Rezumatul tezei de doctorat - USAMV Cluj-Napoca

Rezultatele prelucrării celor 69 probe extrase prin fiecare metodă arată că purităŃile şi
cantităŃile de ADN redate de spectrofotomentrul Nanodrop ND 1000, variază de la un bazin
la altul ca şi de la o metodă la alta în cadrul aceluiaşi bazin.
Astfel, purităŃile ADN redate de spectrofotomentru, în urma extracŃiei cu kit pe
microcoloane (Qiagen), oscilează între 1,02 - 1,51, cu o medie a purităŃii probelor de 1,250,
la lungimea de undă 260/280, iar cantităŃile de ADN obŃinute prin aceeaşi metodă între 2,54
– 14,00 ng/µl, cu o medie de 5,543 ng/µl. Analizând purităŃile ADN redate de
spectrofotomentru, în urma extracŃiei cu soluŃie ce conŃine PBS, constatăm că probele au
valori cuprinse între 1,10 – 1,51, cu o medie de 1,394, la lungimea de undă 260/280, iar
cantităŃile de ADN obŃinute prin aceeaşi metodă, între 5,23 ng/µl şi 86,56 ng/µl, cu o medie
de 30,653 ng/µl.
II.5. REZULTATELE AMPLIFICĂRII ADN-ULUI LA SPECII
DE FUNGI DIN FAMILIA SAPROLEGNIACEAE
II.5.1. Amplificarea ADN prin PCR
ReacŃiile de amplificare au fost efectuate individual, într-un volum final de 25 µl, cu
un termocycler Eppendorf. MenŃionăm faptul că procesul de amplificare în fază preliminară
a fost efectuat pe câte 20 probe, din care 10 provenite din extracŃia ADN-ului din fungi
utilizând kituri de extracŃie (QIAGEN) şi 10 probe provenite din extracŃia ADN-ului din
fungi utilizând soluŃia PBS (tampon fosfat salin). Acest test a fost efectuat pentru a se urmări
prin care din cele două metode utilizate se realizează cea mai precisă amplificare a ADNului,
fără obŃinerea de produşi nespecifici.
MenŃionez faptul că al doilea protocol utilizat, descris în material şi metodă, nu a dat
rezultatele scontate la fungi, motiv pentru care s-a renunŃat la el. Prezentăm în continuare, în
fig.3, rezultate comparative privind profilele electroforetice ale fragmentelor amplificate cu
cele două seturi de primeri.
22