Fecal Occult Blood

SPIN – F.O.B.
Fecal Occult Blood
One step - Cassette
One Step Immunochromatographic assay for the qualitative detection of
Fecal Ocult Blood
IVD
Store at 2-30ºC
INTENDED USE
This Fecal Occult Blood (FOB) Rapid Test is an immunochemical device intended for the
qualitative detection of human hemoglobin in stool samples by laboratories or physicians
offices.
It is for health care professional use only.
This assay provides only a preliminary result. Clinical consideration and professional
judgment must be applied.
CLINICAL SIGNIFICANCE
Screening with fecal occult blood tests is based on the concept that gastrointestinal bleeding is found
in important gastrointestinal disorders, such as: diverticulitis, colitis, polyps, and colorectal cancer.
Colorectal cancer is a leading cause of illness and death in Western world.
When gastrointestinal blood is lost, the stool will contain a combination of intact or nearly intact
hemoglobin, intact heme, and heme-derived porphyrins in amounts that depend on the site and
amount of bleeding and the transit time through the gut.
At this moment the commercially available types of assays for FOB testing are:
1. The Guaiac test is widely available but lacks high accuracy. Guaiac is a naturally occurring
phenolic compound that can be oxidized to quinone by hydrogen peroxidases with a detectable color
change. The sensitivity and specificity of Guaiac tests are much lower than those of Hemoporphyrin
tests and Immunochemical assays. The low accuracy of the Guaiac Dye method is related to dietary
peroxidases, including hemoglobin and myoglobin from meat and uncooked fruits and vegetables.
Non-cancerous gastrointestinal tract bleeding and iron intake may also cause false positive results
from Guaiac test. 2
2. The Hemoporphyrin test is not affected by dietary peroxidases, but false-positive results can
occur in patients with upper gastrointestinal bleeding disorders such as gastric or duodenal ulcers
because porphyrins are not broken down by stomach acids. 2
3. Immunochemical tests detect intact or nearly intact human hemoglobin, being a very specific
technique for detecting loss of blood from the lower intestine, because blood from lower sites is less
degraded during transit. The results of immunochemical FOB rapid tests are not affected by dietary
peroxidases, animal blood and ascorbic acid.
PRINCIPLE OF THE METHOD
This assay is a one-step lateral flow chromatographic immunoassay. Once dispensed into the
sample well of the device, the sample is allowed to react with the coloured conjugate (anti-human
hemoglobin mouse monoclonal antibodies-red microspheres) which was pre-dried on the test. The
mixture then moves upward on the membrane by capillary action.
In the case of a positive result, the specific antibodies present on the membrane will capture the
coloured conjugate. The mixture continues moving across the membrane to the immobilized antibody
placed in the control band region, where a GREEN coloured band should always appears.
REAGENTS AND MATERIAL SUPPLIED
5 / 20 / 50 test devices, each sealed in a pouch with a desiccant.
5 / 20 / 50 Stool collection tubes, each filled with sample extraction diluent
MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
Timer
Specimen collection container
Disposable gloves
STORAGE AND STABILITY
The test device is stable when stored in a controlled environment at 2-30 C (35.6-86°F) until
the expiration date printed on the label. Do not freeze or expose the kit components to
temperatures over 30 C (86°F).
PRECAUTION
1. This kit is for professional in-vitro diagnostic use only.
2. Do not use expired kit components.
3. Treat all specimens and used assay materials as if they are infectious.
4. Dispose of all used test components in a biohazard container, after testing.
SPECIMEN COLLECTION
Stool samples should be collected in clean containers and the assay should be done right
after collection.
Precautions: Patients should not collect samples during their menstrual period, if they have
bleeding haemorrhoids, blood in urine, or if they have strained during bowel movement.
The samples can be stored in the refrigerator (2-4ºc) for 1-2 days prior to testing. For longer
storage, maximum 1 year, the specimen must be kept frozen at –20ºc. In this case, the
sample will be totally thawed, and brought to room temperature before testing.
1. Unscrew the cap (with the attached sampler) of the collection tube.
2. Randomly pierce the fecal specimen with the threaded end of the sampler in different
sites. Wipe excess feces off the shaft and outer grooves.
3. Insert sampler in the collection tube and firmly tighten the cap.
4. Shake the tube well to mix the specimen and the extraction buffer.
Stool sample
Stool collection
Tube (1) (2)
ASSAY PROCEDURE
1. Refrigerated specimens or other materials, including the test cassette, must be
equilibrated to room temperature (15-30ºC) before testing. Use a separate stool
collection tube and device for each sample or control.
2. Proceed to shake the stool collection tube in order to assure good sample dispersion.
Cut the end of the top (3).
3. Remove the test cassette from its pouch and place it on a flat surface. Do not open
pouches until ready to perform the assay. Label the device with appropriate
identification.
4. Squeezing the collection tube, dispense 5 drops or 150 µL of the extraction solution in
into the sample well ("S") (4).
5. Read the result at 5 minutes. IMPORTANT: Do not read the test results after ten (10) minutes.
INTERPRETATION OF RESULTS
NEGATIVE POSITIVE INVALID
Negative:
If only the green line appears across the central window in the site marked with the letter C (control
line).
Positive:
If both green-line and red-line (test line) are present. Note:The intensity of the RED coloured band in
the result line region (T) will vary depending on the concentration of human hemoglobin in the
specimen. However, neither the quantitative value, nor the rate of increase in hemoglobin can be
determined by this qualitative test.
Invalid: a total absence of the control coloured band (GREEN) regardless the appearance or not of
the result line (RED). Insufficient specimen volume, incorrect procedural techniques or deterioration
of the reagents are the most likely reasons for control line failure. Review the procedure and repeat
the tests with a new test. If the problem persists, discontinue using the test kit and contact you local
distributor.
QUALITY CONTROL
Internal Quality Control
This device contains a built-in control feature, the Control line (C-line). The presence of this C-line
indicates 1) that sufficient volume is added, 2) that proper flow is obtained and 3) as an internal
control for the reagents.
External Quality Control
Operators should always follow the appropriate federal, state, and local guidelines concerning the
running of external quality controls, including positive and negative, to assure the proper
performance of the device.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
1. The test must be carried out within 2 hours of opening the sealed bag.
2. An excess of stool sample could cause wrong results (brown bands appear or absence of the
control coloured band).
3. The intensity of the lines may vary from very strong at high hemoglobin concentrations to faint
when the hemoglobin concentration is close to the sensitivity limit of the test.
4. This test may be less sensitive for detecting upper gastrointestinal bleeding because blood
degrades as it passes through the gastrointestinal track.
5. Results cannot be considered conclusive evidence of the presence or absence of gastrointestinal
bleeding or pathology.
A positive result should be followed up with additional diagnostic procedures to determine the exact
cause and source of the occult blood in the feces.
False negative results can be obtained even when a gastrointestinal disorder is present.
a. For example, some polyps and colorectal cancers may bleed intermittently or not at all
during certain stages of the disease.
b. Additionally, blood may not be uniformly distributed in stool samples. When occult blood is
not uniformly distributed throughout the bowel movement and the formation of a fecal
sample.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Sensitivity: A sample containing human hemoglobin at concentration equal to or higher than 50
ng/mL produces a positive result using the SPIN-FOB. In some cases samples containing human
haemoglobin at concentrations less than 50 ng/ml can also be tested as positive.
Different hemoglobin dilutions were tested directly in the extraction buffer or spiked in a negative stool
sample in accordance with the kit instructions. The detection of human hemoglobin with the SPIN-
FOB showed >99% of sensitivity compared with a commercial guaiac assay.
Specificity: The SPIN-FOB Test is specific for human hemoglobin and do not show any cross
reaction with hemoglobin from bovine and pig.
The detection of human haemoglobin with SPIN-FOB Test showed >99% of specificity compared with
a commercial guaiac assay. The use of mouse monoclonal antibodies in the elaboration of the SPIN-
FOB assures high degree of specificity for the detection of human hemoglobin.
REFERENCES
1. Towler BP, Irwig L, Glasziou P, Weller D, Kewenter J. Screening for colorectal cancer using the faecal occult blood
test, Hemoccult. Cochrane Database Syst Rev. 2000;(2): CD001216.
2. Ransohoff DF and Lang CA. Screening for colorectal cancer with the Fecal Occult Blood Test: a background paper.
Ann Intern Med. 1997; 126: 811-822.
3. Ransohoff DF and Lang CA. Suggested technique for Faecal Occult Blood testing and interpretation in colorectal
cancer screening. Ann Intern Med. 1997; 126: 808-810.
4. Allison JB, Takawa IS, Ransom LJ, Adrian AL. A comparison of fecal occult blood tests for colorectal-cancer
screening. N Engl J Med 1996; 334:155-159.
PACKAGING
GREEN
RED
Ref. 1504010
Ref. 1504011
Ref. 1504012
control region result
(3) (4)
Cont
RED
5 Cards-5 Buffer tubes
20 Cards-20 Buffer tubes
50 Cards-50 Buffer tubes
S
Add 5 drops
OSIS23-I 18/11/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

SPIN – F.O.B.
Sangre Oculta en Heces
One step - Cassette
Ensayo inmunocromatográfico One Step para la determinación cualitativa
de Sangre Oculta en Heces
IVD
Conservar a 2-30ºC
4. Dispensar cinco (5) gotas o 150 µL del líquido de la solución de extracción en la ventana circular
marcada con una flecha o una S en el dispositivo (4).
5. Leer el resultado a los cinco (5) minutos. IMPORTANTE: No leer los resultados pasados los
diez (10) minutos.
USO RECOMENDADO
El sistema empleado en este test es un inmunoensayo en fase sólida para la detección
cualitativa de hemoglobina humana en heces (FOB). Sólo para uso profesional.
El test se usa únicamente para obtener un resultado preliminar. En cualquier caso el
resultado debe ser interpretado por un profesional.
S
Añadir 5 gotas
SIGNIFICADO CLÍNICO
El test resulta útil para la detección de hemorragias intestinales que tienen lugar en un gran número
de desórdenes gastrointestinales: diverticulitis, colitis, pólipos y cáncer colorectal. El cáncer colorectal
es la principal causa de enfermedad y muerte en el mundo occidental.
Cuando se elimina sangre gastrointestinal, las heces contienen una mezcla de hemoglobina no
degradada o poco degradada, grupos hemo, y porfirina hemo-derivada en cantidades que dependen
del lugar, de la cantidad de sangrado y del tiempo de tránsito a través del intestino.
Actualmente se pueden encontrar en el mercado tres tipos de ensayos para el análisis de F.O.B.:
1. El test Guaiac es el más extendido aunque carece de una gran exactitud. El Guaiac es un
compuesto fenólico que puede ser oxidado a quinona, mediante peroxidasas, con un cambio de
color detectable. La sensibilidad y especificidad de este método es inferior a la de los otros tipos. La
baja exactitud de este método está relacionada con las peroxidasas que se encuentran la dieta, como
por ejemplo la hemoglobina y mioglobina de la carne, frutas o vegetales crudos. El tratamiento de
hemorragias gastrointestinales no cancerosas y la ingesta de hierro pueden causar falsos resultados
positivos en el test de Guaiac.
2. El test Hemoporfirina no se ve afectado por las peroxidasas de la dieta, pero se pueden dar
falsos resultados positivos en pacientes con desórdenes gastrointestinales hemorrágicos superiores,
como úlceras duodenales o gástricas, debido a que las porfirinas no son inactivadas por los ácidos
biliares. 2
3. Los tests inmunocromatográficos detectan hemoglobina humana no degradada o casi
intacta, siendo una técnica muy específica para detectar pérdidas de sangre producidas en la parte
final del intestino, ya que la sangre procedente de este lugar sufre menor degradación durante su
tránsito. Los resultados del test inmunocromatográfico no se ven afectados por las peroxidasas
presentes en la dieta, sangre animal o ácido ascórbico.
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El SPIN-F.O.B.Test es un inmunoensayo por cromatografía de flujo lateral. La muestra reacciona con
los conjugados coloreados (anticuerpos monoclonales de ratón anti-hemoglobina humanamicroesferas
rojas) previamente secados en el test. Independientemente de que haya presencia o no
de hemoglobina humana, la mezcla de conjugado va avanzando por capilaridad a través de la la
membrana hasta la región de control donde se han inmovilizado anticuerpos y debiendo siempre
aparecer una línea de color VERDE (línea de control). Si el resultado es positivo, una línea de color
rojo aparecerá en la zona de resultado de la membrana.
REACTIVOS Y MATERIAL PROVISTOS
5 / 20 / 50 placas en un sobre sellado incluyendo desecante.
5 / 20 / 50 tubos para la toma de muestra, cada tubo contiene el tampón de extracción
REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIO
Recipiente para la recogida de muestra de heces
Guantes desechables
Reloj o cronómetro
PRECAUCIONES
1. El kit es sólo para diagnóstico in-vitro.
2. No usar test caducados.
3. Manipular todas las muestras y material usado en el ensayo como potencialmente
infeccioso.
4. Desechar todos los componentes usados para el test en contenedores de material
biopeligroso.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
El kit es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se conserva a una
temperatura ambiente controlada de 2-30 C (35.6-86°F), sellado y con el desecante dentro
del sobre. No congelar ni exponer a temperaturas superiores a 30 ºC.
TOMA DE MUESTRA
Las heces deben ser recogidas en un recipiente limpio.
Precauciones: No se deben obtener muestras de pacientes durante su periodo menstrual, si
presentan hemorroides sangrantes, sangre en orina, o estreñimiento.
Conservar las muestras a 2-4º c (sólo 1 ó 2 días) hasta el momento de utilizarlas. Para
conservar las muestras durante un tiempo prolongado, como máximo 1 año, deben
mantenerse congeladas a –20º c. La muestra debe descongelarse totalmente y alcanzar la
temperatura ambiente antes de poder utilizarla en la prueba.
1. Desenroscar el tapón (unido al muestreador) del tubo para la toma de muestra.
2. Introducir el extremo del muestreador, de forma aleatoria, en puntos diferentes de la
muestra.
3. Volver a introducir el muestreador en el vial y cerrar fuertemente.
4. Agitar el tubo enérgicamente para mezclar la muestra y el tampón de extracción.
Muestra heces
Tubo para
dilución muestra (1) (2)
PROCEDIMIENTO
1. Atemperar (15-30º C) la muestra y resto de material necesario antes de realizar el
ensayo. Para cada muestra o control se debe usar un tubo de dilución de la muestra y un
dispositivo diferente.
2. Agitar el tubo de dilución de la muestra para asegurar una buena dispersión y romper la
punta superior, tal y como se muestra en la figura ( 3 ).
3. Extraer la placa del sobre y colocarla sobre una superficie plana. Identificar cada placa
con los datos del paciente.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
NEGATIVO POSITIVO INVÁLIDO
Negativo:
Si sólo aparece una línea verde en la zona central del dispositivo, marcada con la letra C (línea de Contro)l.
Positivo:
Si también aparece una línea ROJA (línea de resultado) en la zona marcada con la letra T (zona de
resultado). Observaciones: la intensidad de la línea roja en la zona de resultado puede variar dependiendo
de la concentración de hemoglobina humana presente en la muestra. Sin embargo, esta prueba es cualitativa
por lo que, ni la cantidad ni la tasa de aumento de hemoglobina puede ser determinada por la misma.
No válido:
Si no aparece una línea C en la zona del control independientemente de que aparezca o no la línea de
resultado (ROJA). Las causas más comunes por las que puede aparecer un resultado inválido son: una
cantidad insuficiente de muestra, una forma de proceder incorrecta o un deterioro de los reactivos. Si ocurriera
esto, debe revisarse el procedimiento y repetir la prueba con un nuevo dispositivo de reacción. Si persistiese
el problema, debe contactar con su proveedor y dejar de utilizar la prueba.
CONTROL DE CALIDAD
Control de Calidad interno
El test contiene un control interno, la línea verde que aparece en la zona Control (C). La aparición de esta
línea se utiliza: 1) para verificar que se ha añadido el volumen de muestra suficiente y que el flujo ha sido el
apropiado 2); 3) como control interno de los reactivos.
Control de Calidad externo
El usuario deberá seguir la normativa de control de calidad propia de cada localidad, región o país.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Una vez abierto, el dispositivo no debe usarse después de 2 horas.
2. Un exceso de muestra de heces puede dar resultados erróneos, dando líneas no muy definidas
de color pardo, que no tienen ningún valor diagnóstico, o ausencia de la línea de control.
3. La intensidad de las líneas puede variar desde muy fuerte, a elevadas concentraciones de
hemoglobina, hasta muy débil, cuando la concentración de hemoglobina está cerca del límite de
detección.
4. Este test puede ser menos sensible para detectar hemorragias del tracto gastrointestinal superior
porque la sangre se va degradando a través del mismo hasta ser expulsada junto con las heces.
5. Los resultados obtenidos en este test no pueden considerarse concluyentes de la presencia o
ausencia de hemorragia o patología gastrointestinal.
Un resultado positivo debe confirmarse con técnicas de diagnóstico adicionales para determinar
la causa exacta y el origen de la presencia de sangre oculta en heces.
Puede obtenerse falsos resultados negativos incluso cuando exista algún tipo de desorden
gastrointestinal.
a. Algunos pólipos y cánceres colorectales sangran intermitentemente o incluso no lo
hacen durante ciertos fases de la enfermedad.
b. Si la sangre oculta en heces no se distribuye uniformemente durante al movimiento del
bolo y la formación de la muestra fecal. Se recomienda repetir el test en caso de
sospechar condiciones patológicas.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Sensibilidad: La sensibilidad del test es 50 ng hHb/mL de tampón. En algún caso puede darse que muestras
que contengan hemoglobina humana a concentraciones menores de 50 ng/mL pueden dar resultados
positivos. Diluciones diferentes de hemoglobina fueron probadas directamente en el tampón de extracción o
en muestras negativas de heces para determinar la sensibilidad y especificidad del SPIN- FOB. La detección
de hemoglobina humana con el SPIN FOB obtiene >99% de sensibilidad en comparación con un test
comercializado de guaiaco.
Especificidad: El uso de anticuerpos monoclonales de ratón en el diseño del SPIN-F.O.B. asegura un alto
grado de especificidad para la detección de hemoglobina humana y no presenta ninguna reacción cruzada
con hemoglobina bovina o porcina. La detección de hemoglobina humana con el SPIN-F.O.B. obtiene >99%
de especificidad en comparación con un test comercializado de guaiaco. El uso de anticuerpos monoclonales
de ratón en el diseño del SPIN-F.O.B. asegura un alto grado de especificidad para la detección de
hemoglobina humana.
REFERENCIAS
1. Towler BP, Irwig L, Glasziou P, Weller D, Kewenter J. Screening for colorectal cancer using the faecal occult blood
test, Hemoccult. Cochrane Database Syst Rev. 2000;(2): CD001216.
2. Ransohoff DF and Lang CA. Screening for colorectal cancer with the Fecal Occult Blood Test: a background paper.
Ann Intern Med. 1997; 126: 811-822.
3. Ransohoff DF and Lang CA. Suggested technique for Faecal Occult Blood testing and interpretation in colorectal
cancer screening. Ann Intern Med. 1997; 126: 808-810.
4. Allison JB, Takawa IS, Ransom LJ, Adrian AL. A comparison of fecal occult blood tests for colorectal-cancer
screening. N Engl J Med 1996; 334:155-159.
PRESENTACIÓN
VERDE
ROJO
Ref. 1504010
Ref. 1504011
Ref. 1504012
Zona de control Zona de resultado
(3) (4)
Cont
5 Placas- 5 Tubos tampón
20 Placas-20 Tubos tampón
50 Placas-50 Tubos tampón
ROJO
OSIS23-E 18/11/11 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com