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Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER

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Ergebnisse & Diskussion<br />

tatsächlich durch das Fehlen der C-terminalen Struktur und nicht durch die Verlagerung des<br />

His-Tags begründet.<br />

4,0<br />

BALwt<br />

HisBALΔ<br />

BAL Δ His<br />

3,5<br />

3,0<br />

k des<br />

(% min -1 )<br />

2,5<br />

2,0<br />

1,5<br />

1,0<br />

0,5<br />

0,0<br />

BA 3,5-DMBA 4-ClBA<br />

Abb. 78: Inaktivierungsraten der BAL Deletionsvarianten mit Benzaldehyd, 4-Chlorbenzaldehyd und<br />

3,5-Dimethoxybenzaldehyd. Inaktivierungsansatz: 20 µg/ml BAL in 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 0,5 mM ThDP,<br />

2,5 mM MgSO 4 ; 30 vol% DMSO; 2 mM Substrat; T=25 °C. Die Standardabweichungen der Wildtyp BAL<br />

beziehen sich auf die empirisch ermittelten Standardabweichungen aus drei unabhängigen Experimenten. Die<br />

anderen Standardabweichungen ergeben sich aus der Berechnung von k des eines Experiments und stellen keine<br />

empirisch ermittelten Standardabweichungen dar.<br />

Der deletierte Bereich der BAL besteht zu 75% (ohne Berücksichtigung des His-Tags), aus<br />

Aminosäuren mit apolaren und damit hydrophoben Seitenketten (siehe unten). Eine so hohe<br />

Dichte an hydrophoben Aminosäuren in exponierten Bereichen von Proteinen ist eher<br />

ungewöhnlich. Ausgedehnte hydrophobe Bereiche lagern sich normalerweise, abgeschirmt<br />

von der wässrigen Umgebung, im Kern von Proteinen an und unterstützen so die native<br />

Faltung.<br />

Aber auch der Reaktionsraum, also das aktive Zentrum, der THDP-abhängigen Enzyme<br />

besteht aus einem relativ großen Anteil hydrophober Aminosäuren, so wird unter anderem die<br />

notwendige Umgebung für die Aktivierung des ThDP geschaffen (Kapitel 1.4.1). In Tabelle<br />

15 sind die Aminosäuren, welche im oder in unmittelbarer Nähe vom aktiven Zentrum der<br />

BAL und zum Vergleich der BFD lokalisiert sind, aufgelistet. In der BAL sind 12 und in der<br />

BFD 10 Aminosäuren mit hydrophoben Seitenketten im aktiven Zentrum und dem<br />

Substratkanal lokalisiert (AS bis Position 484).<br />

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