Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Küvette wurde, wie vom Techniker (Perkin Elmer) angegeben, mit der Schichtdicke von
10 mm im Anregungslicht positioniert. Die Fluoreszenz wird typischerweise in einem Winkel
von 90° zum Anregungslicht gemessen, um eine Verfälschung des Messsignals durch den
Anregungsstrahl zu vermeiden. Dies ist möglich, da Fluorophore in alle Richtungen
emittieren (Abb. 20). Die Intensität der Fluoreszenz wird beim LS-50B in relativen Einheiten
von 0-1000 angegeben, gemessen wurde mit der größt möglichen Spaltbreite von ± 12,5 nm.
500
400
Intensität
300
200
100
0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0
DMBA (mM)
Abb. 22: Fluoreszenz von 0,1-3 mM DMBA. 50 mM Kpi-Puffer, pH 8, 2,5 mM MgSO 4 , 0,1 mM ThDP, 30%
DMSO, Halbmikroküvette (SD: 10x4 mm), Anregung: 360 nm, Emission: 470 nm, Spaltbreiten: ± 12,5 nm,
T=25 °C.
Bis 1 mM DMBA ist eine Zunahme der Fluoreszenz zu beobachten, oberhalb von 1 mM
stagniert das Fluoreszenzsignal jedoch. Unter den gewählten Bedingungen ist eine Messung
der Aktivität bei DMBA-Konzentrationen oberhalb von 1 mM DMBA also nicht mehr
möglich. Wie bereits erwähnt, können Kosolventien, wie DMSO oder der pH-Wert einen
Einfluss auf die Fluoreszenzeigenschaften eines Stoffes haben. Dies sollte für DMBA
überprüft werden. Zum Vergleich wurden je 800 µl Reaktionspuffer, pH 6,5 oder pH 8 mit
200 µl Substratlösung (0,5-15 mM DMBA in DMSO) vermischt auf 25 °C temperiert und die
Fluoreszenzintensität gemessen.
Wie in Abb. 23 gezeigt, ist die gemessene Fluoreszenzintensität in Gegenwart von 30 vol%
DMSO höher als mit 20 vol% DMSO. In beiden Fällen ist oberhalb von 1 mM DMBA eine
Sättigung der Fluoreszenz zu beobachten. Bei den weit auseinander liegenden pH-Werten (pH
6,5 und pH 8) kann aber kein entscheidender Unterschied in der Fluoreszenz festgestellt
werden.
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