24. Ulusal Biyokimya Kongresi - Türk Biyokimya Dergisi

XXIV. ULUSAL B‹YOK‹MYA KONGRES‹
25 - 28 Eylül 2012
Dedeman Otel - Konya
24. Ulusal Biyokimya Kongresi, Konya [24 th National Biochemistry Congress, Konya / TURKEY]
İÇİNDEKİLER
P159 - HİR2 PROTEİNİ SACCROMYCES CEREVİSİAE’ DE
SENTROMERİK H3 VARİANTI CSE4 PROTEİNİNİN EKTOPİK
LOKALİZASYONU ENGELLER
1
Sultan CİFTCİ-YİLMAZ, 2 Wei CHUN AU, 2 Joy CHANG,
2
Anthony DAWSON, 2 Lars BOECKMANN, 3 Michael COSTANZO,
4
Richard BAKER, 5 Charlie BOONE, 2 Munira BASRAİ
P159 - HIR2P ACTS TO CONSTRAIN ECTOPIC LOCALIZATION
OF CENTOMERIC H3 VARIANT CSE4P IN SACCROMYCES
CEREVISIAE
1
Sultan CİFTCİ-YİLMAZ, 2 Wei CHUN AU, 2 Joy CHANG,
2
Anthony DAWSON, 2 Lars BOECKMANN, 3 Michael COSTANZO,
4
Richard BAKER, 5 Charlie BOONE, 2 Munira BASRAİ
CONTENTS
1
Mevlana Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji, Konya
2
National Institutes of Health National Cancer Institutes, Genetics Branch,
Bethesda, MD
3
University of Toronto, Banting and Best Dept. of Med. Research, Toronto
4
University of Massachusetts Med Sch., Dept. of Mol. Genetics and
Microbiology, Worcester, MA
5
University of Toronto, Banting and Best Dept. of Med. Research, Toronto
1
Department of Medical Biology, Mevlana University Faculty of Medicine, Konya
2
Genetics Branch, National Institutes of Health/ National Cancer Institutes,
Bethesda, MD
3
Banting and Best Dept. of Med. Research, University of Toronto, Toronto
4
Dept. of Mol. Genetics and Microbiology, University of Massachusetts Med
Sch., Worcester, MA
5
Banting and Best Dept. of Med. Research, University of Toronto, Toronto
Kinetikor (sentromerik DNA ve ilişkili proteinler) kromozomların doğru
segregasyonunda çok önemli bir rol oynarlar. Evrimsel olarak korunmuş olan
histon H3 varyantı Cse4 proteininin sentromerdeki lokalizasyonu, S. cerevisiae’de
sentromerin kimliğinin belirlenmesi ve kinetikor oluşumu için gereklidir. Her
geçen gün artan çalışmalar Cse4 proteininin sentromerik olmayan lokuslardan
çıkarılamamasının, mitoz esnasında kromozom kayıplarına yol açtığını ve bu
fenotipin seyrettiği ağırlık Cse4 proteinin kromozom üzerinde bulunduğu yer
ve mislokalizasyonun boyutuna göre değiştiğini göstermektedir. Cse4 proteinin
sentromerik olmayan lokuslardan hangi moleküler mekanizmalarla uzak tutulduğunu
tespit etmek için, CSE4 geninin mutant alellerini oluşturup genetik ve biyokimyasal
olarak test ettik. Önceki çalışmalarımız N-terminal kuyruğu olmayan Cse4 mutantının
(GAL∆129cse4) kromatinde arttığını, daha yüksek stabilite gösterdiğini, mislokalize
olup, artan kromozom segregasyon defektlerine sebep olduğunu göstermişti.
Cse4 proteinin sentromerik olmayan lokuslardan N-terminus kuyruğu yoluyla
çıkarılmasında rol oynayan genlerin tespiti için, Sentetik Genetik Array (SGA)
tekniğini kullanarak, GALCSE4 veya GAL∆129cse4 için tüm genomu kapsayan
bir araştırma yaptık. Genetik interaksiyonların analizi neticesinde GALCSE4’e
spesifik ubiqutin protolitik yolağında çalışan ve histone şaperon fonksiyonu olan
genler tespit ettik. Histone şaperon mutant suşlarında Cse4 overexpresyonunun, Cse4
proteininin kromatinde artmasına, stabilitesinin artmasına ve mislokalize olmasına
sebep olduğunu gözlemledik. Bu araştırmalar, histone şaperon proteinlerinin Cse4
proteininin sentromerik olmayan lokuslardan çıkarılmasında rol oynadığı hipotezini
destekledi. Elde ettiğimiz sonuçlar neticesinde, Cse4 proteininin N-terminus kuyruğu
sayesinde tanınıp, sentromerik olmayan bölgelerden çıkarıldığı, doğru kromozom
segregasyonu için gerekli bir sürvelans mekanizmasının var olduğunu düşünüyoruz.
Kinetochore (CEN DNA and associated proteins) plays a pivotal role in
ensuring chromosome transmission fidelity (ctf). Centromeric localization of the
evolutionarily conserved histone H3 variant Cse4p is required for centromere
identity and kinetochore assembly in S. cerevisiae. There is increasing evidence
that failure to exclude Cse4p from non-centromeric loci leads to chromosome
loss during mitosis and the severity of the phenotype is dependent on the
chromosomal location and level of mis-localization of Cse4p. To probe the
molecular mechanisms underlying the exclusion of Cse4p from non-centromeric
loci, we created and tested mutant alleles of cse4 in genetic and biochemical
assays. Overexpression of a CSE4 mutant lacking the entire N-terminal tail
(GAL∆129cse4) leads to its chromatin enrichment, increased protein stability,
mis-localization and a ctf phenotype. We performed a genome-wide analysis on
GALCSE4 or GAL∆129cse4 using the Synthetic Genetic Array (SGA) approach
to identify genes that exclude Cse4p from non-centromeric loci by interaction with
its N terminal tail. Analysis of genetic interactions specific for GALCSE4 led to
the identification of genes required for ubiquitin-mediated proteolytic pathway and
histone chaperone function. Our results showed that overexpression of CSE4 in
histone chaperone mutant strains leads to chromatin enrichment, increased protein
stability, and mis-localization of Cse4p. These investigations supported the role
of histone chaperones in excluding Cse4p from non-centromeric loci. Based on
our results we propose a model in which recognition of the N-terminal tail of
Cse4p by a surveillance mechanism results in its exclusion from non-centromeric
loci and this is required for faithful chromosome segregation.
Turk J Biochem, 2012; 37 (S1)
http://www.TurkJBiochem.com