Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
1000
2,5 nm
5 nm
7,5 nm
12,5 nm
400
350
2,5 nm
5,0 nm
7,5 nm
12,5 nm
800
300
Intensität
600
400
200
Intensität
250
200
150
100
0
300 320 340 360 380 400
Wellenlänge (nm)
50
420 440 460 480 500 520
Wellenlänge (nm)
Abb. 32: Vergleich Anregungs- (links) und Emissionsspektrum (rechts) bei verschiedenen Anregungsspalten
mit 3 mM DMBA. 50 mM Kpi-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,1 mM ThDP; 20 vol% DMSO.
Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), T=25 °C. links: Anregung: 300-400 nm, Emission: 470 nm, Anregungsspalt:
± 2,5-12,5 nm, Emissionsspalt: ± 12,5 nm. Rechts: Anregung: 360 nm, Emission: 420-520 nm, Anregungsspalt:
± 2,5-12,5 nm, Emissionsspalt: ± 7,5 nm.
Aus Abb. 32 wird deutlich, dass die Variation des Anregungsspaltes zwar nicht zu einer
Verschiebung des Anregungs- oder Emissionsspektrums führt, aber die Intensität der
Fluoreszenz bei kleineren Anregungsspalten tatsächlich zunimmt. Bei einem Emissionsspalt
von ± 12,5 nm (Abb. 32, links) ist das Signal bereits bei einem Anregungsspalt von ± 7,5 nm
außerhalb des messbaren Bereiches. Um also bei kleineren Anregungsspaltbreiten messen zu
können, muss auch der Emissionsspalt verringert werden (Abb. 32, rechts). Hier wird
besonders deutlich, wie groß der Einfluss durch die Verringerung des Anregungsspaltes auf
die Fluoreszenzintensität ist. Während das Maximum der Emission bei einem Anregungsspalt
von ± 12,5 nm bei etwa 300 liegt, kann mit einem Anregungsspalt von ± 2,5 nm eine
Intensität von etwa 390 gemessen werden.
1000
800
2,5 nm
5,0 nm
7,5 nm
10,0 nm
12,5 nm
Intensität
600
400
200
0
300 320 340 360 380 400
Wellenlänge (nm)
Abb. 33: Anregungsspektrum von DMBA bei verschiedenen Emissionsspalten mit 0,5 mM DMBA. 50 mM
Kpi-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,1 mM ThDP; 20 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm),
Anregung: 300-400 nm, Emission: 470 nm, Anregungsspalt: ± 2,5 nm, Emissionsspalt: ± 2,5-12,5 nm T=25 °C
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