Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
1000
10x4 mm
4x10 mm
10x2 mm
2 x10 mm
800
Intensität
600
400
200
0
0 1 2 3 4
DMBA (mM)
Abb. 27: Übersicht Fluoreszenz von DMBA bei verschiedenen Küvettengeometrien. 50 mM Kpi-Puffer,
pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,1 mM ThDP; 10 vol% DMSO. Halbmikroküvette und Mikroküvette (die SD im
Anregungslicht ist zuerst genannt), Anregung: 360 nm, Emission: 470 nm, Spaltbreiten: ± 12,5 nm, T=25 °C.
Zur besseren Übersicht wurden die Messpunkte miteinander verbunden.
Mit SD: 10 mm in der Anregung ist das Fluoreszenzsignal mit der Halbmikroküvette
intensiver als mit der Mikroküvette, dies ist vermutlich durch die unterschiedliche Molekülzahl
im Strahlengang zu begründen. Ansonsten verlaufen die Kurven fast parallel zueinander.
Trotz der geringeren Molmenge ist die Intensität in der Mikroküvette mit SD = 2x10 mm bis
0,6 mM DMBA identisch mit der Halbmikroküvette mit SD: 10x4 mm. Oberhalb dieser
Konzentration ist das Fluoreszenzsignal mit der Mikroküvette sogar intensiver. Im Vergleich
zur Messung mit der Halbmikroküvette mit SD: 4x10 mm ist die Intensität mit der
Mikroküvette bei der SD = 2x10 mm bis 2 mM DMBA geringer, was wiederum durch die
geringere absolute Molekülzahl im Strahlengang zu erklären ist. Allerdings ist die Steigung
der Intensität oberhalb von 1 mM DMBA mit der Mikroküvette (2x10 mm) höher als mit der
Halbmikroküvette (4x10 mm). Bei 2 mM DMBA ist die Fluoreszenz in beiden Küvetten
vergleichbar, mit 4 mM ist das Fluoreszenzsignal mit der Mikroküvette sogar intensiver. Der
positive Einfluss einer geringeren SD bei steigender DMBA-Konzentration im
Anregungslicht lässt sich durch Absorptionsprozesse erklären.
Bei Erhöhung der Fluorophorkonzentration wird auch die optische Dichte erhöht, dies hat
eine erhöhte Absorption des Lichtes zu Folge (Lambert-Beersches Gesetz). Je länger der
Weg, den das Licht durch die Probe durchschreiten muss, desto geringer wird die Lichtintensität
und damit auch die Anregung der Fluorophore (innerer Filtereffekt). Ist der Lichtweg
kürzer, ist auch die Absorption geringer, also die Lichtintensität durchgängig höher und
folglich ist die Fluoreszenzintensität höher (Abb. 28).
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