilizza uno dei densitometri HYRYS o DVSE, posizionare la frazione A 2
sul segno dei 5 mm della piastra di lettura: lo zero è effettuato, nel
punto più basso, tra le frazioni A 2
e anidrasi carbonica.
NOTA: Per assicurare i risultati più accurati e precisi, attenersi alla seguente procedura:
- Regolare la lunghezza di scansione per includere l’intero quadro elettroforetico (30 mm).
- Assicurarsi che i minimi, su ambedue i lati della frazione A 2
, siano posti ai piedi del picco.
E’ buona prassi leggere i gels colorati senza ritardi. Per consultazioni successive, possono essere conservati in un astuccio protettivo, all’asciutto,
protetti dalla luce e lontani da fonti di calore ed interpretati visivamente entro 3 mesi.
RISULTATI
Controllo Qualità
Si consiglia di includere, in ogni gruppo di campioni processati, un sangue di controllo o un campione di sangue noto contenente emoglobine A, F, C e S.
Valori
La lettura densitometrica degli elettroforegrammi colorati, fornisce le concentrazioni relative (percentuali) delle singole zone proteiche.
I valori normali (media ± 2 DS), utilizzando la metodica HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, sono stati determinati su una popolazione sana di
200 adulti (uomini e donne) :
Emoglobina A ≥ 96,5 %
Emoglobina F < 2,0 % (*)
Emoglobina A 2
≤ 3,5 %
(*) vedi Interferenze e limitazioni
Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire i propri valori normali.
Interpretazioni
1. Anomalie qualitative: Emoglobinopatie
La maggior parte delle emoglobinopatie sono dovute alla sostituzione, per mutazione, di un singolo aminoacido in una dei quattro tipi di catene
polipeptidiche. Il significato clinico della mutazione varia in funzione del tipo di aminoacido e della posizione coinvolti. Nelle malattie clinicamente
significative, è affetta la catena α o la catena ß (talvolta la catena γ).
Più di 200 varietà di emoglobine adulte sono già state descritte. Le prime emoglobine anomale studiate, nonché le più numerose, presentano
un’alterata carica elettrica netta e ciò ne consente una semplice individuazione attraverso l’elettroforesi.
Sono quattro le principali emoglobine anomale che presentano un particolare interesse clinico: S, C, E e D.
Il kit HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, è rivolto alla identificazione preliminare delle emoglobinopatie e delle talassemie. Quando si evidenzia un
quadro anormale, l’identificazione deve essere confermata da un test discriminatorio appropriato (es., elettroforesi su gel di agarosio acido).
Emoglobina S
L’emoglobina S è la più frequente. E’ dovuta alla sostituzione di un acido glutammico (aminoacido acido) della catena ß, con valina (aminoacido
neutro). La sua mobilità elettroforetica è quindi rallentata. Su HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 tamponato in mezzo alcalino, l’emoglobina S migra
fra le frazioni A e A 2
.
Emoglobina C
Un acido glutammico della catena ß è sostituito dalla lisina (aminoacido basico): la sua mobilità è fortemente ridotta. Con la metodica HYDRAGEL
HEMOGLOBIN(E) K20, le emoglobine C, E ed A 2
sono sovrapposte. Quando questa frazione è superiore al 15 % deve essere sospettata la presenza
di emoglobine C ed E.
Emoglobina E
Un acido glutammico della catena ß è sostituito dalla lisina: con la metodica HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, l’emoglobina E migra esattamente
come la C. Diversamente dalla C, non si separa dalla A in tampone acido (HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20). Questa proprietà permette
di differenziare la E e la C.
Emoglobina D
Un acido glutammico della catena ß è sostituito dalla glutammina: su HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, l’emoglobina D migra esattamente come
la S. Diversamente dall’emoglobina S, la D non si separa dalla A in tampone acido (HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20). Questa proprietà
permette di differenziare la S e la D.
2. Anomalie quantitative: Talassemie
Le talassemie costituiscono un gruppo pressoché eterogeneo di affezioni genetiche caratterizzate dalla riduzione del livello di sintesi di uno o più tipi
di catena polipeptidica. Il meccanismo molecolare di questa riduzione non è stato ancora completamente descritto.
Ci sono due tipi di sindromi talassemiche:
Alfa-talassemie
Sono caratterizzate da una ridotta sintesi delle catene α che, quindi, condiziona la sintesi di tutte le emoglobine normali.
L’eccesso di sintesi delle catene ß e γ rispetto alla catena α, induce la formazione di tetrameri senza nessuna catena α:
• Emoglobina Bart = γ 4,
• Emoglobina H = ß 4.
- 33 -