Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Absorptions- und Anregungsspektren zeigt, dass die Absorption in diesen Bereichen wieder
abnimmt (Abb. 30).
Absorption
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,5 mM DMBA Absorption
0,5 mM DMBA Anregung
3,0 mM DMBA Anregung
350
300
250
200
150
100
50
Intensität
0,0
0
300 320 340 360 380 400
Wellenlänge (nm)
Abb. 30: Überlagerung Absorptions- und Anregungsspektrum. 50 mM Kpi-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ;
0,1 mM ThDP, 20 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), Anregung: 300-400 nm, Emission: 470 nm,
Anregungsspalt: ± 5 nm, Emissionsspalt: ± 7,5 nm T=25 °C
Die beobachteten Absorptionsprozesse legen nahe, dass die zu Beginn gewählten Spaltbreiten
von ± 12,5 nm nicht unbedingt optimal sind, um eine maximale Quantenausbeute zu erzielen.
Ein Großteil des auf die Probe treffenden Lichtes, wird absorbiert und führt zu dem
beschriebenen inneren Filter Effekt. Abb. 31 soll dies schematisch verdeutlichen.
Abb. 31: Verwendung kleiner Spaltbreiten (links) und großer Spaltbreiten (rechts) im Anregungslicht. Bei
kleinen Anregungsspaltbreiten, wird die Lichtmenge auf die Probe verringert. In diesem Bereich wird aber nur
wenig Licht absorbiert. Bei größeren Spaltbreiten, wird die Lichtmenge auf die Probe vergrößert, ein Großteil
des Lichtes wird aber schon früh absorbiert. Licht im längerwelligen Bereich führt nur zu einer geringen
Anregung.
Im Folgenden sollte überprüft werden, welchen Einfluss die Spaltbreiten tatsächlich auf die
Fluoreszenzintensität von DMBA haben. Hierfür wurden Anregungs- und Emissionsspektren
von 0-3 mM DMBA mit 20 vol% DMSO bei verschiedenen Spaltbreiten vermessen.
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