Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
wurden. Eine tatsächliche Verringerung der Inaktivierung mit steigender Aldehydkonzentration
erscheint aber sehr unwahrscheinlich und wird auf bisher nicht geklärte
Probleme bei der Analytik zurückgeführt. Bei Substratkonzentrationen unterhalb von 0,2 mM
konnte der Umsatz nicht ermittelt werden. Da bei einer Substratkonzentration von 0,1 mM
bereits die maximale Inaktivierungsrate erreicht wurde, ergibt sich aber kein Unterschied für
die Betrachtung der Ergebnisse vor und nach Erreichen des Reaktionsgleichgewichts (Abb. 66
A und B). Ein etwa 2.500-5.000 facher 3,5-Dimethoxybenzaldehydüberschuss relativ zum
Enzym reicht aus um die maximale Inaktivierung zu erreichen.
A
3,5
B
3,5
3,0
3,0
2,5
2,5
k des
(% min -1 )
2,0
1,5
1,0
k des
(% min -1 )
2,0
1,5
1,0
0,5
0,5
0,0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
3,5-Dimethoxybenzaldehyd (mM)
0,0
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
3,5-Dimethoxybenzaldehyd (mM)
C
k des
(% min -1 )
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
eingesetzte Substratkonz.
Reaktionsgleichgewicht
0,0
0 5.000 10.000 15.000 20.000 25.000
molarer Substratüberschuss
Abb. 66: Inaktivierungsraten der BAL in Abhängigkeit von der eingesetzten 3,5-Dimethoxybenzaldehydkonzentration
(A), der 3,5-Dimethoxybenzaldehydkonzentration nach Erreichen des Reaktionsgleichgewichts
(B) und vom molaren 3,5-Dimethoxybenzaldehydüberschuss (C). Inaktivierung mit 0-2 mM
3,5-Dimethoxybenzaldehyd: 0,02 mg/ml BAL in 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 30
vol% DMSO; T=25 °C. Zur besseren Übersicht sind Hilfslinien eingezeichnet.
Fazit: Die Analysen mit 4-Chlorbenzaldehyd haben gezeigt, dass die Inaktivierungsrate nicht
allein abhängig von der Substratkonzentration ist, sondern der molare Überschuss des
Substrats relativ zum Enzym entscheidend für die Geschwindigkeit der Inaktivierung ist.
Bereits geringe Aldehydüberschüsse zwischen 1:2.500 und 1:50.000 reichen aus, um die
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