Helmholtz-Gemeinschaft
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
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Ergebnisse & Diskussion<br />
tatsächlich durch das Fehlen der C-terminalen Struktur und nicht durch die Verlagerung des<br />
His-Tags begründet.<br />
4,0<br />
BALwt<br />
HisBALΔ<br />
BAL Δ His<br />
3,5<br />
3,0<br />
k des<br />
(% min -1 )<br />
2,5<br />
2,0<br />
1,5<br />
1,0<br />
0,5<br />
0,0<br />
BA 3,5-DMBA 4-ClBA<br />
Abb. 78: Inaktivierungsraten der BAL Deletionsvarianten mit Benzaldehyd, 4-Chlorbenzaldehyd und<br />
3,5-Dimethoxybenzaldehyd. Inaktivierungsansatz: 20 µg/ml BAL in 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 0,5 mM ThDP,<br />
2,5 mM MgSO 4 ; 30 vol% DMSO; 2 mM Substrat; T=25 °C. Die Standardabweichungen der Wildtyp BAL<br />
beziehen sich auf die empirisch ermittelten Standardabweichungen aus drei unabhängigen Experimenten. Die<br />
anderen Standardabweichungen ergeben sich aus der Berechnung von k des eines Experiments und stellen keine<br />
empirisch ermittelten Standardabweichungen dar.<br />
Der deletierte Bereich der BAL besteht zu 75% (ohne Berücksichtigung des His-Tags), aus<br />
Aminosäuren mit apolaren und damit hydrophoben Seitenketten (siehe unten). Eine so hohe<br />
Dichte an hydrophoben Aminosäuren in exponierten Bereichen von Proteinen ist eher<br />
ungewöhnlich. Ausgedehnte hydrophobe Bereiche lagern sich normalerweise, abgeschirmt<br />
von der wässrigen Umgebung, im Kern von Proteinen an und unterstützen so die native<br />
Faltung.<br />
Aber auch der Reaktionsraum, also das aktive Zentrum, der THDP-abhängigen Enzyme<br />
besteht aus einem relativ großen Anteil hydrophober Aminosäuren, so wird unter anderem die<br />
notwendige Umgebung für die Aktivierung des ThDP geschaffen (Kapitel 1.4.1). In Tabelle<br />
15 sind die Aminosäuren, welche im oder in unmittelbarer Nähe vom aktiven Zentrum der<br />
BAL und zum Vergleich der BFD lokalisiert sind, aufgelistet. In der BAL sind 12 und in der<br />
BFD 10 Aminosäuren mit hydrophoben Seitenketten im aktiven Zentrum und dem<br />
Substratkanal lokalisiert (AS bis Position 484).<br />
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