Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Abb. 46: Proben zur Bestimmung der Enzymstabilität gegenüber Rühreffekten. Links: Probe mit
minimierter Luft/Gas-Interphase (1,9 ml Füllvolumen). Mitte: Probe mit großer Luft/Gas-Interphase (0,6 ml
Füllvolumen). Rechts: ungerührte Kontrolle (0,6 ml Füllvolumen)
Um nicht im unteren Nachweisbereich des Aktivitätstest zu arbeiten und minimale
Änderungen in der Aktivität messbar nachweisen zu können, wurde für die Versuche hohe
Enzymkonzentrationen von 0,125 mg/ml bis 0,5 mg/ml gewählt. BAL und BFDH281A
wiesen bei bisherigen Analysen im pH-Bereich von pH 6,5 bis pH 8 hohe Stabilitäten auf,
allerdings liegt das Aktivitätsoptimum für die BAL zwischen pH 8 und pH 9,5 und für die
BFD bei ca. pH 6-6,5 (Kapitel 1.4.4.3). Daher unterscheiden sich die üblicherweise
verwendeten pH-Werte der beiden Enzyme bei der Katalyse. Für die Katalyse mit BFD
werden Puffer mit pH 6,5 und für die Katalyse mit BAL werden Puffer zwischen pH 8 und
pH 8,5 verwendet. Aufgrund der in anderen Studien am häufigsten unter Reaktionsbedingungen
verwendeten pH-Werte, wurden für BAL pH 8 und für die BFDH281A pH 6,5
für die folgenden Analysen verwendet.
Wie aus Abb. 47 ersichtlich, wies die BAL nach 24 h Inkubation unter Rühren einen
Aktivitätsverlust von ca. 5-30%, sowie eine Präzipitation von ca. 5-40% im Vergleich zur
Kontrolle auf. Dabei korreliert der lösliche Proteinanteil mit der ermittelten Aktivität. Die
Inaktivierung scheint daher eine Folge eines Aggregations- und anschließenden Präzipitationsprozesses
zu sein. Ein signifikanter Unterschied zwischen den Stabilitäten mit
verschiedenen Enzymkonzentrationen ist nicht festzustellen. Allerdings ist auffällig, dass in
den Proben mit einer vergrößerten Flüssig/Gas Interphase (0,6 ml Füllvolumen) die
Inaktivierung und die Aggregation immer etwas stärker ausgeprägt ist (ca. 20-40%), als in
den Proben mit minimierter Wasser/Gas-Interphase (ca. 10-20%).
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