DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS DA VIDA ... - Estudo Geral

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Resumo
Está descrito que as células mesenquimais estaminais (MSCs) são extremamente
reactivas à modulação por mecanotransdução (Chen, 2008; Eyckmans et al., 2011;
Moore et al., 2010), nomeadamente através da expressão tipica de genes especificos
da linhagem de certos tecidos quando cultivados in vitro em substratos com
propriedades mecanicas similares ás dos mesmos. Nomeadamente, as MScs quando
cultivadas em substratos com rigídez semelhante a dos tecidos neuronais (1-10 kPa)
expressam genes neuronais (Engler et al., 2006)Também tem sido discrito que estas
células parecem reter algum tipo de memoria relacionada com a rigídez dos subtratos
em que estiveram cultivadas (Tse et al., 2011).
Normalmente as MSCs são isoladas e cultivadas em placas de cultura de poliestireno e
so depois de vários passagens transferidas para substratos apropriados para
determinar a sua pasticidade em termos de expressão de marcadores de linhagem
celular especifica , como já descrito nos casos de “compromisso” dos tipos osteogénico,
miogénico e neurogénico (Engler et al., 2006).
No entanto, as MSCs podem reter alguma “memoria” do contacto anterior com o
poliestireno de rigidez extremamente alta quando comparada a de tecidos humanos,
possivelmente diminuindo o potencial em termos de diferenciação (em termos de
compromisso com as diferentes linhagens celulares).
É do nosso interesse perceber quais serão os efeitos de isolar as MSCs directamente
em substratos com rigidez similar a dos tecidos neuronais em termos do seu potencial
para expressar marcadores neuronais. Propomos então isolar e cultivar MSCs da matriz
do cordão umbilical humano (hUCM) directamente em substratos mais moles,
nomeadamente, hidrogéis semelhantes em rigidez ao tecido neuronal (1 a 10 kPa).
Como control parte da matriz do cordão umbilical de cada amostra irá ser usado para
isolar MSCs usando o protocolo base em placas de cultura de tecidos de poliestireno
(TCPs) (Secco et al., 2008) sendo depois transferidas para hidrogéis similares após
algumas passagens em poliestireno (P1-P5), para verificar se a cultura prolongada em
poliestireno rigo é um factor de restrição na sua capacidade de expressar marcadores
neuronais após a cultura em plastico. Para promover a adesão das MSCs aos hidrogéis
para a isolação e cultura, estes vão ser covalentemente funcionalizados com colagénio
(Engler et al., 2006) e em alguns casos fibronectina.