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Vol. 11 - nº 1 - 2013 - CRMV-SP Vol. 11 - nº 1 - 2013 - CRMV-SP

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X X I I I R I T A B r a z i lPT.101VIGILÂNCIA AMBIENTAL DIANTE DO SURTO DE RAIVASILVESTRE NO MUNICÍPIO DE SÃO BENEDITO NO ESTADODO CEARÁ EM 2010Silva MVS 1 , Moura FBP 1 – 1 Secretaria da Saúde do Estado do Ceará – 1 ªCoordenadoria Regional de Saúde de FortalezaIntrodução: Casos relatados de raiva em raposas e transmissão emhumano é relatada nos estados do Ceará¹, Paraíba², Pernambuco, Bahiae Minas Gerais3. Na Serra da Ibiapaba nos meses de maio e junho de 2010no município de São Benedito no Estado do Ceará ocorreram seis casos deraiva em raposa guaxinim nas localidades de Muricituba, Corquinho, SantaLuzia e em Barroquinha. Objetivo: Diagnosticar a situação populacionaldos animais silvestres em áreas com diferentes graus de alteração (moradias,plantações) onde ocorrem agressões, analisando fatores de risco da raiva.Material e método: Foi utilizado GPS na marcação dos locais ondeocorreram ataques para analisar as áreas de vida de cada espécie animalagressora. Vacinação de bloqueio em cães e gatos e trabalho educativoforam realizados. Armadilhas para capturar raposas foram instaladas parapesquisa de circulação do vírus rábico dentro dos limites marcados porGPS. Resultados: A situação epidemiológica da raiva em São Beneditofoi grave, devido o grande número de ataques em seres humanos causadospor raposas e guaxinins. Diagnósticos laboratoriais positivos de diferentesanimais silvestres de comprovaram a circulação viral na região. A utilizaçãoantrópica na Serra da Ibiapaba tem alterado o meio ambiente para atenderos objetivos com fins econômicos, o que comprova a adaptação dos canídeosem áreas alteradas pelo homem, criando legítimos corredores ecológicos, osquais possibilitam às espécies silvestres transitarem livremente para as áreashabitadas por pessoas. Os animais silvestres estão com o potencial de dispersãoe colonização limitadas devido à fragmentação de habitat na zona rural. Coma fragmentação de habitat as doenças emergentes e re-emergentes que já nãopossuíam importância epidemiológica, aparecem em surtos, epidemias ouepizootias numa população e região como em São Benedito. Conclusão: Araiva ainda é um problema imbatível em muitos lugares e um constante desafiopara os serviços de saúde pública, porém, um fato permanece óbvio, o de quea erradicação da raiva humana depende, fundamentalmente, do controle daraiva animal, inclusive com a utilização da vigilância ambiental.Agradecimentos: Aos moradores do município de São Benedito,pela disponibilidade em ceder seu tempo e conhecimento para a realizaçãodesse trabalho. Aos técnicos do Núcleo de Controle de Vetores – Secretaria daSaúde do Estado do Ceará, que acompanharam o primeiro autor em todas asatividades. Aos técnicos e demais servidores da 13ª Coordenadoria Regionalde Saúde de Tianguá. Aos servidores da Secretaria Municipal de Saúde de SãoBenedito.Referências Bibliográficas 1. Barros, J.S.; Freitas, C.E.A.A.; Sousa, F.S.(1989). Raiva em animais silvestres no Estado do Ceará particularmente na raposa (Dusicyonvetulus). Zoon. Rev. Int., 1, 9-13. 2. Gomes, A.A.B. (2004). Epidemiologia da raiva: caracterizaçãode vírus isolados de animais domésticos e silvestres do semiárido paraibano da região dePatos, Nordeste do Brasil. São Paulo, Brasil, 107p. (Thesis, Faculdade de Medicina Veterináriae Zootecnia, Universidade de São Paulo). 3. Araújo, F.A.A. (2002). Raiva humana no Brasil:1992-2001. Belo Horizonte, Brasil, 90p. (M.Sc. Dissertation, Escola de Veterinária, UniversidadeFederal de Minas Gerais).PT.102SEROPREVALENCE OF RABIES VIRUS IN WILDCARNIVORESPeres MG 1 , Bacchiega TS 1 , Martorelli LFA 2 , Kataoka APAG 2 , Vicente AF 1 ,Apollinario CM 1 , Allendorf SD 1 , Antunes JMAP 1 , Megid J 1 – 1 UNESP –School of Veterinary Medicine and Animal Science – Departament ofVeterinary Hygiene and Public Health- Botucatu-SP, Brasil, 2 ZoonosisControl Center – Rabies Laboratory – São Paulo-SP, BrasilAll mammals are susceptible to rabies virus, especially those of the orderCarnivora and Chiroptera. In the wild cycle animals that act as reservoirs varyaccording to region. In Latin America, the bats act as main reservoirs of thevirus in the wild cycle, however the rabies virus has been isolated from otherwildlife species such Cerdocyon thous (Crabeating Fox), Procyon cancrivorus(Crab-eating Raccoon), and Callithrix jacchus jacchus (Common marmose).In this context, this work aimed to analyze the seroprevalence for rabies virusin 9 carnivores captured in areas of large and small forest fragments in therural area in central west region of São Paulo state. Were captured 4 Nasuanasua (Coati), 4 Cerdocyon thous (Crab-eating Fox) and a Leopardus pardalis(Ocelot), with the use of Tomahawk traps containing chicken leg as bait. Theywere anesthetized with Zoletil® (Tiletamine and Zolazepam) and had bloodsamples collected by jugular vein puncture. The blood was placed in collectingtube without EDTA, and serum in microtube. Sera samples were stored at -20° C and than were tested for neutralization in cell culture for the determinationof neutralizing antibodies to rabies virus by rapid method focus inhibition offluorescence (RIFFT). In Cerdocyon thous, that is considered as an importantreservoir for a particular rabies virus variant in Brazil, 75% showed antirabiesantibodies titers above 0,5 UI/mL. These data suggests that rabies virusis presented in the analyzed region and somehow these wildlife species getin contact with rabies virus. It’s important to note that these animals werecaptured in a region of close contact with other humans and domestic animals,representing a possible epidemiological risk.50 mv&z c r m v s p . g o v . b r

X X I I I R I T A B r a z i lPT.103VALORACIÓN DE UN TEST RÁPIDO DEINMUNOCROMATOGRAFÍA EN PLACA PARA LADETECCIÓN DE RABIA EN MUESTRAS FRESCAS Y ENAVANZADA DESCOMPOSICIÓN DE ARGENTINAGury Dohmen F 1 , Barcos O 2 , Cisterna D 3 , Cicuttin G 1 , Mena Segura C 1 ,Beltrán F 4 – 1 Instituto de Zoonosis Luis Pasteur – Diagnóstico, 2 LaboratorioColón, 3 INEI-ANLIS Dr. Carlos Malbrán – Servicio de Neurovirosis,4Instituto de Zoonosis Luis Pasteur, Buenos Aires, ArgentinaEn el presente estudio se evaluó un test de inmunocromatografía (RIDT)para rabia (Rabies Ag Test Kit, Bionote Inc., Korea) de las principales cepasvirales circulantes en la República Argentina, en muestras frescas queincluyeron a los reservorios más frecuentes, como así también en cerebros enavanzado estado de descomposición bajo condiciones de laboratorio. Para ellose realizó el diagnóstico sobre un lote de 50 de muestras clínicas frescas porlas técnicas de IFD, RIDT y EBRL entre los años 2011 y 2012. Para evaluar lascepas de Lasiurus sp (V6) y terrestre silvestre (V2) se utilizaron aislamientosen cerebro de ratón, con la intención de incluir en el ensayo las variantesde mayor circulación del país. Posteriormente se descongelaron 5 cerebrosguardados a -70°C de un brote de rabia canina (V1) 2002-2008. La sensibilidaddel test se valoró con una cepa de virus fijo utilizado en la producción devacuna CRL, previamente titulado en ratones de 21 días y RT-PCR en formaparalela. La concordancia del RIDT con la IFD y EBRL fue del 100% y pudodetectarse hasta la dilución 10-4 del virus fijo, que correspondió a 100 DL50 en0,03ml. Existen regiones de explotación ganadera en el norte del país con rabiaparesiante y otras con antecedentes de rabia de ciclo terrestre de difícil accesocerca de la frontera con Bolivia en donde el veterinario del municipio podríarealizar un primer diagnóstico diferencial a fin de dar parte a las autoridadessanitarias y así aplicar rápidamente las acciones de profilaxis correspondientesa los mordidos y luego remitir la muestra a los laboratorios de referencia paraconfirmación y caracterización de la cepa responsable del brote. En nuestraconclusión el RIDT es de uso muy simple y podría ser considerado de sumautilidad en muestras post-mortem bien conservadas o descompuestas quehayan completado el período de estado de la enfermedad.PT.104USE OF PROPIDIUM IODIDE LIKE A CELULAR CONTRASTSTAINING IN THE DIRECT FLUORESCENT ANTIBODY (DFA)TEST FOR THE RABIES VIRUSES DIAGNOSTIC.Iguala-Vidales M 1 – 1 InDRE – VirologiaIntroduction: Rabies remains one of the most important zoonosisworldwide and represents a serious problem in many countries. Into thediagnostic tools the direct fluorescent antibody (DFA) test is a fast and sensitivemethod to diagnosis rabies infection in animals and in humans (1, 3). The test isbased on microscopic examination, under ultraviolet light, impressions, smearsamples of tissue of the hippocampus (flagpole of Ammon), the cerebellumand the medulla or tissue sections; antibodies (IgG) used in the conjugatemonoclonal allow specific and uniform coloring without interference from thefund.In cell biology, propidium iodide is used as a dye contrast that differentiatesthe nucleus from the cytoplasm (intercalates in DNA) (4), there is evidences ofits use in stains for identification of Herpes Simplex Type 1 (5).Goal: Implement the use of propidium iodide in the diagnosis of the rabiesvirus by direct fluorescent antibody (DFA) test Materials and methods:70 Samples were selected: 50 brains: (25 positive samples of varying degrees ofpositivity (1 + to 4 +) and 25 samples negative) and 20 isolates of the rabies virusin mouse neuroblastoma cell (15 positive samples of varying degrees of positivity(1 + to 4 +) and 5 negative samples) of the rabies laboratory samples bank.The direct fluorescent antibody (DFA) test was applied as indicatedby the supplier Anti-Rabies Monoclonal Globulin (IDF, FUJIREBIO.)(DIAGNOSTICS, Inc.); to the end of the test, added 20 μL of the propidiumiodide solution to a final concentration of 0.3 μg/mL (in each imprint of brainor well cell culture) and it was incubated at room temperature for 5 minutes,it was eliminated by rinsing with PBS pH 7.4, let air dry and was added adrop of buffered glycerin pH 8.4; reading was conducted on an magnificationlens fluorescence microscope 10 X and 40 X. The reading was evaluated for4 people; 2 experts in rabies diagnosis and 2 people in the learning process.Results and conclusion: Of the 50 samples brains were obtained thefollowing results; 25 positive samples of varying degrees of positivity (1 + to 4+) and 25 negative samples and all 20 isolates of the rabies virus of in mouseneuroblastoma cell (15 positive samples of varying degrees of positivity (1 + to4 +) and 5 negative samples; all samples coincided with the previously reportedresults. All personnel involved in reading coincided in the ease of identify thenucleus of the cell in the brain imprints as well as in cell culture slides. Becauseof the propidium iodide is used to staining the DNA, were watched the cellsnucleus of red-orange color; likewise facilitated the identification of infectionin the cytoplasm of the cell (in positive cases) by the fluorescent apple greencontrast of the fluorescein isothiocyanate (FITC) fluorochrome, that isconjugated to the monoclonal antibodies targeting the protein of rabies virus.Therefore, it is concluded that the use of propidium iodide does notinterfere in the DFA test it is concluded that the use of propidium iodide doesnot interfere in the DFA test, since all results were identical to the reported inthe samples tested before; the use of propidium iodide is helpful mainly fortechnical staff who do not have experience in identifying cells in imprints andcell culture; the use of propidium iodide allows a contrast which facilitates theidentification of the fluorescence of the rabies virus.c r m v s p . g o v . b rmv&z51

X X I I I R I T A B r a z i lPT.101VIGILÂNCIA AMBIENTAL DIANTE DO SURTO DE RAIVASILVESTRE NO MUNICÍPIO DE SÃO BENEDITO NO ESTADODO CEARÁ EM 2010Silva MVS 1 , Moura FBP 1 – 1 Secretaria da Saúde do Estado do Ceará – 1 ªCoordenadoria Regional de Saúde de FortalezaIntrodução: Casos relatados de raiva em raposas e transmissão emhumano é relatada nos estados do Ceará¹, Paraíba², Pernambuco, Bahiae Minas Gerais3. Na Serra da Ibiapaba nos meses de maio e junho de 2010no município de São Benedito no Estado do Ceará ocorreram seis casos deraiva em raposa guaxinim nas localidades de Muricituba, Corquinho, SantaLuzia e em Barroquinha. Objetivo: Diagnosticar a situação populacionaldos animais silvestres em áreas com diferentes graus de alteração (moradias,plantações) onde ocorrem agressões, analisando fatores de risco da raiva.Material e método: Foi utilizado GPS na marcação dos locais ondeocorreram ataques para analisar as áreas de vida de cada espécie animalagressora. Vacinação de bloqueio em cães e gatos e trabalho educativoforam realizados. Armadilhas para capturar raposas foram instaladas parapesquisa de circulação do vírus rábico dentro dos limites marcados porGPS. Resultados: A situação epidemiológica da raiva em São Beneditofoi grave, devido o grande número de ataques em seres humanos causadospor raposas e guaxinins. Diagnósticos laboratoriais positivos de diferentesanimais silvestres de comprovaram a circulação viral na região. A utilizaçãoantrópica na Serra da Ibiapaba tem alterado o meio ambiente para atenderos objetivos com fins econômicos, o que comprova a adaptação dos canídeosem áreas alteradas pelo homem, criando legítimos corredores ecológicos, osquais possibilitam às espécies silvestres transitarem livremente para as áreashabitadas por pessoas. Os animais silvestres estão com o potencial de dispersãoe colonização limitadas devido à fragmentação de habitat na zona rural. Coma fragmentação de habitat as doenças emergentes e re-emergentes que já nãopossuíam importância epidemiológica, aparecem em surtos, epidemias ouepizootias numa população e região como em São Benedito. Conclusão: Araiva ainda é um problema imbatível em muitos lugares e um constante desafiopara os serviços de saúde pública, porém, um fato permanece óbvio, o de quea erradicação da raiva humana depende, fundamentalmente, do controle daraiva animal, inclusive com a utilização da vigilância ambiental.Agradecimentos: Aos moradores do município de São Benedito,pela disponibilidade em ceder seu tempo e conhecimento para a realizaçãodesse trabalho. Aos técnicos do Núcleo de Controle de Vetores – Secretaria daSaúde do Estado do Ceará, que acompanharam o primeiro autor em todas asatividades. Aos técnicos e demais servidores da 13ª Coordenadoria Regionalde Saúde de Tianguá. Aos servidores da Secretaria Municipal de Saúde de SãoBenedito.Referências Bibliográficas 1. Barros, J.S.; Freitas, C.E.A.A.; Sousa, F.S.(1989). Raiva em animais silvestres no Estado do Ceará particularmente na raposa (Dusicyonvetulus). Zoon. Rev. Int., 1, 9-13. 2. Gomes, A.A.B. (2004). Epidemiologia da raiva: caracterizaçãode vírus isolados de animais domésticos e silvestres do semiárido paraibano da região dePatos, Nordeste do Brasil. São Paulo, Brasil, 107p. (Thesis, Faculdade de Medicina Veterináriae Zootecnia, Universidade de São Paulo). 3. Araújo, F.A.A. (2002). Raiva humana no Brasil:1992-2001. Belo Horizonte, Brasil, 90p. (M.Sc. Dissertation, Escola de Veterinária, UniversidadeFederal de Minas Gerais).PT.102SEROPREVALENCE OF RABIES VIRUS IN WILDCARNIVORESPeres MG 1 , Bacchiega TS 1 , Martorelli LFA 2 , Kataoka APAG 2 , Vicente AF 1 ,Apollinario CM 1 , Allendorf SD 1 , Antunes JMAP 1 , Megid J 1 – 1 UNESP –School of Veterinary Medicine and Animal Science – Departament ofVeterinary Hygiene and Public Health- Botucatu-SP, Brasil, 2 ZoonosisControl Center – Rabies Laboratory – São Paulo-SP, BrasilAll mammals are susceptible to rabies virus, especially those of the orderCarnivora and Chiroptera. In the wild cycle animals that act as reservoirs varyaccording to region. In Latin America, the bats act as main reservoirs of thevirus in the wild cycle, however the rabies virus has been isolated from otherwildlife species such Cerdocyon thous (Crabeating Fox), Procyon cancrivorus(Crab-eating Raccoon), and Callithrix jacchus jacchus (Common marmose).In this context, this work aimed to analyze the seroprevalence for rabies virusin 9 carnivores captured in areas of large and small forest fragments in therural area in central west region of São Paulo state. Were captured 4 Nasuanasua (Coati), 4 Cerdocyon thous (Crab-eating Fox) and a Leopardus pardalis(Ocelot), with the use of Tomahawk traps containing chicken leg as bait. Theywere anesthetized with Zoletil® (Tiletamine and Zolazepam) and had bloodsamples collected by jugular vein puncture. The blood was placed in collectingtube without EDTA, and serum in microtube. Sera samples were stored at -20° C and than were tested for neutralization in cell culture for the determinationof neutralizing antibodies to rabies virus by rapid method focus inhibition offluorescence (RIFFT). In Cerdocyon thous, that is considered as an importantreservoir for a particular rabies virus variant in Brazil, 75% showed antirabiesantibodies titers above 0,5 UI/mL. These data suggests that rabies virusis presented in the analyzed region and somehow these wildlife species getin contact with rabies virus. It’s important to note that these animals werecaptured in a region of close contact with other humans and domestic animals,representing a possible epidemiological risk.50 mv&z c r m v s p . g o v . b r

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