Characterization of yield, sensitivity to Botrytis cinerea and ...

1עלי הכותרת של הורדים נצרכו בתרבויות שונות למשך תקופה כה ארוכה במיוחדכריבה,‏ תה,‏ עוגיות,‏ וכתמציות טעם )2003 .)Cutler, וגם שימשו גם כתרופות למחלותשונות בתחומים הרפואיים )2003 Gorji, .)Cutler, ;2003 בשנים האחרונות נרקמתKelley, 2002; Kelley, 2001; Kelley,דרך להשתמש בפרחים כיבול טרי ואכיל (Burfield, 2005 ,)2001; Kelley, 2002; Kelley, 2001; והורדים בצבעיהם הרב-‏גוניים וניחוחם הנעים הינם מועמדים מצוינים למסחור כיבולים טריים ובעיקראכילים.‏בכדי לגדל את עלי הכותרת של הפרחים כיבול טרי חדש,‏ בחירת זנים ראויים,‏ בעליאיכות מתאימה,‏ שמאופיינים בכמות יבול גדולה,‏ והיכולת לעמוד בטיפול אחריהקציר כמו זו של הפרחים מסוג-‏ ,Tropaeolum Majus הינה דבר הכרחי)2005 .)Friedman, התועלת הבריאותית של התוצר,‏ כמו כן,‏ מוסיפה רבות לטיבו שלהיבול הטרי החדש )2005 .)Gruda,עלי הכותרת של הפרחים ידועים להכיל רמה גבוהה של נוגדי חמצון,‏ ובמיצוייםהעשויים מעלי הכותרת של ה-‏,Rosa de Castillo הרמה שלהם נחשבת לגבוההביותר בקרב 30 צמחיים תרופתיים )2002 .)VanderJagt,הרמות הכי גבוהות שלRosaושל anti-peroxynitriteגם כן נמצאו בתה שהוכן מ-‏anti-hypochloriteMoschata בהשוואה לתה שהוכן מצמחים אחרים )2006 ,)Speisky, ובמחקרRosaקודם,‏נמצא שרמת נוגדי החמצון בתה שהוכן מכמה זניהייתה שווה לרמהשלהם בתה ירוק )2006 .)Vinokur,עמידות לגורמי מחלות בתקופה אחרי הקציר הינה תכונה חשובה נוספת ליבוליםBotrytis cinereaאכילים טריים.‏ הפרחים של הורדים הינםרגישיםלפטרייה-‏.)Gleason, 2003(ויכולתהאחסון שלהם תלויה באופן הדוקלרגישותןזו למחלההרגישות לזיהום הנגרם מ-‏Botrytisנבחנה ונבדקהבעברעבור מבחר זנים טרייםשפרחיהם מיועדים לקישוט )1993 Pie, ,)Hazendonk, ;1995 וגם כן לכמה זנים

3ניסויים שלנו בוצעו במחלקה לטכנולוגיה ואיחסון תוצרת חקלאית לאחר הקטיףבמרכז וולקני-‏ מינהל המחקר החקלאי,‏ בית דגן.‏ העבודה התבצעה במכון לטכנולוגיהולאחסון של תוצרת חקלאית.‏ מרכז וולקני הוא המוסד הגדול ביותר בישראל העוסקבמחקר חקלאי.‏ תפקידו לסייע לחקלאי ישראל בבעיות שונות ולבצע מחקר ופיתוחבנושאים חדשים ומבטיחים בחקלאות ובמדעי המזון.‏המחלקה לטכנולוגיה ולאחסון עוסקת,‏ בין שאר,‏ בתהליכים פיזולוגיים,‏ כימייםוביוכימיים של תוצרת חקלאית לאחר הקטיף:בהחלפת תוספות מזון כימיקליותבטבעיות ‏)כדוגמת חומרי צבע ואנטיאוקסדנטים(‏ ובשיפור איכותם של מוצרי מזון,‏כגון פירות וירקות.‏ כיום,‏ הנושא של אנטיאוקסדנטים תופס תאוצה בקרב תעשייתמוצרי הבריאות,‏ ומסתמן כדרך חדשנית לפתרון בעיות שונות.‏רדיקל הוא מולקולה מעורערת מבחינה אנרגטית,‏ כלומר מולקולה שלאחד האטומיםבה,‏ יש אלקטרון בלתי מזווג.‏ היא ‏"שואפת"‏ להשלים את האלקטרון החסר להממולקולות אחרות בסביבתה.‏ לכן,בהימצא מולקולה שאינה מעורערת מבחינהאנרגטית באיזור,‏ הרדיקל ‏"יתלוש"‏ ממנה אלקטרון.‏ גם מולקולה זו תהפוךלמעורערת-‏ לרדיקל,‏ וכך תימשך השרשרת.‏ כאשר רדיקלים ‏"תולשים"‏ אלקטרוניםמהמולקולות של קרום התא,‏ נוצרים שומנים מחמצנים שעלולים לגרום להרס התא.‏רדיקלים חופשיים נוצרים בגוף באופן טבעי,‏ כתוצאה מחילוף חומרים.‏ הם נמצאיםגם בסביבה,‏ למשל באוויר מזוהם,‏ בעישון סיגריות,‏ בחומרים כימיקלים שונים ועוד.‏נוגדי חמצון ( אנטיאוקסידנטים(‏ הם תרכובות המסייעות בנטרול הרדיקליםהחופשיים,‏ ולפיכך מסייעים במניעת מחלות שונות והזדקנות מוקדמת כתוצאהמהרס רב של תאים.‏נוגדי חמצון נמצאים במזון,‏ למשל בירקות ובפירות שונים,‏ ולעתים אף נוצרים בגוףבאופן טבעי.‏ ויטמיןנפוצים.‏E ויטמין ,Cובטא קרוטן הם דוגמאות לאנטיאוקסידנטים

55מ"מ אך שכיחותם בטבע מועטה ביותר.‏ היווצרותם ידועה בכ-‏‎15‎ מתןךמיני 22הבוטריטיס.‏ השלב המיני של .Botrytis spp משייך אותו למינים שונים של)Ascomycotina( ,Botryotinia אך הוא הנדיר יותר.‏פטריית בוטריטיס תוקפת מגוון רחב של פונדקים:‏ גפן,‏ תות שדה,‏ מלפפון,‏ ורדים ועודרבים אחרים.‏ הפטרייה מתפתחת כתפטיר אפור.‏ על כן היא נקראת בשפה העממית"‏העובש האפור".‏ מציאת מדביר ידידותי לסביבה נגד פטרייה זו,‏ עשוי להיות רבחשיבות הן לחקלאי והן להיבט הסביבתי.‏הנציג הטיפוסי של הסוגהפטרייה מחוללת מחלת העובש האפור,‏ נמנית עם ה-‏Hyphomycetesוהיא הצורההאל-‏ מינית של הפטרייהכאמור,‏.Botryotinia fuckeliana WhetsB.cinereaהיא המין הנפוץ והמזיק ביותר של הסוג.‏ הפטרייה תוקפתגידולים שונים בחממה,‏ בשדה ובמהלך האחסנה.‏ בארץ נפגעים גידולי חממה כגוןמלפפון,‏ עגבנייה,‏ פלפל,‏ חציל,‏ שעועית ותות שדה,‏ וכן פרחים,‏ כגון גרברה וורדים.‏מחוץ לחממה נפגעים גידולים כגון,‏ ענבים ורוסקוס הגדל תחת רשת.‏ בוורדיםלדוגמה,‏ המחלה פוגעת בעלים,‏ בגבעולים ובעיקר בפרחים.‏ במהלך הגידול הפטרייהעשויה לחדור לרקמת הצמח בשלב זה,‏ בדרך כלל,‏ לא נראים תסמיני המחלה ‏)הדבקהרדומה(.‏ הללו מופיעים רק בשלבים מאוחרים יותר ובעיקר לאחר הקטיף.‏ על גבירקמה צמחית רקובה מופיע העובש האפור,‏ כלומר תפטיר ונבגים על גבי נושאי נבגים.‏בנוסף לתסמינים אלה נוצרות צלקות מוגבלות בגודלן,‏ ללא עובש נראה לעין.‏ הנבגיםהנוצרים על גבי הרקמה,‏ בתנאי לחות גבוהה,‏ משתחררים לאוויר בעת ירידה בלחותהיחסית של האוויר.‏ קרינה באור אולטרה סגול או אינפרא אדום משרה ייצור נבגים,‏ואילו קרינת אור אדום וכחול מעכבת את יצירתם.‏ עם זאת,‏ ידועים גם תבדדיבוטריטיס המנביגים בחושך.‏ בתרבית,‏ הפטרייה עשויה ליצור מיקרוקונידיות,‏ שאיןלהן חשיבות ביצירת המחלה.‏בתרבית נוצרים גם קשיונות אשר חשיבותם במעגל חיי הפטרייה בטבע רק במקריםמיוחדים,‏ ואין להם חשיבות בהפצת המחלה.‏

6תהליך ההדבקההחדירה לפונדקאי יכולה להתבצע על ידי קורי נביטה של הנבגים או על ידי תפטיר,‏שהתבסס על חלקי צמח מתים או חיים.‏ חדירת קורי הנביטה לצמח נעשית דרךפיוניות,‏ דרך פצעים או ישירות מבעד לקוטיקולה.‏ חדירת הפטרייה מתרחשת באיבריצמח שונים בהתאם לרגישות לפתוגן:‏ בעלי כותרת וגביע,‏ בעלים,‏ בפילוקלדים‏)ברוסקוס(,‏ בגבעולים ואף בשורשים.‏ תהליך החדירה לרקמה הוא אנזימטי.‏ מעקבאחרי תהליך ההדבקה בעגבניות הראה לעתים התמוססות של הקוטיקולה,‏ ללאסימני קריעה.חדירה לרקמת פרחים וחנטי מלפפון נעשית בעיקר דרך פיוניות,‏ ובעליכותרת החדירה ישירה מבעד לקוטיקולה.‏ מנחשוני הנביטה יכולים להתפתח איבריחדירה שונים,‏ המושפעים מריכוז הנבגים ומנוכחות ומהרכב חומרי מזון.‏מעורבות אנזימים בתהליך ההדבקהבמהלך החדירה והתפתחות המחלה מפרישה הפטרייה אנזימים רבים.‏ הקוטיקולהמהווה את המחסום הראשון של הפטרייה במהלך החדירה לפונדקאי.‏ לפיכךלקוטינאזות)cutinase(תיתכן חשיבות בתהליך ההדבקה.‏ שימוש בנוגדניםמונוקלונלים כנגד פעולת האנזים הפחית את המחלה בפרחי גרברה.‏ אך לעומת זאתמוטנט של הפטרייה חסר גן ליצור האנזים היה מסוגל להדביקם.‏הפקטין מהווה רכיב מרכזי בלמלת הביניים.‏ פירוק הפקטין מביא לפירוק הרקמהולפגיעה בתאי הצמח.‏ הפטרייה מפרישה אנדו ואקסו ‏"פקטינאזות"‏ שיכולים להיותהידרולאזות,‏ אסטראזות או ליאזות.‏ חומצה D- גלקטורונית בריכוז קטן עודדה אתפעילותם.‏ בדומה למוזכר לעיל בקשר לעיכוב קוטינאזי,‏ מעכיבים ייחודיים שלפוליגלקטורונאזPG-עיכבו את המחלה בצמחים שונים,‏ בתנאי מעבדה.‏ לאחרונהנמצא,‏ שבגידולים רבים מפרישה הפטרייה בוטריטיס פרוטאזה חומצית בשלביםהראשונים של תהליך ההדבקה,‏ עוד לפני הפרשת אנזימים פקטוליטיים ואחרים.‏עיכוב האנזים הפחית במידה רבה את הנגיעות במחלה.‏ לקטאז,‏ צלולאז ופוסליפאז,‏הם אנזימים נוספים המופרשים על ידי מחולל המחלה,‏ וחשיבותם בתהליך ההדבקהנבדקת.‏

7השפעת תנאי הסביבה על התפתחות המחלהתנאי הסביבה המשפיעים על מחולל המחלה ועל הפונדקאי ומהווים גורם מרכזיבהצלחת התפתחות המחלה.‏ ככלל מתפתחת המחלה בתנאי לחות יחסית גבוהה.‏נביטת נבגי הבוטריטיס מתרחשת בתנאי רטובות.‏ הנביטה והתפתחות קורי הנביטהאינן מושפעות מהלחות היחסית של האוויר,‏ והן מותנות בקיומם של מים חופשיים עלפני הרקמה.‏ למשך הימצאות המים החופשיים על פני הרקמה יש חשיבות רבהלהצלחת תהליך ההדבקה.‏ אולם במלפפונים לא נמצא מתאם בין זמני הרטבה שלהעלה לבין רמת המחלה,‏ הגורמים הקבועים היו הטמפרטורה והלחות היחסית.‏ ישנםדיווחים על הידבקות בלחות יחסית גבוהה.‏ למשל:‏ פרחי גרברה נדבקים ב-‏ 95%,ורדים-‏ ב‎80%‎‏.‏ ניתן לפרש את השונות בדיווחים בהסתמכות על מדידות לחות יחסיתדווקא,‏ ולא על נוכחות מים חופשיים על האתרים הנגועים בלחויות אוויר לא רווי.‏בכרם,‏ תנועת אוויר המייבשת אשכולות ענבים ומסייעות לפיתוח דופן עבה מפחיתיםמחלה.‏הטמפרטורה המאפשרת את התפתחות המחלה משתנה בין גידולים שונים.‏ המחלהעשויה להתפתח על פני רקמה צמחית בטמפרטורות נמוכות0-125-30מ"צ.‏ הטמפרטורותמ"צ.‏ קיים פיצוי בין תנאי לחות יחסית לטמפרטורה בעידוד המחלה,‏ כך שגםבתנאי טמפרטורה או לחות יחסית תת מיטיביים תיתכן מגפה.‏נוכחות חומרי מזון מעודדת את נביטת הנבגים,‏ אך אין היא תמיד הכרחית.‏ בתרבית,‏תבדידים מסוימים מסוגלים לנבוט ללא חומרי מזון,‏ ואילו אחרים זקוקים לתוספתסוכרים וחומצות אמינו.‏ אולם מרקמת הצמח דולפים סוכרים,‏ חומצות אמינו,‏חומצות אורגניות ויטמינים והורמונים צמחיים,‏ המסייעים לנביטה , עודדו נביטה.‏לג'ברלין ולקינטין לא היתה השפעה על הנביטה,‏ ואילו חומצה אנדול-‏ אצטית עודדהאותה במידה קטנה.‏ אופי רקמת הפונדקאי מהווה גורם נוסף הקובע את התפתחותהמחלה גם ללא תוספת חומרי מזון ממקור חיצוני.‏תיאור התפתחות המחלה שגורמתבוורדB.cinereaבזנים נבחריםגידול הוורד נפגע ביותר ממחלות שגורמות פטריית הבוטריטיס.‏ הדבקת הוורדיםמתרחשת בעיקר בעת הגידול,‏ אך גם לאחר הקטיף.‏ גם כאשר ההדבקה מתרחשת כעתהגידול,‏ התסמינים עשויים להופיע לאחר קטיפת הפרח-‏ בעלי כותרת מזדקנים.‏

8בתחילה ניתן לראות כתמים קטנים או בליטות קטנות על פני עלי הכותרת,‏ והםמתפתחים לכתם נקרוטי ולריקבון רך.‏ בשלב מאוחר ניתן להבחין גם בעובש אפור,‏המתפשט על פני הרקמה.‏ חדירת הפטרייה לרקמה מתרחשת גם ללא תוספת שלחומרי מזון וללא יצירת אפרסוריום ‏)כרית הדבקה(.‏לאחר החדירה מבעד לקוטיקולה ישנה התנפחות של תאים אפידרמליים.‏ מתרחשיםתהליכי פירוק מהירים כתוצאה מהפרשת אנזימים מפרקי דופן ורעלים על ידי גורםהמחלה.‏ התפטיר גדל בין תאי האפידרמיס וגורם להתמוטטויות של תאים,‏ והללומתכסות על ידי הקוטיקולה.‏ יתכן שתאים אלה גורמים להופעת נקודות לבנות על פניעלי הכותרת,‏ בשלבים ראשוניים של המחלה.‏ בחממה ניתן למצוא את המחלה עלגדמים,במקומות פציעה על הגבעול,‏ על עלי הכותרת ועל ענפים צעירים ‏)ענפי מים(‏ובמספר זנים-‏ אף על עלי הכותרת.‏רדיקלים חופשייםמהם הרדיקלים החופשיים?‏בתהליך הנשימה נקלט בגופנו חמצן,‏ הגורם לתגובה כימית בתאים-‏ חמצן.‏ תהליךהחמצון המתרחש בגוף האדם אמנם חיוני מאוד,‏ אולם הוא עלול להוביל לנזקיםחמורים כאשר הוא רב מדי.‏במצב של חמצון יתר,‏ התוצאה היא התהוות מולקולות הידועות בשם רדיקליםחופשיים ‏)מחמצני יתר(.‏ רדיקלים חופשיים הם מולקולות מעורערות מבחינהאנרגטית בעלות אלקטרונים לא מזווגים,‏ הלוקחות אלקטרון ממולקולות שאינןכאלה.‏ כאשר רדיקל חופשי נמצא בקרבת תא בגוף,‏ הוא נוטה ‏"לתלוש"‏ אלקטרוניםממולקולות קרום התא,‏ וכאשר הוא נוצר בתוך התא במהלך חילוף החומרים,‏ הוא‏"תולש"‏ אלקטרונים ממולקולות בתוך התא.‏ בכך הופך אף אותן לרדיקלים חופשיים.‏כך נוצרת שרשרת מסוכנת של מולקולות הורסות-‏ תאים.‏ מספר קטן של רדיקליםחופשים בגוף יכול לגרום נזק למולקולות רבות אחרות,‏ ולמנוע מהגוף לתפקד כראוי.‏הרס המולקולות הזה מתרחש בגופנו ללא הרף.‏הרדיקלים החופשיים בגוף נוצרים במהלך תהליכים מטבוליים,‏ אך הם גם יכוליםלחדור לגוף ממקורות חיצוניים כמו,‏ מזון,‏ מים,‏ עשן טבק,‏ אוויר מזוהם,‏ אלכוהול,‏תרופות,‏ כימיקלים מזיקים,‏ קרני השמש,‏ מזון מעושן וצולי על האש ועוד.‏אם המולקולות שהותקפו על ידי הרדיקלים החופשיים הן חלבונים ואנזימים,‏ אוחומצות גרעין,‏ לדוגמא ,DNA הקובעות את התכונות הגנטיות,‏ עלול להתפתח נזקשיתבטא במחלה הקשורה לתפקוד התקין של המולקולות בהן פגע הרדיקל החופשי.‏

10להביא למחלת הסרטן.‏ במחקר שנערך בלונדון הוכח,‏ כי לצריכה רבה בילדות שלפירות המכילים אנטיאוקסידנטים,‏ יש השפעה לטווח רחוק באשר לסיכון לחלותבסרטן בבגרות.‏Botrytis cinereaמטרת העבודה:‏1. לבחון את רגישות זני וורדים שונים להתקפת הפטריה הפתוגנית2. בחינת טיפולים לאחר הקטיף המשפרים עמידות הפרח להתפתחות הרקבון.‏3. לבחון האם ישנו מתאם בין שיעור האנטיאוקסידנטים בוורד לעמידות כנגדהפטרייה הפתוגנית בוטריטיס.‏

11טרולוקס ושיטת ה-‏equivalent Troloxטרולוקס הוא נגזרת מסיסה במים של ויטמיןE, והוא בעל תכונותאנטיאוקסדנטיביות חזקות.נוסחתו הכימית C. 14 H 18 O 4 לרוב הוא נמכר בצורת אבקהלבנה.‏הטרולוקס היה גורם חשוב בניסוי,‏ כדי לחשב את רמת הפעילותהאנטיאוקסידטיבית בדגימות רקמת הצמח שנלקחו לניסוי ‏)צמחי סליקוורניהשטופלו ב-‏ 5 רמות מלח(,‏ השתמשנו בשיטת חישוב שנקראת.Trolox equivalentהשיטה מבוססת על השוואת העוצמה האנטי-‏ חמצונית של הדגימות שנבדקו עםהעוצמה של תמיסת טרולוקס בריכוז של .1mM העוצמה האנטי חמצונית נמדדהבעזרת ספקטרופוטמטר לפי החלשת הצבע הכחול של הרדיקל.‏החופשי(‏ לאחר הוספת(ABTS*+ הרדיקל10מיקרוליטר של נוגד חמצון ‏)דגימה או טרולוקס(‏ ל-‏‎1‎ מ"לשל תמיסת הרדיקל,‏ הדוגמאות נכנסו לספקטרופוטומטר.‏לאחר שקבלנו את הקריאות שנתן הספקרופוטומטר לגבי כל דגימה,‏ וכן לגבי תמיסתטרולוקס 1 mM.TEmMהנוסחה:‏השתמשנו בנוסחה לחישוב הפעילות האנטיאוקסדטיבית ביחידותTE(mM)=(Sample -Blank)/(Standard – Blank)מכשירים שהשתמשנו בהם:-‏ספקטרופוטומטר:-העין האנושית יכולה לזהות הבדלים בצבע,‏ ולפיכך גםללא מכשיר,‏ ניתן לקבוע האם תמיסה היא מרוכזת יותר או פחות במקריםמסוימים,‏ אך לא ניתן לזהות הבדלים זעירים בין ריכוז תמיסות ללא שימושבמיכשור מתאים.‏ לשם כך משתמשים במכשיר הקרוי ספקטרופוטומטר,‏המודד את כמות האור הנבלעת בתמיסה ‏)בניסוי שלנו הרדיקל היה זה שבלעאת האור(,‏ בעזרת השוואת עוצמת האור המוקרנת על התמיסה)באורך גלאותו קובעים מראש(‏ לעוצמת האור היוצא ממנה.‏ כמות האור ‏)האנרגיה(‏.1

12הנבלעת בתמיסה תלויה בגורמים שונים:‏ ריכוז התמיסה,‏ רוחב תא הדגימה,‏אורך הגל של האור ומסס שבו משתמשים.‏אחת הבדיקות הנפוצות בהן משתמשים בספקטרופוטומטר היא יצירת תגובהבין תמיסה המכילה חומר כלשהו לאינדיקטור הגורם לשינוי צבעה שלהתמיסה.‏ עוצמת הצבע המתפתחת מעידה על ריכוז החומר בתמיסה.‏הספקטרופוטומטר מקרין אור באורך גל מסוים על התמיסה הנוצרת.‏ חלק מןהאור יעבור את התמיסה הנוצרת.‏ חלק מן האור יעבור את התמיסה וחלקייבלע בה.‏ ההבדל בין כמות האור שהוקרנה על התמיסה לבין כמות האורשעברה אותה ילמד אותנו על ריכוז החומר.‏ במקרה שלנו האנטיאוקסידנטים‏)ביהנם הטרולוקס(‏ מפחיתיפ את הצבע של הרדיקל.‏ לכן התוצאות שקבלנומהספקטרופוטומטר הן שליליות.‏פיפטה Pipette(-:או;Pipet בעברית:‏המשמש להעברה של כמויות קטנות שלטפטפת(‏ היא מכשיר מעבדתינוזלים.‏ הפיפטה משמשת רבותבמעבדות כימיה וביולוגיה.קיימים דגמים רבים של פיפטות השונים זה מזהבדרגת הדיוק וביכולת לשנות את כמות הנוזל המועברת.‏.2הפיפטות הפשוטות ביותר מורכבות מצינור פלסטיק דק אשר בקצהו האחד חור ‏)אותוטובלים בנוזל(‏ ובקצהו השני בועית פלסטיק,‏ אותה לוחצים קלות לפני טבילת

13הפיפטה בנוזל.‏ הלחיצה על הבועית יוצרת ריק בצינור הפלסטיק;‏ כשהצינור טבולבנוזל מרפים מהבועית והנוזל,‏ ה"שואף"‏ למלא את הריק,‏ זורם במעלה הצינור.‏באמצעות לחיצה נוספת על הבועית משתחרר הנוזל.‏ פיפטות מסוג זה ניתן למצואלעתים קרובות בתכשירים רפואיים נוזליים אותם ניתן לרכוש בבית המרקחת,‏ כגוןטיפות אוזניים,‏ עיניים ואף וכן תמיסת יוד המשמשת לחיטוי.‏ פיפטה זו אינה מדויקתכלל,‏ שכן כמות הנוזל הנשאבת תלויה בלחץ שמופעל על הבועית.‏ לא ניתן לחזותבדייקנות את כמות הנוזל שנשאבת בפיפטה זו.‏ במעבדות משתמשים בפיפטה זובמקרים בהם הכמות המדויקת של הנוזל אינה משמעותית.‏הפיפטות השכיחות ביותר במעבדה הן המיקרופיפטות;‏ במקום ללחוץ על בועית ישללחוץ על כפתור בראש הפיפטה;‏ על ידי סיבוב הכפתור ניתן לקבוע בדייקנות אתכמות הנוזל שתישאב.‏ לפיפטות הרגישות ביותר הפרדה רשמית של0.0110(1מיקרוליטרנאנוליטר(,‏ אם כי רמת הדיוק בדרך כלל אינה נשמרת כשמדובר בכמויות כהמזעריות.‏ הכמות המקסימאלית שמסוגלת לשאוב המיקרופיפטה הגדולה ביותר היאמיליליטר.‏ לשם הנוחות והדיוק מיוצרות פיפטות בעלות טווחי ביניים,‏ בדרך כללבעלות שאיבה מקסמילית של2 מק"ל,‏ 10 מק"ל,‏ 20 מק"ל,‏ 100 מק"ל,‏1,00010 או 8(200 מק"ל ו-‏מק"ל.‏ על איש המעבדה להפעיל שיקול דעת ולהחליט על הפיפטה המתאימהביותר לפעולה מסוימת,‏ פיפטה אשר מצד אחד תציע דיוק מרבי ‏)כאן ניתנת עדיפותלפיפטות הקטנות יותר(‏ ואשר מצד שני תוכל לשאוב את כל הכמות הרצויה.‏ אתהמיקרופיפטה עצמה לא טובלים באופן ישיר בנוזל,‏ אלא מלבישים עליה קצה חד-‏פעמי מפלסטיק,‏ שנקרא טיפי.‏פיפטות מתוחכמות יותר מצוידות במנוע חשמלי זעיר אשר יוצר ריק כשהוא מופעל,‏באמצעות לחיצה על כפתור.‏ פיפטות אחרות ‏)ידניות וחשמליות(‏ מכילות קצוות רביםבדרך כלל(,‏ דבר המאפשר שאיבה סימולטנית של מספר נוזלים ממספרמיכלים נפרדים.‏האורגניזם הנחקר וגידולוזני הפרחים נבחרו,‏ ממבחר ורדי הגינון המוצעים ממשתלת Zur” ,“Keren בקפדנות.‏קריטריונים כמו העדר מרירות,‏ כבילות או מרקם עצי הוו משען לבחירה זו.‏ עשריםוארבעה זנים נבחרו ונועדו פרחי מאכל טריים.‏ ובמחקר הזה התמקדנו ב242006( .)Vinokur, בחודש פברואר 2007הזניםהושתלו צמחים ששורשיהם חשופים בשדהפתוח באדמה עם אופי חולי .)sandy( הצמחים הושקו דרך תמיסת הדשיה ‏)יישום בו

14זמני של דשן ומים:‏)Fertigationהמכילה את הדשן )20/20/20(, NPK וגוזמו אחריכל גל לבלוב/פריחה.‏ לא ניתן טיפול כימי כל שהוא לכל תקופת הגידול.‏ עקבנו אחרייבול הפרחים השבועי למשך64לצמח אחד ± .SDשבועות.‏ התוצאות מופיעות כיבול ממוצע מצטברהערכת הרגישות של זני הפרחים השונים ל-‏ Botrytis cinereaתרבית של .B cinerea התקבלה מפרחים נגועים.‏ לאחר מכן גודלה התרבית גודלה על.)PDA, Difco(גבי מצע גידול העשוי אגר מסוג (PDA) potato dextrose agarתרחיף )suspension( נבגים הוכן מהנבגים הנמצאים בקצוות של תרביות .B cinereaבנות שבועיים.‏ הנבגים הוסרו באמצעות לולאה בקטריולוגית,‏ ויוצר תרחיף במיםמזוקקים סטריליים,‏ סונן באמצעות4שכבות של בד כותנה אוורירי סטרילי בכדילהסיר את שאריות התפטיר ‏)גוף הפטרייה המורכב מקורים רבים.)mycelia:שיטהבדיקה )bioassay( לקביעת רגישותם של עלי הכותרת של פרחי מאכל מזניםB. cinereaשונים לפטריית -בוצעה על עלים נפרדים שנתלשו מצמח האם.‏ עליהכותרת ששמשו לצורך ה-‏bioassayנלקחו מהדור- whorl -‏)ספירלית עלים בעלתמרכז אחד(‏ השני עד החמישי כשסופרים מהדור החיצוני ביותר.‏ מס'‏ עלים טוטלי של9-15עלי כותרת נאסף מ2-3פרחים ו-‏3-4עלי כותרת אינדיבידואליים הוצבו על ניירסינון לח בתוך צלחות פטרי סטריליות כעותקים מדויקים.‏ טיפה בנפח שלהמכילה תרחיף נבגים של ה-‏20 μl)5X10 4 -10 5 spores/ml( B. cinerea הונחה באמצעהעלה,‏ מים סטריליים שמשו כקבוצת ביקורת.‏ אחוז השטח הפגוע נקבע אחריימים של אינקובציה בטמפ'‏ 20 o C בתוך צלחות סגורות.‏4-10ההדבקה טבעית של זני הפרחים השונים ל-‏B. cinereaנקבעה באופן מיידי לאחרהחליף או מיד אחרי תום תקופת האחסון.‏ הפרחים הטריים הקטופים שהוטבלובתמיסת כלור אורגני Israel( )TOG 6, Milchan Bross Ltd., רוססו בצורהאוורירית במים וכוסו בשקיות העשויות .polyethylene שקיות אלו ובתוכם הפרחיםנסגרו למשך יומיים עם גומייה.‏ חומרת הסימפטומים נקבעה אחריימים של 6

15אינקובציה בטמפ'‏ 20. o C החומרה של ההדבקה נקבעה ע"י הערכה ויזואלית של אחוזהפרחים שנפגמו מ-‏ .Botrytis הערכתה של ההדבקה הטבעית לאחר אחסון של15ימים בוצעה ע"י ספירה כמותית של עלי הכותרת הנגועים המכוסים בפוליפרופילין)polypropylene( מחורר.‏אחוז ההדבקה המלאכותית )1( וגם ההדבקה הטבעית )3,4( תורגם לסימנים לפיהסקאלה:‏ )-( : איןהדבקה, )±( : פחות מ-‏ , 1% )+( : 1% - 25% , )++( : 25% -75% - 50% : )+++( , 50%, )++++( : למעלה מ-‏ 75%. בגלל שההערכה של ההדבקהב "2" בוצעה מוקדם )4 ימים אחרי ההדבקה(‏ רמות האינפקציה הגיעו למקסימום שללפי כך הסקאלה נקבעה כך ש:‏ )-( : אין הדבקה, )±( : פחות מ-‏ , 1% )+( : 1% -75%, 15% )++( : 15% - 30% , )+++( : 30% - 45% , )++++( : למעלה מ-‏ .45%קביעת הפעילות האנטיאקסידנטיתהפקת נוגדי החמצון והגדרתם בוצעה כמתואר )#179 .)Vinokur, 2006 בקיצור,‏ עלי50mMכותרת שלפרחיםמכל זן הוקפאו ונהפכולתמציות ע"י ריסוק ב-‏בופראציטאט buffer( )acetate המאופיינת ב-‏ pH של 4.3. נוגדי חמצון הידרופיליים הופקוע"י אצטון )acetone( ואילו נוגדי החמצון הליפופיליים ע"י הקסאן )hexane( כמתואר.)2006(ע"י Vinokurהפוטנציאל האנטיאוקסידנטי של התמציות שהופקו נמדד150 μMכמתואר )1999 .)Araki, תערובת הריאקציה הסופית הכילה azinobis1.77 mM ]2,2’ ו--‏‎2,2’-azobis(2‎ 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate (ATBS)]249ב ml(AAPH) amidinopropane) dihydrochloride איתנול שריכוזו 99.9%פלוס 250 μl של .H 2 SO 4תערובת הריאקציה שהתקבלה חוממה בטמפ'‏ 45 o C למשך60דקות וקוררה לאחר1 mlמכן עד לטמפ'‏ החדר.‏ 5μlמהתמציות שהוכנו מהפרחים עורבבו עםשלתערובת הריאקציה ונקבעה הירידה בספיגה באורך גל של 734 nmדקה 15 לאחרBioscience( .)Ultrospec, Amersham התוצאות הסופיות חושבובטמפ'‏ 25 o Cכהשוואה בין הספיגה בדגימות לעומת הספיגה הסטנדרטית של(±)-6-Hydroxy-

16(Trolox) .2,5,7,8-tetramethylchromane-2-carboxylic acid רמת נוגדי החמצוןבדגימות שלנו נקבעה,‏ אקוויוולנט של ה-‏המשוואה:‏באורך גל של nm,)trolox equivalents - TE( Trolox לפיA כך ש-‏ ,TE=(A sample -A blank )/(A standard -A blank )*C standardC ו-‏ 734הוא הריכוז של ה-‏קיבולת נוגדי החמצון אקוויוולנט של ה-‏ TroloxTroloxהוא הספיגה.)mM( בכדי לחשב אתTrolox Equivalent Antioxidant(TEAC)] ,Capacity ביחס למשקל רקמת הצמח שלקחנו,‏ השתמשנו בנוסחה:‏V כך ש , TEAC (mmole TE/ mg) = (TExV)/(1000xM)התמצית ו-‏ M הינו כמות הרקמה שהופקה.‏קיצורים:‏הינו הנפח הסופי שלAAPH, 2,2’-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride; ABTS, 2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate); TE, Trolox equivalents;Trolox, (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)

17יבול הפרחים של הזנים הנבחרים12זני הפרחים שלעלי הכותרת שלהם יש תכונות מתאימות נבחרו לצורך המחקר)2007 )Friedman, .)Vinokur, )2006 הזנים שנבחרו וממוצע המשקל של פרחיהם(4.9 gr) -,(6.8 gr) - 'Brandy',הם כדלקמן:‏ Francisco' (5.2 gr) - 'San(5.3 gr) - ו-‏ (5.2 gr) 'Amadeus' -,(7.1 gr) - 'Sweet Surrender','Maxim'(3 gr) - 'Trier 2000'השייכים לקבוצת .Hybrid Teaהשייך לקבוצת'Eterna'(5.8 gr) - 'English sachet', (7.3 gr) - 'Golden Celebration' , (6.7.Floribunda(0.6 gr) - 'Katharina ו-‏ English Rose ששיכים לקבוצת gr) - 'Pat Austin'Zeimet' המשויך ל-‏.Polyanthaהמצטבר לכל צמח מכל זן נמדד במהלך64כל הזנים שבחנו מוצגים בתמונה 1. היבול הממוצעשבועות ‏)תמונה 2(. כמות היבול של הזןZeimet' ,'Katharina שמניב את הפרחים הכי קטנים בקוטר,‏ הייתה הגדולה ביותראשר נרשמה במחקר שלנו,‏ והייתה גדולה בהרבה משאר הזנים,‏ כמות שהגיעהלממוצע של900'English Sachet'פרחים לצמח.‏ הכמויות הנמוכות ביותר שהתקבלו היו של הזניםו-‏ Surrender' ,'Sweet שרשמו בממוצע רקלצמח,‏ בהתאמה.‏ לשאר הזנים הייתה כמות יבול בטווח של68 ו-‏ 85110-300פרחיםפרחים לצמח.‏לרוב הזנים נצפו שני גלים של תקופת פריחה ולבלוב מוגברת,‏ הראשון היה בערךאחרי 4.5 חודשים מההשתלה,‏ מפברואר עד יוני;‏ וגל שני שנה לאחר מכן,‏ מפברואר עדמרץ עד סיום איסוף הנתונים.‏ רק לזנים'Amadeus'ו-‏'English Sachet'לא זוהה גלראשון ברור של לבלוב ‏)תמונה 2(. מצאנו גם משהו ראוי לתשומת לב,‏ בזנים'San Francisco' , 'Golden celebration' ,'Maxim'ו-‏'English Sachet'סטיתהתקן הייתה גבוהה,‏ דבר שמציין שישנו שוני גדול בקרב השיחים האינדיבידואלייםשל אותו זן.‏

18900300750250600200450150300100150Katarina Zeimet500Terier 2000AmadeusMaximCummulative flower0number/plant140120100806040200250200150100500Golden CelebrationSan Franscico10 20 30 40 50 60120100806040200Pat AustinBrandy10 20 30 40 50 60Mount ShastaEnglish Sachet10 20 30 40 50 60WeekEternaSweet Surrender10 20 30 40 50 60Fig 2תמונה 2: כמות יבול הפרחים של הזנים הנבחרים.‏ הפרחים נאספו כל שבוע במשך 64שבועות מ 10צמחים שונים ובלתי תלויים מכל זן.‏ הממוצע המצטבר שלמספר הפרחים לכל צמח חושב ונרשם ± SD ‏)סטיית תקן(.‏

19EternaTrier 2000English SachetGolden CelebrationPat AustinKatharina ZeimetFig 1Mount Shasta San Francisco BrandyMaxim Sweet Surrender Amadeusתמונה 1: זני הפרחים שנבחרו להיות המועמדים הטובים ביותר כפרחי מאכל.‏ שתיםעשרה הזנים נבחרו מתוך קולקציה של בערך 300זנים המתאימים לגינון ע"פ משתלת'Katharina הקוטר הממוצע של פרחי .http://www.vradim.com “Keren Zur”'Mountפתוחים הינו 4ס"מ.‏ הקוטר הממוצע של הפרחים הפתוחים שלZeimet'10.8±0.5 cm הינו Shasta', 'San Francisco', 'Brandy' 'Sweet Surrender''Maxim', 'Amadeus', 'Eterna', 'Terier 2000', 'Golden ואילו של (±SD).9.3±0.3 cm הוא celebration', 'Pat Austin' , 'English Sachet'

20הרגישות של הזנים השונים ל-‏ .B cinereaרגישות להדבקה ב-‏Botrytisהתוצאות המופיעות בתמונה3הינה תכונה משמעותית כשבוחנים פרחי מאכל.‏מתארות התפתחות הדבקה בפטריה של עליםשהודבקו באופן מלאכותי בזנים השונים.‏ התמונה מראה שקיים שוני משמעותיברגישות להדבקה ב-‏Botrytis בזנים השונים.‏ טבלה1מסכמת שני ניסויים שלהדבקה מלאכותית ועוד שניים של הדבקה טבעית.‏ בדרך כלל קיימת עקביותבתגובתם של זנים שונים להדבקה הן מלאכותית והן טבעית ‏)טבלה 1(. התגובה שלהזנים השונים לאינפקציה מלאכותית או טבעית ל-‏ Botrytis משתנה בקרב הזנים.‏בכדי למדוד את ערך הרגישות של כל הזנים השונים,‏ ממוצע הרגישות של שתי– ההדבקותמלאכותית וטבעית–חושב והוצג בטבלה.1Bניתן לחלק את הזניםשבידינו לשלוש קבוצות עיקריות:‏ קבוצה של אלה המפגינים רגישות גבוהה ל-‏– Botrytisקבוצה זאת כוללת בתוכה את הזנים:‏, 'Golden Celebration';'Mount Shasta' ו-‏ 'Sweet Surrender','Pat Austin','Katharina Zeimet'קבוצה שנייה מראה רגישות בינונית,‏ קבוצה זאת כוללת את הזנים:‏, 'Terier 2000'ו-‏; ובקבוצה השלישית כלולים הזנים'English Sachet''Brandy','Amadeus''San Francisco',שרגישותם לפטרייה הייתה נמוכה והיא כוללת:‏ 'Eterna'ו-‏.'Maxim'

21טבלה 1: הרגישות של פרחי הזנים השונים ל-‏ .B. cinerea בוצעה ‏"הדבקה"‏ מלאכותית של כמה עליםעצמאיים בלתי תלויים ‏)לא פרח שלם(‏ בגורם המזיק כמתואר בתמונה ובחומרים ושיטות.‏ אינטנסיביות3הפגיעה הזיהומית נקבעה בשני שלבים.‏ 11ימים לאחר ההדבקה בניסוי הראשון )1 )Exp ו-‏ 4 ימים בניסויהשני )2 .)Exp התפתחות ומידת החומרה של ה"זיהום"‏ הטבעי )4 )Exp 3 and של פטריית ה-‏ .Bבפרחים שלמים נקבעה כמתואר להלן.‏ בדיקת הפגיעה מהמזיק בניסוי 3בוצעה לאחר אחסון של-nd64cinereaימים בטמפרטורת 4Cْ. התוצאות של ניסוינקבעו לאחרימים באגרטל ללא אחסון.‏משמעו–לא בוצע.‏ טבלהמתארת ‏}אחוז השטח הפגום בעלי הכותרת ±SD ‏)סטיית תקן({‏A15- not doneלדוגמא:‏ ה SD ב Exp 1 של הזן Maxim הוא 12.3.טבלה B מסכמת את התוצאות לפי המפורט בחומריםA.ושיטות.‏ העמודה האחרונה ב-‏ B חושבה כממוצע של כל העמודות בה לכל '+' ניתן ערך השווה ל-‏‎1‎‏.‏זןזיהום מלאכותיזיהום טבעיExp 4 Exp 3 Exp 2 Exp 1B.nd 95.6±4.4 75.0±2.1 100.0±0.0 Katharina Zeimet96.0±9.0 78.7±20.2 67.0±12.6 96.7±2.5 Golden Celebration95.0±10.0 70.0±27.5 57.5±8.9 100.0±0.0 Pat Austin90.0±11.6 96.7±3.3 18.3±6.4 100.0±0.0 Sweet Surrendernd 81.7±18.3 24.2±9.9 80.8±8.8 Mount Shasta96.0±9.0 62.8±24.6 9.3±5.2 28.3±6.7 Terier 200040.0±0.0 45.6±20.4 2.0±0.96 40.8±10.8 Amadeus45.0±19.2 54.2±24.2 0 28.0±9.5 Brandy22.5±10.0 63.4±21.7 0 20.2±16.3 English Sachet40.0±0.0 30.6±13.3 0 25.8±12.3 Eterna45.0±10.0 39.1±23.9 0.17±0.17 0.5±0.2 San Francisco20.0±0.0 nd 0.17±0.17 19.5±12.3 Maximזןזיהום מלאכותיזיהום טבעירגישותסיכוםExp 4 Exp 3 Exp 2 Exp 14.0±0.0 nd ++++ ++++ ++++ Katharina Zeimet4.0±0.0 ++++ ++++ ++++ ++++ Golden Celebration3.7±0.5 ++++ +++ ++++ ++++ Pat Austin3.5±1.0 ++++ ++++ ++ ++++ Sweet Surrender3.3±1.1 nd ++++ ++ ++++ Mount Shasta2.5±1.3 ++++ +++ + ++ Terier 20002.0±0.8 ++ ++ + +++ Amadeus1.7±1.2 ++ +++ - ++ Brandy1.2±1.2 + +++ - + English Sachet1.2±0.9 ++ ++ - + Eterna1.2±0.8 ++ ++ +/- +/- San Francisco0.8±0.3 + nd +/- + Maxim

22תכולת נוגדי החמצון בתמציות עלי הכותרת של ורדים בזנים הנבחריםהתכולה הכללית של נוגדי החמצון ושל האנתוציאנינים יכולה לנבא את מידת הרווחהבריאותי של כל מוצר )2004 .)Wu, במחקר הזה השווינו את תכולת נוגדי החמצוןהליפופיליים וההידרופיליים וגם כן תכולת האנתוציאנינים )anthocyanines(בתמציות שהופקו מהזנים השונים ‏)תמונההליפופיליים הייתה בממוצע נמוכה פילזן4(. הרמה100הכללית של נוגדי החמצוןמאלה ההידרופיליים ‏)תמונה 4B(. הזנים'Amadeus' , 'Golden Celebration' , 'Sweet Surrender' , 'Brandy'Austin' הכילו את רמות נוגדי החמצון הליפופיליים הגבוהות ביותר.‏'Pat ו-‏'San Francisco'היתה רמת נוגדי החמצון הגבוהה ביותר,‏ ערך זה היה גבוהבהרבה מהערכים שנרשמו TE/gFW( 36(. µmole אותו זן הכיל גם כן את הרמההגבוהה ביותר של אנתוציאנינים.)4C ‏)תמונה )anthocyanines(MaximBrandyMSSFAmadeusPAEternaT2000GCESSSKZFig. 3תמונה 3: הרגישות ל-‏Botrytisבכל אחד מזני הפרחים השונים.‏ טיפה בת נפח של20 μl המכילה10 3נבגים נטפה באמצע עלי הכותרת של הפרחים שבמדגם.‏ מידת הפגיעה ע"ינבחנה אחריBotrytis4בצילומים מסוכמת כ-‏ימים בתא רטוב בטמפ'‏ החדר.‏ אנליזה כמותית של הכתמים שנראוExp. 2 בטבלה .1

2330A. Hydrophillic20Antioxidant activity(mole TE / gr FW)100.20.15.10B. Lipophilic.05Anthocyanins(mg Cy-3-Gl / gr FW)0.003.002.502.00.15.10.050.00San FransiscoEnglish SachetMaximBrandySweet SurrenderTrier 2000EternaC. AnthocyaninsAmadeusMount ShastaGolden CelebrationPat Austinתמונה4: רמת נוגדי חמצון הידרופיליים )A(, ליפופיליים )B( ואנתוציאנין-anthocyanine)C( בעלי הכותרת של פרחי הזנים הנבחרים.‏ התמציות הוכנומעלי הכותרת של כל זן.‏ נוגדי החמצון ההידרופיליים תומצתו על גבי תערובתשל אצטון/בופור,‏ ואילו הליפופיליים ע"י עוד תמצות לאחר מכן בעזרת הקסאן‏)אלקאן בעל6פחמימנים(.‏ רמת כל אחת משני נוגדי החמצון לכל מקטעומקטע נקבעה בעזרת שיטה שנקראת:‏ABTS+ assay methodכך שפעילותנוגדי החמצון ובסוף גם רמתם נקבעת ע"י היכולת שלהם ל"נקות"‏ את ה.SD ± התוצאות שהתקבלו הינן הממוצע של שלוש תמציות .ABTS+

24ניתן לחלק את שאר הזנים בהתבסס על רמות נוגדי החמצון ההידרופיליים שלהם, 'Sweet,'English Sachet'לשלוש קבוצות;‏קבוצה שמכילה את הזנים:‏10 µmoleו-‏ 'Amadeus'שמכילים רמה גבוהה של נוגדים ‏)בערךSurrender''Mount'Terrier 2000',בקבוצה השנייה נמנים הזנים:‏ 'Brandy'ו-‏;)TE/gFW;5-7µmole TE/gFW שמכילים רמות בינוניות של בערך ,Shasta'הקבוצההאחרונה כוללת את :'Golden Celebration' , 'Maxim' , 'Eterna'ו-‏'Pat Austin'שתכולתם האנטיאוקצידנטית הינה הנמוכה ביותר TE/gFW( 2-4(. µmole רמותהאנתוציאנינים בזנים השונים אינה נוהגת לפי תבנית החלוקה לקבוצות כמו זאתשנמצא בנוגדי החמצון ההידרופיליים,‏ דבר המורה על כך שלא כל התכולההאנטיאוקסידנטית נובעת מהאנתוציאנינים.‏

25במחקר זה אפיינו מספר תכונות של זני ורדים נבחרים בעלי עלי כותרת טרייםואכילים.‏ היה צורך לאפיין את התכונות שלהם,‏ נבחרו זנים שאינם מרים והמרקםשלהם אינו קשה לעיסה ( 2007 )Friedman, .)Vinokur, )2006 , כצעד ראשון בכיווןהמסחור של זנים אלו,‏ קבענו את כמות היבול,‏ עמידות לBotrytis –– שהינה תכונההכרחית להערכת מידת טיפול אחרי קציר,‏ ורמות נוגדי החמצון-‏ תכונה חשובהלקביעת רווח בריאותי.‏פרט לזן Zeimet' 'Katarinaהמניבפרחים מאוד קטנים )4ס"מ קוטר(‏ ויבול גדול9-101665-300900(פרחים/צמח(,‏ יבול הפרחים של רוב הזנים ‏)קוטר פרחיהם הוא ס"מ(‏ היהבטווח של פרחים לכל צמח לתקופת גידול שנמשכה חודשים.‏ להשוואה,‏כמות היבול המוערכת של ורדים המשמשים לצרכי קישוט למשך אותה תקופה הינו25-43 בערךפרחים לצמח,‏ דבר התלוי בזן.‏ ההבדל בכמות היבול נובע ברמת העיקרוןמהעובדה שבזנים המגודלים כפרחי מאכל,‏ ניתן כמעט להשתמש ולנצל את כלהפרחים שמתפתחים,‏ בעת שבפרחי הקישוט,‏ משתמשים רק באלו שפיתחו גבעוליםארוכים וחזקים.‏ לכן,‏ כמות היבולים של כל הזנים שנבחנו,‏ מכתיבה להם להיותמועמדים טובים למסחור.‏כמות היבול הגדולה שנרשמה לזן ה-‏ '2000 'Terierהינה ככל הנראה תוצאה שלהרקע הגנטי של קבוצת ה-‏ Floribundaאליה שייך,‏ המאופיינת במס'‏ פרחים רבTea'Maxim'עלפי כן,‏ לזניםו-‏,'Eterna' השייכים לקבוצת2003( .)Cairns, אףhybridיש כמות יבול דומה לזן ה-‏ '2000 .'Terier מעניין לגלות שישנו שוני רבבכמות היבול בין צמחים שונים של זנים מסוימים ‏)שימו לב לסטיית התקן הגבוההשל הזנים:‏'Maxim', 'Golden Celebration', 'San Francisco' , 'English Sachet'– תמונה2(, ולזנים אחרים ההבדל היה זעיר.‏הסיבה להבדלים בכמות היבול בקרב הצמחים האינדיבידואליים אינה ברורה.‏מאפיין חשוב נוסף בתיאור אופי היבול הוא שבזנים אחדים הפרחים מלבלבים

26ופורחים בשיעור זהה 'Amadeus'( ,)'English Sachet' , ואילו לאחרים,‏ פריחההופיעה באופן מוגבר לזמן קצר ולאחר מכן חלה ירידה ניקרת בפריחה בקיץ,‏ בסתיוובהתחלת החורף ‏)שבוע 25-55 המקביל לחודש יולי-‏ דצמבר.‏ תמונה 2(. תכונה זו הינהבעלת חשיבות גדולה כשמתכננים את מועד השיווק לכל אחד ואחד מהזנים.‏ פריחהממושכת ורציפה בתנאים מעודדים הינה תכונה המועברת בתורשה נסגנית–רצסיבית )2002 Crespel, )Semeniuk, 1971 ; ורוב סוגי הפרחים המודרניים הינםהומוזיגוטים רצסיביים לתכונה הזאת.‏ לזכור שזה הגיוני לחשוב שכמות יבולם שלרוב הזנים עוכבה בשל תנאים לא מעודדים בקיץ החם של ישראל.‏למרות שכמות היבול של הזן'Katarina Zeimet'בעל הפרח הקטן הייתה הכמות הכיגדולה שנצפתה במחקר זה,‏ מצאנו שהזן הזה אינו מתאיים למסחור,‏ נשירה מוקדמתשל עלי הכותרת בזמן התפתחותו של הפרח.‏ צריך לציין,‏ שזן זה היה רגיש מאוד ל-‏Botrytis‏)תמונה,3 טבלה ,)1דבר שחזק עוד יותר את המסקנה שלנו לשלול אותו כזןמתאים לגידול לצורך מאכל.‏ אנו לא מציעים בזאת לשלול את כל הזנים הרגישים ל-‏,Botrytis כי ייתכן ותתאפשר הפחתת הזיהום עם תנאים תברואתיים יותר טובים,‏ אוטיפולים מתאימים אחרי הקציר,‏ כמו למשל טבילה במים חמים )1991 )Elad, אואחסון באטמוספרה מבוקרת )1990 ,)Hammer, בדיוק כמו שנהוג לעשות עם פרחיםהמגודלים למטרות קישוט.‏הזניםו-‏היו גם כן רגישים מאוד ל-‏.Botrytis'Golden Celebration''Pat Austin'למרות ששני הזנים האלה שייכים לקבוצת הפרחים שנקראת,English roses רגישות'Englishיתר ל-‏ Botrytisאינה אופיינית לכל הזנים של קבוצה זו,‏ מאז שהזןSachet' הינו אחד הזנים העמידים והסבילים ביותר למחלה זו.‏ נצפה שוני ברגישות ל-‏Wisniewska-( בזנים שונים של אותה קבוצת ורדים לפני כן BotrytisElad,יכולה לנבועמכמה סיבות (Botrytis עמידות ל-‏ .)Grzeszkiewicz, 1999Lattanzio, ( כולל תגובת עמידות חזקה יותר בשל רקע גנטי ;1995( Droby, 20042006(. עם זאת,‏ הדבר יכול לנבוע מתכונותיו של הצמח לפני ‏"ההידבקות"‏ כמו למשלLattanzio, (polyphenolsאפידרמיסעבה )1994 )Hammer, או רמות גבוהות של.)2006

27תמציתי אצטון מעלי הכותרת של הפרחים הכילה רמה גבוהה של תכולת נוגדי חמצוןהידרופיליים ‏)תמונה 4(. אכן,‏ תמציתי מתנול מה-‏אנטיאוקסידנטית רבה גדולה בערך פיRosa chinensis50פעילותמאלו בתמציות עגבניות,‏ ברוקולי,‏ אותפוחים )2005 )Cai, וגם כן גדולה מאלה המצויות בצמחי רפואה אחריםMavi, (2004(. התפוצה של רמות נוגדי חמצון הידרופיליים בתמציות בקרב הזנים השוניםהייתה די דומה לזאת הנמצאת באינפוזיות מים חמים )2006 .)Vinokur, הזן 'SanFrancisco' הכיל הרמה הכי גבוהה של נוגדי חמצון הידרופיליים,‏ קרוב לוודאי,‏כתוצאה מרמת האנתוציאנינים )anthocyanines( הגבוהה שיש בו ‏)תמונה4(. לאנמצא קשר בין רמת התכולה של נוגדי החמצון והאנתוציאנינים בזנים האחרים,‏הדבר מצביע שניתן לייחס את התכולה נוגדי החמצון למרכיבים אחרים.‏ הפעילותהאנטיאוקסידנטית בתמציות הורדים ככל הנראה הינה תוצאה ישירה של ה-‏polyphenolsכמו חומצה גאלית,‏quercetinו-‏kaempferolשנמצאו בתמציות עליהכותרת )2005 Cai, .)Ng, ;2004 למרות זאת,‏ אנליזה מעמיקה יותר הינה הכרחיתכדי לקבוע את המרכיבים השונים הנמצאים בתמציות זני הפרחים שבחרנו.‏ רמתנוגדי החמצון ההידרופוביים הייתה נמוכה בהרבה מרמת הקיבולת של הנוגדיםההידרופיליים ‏)תמונה 4(. זהותם של נוגדי חמצון אלה עדיין לא ידועה.‏המחקר הזה הראה שחלק מהזנים האכילים שנבחרו יכולים להוות יבולים מסחריים,‏והמידע לגבי רמות נוגדי החמצון יעזרו הרבה לפתחם כיבולים בעלי ערך תזונתי גבוה.‏

28ספריםעדי בנארי,‏ 2001. השפעת תמיסות ביקרבונטיות על התפתחותן של פטריותפתוגניות.‏ עבודת גמר בהנחיית ד"ר זיו עודד,‏ היחידה לנוער שוחר מדע,‏מכון וולקני,‏ בית דגן.‏פלטי י,‏ יפת י.‏ 1998. מחלות צמחים.‏ הוצאת המחלקה לפרסומים מדעיים.‏מרכז וולקני,‏ בית דגן.‏אתרי אינטרנטhttp://www.ayalot.com/modules.php?name=news&file=ar .1ticle&sid=334http://www.google.com.2http://www.matalk.co.il/docy/kntr2_9.htm .3http://www.antioxidants.net .4http://www.naturemed.co.il/tosfey_02.html.5מאמריםד"ר רוזנטל י.,‏ 1997, השדה ע"ז ‏)י"א(,‏ ‏"הגנה מפני חמצן".‏ליבשיץ ס.,‏ יוני 2001, איתנים,"‏ חיוניותם של נוגדי החמצון".‏מאור א.,‏ 1995, תזונה פלוס,‏ ‏"רכיבי התזונה האנטיאוקסידנטים"‏

29Araki, S., Kimura, T., Shimizu, C., Furusho, S., Takashio, M. andShinotsuka, K., 1999 . Estimation of antioxidative activity and its relationto beer flavor stability. J. Am .Soc. Brew. Chem. 57, 34-37 .Burfield, T., 2005. Edible flowers start to outgrow role as garnish, ThePacker, pp. 6 .Cai, Y.-Z., Xing, J., Sun, M., Zhan, Z.-Q. and Corke, H., 2005. Phenolicantioxidants hydrolyzable tannins, flavonols,and anthocyanins identified byLC-ESI-MS and MALDI-QIT-TOF MS from rosa chinensis flowers.J.Agric.Food Chem. 53 , . 9940-9948Cairns, T., 2003. Horticultural classification schemes. In: A.V. Roberts, T.Debener and S. Gudin (Editors), Encyclopedia of Rose Science. Elsevier,Academic Press, san Diego, CA,pp. 117-124 .Crespel, L., Chirollet, M., Durel, C.E., Zhang, D., Meynet, J. and Gudin,S., 2002 . Mapping of qualitative and quantitative phenotypic traits in Rosausing AFLP markers. . Theor. Appl. Genet. 105, 1207-1214 .Cutler, R.R., 2003a. Culinary uses and nutriotional value. In: A.V. Roberts,T. Debener and S. Gudin (Editors), Encyclopedia of Rose Science.Elsevier, Academic Press , San Diego, CA, pp. 707-716 .Cutler, R.R., 2003b. Medicinal and pharmaceutical uses. In: A.V. Roberts,T. Debener and S. Gudin (Editors), Encyclopedia of Rose Science.Elsevier, Academic Press san Diego, CA, pp. 716-726 . 17

30Droby, S. and Lichter, A., 2004. Post-Harvest Botrytis Infection: Etiology,Development and Management. In: Y. Elad, B. Williamson, P. Tudzynskiand N. Delen (Editors), Botrytis: Biology, Pathology and Control. KluwerAcademic Publishers, pp. 349-367 .Elad, Y. and Evensen, K., 1995. Physiological Aspects of Resistance toBotrytis cinerea. Phytopathology. 85 637-643 .Elad, Y. and Volpin, H., 1991. Heat treatment for the control of rose andcarnation grey mould (Botrytis cinerea). Plant Pathology 40, 278-286 .Friedman, H., Resnick, N., Agami, O., Rot, I., Hagiladi, A., Umiel, N. and2007. Roses as edible flowers: Steps in development of fresh crop (inHebrew). Olam Haperach Feb-March, 54-56 .Friedman, H., Rodov, V., Rot, I., Vinokur, Y., Goldman, G., Resnick, N.,Hagiladi, A . and Umiel, N., 2005. Tropaeolum majus L. as edible flowers:growth and postharvest handling. Adv. Hort. Sci. 19, 3-8 .Gleason, M.L. and Helland, S.J., 2003. Botrytis. In: A.V. Roberts, T.Debener and S . Gudin (Editors), Encyclopedia of Rose Science, Elsevier,Academic Press San Diego, CA, pp. 144-148 .Gorji, A., 2003. Pharmacological treatment of headache using traditionalPersian medicine. Tren. Pharm. Sci. 24, 331-334 .

31Gruda, N., 2005. Impact of environmental factors on product quality ofgreenhouse vegetables for fresh consumption. Crit. Rev. Plant Sci. 24, 227-247 .Hammer, P. and Evensen, K., 1994. Differences between rose cultivars insusceptibility to infection by Botrytis cinerea. Phytopathology 84, 1305-1312 .Hammer, P.E., Yang, S.F., Reid, M.S. and Marois, J.J., 1990. Postharvestcontrol of Botrytis cinerea infections on cut roses using fungistatic storage.Journal of the American Society for Horticultural Science 115, 102-107 .Hazendonk, A., Hoope, M.T. and Wurff, T.V.-D., 1995. Method to testrose cultivars on their susceptibility to Botrytis cinerea during the postharveststage. ActaHort . 39-45 ,405 .Kelley, K.M., Behe, B.K., Biernbaum, J.A. and Poff, K.L., 2001a.Consumer and professional chef perceptions of three edible-flower species.HortScience 36, 162 - 166.Kelley, K.M., Behe, B.K., Biernbaum, J.A. and Poff, K.L., 2001b.Consumer preference for edible-flower color, container size, and price.HortScience 36, 801-804 .Kelley, K.M., Behe, B.K., Biernbaum, J.A. and Poff, K.L., 2001c.Consumer ratings of edible flower quality, mix, and color. HortTechnol.11, 644-647 .

32Kelley, K.M., Behe, B.K., Biernbaum, J.A. and Poff, K.L., 2002a.Combinations of colors and species of containerized edible flowers: effecton consumer preferences. HortScience 37, 218-221 .Kelley, K.M., Behe, B.K., Biernbaum, J.A. and Poff, K.L., 2002b.Consumer purchase and use of edible flowers: results of three studies.HortTechnol. 12, 282-287 .Lattanzio, V., Lattanzio, V.M.T. and Cardinali, A., 2006. Role of phenolicsin the resistance mechanisms of plants against fungal pathogens andinsects. In: F .Imperato (Editor), Phytochemistry: Advances in Research,pp. 23-67 .Mavi, A., Terzi, Z., Ozgen, U., Yildrim, A. and Coskun, M., 2004.Antioxidant Properties of Some Medicinal Plants:Prangos ferulacea(Apiaceae),Sedum sempervivoides ( 18 Crassulaceae),Malva neglecta(Malvaceae),Cruciata taurica (Rubiaceae),Rosa pimpinellifolia(Rosaceae),Galium verum subsp.verum (Rubiaceae),Urtica dioica(Urticaceae). Biol. Pharm. Bull. 27, 702-705 .Ng, T.B., He, J.S., Niu, S.M., Zhao, L., Pi, Z.F., Shao, W. and Liu, F.,2004. A gallic acid derivative and polysaccharides with antioxidativeactivity from rose (Rosa rugosa) flowers. J Pharma. Pharmacol. 56, 537-545 .Pie, K. and Brouwer, Y.J.C.M., 1993. Susceptibility of cut rose flowercultivars to infections by different isolates of Botrytis cinerea. J.Phytopathol. 137 233-244 .

33Semeniuk, P., 1971. Inheritance of recurrent blooming in Rosawichuraiana. J. Heredity. 203-204,62Speisky, H., Rocco, C., Carrasco, C., Lissi, E. and López-Alarcón, C.,2006. Antioxidant screening of medicinal herbal teas. Phytoter. Res. 20,462 -467 .VanderJagt, T.J., Ghattas, R., VanderJagt, D.J., Crossey, M. and Glew,R.H., 2002 Comparison of the total antioxidant content of 30 widely usedmedicinal plants of New Mexico. Life Sci. 70, 1035-1040 .Vinokur, Y. and Rodov, V., 2006. Method for determining total(hydrophilic and lipophilic) radical-scavenging activity in the same sampleof fresh produce . ActaHort. 709, 53-60 .Vinokur, Y., Rodov, V., Reznick, N., Rot, I., Goldman, G., Horev, B.,Umiel, N. and Friedman, H., 2006. Rose petal tea as an antioxidant-richbeverage: cultivar variability. J. Food Sci. 71, S42-S47 .Wisniewska-Grzeszkiewicz, H. and Wojdya, A., 1999. Evaluation of rosepetals susceptibility to botrytis blight (Botrytis cinerea) under laboratorycondition. Zes .Nauk. Insty. Sadown. Kwiacia. Skierniew. 6, 201-208 .Wu, X., Beecher, G.R., Holden, J.M., Haytowitz, D.B., Gebardt, S.E. andPrior, R.L . 2004 ,. Lipophilic and hydrophilic antioxidant capacities ofcommon foods in the united states. J.Agric.Food Chem. 52, 4026-4037.