Helmholtz-Gemeinschaft
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
Einflussfaktoren auf die Stabilität und Aktivität der ... - JuSER
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Ergebnisse & Diskussion<br />
A<br />
B<br />
Aktivität (U/mg)<br />
Aktivität (U/mg)<br />
500<br />
450<br />
400<br />
350<br />
300<br />
250<br />
200<br />
150<br />
100<br />
50<br />
0<br />
250<br />
225<br />
200<br />
175<br />
150<br />
125<br />
100<br />
75<br />
50<br />
25<br />
0<br />
V max : 628,6 55,4 U/mg<br />
K M : 32,5 6,6 mM<br />
0 10 20 30 40 50 60 70 80<br />
Benzaldehyd (mM)<br />
V max : 198,8 7,1 U/mg<br />
K M : 0,36 0,08 mM<br />
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18<br />
3,5-Dimethoxybenzaldehyd (mM)<br />
Aktivität (U/mg)<br />
Aktivität (U/mg)<br />
16<br />
14<br />
12<br />
10<br />
8<br />
6<br />
4<br />
V<br />
2<br />
max : 19,5 1,7 U/mg<br />
K M : 0,32 0,09 mM<br />
0<br />
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8<br />
220<br />
200<br />
180<br />
160<br />
140<br />
120<br />
100<br />
80<br />
60<br />
40<br />
20<br />
0<br />
(R)-Benzoin (mM)<br />
v: 212,8 9,9 U/mg<br />
K M : minimum 5 mM<br />
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10<br />
(R)-3,3´,5,5´-Tetramethoxbenzion (mM)<br />
C<br />
Aktivität (U/mg)<br />
700<br />
600<br />
500<br />
400<br />
300<br />
200<br />
100<br />
v: 660,0 54,0 U/mg<br />
K M : minimum 11 mM<br />
0<br />
0 3 6 9 12 15 18 21 24<br />
4-Chlorbenzaldehyd (mM)<br />
Aktivität (U/mg)<br />
140<br />
120<br />
100<br />
80<br />
60<br />
40<br />
V<br />
20<br />
max : 175,0 4,3 U/mg<br />
K M : 0,20 0,02 mM<br />
0<br />
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0<br />
(R)-4,4´-Chlorbenzoin (mM)<br />
Abb. 67: BAL Kinetiken der Ligase- sowie Lyasereaktion mit Benzaldehyd und (R)-Benzoin (A),<br />
3,5-Dimethoxybenzaldehyd und (R)-3,3´,5,5´-Tetramethoxybenzoin (B) (Daten von Carmen Kocot; Kocot,<br />
2010), 4-Chlorbenzaldehyd und 4,4´-Chlorbenzoin (C) (diese Arbeit). 0,67-2 µg/ml BAL in 50 mM TEA-<br />
Puffer, pH 8; 0,5 mM ThDP, 2,5 mM MgSO 4 ; 30 vol% DMSO; T=25 °C; n=2. Die Darstellung erfolgte mittels<br />
nicht-linearer Regression unter Verwendung des Programms Origin 8.0. Mit (R)-3,3´,5,5´-Tetramethoxybenzoin<br />
und 4-Chlorbenzaldehyd konnte innerhalb der Substratlöslichkeit kein Anzeichen für eine Sättigung der BAL<br />
gefunden werden. Hier sind die maximalen gemessenen Anfangsreaktionsgeschwindigkeiten (v) und die<br />
Standardabweichungen aus der Doppelbestimmung angegeben. Der minimale K M , welcher aufgrund der<br />
fehlenden Sättigung mindestens vorliegen muss, ist ebenfalls angegeben.<br />
Deshalb wurde die Ligase- und Lyaseaktivität der BAL für die zur vergleichenden Analyse<br />
herangezogenen Aldehyde unter den in dieser Arbeit verwendeten Standardbedingungen<br />
ermittelt. Die Messungen für Benzaldehyd, Benzoin, 3,5-Dimethoxybenzaldehyd und<br />
3,3´,5,5´-Tetramethoxybenzoin wurden von Carmen Kocot im Rahmen ihrer Diplomarbeit<br />
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