HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20

HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 - 2005/03
UTILIZZO
Il kit HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 è stato progettato per la separazione delle emoglobine normali (A e A 2
) e per la rivelazione delle maggiori
varianti dell’emoglobina: S o D e C o E mediante elettroforesi su gel di agarosio tamponato in mezzo alcalino. Gli elettroforegrammi risultanti sono
interpretati visivamente per la valutazione dei quadri anormali. La densitometria trova applicazione pratica nell’aiuto all’interpretazione dei quadri
elettroforetici, fornendo la quantificazione relativa delle singole frazioni. Per confermare l’identificazione delle emoglobine varianti, in particolare per
differenziare l’emoglobina S dalla D e la E dalla C, dovrebbe essere eseguita l’elettroforesi su gel acido, utilizzando la metodica HYDRAGEL ACID(E)
HEMOGLOBIN(E) K20.
Ogni gel di agarosio del kit HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20, permette di processare 7 campioni.
Per uso diagnostico in vitro.
PRINCIPIO DEL METODO
L’emoglobina è una molecola complessa composta da due coppie di catene polipeptidiche. Ogni catena è collegata all’eme, un nucleo tetrapirrolico
(porfirina) chelato ad un atomo di ferro. L’eme è comune a tutte le emoglobine e alle loro varianti. Il tipo di emoglobina è determinato dalla parte
proteica chiamata globina. Le catene polipeptidiche α, ß, δ e γ costituiscono le emoglobine umane normali:
• emoglobina A....................... = α 2 ß 2
• emoglobina A 2
..................... = α 2 δ 2
• emoglobina fetale F............. = α 2 γ 2
La catena α è comune a queste tre emoglobine.
La struttura spaziale e le altre proprietà molecolari dell’emoglobina (come quelle di tutte le proteine), dipendono dalla natura e dalla sequenza degli
aminoacidi che formano le catene. La sostituzione di un aminoacido per mutazione è responsabile della formazione di emoglobine varianti che hanno
differenti cariche superficiali e quindi diversa mobilità elettroforetica, in funzione anche del pH e della forza ionica del tampone.
Le risultanti anomalie qualitative (o strutturali) sono chiamate emoglobinopatie. La diminuzione di sintesi di una delle catene emoglobiniche, comporta
anormalità di tipo quantitativo (o di regolazione), denominate talassemie.
L’analisi è eseguita con emolisato di globuli rossi lavati. Le emoglobine sono separate elettroforeticamente su gels alcalini e le frazioni sono colorate
con una soluzione di amidoschwarz. I gels essiccati sono pronti per l’interpretazione.
REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEL KIT HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20
COMPONENTI PN 3010 Gels di Agarosio (pronti all’uso) 10 gels Tampone tris-barbital (soluzione concentrata) 3 flaconi da 75 mL Diluente per la soluzione colorante (soluzione concentrata) 1 flacone da 60 mL Colorante Amidoschwarz (soluzione concentrata) 1 flacone da 20 mL Soluzione decolorante (soluzione concentrata) 1 flacone da 100 mL Soluzione emolizzante (pronta all’uso) 1 flacone da 20 mL Applicatori a 7 dentini (pronti all’uso) 1 confezione da 10
| Cartine da filtro – Sottili | 1 confezione da 10 |
PER RISULTATI OTTIMALI
I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit.
LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO.
1. GELS DI AGAROSIO
Preparazione
I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gels di agarosio contiene: agarosio, 0.8 g/dL ; tampone alcalino pH 8.5 ± 0.1 ; additivi, non rischiosi alle
concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi.
Utilizzo
Mezzo di supporto per elettroforesi delle emoglobine.
Conservazione, stabilità e segni di deterioramento
Conservare i gels orizzontalmente, nella confezione originale protettiva, a temperatura ambiente (15 - 30 °C) o in frigorifero (2 - 8 °C). I gels sono
stabili fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. (La freccia sulla scatola del kit deve essere rivolta verso l’alto).
Evitare, durante la conservazione, significative variazioni di temperatura (es., non conservare in prossimità di finestre o di sorgenti di calore).
NON CONGELARE.
Non utilizzare il gel quando:
(i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe conseguenze del
congelamento del gel),
(ii) è presente muffa o flora batterica,
(iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni
di conservazione improprie).
2. TAMPONE TRIS-BARBITAL
Preparazione
Ogni flacone di soluzione tampone concentrata deve essere diluito ad 1 litro con acqua distillata o deionizzata. Dopo la diluizione, la soluzione di
utilizzo contiene: tris-barbital pH 9.2 ± 0.3 ; sodio azide.
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