Καρδιολογική Γνώμη - Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο ...

HIV λοίμωξη και καρδιαγγειακός κίνδυνος, ο ρόλος του Παράγοντα Ενεργοποίησης Αιμοπεταλίων (PAF)113Εικόνα 2. Σχηματική απόδοση της πορείας μελέτης μεταβολισμού PAF και κυτταροκινών. Δείγμα αίματος συλλέχθηκε σε αντιπηκτικόδιάλυμα κιτρικών. Στη συνέχεια το ολικό αίμα διαχωρίστηκε με φυγοκέντρηση σε πλάσμα πλούσιο σε αιμοπετάλια (PRP), και στησυνέχεια σε αιμοπετάλια, λευκοκύτταρα και ερυθροκύτταρα μέσω διαδοχικών φυγοκεντρήσεων και εκπλύσεων. Οι ειδικές δραστικότητεςτων PAF-CPT και lyso-PAF-AT στα λευκοκύτταρα και τα αιμοπετάλια προσδιορίστηκαν μέσω ενζυμικής δοκιμασίας ακολουθούμενηαπό καθαρισμό των προϊόντων της αντίδρασης με χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (TLC) και βιολογική δοκιμασία σεπλυμένα αιμοπετάλια κουνελιού (WRPs). Η ειδική δραστικότητα της PAF-AH των αιμοπεταλίων, λευκοκυττάρων και ερυθροκυττάρωνόπως και της LpPLA 2 στη περίπτωση του πλάσματος μετρήθηκαν μέσω ραδιενέργειας 38 . Τα επίπεδα των κυτταροκινών και του VEGFμετρήθηκαν μέσω κυτταρομετρίας ροής.Εικόνα 3. Σχηματική απόδοση της εκχύλισης, απομόνωσης και προσδιορισμού του PAF. Μετά τη συλλογή του αίματος έγινε άμεσα προσθήκηαπόλυτης αιθανόλης και διαχωρισμός του πλάσματος από τα έμμορφα συστατικά με φυγοκέντρηση. Ακολούθησε εκχύλιση τωνλιποειδών στο υπερκείμενο και στο ίζημα της φυγοκέντρησης με την μέθοδο Bligh-Dyer όπου και έγινε η παραλαβή του ελεύθερου PAF(free-PAF), δηλαδή αυτού που ευρίσκεται στο πλάσμα, και του δεσμευμένου PAF (bound-PAF), δηλαδή αυτού που ευρίσκεται δεσμευμένοςστα κύτταρα του αίματος. Περαιτέρω καθαρισμός του PAF έγινε με χρωματογραφία στήλης και με υγρή χρωματογραφία υψηλής πίεσης(HPLC). Τα επίπεδα του καθαρού PAF στα δείγματα μετρήθηκαν με βιολογική δοκιμασία σε πλυμένα αιμοπετάλια κουνελιού (WRPs) 41 .νεται να παίζει κεντρικό ρόλο στην πρόκληση της αθηρογένεσης39 , [http://www.chem.uoa.gr/research/PAF_mechanism.htm].Τα επιμέρους στάδια του προτεινόμενου μηχανισμούέχουν αποδειχθεί από in vitro και ex vivo μελέτες 40 .Η ερευνητική μας ομάδα έχει δημοσιεύσει τα αποτελέσματαμελέτης σχετικά με την επίδραση της HAART με abacavirστο μεταβολισμό του PAF για 6 μήνες 38 . Ολοκληρώθηκανοι μετρήσεις (που δεν έχουν ακόμα δημοσιευτεί) γιατους συμμετέχοντες 10 άρρενες συμπτωματικούς ασθενείςμε HIV λοίμωξη οι οποίοι μελετήθηκαν συνολικά για διάστημα12 μηνών με 6 αιμοληψίες. Η πρώτη προσδιορίζεταιως baseline (t=0) και λαμβάνει χώρα πριν την έναρξη αγωγήςμε το σχήμα abacavir/lamivudine/efavirenz, ενώ στησυνέχεια ακολουθούν οι χρονικές στιγμές 1,3,6,9,12 μήνες.Στα δείγματα αυτά εξετάστηκαν τα επίπεδα και ο μεταβολισμόςτου PAF όπως και ορισμένες από τις σημαντικότερεςκυτταροκίνες που σχετίζονται με την HIV λοίμωξη(Eικόνες 2, 3).Από τα βασικά ανθρωπομετρικά και βιοχημικά χαρακτηριστικάτης ομάδας των ασθενών (Πίνακας 1), παρατηρείταιστατιστικώς σημαντική αύξηση των CD4 κυττάρων ήδηαπό τον 1 ο μήνα θεραπείας. Σταδιακά υπάρχει πτώση τουιικού φορτίου όπου στον 6 ο μήνα είναι μη ανιχνεύσιμο γιαόλους τους ασθενείς. Η ολική χοληστερόλη, η HDL και ηLDL αυξάνονται στατιστικώς σημαντικά από τον 1 ο μήνα.Αντιθέτως, το ΒΜΙ και τα τριγλυκερίδια παραμένουν σχετικάσταθερά. Τα ανωτέρω είναι συμβατά με τη συνήθη ανταπόκρισημη προθεραπευμένων ασθενών μετά την έναρξη