Zbornik - Društvo genetičara Srbije

60 ZBORNIK ABSTRAKATA III KONGRESA GENETIÈARA SRBIJE II-Pos-5
Subotica, 30. novembar - 4. decembar 2004.
MUTACIONA ANALIZA POTENCIJALNOG MESTA VEZIVANJA RXRa
PROTEINA U REGULATORNOM REGIONU SOX3 GENA
Tijana Saviæ, Gordana Nikèeviæ i Milena Stevanoviæ
Institut za molekularnu genetiku i genetièko inenjerstvo, Beograd
SOX3 gen je èlan SOX familije gena koji ima znaèajnu ulogu u procesima neurogeneze i
diferencijacije neurona. Poznato je da je ekspresija humanog SOX3 gena indukovana
retinoiènom kiselinom (RA). U cilju definisanja elemenata odgovrnih za ovu indukciju
napraviljena je serija delecionih konsrukata u okviru 5’ nekodirajuæeg regiona SOX3
gena. Funkcionalna analiza pokazala je da je najmanji od ovih konstrukata duine 31 bp
zadrao sposobnost inducibilnosti RA. Na osnovu rezultata dobijenih u eksperimentima
kotransfekcije sa ovim regionom zakljuèeno je da je dejstvo RA na ekspresiju SOX3 gena
posredovano RXRa nuklearnim receptorom. U eksperimentima smanjene elektroforetske
pokretljivosti pokazano je da se rekombinantni humani RXR protein vezuje za ovaj region.
Mutacionom analizom ovog regiona tj. nizom eksperimenata smanjene
elektroforetske pokretljivosti u kojima je poreðen afinitet vezivanja RXR nuklearnog
receptora za mutirane probe u odnosu na wild type, definisan je RXR vezivni region.
Analiza je pokazala da se ovaj vezivni region sastoji od 2 polumesta razdvojena sa 4bp.
RXR vezivni region okarakterisan u ovom radu razlkuje se po svojoj sekvenci kao i po
strukturi od RXR vezivnih mesta veæ opisanih u literaturi.
MUTATION ANALYSIS OF THE POTENTIAL RXRa RESPONSE ELEMENT
WITHIN REGULATORY REGION OF SOX3 GENE
SOX3 gene is member of SOX gene family which has an important role in the process of
neurogenesis and neuronal differentiation. It is known that the expression of the human
SOX3 gene is induced by retinoic acid (RA). In order to deffine elements responsible for
this induction a series of various deletion constracts of the 5’ noncoding region of the
SOX3 gene has been made. Functional analysis has showed that the shortest of these
constracts 31 bp in length is able to hold RA inducibility. Cotransfection experiments
have indicated that the effect of RA on SOX3 gene expession is mediated by RXR nuclear
receptor. Gelshift and supershift experiments have shown that the human recombinant
RXR protein binds to this region. By comparation of the abiluty of RXR nuclear
receptor to bind to wild type and serious of mutated oligonucleotides using gelshifts experiments,
the RXR respnse region has been determined. Detailed analysis has shown
that this response region consists of two halfsites separated with 4 bp. RXR response region,
caracterised in this study differs by its sequence, as well as its structure, from already
described RXR response elements.