Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Lösungsmittelinhibierung sowie eine molekulare Toxizität konnte nicht festgestellt werden
(Schmidt, 2008, Zavrel, 2009). Da der bisher verwendete gekoppelte Aktivitätstest (Kapitel
3.9.1.2) aufgrund der Produktionseinstellung des Hilfsenzym, der Pferdeleber Alkoholdehydrogenase
(HLADH), nicht mehr verwendet werden konnte, wurde ein direkter
fluoreszenzphotometrischer Aktivitätstest etabliert (Kapitel 3.9.1.3). Dieser basiert auf der
fluoreszierenden Eigenschaften des aromatischen Substrates 3,5-Dimethoxybenzaldehyd,
welches von der BAL zu 3,3´,5,5´-Tetramethoxybenzoin umgesetzt wird. Die Aktivität der
BAL wird durch den Umsatz des Substrates und der damit einhergehenden Abnahme der
Fluoreszenzintensität über die Zeit ermittelt.
Durch die Probenentnahme mit MIBK als zweiter Phase, können Spuren des Lösungsmittels
mit in den Ansatz für die Aktivitätsmessungen übertragen werden. Da die Fluoreszenz von
jeglichen Komponenten im Messsystem beeinflusst werden kann, wurde zunächst überprüft
ob durch den Übertrag eine Veränderung in der Fluoreszenz zu erwarten war. Es konnte kein
Unterschied in der Fluoreszenz ermittelt werden (ohne Abb.), so dass die Analysen ohne eine
weitere Kalibrierung durchgeführt werden konnten.
Die Stabilität der BAL wurde, wie in Kapitel 3.10.2 beschrieben ermittelt. Dabei wurde für
jeden Zeitpunkt ein eigener Ansatz vermessen. Die Stabilität der BAL im Emulsionssystem
sollte mit nicht gerührten sowie gerührten Kontrollen reiner Pufferlösung, MIBK gesättigtem
Puffer (ca. 5 vol% MIBK) und MIBK als zweiter Phase verglichen werden. Je 0,5 mg/ml
BAL wurden dazu in Phosphatpuffer oder MIBK-gesättigtem Puffer gelöst. Die Anfangsreakionsgeschwindigkeit
wurde jeweils vor der Inkubation bestimmt.
Die Messschwankungen für die Pufferkontrollen (Abb. 54 A) sind relativ hoch, in den
anderen Proben jedoch akzeptabel. Innerhalb von 170 Stunden ist bei der ungerührten
Pufferkontrolle eine Inaktivierung von etwa 30% festzustellen, während die Inaktivierung der
gerührten Pufferkontrolle in diesem Zeitraum etwa 80% beträgt. Die Inaktivierung der BAL
mit gesättigtem MIBK Puffer (Abb. 54 B) ohne Einfluss des Rührens liegt mit einer
Inaktivierung zwischen 20-30% in einem ähnlichen Rahmen. Gegenüber der gerührten
Pufferkontrolle, ist die Inaktivierung mit MIBK gesättigtem Puffer unter Rühren mit 60%
etwas geringer. Dies mag auf eine Stabilisierung der BAL durch MIBK als Kosolvents
hinweisen, sollte aber ohne eine Verifizierung der Experimente nicht überbewertet werden.
Mit MIBK als zweiter Phase (Abb. 54 C) ist eine wesentlich schnellere Inaktivierung zu
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