Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Tabelle 12: Reaktivierungsversuche der BAL nach 2 Stunden Inkubation mit aromatischen Aldehyden.
Inaktivierung: 0,5 mg/ml BAL in 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 0,5 mM ThDP, 2,5 mM MgSO 4 ; 30 vol% DMSO;
2 mM Substrat; T=25 °C. Reaktivierung (Elution und Inkubation nach Elution): 50 mM TEA-Puffer, pH 8;
0,5 mM ThDP, 2,5 mM MgSO 4 . Wenn nicht anders angegeben, wurden die Experimente nur einmal durchgeführt.
Relative Aktivität
Substrat
2 h
1 h
2 h
24 h
nach Inaktivierung nach Elution nach Elution nach Elution
[%] [%] [%] [%]
2-MBA (n=2) 5 36 41 98
2-ClBA (n=2) 3 28 33 29
BA 29 n.b. 79 50
3,5-DMBA 10 n.b. 36 34
4-ClBA 27 n.b. 61 71
n.b.: nicht bestimmt
In der mit 2-Methoxybenzaldehyd inaktivierten Probe konnte sogar eine vollständige
Reaktivierung innerhalb von 24 Stunden erreicht werden. Innerhalb von zwei Stunden und 24
Stunden Inkubation im Elutionspuffer konnte bei den weiteren untersuchten Aldehyden keine
entscheidende Zunahme der Aktivität festgestellt werden. Mit Benzaldehyd als Substrat
wurde nach 24 Stunden sogar eine geringere Aktivität ermittelt, als nach zwei Stunden
Inkubation im Elutionspuffer. Ob dies auf Messungenauigkeiten oder Verunreinigungen in
der Probe begründet ist, ist nicht geklärt. Eine mit 2-Chlorbenzaldehyd inaktivierte Probe
wurde zusätzlich zweimal hintereinander über PD-10 Säulen gereinigt. Innerhalb von 24
Stunden wurde kein Unterschied in der Reaktivierung der einfach sowie zweifach gereinigten
Probe ermittelt. Wie auch im ersten Versuch (Tabelle 12), betrug die Reaktivierung etwa
30%. Es kann also davon ausgegangen werden, dass alle freien Aldehyde bereits im ersten
Reinigungsschritt entfernt wurden.
Für 3,5-Dimethoxybenzaldehyd und 4-Chlorbenzaldehyd wurden die Versuche noch einmal
wiederholt. Diesmal wurde die BAL für 24 Stunden mit 2 mM der Substrate inkubiert und
anschließend durch Gelfiltration von den Reaktanden abgetrennt. Nach zwei Stunden
Inkubation mit den Aldehyden war, wie in den Versuchen zuvor, die Inaktivierung der BAL
nicht vollständig. Innerhalb von 24 Stunden war aber mit beiden Aldehyden eine fast
vollständige Inaktivierung erreicht (Tabelle 13).
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