Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Fläche (mAu)
7000
6000
5000
4000
3000
2000
1000
R 2 = 0,99
y = 7275x
0
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
4-Chlorbenzaldehyd (mM)
Fläche (mAu)
8000
7000
6000
5000
4000
3000
2000
R
1000
2 = 0,997
y = 7921,4x
0
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
4,4´-Dichlorbenzoin (mM)
Fläche (mAu)
7000
6000
5000
4000
3000
2000
1000
R 2 = 0,997
y = 3489x
0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
Fläche (mAu)
7000
6000
5000
4000
3000
2000
1000
R 2 = 0,998
y = 3322,9x
0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
3,5-Dimethoxybenzaldehyd (mM)
3,3´,5,5´-Tetramethoxybenzoin (mM)
Abb. 16: Kalibriergeraden für verschiedene Benzaldehyd- und Benzoin-Derivate. Die Kalibrierungen
wurden mit den entsprechenden HPLC-Methoden (Tabelle 6) mit Acetonitril als Laufmittel ausgeführt.
3.8.2 Chirale-Analytik
Säule: Chiralcel OD-H, 4,6 x 250 mm, 5 µm
Laufmittel: 90:10 (v/v) n-Hexan : Isopropanol
Methode: 0,75 ml/min Fluss, Detektion bei 250 nm, 34 bar
Retentionszeiten: Benzaldehyd = 8,7 min; (S)-Benzoin = 19,7 min; (R)-Benzoin = 28,7 min
Zur Überprüfung der Stereoselektivität der BAL sowie der Varianten HisBALΔ und
BALΔHis wurden 0,1 mg/ml Enzym mit 20 mM Benzaldehyd (50 mM TEA Puffer, pH 8 mit
2,5 mM MgSO 4, 0,5 mM ThDP, 30% DMSO) versetzt und für 1 h bei 25 °C inkubiert.
Anschließend gründlich 1:2 (v/v) mit n-Hexan gemischt und 1 min bei 13.000 Upm
zentrifugiert. Das in die n-Hexan Phase übergetretene Benzoin wurde anschließend, wie oben
angegeben, auf seine Enantiomerenreinheit hin untersucht. Der Enantiomerenüberschuss
(enatiomeric excess, ee) wurde über folgenden Zusammenhang berechnet:
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