Helmholtz-Gemeinschaft
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
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Ergebnisse & Diskussion<br />
relative Aktivität/Stabilität<br />
A<br />
1,0<br />
0,8<br />
0,6<br />
0,4<br />
0,2<br />
0,0<br />
6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0<br />
pH<br />
Aktivität<br />
Stabilität<br />
relative Aktivität/Stabilität<br />
B<br />
1,0<br />
0,8<br />
0,6<br />
0,4<br />
0,2<br />
0,0<br />
6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0<br />
pH<br />
Aktivität<br />
Stabilität<br />
relative Aktivität/Stabilität<br />
C<br />
1,0<br />
0,8<br />
0,6<br />
0,4<br />
0,2<br />
0,0<br />
6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0<br />
pH<br />
Aktivität<br />
Stabilität<br />
Abb. 68: Gegenüberstellung der relativen Aktivität und Stabilität der BAL gegenüber Benzaldehyd (A),<br />
3,5-Dimethoxybenzaldehyd (B) und 4-Chlorbenzaldehyd (C). Die relative Stabilität wurde über die in Kapitel<br />
4.2.2 bestimmten Halbwertszeiten ermittelt. Relative Aktivität mit 1,7 µg/ml (A) bzw. 3,3 µg/ml (B,C) BAL in<br />
50 mM TEA-Puffer, pH 6-9; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 30 vol% DMSO; T=25 °C und 50 mM Benzaldehyd<br />
(A), 10 mM 3,5-Dimethoxybenzaldehyd (B) oder 15 mM 4-Chlorbenzaldehyd (C). Die Reaktion wurde<br />
jeweils nach 2 min gestoppt. Zur besseren Übersicht, sind Hilfslinien eingezeichnet.<br />
Das pH-Spektrum, in dem die BAL eine vergleichbare Ligaseaktivität für 3,5-Dimethoxybenzaldehyd<br />
besitzt, ist unerwartet groß (Abb. 68 B) verglichen mit den pH-Profilen für<br />
3,5-Dimethoxybenzaldehyd (Kapitel 1.5.1; Schmidt et al., 2009). Schmidt verwendete<br />
allerdings eine relativ geringe Magnesiumionenkonzentration (0,25 mM Mg 2+ ). Wie in<br />
Kapitel 4.1.5 besprochen, zeigt die BAL bei Magnesiumkonzentrationen unterhalb von 1 mM<br />
mit 3,5-Dimethoxybenzaldehyd eine verringerte Ligaseaktivität. Da die Stabilisierung der<br />
Substrate sowie der Kofaktoren im aktiven Zentrum ebenfalls pH-abhängig ist, könnte das<br />
veränderte pH-Profil auf die höhere Magnesiumionenkonzentration zurückzuführen sein. Des<br />
Weiteren könnten die Unterschiede durch die verschiedenen Testsysteme begründet sein.<br />
Jedenfalls kann bei pH 6 eine Stabilisierung um etwa das Doppelte gegenüber pH 8 erreicht<br />
werden, wobei die Aktivität um etwa 55% sinkt. Eine Optimierung des Prozess durch<br />
Senkung des pH ist auch im Falle der Umsetzung von 3,5-Dimethoxybenzaldehyd zu<br />
3,3‘5,5‘-Tetramethoxybenzoin unwahrscheinlich.<br />
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