Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Drei Varianten wurden zur Ermittlung der Inaktivierung gegenüber den Standardaldehyden
(Benzaldehyd, 3,5-Dimethoxybenzaldehyd und 4-Chlorbenzaldehyd) ausgewählt, im 5 Liter
Maßstab überexprimiert (Kapitel 3.3.3) und über Ni-NTA 2+ gereinigt (Kapitel 3.6). Die
ermittelten Anfangsreaktionsgeschwindigkeiten der BALLys127 Varianten gegenüber den
Standardaldehyden stimmen mit denen der Wildtyp BAL überein.
Daher wurden die Inaktivierungsraten entsprechend den Versuchen mit der Wildtyp BAL
ermittelt (Kapitel 3.10.3) und miteinander verglichen (Abb. 74). Keine der untersuchten
Varianten zeigte im Vergleich zur Wildtyp BAL einen Unterschied in der Inaktivierung durch
die untersuchten Aldehyde. Eine Schiffbasenbildung an den Lysinresten der BAL kann also
als äußerst unwahrscheinlich angesehen werden.
4
BALwt
K127L
K127M
K127Q
3
k des
(% min--1 )
2
1
0
BA 4-ClBA 3,5-DMBA
Abb. 74: Inaktivierungsraten der BALLys127-Varianten mit Benzaldehyd, 4-Chlorbenzaldehyd und
3,5-Dimethoxybenzaldehyd. Inaktivierungsansatz: 20 µg/ml BAL in 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 0,5 mM ThDP,
2,5 mM MgSO 4 ; 30 vol% DMSO; 2 mM Substrat; T=25 °C. wt: Wildtyp, K: Lysin, L: Leucin, M: Methionin, Q:
Glutamin. Die Standardabweichungen der Wildtyp BAL beziehen sich auf die empirisch ermittelten Standardabweichungen
aus drei unabhängigen Experimenten. Die anderen Standardabweichungen ergeben sich aus der
Berechnung von k des eines Experiments und stellen keine empirisch ermittelten Standardabweichungen dar.
Für aliphatische Aldehyde konnten kovalente Modifikation auch mit anderen Aminosäureresten
als Lysin sowie intra- und intermolekulare crosslinks nachgewiesen werden (Buko
et al., 1999, Metz et al., 2004, Uchida et al., 1998). Nach aktuellem Kenntnisstand werden in
der Literatur nur detaillierte Inaktivierungs- und Stabilisierungsanalysen gegenüber
aliphatischen Aldehyden beschrieben. Hier führten vor allem Austausche anderer
Aminosäuren als Lysin zu einer Stabilisierung der Enzyme (Di Lorenzo et al., 2007,
Jennewein et al., 2006). Eine Interaktion anderer Aminosäurereste mit den aromatischen
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