Rezumatul tezei de doctorat - USAMV Cluj-Napoca

More documents

Recommendations

Info

în faptul că s-au utilizat două medii de cultură solide comparative şi trei gradiente de temperatură pentru fiecare mediu. I.3.3.1. Mediile de cultură solide utilizate în experiment Cele două medii de cultură solide utilizate în experiment au fost următoarele (conform http://www.sigmaaldrich.com): Potato Dextrose Agar (PDA-agar cu cartof-dextroză) (Fluka) Sabouraud 2% Glucose Agar (SGA-agar Sabouraud cu glucoză) (Fluka) Din fiecare bazin s-a făcut însămânŃare în cele două medii de cultură solide utilizate (PDA, SGA), din cea mai bine dezvoltată probă, pentru a putea fi făcute observaŃii comparative privind modul de dezvoltare al speciilor de fungi din familia Saprolegniaceae. Pentru testarea ratei de creştere pe mediul solid cu agar, în plăcile Petri conŃinând cele două medii de cultură solide (PDA, SGA) şi incubate la 22°C ± 2°C timp de 72 ore s-a urmărit rata de creştere a hifelor de Saprolegnia. Creşterea radială în diametru a fost măsurată tot la 24 ore. S-a considerat că hifele şi-au epuizat creşterea radială atunci când acestea au atins marginea plăcilor Petri (>40 mm) (prelucrare după Stueland şi col., 2005). La 72 ore de dezvoltare pe mediile solide, coloniile fungice au fost pasate pe cele lichide, în următorul mod: coloniile de pe mediul solid Potato Dextrose Agar (PDA-agar cu cartof-dextroză) au fost transferate pe mediul lichid Potato Dextrose Broth (PDB-bulion cu cartof-dextroză), iar coloniile de pe mediul solid Sabouraud 2% Glucose Agar (SGA-agar Sabouraud cu glucoză) pe mediul lichid Sabouraud Dextrose Broth (SDB-bulion Sabouraud cu dextroză). Acest experiment s-a efectuat pentru a putea observa şi recomanda cea mai bună combinaŃie de transfer de la mediul solid la mediul lichid. I.3.3.2. Mediile de cultură lichide utilizate în experiment Mediile lichide utilizate în experiment au fost următoarele (conform http://www.sigmaaldrich.com): Potato Dextrose Broth (PDB-bulion cu cartof-dextroză) (Fluka): 10
Sabouraud Dextrose Broth (SDB-bulion Sabouraud cu dextroză) (Fluka) Toate coloniile de fungi saprolegnieni de pe mediile solide au fost pasate în pahare Erlenmeyer cu 100 ml mediu lichid cu adaos de antibiotic şi menŃinute într-un incubator cu agitator, la temperatura de 22°C ± 2°C, timp de 5-7 zile, în funcŃie de gradul de dezvoltare. Peletele miceliale au fost apoi filtrate, spălate cu apă distilată şi menŃinute la temperatura de -20°C până la extracŃia ADN (metodă adaptată după Leclerc şi col., 2000). MenŃionez faptul că la această procedură au fost supuse probele de fungi obŃinuŃi din apa recoltată în cursul lunii iunie 2009, un număr total de 138 probe, din care 69 probe pe combinaŃia de mediu solid-lichid Potato Dextrose Agar (PDA-agar cu cartof-dextroză)- Potato Dextrose Broth (PDB-bulion cu cartof-dextroză) şi 69 probe combinaŃia de mediu solid-lichid Sabouraud 2% Glucose Agar (SGA-agar Sabouraud cu glucoză) - Sabouraud Dextrose Broth (SDB-bulion Sabouraud cu dextroză). I.3.3.3. Antibioticele utilizate în experiment Pentru a preîntâmpina dezvoltarea şi contaminarea bacteriană, în mediile de cultură pentru fungi se utilizează mai multe tipuri de antibiotice (Lategan şi col., 2003, 2004). În experienŃa noastră, am optat pentru: Penicillin G potassium salt (sare de potasiu cu penicilină G) (Sigma). ConcentraŃia de lucru utilizată de noi pe mediile solide, cât şi lichide a fost de 100 mg L -1 Penicilină G cu sare de potasiu. I.3.4. Caracterizarea morfologică a tulpinilor de Saprolegnia Pentru caracterizarea mofologică a tulpinilor de Saprolegnia dezvoltate pe mediile de cultură, s-a urmărit pe cele 69 probe următoarele aspecte: tipurile de hife caracteristice genului Saprolegnia, reproducerea asexuată (prezenŃa flagelilor pe zoosporii primari) şi formarea structurilor sexuale (anteridiile şi oogoanele). Tulpinile fungice din fiecare bazin, la 72 ore de creştere pe mediul solid PDA, au fost reînsămânŃate în plăci Petri de plastic cu diamentrul de 9 cm, pe acelaşi mediu PDA, la temperatura de 22ºC, pH 5,5. Creşterea Saprolegniei a fost examinată periodic la microscop 11
Page 1 and 2: UNIVERSITATEA DE ŞTIINłE AGRICOLE
Page 3 and 4: II.6. REZULTATELE RESTRICłIEI ENZI
Page 5 and 6: diverse specii piscicole. De aici s
Page 7 and 8: Fig.1. LocaŃiile în care s-au efe
Page 9: A fost constituit un număr de 207
Page 13 and 14: Echipament, materiale şi reactivi
Page 15 and 16: Primerii folosiŃi de către noi î
Page 17 and 18: CAPITOLUL II REZULTATELE CERCETĂRI
Page 19 and 20: Mediile diametrului coloniilor de S
Page 21 and 22: laborator specifice metodologiei de
Page 23 and 24: Deoarece am utilizat în experiment
Page 25 and 26: fragmente: primul la aproximativ 45
Page 27 and 28: II.7. REZULTATE PRIVIND STUDIUL ÎN
Page 29 and 30: mai mare genetică, indivizii despr
Page 31 and 32: MenŃionăm faptul că în toate ba
Page 33 and 34: CAPITOLUL III CONCLUZII ŞI RECOMAN
Page 35 and 36: isexualis (761 pb, o identitate de
Page 37 and 38: BIBLIOGRAFIE SELECTIVĂ 1. Colao Ma
Page 39 and 40: 19. Oroian, T.E., 2006, SelecŃia a
Page 41 and 42: UNIVERSITY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Page 43 and 44: SPECIES FROM SAPROLEGNIACEAE FAMILY
Page 45 and 46: The specific literature presents up
Page 47 and 48: Fig.1. The locations where the rese
Page 49 and 50: estimation of the spawns infestatio
Page 51 and 52: pellets were filtred, washed with d
Page 53 and 54: The DNA rapid extraction using PBS
Page 55 and 56: We used a comparatively mixture of
Page 57 and 58: II.1. THE RESULTS OF SAPROLEGNIA CU
Page 59 and 60: Reading time 24 48 72 n Culture med
Page 61 and 62:
asexual one. We can precisely concl
Page 63 and 64:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 700pb- Fig.3. Ele
Page 65 and 66:
pairs length. The sequencing result
Page 67 and 68:
II.7. RESULTS REGARDING THE GENETIC
Page 69 and 70:
higher genetic distance, the indivi
Page 71 and 72:
We mention the fact that in al the
Page 73 and 74:
extraction have values between 1,10
Page 75 and 76:
13. In researches on the aquatic fu
Page 77 and 78:
40. Frisvad, J.C., Bridge, P.D., Ar
Page 79:
61. *** http://www.sigmaaldrich.com
show all

Rezumatul tezei de doctorat - USAMV Cluj-Napoca

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?