Zbornik - Društvo genetičara Srbije
Zbornik - Društvo genetičara Srbije
Zbornik - Društvo genetičara Srbije
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
II-Usm-4 ZBORNIK ABSTRAKATA III KONGRESA GENETIÈARA SRBIJE 51<br />
Subotica, 30. novembar - 4. decembar 2004.<br />
TIAZOFURIN NE DOVODI DO OŠTEÆENJA DNK U KOMET TESTU<br />
N. Ðeliæ 1 , Biljana Spremo-Potpareviæ 2 , Lada ivkoviæ 2 iV.Bajiæ 3<br />
1 Katedra za biologiju, Fakultet veterinarske medicine, Univerzitet u Beogradu, Beograd<br />
2 Institut za fiziologiju, Farmaceutski fakultet, Univerzitet u Beogradu, Beograd<br />
3 Institut za biomedicinska istraivanja, «Galenka», Beograd<br />
Tiazofurin predstavlja nukleozid sa izraenim antitumorskim dejstvom. Intracelularno,<br />
tiazofurin se metabolièki konvertuje do tiazol-4-karboksamid adenin dinukleotida (TAD),<br />
analoga nikotinamid adenin dinukleotida (NAD), koji snano inhibira IMP dehidrogenazu.<br />
Usled inhibicije IMP dehidrogenaze kao kljuènog enzima u de novo sintezi purinskih<br />
nukleotida, dolazi do pada guanilata i na taj naèin se postie inhibicija rasta tumora kako in<br />
vitro,takoiin vivo.<br />
Cilj ovog rada bio je da se utvrdi da li tiazofurin moe da dovede do ošteæenja molekula<br />
DNK u humanim limfocitima, detektabilnih Komet testom (elektroforeza DNK pojedinaènih<br />
æelija, engl. single cell gel electrophoresis). Cela krv je izlagana eksperimentalnim koncentracijama<br />
(0.001, 0.002, 0.004 i 0.006 M) u trajanju od 30 min ili 2 sata na 37°C. Nakon<br />
tretmana i provere citotoksiènosti pomoæu tripan plavog, uzorci su centrifugirani, a zatim su<br />
æelije su resuspendovane u agarozi niske taèke topljenja, nanete na prethodno pripremljena<br />
predemetna stakla i ostavljena u rastvoru za liziranje na +4°C preko noæi. Sutradan je posle<br />
denaturacije DNK u puferu sa pH>13, izvršena elektroforeza u istom puferu na 0,7 V/cm.<br />
Nakon neutralizacije alkalija, predmetna stakla su odmah bojena etidijum bromidom i obavljena<br />
je analiza dobijenih kometa. Analizirano je taèno po 200 kometa za svaku<br />
eksperimentalnu koncentraciju. Statistièka analiza uraðena je neparametrijskim<br />
Wilcoxon-ovim testom.<br />
Tiazofurin u ispitanim koncentracijama nije ispoljio znaèajnu citotoksiènost (u svim<br />
uzorcima bilo je preko 90% vijabilnih limfocita). Pored toga, ne postoji statistièki znaèajno<br />
odstupanje u stepenu ošteæenja DNK u odnosu na kontrolne (netretirane) uzorke,<br />
kako pri tretmanu od 30 min, tako i pri tretmanu od 2 h. Na osnovu toga, moe se<br />
zakljuèiti da je rezultat testiranja tiazofurina u in vitro Komet testu negativan.<br />
TIAZOFURIN DO NOT INDUCE DNA DAMAGE IN THE COMET ASSAY<br />
Tiazofurin is a nucleoside with a profound antitumor effects. Tiazofurin is metabolically<br />
converted intracellularly to an analogue of nicotin amide adenin dinucelodide (NAD),<br />
tiazole-4-carboxamide adenine dinucleotide (TAD), a potent inhibitor of IMP dehydrogenase.<br />
Inhibition of this rate-limiting enyzme for de novo purine synthesis results in reduced<br />
levels of guanylates, inhibiting tumor growth in vitro and in vivo.<br />
The objective of the present investigation was to examine whether tiazofurin induces<br />
DNA damage in human lymphocytes detectable by single cell gel electrophoresis<br />
(Comet) assay. The whole peripheral venous blood was exposed to four experimental<br />
concentrations of tiazofurin (0.001, 0.002, 0.004 i 0.006 M) for either 30 min or 2 h at<br />
37°C. After the treatment, we checked cytotoxicity using trypan blue dye exclusion. The<br />
samples were centrifugated, the cell pellet was resuspended in pre-heated low melting<br />
point agarose and layed on the precoated slides. Afterwards, the slides were left in lysing<br />
solution at +4°C overnight. Tomorrow, we performed DNA unwinding and electrophoresis<br />
in alkaline buffer (pH>13) at 0,7 V/cm. After the neutralisation of alkali, slides were<br />
stained with ethidium bromide and the comets were immediately scored. For each experimental<br />
concentration and exposure time we analysed exactly 200 comets. Statistical<br />
analyisis was performed by non-parametric Wilcoxon rank-sum test.<br />
Tiazofurin has not expressed significant cytotoxicity at any experimental point (lymphocyte<br />
viability was over 90%). Moreover, there is no significant departure in DNA damage