GUÍA DE GENÉTICA 2009 - Facultad de Agronomía

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) Expresión estable Sumado al análisis de estabilidad en la integración debe confirmarse la estabilidad en el nivel de expresión del transgén. Esto se realiza a varios niveles: transcripcional (acumulación de ARNm); a nivel proteico (acumulación de la proteína CP4 EPSPS) y a nivel del fenotipo (tolerancia a glifosato) en varios tejidos de la planta. Si bien el promotor es constitutivo y fuerte, diferentes eventos de transformación pueden generar líneas inestables en su expresión. EXTRAÍDO DE • Canadian Food Inspection Agency, Decision Document DD95-05. 1995.The analysis of Food Samples for the Presence of Genetically Modified Organism. • Development, Identification and Characterization of a Glifosato – Tolerant Soybean Line. Padgette, S. R. et al. 1995. Crop Science 35: 1451-1461. Figura 10. Dentro del cloroplasto la EPSPS cataliza la reacción de la shikimato-3-fosfato y fosfoenolpyruvate (PEP) a la forma 5-enolpyruvylshikimato-3-3 fosfato (EPSP) y fosfato. EPSP es un intermediario para la síntesis de aminoácidos aromáticos. Como una consecuencia de la inhibición de esta ruta bioquímica, la síntesis de proteínas es interrumpida, resultando en la muerte de la planta. EPSPS es el único objetivo biológico del glifosato en las planta, y ninguna otra enzima que utilice PEP es inhibida por glifosato. 55
56 Figura 11. Representación esquemática del “cassette CP4 EPSPS” introducido a la Soja RR (Roundup Ready). Figura 12. Mapa del plásmido (vector) PV-GMGT04 usado en el evento de transformación de la Soja RR (tomado de Monsanto, 2000) PREGUNTA 1 i) Identifique y detalle la función que cumple cada una de las secuencias del inserto descritas en la Fig. 11. Utilice para su respuesta el diagrama realizado en el punto anterior. ¿En dónde ubica el ORF en este transgen? ii) Si deseara fabricar su propio transgénico resistente al glifosato diferente al descrito anteriormente ¿qué partes del diseño de la Fig. 11 podría mantener constantes y que partes podría modificar? iii) COMPLEMENTARIA: Identifique en la Fig. 12 (plásmido) las secuencias más relevantes aclarando la función que cumple cada una. Identifique también la secuencia presente en el evento GTS 40-3-2.
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