24. Ulusal Biyokimya Kongresi - Türk Biyokimya Dergisi

XXIV. ULUSAL B‹YOK‹MYA KONGRES‹
25 - 28 Eylül 2012
Dedeman Otel - Konya
24. Ulusal Biyokimya Kongresi, Konya [24 th National Biochemistry Congress, Konya / TURKEY]
İÇİNDEKİLER
P093 - İNSAN ERİTROSİT GLUTATYON S-TRANSFERAZ Pİ
İZOZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI
1
Seyhan TÜRK, 1 Gülnihal KULAKSIZ ERKMEN, 2 Özlem DALMIZRAK,
2
Nazmi ÖZER, 2 İzzet Hamdi ÖĞÜŞ
1
Hacettepe Üniversitesi, Tıbbi Biyokimya, Ankara
2
Yakındoğu Üniversitesi, Tıbbi Biyokimya, Mersin
P093 - PURIFICATION OF GLUTATHIONE S-TRANSFERAZ Pİ
ISOZYME FROM HUMAN ERYTHROCYTES
1
Seyhan TÜRK, 1 Gülnihal KULAKSIZ ERKMEN, 2 Özlem DALMIZRAK,
2
Nazmi ÖZER, 2 İzzet Hamdi ÖĞÜŞ
1
Medical Biochemistry, Hacettepe University, Ankara
2
Medical Biochemistry, Near East University, Mersin
CONTENTS
Canlılarda bulunan koruyucu enzim sistemlerinden Glutatyon S-Transferazlar
(GST, E.C.2.5.1.18) hücrelerde detoksifikasyon, oksidatif strese karşı korunma,
hücre içi molekül taşınımı, prostaglandin ve steroid sentez - metabolizması,
sinyal iletim yolları gibi çok önemli işlevler üstlenen moleküllerdir. GST
izozimlerinin, özellikle de GST-pi’nin kanser hücrelerinde üretiminin artmış
olduğu ve kanser ilaçlarına karşı direnç gelişiminde rolü olduğu bilinmektedir.
GST-pi’nin saflaştırılması kanser araştırmalarında önemlidir. Bu çalışmada
ksenobiyotiklerin (örn. kanser ilaçlarının) etkilerine doğrudan maruz kalan insan
eritrosit GST-pi’sinin saflaştırılması ve kinetik parametrelerinin belirlenmesi
amaçlandı. İnsan eritrosit GST’si iyon değiştirici, jel filtrasyon ve afinite
kromatografileri kullanılarak % 71 verimle 2550 kez saflaştırıldı. GST-pi
izozimi Poly buffer Exchanger 94 kromatofokuslama kolonu ile pH 4.8’de
elde edildi. Substrat karakterizasyonu, SDS-PAGE ile Mr tayini (23.3 kDa) ve
Western Blot yöntemi ile izozimin GST-pi olduğu doğrulandı. [GSH] değişken
(0,035-1.6mM) - [CDNB] sabit derişimde (1mM) olduğunda Vm: 111±7 U/
mgprotein, Km: 0.64±0.08 mM; [CDNB] değişken (0,035-1.6mM) - [GSH]
sabit derişimde (1mM) olduğunda ise Vm: 85±6 U/mgprotein, Km: 0.74±0.10
mM olarak saptandı. Elde edilen veriler önceki çalışmalarla karşılaştırıldı.
Glutathione S-Transferases (GST, E.C.2.5.1.18) are one of the components of
protective enzyme systems in living organisms and play many important roles
such as detoxification, protection against oxidative stress, intracellular molecular
transport, prostaglandin and steroid synthesis - metabolism, signal transduction
pathways. In cancer cells, overproduction of GST isozymes, especially GSTpi
has been shown and GSTs are implicated in the development of resistance
against anticancer drugs. Thus, purification of GST-pi is important in cancer
research. Human erythrocytes are directly exposed to xenobiotics (e.g. anticancer
drugs) effects. In this study, it was aimed to purify human erythrocyte GSTpi
and determination of its kinetic parameters. Human erytrocyte glutathione
S-transferase (EC2.5.1.18, GST) was purified by using ion exchange, gel
filtration and affinity chromatographies with a yield of 71 % and a purification
fold of 2550. GST-pi isozyme was obtained through Polybuffer Exchanger 94
chromatofocusing column at pH 4.8. Substrate characterisation, determination of
Mr by using SDS-PAGE (23 300) and Western Blotting confirmed that purified
enzyme was GST-pi. When the varied substrate was GSH (0,035-1.6mM) and
fixed substrate was CDNB (1mM), Vm: and Km values were found as 111±7 units
/ mg protein and 0.64±0.08 mM, respectively. At varied CDNB (0,035-1.6mM)
and fixed GSH, Vm and Km were found as 85±6 units / mg protein and 0.74 ±
0.10 mM, respectively. The obtained data were compared with previous studies.
Turk J Biochem, 2012; 37 (S1)
http://www.TurkJBiochem.com