HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20

HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 - 2005/03
VERWENDUNGSZWECK
Der HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 Kit dient zur Abtrennung der normalen Hämoglobine (A und A 2
) und zum Nachweis der
Haupthämoglobinvarianten: S oder D und C oder E, durch Elektrophorese auf alkalischen Agarosegelen. Die erhaltenen Elektropherogramme werden
visuell auf abnormale Muster untersucht. Die Densitometrie kann bei der Interpretation als Hilfe dienen, weil mit Ihr relative Konzentrationen
individueller Banden gemessen werden können. Eine Elektrophorese auf sauren Gelen, z.B. mit der HYDRAGEL ACID(E) HEMOGLOBIN(E) K20
Prozedur, sollte zur Bestätigung der identifizierten Hämoglobinvarianten folgen, insbesondere um die Hämoglobine S von D und E von C zu
unterscheiden.
Jedes Agarosegel im HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 Kit ist für sieben Proben bestimmt.
Nur für den diagnostischen in vitro Gebrauch.
TESTPRINZIP
Hämoglobin ist ein komplexes Molekül und besteht aus zwei Paaren von Polypeptidketten. Jede Kette ist mit der Häm-Gruppe, einem Tetrapyrrolkern
(Porphyrin,) der als Chelat ein Eisenatom bindet, verbunden. Der Häm-Teil ist in allen Hämoglobinen und ihren Varianten gleich. Der Typ des
Hämoglobins wird durch den Proteinteil, der Globin genannt wird, bestimmt. Die Polypeptidketten α, ß, δ und γ bilden die normalen Hämoglobine:
• Hämoglobin A = α 2 ß 2
• Hämoglobin A 2
= α 2 δ 2
• fötales Hämoglobin F = α 2 γ 2
Die α-Kette ist bei diesen drei Hämoglobinen gleich.
Die räumliche Struktur des Hämoglobins und andere molekulare Eigenschaften (wie bei allen Proteinen) hängt von der Natur und Sequenz der
Aminosäuren ab, die die Ketten bilden. Das Ersetzen von Aminosäuren durch Mutationen, ist für die Bildung der Hämoglobinvarianten verantwortlich.
Diese haben unterschiedliche Oberflächenladungen und dadurch bei Elektrophoresen eine unterschiedliche Beweglichkeit, die ebenso vom pH-Wert
und der Ionenstärke des Puffers abhängt.
Die resultierenden qualitativen (oder strukturellen ) Abnormitäten werden Hämoglobinopathien genannt. Die verminderte Synthese von einer der
Hämoglobinketten führt zu quantitativen (Regulations-) Abnormitäten, die Thalassämien genannt werden.
Der Assay wird mit gewaschenen hämolysierten Roten Blutzellen (Erythrozyten) durchgeführt. Die Hämoglobine werden auf alkalischen Gelen
elektrophoretisch getrennt und die Fraktionen durch Färbung mit Amidoschwarz sichtbar gemacht. Die getrockneten Gele können direkt interpretiert
werden.
REAGENZIEN UND MITGELIEFERTE MATERIALIEN IM HYDRAGEL HEMOGLOBIN(E) K20 KIT
ARTIKEL ART.-NR. 3010 Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele Tris-Barbital Puffer (Stammlösung) 3 Fläschchen, jedes 75 mL Verdünnungslösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 60 mL Amidoschwarz Färbelösung (Stammlösung) 1 Fläschchen, 20 mL Entfärbelösung (Stammlösung) 1 Fläschchen, 100 mL Hämolyse-Lösung (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 20 mL Applikatoren 7 Zähne (gebrauchsfertig) 1 Pack von 10
| Filterpapier - Dünn | 1 Pack von 10 |
FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE
Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden.
BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN.
1. AGAROSEGELE
Vorbereitung
Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält: Agarose, 0,8 g/dl ; alkalischen Puffer pH 8,5 ± 0,1 ; Zusätze, ungefährlich bei den eingesetzten
Konzentrationen, nötig für die optimale Durchführung.
Gebrauch
Hilfsmittel für die Elektrophorese der Hämoglobine.
Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall
Die Gele horizontal in der Originalverpackung bei Raumtemperatur (15 - 30 °C) oder gekühlt (2 - 8 °C) lagern. (Die Pfeile auf der Vorderseite des Kits
müssen nach oben zeigen). Offensichtliche Temperaturschwankungen vermeiden. (z.B. nicht in der Nähe eines Fensters oder einer Hitzequelle
lagern). Die Gele sind bis zum Ablauf des Verfallsdatums auf der Kitschachtel oder auf der Gelverpackung stabil.
NICHT EINFRIEREN.
Das Gel verwerfen, wenn:
(i) sich Kristalle oder Präzipitate auf der Geloberfläche bilden oder die Geltextur sehr weich wird (dies alles resultiert vom Einfrieren des Gels) ;
(ii) bakterielles - oder Pilzwachstum erscheint,
(iii) sich eine abnormale Flüssigkeitsmenge in der Gelschachtel befindet (Absonderungen von Puffer aus dem Gel durch nicht korrekte
Lagerbedingungen).
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SEBIA ARBEITSANLEITUNG - Deutsch