Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Intensität (cps)
0,1 mM DMBA
9,0x10 4 0,5 mM DMBA
1,0 mM DMBA
2,0 mM DMBA
7,5x10 4
3,0 mM DMBA
4,0 mM DMBA
6,0x10 4
4,5x10 4
3,0x10 4
1,5x10 4
Intensität (cps)
0,1 mM DMBA
2,0x10 5 0,5 mM DMBA
1,0 mM DMBA
2,0 mM DMBA
3,0 mM DMBA
1,5x10 5
4,0 mM DMBA
1,0x10 5
5,0x10 4
0,0
300 320 340 360 380 400
Wellenlänge (nm)
0,0
300 320 340 360 380 400
Wellenlänge (nm)
Abb. 38: Anregungsspektrum 0,1-4 mM DMBA mit „Right Angle“ (links) und „Front Face“ (rechts).
50 mM TEA-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 20 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm),
Anregung: 300-400 nm, Emission: 470 nm, Spaltbreiten: ± 1 nm, T=25 °C.
Abb. 39 verdeutlicht die Verbesserung für die Aktivitätsmessungen. Bereits ein Vergleich der
rechtwinkligen Messungen mit der leistungsstärkeren Lampe im Fluorolog 3-22 gegenüber
dem LS50-B zeigt, dass die Steigung der Fluoreszenzintensität länger linear verläuft. Wird
nun auch noch die Front Face Option für die Messung genutzt, ist zum einen die
Quantenausbeute erhöht, sowie eine erhöhte Steigung bis 3 mM DMBA erreicht. So ist mit
dem Fluorolog 3-22 eine Messung der Aktivität mit 3 mM DMBA möglich, was im
Substratsättigungsbereich der BAL liegt und somit V max -Messungen ermöglicht.
Front Face
Right Angle
LS-50B
2,0x10 5 2000
Intensität (cps)
1,5x10 5
1,0x10 5
5,0x10 4
1500
1000
500
Intensität
0,0
0 1 2 3 4
DMBA (mM)
0
Abb. 39: Vergleich der Fluoreszenz bei 0-4 mM DMBA mit „Right Angle“, „Front Face“ gemessen am
Fluorolog 3-22 und am LS-50B. Fluorolog 3-22: 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP;
20 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), Spaltbreiten: ± 1 nm, T=25 °C. „Right Angle“ Anregung:
360 nm, „Front Face“ Anregung: 350 nm, Emission: 470 nm. LS-50B: 50 mM Kpi-Puffer, pH 8; 2,5 mM
MgSO 4 ; 0,1mM ThDP; 10 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), Anregung: 360 nm, Emission: 470
nm, Spaltbreiten: ± 12,5 nm, T=25 °C. Zur besseren Übersicht, wurden die Messpunkte miteinander verbunden.
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