Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Ligaseaktivität nachzuweisen. Das Kosolvents ist also tatsächlich zwingend notwendig für die
Aktivität der HisBALΔ. Weiterhin kann durch DMSO eine Stabilisierung der Variante
erreicht werden.
Die Deletionsvariante mit C-terminalen His-Tag (BALΔHis), weist im Vergleich zur
Deletionsvariante mit N-terminalen His-Tag (HisBALΔ) eine erhöhte Stabilität in Puffer ohne
Kosolvents auf (Abb. 77 B). Nach 72,5 Stunden betrug die Restaktivität noch etwa 40%,
während mit der HisBALΔ nur noch eine Restaktivität von knapp 10% ermittelt wurde. Durch
Zugabe von 30 vol% DMSO konnte aber keine weitere Stabilisierung der BALΔHis erreicht
werden. Bei Inkubation mit und ohne DMSO ist die Stabilität der BALΔHis vergleichbar mit
der Stabilität der Variante HisBALΔ. Möglicherweise führt eine Anlagerung von DMSO an
der verkürzten Variante mit frei liegendem C-Terminus (HisBALΔ) zu einer strukturellen
Stabilisierung, welche bei der Variante BALΔHis bereits durch den C-terminalen His-Tag
erreicht wird. Die Stabilisierung einer Reihe von Enzymen durch DMSO ist bereits in der
Literatur beschrieben. Hier wird eine Stabilisierung durch die optimale Hydratisierung (siehe
Kapitel 1.2.2) der Enzyme durch das Kosolvents als Ursache der Stabilisierung vermutet. Des
Weiteren wird angenommen, dass durch die Zugabe von Kosolventien geringe
Konformationsänderungen hervorgerufen werden, die bis zum Erreichen eines kritischen
Maßes zu einer Stabilisierung der Enzyme führen (Kumar und Prakash, 2003).
Ein weiterer sehr interessanter Aspekt wird beim Vergleich der Deletionsvarianten mit der
Stabilität der Wildtyp BAL deutlich (Abb. 77 C). Wie auch zuvor des Öfteren beschrieben
(Kapitel 1.5.1) ist die Stabilität der BAL in Puffer mit 30 vol% DMSO gegenüber der
Lagerung in reinem Puffer erhöht. Die C-terminal verkürzte Variante BALΔHis mit
C-terminalen His-Tag, zeigt in Puffer dieselbe Stabilität wie die Wildtyp BAL. Gleiches gilt
für die Variante HisBALΔ bei Lagerung in Puffer mit 30 vol% DMSO. Der C-terminale His-
Tag bzw. die Inkubation in Puffer mit 30 vol% DMSO, führt also zu vergleichbaren
Stabilitäten der Deletionsvarianten und der Wildtyp BAL in Puffer (ohne Zugabe von
DMSO). Wie bereits erwähnt, ist ein Großteil des C-terminalen Bereichs der BAL sehr
flexibel (AS 556 – 563). Des Weiteren enthält der C-Terminus überwiegend hydrophobe
Aminosäurereste (etwa 75%, siehe Kapitel 4.3.3.2). Möglicherweise wird die Konformation
dieses Bereichs durch DMSO im wässrigen Puffer verändert. Unter diesen Bedingungen führt
der C-Terminus im Vergleich zu den verkürzten Varianten wiederum zu einer höheren
Stabilität.
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