HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20
HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 - Sebia Electrophoresis
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<strong>HYDRAGEL</strong> <strong>HEMOGLOBIN</strong>(E) <strong>K20</strong> - 2005/03<br />
NOTA:<br />
- Per preparare emolisati di soggetti lievemente anemici (Hb di circa 10 g/dL) o gravemente anemici (Hb < 7 g/dL), il volume di globuli rossi<br />
impaccati deve essere incrementato rispettivamente a 15 µl e a 20 µl. L’intensità della colorazione risulterà aumentata, ma le concentrazioni<br />
relative delle singole frazioni non cambieranno.<br />
- L’emolisato non deve essere filtrato o centrifugato.<br />
- La Soluzione Emolizzante SEBIA non ha effetti sulla stabilità dell’emoglobina Bart’s.<br />
PROCEDURA<br />
I. MIGRAZIONE<br />
1. Posizionare il porta applicatore <strong>HYDRAGEL</strong> <strong>K20</strong> su una superficie piana (Fig. 1) ed alzare la cornice porta applicatore (quella con le fessure<br />
numerate).<br />
2. Dispensare 120 µL di acqua distillata o deionizzata sul terzo inferiore del riquadro stampato sul porta applicatore <strong>HYDRAGEL</strong> <strong>K20</strong>.<br />
3. Estrarre il gel <strong>HYDRAGEL</strong> dalla confezione.<br />
4. Eliminare rapidamente l’eccesso di liquido in superficie, tamponando il gel con una carta assorbente sottile<br />
ATTENZIONE : Fate attenzione a non lasciare la carta da filtro troppo a lungo a contatto con il gel per evitarne la disidratazione.<br />
5. Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 2)<br />
6. Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia d’acqua (Fig. 2). Assicurarsi che non siano rimaste intrappolate bolle d’aria. L’acqua deve essere<br />
uniformemente stratificata sotto la lastrina di gel e questa deve essere allineata all’interno del riquadro stampato.<br />
7. Abbassare la cornice porta applicatore fino alla posizione intermedia, con la manopola ruotata in alto.<br />
8. Posizionare un applicatore su di una superficie piana con i numeri dei pozzetti orientati correttamente verso l’alto (Fig. 3).<br />
9. Applicare in ogni pozzetto 10 µL di campione emolizzato. Caricare l’applicatore entro 2 minuti.<br />
- Utilizzare l’applicatore senza alcun ritardo.<br />
- Per un utilizzo successivo (fino ad 8 ore), inserire l’applicatore nella camera umida di conservazione, con i dentini rivolti verso l’alto<br />
(maneggiare il depositore mediante la cornice protettiva in plastica), mantenendo l’intera camera in frigorifero e preparando la lastrina di gel,<br />
sul porta applicatore <strong>HYDRAGEL</strong> <strong>K20</strong>, appena prima dell’uso.<br />
Consultare l’inserto all’interno della confezione della camera umida per ulteriori dettagli.<br />
10. Staccare la cornice protettiva dei dentini dell’applicatore.<br />
11. Inserire l’applicatore sulla cornice mobile in posizione No. 4.<br />
IMPORTANTE: I numeri stampati sull’applicatore devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 4).<br />
12. Abbassare la cornice porta applicatore in modo che l’applicatore entri in contatto con la superficie del gel. NON FORZARE LA CORNICE AD<br />
ABBASSARSI ULTERIORMENTE.<br />
13. Dopo 1 minuto, ruotare la manopola per sollevare l’applicatore, rimuovere l’applicatore ed eliminarlo.<br />
14. Mettere il gel in un’appropriata camera elettroforetica, in accordo alla polarità indicata sul gel. Quando è utilizzata la camera SEBIA <strong>K20</strong>,<br />
posizionare il gel sul ponte in modo che la superficie del gel sia rivolta verso il basso ; il gel deve essere immerso per circa 1 cm nel tampone<br />
su entrambi i lati.<br />
Per ulteriori dettagli consultare l’inserto contenuto nella camera <strong>K20</strong>.<br />
15. Collegare la camera all’alimentatore.<br />
CONDIZIONI DI MIGRAZIONE SEBIA <strong>K20</strong> Volume di tampone per compartimento 150 mL Volume totale di tampone 300 mL Tempo di migrazione 15 minuti Voltaggio costante 165 V<br />
| Amperaggio iniziale (un gel) | 7 ± 2 mA |<br />
16. Dopo la migrazione, scollegare la camera e rimuovere la lastrina di gel.<br />
II. FISSAZIONE<br />
Trattare i gels con una delle seguenti procedure.<br />
Fissazione con aria calda (raccomandata solo con essiccatore-incubatore SEBIA IS 80):<br />
Essiccare completamente il gel nell’incubatore-essiccatore ad 80 °C (per un minimo di 10 min.).<br />
Fissazione con soluzione fissativa<br />
1. Posizionare il gel nel telaio porta gel (fornito con il Kit Accessori <strong>HYDRAGEL</strong> <strong>K20</strong> SEBIA) per i trattamenti successivi.<br />
2. Riempire una vaschetta (fornita con il Kit Accessori <strong>HYDRAGEL</strong> <strong>K20</strong> SEBIA) con 150 mL di soluzione fissativa.<br />
3. Immergere verticalmente il gel nella soluzione fissativa per 15 minuti.<br />
4. Rimuovere il gel ed essiccarlo con un flusso di aria calda ad 80 °C nell’incubatore-essiccatore IS 80.<br />
IMPORTANTE: Il gel deve essere perfettamente essiccato.<br />
III. COLORAZIONE - DECOLORAZIONE<br />
1. Dopo l’essiccazione immergere verticalmente il gel asciugato e raffreddato nella soluzione colorante per 5 minuti.<br />
2. Decolorare in tre successivi bagni di soluzione decolorante fino a quando il gel è privo di colorazione di fondo.<br />
3. Rimuovere l’eccesso di liquido sulla superficie del gel con una cartina assorbente ed essiccare il gel con aria calda ad 80 °C. Se necessario<br />
pulire il retro della lastrina (faccia di supporto) con carta morbida inumidita.<br />
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