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Protein Expression System
產 品 目 錄 Product Catalog
蛋
白
質
表
現
系
統
Expresso T7 SUMO Cloning and Expression System
Make soluble proteins the easy way!
SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier) 源 自 於 yeast SMT3 gene, 可 以 增 加 蛋 白 質 的 表 現 量 及 solubility
此 linear vector (pETite N-His SUMO, Kan, 2.5 kb) 約 可 裝 入 12 kb 的 insert
可 以 用 SUMO Express Protease 切 除 SUMO 的 C 端 ,100ug SUMO protein 只 需 在
4 度 反 應 30 分 鐘 , 即 可 達 >90% 以 上 的 切 除 效 率
6XHis SUMO fragment 大 小 跑 膠 位 置 約 在 15-18 kDa
建 議 使 用 pfu 來 P 出 insert
若 Insert 來 自 於 kan-plasmid, 請 將 PCR 產 物 跑 膠 回 收 以 免 有 背 景 值 干 擾
Cloning for Lucigen T7 Expression System
insert 的 primer set 前 後 兩 端 需 設 計 和 vector 上 一 樣 的 序 列 18mer+ insert 上 的 21mer!!
Step 1. Amplify target gene
Step 2. Mix: unpurified PCR product (1-3ul/25-100ng) + linear vector (25ng/2ul) into
HI-Control 10G Chemically Competent Cells
Step 3. Transform cells on YT—Kan agar plate
Step 4. Colony PCR Screening
Step 5. Protein expression in HI-Control BL21(DE3) cells
Protein Expression & Purification for Lucigen T7 SUMO Expression System
Induction of Protein Expression
通 常 使 用 IPTG 1mM 來 做 induction
SDS-PAGE analysis
Affinity Purification of 6XHis tagged proteins
Total protein lysate 避 免 添 加 含 有 cysteine protease inhibi-
Dialysis
透 析 的 目 的 為 移 除 imidazole , 以 利 後 續 SUMO protease 的 作 用
Removal of SUMO tag using SUMO Express Protease
只 能 用 Lucigen SUMO Proteaes !!
Recovery of cleaved target protein
使 用 Affinity matrix 將 6XHis SUMO binding 住 , 留 下 來 的 flow through 即 為 表 現 的 外 源 蛋 白
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