Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Erreichen des Reaktionsgleichgewichtes oder Produktinhibierung zur Folge haben, ausgeschlossen
werden. Messungen mit höheren BAL-Konzentrationen haben gezeigt, dass die
Reaktion sogar bis zu einem Substratverbrauch von ca. 30% verfolgt werden kann, ohne dass
eine signifikante Änderung in der Reaktionsrate zu beobachten ist (Abb. 42).
Abb. 42: Gemessene Aktivitäten in U/mg bei verschiedenen BAL-Konzentrationen. Die ungefähre
Intensitätsabnahme innerhalb von 90 sek (Δ cps), sowie der mittlere Umsatz von DMBA in dieser Zeit sind
angegeben. 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 20 vol% DMSO. Halbmikroküvette
(SD: 4x10 mm), „Front Face“, Anregung: 350 nm, Emission: 460 nm, Spaltbreiten: ± 1,3 nm, T=25 °C, n = 3.
3.9.2 Diskontinuierliche Aktivitätstests (BAL)
Für die Ermittlung der Ligase- und Lyaseaktivitäten der BAL und ihrer Varianten wurden
auch diskontinuierliche Aktivitätstests genutzt. Ein Nachteil dieser Methode ist, dass der
Umsatz nicht direkt verfolgt werden kann und so z.B. Enzymkonzentrationen nicht direkt
angepasst werden können. Bei unbekannten Enzymkonzentrationen sind diese Tests also
ungeeignet. Des Weiteren ist eine relativ große Probenzahl zu bewältigen, da für jeden
Messzeitpunkt eine eigene Probe ausgewertet werden muss. Sind die Bedingungen, wie
Enzymkonzentration, Messzeitraum, Probenverdünnung usw. aber erstmal ausgelotet, bieten
diskontinuierliche Test mit der geeigneten Analytik den Vorteil, dass jede gewünschte
Reaktion unter variablen Bedingungen vermessen werden kann.
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