Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Wie Kapitel 4.2.3 zu entnehmen ist, entsprach die Inaktivierung der BAL (0,5 mg/ml) mit
einer Restaktivität von 27-39% nach zwei Stunden Inkubation mit 2 mM 4-Chlorbenzaldehyd
nicht der Erwartung. Die Schlussfolgerung war, dass nicht alleine die Aldehydkonzentration
sondern das Verhältnis von Aldehyd zu Enzym für die Inaktivierungsrate von Bedeutung ist.
Deshalb wurden nun bei konstanter 4-Chlorbenzaldehydkonzentration variable BAL-Konzentrationen
eingesetzt und die Inaktivierungsrate ermittelt (Abb. 63). Tatsächlich konnte mit
höheren Enzymkonzentrationen eine verringerte Inaktivierungsrate ermittelt werden.
Allerdings ergaben diese Versuche eine maximale Inaktivierung von etwa 5,2% min -1 bei der
geringsten BAL-Konzentration (0,0004 mg/µl). Diese hohe Inaktivierungsrate könnte auf eine
erschwerte Analyse der Aktivität bei der geringen Enzymkonzentration zurückzuführen sein.
Zusätzlich könnte die BAL aufgrund der hohen Verdünnungen zur Dissoziation ihrer
Tetramere neigen, dies könnte neben der Aldehyd-induzierten Inaktivierung zu einer
zusätzlich beschleunigten Inaktivierung führen (persönliche Mitteilung Prof. Dr. Pohl, IBT2).
Bei allen anderen Enzymkonzentrationen liegen die Inaktivierungsraten im Bereich der zuvor
durchgeführten Messungen.
5
4
k des
(% min -1 )
3
2
1
0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
BAL (mg/ml)
Abb. 63: Inaktivierungsraten der BAL mit 4-Chlorbenzaldehyd in Abhängigkeit von der Enzymkonzentration.
Inaktivierung mit 2 mM 4-Chlorbenzaldehyd: 0,004-2 mg/ml BAL in 50 mM TEA-Puffer, pH 8;
2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 30 vol% DMSO; T=25 °C. Zur besseren Übersicht sind Hilfslinien
eingezeichnet.
Das Molekulargewicht der nativen BAL (Tetramer) wurde über Gelfiltrationsanalysen mit
216 kDa ermittelt (Janzen et al., 2006). 1 nmol entsprechen also etwa 216 µg BAL. Bei
bekannter Protein- und Substratkonzentrationen, kann unter der Annahme einer reinen
Enzymcharge, das molare Verhältnis von Substrat zu Enzym berechnet werden. Zum einen
sind die Enzympräparate aber nie vollständig frei von wirtszelleneigenen Proteinen und zum
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