HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20

HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 - 2005/03
UTILISATION
Le kit HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 permet la séparation des hémoglobines normales (A et A 2
) et la détection des principales hémoglobines
anormales : S ou D et C ou E, par électrophorèse sur gel d’agarose. L’analyse est réalisée sur l’hémolysat de globules rouges lavés. Les hémoglobines
sont séparées en tampon alcalin (pH 8,5), fixées par la chaleur ou en milieu alcool / acide et colorées par une solution d’amidoschwarz. L’excès de
colorant est éliminé en milieu acide.
Le gel est alors prêt pour l’identification des différentes hémoglobines. L’analyse qualitative des hémoglobines normales et anormales peut être
réalisée. La densitométrie donne une quantification relative précise de chaque zone individualisée dont les hémoglobines présentant un intérêt
particulier, telles que l’hémoglobine A 2
pour le diagnostic des ß thalassémies. L’électrophorèse sur gel acide du kit HYDRAGEL ACID(E)
HEMOGLOBIN(E) K20, permet de confirmer l’identification des variants de l’hémoglobine, en particulier, de différencier l’hémoglobine S de
l’hémoglobine D et l’hémoglobine E de l’hémoglobine C.
Chaque gel d’agarose contenu dans le kit HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 est prévu pour l’analyse de 7 échantillons.
À usage in vitro exclusivement.
PRINCIPE DU TEST
L’hémoglobine est une molécule complexe composée de quatre chaînes polypeptidiques, identiques deux à deux, chaque chaîne étant liée à l’hème,
noyau tétrapyrrolique (porphyrine) lié à un atome de fer. L’hème est commun à toutes les hémoglobines. La partie protéique responsable du type
d’hémoglobine est appelée globine. On connaît principalement les chaînes polypeptidiques α, ß, δ et γ. Chez l'homme, on peut trouver les
hémoglobines normales suivantes :
• hémoglobine A ................................... = α 2 ß 2
• hémoglobine A 2
.................................. = α 2 δ 2
• hémoglobine fœtale F ........................ = α 2 γ 2
La chaîne α est commune à ces trois hémoglobines.
La structure spatiale de l’hémoglobine (comme celle de toutes les protéines) dépend de la nature et de la séquence des acides aminés constituant
les chaînes. Les liaisons qui se forment entre les différents acides aminés sont responsables de la forme de la molécule, de sa stabilité et de ses
propriétés. Placées dans un champ électrique, les hémoglobines se déplacent en fonction de leur charge, de la taille de la molécule, de la force
ionique, du pH du tampon et de la nature du support. Les variants de l’hémoglobine sont dus à des mutations de certains acides aminés entraînant
des charges de surface différentes et donc des mobilités différentes en électrophorèse.
Les anomalies de l’hémoglobine sont de deux sortes :
• anomalies qualitatives ou de structure constituant le groupe des hémoglobinopathies ;
• anomalies quantitatives ou de régulation constituant le groupe des thalassémies.
RÉACTIFS FOURNIS DANS LE KIT HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20
COMPOSANTS RÉF. N° 3010 Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels Tampon Tris-Barbital (solution concentrée) 3 fl. de 75 mL Diluant colorant (solution concentrée) 1 fl. de 60 mL Colorant amidoschwarz (solution concentrée) 1 fl. de 20 mL Décolorant (solution concentrée) 1 fl. de 100 mL Solution hémolysante (prête à l’emploi) 1 fl. de 20 mL Applicateurs 7 dents (prêts à l’emploi) 1 boîte de 10
| Papiers-filtres fins | 1 sachet de 10 |
POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS
Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice.
LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION.
1. GELS D’AGAROSE
Préparation
Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 8 g/L ; tampon alcalin, pH 8,5 ± 0,1 ; composants sans danger aux
concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales.
Utilisation
Support pour l’électrophorèse des hémoglobines.
Conservation, stabilité et signes de détérioration
Les gels doivent être conservés à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date
d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet du gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur
le devant du kit doit être pointée vers le haut). Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. Éviter toute variation
brutale de température.
NE PAS CONGELER.
Éliminer le gel dans les cas suivants :
(i) apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ;
(ii) apparition de bactéries ou de moisissures ;
(iii) présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation).
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NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français