Rezumatul tezei de doctorat - USAMV Cluj-Napoca

CUPRINS
INTRODUCERE.................................................................................................................................. 4
CAPITOLUL I ..................................................................................................................................... 4
IPOTEZA EXPERIMENTALĂ, OBIECTIVELE CERCETĂRII, DISPOZITIVUL
EXPERIMENTAL, MATERIAL ŞI METODĂ DE LUCRU............................................................. 4
I.1. IPOTEZA EXPERIMENTALĂ ŞI OBIECTIVELE CERCETĂRII ........................................ 4
I.2. DISPOZITIVUL EXPERIMENTAL......................................................................................... 6
I.3. MATERIAL ŞI METODĂ DE LUCRU ................................................................................... 7
I.3.1. Prelevarea probelor ............................................................................................................. 7
I.3.2. IniŃierea culturii de Saprolegnia în condiŃii de laborator.................................................... 8
I.3.3. Mediile de cultură utilizate ................................................................................................. 9
I.3.3.1. Mediile de cultură solide utilizate în experiment....................................................... 10
I.3.3.2. Mediile de cultură lichide utilizate în experiment ..................................................... 10
I.3.3.3. Antibioticele utilizate în experiment .......................................................................... 11
I.3.4. Caracterizarea morfologică a tulpinilor de Saprolegnia................................................... 11
I.3.5. ExtracŃia şi detectarea ADN-ului din fungi ...................................................................... 12
I.3.5.1. ExtracŃia ADN-ului din fungi utilizând kituri de extracŃie (QIAGEN) ...................... 12
I.3.5.2. ExtracŃia ADN-ului din fungi utilizând soluŃii........................................................... 13
I.3.6. Cuantificarea ADN prin metoda directă de determinare a purităŃii şi concentraŃiei
ADN cu spectofotometrul Nanodrop ND-1000 ......................................................................... 13
I.3.7. Regiunea ITS de la fungi şi primerii utilizaŃi.................................................................... 13
I.3.8. Tehnici moleculare utilizate în experiment....................................................................... 15
I.3.8.1. Amplificarea PCR a probelor de Saprolegnia........................................................... 15
I.3.8.2. Tehnica PCR-RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism ......................... 16
I.3.9. Metode utilizate în stabilirea diversităŃii şi....................................................................... 16
înrudirii filogenetice a speciilor de fungi din familia Saprolegniaceae..................................... 16
I.3.9.1. SecvenŃierea automată............................................................................................... 16
CAPITOLUL II.................................................................................................................................. 17
REZULTATELE CERCETĂRILOR PROPRII ................................................................................ 17
II.1. REZULTATELE CULTURII DE SAPROLEGNIA ÎN
CONDIłII DE LABORATOR ...................................................................................................... 17
II.2. REZULTATE PRIVIND CREŞTERA ŞI DEVZOLTAREA
SAPROLEGNIEI PE MEDIILE DE CULTURĂ.......................................................................... 18
II.2.1. Rezultate comparative privind creşterea coloniilor
de Saprolegnia pe mediile de cultură solide .............................................................................. 18
II.2.2. Rezultate comparative privind dezvoltarea coloniilor
de Saprolegnia pe mediile de cultură lichide............................................................................. 20
II.3. CARACTERIZAREA MORFOLOGICĂ A TULPINILOR DE SAPROLEGNIA................ 20
II.4. REZULTATE PRIVIND EXTRACłIA ŞI CUANTIFICAREA
ADN-ULUI LA SAPROLEGNIA................................................................................................... 21
II.4.1. ExtracŃia ADN ................................................................................................................. 21
II.5. REZULTATELE AMPLIFICĂRII ADN-ULUI LA SPECII
DE FUNGI DIN FAMILIA SAPROLEGNIACEAE ...................................................................... 22
II.5.1. Amplificarea ADN prin PCR .......................................................................................... 22
2