Helmholtz-Gemeinschaft
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
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Material & Methoden<br />
mit Si(CH 3 )-Gruppen umgesetzt werden. So sollen ungewollte Wechselwirkungen der zu<br />
trennenden Substanzen mit der polaren Oberfläche der Silica-Partikel (Si-OH-Gruppen), vor<br />
allem bei neutralen und alkalischen Puffern, vermieden werden. Bei chiralen<br />
Chromatographiesäulen werden die Partikel mit enantiomerenreinen Substanzen besetzt.<br />
Diese bilden mit dem zu analysierenden Enatiomeren unterschiedlich starke diastereomere<br />
Wechselwirkungen aus, wodurch es zu unterschiedlichen Retentionszeiten kommt. Beim<br />
Austritt aus der Säule werden die chemischen Komponenten mittels einer Fotodiodenzelle<br />
(photo diode array detector, DAD) detektiert.<br />
3.8.1 Reversed-phase HPLC<br />
Säule: Eclipse XDB-C18, 4.6 x 150mm, 5µm<br />
Für die Trennung der aromatischen Benzaldehyd-Derivate und Benzoin-Derivate eignen sich<br />
besonders die hydrophoben C18-Umkehrphasen. Wenn möglich wurde für die mobile Phase<br />
ein Gemisch aus Acetonitril und Millipore-Wasser verwendet. Aufgrund der Wirtschaftskrise<br />
und dem daraus resultierendem Acetonitrilmangel, wurde alternativ auch ein Methanol und<br />
Millipore-Wasser Gemisch verwendet. In den meisten Fällen waren die Basislinientrennung<br />
und/oder die Peaksymmetrie gegenüber Acetonitril schlechter. Die zu analysierenden Proben<br />
wurden vor Auftrag in Isopropanol mit 0,7 vol% Perchlorsäure aufgenommen und 1-5 min bei<br />
13.000 Upm zentrifugiert. Es wurden jeweils 10 µl Probe injiziert und bei einem Fluss von<br />
1 ml/min analysiert. Die verwendeten Methoden, können der nachfolgenden Tabelle 6<br />
entnommen werden.<br />
Tabelle 6: Verwendete HPLC-Methoden zur Analyse der Benzaldehyde und die entsprechenden Benzoine<br />
Benzaldehyd<br />
Detektion bei<br />
Wellenlänge<br />
[nm]<br />
Laufmittel<br />
Acetonitril<br />
[%]<br />
Retentionszeiten<br />
[min]<br />
Laufmittel<br />
Methanol<br />
[%]<br />
Retentionszeiten<br />
[min]<br />
BA BZ BA BZ<br />
Benzaldehyd 254 50 3,5 4,2 60 3,1 4,7<br />
2-Methoxy 254 40 5,5 7,7 60 3,7 4,5<br />
3-Methoxy 254 - - - 60 3,7 6<br />
4-Methoxy 280 50 3,3 4,1 60 3,3 5,3<br />
3,5-Dimethoxy 270 55 3,6 4,1 60 4,8 9<br />
2-Fluor 250 50 3,8 4,5 - - -<br />
3-Fluor 250 50 3,9 5,5 70 2,6 3,5<br />
4-Fluor 250 50 3,6 5,2 70 2,4 3,4<br />
3,5-Difluor 250 50 4,6 8,9 70 3 6,4<br />
2,4-Difluor 250 50 4,2 6,3 70 2,8 3,7<br />
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