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ExactSTART Full-Length cDNA Library Cloning Kit
特 性 :
1. 從 1ug total RNA 中 獲 得 full length double stand cDNA.
2. 保 留 了 最 完 整 的 mRNA 中 ,5’ start condon and 3’ poly (A).
3. 內 附 pre-cut pCDC-1 K vector, 使 用 NotI、AscI site 進 行 cloning 唯 有 full length
cDNA insert 才 能 construct.
4. 應 用 : Full length cDNA library cloning.
Easy Protocol:
1
1
Total RNA input (1-10ug)
2
(TAP)
2
TAP Treatment: 將 5’ cap 移 除 , 以
便 後 續 接 上 RNA Acceptor
3
( 花 費 時 間 : 30 min)
3
RNA Acceptor Oligo Ligation: 將 包
4
含 PCR primer site 及 Not I site 的
Oligo Nucleotide 接 上 5’ end
( 花 費 時 間 : 30 min)
5
4
第 一 股 cDNA 合 成 : 藉 由 MMLV 合 成
第 一 股 cDNA ( 花 費 時 間 : 1 hr)
6
5
Remove RNA: 只 剩 single cDNA
( 花 費 時 間 : 5 min)
7
6
PCR: 獲 取 full length double strand
cDNA
7
Modify ds cDNA 兩 端 : 以 Not I and
8
Asc I digest dscDNA
( 花 費 時 間 : 1 hr)
8
接 至 pCDC-1KL and Transformation
訂 購 資 訊 :
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Cat. No. ES0907
Cat. No. EC10005
(5 x 100 ul )
ExactSTART Full-Length cDNA Library
Cloning Kit ( 10 rxns)
TransforMax EC100
Electrocompetent E. coli