Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
kovalenten Bindungen bleiben in Gegenwart von SDS stabil, werden allerdings durch
Reduktionsmittel, wie ß-Mercaptoethanol oder Dithiothreitol gespalten. Eine vergleichende
Probenbehandlung des BFD-Präzipitats mit und ohne Reduktionsmittel ist in Abb. 53 gezeigt.
Wie die Ergebnisse in Abb. 53 zeigen, ist ohne Zugabe von Reduktionsmitten eine schmale
Proteinbande bei einem Molekulargewicht von ca. 120 kDa erkennbar. Ein kleiner Anteil des
Enzyms wird also oxidiert, dieser Anteil ist aber so gering, dass die Bildung intermolekularer
Disulfidbrücken als Hauptdeaktivierungsgrund ausgeschlossen werden kann. Ein Großteil des
Enzyms findet sich bei der nativen Monomerengröße von ca. 60 kDa wieder, was darauf
hindeutet, dass der Hauptteil der Aggregation durch hydrophobe Wechselwirkungen
hervorgerufen wird. Darüber hinaus ist ein weiterer Effekt auf die BFDH281A erkennbar: In
der gerührten Probe sind auch Proteinfragmente mit kleineren Molekulargewichten zu
erkennen (unterhalb von 60 kDa), anscheinend werden die Proteinaggregate durch die
Reibung des Rührfisches am Boden zusätzlich zerkleinert (Abb. 53). Für die BAL konnte eine
solche Fragmentierung, auch bei pH 6.5, nicht nachgewiesen werden. Vermutlich war die
Inaktivierung durch den Rührprozess zu gering (ohne Abb.)
Fazit: Die Analysen haben gezeigt, dass der Rührmodus und der gewählte pH-Wert einen
entscheidenden Einfluss auf die Enzymstabilität haben, wobei die BAL eine geringere
Sensitivität gegenüber der hydrophoben Interaktion mit der Oberfläche des Magnetrührfisches
zeigte als die BFDH281A (vgl. Abb. 51 und Abb. 52). Abgesehen von der Aggregation findet
in den gerührten Proben auch eine Fragmentierung der aggregierten BFDH281A statt.
Darüber hinaus konnte die Bildung von Aggregaten durch intermolekulare Disulfidbrücken
als ein entscheidender Grund für die Deaktivierung ausgeschlossen werden. Die Wahl von
größeren Probenvolumina kann den Deaktivierungsprozess durch den Magnetrührfisch
verringern (Abb. 50 und Abb. 52). Diese Aspekte sind zwar sehr interessant, eine tiefer
gehende Analyse war aber nicht Ziel dieser Arbeit. Die BAL weist eine ausreichende
Stabilität gegenüber dem magnetischen Rühren auf, so dass eine Analyse der Stabilität auch
mit organischen Lösungsmitteln im gewählten Versuchsaufbau möglich ist.
4.1.3 Einfluss einer Grenzfläche auf die Stabilität der BAL
Zur Untersuchung des Einflusses von Grenzflächen auf die BAL wurde Methylisobutylketon
(MIBK) als organisches Lösungsmittel ausgewählt. Laut Schmidt und Zavrel eignet sich
MIBK besonders gut für den Einsatz im Zweiphasensystem mit der BAL und eine
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