Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
4 Ergebnisse und Diskussion
4.1 Untersuchungen der verschiedenen Einflussfaktoren auf die Stabilität der
BAL
Um einen Eindruck über die tatsächlichen Inaktivierungsprozesse der BAL im Emulsionssystem
zu erhalten, sollen zunächst die Faktoren die destabilisierend oder deaktivierend auf
die BAL wirken im Einzelnen analysiert werden. Im gerührten Emulsionssystem können
diese vielfältig sein:
Rühreffekte
Interphaseneffekte
pH-Wert
Molekulare Toxizität des organischen Lösungsmittel
Molekulare Toxizität der Substrate und Produkte
Oxidation des Enzyms z.B. durch Luftsauerstoff
Kinetische Inhibierung durch Substrate und Produkte
Die der BAL in der 3D Struktur sehr ähnliche Benzoylformiatdecarboxylase (BFD) aus
Pseudomonas putida (Kapitel 1.4.4.1), wurde teilweise für vergleichende Analysen
herangezogen. Aufgrund ihrer gegenüber dem Wildtyp Enzym erhöhten Benzoinsyntheseaktivität
wurde die Variante BFDH281A gewählt. Vergleichende Studien, in denen
verschiedenste Parameter untersucht wurden, wiesen für die BFD sowie der Variante
BFDH281A gegenüber der BAL stets erhöhte Stabilitäten, auch gegenüber den aldehydischen
Substraten nach (Iding et al., 2000, Kokova, 2009, Mikolajek et al., 2007, Mikolajek et al.,
2009) (siehe auch Kapitel 1.4.4.3). Die gleichzeitig hohe strukturelle Ähnlichkeit und die
dabei wesentlich höhere Stabilität der BFD macht diese für vergleichende Analysen mit der
BAL sehr attraktiv.
4.1.1 Stabilität gegenüber Rühreffekten
Für die Analyse einer hohen Probenzahl wurde ein Mehrfachmagnetrührer (Variomag
Telesystem 60, Thermo Scientific, Deutschland) mit 60 gleichgeschalteten Stellplätzen
gewählt. Die Untersuchungen wurden in Probengefäßen aus Glas, mit einem Schraubver-
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