Helmholtz-Gemeinschaft
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
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Material & Methoden<br />
Mit 4 mM DMBA wird eine Intensität von fast 200.000 cps erreicht, dies entspricht nur etwa<br />
1/10 des maximalen Messbereichs des Geräts (2x10 6 cps), durch die Wahl größerer<br />
Spaltbreiten sollte das gemessene Signal erhöht werden. Spaltbreiten von ± 1,3-1,5 nm<br />
scheinen am besten geeignet für die Messung von DMBA zu sein (Abb. 40), hier liegt das<br />
Emissionsmaximum zwischen 8x10 5 und 1,5x10 6 cps. Bei Betrachtung des Emissionsspektrum<br />
fällt auf, dass das tatsächliche Emissionsmaximum eher bei 460 nm als bei 470 nm<br />
liegt, weshalb die Emission in den folgenden Messungen bei 460 nm detektiert wurde.<br />
6x10 6<br />
5x10 6<br />
1,0 nm<br />
1,3 nm<br />
1,5 nm<br />
2,0 nm<br />
Intensität (cps)<br />
4x10 6<br />
3x10 6<br />
2x10 6<br />
1x10 6<br />
0<br />
400 420 440 460 480 500 520 540<br />
Wellenlänge (nm)<br />
Abb. 40: Emissionsspektrum bei verschiedenen Spaltbreiten mit 4 mM DMBA. 50 mM TEA-Puffer, pH 8;<br />
2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 20 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), Anregung: 350 nm,<br />
Emission: 400-550 nm, Spaltbreiten: ± 1-2 nm, T=25 °C.<br />
Nachdem die Bedingungen für den Fluoreszenztest am Fluorolog 3-22 festgelegt waren,<br />
wurde eine Kalibrierung durchgeführt. DMBA-Konzentrationen von 0-4 mM wurden dreimal<br />
vermessen und eine Kalibrierkurve erstellt (Abb. 35).<br />
Intensität (cps)<br />
1x10 6<br />
8x10 5<br />
6x10 5<br />
4x10 5<br />
2x10 5<br />
0<br />
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0<br />
DMBA (mM)<br />
DMBA (mM)<br />
4,0<br />
3,5<br />
3,0<br />
2,5<br />
2,0<br />
1,5<br />
1,0<br />
0,5<br />
<br />
<br />
0,0<br />
0 2x10 5 4x10 5 6x10 5 8x10 5 1x10 6<br />
Intensität (cps)<br />
Abb. 41: Kalibrierung zur Quantifizierung der DMBA-Konzentration mit 0-4 mM DMBA. 50 mM TEA-<br />
Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 20 vol% DMSO, Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), „Front<br />
Face“, Anregung: 350 nm, Emission: 460 nm, Spaltbreiten: ± 1,3 nm T=25 °C. Links: gemessene Intensität<br />
abhängig von der DMBA-Konzentration, n = 3. Rechts: DMBA-Konzentration in Abhängigkeit von der<br />
gemessenen Intensität.. Die Anpassung der Daten erfolgte Exponential (1. Ordnung).<br />
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