Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Zu je 1800 µl Reaktionspuffer pH 8 wurden 200 µl Substratlösung gegeben (1-40 mM). Je
1 ml der DMBA Lösungen wurde in einer Halbmikroküvette und 700 µl in einer Mikroküvette
vermessen (Abb. 26).
1000
10x4 mm
4x10 mm
1000
10x2 mm
2x10 mm
800
800
Intensität
600
400
Intensität
600
400
200
200
0
0 1 2 3 4
DMBA (mM)
0
0 1 2 3 4
DMBA (mM)
Abb. 26: Fluoreszenz von DMBA bei verschiedenen Küvettengeometrien. Links: Halbmikroküvette und
rechts: Mikroküvette (die SD im Anregungslicht ist zuerst genannt). 50 mM Kpi-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ;
0,1 mM ThDP; 10 vol% DMSO. Anregung: 360 nm, Emission: 470 nm, Spaltbreiten: ± 12,5 nm, T=25 °C.
Bereits bei der Messung mit der Halbmikroküvette ist sofort erkennbar, dass die Orientierung
der Küvette zum Anregungslicht einen entscheidenden Unterschied im Fluoreszenzsignal
ausmacht. Bis etwa 0,3-0,4 mM DMBA ist das Fluoreszenzsignal fast identisch, aber oberhalb
dieser Konzentration kann eine höhere Intensitätszunahme mit SD: 4x10 mm erreicht werden,
auch oberhalb von 1 mM DMBA ist noch eine Intensitätszunahme zu beobachten. Messungen
mit der Mikroküvette zeigen ein ähnliches Bild, mit SD: 10x2 mm ist das Fluoreszenzsignal
relativ gering und eine Sättigung ist schnell erreicht. Durch die Positionierung der geringeren
SD = 2 mm im Anregungslicht, kann eine entscheidend höhere Intensitätszunahme erreicht
werden. Ein Vergleich der Messungen miteinander (Abb. 27) verdeutlicht den Einfluss der
Schichtdicken auf die von der DMBA-Konzentration abhängige Steigung der Fluoreszenzintensität.
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